Reaccin en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa

variante de PCR Reaccin en Cadena de Polimerasa en Transcripcin Reversa RT-PCR

una hebra de ARN es retrotranscrita en ADN complementario (ADNc) usando una enzima llamada transcriptasa reversa

Tcnica de laboratorio comnmente usada en biologa molecular para generar una gran cantidad de copias de ADN, proceso llamado "amplificacin".

Se utiliza para la deteccin y amplificacin de ARN. Permite estudiar la expresin de determinados genes (su traduccin a protenas).

http://www.youtube.com/watch?v=68zTyjeUsqY&feature=relate d

Procedimiento
Se extrae el ARN total de las clulas en estudio y se separa la fraccin correspondiente al mensajero (ARNm).

Tras purificarlo el ARN se transcribe a ADN mediante una transcriptasa inversa, por cada molcula de ARNm se sintetiza una molcula de cADN monocatenaria que posteriormente se ha de convertir en bicatenaria utilizando una ADN polimerasa

La rTth ADN polimerasa de Thermus thermophilus es un enzima recombinante y termoestable que acta como transcritasa inversa y como ADN polimerasa simultneamente

A partir de aqu se aplica la tcnica de PCR lo que permite una deteccin de la expresin de ARNm mucho ms sensible que con Northern blot o con hibridacin in situl76.

Northern blot
tcnica de deteccin de molculas de cido ribonucleico (ARN) de una secuencia dada dentro de una mezcla compleja

hibridacin in situ l76

basada en la capacidad que poseen los cidos nuclecos para hibridarse entre s, es decir, la existencia de determinada secuencia de ADN o ARN, que resulta complementaria con otra secuencia.

Puede ser aplicada al ARN extrado de mnimos volmenes de sangre o en material archivado como extensiones en laminillas as como en secciones de tejidos.

Muy til para detectar la presencia de virus ARN (como el virus del sarampin)177 y el anlisis citogentico molecular de translocaciones cromosmicas176.

aplicaciones

Usarda para detectar la expresin proteica de antgeno especfico prosttico en clulas (deteccin de micrometstasis o clulas tumorales circulantes)178.

Detecta las translocaciones en los tumores de piel y partes blandas.

Se ha empleado RT-PCR en el estudio de citoquinas (interleuquina IL-2, IL-4 y IL-10) en la dermatitis por hipersensibilidad de contacto, comprobndose un nivel elevado en estas reacciones, mientras que en la dermatitis por mecanismo imitativo no se detecta elevacin en el ARN de estas citoquinas191.

El estudio de ARNm y de su expresin proteica se utiliza para conocer mejor los mecanismos inmunolgicos y de la inflamacin.

En sangre perifrica y en biopsias de piel, es posible estudiar el patrn de respuesta inmunolgica en las reacciones asociadas a dao tisular

Utilizacin teraputica
En el estudio de enfermedades inflamatorias de la piel, puede utilizarse RT-PCR para valorar el efecto y mecanismo de accin de determinados frmacos.

Bibliografia
"Tecnicas de biologia molecular II." Portal del

Sistema de Bibliotecas de la UNMSM - Inicio. N.p., n.d. Web. 28 Sept. 2011. <http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas "RT-PCR - Wikipedia, la enciclopedia libre." Wikipedia, la enciclopedia libre. N.p., n.d. Web. 28 Sept. 2011. <http://es.wikipedia.org/wiki/RTPCR>.