UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

1 MEDICINA B HISTOLOGA MTODOS HISTOLGICOS

MTODOS HISTOLGICOS

Observacin directa de Analizan material las clulas y tejidos muerto o inanimado vivos

ANLISIS MICROSCPICO

El microscopio es el instrumento mas importante en la histologa

La luz atraviesa los preparados histolgicos para visualizar sus caractersticas

Los preparados no coloreados se captan transparentes

PODER DE RESOLUCIN
Es las distancia mnima que debe existir entre dos puntos para que se visualizen separados

AUMENTO
Relacin entre el tamao de la imagen y el objeto

OPTICO

1.000 a 1.400 veces

ELECTRONICO

Optica y mecanica

Incrementa el poder de resolucin y aumento Haz de electrone 500.000 veces

MICROSCPIO DE CAMPO OSCURO

particulas pequeas de escaso contraste condensador especial preparados radioautograficos treponema pallidum

MICROSCPIO tejidos no coloreados DE se observa estructuras en celulas vivas CONTRASTE DE FASE transforman diferencias de intensidad MICROSCPIO DE INTERFERENCIA MICROSCPIO DE LUZ POLARIZADA MICROSCPIO DE BARRIDO CONFOCAL MICROSCPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA instrumento cuantitativo la luz se divide imagen tridimensional componentes cristalinos y fibrosos de la molecula anisotropas y isotropas polarizador y analizador iluminado por un rayo laser atravieza una hendidura imagen bidimensional mitad de la luz visible que se uitiliza sistema optico de cuarzo pelicula fotografica

MICROSCPIO fluoresceina DE FLUORESCENCIA fuentes luminosas

Electrones no atraviesan el objeto directamente

MICROSCPIO ELECTRNICO DE BARRIDO

MICROSCPIO DE TUNEL DE BARRIDO

Captar las estructuras superficiales a nivel atomico

Los rayos X pueden aumentar el poder de resolucin

No existen lentes capaces de enfocar y sacar provecho de estas longitudes

En lugar de lentes se debe aplicar el ANALISIS MATEMATICO lo cual limita la utilidad

Ha tenido importancia fundamental en el desarrollo de la biologa molecular

MTODO DE OBSERVACIN DIRECTA DE CLULAS Y TEJIDOS VIVOS

Cultivo de tejidos: Importante mtodo de estudio de la poblacin fuera del organismo. Mtodo : in vitro e in vivo

CLASIFICACON DEL CULTIVO DE TEJIDO 1.-CULTIVO DE CELULAS 2.-CULTIVO DE TEJIDO 3.-CULTIVO DE ORGANOS CULTIVOS A CORTO PLAZO :CROMOSOMAS HUMANOS
Cmo realizar un estudio de cultivo ?

1.-Toma de muestras 2.-solucion de lquidos tisulares con enzimas tripsina y colagenasas 3.- separacin mecnica 4-.cultivo de suspensin = monocapa

Aislamiento de clulas seccin celular activa mediante fluorescencias

Lneas celulares primaria = cultivo primario

Lneas celulares establecidas = clulas espontaneas

Hibridacin celular

Hibridacin celular

fusin celular Formacin espntame

HETECARIONICAS SINCARION = material gentico ambas clulas

Clulas tumorales

MANIPULACIN DE CLULAS VIVAS

Tincin vital y supra vital Azul tripan Carmn de litio Rojo neutro y verde Jano La alizarina

Manipulacin mecnica
Microtubuladores Micro electrodos soluciones salinas Microinyectores Microcinematografa

PREPARACION E INVESTIGACION DE TEJIDOS MUERTOS

El tejido presenta un espesor que la penetracin de la luz es escasa

Se utiliza el tejido muerto que se corta en secciones muy delgadas

Luego dela tincin se observan los cortes en el microscopio ptico

PREPARACION DE TEJIDOS PARA MICROSCOPIA OPTICA

FIJACION

Las clulas se matan con la fijacin para detener los procesos celulares dinmicos

Se logra con insolubilizacin de los componentes estructurales de la clula y la formacin de enlaces cruzados

Se estabilizan las protenas por al formacin de enlaces cruzados entre las molculas de las protenas

Las protenas solubles se unen

El formaldehido y el glutacaldehido son efectivos en la formacin de enlaces transversales

Produce inactivacin de enzimas celulares que inician la digestin y conduciran a la degeneracin post mortem

Se elimina bacterias y microorganismos de podran destruir el tejido

Se corta en secciones delgadas para esto es necesario : Incluir al tejido en un material que al solidificarse , le confiera dureza

Los medio de inclusin son: de ceras insolubles PARAFINA Antes de la inclusin se realiza la deshidratacin del tejido

El alcohol y el xileno extraen grasas y el calentamiento de la inclusin La tcnica de congelacin se obtiene en minutos

METODO DE CONGELACIONCOLORACION CONGELACIONDESECACION SUSTITUCION

Montar sobre porta objetos y colorear Se congela Fijacin moderada con rpidamente el trozo sacarosa Congelacin En soluciones acuosas de tejido y se lo rpida Continuacin Hematoxilina y eosina coloca en una cmara una deshidratacin a Se deshidrata y se de vaco a baja 85.C aclara la muestra del temperatura, luego se Polimeriza por tejido seca por evaporacin irradiacin lenta del agua Algunos son miscibles en agua

PARA MICROSCOPIA ELECTRONICA

Utilizar glutaraldehido

Se deshidrata y se incluye el tejido

Se necesitan ultra micrtomo

Se pueden seccionar en resinas acrlicas

Investigacin de las estructuras de las membranas

Utilizacin de acciones fsicas y qumicas sobre preparados histolgicos

METODOS HISTOQUIMICOS
Es esencial la localizacin Es necesario una fijacin Los lpidos son soluble orgnicos La mayora de las enzimas se inactivan con la fijacin

Induce la formacin de un producto insoluble visible Se debe considerar la sensibilidad de la reaccin histoqumica

ACIDOFILIA

Capacidad de tincin delos colorantes acido Capacidad de tincin de los colorantes bsicos

BASOFILIA

METACROMASIA

Cuando se tien ciertos componentes tisulares

MTODOS BASADOS EN LA REACCION DE SCHIFF PARA GRUPOS ALDEIDOS

Su reactivo es la leuco fucsina

MTODO DE CIDO PERYDICO DE SCHIFF (PAS )

Pera determinar la presencia de macromolculas

MTODO DE FAULGEN

Mtodo especifico para la determinacin histoqumica del ADN

DETERMINACIN HISTOQUMICA DE LPIDOS

La tincin se produce cuando las molculas del colorante se distribuyen entre los lpidos y el solvente

DETERMINACION HISTOQUIMICA DE LAS ENZUMAS

Actan como catalizadores biolgicos

Se basa en que de distintas maneras se obtiene un producto de reaccin visible y seala la localizacin de la enzima

METODOS INMUNOHISTOQUIMICOS

Forma anticuerpos especficos que se unen con los antgenos de macromolculas proteicas o polisacridos

Basa en la utilizacin de un anticuerpo especifico que se marca mediante un enlace qumico en una sustancia que se puede transformar en visible

INMUNOHISTOQUIMICA INDIRECTA

utilizadas en las Investigaciones histolgica y biolgica celular

Es posible demostrar la localizacin de cada una de las protenas

HISTOQUIMICA CON LECTINA S

Se une a glicoprotenas y glucolipidos especficos de la membrana celular

HIBRIDACION IN SITU

Basada en la capacidad que poseen los acido nucledos para hibridarte entre si

RADIOAUTOGRAFIA

Informacin directa dentro del sitio de la clula

Artificios .- designa estructuras del preparado que no existe en el tejido vivo PROBLEMAS EN LA INTERPRETACION DE CORTES DE TEJIDO Interpretacin tridimensional .-establece la forma tridimensional de un rgano o estructura de gran tamao

GRACIAS POR SU ATENCIN