LIC.T.

M EFRAIN MONTES HIJAR BACTERIOLOGIA MEDICA UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDES CARRERA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA

Gneros Streptococcus y Enterococcus

Flora normal del tracto respiratorio y digestivo Cocos gram positivos agrupados en cadenas de longitud variable. Catalasa negativa Crecen bien en medios de cultivo habituales Aerobios / Anaerobios facultativos

Agrupacin Staphylococcus

Agrupacin Streptococcus

Clasificacin
Propiedades serolgicas Grupos de Lancefield A-V Patrones de hemlisis Incompleta () Completa () Nula () Propiedades bioqumicas

Gnero Streptococcus

Clasificacin
1.- Hemlisis en medios con sangre -hemolticos: hemlisis total (S.pyogenes, S. agalactiae) -hemoliticos: hemlisis parcial (S.pneumoniae, S. viridans) No hemolticos

Gnero Streptococcus

2.- Clasificacin serolgica

Antgeno polisacarido de la pared celular o antgeno de grupo Grupos serolgicos de Lancefield Grupo A, B, C, D, F,..V. Grupo A = S. pyogenes Grupo B = S. agalactiae

Gnero Streptococcus

3.- Diferenciacin bioqumica

Estreptococos - hemolticos Sensibilidad a bacitracina S. pyogenes = Sensible Otros estreptococos -hemolticos = Resistente
Estreptococos - hemolticos Sensibilidad a optoquina S. pneumoniae = Sensible S. grupo viridans = Resistente

S. Pyogenes (Grupo A) Estructura antignica

Antgeno C Grupo especfico. Antgeno M Tipo especfico. Antigenos proteicos T, R.

S. Pyogenes (Grupo A) determinantes de patogenicidad

Determinantes de . Estructurales patogenicidad: 1.2.- Extracelulares

Clasificacin de patgenos
Clasificacin serolgica Microorganismo Patrones de hemlisis

A
B

S. pyogenes
S. agalactiae

C D F, G
--

S. anginosus, S. equisimilis S. bovis, Enterococcus spp. S. anginosus

S. pneumoniae

o no hemlisis ,,

Streptococcus

Cocos Gram positivos

Aerobios facultativos, algunos capnoflicos

Catalasa negativos
No mviles No tienen esporas

Streptococcus

Agrupamiento en cadena en medios lquidos Crecimiento y la hemlisis se favorecen con 10% de CO2 a 35C Los cultivos viejos pueden ser Gram (-)

Manifestaciones Clnicas

Streptococcus pyogenes: faringitis, amigdalitis, escarlatina, imptigo, secuelas no supurativas: fiebre reumtica y glomerulonefritis Streptococcus agalactiae: meningitis en neonatos Streptococcus pneumoniae: principal causa de neumona, sinusitis, meningitis y otitis media.

Enterococcus
Cocos

Gram positivos
negativos facultativos

Catalasa

Aerobios

Crecen

en CTS NaCl 6,5%

mviles

Algunos

Enterococcus

Agrupamiento en pares o cadenas Hidrolizan esculina en presencia de sales biliares Capaces de crecer a pH 9,6 Temperatura oscila 10C - 45C

Enterococcus

Enterococcus faecalis: 80 a 90% de aislamientos Enterococccus faecium: mayor incidencia como agente nosocomial y se han detectado cepas multirresistentes a antimicrobianos de uso comn contra G+

Manifestaciones clnicas

Endocarditis Infeccin de tracto urinario

Mediastinitis: infeccin de herida postoperatoria a nivel del mediastino

Escarlatina

Imptigo

Muestras clnicas

Hisopados farngeos Aspirado pleural Sangre LCR Exudado bronquial Muestra de odo medio Lesiones de piel

S. pyogenes Diagnstico Obtencin de muestras Tincin de Gram Cultivo

Tincin de Gram P.bioqumicas

Catalasa Hemlisis Sensibilidad a bacitracina

Identificacin serolgica

Deteccin Ag de grupo

Pruebas de identificacin

Muestra Aislamiento y tincin de Gram Catalasa Hemlisis Resistencia a bacitracina Resistencia al optoqun Resistencia a SXT Factor CAMP Bilis esculina Crecimiento en CTS 6.5% NaCl

Tincin de Gram
Streptococcus

Enterococcus

Hemlisis

En medios nutritivos enriquecidos con sangre o suero.

Patrn de hemlisis

Alfa hemlisis (parcial) H2O2 Beta hemlisis (completa) Estreptolisinas O y S Gamma hemlisis

Catalasa

Para diferenciar Streptococcus y Enterococcus de Staphylococcus y Micrococcus

Resistencia a antibiticos

Se realiza en agar sangre

Bacitracina: cualquier halo permite considerar a la bacteria como Streptococcus pyogenes Optoqun: halo de inhibicin de 14mm o ms es presuntivo de Streptococcus pneumoniae. Trimetropn sulfa: Sensibles grupo C, F y G.

Prueba de CAMP

Streptoccocus -hemolticos S. agalactiae (grupo B)

Positiva

Prueba de Hidrlisis de Esculina

Agar Bilis-Esculina Identificacin presuntiva de grupo D y Enterococcus Hidrlisis de esculina: libera glucosa y esculetina

Esculetina en presencia de Fe3+ forma complejo coloracin negra cuando la prueba es positiva

Crecimiento en 6.5% NaCl

Diferenciacin de Streptococcus grupo D con respecto a Enterococcus:

Enterococcus (+) Streptococcus grupo D (-)

Esquema de clasificacin
Cocos G+ Catalasa + Staphylococcus Streptococcus Enterococcus

Hemlisis

Bacitracina

Optoqun

Bilis esculina

S Grupo A (S. pyogenes) + Grupo B (S. agalactiae)

R CAMP

S S.pneumoniae

R Bilis esculina

+ 6.5%NaCl

Streptococcus No hemolticos

Bilis esculina

+ 6.5%NaCl

Grupo Viridans

+ Enterococcus spp.

Grupo D

+ 6.5%NaCl

Streptococcus No A, B o D

+ Enterococcus spp.

Grupo D

+ Enterococcus spp.

Grupo D

Paciente femenino 72 aos Mieloma mltiple Varias neumonas

14 aos

24/04/2011

Bolo de Dexametasona

04/05/2011

Ingresa Sntomas y signos

Tos Sensacin febril Expectoracin Adinamia 38C Murmullo vesicular asimtrico Crepitaciones : mayor en pulmn derecho Sibilancias

Infiltrado Paracardaco derecho

NEUMONA

Cefotaxima y Levofloxacina

Hemograma
Parmetro Resultado Valores normales
4.000 / 10.000
40 70 20 40

Leucocitos
Neutrfilos Linfocitos

1500 cel/mm3
40% 20%

Monocitos
Plaquetas Hemoglobina Hematocrito Bandas

4%
69 000 cel/mm3 8.7 g/dL 27% 24%

2 10
150.000 400.000 14 18 41 51 5 15

Qumica
Parmetro Creatinina Nitrgeno ureico Na K Cl Ca Resultado 2,4 mg/dL 53 mg/dL 127 mEq/L 4.5 mEq/L 104 mEq/L 7.9 mg/dL Valores normales
0,7 1,5 20 40 135 145 3,5 5,0 100 106 8,5 10,5

Gases
Parmetro pH PO2 PCO2 Bicarbonato Resultado 7.43 49 mmHg 33 mmHg 21 mEq/litro Valores normales 7.35 - 7.45 75 - 100 35 - 45 94 - 100 21 - 26

Saturacin O2 79%

Identificacin
Muestra = Sangre
ANLISIS Antibioterapia Muestra clnica Tipo examen Fecha recepcin Fecha finalizacin RESULTADO S recibe Sangre Hemocultivo 04/05/09 06/05/09
5mL

Botella: Bact-Alert 3D CTS +Carbn

Equipo
-Sistema agitacin -Sensor de CO2 -Lecturas c/10 min

Crecimiento [CO2]

Identificacin
Manitol GRAM Cocos gram (+)

Chocolate
Agar Sangre

Hemlisis Catalasa Optoqun

Identificacin

VITEK 2 Y PSA

Aislamiento: Streptococcus pneumoniae

Resultado S S S S S S R S S S S S R S

Antibitico Bencilpenicilina Cefotaxima (Meningitis) Cefotaxima (No Meningitis) Ceftriaxona (Meningitis) Ceftriaxona (No Meningitis) Cloranfenicol Eritromicina Levofloxacino Linezoid Moxifloxacino Ofloxacino Tetraciclina Trimetoprima/Sulfametoxazol Vancomicina

Esputo o aspirado bronquial

Al obtener crecimiento colonial realizar pruebas como:

Catalasa Pruebas especiales como: Sensibilidad al Optoqun Sensibilidad a la Bacitracina

Si no hacemos previamente un gram, debemos montar en los siguientes medios:

Agar Sangre Agar Chocolate Mac Conkey Agar Manitol Sal***
***Importante correlacionar con la clnica e historia del paciente.
(Staphylococcus aureus y algunos del grupo viridans)

Procedemos a montar la respectiva tarjeta para el VITEK

Descripcin de la muestra. Celularidad >10 Leucos Gram

Diferencial.

Cultivo

BacT-Alert 3D

Gnero Enterococcus

Incluye varias especies: E. faecalis y E. faecium Flora normal del tracto digestivo Escaso poder patgeno. Sinergia con otras bacterias aerobias y anaerobias (E. coli y B. fragilis) que favorecen la capacidad invasiva. Elevada resistencia antimicrobianos: Causa importante de infecciones hospitalarias (ITU, infecciones de heridas quirrgicas) Infecciones intraabdominales (polimicrobianas)

Enterococcus faecalis
Contenido Clasificacin Caractersticas Generales Fisiologa Pruebas de Identificacin Medio de Cultivo Hbitat Patogenicidad Mecanismos de Resistencia Apndice Bibliografa Pgina 2 3 4 5 6 8 9 10 11 12

50

1. Clasificacin

Taxonoma
Familia: Enterococcaceae Gnero: Enterococcus

Especie: faecalis

Tincin de Gram: Positivo

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2. Caractersticas Generales

Enterococcus

faecalis

es

una

bacteria

comensal1, que habita el tracto gastrointestinal de humanos y otros mamferos, E. faecalis

puede causar infecciones comprometidas en

humanos, especialmente en ambiente de
Tincin de Gram en la que se observa E. faecalis

hospital. La existencia de enterococos se

potencia porque ha tenido la habilidad de adquirir resistencia a los antibiticos en uso.
52

3. Fisiologa

Enterococos que tpicamente se disponen en parejas o en cadenas cortas, son anaerobios facultativos y su temperatura ptima de

crecimiento es de 35C aunque pueden crecer

en un intervalo de 10c y 45C.

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4.Pruebas de Identificacin
Prueba Growth in 0.1% methylsene blue milk Ammonia from arginine Reduction of tetrazonlium Reduction of posassium tellurite Tyrosine decarboxylated Acid from L-arabinose Acid from arbutin Acid from melezitose Acid from melibiose Resultado + + + + + +

Acid from sorbitol

Acid from sorbose

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5. Medio de Cultivo
Agar S-S (Salmonella Shigella)
Frmula (en gramos por litro)
Pluripeptona Extracto de carne Lactosa Mezcla de sales biliares Citrato de sodio Tiosulfato de sodio Citrato frrico Agar Verde brillante Rojo neutro 5 5 10 8.5 8.5 8.5 1 13.5 0.00033 0.025 pH final: 7.0 0.2 Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullicin durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

Instrucciones

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5. Medio de Cultivo

Siembra: Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo. Recomendaciones, se aconseja

sembrar en forma conjunta una placa de agar

E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento Microorganismos Colonias

(B02-114-05).

Incubacin:
Presentacin

Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis. x 100g :Cdigo: B02-138-05 X 500g :Cdigo: B02-138-06

Resultados

56

6. Hbitat

El hbitat normal de estos es el tubo digestivo de animales de sangre caliente.

Son indicadores de contaminacin fecal, por

lo que su presencia en los alimentos indica falta de higiene o defectuosas condiciones de
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7. Patogenicidad

The ability of E. faecalis isolates to cause serious infections has been linked to the intrinsic ruggedness of the bacterium, which

allows the organism to persist in the hospital

environment and survive many host

defenses, compounded by the acquisition of

a variety of variable virulence traits by horizontal transfer from other organisms. 58

8. Mecanismos de Resistencia

E. faecalis resiste aminoglicsidos,

aztreonam, cefalosporina, clindamicina,
Aztreonam

las penicilinas semisintticas (nafcilina,

oxacilina,Clindamicina amoxicilina y trimetoprim-sulfametoxazole).
Cefalosporina

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Neisseria

Familia Neisseriaceae Gram Diplococos Aerobios estrictos Saprfitas o patgenas de la especie humana y animales. Oxidasa y catalasa positivos

Neisseria. Especies ms importantes.

Neisseria meningitidis (meningococo)

Producen meningitis Producen gonorrea.

Neisseria gonorrhoeae (gonococo)

Neisseria spp saprfitas. Habituales de rinofaringe y aparato genital, no patgenas. ----------------------------------------------

Las neiserias saprfitas son poco exigentes, fciles de cultivar en medios comunes y crecen entre 22 y 35 C. N. meningitidis y N. gonorrhoeae son muy exigentes, dificiles de cultivar y solo crecen entre 35 y 37 C

Neisseria meningitidis: Accin patgena

Diplococos en granos de caf Afecta a vas respiratorias superiores y causa meningitis epidmica (sobre todo en nios con alta tasa de mortalidad). Factores de virulencia:

La cpsula que le confiere gran resistencia Protenas de membrana con accin muy txica. Fimbrias para adherirse al epitelio que invade

La cpsula presenta un polisacrido con distintas propiedades antignicas que permiten clasificar al menigococo en serogrupos (las cepas ms patgenos pertenecen a los serogrupos A, B, y C). Los serogrupos ms frecuentes en Espaa son el B y el C

Neisseria meningitidis: Cuadro clnico

Comienza con rinofaringitis leve que evoluciona a ms severa y posible bronquitis. Puede pasar a sangre y de all a piel dando petequias, fiebres altas y artralgias. Puede pasar a lquido cefalorraqudeo y meninges (meningitis): Fiebres muy altas, cefala, rigidez de nuca, vmitos, diarreas, etc. que pueden acabar en muerte si no se trata rpidamente. El examen de lquido cefalorraqudeo es turbio, purulento y con abundantes meningococos.

Neisseria gonorrhoeae: Accin patgena

Diplococos con afinidad por las mucosas urogenitales. Produce la Gonorrea de transmisin por contacto sexual. Factores de virulencia:

Protenas de membrana con diferentes caractersticas antignicas. Fimbrias (adherencia y dificultad para ser fagocitadas) Endotoxina que inactiva anticuerpos prximos.

Neisseria gonorrhoeae: Accin patgena

Tras el contacto sexual:

A las pocas horas los gonococos se adhieren a las mucosas mediante las fimbrias Penetran a tejidos subepiteliales, se multiplican y liberan endotoxinas con efecto sobre uretra, cuello uterino, ano, etc. con destruccin de clulas epiteliales, formacin de procesos supurativos purulentos, dolor a la miccin por uretritis, afectando tambin a cuello de tero y vaginitis en mujeres. Sobre el 50% son asintomticos cronificacin (al no ser tratado).

Neisseria meningitidis. Aislamiento. Caracteres bioqumicos.

TOMA DE MUESTRAS:

De LCR por puncin lumbar Examinar rpidamente (sensible)

A la muestra de LCR turbio y purulento se le realiza:

Examen directo: Se centrifuga:

Sedimento Frotis para tinciones (gram, tinta china, etc.) Sobrenadante: Tcnicas inmunolgicas para detectar Polisacridos capsulares y protenas.

Siembra en Agar sangre, agar chocolate, etc. Puede realizarse tambin un hemocultivo.

Neisseria meningitidis. Aislamiento. Caracteres bioqumicos.

Pruebas bioqumicas: Catalasa (+) Oxidasa (+) O/F con glucosa y maltosa (oxidativo) Reduccin de NO3 a NO2 (-) Estudios serolgicos del LCR o del Suero.

Neisseria gonorrhoeae. Aislamiento. Caracteres bioqumicos.

TOMA DE MUESTRA:

En el laboratorio a primera hora antes de la primera miccin (si es posible) De uretra, recto y cuello de tero.

EXAMEN DIRECTO: Frotis y tincin de gram. CULTIVO: en medios enriquecidos (agar sangre, agar chocolate, Thayer Martin modificado, NYC medium) Incubar a 35 37 C, humedad al 70 % y 5 10 % de CO2. Pruebas bioqumicas: O/F, oxidasa, catalasa, etc. Pruebas serolgicas (ELISA).

PUNCIN LUMBAR

2/3 Neutrfilos

2000 Leucocitos/L Clulas mononucleares

Glucosa

Pleocitosis

Liquido Claro

LCR

Protenas
1/3 100mg/dL

Presin Ligeramente

Cultivo Bacteriano Negativo

Gracias