Manuel de Sécurité Biologique en Laboratoire

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE TROISIME DITION
Depuis sa premire dition publie il y a plus de vingt ans en 1984, le Manuel de scurit biologique en laboratoire est toujours le guide pratique auquel les laboratoires de tous niveaux se rfrent en matire de scurit biologique. Une bonne technique microbiologique et une utilisation judicieuse des quipements de scurit par un personnel convenablement form sont toujours des lments fondamentaux de la scurit biologique en laboratoire. Cela tant, la mondialisation, les progrs importants raliss par la technologie, lapparition de maladies nouvelles et les srieuses menaces que reprsentent les agents ou les toxines microbiologiques dtourns de leur usage normal et dlibrment introduits dans lenvironnement, appellent un rexamen des techniques actuellement utilises dans les laboratoires. Cest pourquoi le manuel a t largement remani et dvelopp loccasion de cette nouvelle dition. Le manuel aborde maintenant la question de lvaluation du risque et les rgles de scurit observer dans la mise en uvre des technologies de recombinaison de lADN ; en outre, il propose un certain nombre de principes directeurs pour la mise en service des laboratoires et leur agrment. Les diffrents concepts de la scurit biologique sont exposs, de mme que la rglementation internationale la plus rcente relative au transport des substances infectieuses. Diverses considrations de scurit biologique applicables aux laboratoires des tablissements de soins, qui figuraient dans dautres publications de lOMS, sont galement reprises dans le manuel. Le manuel devrait continuer tre, pour les pays, un encouragement mettre en uvre des programmes de scurit biologique ainsi que des codes nationaux de bonnes pratiques pour la manipulation, dans de bonnes conditions de scurit, de matriels biologiques potentiellement infectieux.
ISBN 92 4 254650 X
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

Troisime dition
OMS
Organisation mondiale de la Sant
MANUEL DE SCURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

Troisime Edition
ORGANISATION MONDIALE DE LA SANT Genve 2005
Catalogage la source: Bibliothque de lOMS Organisation mondiale de la Sant. Manuel de scurit biologique en laboratoire. 3e d. 1.Matrise risque biologique mthodes 2.Laboratoire normes 3.Infection laboratoire prvention et contrle 4.Manuel I.Titre. ISBN 92 4 254650 X (Classication LC/NLM: QY 25)
Cette publication a bnci dune subvention (Grant/Cooperative Agreement Number U50/ CCU012445-08) des Centers for Disease Control and Prevention (CDC), Atlanta, Gorgie, EtatsUnis dAmrique. Les informations quelle contient sont publies sous la responsabilit exclusive des auteurs et ne reprsentent pas ncessairement le point de vue ofciel de lOMS.
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Table des matires
Avant-propos Remerciements 1. Principes gnraux Introduction PARTIE I Les principes directeurs de la scurit biologique 2. Evaluation du risque microbiologique Echantillons pour lesquels les informations sont limites Evaluation du risque et micro-organismes gntiquement modis 3. Les laboratoires de base Scurit biologique niveaux 1 et 2 Code de bonnes pratiques Conception et amnagement du laboratoire Appareils et quipements de laboratoire Surveillance mdico-sanitaire Formation Traitement des dchets Scurit chimique, lectrique, incendie, radioprotection et scurisation de lappareillage 4. Le laboratoire de connement Scurit biologique niveau 3 Code de bonnes pratiques Conception et amnagement du laboratoire Appareils et quipements de laboratoire Surveillance mdico-sanitaire 5. Le laboratoire de connement haute scurit Scurit biologique niveau 4 Code de bonnes pratiques Conception et amnagement du laboratoire
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SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE MANUEL DE SECURITE
6. Animaleries Animalerie Scurit biologique niveau 1 Animalerie Scurit biologique niveau 2 Animalerie Scurit biologique niveau 3 Animalerie Scurit biologique niveau 4 Invertbrs 7. Principes directeurs pour la mise en service des laboratoires ou installations 8. Principes directeurs pour lagrment des laboratoires/ installations PARTIE II Scurit biologique en laboratoire 9. Principes de la sret biologique en laboratoire PARTIE III Equipements de laboratoire 10. Enceintes de scurit biologique Enceinte de scurit biologique de classe I Enceinte de scurit biologique de classe II Enceinte de scurit biologique de classe III Raccordements pour lvacuation de lair des enceintes de scurit biologique 62 Choix dune enceinte de scurit biologique Utilisation des enceintes de scurit biologique au laboratoire 11. Equipements de scurit Isolateurs dpression en lm ou feuille de plastique souple Pipetteurs Homogniseurs, agitateurs secoueurs, mlangeurs et gnrateurs dultrasons Anses usage unique Micro-incinrateurs Equipements et vtements de protection individuelle PARTIE IV Bonnes techniques microbiologiques 12. Techniques de laboratoire Rgles de scurit pour la manipulation des chantillons au laboratoire Utilisation des pipettes et des dispositifs de pipettage Comment viter la dissmination de matriel infectieux
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32 33 33 34 35 36 38 41 49 51 55 57 58 59 62
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TABLE DES MATIRES
Utilisation des enceintes de scurit biologique Comment viter lingestion de matriel infectieux et le contact avec la peau et les yeux Comment viter linoculation accidentelle de matriel infectieux Sparation du srum Utilisation des centrifugeuses Utilisation des homogniseurs, des agitateurs secoueurs, des mlangeurs et des gnrateurs dultrasons Utilisation des broyeurs de tissus Entretien et utilisation des rfrigrateurs et conglateurs Ouverture des ampoules contenant du matriel infectieux lyophilis Stockage des ampoules contenant du matriel infectieux Prcautions dusage pour manipuler du sang et autres liquides biologiques, des tissus et des excreta Prcautions prendre avec le matriel pouvant contenir des prions 13. Plans durgence et conduite tenir en cas durgence Plan durgence Conduite tenir en cas durgence dans un laboratoire de microbiologie 14. Dsinfection et strilisation Dnitions Nettoyage du matriel de laboratoire Germicides chimiques Dcontamination de lenvironnement local Dcontamination des enceintes de scurit biologique Lavage et dcontamination des mains Dsinfection et strilisation par la chaleur Incinration Elimination 15. Introduction au transport des matires infectieuses Rglementation internationale relative aux transports Le systme du triple emballage Consignes pour nettoyer des produits rpandus
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SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE MANUEL DE SECURITE
PARTIE V Introduction aux biotechnologies 16. Scurit et technologies de recombinaison de lADN Considrations bioscuritaires applicables aux systmes dexpression biologiques Considrations bioscuritaires applicables aux vecteurs dexpression Vecteurs viraux pour le transfert de gnes Animaux transgniques et animaux knock out Plantes transgniques Evaluation du risque dans le cas des organismes gntiquement modis Autres considrations PARTIE VI Scurit chimique, lectrique et incendie 17. Les risques chimiques Voies dexposition Stockage des produits chimiques Rgles gnrales dincompatibilit chimique Toxicit des produits chimiques Produits chimiques explosifs Renversement accidentel de produits chimiques Gaz comprims et liqus 18. Autres types de risques au laboratoire Risque dincendie Risques lectriques Bruit Rayonnements ionisants PARTIE VII La scurit : organisation et formation 19. Le responsable de la scurit et le comit de scurit Le dlgu la scurit Le comit de scurit biologique 20. La scurit du personnel de maintenance et dentretien Services de maintenance des appareils et des btiments Nettoyage 21. Programmes de formation
111 113 114 114 114 115 115 115 117 119 121 121 121 121 121 122 122 123 125 125 126 126 127 131 133 133 134 136 136 136 137
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TABLE DES MATIRES
PARTIE VIII Liste des contrles de scurit 22. Liste des contrles de scurit Locaux Entreposage Assainissement et locaux pour le personnel Chauffage et ventilation Eclairage Services Sret biologique en laboratoire Prvention des incendies et protection contre le feu Stockage des liquides inammables Gaz comprims et liqus Risques lectriques Protection individuelle Sant et scurit du personnel Appareils et quipements de laboratoire Matriel infectieux Produits chimiques et matires radioactives PARTIE IX Bibliographie, annexes et index Bibliographie Annexe 1 Premiers secours Annexe 2 Vaccination du personnel Annexe 3 Centres collaborateurs de lOMS pour la scurit biologique Annexe 4 Scurit demploi des appareils et instruments Appareils et instruments dont lutilisation peut comporter un risque Annexe 5 Produits chimiques : dangers et prcautions prendre Index
141 143 143 144 144 144 144 144 145 145 146 146 147 147 148 148 149 149 151 153 156 157 158 159 159 163 211
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Avant-propos
LOrganisation mondiale de la Sant (OMS) a pris conscience depuis longtemps que la scurit, et en particulier la scurit biologique, constitue une question importante au plan international. LOMS a en effet publi la premire dition de son Manuel de scurit biologique ds 1984. Ce manuel a constitu, pour les pays, une incitation accepter et appliquer les concepts de base de la scurit biologique et mettre au point des recueils nationaux de directives pratiques ou codes de bonnes pratiques destins aux laboratoires de leur territoire o sont manipuls des micro-organismes pathognes. Depuis cette poque, de nombreux pays se sont inspirs des indications du manuel pour laborer ces recueils ou codes. Une deuxime dition en a t publie en 1997. En publiant cette troisime dition du manuel, consacre aux questions de sret et de scurit biologiques qui se posent nous en ce troisime millnaire, lOMS continue de jouer un rle pilote dans le domaine de la scurit biologique au niveau international. Dans la prsente dition, limportance dune attitude responsable du personnel est constamment souligne. De nouveaux chapitres ont t ajouts; ils portent sur lvaluation du risque, les mesures de scurit dans la mise en uvre de techniques utilisant de lADN recombinant et le transport dchantillons biologiques infectieux. Des vnements rcents ont mis en lumire les nouvelles menaces que lon pourrait faire peser sur la sant publique en dtournant dlibrment des agents ou des toxines biologiques de leur usage normal pour les librer dans lenvironnement. La troisime dition constitue donc galement une introduction la notion de sret biologique notamment en ce qui concerne la protection des ressources biologiques contre le vol, la perte ou le dtournement de ces agents qui pourraient dboucher sur une utilisation mauvais escient dommageable pour la sant publique. Le nouveau manuel contient galement des informations de nature scuritaire tires dune publication de lOMS intitule Safety in health care laboratories (1). Cette troisime dition du Manuel de scurit biologique en laboratoire constituera un ouvrage de rfrence et un guide utile aux pays dsireux de sattaquer la tche difcile que reprsentent llaboration et ltablissement de recueils nationaux de directives pratiques ou de codes de bonnes pratiques, pour une scurisation des
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AVANT-PROPOS
ressources microbiologiques qui nentrave pas leur utilisation en clinique, dans la recherche et en pidmiologie.
Dr A. Asamoah-Baah Sous-directeur gnral Maladies transmissibles Organisation mondiale de la Sant Genve, Suisse
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Remerciements
Nous sommes trs reconnaissants aux personnes dont les noms suivent et dont les comptences nous ont t prcieuses pour la prparation de cette troisime dition du Manuel de scurit biologique en laboratoire : Dr W. Emmett Barkley, Howard Hughes Medical Institute, Chevy Chase, MD, EtatsUnis dAmrique Dr Murray L. Cohen, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, EtatsUnis dAmrique (retrait) Dr Ingegerd Kallings, Institut sudois pour la lutte contre les maladies infectieuses, Stockholm, Sude Mme Mary Ellen Kennedy, Consultante en scurit biologique, Ashton, Ontario, Canada Mme Margery Kennett, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North Melbourne, Australie (retraite) Dr Richard Knudsen, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, Etats-Unis dAmrique Dr Nicoletta Previsani, Programme de scurit biologique, Organisation mondiale de la Sant, Genve, Suisse Dr Jonathan Richmond, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, Etats-Unis dAmrique (retrait) Dr Syed A. Sattar, Facult de Mdecine, Universit dOttawa, Ottawa, Ontario, Canada Dr Deborah E. Wilson, Division of Occupational Health and Safety, Ofce of Research Services, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, Washington, DC, Etats-Unis dAmrique Dr Riccardo Wittek, Institut de biologie animale, Universit de Lausanne, Lausanne, Suisse Nous exprimons galement notre gratitude aux personnes suivantes pour laide quelles nous ont apporte : Mme Maureen Best, Bureau de la scurit des laboratoires, Sant Canada, Ottawa, Canada Dr Mike Catton, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North Melbourne, Australie
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REMERCIEMENTS
Dr Shanna Nesby, Ofce of Health and Safety, Centers for Diseases Control and Prevention, Atlanta, GA, Etats-Unis dAmrique Dr Stefan Wagener, Canadian Science Centre for Human and Animal Health, Winnipeg, Canada Les auteurs et les membres du comit de lecture souhaitent galement exprimer leur gratitude aux nombreux spcialistes qui ont contribu la premire et la seconde dition du prsent manuel ainsi qu la rdaction de la publication de lOMS intitule Safety in health-care laboratories (1997) (1).
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1. Principes gnraux
Introduction Dans tout le manuel, il est fait rfrence au danger relatif que reprsentent les microorganismes infectieux au moyen dune classication par groupe de risque (groupes de risque de lOMS 1, 2, 3 et 4). Cette classication par groupe de risque nest applicable quaux travaux de laboratoire. Ces groupes de risque sont explicits dans le tableau 1. Tableau 1. Classication des micro-organismes infectieux par groupe de risque
Groupe de risque 1 (risque faible ou nul pour les individus ou la collectivit) Micro-organisme qui, selon toute probabilit, ne peut causer de maladie humaine ou animale. Groupe de risque 2 (risque modr pour les individus, faible pour la collectivit) Germe pathogne capable de provoquer une maladie humaine ou animale mais qui ne prsente vraisemblablement pas un srieux danger pour le personnel de laboratoire , la collectivit, le btail ou lenvironnement. Une exposition en laboratoire est susceptible dentraner une infection grave, mais qui peut tre traite ou prvenue efcacement; par ailleurs le risque de propagation de linfection est limit. Groupe de risque 3 (risque important pour les individus, faible pour la collectivit) Germe pathogne qui cause habituellement une grave maladie humaine ou animale, mais qui ne se transmet gnralement pas dun individu lautre. Il existe un traitement et des mesures prventives efcaces. Groupe de risque 4 (risque important pour les individus comme pour la collectivit) Germe pathogne qui cause habituellement une grave maladie humaine ou animale et peut se transmettre facilement dun individu lautre, soit directement, soit indirectement. Il nexiste gnralement ni traitement, ni mesures prventives efcaces.
Les laboratoires sont dsigns comme suit : laboratoire de base scurit biologique niveau 1, laboratoire de base scurit biologique niveau 2, laboratoire de connement scurit biologique niveau 3, laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4. Le niveau de scurit biologique est un indice composite bas sur le type dorganisation, le mode de construction, les moyens de connement et lappareillage du laboratoire ainsi que sur les pratiques et modes opratoires observer pour travailler sur des agents appartenant aux divers groupes
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Tableau 2. Rapport entre groupe de risque et niveau de scurit biologique, pratiques et appareillage
GROUPE DE RISQUE NIVEAU DE SCURIT TYPE DE LABORATOIRE PRATIQUES DE PABORATOIRE APPAREILLAGE DE SCURIT
De base niveau de scurit biologique 1 De base niveau de scurit biologique 2
Enseignement de base Services de sant primaires; laboratoire danalyses ou de recherche Diagnostic spcialis, recherche
BTM
Aucun; paillasse sans protection Paillasse sans protection et ESB contre le risque darosols ESB ou autres moyens de connement primaire pour lensemble des activits ESB classe III ou combinaisons pressurises utilises avec une ESB classe II , autoclave deux portes formant sas mural, air ltr
BTM et vtements protecteurs, logo de risque biologique Comme niveau 2, plus vtements spciaux, accs rglement et ux dair dirig Comme niveau 3, plus sas air lentre, douche la sortie et limination spcique des dchets
Connement niveau de scurit biologique 3
Connement haute scurit niveau de scurit biologique 4
Manipulation de germes pathognes dangereux
BTM, bonnes techniques microbiologiques; ESB, enceinte de scurit biologique (voir Partie IV).
de risque. Le tableau 2 indique le rapport entre groupe de risque et niveau de scurit biologique, mais il nassimile pas les groupes de risque au niveau de scurit biologique des laboratoires conus pour travailler sur des micro-organismes appartenant ces groupes. Chaque pays ou rgion devra tablir une classication nationale ou rgionale, par groupe de risque, des micro-organismes. Cette classication devra reposer sur les critres suivants : 1. Pathognicit du germe. 2. Mode de transmission et gamme dhtes, qui peuvent dpendre de ltat immunitaire de la population locale, de la densit et de la mobilit des htes, de la prsence de vecteurs appropris et du niveau dhygine de lenvironnement.
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1. PRINCIPES GNRAUX
Tableau 3. Normes applicables aux diffrents niveaux de scurit biologique

NIVEAU DE SCURIT BIOLOGIQUE
1 Isolement du laboratoire Salle tanche pour dcontamination Ventilation : circulation vers lintrieur systme de ventilation rgul ltre HEPA sur la sortie dair Double porte dentre Sas air Sas air avec douche Vestibule Vestibule avec douche Traitement des efuents Autoclave : sur place dans une salle du laboratoire deux portes formant sas Enceinte de scurit biologique Systme de surveillance de la scurit du personneld
a b c d
2 Non Non Souhaitable Souhaitable Non Non Non Non Non Non Non Souhaitable Non Non Souhaitable Non
3 Oui Oui Oui Oui Oui/Nonb Oui Non Non Oui Oui/Nonc Oui/Nonc Oui Souhaitable Souhaitable Oui Souhaitable
4 Oui Oui Oui Oui Oui Oui Oui Oui Non Oui Oui Oui Oui Oui Oui
Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non
Isolement environnemental et fonctionnel par rapport aux points de passage Selon la situation de la sortie dair (voir chapitre 4) Selon le ou les agents qui sont manipuls Par exemple, fentre, tlvision en circuit ferm, metteur-rcepteur
3. Possibilit de prendre localement des mesures prventives efcaces, lesquelles peuvent comprendre : une prophylaxie par vaccination ou administration dimmunsrums (immunisation passive), des mesures sanitaires concernant par exemple lhygine des aliments et de leau, llimination des rservoirs animaux ou des arthropodes vecteurs. 4. Possibilit de dispenser localement un traitement efcace : immunisation passive, vaccination post-exposition, utilisation danti-infectieux et dagents chimiothrapiques ou antiviraux, sans ngliger le risque dapparition de souches pharmacorsistantes. Pour dterminer quel niveau de scurit biologique en laboratoire sapplique un agent donn, il faut procder une valuation du risque. Pour cela, on doit prendre en compte non seulement le groupe de risque, mais aussi un certain nombre dautres facteurs. Par exemple, un agent inclus dans le groupe de risque 2 ncessite gnralement une installation, un appareillage, des pratiques et des modes opratoires correspondant au niveau de scurit 2 si lon veut que le travail seffectue avec le minimum de risques. Par contre, si certaines manipulations impliquent la production darosols trs concentrs, il vaudra mieux passer au niveau 3 pour que les conditions
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de scurit soient remplies, car ce niveau, un meilleur connement des arosols sera assur dans le laboratoire. La dtermination du niveau de scurit biologique exig par une manipulation donne consiste donc apprcier le risque en professionnel , plutt qu adopter automatiquement le niveau de scurit correspondant au groupe de risque auquel appartient lagent pathogne en cause (voir chapitre 2). Le tableau 3 rcapitule les installations et moyens ncessaires chaque niveau de scurit biologique. Pour dterminer le niveau de scurit biologique, on prend donc en compte le micro-organisme (agent pathogne), les installations et moyens existants ainsi que les pratiques et les modes opratoires respecter pour que le travail de laboratoire seffectue dans de bonnes conditions de scurit.
PARTIE I
Les principes directeurs de la scurit biologique
2. Evaluation du risque microbiologique
Dans sa pratique, la scurit biologique repose essentiellement sur une valuation du risque. On peut saider de nombreux outils pour procder cette valuation, mais le facteur le plus important reste le jugement professionnel. Lvaluation du risque doit tre cone ceux qui connaissent le mieux les caractristiques des micro-organismes sur lesquels on se propose de travailler, lappareillage et les modes opratoires mettre en uvre, les modles animaux qui pourraient tre utiliss ainsi que les systmes de connement et les installations disponibles. Il incombe au directeur du laboratoire ou au chercheur principal de veiller ce quune valuation approprie du risque soit effectue en temps voulu et de collaborer troitement avec le comit de scurit de linstitution et le personnel charg de la scurit biologique pour que les quipements et les installations ncessits par les travaux envisags soient mis la disposition du laboratoire. Une fois le risque valu, on procdera priodiquement un rexamen systmatique de la situation et on rvisera lvaluation si ncessaire, compte tenu dventuelles donnes nouvelles susceptibles davoir des incidences sur le degr de risque et de toute nouvelle information utile tire de la littrature scientique. Ltablissement de groupes de risque applicables aux diffrents agents microbiens constitue lun des outils les plus utiles pour lvaluation du risque microbiologique (voir chapitre 1). Toutefois, il ne suft pas de connatre le groupe de risque auquel appartient un agent pathogne donn pour valuer le risque effectif. Dautres lments dapprciation doivent galement tre pris en compte en tant que de besoin, savoir : 1. La pathognicit du germe et la dose infectieuse 2. Lissue vraisemblable dune exposition au germe 3. Le mode de contamination naturel 4. Les autres voies ou modes de contamination rsultant de manipulations en laboratoire (voie parentrale, particules aroportes, voie digestive) 5. La stabilit du germe dans lenvironnement 6. La concentration du germe et le volume de matriel biologique concentr manipuler 7. La prsence dun hte appropri (humain ou animal) 8. Les informations tires de lexprimentation animale, les rapports faisant tat dinfections contractes en laboratoire ou les rapports mdicaux 9. Le type doprations envisages (traitement par les ultra-sons, production darosols, centrifugation, etc.)
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10. Toute manipulation gntique du micro-organisme susceptible dtendre sa gamme dhtes ou de modier sa sensibilit aux traitements reconnus comme efcaces (voir chapitre 16) 11. La possibilit dintervenir localement titre prophylactique ou curatif. En sappuyant sur les informations recueillies lors de lvaluation du risque, il est possible de dterminer quel est le niveau de scurit requis pour les travaux envisags, de choisir les quipements de protection individuelle et dtablir des modes opratoires normaliss (MON) comportant dautres mesures de scurit labores en vue dassurer un maximum de scurit pendant les travaux. Echantillons pour lesquels les informations sont limites La procdure dcrite plus haut pour lvaluation du risque donne satisfaction lorsquon dispose dinformations sufsantes. Il y a cependant des cas o lon ne dispose pas de donnes sufsantes pour apprcier correctement le risque, par exemple lorsquon a affaire des chantillons cliniques ou pidmiologique prlevs sur le terrain. En pareil cas, il est plus prudent de manipuler ces chantillons avec prcaution. 1. Les prcautions habituelles (2) doivent toujours tre prises et des dispositifs mcaniques de protection (gants, blouses, lunettes) utiliss lors du prlvement dchantillons sur des malades. 2. Connement de base les pratiques et modes opratoires prvues au niveau de scurit biologique 2 constituent un minimum pour la manipulation des chantillons. 3. Le transport des chantillons doit seffectuer conformment la rglementation nationale ou internationale. Certaines donnes peuvent apporter un complment dinformation utile lvaluation du risque que reprsente la manipulation de ces chantillons, savoir : 1. Le dossier mdical du malade 2. Les donnes pidmiologiques (statistiques de morbidit et de mortalit, mode de transmission prsum, autres donnes fournies par ltude de la ambe pidmique) 3. Donnes relatives lorigine gographique de lchantillon. Lorsquclatent des ambes dune maladie dont on ignore ltiologie, les autorits comptentes, lOMS ou les deux la fois, peuvent tre amenes laborer des directives spciales et les diffuser sur le rseau internet (comme cela a t le cas en 2003 lors de lapparition du syndrome respiratoire aigu svre (SRAS)), le but tant dindiquer comment prparer les chantillons pour lexpdition et de prciser quel niveau de scurit biologique les analyses doivent tre effectues. Evaluation du risque et micro-organismes gntiquement modis On trouvera au chapitre 16 une tude dtaille de lvaluation du risque dans le cas dorganismes gntiquement modis (OGM).
3. Les laboratoires de base Scurit biologique niveaux 1 et 2

Aux ns du prsent manuel, les indications et recommandations quil contient et qui constituent un minimum pour les laboratoires de tous niveaux de scurit biologique, sappliquent aux micro-organismes des groupes de risque 1 4. Si certaines prcautions peuvent sembler inutiles pour quelques germes du groupe de risque 1, elles sont nanmoins souhaitables titre dentranement lobservation de bonnes techniques microbiologiques (BTM), cest--dire de techniques qui assurent la scurit. Les laboratoires danalyses ou ceux qui sont attachs un tablissement de soins (laboratoires de sant publique, laboratoires danalyses biologiques ou laboratoires hospitaliers) doivent tous tre amnags au minimum conformment au niveau 2 de scurit biologique. Etant donn quaucun laboratoire na la matrise totale des chantillons quil reoit, il nest pas exclu que le personnel soit expos des microorganismes appartenant un groupe de risque plus lev que prvu. Cette possibilit doit tre prise en compte dans llaboration des politiques et des plans de scurit. Dans certains pays, les laboratoires danalyses biologiques sont soumis un agrment ofciel. Partout dans le monde, les prcautions habituelles (2) de scurit doivent tre adoptes et observes. Les principes directeurs applicables aux laboratoires de base niveaux de scurit biologique 1 et 2 exposs ici sont aussi dtaills et complets que possible car ils sont essentiels pour tout laboratoire quel que soit soit son niveau de scurit biologique. En ce qui concerne les laboratoires de connement scurit biologique niveau 3, et les laboratoires de connement haute scurit scurit biologique niveau 4, les principes directeurs exposs plus loin (chapitres 4 et 5) constituent des variantes ou des complments des principes de base, applicables aux travaux sur des agents pathognes particulirement dangereux. Code de bonnes pratiques Ce code est une liste des mthodes et techniques de laboratoire les plus importantes pouvant constituer la base dune bonne technique microbiologique. Dans beaucoup de laboratoires ou programmes nationaux relatifs aux laboratoires, ce code peut tre utilis pour mettre par crit des pratiques et des modes opratoires destins assurer la scurit du travail en laboratoire. Tout laboratoire doit disposer dun manuel ou dun guide (manuel pratique, manuel de bonnes pratiques, guide de scurit au laboratoire, manuel de scurit, etc.)
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dans lequel sont repertoris les dangers effectifs et potentiels et qui indique comment procder pour les liminer ou du moins les rduire au minimum. Les bonnes techniques microbiologiques sont un lment essentiel de la scurit au laboratoire. Lemploi dquipements et dappareils de scurit ne sauraient sy substituer et ne peut intervenir qu titre complmentaire. Les principes les plus importants sont indiqus ci-dessous.
Accs
1. Le pictogramme international de danger biologique (gure 1) doit tre appos sur les portes des salles o des micro-organismes appartenant au groupe de risque 2 ou aux groupes suprieurs sont manipuls. 2. Aucune personne trangre au service ne doit tre autorise pntrer dans les zones de travail du laboratoire. 3. Les portes du laboratoire doivent rester fermes. 4. Les enfants ne doivent pas tre autoriss entrer dans les zones de travail du laboratoire.
Figure 1. Panneau de mise en garde apposer sur les portes des laboratoires.
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3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2
5. Tout accs lanimalerie doit tre subordonn une autorisation spciale. 6. La prsence dans le laboratoire danimaux qui ne servent pas aux exprimentations doit tre interdite.
Protection individuelle
1. Le port de combinaisons, blouses, sarraus ou uniformes est obligatoire pour le travail au laboratoire. 2. Le port de gants appropris est obligatoire chaque fois quun geste comporte un risque de contact accidentel direct avec du sang ou autres liquides biologiques, du matriel potentiellement infectieux ou des animaux infects. Aprs usage, on devra se dganter aseptiquement et se laver les mains. 3. Le personnel doit se laver les mains aprs avoir manipul du matriel infectieux ou des animaux contagieux et avant de quitter le laboratoire. 4. Le port de lunettes de scurit, dun cran facial (visire) ou dun autre dispositif de protection est obligatoire quand il est ncessaire dassurer la protection des yeux ou du visage contre les projections de liquides, limpact dobjets ou le rayonnement ultraviolet articiel. 5. Il est interdit de porter les vtements protecteurs hors du laboratoire, comme par exemple la cantine, la caftria, dans les bureaux, la bibliothque, la salle du personnel ou les toilettes. 6. On ne doit pas porter de chaussures bout ouvert dans le laboratoire. 7. Il est interdit de manger, de boire, de fumer, de se maquiller ou de manipuler des lentilles de contact dans les zones de travail du laboratoire. 8. Il est galement interdit dentreposer des aliments ou des boissons en quelque point que ce soit des zones de travail du laboratoire. 9. Les vtements de protection qui ont t ports au laboratoire ne doivent pas tre rangs dans les mmes vestiaires ou armoires que les vtements de ville.
Modes opratoires
1. le pipettage la bouche est rigoureusement interdit. 2. Aucun objet ou matriel ne doit tre port la bouche; les tiquettes ne doivent pas tre humectes avec la langue. 3. Toutes les techniques mises en uvre doivent rduire au minimum la formation darosols et de gouttelettes. 4. Lemploi daiguilles et de seringues hypodermiques doit tre limit. Elles ne doivent en aucun cas remplacer les dispositifs de pipettage ou servir une autre n que les injections par voie parentrale ou le prlvement de liquides biologiques sur les animaux de laboratoire. 5. Si des liquides sont rpandus accidentellement, en cas daccident, dexposition patente ou possible du matriel infectieux, le chef de laboratoire doit toujours tre immdiatement avis. Les accidents et incidents survenus doivent tre consigns et le rapport archiv.
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6. Il est ncessaire dtablir par crit une marche suivre pour le nettoyage des produits de toute nature qui viendraient tre rpandus. 7. Les liquides contamins doivent tre dcontamins (par voie physique ou chimique) avant dtre jets dans le rseau dgouts sparatif. Selon le rsultat de lvaluation du risque que reprsentent le ou les agents manipuls, il pourra tre ncessaire de disposer dun systme de traitement des efuents. 8. Si des documents doivent sortir du laboratoire, ils devront avoir t protgs de toute contamination.
Zones de travail du laboratoire
1. Le laboratoire doit tre tenu propre et en ordre et exempt de tout produit ou objet non ncessaire aux travaux. 2. Les plans de travail doivent tre dcontamins sils ont t souills par des produits potentiellement dangereux ainsi qu la n de la journe de travail. 3. Tout les matriels, chantillons et cultures contamins doivent tre dcontamins avant dtre jets ou nettoys pour tre rutiliss. 4. Lemballage et le transport des chantillons sont soumis la rglementation nationale ou internationale pertinente. 5. Si les fentres peuvent tre ouvertes, elles doivent tre munies de grillages pour empcher la pntration des arthropodes.
Gestion de la scurit biologique
1. Il incombe au directeur (la personne qui a la responsabilit directe du laboratoire) de faire prparer et adopter un plan de gestion de la scurit biologique ainsi quun manuel pratique, un guide de laboratoire ou un guide dhygine et scurit. 2. Le chef de laboratoire (qui relve directement du directeur du laboratoire) doit veiller ce que le personnel reoive une formation rgulire en matire de scurit au laboratoire. 3. Le personnel doit tre averti des risques particuliers aux activits du laboratoire et tenu de lire le manuel. Il doit galement suivre les instructions et les protocoles normaliss. Le chef de laboratoire devra sassurer de la bonne comprhension de ces instructions. Le laboratoire doit disposer dun exemplaire du manuel de laboratoire ou du guide dhygine et scurit. 4. Il doit exister un programme de lutte contre les arthropodes et les rongeurs. 5. Si ncessaire, tous les membres du personnel doivent tre examins par un mdecin, tre suivis mdicalement ou subir un traitement et un dossier mdical doit tre ouvert pour chacun dentre eux.
Conception et amnagement du laboratoire
La conception dun laboratoire et la dnition des tches qui lui sont assignes doivent tenir compte des situations connues pour engendrer des problmes, notamment :
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Figure 2. Laboratoire classique au niveau de scurit 1. (gure aimablement communique par CUH2A, Princeton, NJ, Etats-Unis dAmrique)
1. La formation darosols 2. Le travail sur des volumes importants ou des concentrations leves de micro-organismes 3. Un personnel ou des appareils trop nombreux eu gard la place disponible 4. Linfestation par des rongeurs ou des arthropodes 5. Entre interdite 6. Lordonnancement des tches : utilisation dchantillons et de ractifs particuliers. Les gures 2 et 3 donnent des exemples damnagement de laboratoires aux niveaux de scurit biologique 1 et 2. Conception dun laboratoire 1. Le laboratoire doit tre sufsamment spacieux pour quon puisse travailler en toute scurit et procder facilement au nettoyage et la maintenance.
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6. Les espaces de rangement doivent pouvoir recevoir le matriel courant, de manire viter lencombrement des paillasses et des zones de passage. On prvoira galement des espaces pour le stockage de longue dure, qui devront tre commodment situs, hors des zones de travail. 7. On prvoira la place et les moyens matriels permettant de manipuler et dentreposer sans danger les solvants, les substances radioactives ainsi que les gaz comprims et liqus. 8. Les vestiaires pour les vtements de ville et les objets personnels doivent se trouver en dehors des zones de travail. 9. Les zones prvues pour se restaurer, boire ou se reposer doivent galement se trouver en dehors des zones de travail. 10. On installera des lavabos, si possible avec leau courante, dans chaque salle du laboratoire, de prfrence prs de la porte. 11. Les portes doivent tre munies de panneaux transparents, avoir une rsistance au feu convenable et comporter de prfrence un systme de fermeture automatique. 12. Au niveau de scurit biologique 2, il doit y avoir un autoclave ou autre moyen de dcontamination distance sufsamment proche du laboratoire. 13. Les systmes de scurit doivent couvrir les risques dincendie, les accidents dorigine lectrique et comporter une douche de scurit ainsi quun rince-yeux. 14. On prvoira des zones ou des salles de premiers soins, convenablement quipes et facilement accessibles (voir annexe 1). 15. Dans le plan de toute nouvelle installation, il faudra prvoir un systme de ventilation mcanique assurant un ux dair dirig vers lintrieur sans recyclage. A dfaut, les fentres doivent pouvoir souvrir et tre munies dun grillage anti-arthropodes. 16. Il est indispensable que lalimentation en eau soit able et de bonne qualit. Il ne doit y avoir aucune interconnexion entre les branchements destins au travail du laboratoire et le rseau deau potable. Le rseau public dadduction doit tre protg par un dispositif anti-retour. 17. Lalimentation lectrique doit tre able et de puissance sufsante; il faut prvoir un clairage de secours permettant de sortir en cas de ncessit. Il serait souhaitable de disposer dun groupe lectrogne de secours pour lalimentation des quipements indispensables tels quincubateurs, enceintes de scurit biologique, conglateurs, etc., et pour la ventilation des cages de lanimalerie. 18. Lalimentation en gaz de ville doit tre able et sufsante. Il est impratif dassurer le bon entretien de cette installation. 19. Il arrive que les laboratoires et les animaleries soient la cible de vandales. Linstallation de systmes de protection physique et de scurit anti-incendie doit tre envisage. Il est indispensable de renforcer les portes, dquiper les fentres de grillages et de limiter le nombre de cls. Le cas chant, on devra tudier et mettre en uvre toute autre mesure susceptible damliorer la scurit (voir chapitre 9).
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Appareils et quipements de laboratoire Associe lobservation de bons protocoles et de bonnes pratiques de laboratoire, lutilisation dappareils scuriss et dquipements de scurit permettra de rduire les risques en cas de danger de nature biologique. La prsente section traite des principes de base applicables aux appareils utiliser dans les laboratoires de tous niveaux de scurit biologique. Les spcications applicables aux appareils destins des laboratoires dont le niveau de scurit biologique est plus lev, sont abordes dans les chapitres consacrs ces laboratoires. Aprs consultation du comit de scurit et du dlgu la scurit biologique (sil a t dsign), le directeur du laboratoire sassurera que lappareillage et lquipement sont adquats et correctement utiliss. Les appareils seront choisis en fonction dun certain nombre de principes gnraux tels que : 1. Etre conus pour empcher ou limiter les contacts entre loprateur et le matriel infectieux 2. Etre faits de matriaux impermables aux liquides, rsistants la corrosion et conformes aux normes de solidit 3. Etre dpourvus dasprits, de bords tranchants et dlments mobiles non protgs 4. Etre conus, raliss et installs de faon tre faciles utiliser, rviser, nettoyer, dcontaminer et soumettre aux essais de conformit. Dans la mesure du possible, on vitera dutiliser de la verrerie et autres matriaux fragiles. Des spcications dtailles portant sur la construction et les caractristiques de fonctionnement sont parfois ncessaires pour que les appareils soient conformes aux normes de scurit (voir galement les chapitres 10 et 11).
Appareils et instruments de scurit biologique essentiels
1. Dispositifs de pipettage, pour remplacer le pipettage la bouche. Il en existe de nombreux modles. 2. Enceintes de scurit biologique, utiliser systmatiquement dans les situations suivantes : manipulation de matriel infectieux. Ce matriel peut tre centrifug normalement si la centrifugeuse est munie de godets de scurit tanches remplis et vids dans une enceinte de scurit biologique. existence dun risque accru dinfection aroporte. techniques comportant un risque lev de formation darosols : par exemple, centrifugation, broyage, mlange, agitation ou mixage nergiques, dsagrgation par ultra-sons, ouverture de rcipients contenant du matriel infectieux lorsque la pression intrieure peut tre diffrente de la pression ambiante, inoculation intranasale danimaux et rcolte de tissus infects sur des animaux ou des ufs.
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3. Anses de transfert jetables en matire plastique. On peut aussi utiliser des incinrateurs lectriques pour anses de transfert placs dans une enceinte de scurit biologique en vue de rduire la formation darosols. 4. Tubes et acons bouchon viss. 5. Autoclaves ou autres dispositifs appropris, pour dcontaminer le matriel infectieux. 6. Pipettes Pasteur jetables, en plastique si possible, plutt quen verre. 7. Il faut vrier, par des essais appropris, que les divers quipements ou appareils tels quautoclaves ou enceintes de scurit biologique sont conformes aux spcications et les recontrler priodiquement, conformment aux instructions du fabricant (voir chapitre 7). Surveillance mdico-sanitaire Il incombe lemployeur, par lentremise du directeur du laboratoire, de veiller ce que la sant du personnel soit surveille de faon satisfaisante. Cette surveillance a pour objectif de dpister les maladies dorigine professionnelle. Pour y parvenir, il faut : 1. Assurer limmunisation active (vaccination) et passive du personnel lorsquil y a lieu (voir lannexe 2) 2. Faciliter le dpistage prcoce des infections contractes au laboratoire 3. Ne pas coner de manipulations haut risque aux personnes particulirement vulnrables (par ex. les femmes enceintes ou les sujets immunodprims) 4. Prendre des mesures de protection efcaces et veiller lefcacit des dispositifs de protection.
Lignes directrices pour la surveillance des travailleurs qui manipulent des microorganismes au niveau 1 de scurit biologique
Il apparat, la lumire de lexprience passe, que les micro-organismes manipuls ce niveau nont gure de chances de provoquer de maladies dimportance mdicale ou vtrinaire. Lidal serait cependant que tous les candidats un poste dans un laboratoire passent une visite mdicale dembauche au cours de laquelle on recherchera leur antcdents mdicaux. Il est souhaitable que toute pathologie ou accident de laboratoire soit signal sans dlai et que tous les membres du personnel mesurent combien il est important de maintenir la qualit des techniques microbiologiques.
Lignes directrices pour la surveillance des travailleurs qui manipulent des micro-organismes au niveau 2 de scurit biologique
1. Une visite dembauche simpose avant laffectation un poste dans un laboratoire. Cet examen comportera une anamnse la recherche des antcdents mdicaux et un bilan mdical spcique de laptitude professionnelle sera effectu. 2. La direction du laboratoire devra tenir un registre des absences et des maladies du personnel.
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3. Les femmes en ge de procrer devront tre informes du danger que reprsente, pour lenfant natre, lexposition professionnelle certains micro-organismes, comme le virus de la rubole, par exemple. Les mesures spciques prendre pour assurer la protection du ftus varient selon la nature du germe auquel la future mre peut tre expose. Formation Les mesures de scurit et les appareils et dispositifs de protection, si efcaces soientils, risquent toujours dtre pris en dfaut par lerreur humaine et la mdiocrit de la technique. La base de la prvention des accidents, des incidents et des infections dorigine professionnelle est que le personnel se sente concern par la scurit et sache identier et matriser les risques qui existent dans le laboratoire. Cest pourquoi la formation continue sur le tas aux mesures de scurit est indispensable. Ce processus commence au niveau de la direction du laboratoire, qui doit faire en sorte que la scurit des pratiques et des protocoles soit incorpore la formation de base du personnel. Les mesures de scurit doivent toujours faire partie intgrante de linitiation des nouveaux membres du personnel au fonctionnement du laboratoire. Il faut familiariser les nouveaux employs avec les dispositions du code de bonnes pratiques et leur indiquer les directives locales et notamment leur prsenter le manuel de laboratoire ou le guide dhygine et scurit. Certaines mesures propres garantir que les employs ont bien lu et compris les directives devront tre prises, elles pourront par exemple consister leur faire signer certaines pages. Le rle des chefs de laboratoire dans la formation du personnel directement sous leurs ordres est fondamental pour lacquisition dune bonne technique. Le dlgu la scurit peut aider la formation du personnel et llaboration de matriels pdagogiques et autres documents pour cette formation (voir galement le chapitre 21). La formation du personnel doit systmatiquement inclure les prcautions observer lors de lutilisation de certaines techniques particulirement dangereuses couramment employes dans un laboratoire, savoir : 1. Techniques comportant un risque dinhalation (cest--dire qui conduisent la formation darosols), telles que lutilisation danses, lensemencement en stries de la glose en bote, le pipettage, la ralisation de frottis, louverture des cultures, le prlvement de sang ou de srum, la centrifugation, etc. 2. Techniques comportant un risque dingestion, telles que la manipulation des chantillons, des frottis ou des cultures 3. Techniques comportant un risque dinoculation percutane, telles que lemploi de seringues et daiguilles 4. Manipulation danimaux avec le risque de morsures ou de griffures que cela comporte 5. Manipulation de sang et de matriel biologique pouvant prsenter un danger 6. Dcontamination et limination des dchets infectieux.
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Traitement des dchets On entend par dchets tout ce dont on doit se dbarrasser. Dans les laboratoires, la dcontamination et llimination dnitive des dchets sont troitement lies. Dans la pratique quotidienne, il ny a toutefois gure de matriels contamins qui devront tre vacus hors du laboratoire ou dtruits. La majeure partie de la verrerie, des instruments et des vtements de laboratoire sera recycle et rutilise. Le principe essentiel, cest que tous les matriels infectieux doivent tre dcontamins, passs lautoclave ou incinrs dans le laboratoire. Les principales questions quil faut se poser avant dliminer un objet ou du matriel biologique provenant dun laboratoire qui travaille sur des microorganismes ou des tissus animaux potentiellement dangereux, sont au nombre de trois : 1. Ces objets ou ce matriel biologique ont-ils t striliss ou dsinfects efcacement par lun des procds approuvs ? 2. Dans la ngative, ont-ils t emballs selon une mthode agre en vue de leur incinration immdiate sur place ou de leur transport vers un autre tablissement capable deffectuer cette opration ? 3. Llimination des objets ou du matriel biologique striliss ou dsinfects comporte-t-elle des risques supplmentaires, biologiques ou autres, pour le personnel charg de llimination immdiate sur place ou pour les personnes susceptibles dtre en contact avec ces dchets en dehors du laboratoire ?
Dcontamination
Le passage dans un autoclave vapeur est la mthode de choix chaque fois que lon doit procder une dcontamination. Le matriel destin tre dcontamin et limin sera plac dans des rcipients par exemple des sacs en plastique autoclavables comportant le code couleur qui indique si leur contenu doit tre autoclav ou incinr. Dautres procds ne peuvent tre envisags que sils sont capables dliminer ou de tuer les micro-organismes (pour plus de dtails, se reporter au chapitre 14).
Manipulation et limination du matriel et des dchets contamins
Il faut instituer un systme didentication et de tri des matriels infectieux et de leurs rcipients, en respectant la rglementation nationale et internationale en la matire. Les diffrentes catgories sont les suivantes : 1. Dchets non contamins (non infectieux) pouvant tre rutiliss, recycls ou jets avec les dchets mnagers ordinaires 2. Objets piquants ou tranchants contamins (infectieux) aiguilles hypodermiques, scalpels, couteaux, verre bris; ces objets doivent toujours tre rassembls dans des collecteurs imperforables (botes anti-piques) munis de couvercles et traits comme du matriel infectieux
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3. Matriel contamin destin tre dcontamin par passage lautoclave, puis lav et rutilis ou recycl 4. Matriel contamin destin tre autoclav puis limin 5. Matriel contamin destin tre directement incinr.
Objets pointus ou tranchants
Aprs usage, les aiguilles hypodermiques ne doivent pas tre recapuchonnes, casses ou dsadaptes des seringues jetables. Lensemble complet devra tre plac dans un collecteur spcialement destin ce type dobjet. Les seringues jetables, utilises seules ou avec une aiguille, devront tre places dans des collecteurs spciaux pour objets pointus ou tranchants, puis incinres, aprs autoclavage pralable si ncessaire. Les collecteurs pour objets pointus ou tranchants doivent tre imperforables ou du moins rsistants la perforation et ne pas tre compltement remplis. Une fois remplis aux trois-quarts, ils seront placs dans dautres conteneurs pour dchets infectieux et incinrs, aprs passage pralable lautoclave, si la pratique du laboratoire lexige. Les collecteurs dobjets pointus ou tranchants ne doivent en aucun cas tre jets dans des dcharges.
Matriel contamin (potentiellement infectieux) destin tre autoclav et recycl
Il ne faut tenter aucun nettoyage pralable de matriels contamins (potentiellement infectieux) destins passer lautoclave en vue dune rutilisation. Le nettoyage ou les rparations ncessaires ne doivent tre effectus quaprs lautoclavage ou la dsinfection.
Matriel contamin (potentiellement infectieux) destin tre limin
A part les objets pointus ou tranchants dont le cas est examin plus haut, tous les matriels contamins (potentiellement infectieux) doivent tre autoclavs dans des rcipients tanches, par exemple des sacs en plastique autoclavables avec code de couleur, avant dtre limins. Aprs passage lautoclave, ils pourront tre placs dans un conteneur pour le transport jusqu lincinrateur. Autant que possible, le matriel dont les tablissements de soins ou de sant se dbarrassent ne doit pas tre jet dans des dcharges, mme une fois dcontamin. Si le laboratoire dispose dun incinrateur sur place, on peut se dispenser du passage lautoclave : les dchets contamins seront placs dans des collecteurs destins cet usage (sacs avec code de couleur, par exemple) et transports directement jusqu lincinrateur. Les conteneurs de transport rutilisables doivent tre tanches et ferms hermtiquement. Il faudra les dsinfecter et les nettoyer avant de les ramener au laboratoire et de les rutiliser. Chaque poste de travail doit disposer de conteneurs, pots, cuvettes, bocaux etc. dchets, de prfrence incassables (en matire plastique, par exemple). Si lon utilise un dsinfectant, les dchets doivent rester en contact intime avec le produit (cest-dire en vitant quils soient protgs par des bulles dair) pendant une dure sufsante,
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selon la nature du dsinfectant utilis (voir chapitre 14). Les pots dchets seront dcontamins et lavs avant dtre rutiliss. Lincinration des dchets contamins doit recevoir lagrment des autorits de sant publique et de lorganisme charg de la lutte contre la pollution atmosphrique ainsi que du dlgu la scurit biologique dsign par le laboratoire (voir au chapitre 14 la section consacre lincinration). Scurit chimique, lectrique, incendie, radioprotection et scurisation de lappareillage Un incendie, un accident dorigine chimique ou lectrique ou encore une irradiation accidentelle, peuvent provoquer indirectement une solution de continuit dans le connement des germes pathognes. Cest pourquoi il est impratif dans tout laboratoire de microbiologie de bien respecter les rgles de scurit pour prvenir de tels accidents. Ces accidents doivent normalement faire lobjet dune rglementation ofcielle manant de lautorit locale ou nationale comptente, dont il faut au besoin solliciter laide. Les risques chimiques, lectriques, radiologiques et incendie sont examins plus en dtail dans la partie VI du prsent manuel (chapitres 17 et 18). Des informations complmentaires sur les quipements de scurit sont donnes au chapitre 11.
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4. Le laboratoire de connement Scurit biologique niveau 3
Le laboratoire de connement scurit biologique niveau 3, est conu et prvu pour les travaux faisant intervenir des micro-organismes du groupe de risque 3 et des volumes importants ou de fortes concentrations de micro-organismes du groupe de risque 2 dont la manipulation risque davantage de provoquer la diffusion darosols. Le degr de connement quimplique le niveau de scurit 3 exige le renforcement des programmes de travail et de scurit par rapport ceux des laboratoires de base scurit biologique niveaux 1 et 2 (exposs au chapitre 3). Les recommandations qui gurent dans le prsent chapitre sont prsentes sous la forme dadditifs celles qui concernent les laboratoires de base niveaux de scurit 1 et 2, lesquelles doivent donc tre appliques avant les recommandations particulires aux laboratoires de connement scurit biologique 3. Les additions et modications les plus importantes concernent : 1. Le code de bonnes pratiques 2. La conception et lamnagement du laboratoire 3. La surveillance mdico-sanitaire. Les laboratoires de cette catgorie doivent tre homologus et rpertoris par les autorits sanitaires comptentes, nationales ou autres. Code de bonnes pratiques Le code de bonnes pratiques, dni pour les laboratoires de base scurit biologique niveaux 1 et 2, sapplique moyennant les modications suivantes : 1. Le panneau de danger biologique (voir gure 1) appos sur la porte du laboratoire doit indiquer le niveau de scurit biologique et le nom du chef de laboratoire responsable de laccs aux locaux et prciser en outre les conditions particulires dentre dans la zone, vaccination par exemple. 2. Les vtements protecteurs porter obligatoirement au laboratoire, doivent tre du type suivant : tabliers, blouses, sarraus, tenues de nettoyage, combinaisons, coiffes et, le cas chant, couvre-chaussures et chaussures spciales. Les blouses ordinaires de laboratoire qui boutonnent devant ne conviennent pas, de mme que les manches qui ne couvrent pas entirement les avant-bras. Les vtements de laboratoire ne doivent pas tre ports lextrieur et seront dcontamins avant le blanchissage. Il peut tre justi dter ses vtement de ville pour revtir une tenue
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4. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 3
de laboratoire approprie lorsquon travaille sur certains agents pathognes (ravageurs ou agents responsables de zoonoses par exemple). 3. Tous les matriels potentiellement infectieux doivent normalement tre manipuls dans une enceinte de scurit biologique ou tout autre dispositif de connement primaire (voir galement le chapitre 10). 4. Le port dun masque respiratoire peut tre ncessaire pour certaines manipulations ou lorsque on travaille sur des animaux porteurs de certains germes pathognes (voir chapitre 11). Conception et amnagement du laboratoire Les recommandations relatives la conception et lamnagement des laboratoires de base niveaux de scurit biologique 1 et 2 sappliquent moyennant les modications suivantes : 1. Le laboratoire doit tre spar des zones de passage non rglement, lintrieur du btiment. On peut complter lisolement en plaant le laboratoire au fond dun couloir sans ouverture sur lextrieur, en construisant une cloison munie dune porte ou encore en nouvrant laccs que par un vestibule (par exemple un sas double entre ou le laboratoire de base scurit biologique niveau 2) dlimitant une zone spcialement conue pour maintenir une diffrence de pression entre le laboratoire et les espaces contigus. Le vestibule doit tre amnag pour la sparation des vtements protecteurs sales et propres et disposer dune douche si ncessaire. 2. Les portes du vestibule doivent tre fermeture automatique et verrouillage asservi de sorte quune seule porte puisse tre ouverte la fois. Un panneau briser en cas durgence peut tre prvu. 3. La surface des murs, des sols et des plafonds doit rsister leau et tre facile nettoyer. Les orices mnags dans ces surfaces (pour la tuyauterie par exemple) doivent tre scells pour faciliter la dcontamination des salles. 4. Le laboratoire doit pouvoir tre ferm hermtiquement pour tre dcontamin. Des gaines seront installes pour permettre une dsinfection gazeuse. 5. Les fentres doivent tre fermes hermtiquement et rsister aux chocs. 6. Un lavabo pouvant tre command sans laide des mains sera plac prs de chaque porte de sortie. 7. Le systme de ventilation doit crer un courant dair dirig de la zone daccs vers lintrieur de la salle. Un dispositif de contrle visuel, muni ou non dune alarme, doit tre install, de manire que le personnel puisse sassurer que le ux dair est toujours correctement dirig. 8. Le systme de ventilation doit tre construit de manire ce que lair qui sort du laboratoire de connement scurit biologique niveau 3, ne soit pas recycl dans dautres zones du btiment. Lair peut tre ltr au moyen dun ltre particules de haute efcacit (HEPA), reconditionn et recycl lintrieur de ce laboratoire.
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Lair vacu du laboratoire (autre que celui qui sort des enceintes de scurit biologique) sera rejet directement lextrieur du btiment, de faon tre dispers loin des btiments occups et des prises dair. Selon les agents utiliss, on pourra vacuer cet air en le faisant passer au pralable travers des ltres HEPA. On pourra installer un systme de rgulation du chauffage, de la ventilation et de la climatisation de qui vite toute surpression permanente dans le laboratoire. On peut envisager linstallation dun dispositif dalarme acoustique ou visuelle parfaitement distinct pour prvenir le personnel en cas de panne du systme de rgulation. 9. Les ltres HEPA doivent tous tre installs de manire permettre la dcontamination gazeuse ou les essais de fonctionnement. 10. Les enceintes de scurit biologique doivent tre situes hors des zones de passage et des courants dair entre les portes et les systmes de ventilation. 11. Lair qui sort des enceintes de scurit de classe I et II (voir chapitre 10), aprs passage au travers des ltres HEPA, doit tre vacu sans perturber le ux dair, ni dans lenceinte, ni dans le systme daration du btiment. 12. Il faut disposer, dans la salle mme du laboratoire, dun autoclave pour la dcontamination des dchets. Si des dchets infectieux doivent tre transports lextrieur du laboratoire de connement pour dcontamination et limination, le transport doit seffectuer dans des conteneurs incassables, hermtiquement ferms et tanches, conformment la rglementation nationale ou internationale, selon le cas. 13. Lalimentation en eau sera munie de dispositifs anti-retour. Les conduites daspiration (circuit de vide) devront tre protges par des piges liquide dsinfectant, des ltres HEPA ou des dispositifs quivalents. Les pompes vide devront galement tre protges par des piges et des ltres. 14. La conception dun laboratoire de connement et les techniques mises en uvre dans ce type de laboratoire doivent sappuyer sur une documentation approprie. La gure 4 donne un exemple damnagement dun laboratoire au niveau 3 de scurit biologique. Appareils et quipements de laboratoire Le choix de lappareillage, y compris des enceintes de scurit biologique (voir chapitre 10), repose sur les mmes principes que pour les laboratoires de base scurit biologique niveau 2. Toutefois, dans un laboratoire de scurit biologique niveau 3, la manipulation de tous les matriels potentiellement infectieux doit seffectuer dans une enceinte de scurit biologique ou avec tout autre dispositif de connement primaire. Il faut se souvenir que certains appareils tels que les centrifugeuses, par exemple, ncessitent des dispositifs de connement supplmentaires, par exemple utilisation de godets, nacelles, etc. de scurit ou connement du rotor. Certaines centrifugeuses ou dautres appareils comme les trieurs de cellules qui sont prvus pour travailler sur des
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Figure 4. Laboratoire classique au niveau 3 de scurit biologique. (gure aimablement communique par CUH2A, Princeton, NJ, Etats-Unis dAmrique). Le laboratoire est spar du lieu de passage gnral et accessible par un vestibule (qui peut tre soit une entre double porte, soit le laboratoire de base niveau de scurit 2) ou par un sas air. Le laboratoire est quip dun autoclave pour la dcontamination des dchets avant leur limination ainsi que dun vier commande mains libres . Lair circule de lextrieur vers lintrieur et toutes les manipulations sur du matriel biologique infectieux sont effectues dans une enceinte de scurit biologique.
cellules infectes, peuvent ncessiter linstallation dune ventilation supplmentaire avec ltres HEPA pour un connement efcace. Surveillance mdico-sanitaire Les objectifs des programmes de surveillance mdico-sanitaire des laboratoires de base scurit biologique niveaux 1 et 2, sappliquent galement aux laboratoires de connement scurit biologique niveau 3, moyennant les modications suivantes : 1. La visite mdicale est obligatoire pour tout le personnel de laboratoire qui travaille dans le laboratoire de connement. Elle devra comporter une anamnse
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la recherche des antcdents mdicaux et un examen physique destin vrier si la personne est mdicalement apte exercer ce type dactivit professionnelle. 2. Si le bilan mdical est satisfaisant, lintress recevra une carte mdicale du genre de celle qui est reproduite la gure 5 attestant quil est employ dans un tablissement o se trouve un laboratoire de connement scurit biologique niveau 3. Cette carte, que le titulaire devra toujours porter sur lui, comportera la photographie du titulaire et devra pouvoir tre range dans un portefeuille ou un porte-cartes. Elle devra galement indiquer le nom de la ou des personnes contacter en cas de problme, lesquelles seront dsignes localement, mais qui pourraient tre par exemple, le directeur du laboratoire, le conseiller mdical ou le dlgu la scurit biologique.
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A. Recto
SURVEILLANCE MEDICALE Nom photographie du titulaire
L'INTENTION DE L'EMPLOYE A Conserver cette carte sur vous. En cas d'accs fbrile inexpliqu, prsenter cette carte votre mdecin et indiquer les personnes joindre dans l'ordre de la liste. Dr Tl. professionnel: Tl. personnel: Dr Tl. professionnel: Tl. personnel:
B. Verso L'INTENTION DU MEDECIN A Le titulaire de cette carte est employ /au Dans une zone o sont prsents des virus, des rickettsies , des bactries, des protozoaires ou des helminthes pathognes. En cas d'accs fbrile inexpliqu, prire de prendre contact avec l'employeur pour obtenir des informations sur les agents auxquels l'employ a pu tre expos. Nom du laboratoire Adresse
Tl.
Figure 5. Modle propos de carte mdicale.
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5. Le laboratoire de connement haute scurit Scurit biologique niveau 4
Le laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4, est conu pour les travaux sur des micro-organismes du groupe de risque 4. Avant de construire et de mettre en service un tel laboratoire, il convient douvrir des consultations approfondies avec des institutions ayant lexprience du fonctionnement de ce genre dinstallation. Les laboratoires de connement haute scurit oprationnels scurit biologique niveau 4 doivent tre placs sous le contrle des autorits sanitaires comptentes, nationales ou autres. Les informations qui suivent sont une simple introduction. Toute personne ou institution qui souhaiterait mettre en place un laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4 est invite prendre contact avec le Programme sur la scurit biologique de lOMS pour plus de renseignements.1 Code de bonnes pratiques Les dispositions du code de bonnes pratiques relatives au niveau 3 de scurit biologique restent valables, moyennant les modications suivantes : 1. La rgle du travail en binme doit tre applique; autrement dit, personne ne doit jamais travailler seul dans le laboratoire. Cette rgle prend toute son importance dans un laboratoire scurit biologique niveau 4, o le port de combinaisons pressurises est obligatoire. 2. Le personnel doit doit changer compltement de vtements et de chaussures avant de pntrer dans le laboratoire et avant de sortir. 3. Le personnel doit sentraner la conduite tenir pour lvacuation durgence de personnes blesses ou prises de malaise. 4. Il faut mettre au point un systme de communication entre les membres du personnel qui travaillent dans un laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4 et le personnel extrieur, que ce soit pour les contacts habituels ou en situation durgence.
Programme de scurit biologique, Dpartement maladies transmissibles : surveillance et action, Organisation mondiale de la Sant, 20 Avenue Appia, 1211 Genve 27, Suisse (http ://www.who.int/csr/).
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5. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT HAUTE SCURIT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 4
Conception et amnagement du laboratoire Les caractristiques du laboratoire de connement scurit biologique niveau 3, sappliquent au laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4, moyennant les additifs suivants : 1. Connement primaire. Le laboratoire doit tre dot dun systme efcace de connement primaire respectant une ou plusieurs des conditions suivantes. Laboratoire avec enceintes de scurit biologique de classe III. Le passage par deux portes au minimum est ncessaire avant de pntrer dans les salles o se trouvent lenceinte ou les enceintes de scurit biologique de classe III (salle des enceintes de scurit). Dans ce type damnagement, cest lenceinte de scurit biologique de classe III qui assure le connement primaire. Le personnel doit disposer dune douche avec un vestiaire intrieur et extrieur. Les fournitures et le matriel qui ne sont pas apports dans la salle des enceintes de scurit biologique en passant par le vestiaire, ne doivent tre introduits quaprs passage dans un autoclave double porte ou une chambre de fumigation. Une fois la porte extrieure bien ferme, le personnel qui se trouve dans le laboratoire peut ouvrir la porte intrieure pour rcuprer fournitures et matriel. Un systme de verrouillage asservi doit tre mis en place au niveau des portes de lautoclave ou de la chambre de fumigation pour viter que la porte extrieure ne puisse tre ouverte tant que lautoclave na pas effectu son cycle de strilisation ou que la chambre de fumigation na pas t dcontamine (voir chapitre 10). Laboratoire pour travaux en combinaison pressurise. Sur le plan de la conception et de lamnagement, un laboratoire pour travaux en combinaison pressurise diffre sensiblement dun laboratoire de connement scurit biologique niveau 4 dot denceintes de scurit biologique de classe III. Dans ce type de laboratoire, les salles sont disposes de manire que le personnel passe par le vestiaire et la salle de dcontamination avant dentrer dans le secteur o du matriel biologique infectieux est manipul. Une douche pour la dcontamination des combinaisons doit tre installe et le personnel doit lutiliser avant de quitter les locaux du laboratoire de connement. Le personnel doit galement disposer dune douche avec un vestiaire intrieur et extrieur. Le personnel qui pntre dans la zone o lon travaille en combinaison pressurise est tenu de revtir une combinaison dune seule pice, en surpression, avec ltre HEPA et alimentation en air. Lalimentation en air de la combinaison doit tre assure par un systme 100 % de redondance, avec une alimentation en air indpendante utilisable en cas durgence. On entre dans le laboratoire travers un sas air dot de portes tanches lair. Le personnel qui travaille dans ce type de laboratoire doit disposer dun systme dalarme quil pourra utiliser dans lventualit dune panne mcanique ou dune dfaillance de lalimentation en air (voir chapitre 10).
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2. Rglementation de laccs. Le laboratoire de connement de haute scurit scurit biologique niveau 4 doit tre situ dans un btiment spar ou tout au moins dans une zone clairement dlimite dun btiment scuris. Lentre et la sortie du personnel doit se faire travers un sas ou autre dispositif de ce genre. A lentre, le personnel doit se changer compltement; avant de sortir, il doit prendre une douche avant de remettre ses vtement de ville. 3. Rgulation de la ventilation. Les locaux doivent tre maintenus en dpression. Lair doit tre ltr au moyen de ltres HEPA tant ladmission qu lvacuation. Un laboratoire avec enceintes biologiques de scurit classe III et un laboratoire pour travaux en combinaison pressurise sont dots de systmes de ventilation sensiblement diffrents : Laboratoire avec enceintes de classe III. Lair destin aux enceintes de scurit biologique classe III peut tre prlev dans la salle travers un ltre HEPA mont sur lenceinte ou bien amen directement par le systme de ventilation. Avant dtre vacu lextrieur, lair des enceintes de scurit biologique classe III doit passer travers deux ltres HEPA. Lenceinte doit toujours tre en dpression par rapport la salle. Il est ncessaire que ce laboratoire dispose dun systme spcial de ventilation sans recyclage. Laboratoire pour travaux en combinaison pressurise. Ce laboratoire doit possder un systme spcial de ventilation et dvacuation de lair vici. Lalimentation et lvacuation sont rgles de manire que le ux dair qui circule dans la zone o sont portes les combinaisons de protection soit dirig de la zone de moindre danger vers la ou les zones de risque maximal. Il faut que les ventilateurs dextraction soient en surnombre de faon que linstallation reste constamment en dpression. Les diffrences de pression dans le laboratoire lui-mme et entre le laboratoire et les locaux contigus, doivent tre surveilles en permanence. Ce doit galement tre le cas de lair qui circule dans les circuits dalimentation et dvacuation du systme de ventilation et un dispositif de rgulation appropri doit tre install pour viter toute surpression lintrieur du laboratoire. Lair distribu dans la zone o sont portes les combinaisons de protection, la douche de dcontamination et les sas ou chambres de dcontamination doit passer travers un ltre HEPA. Lair qui est vacu du laboratoire doit passer travers deux ltres HEPA successifs avant dtre rejet lextrieur. Une autre possibilit consiste, aprs cette double ltration, recycler lair vacu, mais uniquement lintrieur du laboratoire. Lair vacu dun laboratoire de connement scurit biologique niveau 4, ne doit en aucun cas tre recycl vers dautres locaux. La plus grande prudence est de rigueur si lon a opt pour un recyclage de lair dans un laboratoire o le port de combinaisons pressurises est impos. Il convient de prendre en considration la nature des recherches effectues, lappareillage, les quipements, les produits chimiques et autres substances ainsi que les espces animales utiliss pour ces recherches.
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5. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT HAUTE SCURIT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 4
Tous les ltres HEPA doivent tre contrls et certis une fois par an. Leurs gaines sont conues pour permettre de dcontaminer le ltre in situ avant de lenlever. On peut aussi enlever le ltre en le plaant dans un conteneur scell tanche aux gaz en vue de sa dcontamination ultrieure ou de sa destruction par incinration. 4. Dcontamination des efuents. Tous les efuents qui sortent du laboratoire o sont portes des combinaisons pressurises, de la chambre de dcontamination, de la douche de dcontamination ou dune enceinte de scurit biologique classe III doivent tre dcontamins avant dtre dnitivement limins. La contamination par la chaleur est le procd optimal. Il peut tre ncessaire de les amener pH neutre avant de les liminer. Leau provenant de la douche du personnel et des toilettes peut tre vacue directement dans lgout sparatif sans traitement. 5. Strilisation des dchets et des matriels. Il est indispensable de disposer dun autoclave deux portes, formant sas. Toutefois, dautres mthodes de dcontamination doivent tre utilises pour traiter les quipements, appareils, instruments ou objets divers qui ne resisteraient pas une strilisation la vapeur. 6. Sas dentre air pour les chantillons, les matriels et les animaux. Ils sont ncessaires pour ce type dinstallation. 7. Un groupe lectrogne de secours et une alimentation spciale en air sont ncessaires. 8. Le connement des coulements doit tre assur. Le calcul, la conception et la construction des installations de connement haute scurit biologique niveau 4, quelles soient dotes denceintes de scurit biologique ou de zones avec port obligatoire de combinaisons pressurises, sont tellement complexes que les auteurs ont renonc faire gurer dans le prsent manuel des reprsentations schmatiques de ces installations. En raison de la grande complexit du travail dans ce genre de laboratoire, un manuel dtaill sera prpar et test loccasion dexercices de formation. Un plan durgence sera galement labor (voir chapitre 13), en collaboration active avec les autorits sanitaires nationales et locales. Il est galement souhaitable que dautres services de secours tels que les pompiers, la police et les services durgence des hpitaux y participent.
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6. Animaleries
Lorsque des animaux sont utiliss des ns exprimentales ou de diagnostic, lutilisateur a lobligation morale de prendre toutes les mesures ncessaires pour viter des souffrances inutiles. Les animaux doivent tre installs de manire confortable et hyginique et recevoir de leau et des aliments de bonne qualit, en quantit sufsante. A la n de lexprience, ils devront tre traits avec humanit. Pour des raisons de sret, lanimalerie doit tre indpendante, spare du laboratoire. Si elle est accole un laboratoire, elle sera conue de manire pouvoir tre isole des zones publiques du laboratoire, et pouvoir tre dcontamine et dparasite. Tableau 4. Niveaux de connement des animaleries : pratiques et quipements de scurit
GROUPE DE RISQUE NIVEAU DE CONFINEMENT PRATIQUES DE LABORATOIRE ET QUIPEMENTS DE SCURIT
1 2
NSBA-1 NSBA-2
Accs limit, vtements protecteurs et gants. Pratiques comme pour NSBA-1, en plus : panneaux de danger biologique : ESB de classe I ou II pour les activits gnratrices darosols. Dcontamination des dchets et des cages avant le lavage. Pratiques comme pour NSBA-2, en plus : accs rglement. ESB et vtements protecteurs spciaux pour toutes les activits. NSBA-3 avec, en plus : accs strictement limit. Changement de vtements avant dentrer. ESB de classe III ou combinaisons pressurises. Douche avant de sortir. Dcontamination de tous les dchets avant sortie de linstallation.
NSBA-3
NSBA-4
NSBA, niveau de scurit biologique de lanimalerie; ESB, enceinte de scurit biologique
Comme les laboratoires, les animaleries peuvent tre conues en fonction du groupe de risque auquel les micro-organismes tudis appartiennent ou de lvaluation du risque quils reprsentent et correspondre aux niveaux de scurit biologique 1, 2, 3 ou 4.
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6. ANIMALERIES
Eu gard aux agents utiliss dans un laboratoire dexprimentation animale, les facteurs suivants sont prendre en considration : 1. La voie normale de transmission 2. Les volumes et concentrations qui seront utiliss 3. La voie dinoculation 4. La voie possible dexcrtion. Eu gard aux animaux dexprience utiliss au laboratoire, les facteurs suivants sont prendre en considration : 1. La nature des animaux, savoir leur agressivit et leur tendance mordre ou griffer 2. La nature de leurs ecto- ou endoparasites 3. Les zoonoses auxquelles ils sont sensibles 4. La propagation possible dallergnes. Comme dans le cas des laboratoires, les exigences relatives la conception, lquipement et aux prcautions observer sont dautant plus rigoureuses que le niveau de scurit biologique est plus lev. Elles sont exposes ci-dessous et rsumes dans le tableau 4. Ces directives sont cumulatives, cest--dire qu chaque niveau de scurit sappliquent toutes celles qui valent pour les niveaux infrieurs. Animalerie Scurit biologique niveau 1 Cest le niveau qui convient pour conserver la plupart des animaux dlevage aprs la quarantaine ( lexception des primates, propos desquels il convient de consulter les autorits nationales) et les animaux inoculs volontairement avec des agents du groupe de risque 1. Une bonne technique microbiologique est indispensable. Le responsable de lanimalerie doit dterminer la ligne de conduite gnrale, les procdures et les protocoles applicables lensemble des oprations et en ce qui concerne laccs au vivarium. Une surveillance mdicale approprie du personnel doit tre institue. Un guide dhygine et scurit ou un manuel pratique doivent tre rdigs et le personnel doit sy conformer. Animalerie Scurit biologique niveau 2 Cest le niveau qui convient pour le travail sur les animaux inoculs volontairement avec des agents appartenant au groupe de risque 2. Les mesures de scurit suivantes sont applicables : 1. Toutes les exigences relatives aux animaleries scurit biologique niveau 1, doivent tre respectes. 2. Des panneaux de danger biologique (voir gure 1) seront apposs sur les portes et autres endroits appropris. 3. Lanimalerie doit tre conue de manire pouvoir tre nettoye et entretenue facilement.
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4. Les portes doivent souvrir vers lintrieur et se fermer automatiquement. 5. Les locaux doivent tre convenablement chauffs, ventils et clairs. 6. Si la ventilation est mcanique, le ux dair doit tre dirig vers lintrieur. Lair vici est vacu lextrieur et ne doit en aucun cas tre recycl, o que ce soit dans le btiment. 7. Laccs doit tre limit aux personnes autorises. 8. A part les animaux destins lexprimentation, aucun autre animal ne doit tre introduit dans les locaux. 9. Un programme de lutte contre les arthropodes et les rongeurs doit tre mis en place. 10. Sil y a des fentres, elles doivent tre scurises, rsister aux chocs et si elles sont susceptibles dtre ouvertes, comporter des grillages pour empcher le passage des arthropodes. 11. Les plans de travail seront dcontamins avec des dsinfectants efcaces aprs utilisation (voir chapitre 14). 12. Des enceintes de scurit biologique (classe I ou II) ou des isolateurs disposant dune alimentation spciale en air et dune vacuation de lair vici aprs ltration sur ltre HEPA doivent pouvoir tre utiliss pour les activits susceptibles dentraner la formation darosols. 13. Un autoclave doit tre install, soit sur place, soit proximit. 14. Lorsquon retire la litire des animaux, il faut viter au maximum la formation darosols et de poussires. 15. Tous les dchets et les litires doivent tre dcontamins avant limination. 16. Autant que possible, on limitera lutilisation dinstruments pointus ou tranchants. Ces instruments doivent toujours tre ramasss dans des conteneurs rsistants munis dun couvercle (botes anti-piques) et traits comme du matriel infectieux. 17. Le matriel destin lautoclavage ou lincinration doit tre transport en toute scurit dans des conteneurs ferms. 18. Les cages des animaux doivent tre dcontamines aprs utilisation. 19. Les cadavres des animaux seront incinrs. 20. Le port de vtements et dquipements de protection est obligatoire dans lanimalerie. Il devront tre retirs au moment du dpart. 21. Un lavabo doit tre install. Le personnel doit se laver les mains avant de quitter laimalerie. 22. Toute blessure, mme mineure, doit tre traite de manire approprie. Elle doit tre signale et enregistre. 23. Il est interdit de manger, de boire, de fumer et de se maquiller dans lanimalerie. 24. Tous les membres du personnel doivent recevoir une formation approprie. Animalerie Scurit biologique niveau 3 Cest le niveau qui convient pour le travail avec des animaux inoculs volontairement avec des micro-organismes appartenant au groupe de risque 3, ou si une valuation
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6. ANIMALERIES
du risque lindique pour une autre raison. Chaque anne, tous les systmes, pratiques et modes opratoires doivent tre rexamins et faire lobjet dun contrle de conformit. Les rgles de scurit suivantes sont applicables : 1. Toutes les exigences relatives aux animaleries niveaux de scurit 1 et 2 doivent tre respectes. 2. Laccs sera strictement rglement. 3. Linstallation doit tre spare des autres laboratoires et animaleries par une pice formant vestibule, dote dune entre double porte. 4. Un lavabo doit tre install dans ce vestibule. 5. Le vestibule doit galement comporter une douche. 6. Les locaux doivent tre dots dune ventilation mcanique assurant une circulation continue de lair dans toutes les salles. Lair vici doit tre vacu travers des ltres HEPA avant dtre rejet sans recyclage dans latmosphre extrieure. Le systme doit tre conu de manire empcher une inversion du sens de circulation de lair et toute surpression dans les locaux de lanimalerie. 7. Un autoclave doit tre install en un endroit commode de lanimalerie o se trouvent les quipements de connement. Les dchets infectieux doivent tre passs lautoclave avant dtre transports dans dautres locaux de linstallation. 8. Il faut disposer dun incinrateur sur place ou prendre dautres dispositions en consultation avec les autorits concernes. 9. Les cages des animaux porteurs de micro-organismes appartenant au groupe de risque 3 doivent tre places dans des isolateurs ou tre disposes devant des ventilateurs dextraction. 10. Il faut veiller un dpoussirage maximum des litires. 11. Tous les vtements de protection devront tre dcontamins avant de passer au blanchissage. 12. Les fentres doivent tre hermtiquement fermes et rsister aux chocs. 13. Le cas chant, une vaccination sera propose au personnel. Animalerie Scurit biologique niveau 4 Le travail dans cette animalerie sera normalement associ aux manipulations du laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4, et les dispositions rglementaires nationales et locales devront tre harmonises pour pouvoir sappliquer aux deux. Si des travaux doivent tre effectus dans un laboratoire o le port de combinaisons pressurises est obligatoire, un certain nombre dautres pratiques et procdures sont respecter en sus de celles qui sont dcrites ici (voir chapitre 5). 1. Toutes les exigences relatives aux animaleries niveaux de scurit 1, 2 et 3 doivent tre respectes. 2. Laccs sera strictement rglement; seul le personnel dsign par le directeur de ltablissement doit tre autoris entrer.
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3. Personne ne doit travailler seul : la rgle du travail en binme doit tre applique. 4. Le personnel devra avoir reu la formation de microbiologiste la plus pousse possible et bien connatre les risques lis son travail et les prcautions observer. 5. Les secteurs o sont hbergs des animaux porteurs dagents pathognes du groupe de risque 4 doivent rpondre en tout temps aux critres de connement qui sappliquent aux laboratoires de connement haute scurit scurit biologique niveau 4. 6. Lentre dans lanimalerie doit se faire par un vestibule formant sas air, dont le ct propre doit tre spar du ct accs rglement par un vestiaire et des douches. 7. Le personnel doit retirer ses vtements de ville en entrant et mettre des vtements protecteurs spciaux. Aprs le travail, il doit enlever les vtements protecteurs pour que ceux-ci soient passs lautoclave, puis se doucher avant de partir. 8. Lanimalerie doit tre ventile au moyen dun systme dvacuation dair muni de ltres HEPA qui soit conu pour crer une dpression (circulation de lair vers lintrieur). 9. Le systme de ventilation doit tre conu pour empcher une inversion du sens de circulation de lair et toute surpression dans les locaux de lanimalerie. 10. Il faut disposer dun autoclave deux portes pour lchange de matriel, le ct propre souvrant dans une pice extrieure aux salles de connement. 11. Lchange de matriel non autoclavable doit se faire travers un sas air, dont le ct propre doit souvrir dans une pice situe en dehors des salles de connement. 12. Toutes les manipulations sur des animaux porteurs dagents pathognes appartenant au groupe de risque 4 doivent seffectuer dans des conditions de scurit correspondant celles dun laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4. 13. Tous les animaux doivent tre hbergs dans des isolateurs. 14. La totalit des litires et des dchets doit tre passe lautoclave avant de sortir de lanimalerie. 15. Le personnel doit tre plac sous surveillance mdicale. Invertbrs Comme pour les vertbrs, le niveau de scurit de lanimalerie est dtermin par le groupe de risque auquel appartiennent les agents pathognes tudis, toutefois une valuation du risque peut conduire en dcider autrement. Des prcautions complmentaires sont ncessaires avec certains arthropodes, notamment les insectes volants : 1. Les invertbrs infects et ceux qui ne le sont pas doivent tre logs dans des pices distinctes. 2. Les pices doivent pouvoir tre fermes hermtiquement pour fumigation. 3. Des pulvrisateurs dinsecticides doivent tre mis disposition.
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6. ANIMALERIES
4. Des systmes de refroidissement doivent tre prvus pour rduire, si ncessaire, lactivit des invertbrs. 5. Laccs se fera par un vestibule comportant des piges insectes et dont les portes seront munies de grillages pour empcher le passage des arthropodes. 6. Tous les conduits de sortie de ventilation et les fentres susceptibles dtre ouvertes seront obturs par un grillage empchant le passage des arthropodes. 7. Le siphon des viers et des gouts ne doit jamais sasscher. 8. Tous les dchets seront dcontamins par passage lautoclave, car certains invertbrs rsistent tous les dsinfectants. 9. On contrlera le nombre de formes larvaires et adultes des arthropodes volants, rampants et sauteurs. 10. Les cages des tiques et des acariens seront places sur des plateaux contenant du ptrole. 11. Les insectes volants infects ou qui pourraient ltre doivent tre conns dans des cages double grillage. 12. Les arthropodes infects ou qui pourraient ltre doivent tre manipuls dans des enceintes biologiques de scurit ou des isolateurs. 13. On peut galement manipuler les insectes infects ou qui pourraient ltre sur des plateaux refroidis. Pour plus ample information se reporter aux rfrences 3 6 de la bibliographie.
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7. Principes directeurs pour la mise en service des laboratoires ou installations

On peut dnir la mise en service dun laboratoire ou dune installation comme un processus consistant procder un ensemble de contrles et tablir des dossiers en vue dattester que les lments de la structure des locaux ainsi que tout ou partie des systmes dont est quip le laboratoire ont t installs, inspects, soumis des essais de fonctionnement et constats conformes aux normes nationales ou internationales, selon le cas. Ces prescriptions se fondent sur les critres de conception et sur les fonctions respectives des divers systmes dont sera quip le laboratoire. En dautres termes, la mise en service dun laboratoire ne comportera pas les mmes exigences pour tous les niveaux de scurit biologique (1 4) et elle sera dautant plus complexe que le niveau de scurit sera plus lev. Des conditions climatiques comme des tempratures trs leves ou trs basses ou encore des valeurs extrmes de lhygromtrie, de mme que des particularits gomorphologiques comme la prsence de lignes de faille peuvent galement inuer sur la conception du laboratoire et par consquent sur les exigences de mise en service. Une fois la mise en service acheve, les lments structuraux importants du laboratoire et les divers quipements annexes auront t contrls dans diverses conditions dexploitation et de dfaut de fonctionnement raisonnablement prvisibles et dclars conformes. Le processus de mise en service et les contrles de conformit doivent tre organiss de bonne heure, de prfrence lorsquon programme la construction ou la rnovation dun laboratoire. En prenant acte de la mise en place du processus de mise en service ds les premiers stades du projet, les architectes, les ingnieurs, les responsables scurit, le personnel sanitaire et au nal, le personnel du laboratoire lui-mme, vont raliser ce que lon attend du laboratoire en question sur le plan de lefcacit et exprimer de manire cohrente leurs attentes cet gard. Le processus de mise en service constitue, pour linstitution et la collectivit locale, une meilleure garantie de voir les lments structuraux, linstallation lectrique, les dispositifs mcaniques, la plomberie, les systmes de connement et de dcontamination ainsi que les dispositifs dalarme et de scurit fonctionner comme prvu et empcher la propagation de tout micro-organisme potentiellement dangereux sur lesquels on travaille dans le laboratoire ou lanimalerie. Le processus de mise en service commence en gnral lors de la phase de prparation du projet et se poursuit pendant la construction et durant la priode de garantie ultrieure. La priode de garantie doit en gnral se prolonger un an aprs la rcep 38
7. PRINCIPES DIRECTEURS POUR LA MISE EN SERVICE DES LABORATOIRES OU INSTALLATIONS
tion de linstallation. Il est souhaitable, pour la mise en service, de ne retenir que des organismes ou entreprises nayant aucun lien avec les bureaux darchitectes et dingnieurs ou lentreprise de gnie civil qui ont conu et construit le laboratoire. Cet organisme ou son reprsentant devra agir en tant que porte-parole de linstitution ou de ltablissement qui construit ou rnove le laboratoire et tre considr comme un membre de lquipe charge de la conception des installations; il est capital quil soit prsent ds les premiers stades de la prparation du projet. Parfois, cest linstitution qui assume elle-mme ce rle. Dans le cas de projets de laboratoires plus complexes (niveaux de scurit biologique 3 ou 4), elle pourra sassurer les services dun organisme ou dune entreprise extrieurs qui ont fait la preuve de leur exprience et de leur comptence dans la mise en service de laboratoires ou danimaleries posant des problmes complexes sur le plan de la scurit biologique. Mme si linstitution choisit un agent extrieur pour assurer la mise en service, elle doit malgr tout rester membre de lquipe qui assume cette charge. Il est recommand en outre que le dlgu la scurit de linstitution, le responsable du projet, le directeur du programme ainsi quun reprsentant de la direction et de lquipe de maintenance, en fasse galement partie, aux cts de lagent charg de la mise en service. On trouvera ci-dessous la liste des systmes et appareillages qui pourraient faire lobjet de contrles de fonctionnement au titre de la mise en service du laboratoire, en fonction du niveau de connement de linstallation en construction ou rnovation. Cette liste nest pas exhaustive. Le plan de mise en service dpendra lvidence de la complexit du laboratoire envisag. 1. Systmes automatiques du btiment, et notamment les connexions avec les centres de surveillance et de commande distance. 2. Systmes de surveillance et de dtection lectronique. 3. Verrouillage lectronique de scurit et lecteurs de proximit. 4. Chauffage, ventilation (alimentation et vacuation) et climatisation. 5. Filtres particules de haute efcacit (HEPA). 6. Systmes de dcontamination par ltration HEPA. 7. Commandes et asservissements des commandes de chauffage, ventilation, climatisation et vacuation de lair vici. 8. Volets disolement tanches. 9. Systmes de rfrigration. 10. Chaudires et production de vapeur. 11. Systmes de dtection et dextinction des incendies. 12. Dispositif anti-reux pour les eaux uses. 13. Systmes de traitement de leau (par ex. osmose inverse, distillation, etc.). 14. Systmes de traitement et de neutralisation des efuents liquides. 15. Dispositif damorage de vidange des eaux uses. 16. Systmes de dcontamination chimique. 17. Systmes dapprovisionnement en gaz mdicaux de laboratoire.
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18. Systmes dalimentation en air pour combinaisons pressurises. 19. Systmes dalimentation en air pour le service et lappareillage. 20. Contrle de la rgulation cascade des diffrences de pression dans les laboratoires et locaux de service. 21. Rseau informatique local (LAN) et systmes informatiques denregistrement et de traitement des donnes. 22. Alimentation lectrique par le rseau. 23. Groupes lectrognes de secours. 24. Alimentation lectrique sans coupure. 25. Eclairage de secours. 26. Joints dtanchit des traverses pour linstallation lectrique. 27. Joints dtanchit des traverses lectriques et mcaniques. 28. Installation tlphonique. 29. Asservissement du verrouillage de la commande des portes des sas air. 30. Joints dtanchit des portes. 31. Joints dtanchit des fentres et panneaux dobservation. 32. Etanchit des traverses des revtements disolement. 33. Contrle de labsence de dfauts dans les lments structuraux de linstallation : dalles, murs et plafonds en bton. 34. Contrle du revtement disolement des sols, murs et plafonds. 35. Contrle du dispositif de mise en pression et disolement des enceintes de connement pour le niveau de scurit 4. 36. Enceintes de scurit biologique. 37. Autoclaves. 38. Installation pour lazote liquide avec son dispositif dalarme. 39. Systme de dtection des fuites deau (par ex. en cas dinondation dans la zone de connement). 40. Douche de dcontamination et systme de distribution dadditifs chimiques. 41. Installation de lavage des cages et de neutralisation des eaux de lavage. 42. Gestion des dchets.
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8. Principes directeurs pour lagrment des laboratoires/ installations
Un laboratoire est un environnement complexe et dynamique. Aujourdhui, les laboratoires de recherche biomdicale et de biologie mdicale doivent tre capables de sadapter rapidement aux exigences et aux contraintes sans cesse croissantes de la sant publique. Cest ainsi, par exemple, que les laboratoires doivent repenser leurs priorits pour faire face la menace que reprsentent la rapparition de certaines maladies infectieuses ou lmergence de pathologies nouvelles. Cest pour faire en sorte que cette adaptation et les mesures de maintenance correspondantes seffectuent avec la promptitude voulue que tous les laboratoires de recherche biologique et de biologie mdicale sont soumis un agrment priodique. Cette procdure contribue garantir que : 1. Le laboratoire est dot de systmes de contrle technique appropris et que ceux-ci fonctionnent conformment aux prvisions. 2. Des moyens de contrle spciques du site et des protocoles utiliss ont t mis en place. 3. Les quipements de protection individuelle sont adapts aux manipulations effectues. 4. Le problme de la dcontamination des dchets a t convenablement tudi et que la marche suivre approprie pour la gestion de ces dchets a t tablie. 5. Des rgles de scurit gnrale, concernant notamment les risques physiques, lectriques et chimiques, ont t tablies. La procdure dagrment dun laboratoire diffre du processus de mise en service (chapitre 7) sur un certain nombre de points importants. Elle consiste en effet examiner systmatiquement tous les quipements et mesures de scurit qui existent dans le laboratoire (systmes de contrle technique, quipements de protection individuelle, gestion administrative). Les pratiques et procdures relevant de la scurit biologique sont galement examines. Lagrment dun laboratoire est un processus continu dassurance de la qualit et de la scurit qui doit tre repris priodiquement. Lagrment dun laboratoire peut tre con des professionnels de la sant et de la scurit au travail ou de la scurit biologique convenablement forms. Les institutions peuvent disposer, parmi leur personnel, de cadres possdant lensemble de comptences ncessaires pour effectuer des audits, des enqutes ou des inspections
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(ces termes sont considrs comme interchangeables) dans le cadre de la procdure dagrment. Toujours est-il que ces institutions peuvent galement envisager dengager ou tre tenues dengager des tiers pour effectuer ce service. Les centres de recherche biomdicale ou de biologie mdicale peuvent laborer des outils destins ces audits, enqutes ou inspections an dassurer la cohrence du processus dagrment de leurs divers laboratoires. Ces outils doivent prsenter une adaptabilit sufsante pour tenir compte des diffrences matrielles ou oprationnelles entre laboratoires quimplique la nature des travaux effectus, tout en assurant une approche uniforme lintrieur de chaque institution. Il faut veiller ce que ces outils ne soient utiliss que par un personnel convenablement form et quils ne se substituent pas une bonne valuation bioscuritaire conduite par des professionnels. Les tableaux 5 7 en donnent quelques exemples. Les rsultats des audits, enqutes ou inspections doivent tre discuts avec le personnel et la direction du laboratoire. Dans chaque laboratoire, il faut dsigner une personne qui sera charge de veiller ce que des mesures soient prises pour remdier toutes les dfectuosits releves au cours de ces contrles. Le processus dagrment nest pas achev et le laboratoire ne peut tre considr comme oprationnel tant que ces dfectuosits nont pas t corriges. En raison de leur caractre complexe, les activits des laboratoires scurit biologique niveau 4 ne peuvent tre envisages dans cet ouvrage. Pour plus de dtails et des informations plus compltes, le lecteur est invit sadresser au Programme de scurit biologique de lOMS1 (voir galement lannexe 3).
Programme de scurit biologique, Dpartement maladies transmissibles: surveillance et action, Organisation mondiale de la Sant, 20 Avenue Appia, 1211 Genve, Suisse (http://www.who.int/csr/).
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8. PRINCIPES DIRECTEURS POUR LAGRMENT DES LABORATOIRES/INSTALLATIONS
Tableau 5. Laboratoire de base scurit biologique niveau 1 : contrle de scurit

Lieu : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Date : . . . . . . . . . . . . . . . . Responsable du laboratoire : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE) OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS
Laboratoire Signalisation approprie : UV, laser, substances ......... radioactives, etc. .................................................... Directives bioscuritaires existantes et suivies ........... Appareils de laboratoire correctement marqus ......... (danger biologique, radioactivit, ........................... toxicit, etc. ............................................................ Conception du laboratoire Facile nettoyer .......................................................... Lampes UV dotes dun interrupteur dinterdiction .... Etagres solidement assujetties .................................. Revtement des paillasses tanche et rsistant aux acides, aux bases, aux solvants organiques et la chaleur .... Eclairage sufsant ....................................................... Espace de rangement sufsant et correctement utilis .. Bouteilles de gaz Toutes les bouteilles arrimes ..................................... Bouteilles de rserve munies de bouchons ................ Gaz asphyxiants ou toxiques prsents uniquement dans les salles ventiles ......................................... Prsence de bouteilles vides ou en excs ................... Produits chimiques Produits inammables rangs dans larmoire approprie .............................................................. Double datage des produits gnrateurs de peroxydes (rception et ouverture) ......................................... Bonne sparation des produits ................................... Produits dangereux rangs au-dessus du niveau des yeux ........................................................................ Produits rangs au sol ................................................ Rcipients de produits chimiques rests ouverts ....... Bon tiquetage de toutes les solutions ....................... Utilisation de thermomtres mercure ....................... Rfrigrateurs, conglateurs, chambres froides Prsence daliments pour la consommation humaine ... Produits inammables dans des units lpreuve des explosions ou scurises ................................ Prsence de substances cancrognes, radioactives ou dun risque biologique indique par une marque extrieure .................................................. Systme douverture durgence des chambres froides ..
Niveau de scurit biologique: Joindre le formulaire de contrle bioscuritaire correspondant
43
POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE)
OUI
NON
SANS OBJET OBSERVATIONS
Equipement lectrique Prsence de rallonges ................................................. Prises femelles la terre et avec la polarit approprie . Branchements proximit des viers sous les douches, etc. .......................................................... Appareils avec ls eflochs ou endommags ........... Prises surcharges ou plaquettes connexions ......... Plaquettes connexions non poses sur le sol .......... Fusibles appropris dans les gaines ........................... Les prises proches de lalimentation en eau sont conformes la rglementation locale .................... Cbles lectriques la terre ........................................ Radiateurs portables ................................................... Equipement de protection individuelle Rince-yeux dans le laboratoire .................................... Douche de scurit ..................................................... Equipement de protection individuelle (gants, blouses, lunettes de scurit, lunettes coques etc.) .......... Personnel portant des vtements appropris .............. Blouses, combinaisons, sarraus, gants et autres vtements ou accessoires de protection non ports hors du laboratoire ..................................... Tenues de protection individuelle pour le stockage cryognique ............................................................ Gestion des dchets Signes dune vacuation dfectueuse des dchets ..... Dchets tris et rassembls dans les rcipients appropris .............................................................. Rcipients pour dchets chimiques marqus, tiquets, dats et ferms ...................................... Rcipients pour dchets chimiques correctement manipuls et rangs ............................................... Rcipients pour objets pointus ou tranchants correctement utiliss et limins ........................... Pas de dtritus sur le sol ............................................ Afchage de la marche suivre pour llimination des dchets ...................................................................
Existence de programmes de sant et scurit au travail Communication du risque ........................................... Protection respiratoire ................................................. Protection auditive ...................................................... Surveillance du formaldhyde ..................................... Surveillance de loxyde dthylne .............................. Surveillance des gaz anesthsiants .............................
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8. PRINCIPES DIRECTEURS POUR LAGRMENT DES LABORATOIRES/INSTALLATIONS
OUI
NON
Systmes de contrle technique Locaux du laboratoire en dpression par rapport aux autres locaux occups, les couloirs et les bureaux ... Eviers ou conduites dvacuation jouant le rle dvents .... Lavabo ......................................................................... Elments mcaniques exposs (poulies, engrenages) ... Conduite daspiration (circuit de vide) avec ltres et piges au niveau des paillasses ............................. Risque de reux dans le rseau dalimentation en eau .... Appareil distiller leau en bon tat ............................ Programme actif et efcace de lutte contre les arthropodes et les rongeurs ................................... Pratiques et rgles gnrales Aliments destins la consommation humaine conservs en dehors du laboratoire ....................... Avertissement du genre Dfense dintroduire des aliments rserv au travail de laboratoire clairement marqu sur les fours micro-ondes .... On mange, boit, fume ou se maquille dans le laboratoire .. Rcipients en verre sous pression scotchs ou protgs (par ex. piges vide) ............................. Pipettage la bouche interdit ...................................... Dispositifs de pipettage mcaniques, propipettes, etc. fournis et utiliss .................................................... Rangement distinct pour les tenues de laboratoire et les vtements de ville ............................................. Tenue gnrale du laboratoire Rcipients en verre rangs sur le sol .......................... Risques de trbuchement manifestes ......................... Lingettes absorbantes propres sur les plans de travail ... Manipulation mcanique des dbris de verre (pelle et brosse, pinces, etc.) ............................................... Scurit incendie Pommes des asperseurs dgages et non obstrues ... Pas de joints dtanchit au niveau des traverses des murs, plafonds , planchers, etc. ...................... Passage de ls et de tuyaux dans louverture des portes .. Alles de circulation de 1m de largeur au minimum ..... Objets rangs sur des conduites ou sur des appareils lectriques ............................................... Combustibles excdentaires stocks dans le laboratoire .... Bains chauffants temprature constante Avec faible niveau deau et interrupteur de surchauffe ... Construits en matriau non combustible ....................
Signature du contrleur :. . . . . . . . . . Date dachvement du contrle : . . . . . . . . .
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Tableau 6. Laboratoire de base Scurit biologique niveau 2 : contrle de scurit.

Ce formulaire est utiliser avec le formulaire de contrle bioscuritaire pour le laboratoire de base scurit biologique niveau 1 Lieu : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Date : . . . . . . . . . . . . . . . . Responsable du laboratoire : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Enceinte de scurit biologique (ESB) Agrment au cours de lanne prcdente ................. Nettoyage de la surface de lESB avec un dsinfectant appropri au dbut et la n de chaque manipulation .......................................................... Grille frontale et ltre dvacuation non obstrus ...... Prsence de ammes nues dans lenceinte ................ Conduites daspiration (circuit de vide) munies de ltres et de piges dsinfectants en tat de fonctionner ............................................................ Efcacit de lESB compromise par lair ambiant ou lemplacement ....................................................... Utilisation de lESB en prsence dun risque de formation darosols .............................................. Laboratoire Accs limit au personnel autoris ............................. Entre limite au personnel connaissant la totalit des risques ............................................................ Panneau de danger biologique appos si ncessaire sur la porte du laboratoire ................... Informations du panneau exactes et jour ....... Panneau lisible et en bon tat ............................ Toutes les portes fermes .......................................... Dcontamination Dcontaminant spcique du ou des micro-organismes en cause .................................. Le chef de laboratoire est prvenu si du matriel infectieux est rpandu ou impliqu dans un accident ... Un dcontaminant appropri est utilis pour nettoyer un produit rpandu ................................................ Les plans de travail sont nettoys avant et aprs chaque manipulation, quotidiennement ou si un produit a t rpandu ............................................ Manipulation des dchets contamins Bon usage des conteneurs de dchets contamins ... Pas de conteneurs remplis ras bords ...................... Conteneurs correctement tiquets et ferms ............ Cultures et autres dchets soumis rglementation dment dcontamins avant limination ............... Transport dans des conteneurs ferms, solides et tanches du matriel dcontamin hors du laboratoire, conformment la rglementation locale .....................................................................
Date : Emplacement : Marque : Type : No de srie :
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OUI
NON
Dcontamination biologique des dchets mixtes avant limination sous la forme de dchets chimiques ou radiologiques .................................. Protection individuelle Vaccinations ou examens ncessaires rappels au personnel selon les agents infectieux manipuls .............................................................. Services mdicaux comptents contacts pour les bilans de sant, la surveillance mdicale et le traitement en cas dexposition professionnelle ..... Port de gants pour la manipulation de matriel biologique infectieux ou dquipements contamins ............................................................ Protection faciale lors de travaux sur du matriel infectieux en dehors dune ESB ............................. Lavage des mains une fois les gants enlevs et avant de sortir du laboratoire en cas de travaux sur des agents infectieux ....................................... Possibilit dadministrer un anti-infectieux titre de premier secours ..................................................... Pratiques Utilisation dune ESB sil y a possibilit de projections ou de formation darosols de matriel infectieux ................................................. Un manuel de scurit biologique a t prpar et adopt .................................................................... Le personnel lit, tudie et suit les instructions relatives aux pratiques et techniques et en particulier celles qui gurent dans le manuel de scurit ou le manuel de laboratoire (obligatoire une fois par an pour tout le personnel) ................ Les manipulations sont effectues de manire produire le moins possible darosols ou dclaboussures ..................................................... Des seringues autobloquantes ou jetables sont utilises pour les travaux sur agents infectieux .... Les godets et les rotors des centrifugeuses ne sont ouverts qu lintrieur dune ESB ......................... Les chantillons infectieux sont transports hors dune ESB dans des conteneurs approuvs conformment la rglementation relative au transport de ce type de produit ............................. Commodits Lavabo install prs de la sortie du laboratoire .........
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Tableau 7. Laboratoire de connement Scurit biologique niveau 3 : contrle de scurit. Ce formulaire est utiliser avec les formulaires de contrle bioscuritaire
pour les laboratoires scurit biologique niveau 1 et scurit biologique niveau 2. Lieu : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Date : . . . . . . . . . . . . . . . . Responsable du laboratoire : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Etablissement Laboratoire spar des points de passage normaux du btiment ................................................................. Accs au laboratoire par un vestibule dot de portes fermeture automatique ........................................... Des joints dtanchit sont poss ou peuvent ltre au niveau de toutes les traverses en vue de la dcontamination du laboratoire ............................. Air du local non recycl et vacu hors des secteurs occups .................................................................. Systme de ventilation rgul permettant le contrle du sens de circulation de lair ..................................... Protection individuelle Port de blouses fermes sur le devant dans le laboratoire .............................................................. Port des vtements de protection limit aux locaux du laboratoire .............................................................. Lavabo actionn par le pied, le coude ou dclenchement automatique .................................. Protection des mains Port de gants doubles pour le travail avec du matriel infectieux et des dquipements ou des plans de travail pouvant tre contamins ............................. Protection respiratoire Port dune protection respiratoire par lensemble du personnel du laboratoire lorsque des arosols ne sont pas conns de faon sre dans une ESB .... Pratiques Dispositif de protection des muqueuses disposition pour la manipulation de matriel infectieux hors dune ESB ............................................................... Personnel averti des risques particuliers lis lagent ou aux agents infectieux ........................................ Personnel tenu de lire et dobserver toutes les instructions relatives aux pratiques et techniques, y compris celles du manuel de scurit biologique ou du manuel de laboratoire .................................. Mises jour annuelles adresses au personnel ou formation complmentaire si des changements sont apports certaines techniques .................... Autoclavage de tous les dchets avant limination ....
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PARTIE II
Sret biologique en laboratoire
9. Principes de la sret biologique en laboratoire
Jusquici, le contenu du Manuel de scurit biologique en laboratoire a surtout consist dans un expos des principes classiques de la scurit biologique en laboratoire. Les prcdentes ditions montrent combien il est important que les laboratoires aient recours de bonnes techniques microbiologiques, disposent de systmes de connement appropris et dinstallations bien conues et agences, avec des quipements correctement utiliss et entretenus, et quen outre les services administratifs veillent rduire au minimum les risques de lsions ou de maladie chez le personnel. Si les laboratoires suivent ces recommandations, ils seront galement mme de rduire au minimum les risques pour lenvironnement et la collectivit dans son ensemble. Divers vnements survenus ces dernires annes dans le monde mettent en lumire la ncessit de protger les laboratoires et les matires quils dtiennent contre un certain nombre de prils susceptibles dentraner des dommages pour la population, le btail, lagriculture ou lenvironnement. Avant de voir quels peuvent tre les besoins des laboratoires en matire de sret biologique, il convient de dnir clairement ce que lon entend par scurit et sret biologique et en quoi ces deux notions se distinguent. La scurit biologique consiste dans la mise en uvre dun certain nombre de principes, de techniques et de pratiques de connement visant prvenir le risque accidentel dexposition du personnel des agents pathognes ou des toxines, ou encore de libration de telles substances. La sret biologique, elle, consiste dans la mise en place dun certain nombre de mesures dordre administratif et de gestion du personnel, en vue de rduire le risque de perte, de vol, dutilisation mauvais escient, de dtournement ou de libration dlibre dagents ou de toxines. Le vritable fondement de la sret biologique rside dans lapplication en laboratoire des pratiques de scurit biologique. En effet, grce aux valuations du risque pratiques dans le cadre du programme bioscuritaire de ltablissement, on peut recueillir des informations sur la nature des micro-organismes dtenus, sur lemplacement de ces micro-organismes, sur le personnel qui demande pouvoir en disposer et sur lidentit de la personne responsable de ces germes. On peut alors exploiter ces informations pour dterminer si un tablissement dtient des matires biologiques susceptibles dattirer des personnes envisageant den faire un usage criminel. Il convient dlaborer des normes nationales identiant et examinant les respon 51
sabilits actuelles des pays et des tablissements dans la protection des chantillons, des agents pathognes et des toxines dtenus contre toute utilisation abusive. Il incombe chaque laboratoire, en fonction de ses besoins, de la nature de ses activits et des conditions locales, dlaborer et de mettre en uvre un programme de sret biologique spcique. Par consquent, les activits de sret biologique pratiques dans un laboratoire doivent tre reprsentatives des divers besoins de cet tablissement et bncier de la contribution ou de lavis des directeurs scientiques, des principaux chercheurs, des responsable de la sret biologique, du personnel scientique du laboratoire, du personnel dentretien, des responsables administratifs, du personnel spcialis dans les technologies de linformation et, si ncessaire, des services de rpression des fraudes et du personnel de scurit. Les mesures de sret biologique en laboratoire doivent sappuyer sur un programme complet de responsabilisation lgard des agents pathognes et des toxines, qui comprend un inventaire actualis identiant lemplacement de ces matires et du personnel y ayant accs et indiquant leur utilisation, leurs transferts internes ltablissement ou entre tablissements, ainsi que toute inactivation et/ou limination ventuelles des matires. De mme, il convient dtablir un protocole de sret biologique pour le laboratoire, destin guider lidentication, le signalement, ltude et llimination des failles dans la sret biologique de cet tablissement, y compris les incohrences dans les rsultats dinventaire. La participation, les rles et les responsabilits des autorits de sant et de scurit publiques en cas dentorse la sret doivent tre clairement dnis. Une formation la sret biologique en laboratoire, distincte de la formation la scurit biologique en laboratoire, doit tre dispense tout le personnel. Une telle formation devrait aider les membres du personnel comprendre les besoins en matire de protection de ces matires et les raisons des diffrentes mesures de scurit biologique. Elle devrait aussi inclure un examen des normes nationales pertinentes et des procdures propres ltablissement. Au cours de cette formation, il convient de prsenter galement les procdures prcisant les rles et les responsabilits du personnel en matire de sret en cas dinfraction dans ce domaine. Laptitude professionnelle et morale travailler avec des agents pathognes dangereux de lensemble du personnel disposant dun accs autoris rgulier aux matires sensibles joue galement un rle dterminant dans lefcacit des activits concernant la sret en laboratoire. En rsum, les prcautions de sret doivent devenir des lments de routine du travail de laboratoire, lgal des mesures dasepsie ou de scurit microbiologique. Les mesures de sret biologique en laboratoire ne doivent pas faire obstacle un partage efcace des matires de rfrence, des chantillons cliniques et pidmiologiques et des informations qui sy rapportent, ncessaires aux enqutes cliniques ou de sant publique. Un programme de sret bien gr ne devrait pas entraver outre mesure les activits quotidiennes du personnel scientique, ni faire obstacle la ralisation des recherches. Un accs lgitime aux recherches et aux matires cliniques
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9. PRINCIPES DE LA SURETE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
importantes doit tre prserv. Lvaluation de laptitude des membres du personnel, lapport ces membres dune formation spcique la sret et un respect rigoureux des procdures de protection des agents pathognes constituent des moyens raisonnables pour amliorer la sret biologique en laboratoire. La mise en place et le maintien de tous ces efforts passe par la ralisation dvaluations des risques et des menaces et par la rvision et la mise jour des procdures sur une base rgulire. Des contrles du respect de ces procdures, sappuyant sur des instructions claires quant aux rles, aux responsabilits et aux mesures correctives, doivent tre prvus par les programmes de sret biologique en laboratoire et par les normes nationales dans ce domaine.
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PARTIE III
Equipements de laboratoire
10. Enceintes de scurit biologique

Les enceintes de scurit biologique (ESB) appeles aussi postes de scurit microbiologique (PSM) sont conues pour viter que loprateur, le local du laboratoire et le matriel de travail ne soient exposs aux arosols ou claboussures infectieux qui pourraient se produire lors de la manipulation de matriels biologiques contenant des agents pathognes, comme les cultures primaires, les souches pour les cultures et les chantillons destins au diagnostic. Des arosols se produisent lors de toute manipulation qui communique de lnergie un produit liquide ou semi-liquide, par exemple lorsquon secoue, verse, agite, ou fait tomber un liquide goutte goutte sur une surface ou dans un autre liquide. Dautres oprations, par exemple ensemencer en stries une plaque de glose, inoculer des acons pour culture cellulaire laide dune pipette, utiliser une pipette multivoies pour dlivrer une suspension liquide dagents infectieux sur une plaque de microculture, homogniser et mlanger du matriel biologique infectieux, centrifuger un liquide ou travailler sur un animal, peuvent provoquer la formation darosols infectieux. Les particules darosol de moins de 5 m de diamtre ou les gouttelettes de diamtre compris entre 5 et 100 m, ne sont pas visibles lil nu. Lorsque des arosols se forment, loprateur ne sen rend gnralement pas compte, et il na pas conscience non plus quils peuvent tre inhals ou provoquer la contamination croise des plans de travail. On a montr quune ESB convenablement utilise est capable de rduire trs efcacement le nombre dinfections contractes au laboratoire ou les contaminations croises conscutives une exposition des arosols infectieux. Les ESB contribuent galement la protection de lenvironnement. Au cours des annes, la conception de base des ESB a subi un certain nombre de modications. Lune des plus importantes a t le montage dun ltre particules de haute efcacit (ltre HEPA) sur le systme dvacuation. Ce ltre est capable darrter 99,97 % des particules de 0,3 m de diamtre et 99,99 % de celles dont le diamtre se situe de part et dautre de cette valeur. Un ltre HEPA peut donc arrter efcacement tous les agents infectieux connus et lon peut donc tre certain que lair qui sort de lenceinte est exempt de germes pathognes. Une deuxime modication a consist diriger lair ltr sur le plan de travail, ce qui permet dviter la contamination de ce plan et de ce qui sy trouve. On parle souvent de protection du produit pour dsigner cette caractristique. Le tableau 8 indique le type de protection confr dans chaque cas. Remarque. Les hottes ux laminaire horizontal ou vertical ne sont pas des enceintes de scurit biologiques et ne doivent pas tre utilises comme telles.
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Tableau 8. Choix dune enceinte biologique de scurit (ESB) en fonction du type de protection recherch
TYPE DE PROTECTION ESB UTILISER
Protection du personnel, micro-organismes des groupes de risque 1 3 Protection du personnel, micro-organismes du groupe de risque 4, laboratoire avec bote gants Protection du personnel, micro-organismes du groupe de risque 4, port obligatoire de combinaisons pressurises Protection du produit
Classe I, Classe II, Classe III Classe III
Classe I, Classe II
Classe II, Classe III uniquement si ux laminaire
Protection contre les radionuclides volatils/ Classe IIB1, Classe IIA2 vacuation extrieure protection chimique, quantits minimes Protection contre les radionuclides volatils/ Classe I, Classe IIB2, Classe III protection chimique
Enceinte de scurit biologique de classe I Le schma dune enceinte de scurit biologique de classe I est reprsent sur la gure 6. Lair est aspir par louverture frontale la vitesse minimale de 0,38 m/s et passe sur le plan de travail avant dtre vacu par une conduite munie dun ltre. Le courant dair entrane hors de la zone de respiration de loprateur les particules darosol qui pourraient se former au niveau du plan de travail et les dirige vers la conduite dvacuation. Loprateur peut passer les bras par louverture frontale pour atteindre le plan de travail situ lintrieur de lenceinte tout en observant ce plan travers un panneau de verre. Ce panneau peut galement tre compltement lev, ce qui permet daccder plus facilement au plan de travail pour le nettoyer ou pour toute autre raison. Lair de lenceinte est vacu par une conduite munie dun ltre HEPA : a) dans le laboratoire, puis lextrieur du btiment par le circuit dvacuation de ce dernier; b) lextrieur par le circuit dvacuation du btiment; c) directement lextrieur. Le ltre HEPA peut tre mont sur la gaine dvacuation de lESB ou sur le circuit dvacuation du btiment. Certaines ESB de classe I sont quipes dun ltre HEPA intgr, les autres utilisent le ventilateur dextraction qui quipe le circuit dvacuation du btiment. LESB de classe I a t la premire enceinte de ce type tre agre et, du fait de la simplicit de sa conception, elle est encore trs largement utilise dans le monde. Elle prsente lavantage dassurer la protection du personnel et de lenvironnement et peut galement tre utilise pour travailler sur des radionuclides ou des produits chimiques volatils et toxiques. Toutefois, comme lair aspir par louverture frontale passe sur le plan de travail sans tre strilis, ce dispositif ne protge pas coup sr le produit manipul.
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10. ENCEINTES DE SCURIT BIOLOGIQUE
B A
air ambiant air potentiellement contamin air filtr par le filtre HEPA coupe latrale Figure 6. Reprsentation schmatique dune enceinte de scurit biologique de classe I. A, ouverture frontale; B, panneau dobservation guillotine; C, ltre HEPA mont sur la conduite dvacuation; D, gaine dvacuation.
Enceinte de scurit biologique de classe II Les cultures cellulaires et tissulaires tant de plus en plus utilises pour la culture des virus, on a estim quil ntait plus acceptable de faire passer de lair non strilis provenant de la pice sur le plan de travail. Les ESB de classe II ont t conues non seulement pour assurer la protection du personnel, mais galement pour viter que le matriel biologique prsent sur le plan de travail ne soit contamin par lair de la pice. Les ESB de classe II, dont il existe quatre types (A1, A2, B1 et B2), se diffrencient des ESB de classe I par le fait quelles ne laissent passer sur le plan de travail que de lair strile cest--dire ayant travers un ltre HEPA. Les ESB de classe II peuvent tre utilises pour travailler sur des agents infectieux des groupes de risque 2 et 3. Elles peuvent galement tre utilises pour travailler sur des agents infectieux du groupe de risque 4 si loprateur porte une combinaison de protection pressurise.
Enceinte de scurit biologique de classe II, type A1
La gure 7 reprsente une enceinte de scurit biologique de classe II, type A1. Un ventilateur plac lintrieur de lenceinte aspire lair par louverture frontale et le fait passer travers la grille avant. Au niveau de louverture frontale, lair doit tre aspir la vitesse minimum de 0,38 m/s. Lair traverse ensuite un ltre HEPA avant de se diriger vers le bas pour passer sur le plan de travail. Au cours de son mouvement descendant, le courant dair se divise une distance denviron 6 18 cm du plan de travail pour former deux courants secondaires, lun qui passe travers la grille avant
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C E B A
F coupe de face air ambiant air potentiellement contamin air filtr par le filtre HEPA coupe latrale
Figure 7. Reprsentation schmatique dune enceinte de scurit biologique de classe II, type A1. A, ouverture frontale; B, panneau dobservation guillotine; C, ltre HEPA dvacuation; D, chambre de distribution arrire; E, ltre HEPA dadmission; F, ventilateur.
et lautre travers la grille arrire. Toutes les particules darosol qui se forment au niveau du plan de travail sont immdiatement piges par ce courant descendant et entranes travers les grilles avant ou arrire, ce qui assure une protection maximale du produit manipul. Lair schappe ensuite par la chambre de distribution situe larrire pour aboutir dans lespace qui se trouve au sommet de lenceinte, entre le ltre dadmission et le ltre dvacuation. Compte tenu des dimensions relatives de ces deux ltres, environ 70 % de lair est recycl travers le ltre dadmission pour revenir sur le plan de travail; les 30 % restants sont rejets dans la pice ou lextrieur aprs avoir travers le ltre dvacuation. Lair rejet par une enceinte de scurit biologique de classe II, type A1 peut tre recycl dans la pice ou vacu lextrieur du btiment en raccordant lenceinte une conduite dvacuation spciale laide dun manchon ou en le faisant passer par le circuit dvacuation gnral. Le recyclage de lair dans la pice a lavantage de rduire les dpenses en combustible de ltablissement car lair chauff ou refroidi ne schappe pas lextrieur. Le raccordement par une gaine tanche de lenceinte au circuit dvacuation permet galement dutiliser certaines ESB pour travailler sur des radionuclides et des produits chimiques toxiques volatils (tableau 8).
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D B A
F coupe de face air ambiant air potentiellement contamin air filtr par le filtre HEPA
F coupe latrale
Figure 8. Reprsentation schmatique dune enceinte de scurit biologique de classe II, type B1. A, ouverture frontale; B, panneau dobservation guillotine; C, ltre HEPA dvacuation; D, ltre HEPA dadmission; E, gaine dvacuation en dpression; F, ventilateur; G, ltre HEPA dadmission dair. Il est ncessaire de raccorder le circuit dvacuation de lenceinte au circuit gnral dvacuation du btiment.
Enceintes de scurit biologique de classe II, type A2 avec ventilation sur lextrieur et de classe II, types B1 et B2
Les ESB de classe II, type A2 avec ventilation sur lextrieur et les ESB de classe II types B1 (gure 8) et B2, sont des variantes de lESB II, type A1. Le tableau 9 en donne les caractristiques, avec celles des ESB de classe I et de classe III. Chacune de ces variantes correspond un usage particulier (voir tableau 8). Elles diffrent les unes des autres plusieurs gards : vitesse de lair travers louverture frontale; quantit dair recycle sur le plan de travail et vacue de lenceinte; circuit dvacuation, qui dtermine si lair issu de lenceinte est rejet dans la pice ou lextrieur, par lintermdiaire dun circuit dvacuation spcial ou par le circuit dvacuation gnral; rglage de la pression (enceinte dont les gaines et la chambre de distribution biologiquement contamines sont en dpression ou, dfaut, sont entoures de volumes en dpression). Les rfrences bibliographiques 7 et 8 ainsi que les brochures disponibles auprs des fabricants donnent une description complte des diverses ESB de classe IIA et IIB.
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Tableau 9. Diffrences entre les enceintes de scurit biologique (ESB) des classes I, II et III.
ESB VITESSE LENTRE (m/s) COURANT DAIR (%) RECYCL VACU CIRCUIT DVACUATION
Classe Ia Classe IIA1
0,36 0,380,51
0 70
100 30
Jonction rigide tanche Evacuation dans la pice ou manchon de raccordement Evacuation dans la pice ou manchon de raccordement Jonction rigide tanche Jonction rigide tanche Jonction rigide tanche
Classe IIA2 avec ventilation sur lextrieura Classe IIB1a Classe IIB2 Classe III
a
0,51
70
30
0,51 0,51 Sans objet
30 0 0
70 100 100
Toutes les gaines et tous les conduits potentiellement contamins sont en dpression ou sont entours de gaines et de volumes en dpression.
Enceinte de scurit biologique de classe III Ce type denceinte (gure 9), qui assure au personnel la protection maximale, est utilis pour travailler sur des agents infectieux du groupe de risque 4. Toutes les traverses sont dotes de joints tanches aux gaz. Lair admis dans lenceinte passe travers un ltre HEPA et lair qui en sort travers deux ltres HEPA. La circulation de lair est assure par un circuit dvacuation spcial situ lextrieur de lenceinte, qui en maintien lintrieur en dpression (environ 124,5 Pa). Pour accder au plan de travail, on utilise des gants en caoutchouc trs rsistant xs des orices frontaux. Les ESB de classe III doivent tre quipes dun sas de passage susceptible dtre strilis et dot dun systme dvacuation avec ltre HEPA. Les enceintes de classe III peuvent tre raccordes un autoclave double porte pour la dcontamination de tout ce qui entre ou sort de lenceinte. Pour disposer dun plan de travail plus vaste, on peut adjoindre plusieurs botes gants. Les ESB de classe III conviennent pour les manipulations effectues dans les laboratoires de scurit biologique niveau 3 ou 4. Raccordements pour lvacuation de lair des enceintes de scurit biologique Il existe des manchons de raccordement ou des hottes que lon peut utiliser avec les ESB de classe IIA1 ou IIA2 avec ventilation extrieure. Le manchon de raccordement sadapte sur le botier dvacuation de lenceinte et permet den aspirer lair pour lamener jusquaux gaines dvacuation du btiment. Un petit espace, gnralement de 2,5 cm de diamtre est mnag entre le botier dvacuation de lenceinte et le raccord, ce qui permet daspirer lair de la pice pour lamener galement dans le circuit dvacuation du btiment. Le manchon doit tre amovible ou tout au moins
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D B
E F
coupe de face air ambiant air potentiellement contamin air filtr par le filtre HEPA
coupe latrale
Figure 9. Reprsentation schmatique dune enceinte de scurit biologique de classe III (bote gants). A, orices de xation des manchons gants; B, panneau dobservation guillotine; C, deux ltres HEPA dvacuation monts en srie; D, ltre HEPA dadmission; E, autoclave deux portes ou sas de passage; F, cuve de dsinfection chimique. Il est ncessaire de raccorder le circuit dvacuation de lenceinte un circuit dvacuation du btiment indpendant.
tre conu pour permettre de contrler le fonctionnement de lenceinte. En rgle gnrale, les uctuations du dbit de lair dans le circuit de ventilation du btiment nont gure dinuence sur le fonctionnement dune ESB raccorde au circuit par un manchon de ce genre. Les ESB de classe IIB1 ou IIB2 sont dotes de jonctions rigides tanches, cest-dire quelles sont raccordes directement, sans laisser aucun espace, au circuit dvacuation du btiment ou, de prfrence, un circuit dvacuation spcial. Il faut que le circuit dvacuation du btiment soit parfaitement adapt aux spcications indiques par le fabricant, tant en ce qui concerne le volume dair que la pression statique. Le processus dagrment des ESB jonction rigide tanche est plus long que dans le cas des enceintes avec recyclage de lair dans la pice ou qui sont relies au circuit dvacuation au moyen dun manchon ou dune hotte. Choix dune enceinte de scurit biologique Le choix dune ESB doit reposer avant tout sur le type de protection ncessaire : protection du produit manipul, protection du personnel contre des micro-organismes des groupes de risque 1 4, protection du personnel contre des radionuclides ou des
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produits chimiques toxiques et volatils, protection simultane contre plusieurs de ces risques. Le tableau 8 indique quel modle dESB utiliser pour chaque type de protection. Il ne faut pas utiliser de produits chimiques toxiques ou volatils dans les enceintes avec recyclage de lair dans la pice, savoir les enceintes de classe I qui ne sont pas raccordes au circuit dvacuation du btiment ou les enceintes de classe IIA1 ou IIA2. Les enceintes de classe IIB1 peuvent convenir pour des manipulations sur de trs petites quantits de produits chimiques ou de radionuclides volatils. Lorsque lon travaille sur des quantits plus importantes de radionuclides ou de produits chimiques volatils, il faut utiliser une enceinte vacuation totale, cest--dire une ESB de classe IIB2. Utilisation des enceintes de scurit biologique au laboratoire
Emplacement
La vitesse de lair qui traverse louverture frontale dune ESB est denviron 0,45 m/s. A cette vitesse, le ux dair entrant est facilement perturb par les courants dair produits par les personnes qui se dplacent proximit de lESB, les fentres ouvertes, les registres dadmission de lair ou encore louverture ou la fermeture des portes. Il faut donc installer les ESB dans des emplacements qui soient loigns des points de passage et des courants dair qui pourraient perturber leur fonctionnement. Dans la mesure du possible, il faudrait prvoir un dgagement dune trentaine de centimtres derrire lenceinte et sur chacun de ses cts pour faciliter laccs en cas doprations de maintenance. Il peut galement savrer ncessaire de prvoir un dgagement denviron 30 35 cm au-dessus de lenceinte an que lon puisse mesurer exactement la vitesse de lair travers le ltre dvacuation et le cas chant, changer le ltre.
Oprateurs
Si les enceintes de scurit biologique ne sont pas utilises correctement, la protection confre risque dtre considrablement rduite. Loprateur doit veiller ne pas perturber le ux dair entrant lorsquil passe les bras dans le volume de travail ou les en retire. Il faut dplacer les bras trs lentement en avant ou en arrire, perpendiculairement louverture frontale. Avant de manipuler du matriel dans le volume de travail dune ESB, il faut attendre environ 1 minute, une fois que lon a pass les bras lintrieur, pour que lenceinte sadapte et que le courant dair vienne balayer la surface des mains et des bras. Il faut galement veiller ne faire quun minimum de mouvements travers louverture frontale en plaant tous les instruments et objets ncessaires sur le plan de travail avant de commencer la manipulation.
Disposition du matriel
La grille de reprise frontale des ESB de classe II ne doit pas tre obstrue par du papier, des appareils ou dautres objets. Il faut dsinfecter la surface du matriel que lon va disposer lintrieur de lenceinte avec de lalcool 70 %. On peut travailler sur un linge absorbant imprgn de dsinfectant pour retenir les projections et les claboussures. Tout le matriel doit tre dispos aussi loin que possible dans le volume de
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travail, en se rapprochant au maximum du bord distal du plan de travail, mais en vitant dobstruer la grille arrire. Les appareils qui produisent des arosols (par ex. mlangeurs, centrifugeuses, etc.) doivent tre placs vers le fond de lenceinte. Le matriel encombrant, comme les sacs de scurit biologique, les plateaux pour pipettes utilises et les oles vide doivent tre placs sur un des cts du volume de travail. Sur le plan de travail, il faut travailler en allant des zones propres vers les zones contamines. Le sac de scurit autoclavable destin recueillir le matriel infectieux et les plateaux pipettes ne doivent pas tre placs hors de lenceinte. Les frquents mouvements de va-et-vient entre lintrieur et lextrieur de lenceinte qui sont ncessaires pour utiliser ces rcipients peuvent perturber la veine de garde et par voie de consquence, nuire la protection du personnel et du produit manipul.
Utilisation et maintenance
La plupart des ESB sont conues pour une utilisation 24 h sur 24 et les chercheurs estiment que cette utilisation ininterrompue facilite la rduction du taux de poussires et de matires particulaires prsentes dans le laboratoire. Les enceintes de classe IIA1 et IIA2 dont lair est vacu dans la pice ou dans un circuit dvacuation spcial au moyen dun manchon de raccordement, peuvent tre dbranches lorsquelles ne sont pas utilises. Dans dautres types denceinte, comme les ESB de classe IIB1 et IIB2 qui sont directement connectes aux gaines dvacuation par un raccordement tanche, lair doit circuler en permanence pour que lair de la pice reste en tat dquilibre. Il faut brancher les enceintes au moins 5 minutes avant de commencer travailler et attendre galement 5 minutes une fois la manipulation acheve, pour purger le volume de travail, cest--dire pour que lair contamin ait le temps dtre vacu de lenceinte. Toute rparation effectue sur une ESB doit tre cone un technicien quali. Si un dysfonctionnement se produit pendant lutilisation de lenceinte, il faut le signaler et y remdier avant de rutiliser lenceinte.
Lampes UV
Il nest pas ncessaire dquiper les ESB de lampes ultraviolets. Si toutefois on utilise de telles lampes, il faut les nettoyer chaque semaine pour liminer la poussire et les salets qui pourraient rduire laction germicide du rayonnement. Lintensit du rayonnement ultraviolet doit tre mesure lors de chaque nouvel agrment de lenceinte an de vrier que lmission de la lampe est satisfaisante. Les lampes UV doivent tre teintes quand des personnes sont prsentes dans la pice, an de protger leurs yeux et leur peau contre toute exposition accidentelle.
Flammes nues
Il faut viter la prsence de toute amme nue dans lenvironnement quasi strile qui existe lintrieur de lenceinte. En effet, les ammes perturbent la circulation de lair et peuvent tre dangereuses si lon utilise galement des substances volatiles
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inammables. Pour striliser les anses bactriologiques, il existe des microbrleurs et des fours lectriques, qui sont prfrables aux ammes nues.
Produits rpandus accidentellement
Il faut afcher dans le laboratoire un exemplaire de la conduite tenir si des produits sont rpandus accidentellement et veiller ce chacun lise et assimile ces instructions. Si un produit prsentant un danger biologique est rpandu accidentellement dans une ESB, il faut nettoyer immdiatement le volume de travail pendant que lenceinte continue fonctionner. On utilisera cet effet un dsinfectant efcace que lon devra appliquer en sefforant de produire le moins darosols possible. Tout ce qui entre en contact avec le produit rpandu doit tre dsinfect ou pass lautoclave.
Agrment
La procdure dagrment stipule quun contrle doit tre effectu sur chaque ESB pour vrier quelle fonctionne conformment aux spcications nationales et internationales et ne prsente pas de dfaut. Ce contrle doit tre pratiqu lors de linstallation puis priodiquement par des techniciens qualis, conformments aux instructions du fabricant. Pour valuer lefcacit du connement assur par une enceinte, il faut procder aux contrles suivants : intgrit de la structure, prsence ventuelle de fuites au niveau des ltres HEPA, paramtres vlocimtriques du ux dair descendant, vitesse frontale du courant dair, contrle manomtrique de la dpression, dbit des ventilateurs, essai au fumigne pour contrler le ux dair, alarmes et asservissement du verrouillage. On peut galement effectuer dautres contrles (facultatifs) : dfauts disolation lectrique, intensit de lclairage, intensit du rayonnement UV, niveau de bruit et vibrations. Une formation, des comptences et des quipements spcialiss sont indispensables pour effectuer ces contrles et il est vivement recommand de les faire excuter par un professionnel quali.
Nettoyage et dsinfection
Tout ce qui se trouve lintrieur de lenceinte, y compris lappareillage, doit faire lobjet dune dcontamination en surface et tre retir du volume de travail une fois la manipulation acheve, car un reste de milieu de culture peut permettre la prolifration des micro-organismes. Les surfaces intrieures de lenceinte doivent tre dcontamines avant et aprs chaque utilisation. Les plans de travail et les parois intrieures doivent tre passs au dsinfectant de manire tuer tous les micro-organismes prsents. A la n de la journe de travail, on procdera une dcontamination nale consistant passer au dsinfectant le plan de travail, les parois latrales, le fond ainsi que la face arrire du panneau dobservation. A cet effet, on peut utiliser une solution dhypochlorite ou de lalcool 70 %, si ces produits sont efcaces contre les germes que lon cherche liminer. Si on utilise un dsinfectant corrosif, comme lhypochlorite par exemple, il faudra encore rincer les surfaces avec de leau strile.
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Il est recommand de procder cette dsinfection pendant que lenceinte est en marche. Si elle a t arrte, on la remettra en marche pendant 5 minutes pour la purger de lair quelle contient avant de la dbrancher dnitivement.
Dcontamination
Lenceinte doit tre dcontamine avant de changer les ltres ou avant de la dplacer. La mthode la plus courante consiste en une fumigation au formaldhyde. La dcontamination des enceintes doit tre effectue par un professionnel quali.
Equipements de protection individuelle
Des vtements protecteurs doivent tre ports chaque fois que lon utilise une ESB. Les blouses de laboratoire sont acceptables pour le travail aux niveaux de scurit biologique 1 ou 2. Aux niveaux 3 ou 4, il faut utiliser des blouses boutonnage dans le dos, qui assurent une meilleure protection (sauf dans un laboratoire o le port dune combinaison pressurise est obligatoire). Les gants doivent tre bien tirs de manire passer par dessus les poignets et non pas en dessous. Pour se protger les poignets, on peut ajouter des manches lastique. Certaines manipulations ncessitent le port dun masque ou de lunettes de protection.
Alarmes
Les ESB peuvent tre quipes dun ou deux types dalarme. Certaines alarmes nquipent que les enceintes dotes dun panneau dobservation guillotine. Ces alarmes se dclenchent si loprateur place le panneau dans une mauvaise position et ne sarrtent que lorsquil a remis le panneau correctement en place. Un autre type dalarme est destin avertir dune perturbation dans la circulation de lair. Son dclenchement est un signal de danger immdiat pour loprateur ou pour le produit. Si cette alarme retentit, il faut interrompre immdiatement la manipulation et prvenir le chef de laboratoire. Le manuel dutilisation fourni par le fabricant doit indiquer quelle est ensuite la marche suivre. Ces questions doivent tre abordes lors de la formation lutilisation des ESB.
Informations complmentaires
Le choix de lESB approprie, son installation, son utilisation correcte et le contrle annuel de son bon fonctionnement sont des oprations complexes. Il est vivement recommand quelles soient supervises par un professionnel de la scurit biologique parfaitement form et expriment. Ce spcialiste doit trs bien connatre la littrature correspondante mentionne dans la bibliographie du prsent manuel et il doit avoir reu une formation complte sur la question. Les oprateurs doivent galement recevoir une formation en bonne et due forme portant sur le fonctionnement et lutilisation des ESB. Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de se reporter aux rfrences 5 et 7 16, ainsi quau chapitre 11.
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11. Equipements de scurit
Comme les arosols sont une source importante dinfection, il faut veiller ce quil sen forme le moins possible et viter de les disperser. Des arosols dangereux peuvent se former dans de nombreux laboratoires, par exemple lorsquon mlange, mixe, broie, secoue, agite, traite aux ultrasons ou centrifuge du matriel biologique infectieux. Mme en utilisant un appareillage qui rpond aux normes de scurit, il est prfrable deffectuer autant que possible ces oprations dans une enceinte de scurit biologique agre. Les diffrents types denceintes de scurit biologique, ainsi que leur utilisation et leur contrle sont traits au chapitre 10. Lutilisation dquipements de scurit ne garantit pas la protection de loprateur si celui-ci nest pas form et nutilise pas les techniques appropries. Ces quipements doivent subir des contrles priodiques an de sassurer quils continuent fonctionner en toute scurit. Le tableau 10 donne la liste des quipements et instruments de scurit conus pour liminer ou rduire certains risques et indique brivement les caractristiques qui contribuent leur scurit dutilisation. Des prcisions sont donnes par la suite sur une bonne partie de cet appareillage. Des informations complmentaires sur la manire de bien les utiliser sont galement donnes au chapitre 12. Lannexe 4 donne un certain nombre de renseignements sur les quipements et les oprations ou manipulations qui comportent un danger. Isolateurs dpression en lm ou feuille de plastique souple Lisolateur dpression en lm souple est un dispositif de connement primaire autonome qui assure une protection maximale contre le matriel biologique dangereux. Il peut tre mont sur un support mobile. Le volume de travail est compltement ferm par une enveloppe transparente en chlorure de polyvinyle (PVC) suspendue un cadre en acier. La pression lintrieur de lisolateur est maintenue une valeur infrieure celle de la pression atmosphrique. Ladmission de lair se fait travers un ltre HEPA et son extraction travers deux ltres du mme type placs en srie, ce qui vite davoir installer une gaine pour lvacuer lextrieur du btiment. On peut quiper lisolateur dun incubateur, dun microscope ou dautres types dobjets ou dinstruments tels que centrifugeuses, cages pour animaux, enceintes chauffantes, etc. Tous ces objets ou ces matriels sont introduits ou retirs par des orices destins, lun linstrumentation et lautre aux chantillons, sans risque pour la scurit microbiologique. Les manipulations se font laide de manchons dont
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11. EQUIPEMENTS DE SCURIT
Tableau 10. Equipements et instruments de scurit biologique

EQUIPEMENTS ET INSTRUMENTS RISQUES CARACTRISTIQUES DE SCURIT
Enceinte de scurit biologique Classe I
Arosols et projections
Classe II
Classe III
Flux entrant minimal (vitesse frontale) au niveau de louverture frontale. Bonne ltration de lair vacu Pas de protection du produit Flux entrant minimal (vitesse frontale). Bonne ltration de lair vacu Assure la protection du produit Connement haute scurit Assure la protection du produit si ux laminaire Connement haute scurit
Isolateur dpression Arosols et projections en feuille de plastique souple Ecran anti-projections Pipetteurs Projections de produits chimiques Risques dus au pipettage la bouche : ingestion de germes pathognes, inhalation des arosols produits par la succion exerce sur la pipette, expulsion de liquide ou chute de gouttes, contamination de lextrmit de la pipette servant aspirer Projections provenant des anses de transfert
Constitue un cran entre loprateur et la manipulation Facilit dutilisation Pas de contamination de lextrmit pour laspiration, protection du pipetteur, de lutilisateur et du circuit de vide (conduites daspiration) Strilisation possible Pas de fuite par la pointe de la pipette Protection par un tube ferm une extrmit en verre ou en cramique,chauff au gaz ou llectricit Jetables, chauffage inutile Construction tanche, munie dun couvercle Rsistance lusure Autoclavables
Anse micro-incinrateurs, Anses jetables
Rcipients tanches Arosols, produits rpandus par pour recueillir et suite de renversements ou de transporter le matriel fuites infectieux striliser dans une installation approprie de ltablissement
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EQUIPEMENTS ET INSTRUMENTS
RISQUES
CARACTRISTIQUES DE SCURIT
Conteneurs pour objets pointus ou tranchants Conteneurs de transport dun laboratoire ou dun tablissemement lautre Autoclaves, manuels ou automatiques Flacons bouchon viss Protection du circuit de vide ou conduites daspiration
Piqres et coupures
Autoclavables Anti-piques, robustes Robustes Conteneurs primaires et secondaires tanches leau (antifuites) Matriau absorbant retenant les liquides Modles agrs Efcacit de la strilisation par la chaleur Connement efcace Un ltre cartouche arrte les arosols (diamtre des particules 0,45 mm) La ole trop-plein contient un dsinfectant appropri. On peut utiliser un otteur en caoutchouc pour couper automatiquement la dpression quand la ole est pleine Le systme peut tre entirement autoclav
Libration de micro-organismes dans lenvironnement
Objets et matriel contamins (scuriss en vue de leur limination ou rutilisation) Arosols et produits rpandus Contamination du circuit de vide ou des conduites daspiration par des arosols ou le dbordement de liquides
lextrmit est munie de gants jetables. Lisolateur est quip dun manomtre pour la surveillance de la pression lintrieur de lenveloppe plastique. Les isolateurs en lm souple sont utiliss pour manipuler les micro-organismes haut risque (groupes de risque 3 ou 4) sur le terrain, dans des conditions o il serait impossible ou imprudent dinstaller et dutiliser des enceintes de scurit biologique classiques. Pipetteurs Le pipettage doit toujours se faire au moyen de pipetteurs. Le pipettage la bouche est absolument interdit. On ne saurait trop insister sur limportance des dispositifs de pipettage. Les accidents les plus courants lis au pipettage sont dus au pipettage la bouche. Laspiration par la bouche et lingestion de produits dangereux sont responsables dun grand nombre dinfections et daccidents de laboratoire.
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Des germes pathognes peuvent galement tre vhiculs jusqu la bouche si le doigt avec lequel on ferme la pipette a t contamin. Le pipettage la bouche prsente un autre danger beaucoup moins connu, savoir linhalation des arosols qui se forment pendant laspiration. Le cotonnage des pipettes nassure pas une ltration microbiologique satisfaisante, en pression positive ou ngative, et des particules peuvent traverser le coton. Si celui-ci est trs serr, on risque daspirer fortement, et en consquence, daspirer le coton, larosol et mme le liquide. Lutilisation de pipetteurs permet donc dviter lingestion de germes pathognes. Des arosols peuvent galement se former lorsquune goutte de liquide tombe sur un plan de travail, lorsquon mlange une culture par aspirations et refoulements successifs, et lorsquon soufe pour vacuer la dernire goutte de la pipette. On peut viter linhalation des arosols qui se forment invitablement au cours du pipettage en travaillant dans une enceinte de scurit biologique. Les pipetteurs seront choisis avec soin. Ils seront conus et utiliss de manire ne pas crer de risque supplmentaire dinfection et ils doivent pouvoir tre nettoys et striliss facilement. Des pipettes dont la pointe est munie dun embout (antiarosols) doivent tre utilises pour la manipulation des micro-organismes et des cultures cellulaires. Les pipettes dont lextrmit daspiration est brche ou fle ne seront pas utilises car elles endommagent le joint tanche des dispositifs de pipettage et comportent donc un risque. Homogniseurs, agitateurs secoueurs, mlangeurs et gnrateurs dultrasons Les homogniseurs domestiques (utiliss la cuisine) ne sont pas hermtiques et librent des arosols. On utilisera exclusivement des homogniseurs conus pour les laboratoires.Ils sont construits de manire rduire ou empcher la libration darosols. Les broyeurs, que lon peut utiliser maintenant pour traiter de petits ou de gros volumes de matriel biologique, peuvent galement entraner la formation darosols. Lorsque des homogniseurs sont utiliss pour traiter du matriel contenant des micro-organismes du groupe de risque 3, ils doivent toujours tre chargs et rouverts dans une enceinte de scurit biologique. Les gnrateurs dultrasons peuvent entraner la formation darosols. Ils seront utiliss dans des enceintes de scurit biologique ou couverts par un cran protecteur pendant lutilisation. Lcran et lextrieur du gnrateur dultrasons seront dcontamins aprs usage. Anses usage unique Lavantage des anses usage unique tient ce quelles nont pas besoin dtre passes la amme et quelles peuvent donc tre utilises dans des enceintes de scurit biologique o les becs Bunsen et les micro-incinrateurs perturberaient le ux laminaire. Ces anses seront mises tremper dans un dsinfectant aprs usage et limines selon la procdure applicable aux dchets contamins (voir chapitre 3).
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Micro-incinrateurs Les micro-incinrateurs fonctionnant au gaz ou llectricit comportent une protection en verre au borosilicate ou en cramique qui rduit les projections et la dispersion du matriel infect lorsque les anses sont strilises. Ils peuvent cependant perturber le ux laminaire et doivent donc tre disposs vers le fond du plan de travail de lenceinte. Equipements et vtements de protection individuelle Les quipements et vtements destins la protection individuelle constituent une barrire matrielle qui rduit le risque dexposition aux arosols, aux claboussures ou encore le risque dinoculation accidentelle. Ces quipements ou vtements doivent tre ports pour travailler au laboratoire. Avant de quitter le laboratoire, il faut les ter puis se laver les mains. Le tableau 11 dcrit succintement quelques types dquipement de protection utiliss au laboratoire et les risques contre lesquels ils protgent.
Blouses, sarraus, combinaisons et tabliers de laboratoire
Il est prfrable que les blouses de laboratoire soient entirement boutonnes. Cela tant, les sarraus ou les combinaisons manches longues boutonnes sur larrire protgent mieux que les blouses de laboratoire et ont la prfrence dans les laboratoires de microbiologie ou pour travailler avec une enceinte de scurit biologique. Si ncessaire, on peut porter un tablier sur la blouse ou le sarrau pour mieux se protger en cas de renversement de produits chimiques ou de matriel biologique comme le sang ou les milieux de culture liquides. Ltablissement doit disposer dun service de blanchisserie sur place ou proximit. Les blouses de laboratoires, sarraus, combinaisons ou tabliers ne doivent pas tre ports hors des locaux du laboratoire.
Lunettes coques, lunettes de scurit et crans faciaux
Le choix dun quipement destin protger les yeux et la face contre les claboussures, les projections ou les chocs dpend de la nature des activits auxquelles se livre loprateur. Il existe des lunettes de vue ou des lunettes non correctrices en matriau incassable dont la monture est spcialement conue pour que les verres soient monts par lavant et qui sont incurves ou dotes dcrans latraux (lunettes de scurit). Ces lunettes de scurit ne protgent pas trs bien contre les claboussures ou projections, mme quand elles sont dotes dcrans latraux. Pour se protger contre les projections et les chocs, il faut porter des lunettes coques, le cas chant par dessus les lunettes de vue ou les lentilles de contact (lesquelles ne protgent pas des risques chimiques ou biologiques). Les crans faciaux (visires) sont en plastique incassable, ils sadaptent sur le visage et sont maintenus au moyen de sangles ou dun serre-tte. Les lunettes coques et les lunettes de scurit ne doivent pas tre portes hors des locaux du laboratoire.
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Tableau 11. Les quipements de protection individuelle

EQUIPEMENT RISQUE VIT CARACTRISTIQUES DE SCURIT
Blouses et sarraus de laboratoire Tabliers de plastique Chaussures Lunettes coques
Contamination des vtements Contamination des vtements Chocs et claboussures Chocs et claboussures
Boutonnage par larrire Couvrent les vtements de ville Etanches leau Bout ferm Verres antichocs (doivent tre correcteurs ou ports par dessus les lunettes de vue) Verres antichocs (doivent tre correcteurs) Ecrans latraux Protgent entirement le visage Senlvent facilement en cas daccident Diffrents modles : jetable usage unique; avec masque complet ou demi-masque et cartouche dpuration de lair; adduction dair ltr pression positive intermittente; adduction dair Jetables, certis de qualit microbiologique, en PVC, latex ou polyacrylonitrile Protection des mains A mailles
Lunettes de scurit
Chocs
Ecrans faciaux
Chocs et claboussures
Appareils et masques respiratoires
Inhalation darosols
Gants
Contact direct avec des microorganismes Coupures
Appareils respiratoires
Une protection respiratoire peut se rvler ncessaire lorsquon procde des manipulations particulirement dangereuses (par ex. le nettoyage dune surface o du matriel infectieux a t rpandu). Le choix de tel ou tel appareil dpend de la nature du danger. Certains de ces appareils sont munis de ltres interchangeables pour la protection contre les gaz, les vapeurs, les particules et les micro-organismes. Il est impratif dutiliser un ltre adapt au type dappareil respiratoire utilis. Pour une protection optimale, il faut veiller bien adapter le masque la face de lutilisateur et procder un essai. Il existe galement des appareils respiratoires totalement
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autonomes aliments en air par un systme intgr; ces dispositifs assurent une protection totale. Pour choisir lappareil qui convient, il est prudent de sadresser un spcialiste quali, par exemple un ingnieur hygine et scurit. Les masques chirurgicaux nont dautre but que de protger le patient et ne confrent aucune protection respiratoire ceux qui les portent. Il existe des appareils respiratoires jetables usage unique (ISO 13.340.30) qui sont conus pour protger contre lexposition aux agents biologiques. Les appareils respiratoires ne doivent pas tre ports hors des locaux du laboratoire.
Gants
Les mains peuvent tre contamines au cours de certaines manipulations. Elles sont galement exposes aux coupures et aux piqres. Les gants de type chirurgical certis de qualit microbiologique, en latex, PVC ou polyacrylonitrile sont trs utiliss pour les travaux de laboratoire en gnral, comme pour la manipulation dagents infectieux ou de sang et de liquides organiques contamins. On fait galement usage de gants rutilisables, mais il faut veiller les ter correctement et les laver, nettoyer et dsinfecter scrupuleusement. Lorsquon a manipul du matriel infectieux, travaill avec une enceinte de scurit biologique ou quon sapprter quitter le laboratoire, il faut ter les gants et se laver soigneusement les mains. Les gants jetables qui ont t utiliss doivent tre limins avec les dchets infectieux. Des cas de ractions allergiques telles que dermatites ou hypersensibilisation immdiate ont t observs chez certains personnels de laboratoire ou dautres travailleurs qui avaient port des gants en latex, notamment des gants poudrs. On devrait pouvoir disposer dautres gants que des gants poudrs en latex. Lorsquil y a risque de coupure, comme cela peut tre le cas loccasion dune autopsie, il faut porter des gants en mailles dacier inoxydable. Il est toutefois noter que ces gants protgent contre les coupures ou les entailles mais pas contre les piqres. Les gants ne doivent pas tre ports hors des locaux du laboratoire. Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de se reporter aux rfrences 12, 17 et 18.
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PARTIE IV
Bonnes techniques microbiologiques
12. Techniques de laboratoire
Lerreur humaine, une mauvaise technique et le mauvais usage des quipements et de lappareillage sont lorigine de la plupart des lsions et infections attribuables aux activits exerces dans un laboratoire. On trouvera dans le prsent chapitre un recueil de techniques destines viter ou rduire au minimum les problmes de cette nature qui surviennent le plus frquemment. Rgles de scurit pour la manipulation des chantillons au laboratoire Si le prlvement, le transport et la rception des chantillons au laboratoire ne sont pas effectus correctement, il existe un risque dinfection pour le personnel.
Conteneurs chantillons
Les conteneurs chantillons peuvent tre en verre ou de prfrence en matire plastique. Ils doivent tre solides et ne pas fuir lorsque le bouchon ou le capuchon est plac correctement. Lextrieur du conteneur doit tre propre, sans trace de matriel. Les conteneurs doivent tre correctement tiquets pour faciliter lidentication. Les formulaires de demandes dchantillons ou les ches techniques ne doivent pas servir emballer les conteneurs, mais seront placs dans des enveloppes spares, de prfrence rsistantes leau.
Transport des chantillons lintrieur de ltablissement
Pour viter quil y ait des fuites ou du matriel rpandu accidentellement, on utilisera des conteneurs secondaires, des botes par exemple, munis de portoirs de faon que le rcipient contenant lchantillon ne se renverse pas. Les conteneurs secondaires peuvent tre en mtal ou en matire plastique, mais doivent tre autoclavables ou rsistants aux dsinfectants chimiques et le couvercle doit de prfrence tre muni dun joint dtanchit. Ils seront rgulirement dcontamins.
Rception des chantillons
Les laboratoires qui reoivent un grand nombre dchantillons devront rserver une pice ou une zone particulire cet effet.
Ouverture des colis
Le personnel qui reoit et dfait lemballage des chantillons doit connatre les risques quil court et on doit lui avoir appris respecter les prcautions dusage (2),
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notamment en prsence dun conteneur bris ou qui fuit. Les conteneurs primaires doivent tre ouverts dans une enceinte de scurit biologique. Le personnel doit avoir des dsinfectants sa disposition. Utilisation des pipettes et des dispositifs de pipettage 1. On utilisera toujours un dispositif de pipettage (pipetteur, propipette). Le pipettage la bouche doit tre interdit. 2. Toutes les pipettes doivent tre cotonnes pour rduire la contamination du dispositif. 3. Ne jamais soufer dans une pipette place dans un liquide contenant des agents infectieux. 4. Les matriels infectieux ne seront jamais mlangs par aspirations et refoulements successifs. 5. Ne pas soufer dans les pipettes pour en chasser le liquide. 6. Les pipettes deux traits sont prfrables aux autres, puisquon nest pas oblig de soufer pour les vider. 7. Les pipettes contamines seront compltement immerges dans un dsinfectant appropri plac dans un rcipient incassable. On les laissera tremper sufsamment longtemps avant de les liminer. 8. Un rcipient pour les pipettes usages sera plac lintrieur de lenceinte de scurit biologique (et non lextrieur). 9. On ne doit pas utiliser de seringue munie dune aiguille hypodermique pour pipetter. 10. Il existe des dispositifs qui permettent douvrir les acons capsuls au moyen dune pipette, ce qui vite lutilisation des aiguilles hypodermiques et des seringues. 11. Pour viter la dispersion du matriel infectieux qui tomberait accidentellement de la pipette, on placera sur le plan de travail un matriau absorbant qui sera ensuite limin selon la procdure applicable aux dchets infectieux. Comment viter la dissmination de matriel infectieux 1. Pour viter que les anses de transfert ne rpandent prmaturment leur contenu, il faut que lanneau ait un diamtre de 2 3 mm et quil soit entirement ferm. Le manche ne doit pas dpasser 6 cm de long pour rduire le plus possible les vibrations. 2. On vitera le risque de projections de matriel infectieux par la amme nue dun bec Bunsen en utilisant un micro-incinrateur pour striliser les anses de transfert. Toutefois, il est prfrable dutiliser des anses usage unique qui nont pas besoin dtre restrilises. 3. En schant les chantillons dexpectorations, on sefforcera dviter la formation darosols. 4. Les chantillons et les cultures destins tre autoclavs ou limins seront placs dans des conteneurs tanches, par exemple des sacs poubelle de laboratoire. Il faut en fermer lextrmit avec du ruban adhsif autoclavable avant de les jeter dans les poubelles.
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12. TECHNIQUES DE LABORATOIRE
5. Les zones de travail doivent tre dcontamines avec un dsinfectant appropri la n de chaque priode de travail. Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de consulter la rfrence (12). Utilisation des enceintes de scurit biologique 1. Lutilisation et les contraintes des enceintes de scurit biologique seront expliques tous les utilisateurs potentiels (voir chapitre 10), en se rfrant aux normes nationales et la documentation approprie. Des protocoles crits, des manuels dhygine et scurit ou des manuels dutilisation seront remis au personnel. Il doit tre clairement expliqu, en particulier, que lenceinte ne protge pas loprateur contre les claboussures, la casse ou les erreurs de manipulation. 2. Lenceinte ne doit pas tre utilise si elle ne fonctionne pas correctement. 3. Le panneau dobservation vitr ne doit pas tre ouvert lorsque lenceinte est en fonctionnement. 4. Pour travailler, on conservera dans lenceinte le moins possible dappareils et de matriel. Il ne faut pas bloquer la circulation de lair dans le volume ou la gaine arrire de lenceinte. 5. Il ne faut pas utiliser de becs Bunsen dans lenceinte. En effet, la chaleur dgage dvierait le ux laminaire et pourrait endommager les ltres. On peut se servir dun micro-incinrateur mais les anses jetables striles sont prfrables. 6. La totalit des oprations seront ralises au centre ou dans la partie arrire du plan de travail et devront tre visibles par le panneau dobservation. 7. Il faut viter quil y trop de passages derrire loprateur. 8. Loprateur ne doit pas perturber le ux laminaire en passant les bras dans lenceinte ou en les retirant plusieurs reprises. 9. Il ne faut pas bloquer les grilles en entassant des notes, des pipettes ou dautres objets car cela a pour effet de perturber la circulation de lair et risque dexposer loprateur et le matriel une contamination. 10. Une fois la manipulation acheve et la n de la journe de travail, il faut dsinfecter la surface de lenceinte avec un produit appropri. 11. Le ventilateur de lenceinte doit continuer fonctionner au moins 5 minutes aprs la n de la manipulation. 12. Il ne faut jamais introduire de paperasse dans une enceinte de scurit biologique. Des informations complmentaires sur les enceintes de scurit biologique sont donnes au chapitre 10. Comment viter lingestion de matriel infectieux et le contact avec la peau et les yeux 1. Les particules et les gouttelettes de grande taille (>5 mm) formes pendant les manipulations de microbiologie se dposent rapidement sur la paillasse et les
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mains de loprateur, aussi celui-ci doit-il porter des gants jetables et viter de porter ses mains son visage, sa bouche et ses yeux. 2. Il ne faut pas consommer ou conserver de la nourriture ou des boissons dans le laboratoire. 3. Il ne faut pas mettre dans sa bouche des objets tels que crayons ou stylos ni mcher du chewing-gum lorsquon se trouve dans le laboratoire. 4. Il ne faut pas se maquiller dans le laboratoire. 5. Il convient dutiliser un dispositif pour se protger le visage, la bouche et les yeux (cran facial ou autre) pendant toute opration risquant de donner lieu des projections de matriel infectieux. Comment viter linoculation accidentelle de matriel infectieux 1. Si lon effectue les diffrentes manipulations et oprations avec le soin voulu, on peut viter de sinoculer accidentellement du matriel infectieux avec des dbris de verre. De toute faon, il est prfrable de remplacer le verre par du plastique lorsque cela est possible. 2. Un accident avec des aiguilles ou seringues hypodermiques, des pipettes Pasteur en verre ou du verre bris peut entraner linoculation de matriel infectieux. 3. Les piqres daiguille peuvent tre vites : a) en limitant au minimum ncessaire lutilisation des seringues et des aiguilles (il existe des dispositifs simples qui permettent douvrir les acons capsuls et dutiliser alors une pipette plutt quune seringue); b) en utilisant des dispositifs spciaux de protection lorsque lemploi dune seringue est ncessaire. 4. Il ne faut jamais remettre lembout sur laiguille. Le matriel usage unique doit tre jet dans des conteneurs spciaux imperforables (anti-piques) munis dun couvercle. 5. On remplacera les pipettes Pasteur en verre par leur quivalent en matire plastique. Sparation du srum 1. Cette opration ne sera effectue que par un personnel spcialement form. 2. Il faut porter des gants ainsi quun dispositif pour protger les yeux et les muqueuses. 3. Les projections et les arosols ne peuvent tre vits ou rduits qu au moyen dune bonne technique. Le sang et le srum seront pipetts avec soin et non verss dun rcipient dans lautre. Le pipettage la bouche est interdit. 4. Aprs usage, les pipettes seront plonges compltement dans un bain dsinfectant appropri. Il faut les laisser tremper pendant une dure sufsante avant limination ou lavage et strilisation en vue de leur rutilisation. 5. Les tubes chantillons contenant des caillots de sang ou autre et destins tre limins seront rebouchs avec leur capuchon et placs dans un rcipient tanche appropri dans lequel ils seront autoclavs et incinrs. 6. Il faut disposer de dsinfectants appropris pour nettoyer les claboussures ou les liquides rpandus (voir chapitre 14).
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Utilisation des centrifugeuses 1. Le bon fonctionnement mcanique des centrifugeuses de laboratoire est un lment indispensable de la scurit microbiologique. 2. La centrifugeuse doit tre utilise conformment aux instructions du fabricant. 3. La centrifugeuse sera place une hauteur telle que loprateur puisse voir lintrieur de la cuve pour disposer correctement les godets (ou les pots ou nacelles selon le cas) sur les tourillons. 4. Les tubes centrifuger ainsi que les rcipients contenant les chantillons devront tre en verre pais ou de prfrence en matire plastique et ils devront tre inspects avant usage la recherche de dfauts ventuels. 5. Il faut que les tubes centrifuger ou les rcipients contenant les chantillons soient bien ferms (si possible avec un bouchon viss). 6. Les godets doivent tre remplis, quilibrs, ferms et ouverts dans une enceinte de scurit biologique. 7. Les pots (godets ou nacelles, etc.) xs sur les tourillons seront apparis daprs leur poids et correctement quilibrs une fois les tubes en place. 8. Le volume laisser libre entre la surface du liquide et le bord du tube centrifuger doit tre indiqu dans les instructions du fabricant. 9. Pour lquilibrage des pots vides, on utilisera de leau distille ou de lalcool (propanol 70 %). Les soluts salins ou les solutions dhypochlorite sont viter car ils corrodent les mtaux. 10. Des pots centrifuger fermant hermtiquement (pots de scurit) doivent tre utiliss pour les micro-organismes appartenant aux groupes de risque 3 et 4. 11. Si lon utilise des rotors angulaires, il faut veiller ce que les tubes ne soient pas trop remplis pour viter le risque de fuite. 12. Lintrieur de la cuve de la centrifugeuse sera inspect tous les jours la recherche de taches ou de souillures au niveau du rotor. En prsence de salissures manifestes, les protocoles de centrifugation seront rexamins. 13. Les godets (pots ou nacelles) ainsi que le rotor seront inspects chaque jour la recherche de signes de corrosion ou de ssures, si nes soient-elles. 14. Les godets (pots ou nacelles), le rotor et la cuve de la centrifugeuse seront dcontamins aprs chaque usage. 15. Aprs utilisation, les pots seront retourns et conservs ainsi pour que le liquide dquilibrage puisse scher. 16. Des particules infectieuses aroportes sont parfois jectes la centrifugation. Ces particules se dplacent une vitesse trop leve pour pouvoir tre captes par le courant dair si la centrifugeuse est place dans une enceinte de scurit biologique traditionnelle de classe I ou II ouverture frontale. En plaant la centrifugeuse dans une enceinte de classe III, on vite la trop grande dispersion des arosols mis par lappareil. Toutefois, une bonne technique de centrifugation et lutilisation de tubes soigneusement ferms offrent une protection satisfaisante contre les arosols infectieux et les particules en suspension.
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Utilisation des homogniseurs, des agitateurs secoueurs, des mlangeurs et des gnrateurs dultrasons 1. Les homogniseurs domestiques (utiliss la cuisine) ne seront pas utiliss au laboratoire car ils peuvent fuir ou donner lieu la formation darosols. Les homogniseurs, mlangeurs et broyeurs de laboratoire prsentent moins de danger. 2. Les couvercles, bols, oles ou acons doivent tre en bon tat, sans dfaut ni dformation. Le couvercle doit tre parfaitement adapt et le joint en bon tat. 3. Lorsque les homogniseurs, agitateurs ou gnrateurs dultrasons sont en marche, la pression monte lintrieur du bol. Des arosols contenant des germes infectieux risquent alors de schapper par linterstice entre le couvercle et le rcipient. Les bols en plastique et particulirement en polyttrauorthylne (PTFE) sont recommands car le verre peut se briser, librant le matriel infectieux et risquant de blesser loprateur. 4. Pendant lutilisation, ces appareils doivent tre couverts dun botier transparent robuste en matire plastique qui sera dsinfect aprs usage. Si possible, on fera fonctionner lappareil recouvert de son botier en plastique lintrieur dune enceinte de scurit biologique. 5. Lopration termine, le conteneur sera ouvert dans une enceinte de scurit biologique. 6. Une protection auditive doit tre fournie au personnel qui utilise des gnrateurs dultrasons. Utilisation des broyeurs de tissus 1. Les broyeurs en verre seront envelopps dans un tampon de matriau absorbant et tenus par un oprateur gant. Les broyeurs en matire plastique (PTFE) sont plus srs. 2. Les broyeurs de tissus seront utiliss et ouverts dans une enceinte de scurit biologique. Entretien et utilisation des rfrigrateurs et conglateurs 1. Les rfrigrateurs, les conglateurs et les enceintes dioxyde de carbone solide (carboglace) seront dgivrs et nettoys priodiquement et les ampoules, les tubes, etc. casss pendant la conservation, retirs. On portera une protection faciale et des gants en caoutchouc rsistants pour effectuer ce travail. Aprs nettoyage, les surfaces intrieures de lenceinte seront dsinfectes. 2. Tous les rcipients conservs dans les rfrigrateurs, etc. doivent tre clairement tiquets, en indiquant le nom scientique du contenu, la date de stockage et le nom de la personne qui les a stocks. Le matriel ancien ou sans tiquette sera autoclav et limin. 3. Il faut tenir un inventaire du contenu des conglateurs.
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4. Les solutions inammables ne doivent pas tre conserves dans un rfrigrateur qui nest pas antidagrant. Une tiquette de mise en garde sera appose cet effet sur la porte des rfrigrateurs. Ouverture des ampoules contenant du matriel infectieux lyophilis On devra prendre des prcautions lorsquon ouvre des ampoules de matriel lyophilis car lentre brutale de lair, alors que lintrieur de lampoule peut se trouver une pression infrieure, risque de disperser une partie de son contenu dans latmosphre. Les ampoules doivent toujours tre ouvertes dans une enceinte de scurit biologique. Il est recommand de procder comme suit : 1. Dcontaminer tout dabord lextrieur de lampoule. 2. Faire un trait de lime sur le tube peu prs au milieu du tampon de coton ou de cellulose, le cas chant. 3. Envelopper lampoule avec de louate imbibe dalcool pour se protger les mains avant de la briser au niveau du trait de lime. 4. Retirer dlicatement la partie suprieure et traiter comme du matriel contamin. 5. Si le tampon de coton est encore en place au-dessus du contenu de lampoule, le retirer avec des pinces striles. 6. Mettre le lyophilisat en suspension en versant lentement le liquide destin cet effet de manire viter la formation de mousse. Stockage des ampoules contenant du matriel infectieux Les ampoules contenant du matriel infectieux ne doivent jamais tre immerges dans de lazote liquide, les ampoules mal scelles ou ssures risquant de se briser ou dexploser la sortie. Sil est ncessaire datteindre des tempratures trs basses, les ampoules ne seront conserves que dans la phase gazeuse, au-dessus de lazote liquide. On peut aussi stocker le matriel infectieux dans des cryostats ou sur carboglace. Le personnel charg de retirer les ampoules cryoconserves doit se protger les yeux et les mains. La surface extrieure des ampoules cryoconserves sera dsinfecte lorsquelles seront retires aprs stockage. Prcautions dusage pour manipuler du sang et autres liquides biologiques, des tissus et des excreta Les prcautions dusage indiques ci-dessous (qui incluent les prcautions universelles (19)) sont destines rduire le risque de transmission de microorganismes dont lorigine est connue ou inconnue (2).
Rcolte, tiquetage et transport dchantillons
1. Il faut observer ces prcautions dusage dans tous les cas et porter des gants quelle que soit la manipulation.
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2. Le prlvement de sang sur des malades ou des animaux doit tre effectu par du personnel expriment. 3. Pour les ponctions veineuses, on remplacera la seringue classique par un dispositif de scurit usage unique (tube prlvement sous vide) qui permet de prlever le sang directement dans un tube de transport ou de culture ferm qui met ensuite laiguille automatiquement hors dusage (par obturation ou rtraction). 4. Les tubes devront tre placs dans des conteneurs appropris pour tre transports jusquau laboratoire (voir le chapitre 15 pour les conditions observer durant le transport) ou dans les locaux mmes (se reporter la section du prsent chapitre consacre au transport des chantillons lintrieur de ltablissement). Les formulaires de demande devront tre placs dans des sacs ou des enveloppes spars rsistants leau. 5. Le personnel qui rceptionne les chantillons ne doit pas ouvrir ces sacs.
Ouverture des tubes chantillon et chantillonnage
1. Les tubes chantillon seront ouverts dans une enceinte de scurit biologique. 2. Le port de gants est obligatoire. Il est galement recommand de se protger les yeux et les muqueuses (au moyen de lunettes coque ou dun cran facial). 3. Les vtements protecteurs seront complts par un tablier en plastique. 4. Pour viter claboussures ou projections, le bouchon sera saisi avec une feuille de papier ou un morceau de gaze.
Verre et objets tranchants ou pointus
1. Dans la mesure du possible, le verre sera remplac par du plastique. Seul le verre de qualit laboratoire (au borosilicate) devra tre utilis et le matriel brch ou fl sera jet. 2. Il ne faut pas utiliser des aiguilles hypodermiques en guise de pipettes (voir galement, dans le prsent chapitre, la section intitule: Comment viter linoculation accidentelle de matriel infectieux).
Frottis/gouttes paisses
La xation et la coloration des chantillons de sang, dexpectorations et de selles aux ns dexamen microscopique ne tuent pas obligatoirement tous les micro-organismes ou les virus quils contiennent. Il faut donc manipuler les frottis et les gouttes paisses avec des pinces, les conserver de manire approprie et les dcontaminer ou les autoclaver avant limination.
Appareils automatiques (gnrateurs dultrasons, agitateurs vortex)
1. Il faut utiliser des appareils conns pour viter la dissmination de gouttelettes ou darosols. 2. Les efuents seront recueillis dans des rcipients ferms pour autoclavage ultrieur et limination.
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3. Lappareillage doit tre dsinfect lissue de chaque sance de travail, en suivant les instructions du fabricant.
Tissus
1. Il faut utiliser des xateurs formols. 2. Les coupes la conglation doivent tre vites. Si ncessaire, on protgera le cryostat au moyen dun cran et loprateur devra porter un cran facial. Pour la dcontamination, on remontera la temprature de lappareil 20 C.
Dcontamination
Les hypochlorites et les dsinfectants puissants sont recommands pour la dcontamination. Une solution dhypochlorite frachement prpare doit contenir 1g/litre de chlore actif lorsquelle est destine lusage gnral et 5g/litre si elle est utilise pour nettoyer du sang rpandu. Le glutaraldhyde peut tre utilis pour dcontaminer les surfaces (voir chapitre 14). Prcautions prendre avec du matriel pouvant contenir des prions Les prions (galement dsigns sous le nom de virus lents ) sont associs aux encphalopathies spongiformes transmissibles (EST), en particulier la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ ; y compris la nouvelle variante), la maladie de GertsmannStrussler-Scheinker, linsomnie fatale familiale et au kuru chez lhomme, la tremblante chez les ovins et les caprins, lencphalopathie spongiforme bovine (ESB) chez les bovins et dautres encphalopathies transmissibles des cervids, de llan et du vison. Si lon connat des cas de transmission lhomme de la maladie de CreutzfeldtJakob, il semble quil ny ait pas de cas prouv dinfection acquise au laboratoire. La prudence impose nanmoins dobserver certaines prcautions lors de la manipulation de matriel biologique provenant de sujets humains ou danimaux potentiellement infects. Lorsquon envisage des travaux sur du matriel biologique susceptible de contenir un agent associ des EST, le choix du niveau de scurit biologique va dpendre de la nature de lagent et des chantillons tudier et il doit se faire en consultation avec les autorits nationales comptentes. Cest dans les tissus du systme nerveux central que lon trouve les concentrations les plus leves de prions. Les tudes effectues sur lanimal indiquent toutefois quil est probable que de fortes concentrations de prions soient galement prsentes dans la rate, le thymus, les ganglions lymphatiques et les poumons. Selon des travaux rcents, des prions prsents dans les muscles squelettiques et dans les tissus musculaires de la langue pourraient galement constituer un risque de contamination (2023). Comme il est difcile dinactiver compltement les prions, il convient dinsister sur la ncessiter dutiliser autant que possible des instruments jetables et de prvoir un dispositif de protection galement jetable pour couvrir le plan de travail de lenceinte de scurit biologique.
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La principale prcaution observer par loprateur consiste viter lingestion de matriel contamin ainsi que toute piqre cutane. Ces agents ntant pas dtruits par les procds habituels de dsinfection et de strilisation utiliss au laboratoire, il convient de prendre les prcautions complmentaires suivantes: 1. Il est vivement recommand dutiliser des quipements spcialement ddis ces travaux, cest--dire qui ne sont pas partags avec les autres laboratoires de ltablissement. 2. Le port de vtements protecteurs (sarraus et tabliers) et de gants (gants dautopsie complts par des gants en mailles dacier) est obligatoire. 3. Il est vivement recommand dutiliser du matriel jetable en matire plastique, qui puisse tre trait et limin comme dchets secs. 4. Les appareils automatiques de traitement des tissus ne seront pas utiliss en raison des difcults de dsinfection. On utilisera la place des bocaux et des bchers. 5. Toutes les manipulations seront effectues dans une enceinte de scurit biologique. 6. On veillera scrupuleusement viter la formation darosols ainsi que les coupures et les piqres cutanes. 7. Les tissus xs au formol seront considrs comme encore infectieux, mme aprs xation prolonge. 8. Les chantillons histologiques contenant des prions sont largement inactivs par un traitement de 1h lacide formique 96 % (24), (25). 9. Les dchets rsultant de la manipulation y compris les gants, les sarraus et les tabliers jetables devront tre autoclavs dans un strilisateur vapeur pour charge poreuse, la temprature de 134137 C, soit pendant un seul cycle de 18 minutes, soit pendant six cycles successifs de 3 minutes chacun, puis incinrs. 10. Les instruments et le matriel non jetable, comme les gants mailles dacier par exemple, doivent tre rassembls pour tre dcontamins. 11. Les dchets liquides infectieux contamins par des prions doivent tre traits pendant 1 heure par une solution dhypochlorite de sodium contenant 20 g/litre de chlore actif (2 %) (concentration nale). 12. Les techniques bases sur la vaporisation de paraformaldhyde ne font pas baisser le titre des prions et ces derniers sont galement rsistants au rayonnement ultraviolet. Il faut nanmoins continuer dcontaminer les enceintes en utilisant les mthodes traditionnelles (par ex. fumigation au formaldhyde) pour inactiver les autres agents pathognes qui seraient prsents. 13. Les enceintes de scurit biologique et autres surfaces contamines par des prions peuvent tre dcontamines en leur appliquant pendant 1 heure une solution dhypochlorite de sodium 20 g/litre de chlore actif (2 %). 14. Les ltres particules de haute efcacit (ltres HEPA) doivent tre incinrs une temprature minimum de 1000 C une fois retirs. Avant dincinrer le ltre, il est recommand de procder comme suit:
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a. vaporiser une laque capillaire sur la face expose du ltre avant de lter; b. ensacher le ltre pour lenlever; c. retirer le ltre du volume du travail en veillant ce que la chambre de distribution et les gaines inaccessibles ne soient pas contamines. 15. Les instruments doivent tre immergs pendant une heure dans une solution dhypochlorite de sodium 20 g/litre de chlore actif (2 %), puis bien rincs leau avant lautoclavage. 16. Les instruments qui ne peuvent pas tre autoclavs peuvent tre nettoys en les trempant plusieurs reprises pendant 1 heure dans une solution dhypochlorite de sodium 20 g/litre de chlore actif (2 %). Un rinage soigneux est ensuite ncessaire pour liminer les rsidus dhypochlorite. Pour de plus amples informations sur la conduite tenir avec les agents non conventionnels, le lecteur est pri de se reporter aux rfrences 12, 26 et 27.
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13. Plans durgence et conduite tenir en cas durgence

Tous les laboratoires qui travaillent sur des micro-organismes infectieux doivent instituer les mesures de scurit quexigent les risques prsents par les germes et les animaux manipuls. Chaque fois quun tablissement manipule ou conserve des micro-organismes des groupes de risque 3 ou 4 (laboratoire de base scurit biologique niveau 2, laboratoire de connement scurit biologique niveau 3 et laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4), il est indispensable dtablir par crit un plan durgence pour faire face au accidents qui pourraient se produire dans le laboratoire ou lanimalerie. Les autorits sanitaires nationales ou locales doivent tre associes llaboration de ce plan de prparation aux situations durgence. Plan durgence Le plan doit prvoir la conduite tenir dans diffrentes situations : 1. Mesures de scurit en cas de catastrophe, naturelle ou autre : incendie, inondation, sisme ou explosion par exemple. 2. Evaluation du risque biologique. 3. Mesures prendre dexposition accidentelle et dcontamination. 4. Evacuation durgence du personnel et des animaux. 5. Traitement mdical durgence des personnes exposes et des blesss. 6. Surveillance mdicale des personnes exposes. 7. Prise en charge clinique des personnes exposes. 8. Enqute pidmiologique. 9. Suivi de la situation aprs laccident. Lors de llaboration de ce plan, il faudra envisager dinclure les points suivants : 1. Identication des micro-organismes haut risque. 2. Localisation des zones haut risque telles que laboratoires, aires de stockage, animaleries. 3. Idencation du personnel et des populations risque. 4. Identication des responsables et de leurs responsabilits : dlgu la scurit biologique, quipe de scurit, autorits sanitaires locales, cliniciens, microbiologistes, vtrinaires, pidmiologistes, pompiers et police. 5. Liste des moyens disponibles pour assurer le traitement et lisolement des personnes exposes ou contamines.
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13. PLANS DURGENCE ET CONDUITE TENIR EN CAS DURGENCE
6. Transport des personnes exposes ou contamines. 7. Liste des sources dimmunsrums, de vaccins, de mdicaments, de matriel et de fournitures spcialiss. 8. Approvisionnement en quipements et matriel de secours, par exemple vtements protecteurs, dsinfectants, matriel et fournitures pour la dcontamination. Conduite tenir en cas durgence dans un laboratoire de microbiologie
Accidents par inoculation, coupure et rosion
La personne accidente doit enlever ses vtements de protection, laver ses mains ainsi que la ou les zone(s) atteinte(s), appliquer un dsinfectant cutan appropri et si ncessaire consulter un mdecin. Un rapport indiquant la cause de la lsion et la nature du micro-organisme en cause sera adress qui de droit et un dossier mdical complet sera tabli de manire approprie.
Accidents par ingestion de matriel potentiellement infectieux
Il faut ter ses vtements protecteurs et consulter un mdecin. Un rapport indiquant la nature du matriel ingr et les circonstances de laccident sera adress qui de droit et un dossier mdical complet sera tabli de manire approprie.
Formation darosols potentiellement dangereux (hors dune enceinte de scurit)
Tout le personnel devra immdiatement vacuer la zone touche et toute personne expose devra tre adresse un mdecin. Le chef de laboratoire et le dlgu la scurit biologique seront immdiatement informs de lincident. Personne ne doit entrer dans la pice pendant une dure sufsante (par ex. 1 h) pour permettre lvacuation de larosol et le dpt des particules lourdes. Si le laboratoire nest pas dot dun systme central de ventilation, la rintgration des locaux sera retarde (par ex. de 24 h). Des panneaux doivent tre apposs pour indiquer que lentre est interdite. Au bout dune priode de temps approprie, on procdera la dcontamination sous la surveillance du dlgu la scurit biologique. Cette opration doit se faire en portant des vtements protecteurs et une protection respiratoire appropris.
Rcipients casss et substances infectieuses rpandues
Les rcipients casss contamins par des substances infectieuses et les substances infectieuses rpandues accidentellement devront tre recouverts dun linge ou de papier absorbant sur lesquels on versera un dsinfectant quon laissera reposer pendant une dure approprie. Le linge ou le papier absorbant et le matriel cass pourront ensuite tre enlevs; les morceaux de verre seront manipuls avec une pince. On passera ensuite une serpillire imprgne de dsinfectant sur la zone contamine. Si lon utilise une pelle pour ramasser les morceaux de verre, il faudra la passer lautoclave ou la tremper dans un bain dsinfectant efcace. Les linges, le papier et les serpillires utilises pour le nettoyage devront tre jets dans une poubelle pour dchets contamins. Toutes ces oprations doivent tre effectues avec des gants.
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Si des documents, formulaires ou autres imprims ou notes sont contamins, ils seront recopis et les originaux jets dans une poubelle pour dchets contamins.
Bris de tubes contenant du matriel potentiellement infectieux dans les centrifugeuses dpourvues de pots tanches
Si les tubes sont casss ou prsums casss pendant que la centrifugeuse tourne, arrter le moteur et attendre 30 minutes avant douvrir pour laisser reposer les suspensions. Si laccident est dcouvert aprs louverture de la centrifugeuse, refermer immdiatement le capot et attendre encore une trentaine de minutes. Dans les deux cas, il faut prvenir le dlgu la scurit biologique. Des gants rsistants (par ex. en caoutchouc pais) couverts si ncessaires avec des gants usage unique, doivent tre ports pendant la totalit des oprations suivantes. Pour retirer les dbris de verre, on utilisera des pinces, ventuellement garnies de coton. Les tubes casss, les morceaux de verre, les pots ou nacelles centrifuger, les tourillons et le rotor seront placs dans un bain dsinfectant non corrosif dont lefcacit contre les germes concerns est connue (voir chapitre 14). Les tubes intacts et bouchs peuvent tre placs dans un autre rcipient contenant un dsinfectant et rcuprs ultrieurement. La cuve de la centrifugeuse sera nettoye avec le mme dsinfectant, convenablement dilu, aprs quoi on la nettoiera une seconde fois, on la rincera leau et on la schera. Tout le matriel utilis pour le nettoyage sera considr comme dchets contamins.
Bris de tubes lintrieur de pots ou de nacelles centrifuger tanches (de scurit)
Tous les pots ou nacelles tanches doivent chargs et dchargs dans une enceinte de scurit biologique. En cas de bris prsum dans un pot hermtique, il faudra desserrer de bouchon de scurit et passer le pot ou la nacelle lautoclave. On peut aussi dsinfecter le pot ou la nacelle de scurit au moyen dun dsinfectant chimique.
Incendies et catastrophes naturelles
Les services de secours, pompiers notamment, doivent participer llaboration des plans de prparation aux situations durgence. Ils doivent connatre lavance les pices o se trouve du matriel potentiellement infectieux. Il y avantage ce que le personnel de ces services visite le laboratoire pour prendre connaissance de son agencement et de son contenu. Aprs une catastrophe naturelle, les services de secours locaux ou nationaux doivent tre informs des dangers potentiels qui existent lintrieur ou au voisinage des btiments. Ils ne pourront y pntrer quaccompagns dun membre expriment du personnel. Le matriel infectieux devra tre recueilli dans des conteneurs tanches ou des sacs jetables en matriau rsistant. Il appartient lquipe de scurit de
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13. PLANS DURGENCE ET CONDUITE TENIR EN CAS DURGENCE
dterminer en fonction de la rglementation locale ce qui peut tre rcupr et ce qui doit tre jet.
Services de secours : qui sadresser ?
Les numros de tlphone et adresses suivantes seront placs bien en vidence dans les locaux de ltablissement : 1. Nom, adresse et plan daccs de ltablissement ou du laboratoire (pas ncessairement connus par la personne qui appelle ou le service appel). 2. Directeur de ltablissement ou du laboratoire. 3. Chef de laboratoire. 4. Dlgu la scurit biologique. 5. Service incendie/pompiers 6. Hpitaux, ambulances, personnel mdical (nom des divers centres de soins, cliniques, services ou du personnel mdical, si possible). 7. Police. 8. Mdecin. 9. Technicien responsable. 10. Services des eaux, du gaz et de llectricit.
Equipement et matriel de secours
Les quipements de secours suivants doivent tre disponibles : 1. Trousse de premiers secours, comportant des antidotes universels et spciques. 2. Extincteurs appropris et couvertures anti-feu. La liste complmentaire ci-aprs, donne titre indicatif, pourra tre adapte la situation locale : 1. Vtements de protection totale (combinaisons, gants et cagoules pour les accidents impliquant des micro-organismes appartenant aux groupes 3 et 4). 2. Masques respiratoires complets avec cartouche ltrante contre les produits chimiques et les particules. 3. Matriel pour la dsinfection des salles, pulvrisateurs et vaporisateurs de formaldhyde, par exemple. 4. Civire. 5. Outils, marteaux, haches, cls, tournevis, chelles, cordages par exemple. 6. Matriel de signalisation et de balisage. Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de se reporter aux rfrences 12 et 28.
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14. Dsinfection et strilisation
La connaissance des principes de base de la dsinfection et de la strilisation est dune importance cruciale pour la scurit biologique au laboratoire. Comme des objets trs souills ne peuvent pas tre dsinfects et striliss rapidement, il est tout aussi important de connatre les lments de base du nettoyage pralable la dsinfection (prnettoyage). Sous ce rapport, les principes gnraux exposs dans le prsent chapitre sont applicables toutes les catgories de germes pathognes connus. Cest la nature du travail exprimental et des agents pathognes manipuls qui dtermine les besoins particuliers en matire de dcontamination. Les indications gnrales qui sont donnes dans la suite de ce chapitre peuvent servir mettre au point des faons de procder normalises ou plus spciques face aux dangers de nature biologique qui existent dans un laboratoire donn. Le temps de contact ncessaire avec un dsinfectant donn est propre chaque substance et chaque fabricant. Cest pourquoi toutes les recommandations relatives lutilisation des dsinfectants doivent tre conformes aux spcications indiques par le fabricant. Dnitions Dans le domaine de la dsinfection et de la strilisation on a recours une terminologie trs varie. Les termes suivants sont parmi les plus couramment employs en scurit biologique : Anti-infectieux : Agent qui tue les micro-organismes ou en inhibe la croissance et la multiplication. Antimicrobien : Terme souvent employ comme synonyme d anti-infectieux . Antiseptique : Substance qui inhibe la croissance et le dveloppement des microorganismes sans ncessairement les tuer. On applique en gnral les antiseptiques sur le revtement cutan. Biocide : Terme gnral qui dsigne tout agent capable de tuer des micro-organismes. Dcontamination : Tout processus destin liminer ou tuer des micro-organismes. Ce terme dsigne galement llimination ou la neutralisation de produits chimiques ou radioactifs dangereux.
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14. DSINFECTION ET STRILISATION
Dsinfectant : Substance chimique ou mlange de substances chimiques utiliss pour tuer des micro-organismes, mais pas ncessairement les spores. Les dsinfectants sont gnralement appliqus sur des surfaces ou objets inanims. Dsinfection : Destruction, par des moyens physiques ou chimiques, de germes mais pas ncessairement de leurs spores. Germicide chimique : Substance chimique ou mlange de substances utiliss pour tuer les micro-organismes. Microbicide : Substance chimique ou mlange de substances chimiques destins tuer les micro-organismes. Ce terme est souvent utilis la place de biocide , germicide ou anti-infectieux , dont il est synonyme. Sporocide : Substance chimique ou mlange de substances chimiques destins tuer les micro-organismes et leurs spores. Strilisation : Processus par lequel on tue ou limine les micro-organismes et les spores de toute nature. Nettoyage du matriel de laboratoire Le nettoyage consiste enlever les souillures, les matires organiques et les taches. On peut procder par brossage, aspiration, dpoussirage sec, lavage leau ou avec une ponge humide imprgne deau savonneuse ou additionne dun dtergent. La crasse, les excrments et les matires organiques peuvent abriter des micro-organismes et gner laction microbicide des dcontaminants (antiseptiques, germicides chimiques ou dsinfectants). Un nettoyage pralable est ncessaire pour assurer une bonne dsinfection ou une bonne strilisation. Beaucoup de produits germicides ne sont actifs qu la condition dtre appliqus des objets prlablement nettoys. Ce prnettoyage doit tre effectu avec prcaution pour viter de sexposer aux agents infectieux. Il faut quil y ait compatibilit chimique entre le matriel utilis et les germicides qui seront utiliss ultrieurement pour le dsinfecter. Il est assez courant dutiliser le mme germicide chimique pour le nettoyage pralable et la dsinfection. Germicides chimiques De nombreuses substances chimiques peuvent tre utilises comme dsinfectants ou antiseptiques. Chaque prparation doit toutefois tre choisie avec soin en fonction des besoins spciques du laboratoire, parmi des produits commerciaux toujours plus nombreux et divers. Lactivit germicide de nombreux produits chimiques sacclre et samliore lorsque la temprature slve. Dun autre ct, une temprature leve peut provoquer une vaporation plus rapide et entraner galement la dcomposition du produit. Cest pourquoi des prcautions particulires doivent tre prises pour le stockage et lutilisation de ces produits dans les rgions tropicales o leur dure de conservation risque de se trouver rduite en raison de la forte temprature ambiante.
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Beaucoup de germicides peuvent tre nocifs pour lhomme et lenvironnement. Il faut donc les choisir, les stocker, les manipuler, les utiliser et les liminer avec le plus grand soin, en respectant les instructions du fabricant. Lorsquon prpare des dilutions de germicides chimiques, il est recommand, pour des raisons de scurit individuelle, de porter des gants, un tablier et une protection oculaire. Il nest gnralement pas ncessaire dutiliser un germicide chimique pour le nettoyage habituel des sols, des murs, des quipements et du mobilier. On peut toutefois avoir avantage le faire dans certains cas, par exemple pour juguler une ambe pidmique. Une utilisation judicieuse des germicides chimiques contribue la scurit du lieu de travail en rduisant le risque de contamination par des agents infectieux. Dans la mesure du possible, on sefforcera dutiliser un nombre limit de produits pour faire des conomies, faciliter linventaire des stocks et rduire la pollution de lenvironnement. On trouvera ci-aprs une description des divers types de germicides chimiques, avec des informations gnrales sur leurs applications et leur scurit demploi. Sauf indication contraire, les concentrations sont donnes en poids par unit de volume (p/v). Le tableau 12 rcapitule les dilutions recommandes pour les composs librant du chlore. Chlore (hypochlorite de sodium) Le chlore, un oxydant action rapide, est un germicide chimique large spectre universellement disponible. Il est gnralement vendu sous forme deau de Javel, une solution aqueuse dhypochlorite de sodium (NaOCl) que lon peut diluer avec de leau pour obtenir diffrentes concentrations de chlore actif.
Tableau 12. Dilutions recommandes pour les composs librant du chlore

SITUATION PROPRE a SITUATION SALE b
Chlore actif ncessaire Hypochlorite de sodium (5 % de chlore actif) Hypochlorite de calcium (70 % de chlore actif) Dichloroisocyanurate de sodium, poudre (60 % de chlore actif) Dichloroisocyanurate de sodium, comprims (1,5 g de chlore actif par comprim) Chloramine (25 % de chlore actif)c
a b c
0,1 % (1 g/l) 20 ml/l 1,4 g/l 1,7 g/l 1 comprim/l 20 g/l
0,5 % (5 g/l) 100 ml/l 7 g/l 8,5 g/l 4 comprims/l 20 g/l
Aprs enlvement des salissures les plus importantes. Pour verser directement, par ex. sur du sang ou avant llimination des salissures les plus importantes. Voir texte.
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Les solutions dhypochlorite utilises comme agents de blanchiment sont fortement alcalines et corrodent les mtaux. Lactivit du chlore libre est rduite par la prsence de matires organiques (protines). Les solutions-mres ou les solutions de travail dhypochlorite stockes dans des rcipients ouverts dgagent du chlore, notamment temprature leve, ce qui rduit leur pouvoir germicide. La frquence de remplacement des solutions de travail dhypochlorite dpend de leur concentration initiale, des conditions ambiantes, ainsi que du type (avec ou sans couvercle) et de la taille des rcipients dans lesquels elles sont conserves. A titre indicatif, les solutions dans lesquelles on met tremper plusieurs fois par jour du matriel fortement souill par des matires organiques doivent tre remplaces tous les jours au minimum, celles dont la frquence dutilisation est moindre pouvant tre conserves jusqu une semaine. Comme dsinfectant gnral, on utilisera une solution 1 g/l de chlore actif. Pour nettoyer un produit rpandu qui prsente un risque biologique ou en prsence de grandes quantits de matires organiques, il est recommand dutiliser une solution plus concentre, contenant 5 g/l de chlore actif. Les solutions dhypochlorite de sodium usage domestique (eau de Javel) contiennent habituellement 50 g/l de chlore actif et doivent donc tre dilues au 1: 50 ou au 1: 10 avant dtre utilises, pour obtenir une concentration nale respectivement gale 1 g/l et 5 g/l. Les solutions dhypochlorite de sodium usage industriel ont souvent une concentration de prs de 120 g/l et doivent donc galement tre dilues pour obtenir les valeurs indiques ci-dessus. Les granuls ou comprims dhypochlorite de calcium (Ca(ClO)2) contiennent gnralement environ 70 % de chlore actif. Les solutions 1,4 et 7,0 g/l prpares laide de ces granuls ou comprims contiendront donc respectivement 1,0 et 5 g/l de chlore actif. Leau de Javel nest pas recommande comme antiseptique, mais on peut lutiliser comme dsinfectant usage gnral et pour faire tremper le matriel contamin non mtallique. En cas durgence, elle peut galement tre utilise pour dsinfecter leau de boisson, la concentration nale de 1 2 mg/l de chlore actif. Le chlore est extrmement toxique. Il ne faut donc entreposer et utiliser les solutions dhypochlorite que dans des locaux parfaitement ventils. On ne doit pas non plus les mlanger des acides pour viter un dgagement rapide de chlore. Nombre de drivs du chlore peuvent se rvler dangereux pour lorganisme humain et pour lenvironnement, aussi faut-il viter lusage inconsidr de dsinfectants chlors, comme leau de Javel par exemple. Dichloroisocyanurate de sodium Le dichloroisocyanurate de sodium se prsente sous la forme dune poudre contenant 60 % de chlore actif. Les solutions 1,7 et 8,5 g/l prpares laide de cette poudre ont une teneur respective de 1 et 5 g/l en chlore actif. Ce produit existe galement sous forme de comprims contenant lquivalent de 1,5 g de chlore actif. On obtient
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approximativement la concentration ncessaire de 1 ou 5 g/l en dissolvant 1 ou 4 comprims dans 1 litre deau. En poudre ou en comprims, le dichloroisocyanurate de sodium est facile conserver dans de bonnes conditions de scurit. En prsence de sang ou dautres liquides infectieux accidentellement rpandus, on applique le produit sous forme solide et on le laisse agir pendant au moins 10 minutes avant de lliminer. On peut ensuite procder au nettoyage de la zone touche. Chloramines Les chloramines existent sous forme de poudres contenant environ 25 % de chlore actif. Dans la mesure o le chlore est libr plus lentement quavec les hypochlorites, la concentration initiale doit tre plus leve pour que lefcacit soit comparable celle des hypochlorites. En revanche, les chloramines en solution sont moins inactives par les matires organiques que les hypochlorites et elles sont recommandes la concentration de 20 g/l, que la situation soit propre ou sale . Les solutions de chloramines sont pratiquement inodores. Il faut toutefois rincer abondamment les objets qui y ont t plongs pour liminer tout rsidu de lagent gonant ajout aux poudres de chloramine T (tosylchloramide sodique). Dioxyde de chlore Le dioxyde de chlore (ClO2) est un germicide, un dsinfectant et un oxydant puissant et rapide qui agit des concentrations plus faibles que le chlore sous forme dhypochlorite. Sous forme gazeuse, le dioxyde de chlore est instable et se dissocie exothermiquement en chlore (Cl2) et en oxygne (O2). Par contre il se dissout dans leau pour donner des solutions aqueuses stables. On peut lobtenir de deux manires: 1) sur place, par action de lacide chlorhydrique (HCl) sur le chlorite de sodium (NaClO2); 2) en le commandant sous forme stabilise que lon active ensuite sur place selon les besoins. De tous les oxydants biocides, le dioxyde de chlore est le plus slectif. Lozone et le chlore sont beacoup plus ractifs et agissent sur la plupart des composs organiques. Le dioxyde de chlore en revanche, ne ragit que sur les composs soufrs rduits, les amines tertiaires et secondaires ou encore sur certains drivs organiques ractifs ou fortement rduits. On peut donc obtenir, avec des doses beaucoup plus faibles de dioxyde de chlore, un rsidu plus stable quavec le chlore ou lozone. Sil est convenablement prpar, la slectivit de ce produit permet de lutiliser plus efcacement que lozone ou le chlore en prsence dune forte teneur en matires organiques. Formaldhyde Le formaldhyde (HCHO) est un gaz capable de tuer tous les micro-organismes, y compris les spores, aux tempratures suprieures 20C. Par contre, il est inactif contre les prions. Laction du formaldhyde est relativement lente et ncessite une humidit relative denviron 70 %. Il est commercialis sous forme de polymre solide, le paraformaldhyde,
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prsent en paillettes ou en comprims, ou encore sous forme de gaz dissous dans leau raison denviron 370 g/l (37 %) additionn de mthanol 100 ml/l comme stabilisateur (formol). Par chauffage, ces deux formes librent du formaldhyde que lon utilise pour dcontaminer et dsinfecter les espaces clos (locaux ou enceintes de scurit biologique, par exemple) (voir ce sujet la section consacre la dcontamination de lenvironnement local dans ce mme chapitre). On peut galement lutiliser comme dsinfectant liquide (formol 5 % dans leau). On suspecte le formaldhyde dtre cancrogne. Cest de toute faon un gaz dangereux, aux proprits irritantes, dot dune odeur cre. Ses vapeurs peuvent irriter les yeux et les muqueuses. Il faut donc lentreposer et lutiliser sous une hotte ou dans une zone bien ventile. Il faut se conformer la rglementation nationale en matire de scurit chimique. Glutaraldhyde Comme le formaldhyde, le glutaraldhyde (OHC(CH2)3CHO) est galement actif contre les bactries vgtatives, les spores, les champignons ou les virus lipidiques et non lipidiques. Il nest pas corrosif et agit plus rapidement que le formaldhyde. Il lui faut toutefois plusieurs heures pour venir bout des spores bactriennes. Il est gnralement fourni sous forme de solution environ 20 g/l (2 %) et certains produits doivent tre activs (alcaliniss) avant usage par addition de bicarbonate livr avec le produit. Une fois active, la solution peut tre rutilise pendant 1 4 semaines, selon le type de prparation et son mode ou sa frquence dutilisation. Les bandelettes ractives fournies avec certains produits ne donnent quune indication approximative de la concentration en glutaraldhyde actif prsent dans la solution utilise. La solution doit tre jete si elle se trouble. Le glutaraldhyde est toxique et irritant pour la peau et les muqueuses, aussi fautil viter tout contact avec ce compos. On doit lutiliser sous une sorbonne ou dans une zone parfaitement ventile. Il nest pas recommand sous forme de pulvrisations ou de solution pour dcontaminer les surfaces dun local. Dans tous les cas, on se conformera la rglementation nationale en matire de scurit chimique. Drivs phnoliques Les drivs phnoliques constituent un vaste groupe dagents qui ont compt parmi les premiers germicides utiliss. Toutefois leur scurit demploi ayant t rcemment mise en doute, leur emploi sest restreint. Ils sont actifs contre les bactries vgtatives, les virus lipidiques et, sous une forme approprie, galement contre les mycobactries. Ils sont sans effet sur les spores et leur activit contre les virus non lipidiques est variable. De nombreux composs phnoliques sont utiliss pour la dcontamination des surfaces et certains dentre eux, comme le triclosan et le chloroxylnol, comptent parmi les antiseptiques les plus courants. Les produits destins au lavage des mains contiennent frquemment du triclosan. Il est surtout actif contre les bactries vgtatives et nest pas agressif pour la peau et
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les muqueuses. Des tudes en laboratoire ont cependant montr que les bactries devenues rsistantes au triclosan sous faible concentration se montrent galement rsistantes lgard de certains types dantibiotiques. On ignore si cette observation peut avoir des consquences sur le terrain. Un certain nombre de composs phnoliques sont sensibles la duret de leau et une eau trop dure peut les inactiver, cest pourquoi il faut les diluer avec de leau distille ou dsionise. Il nest pas recommand dutiliser des drivs phnoliques pour traiter des surfaces pouvant se trouver en contact avec des produits alimentaires ni des locaux frquents par de jeunes enfants. Ils sont susceptibles dtre absorbs par le caoutchouc et de franchir la barrire cutane. Dans tous les cas, on se conformera la rglementation nationale en matire de scurit chimique. Composs dammonium quaternaire On utilise toutes sortes de composs dammonium quaternaire sous forme de mlanges et souvent aussi en association avec dautres germicides, comme les alcools par exemple. Ces composs ont une activit satisfaisante contre les bactries vgtatives et les virus lipidiques. Certains dentre eux (comme le chlorure de benzalkonium) sont utiliss comme antiseptiques. La prsence de matires organiques ou de dtergents anionique et aussi la duret de leau rduisent fortement le pouvoir germicide de certains composs dammonium quaternaire. Il faut donc choisir avec soin ceux que lon envisage dutiliser comme dsinfectants pour le nettoyage pralable la dcontamination. Certaines bactries potentiellement dangereuses peuvent se dvelopper dans les solutions de sels dammonium quaternaire. Par ailleurs, ces composs peuvent saccumuler dans lenvironnement du fait de leur faible biodgradabilit. Alcools Lthanol (alcool thylique, C2H5OH) et le propanol-2 (alcool isopropylique, (CH3)2CHOH) ont des proprits dsinfectantes similaires. Ils sont actifs contre les bactries vgtatives, les champignons et les virus lipidiques mais sans effet sur les spores. Leur activit contre les virus non lipidiques est variable. Pour que lefcacit soit maximale, la concentration utilise doit tre voisine de 70 % (v/v) dans leau : les concentrations suprieures ou infrieures risquent de ne pas avoir un pouvoir germicide aussi lev. Les solutions aqueuses dalcools ont le grand avantage de ne pas laisser de rsidus sur les objets traits. Mlang dautres agents, lalcool est plus efcace que lorsquil est seul : cest le cas par exemple de lalcool 70 % contenant 100 g de formaldhyde par litre ou de lalcool contenant 2 g par litre de chlore actif. On peut utiliser une solution aqueuse dalcool 70 % pour dsinfecter la peau, les paillasses et les enceintes de scurit biologique ou encore pour y faire tremper de petits instruments chirurgicaux. Comme lthanol dessche la peau, il est souvent additionn dmollients. Les produits pour
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friction base dalcool sont recommands pour la dcontamination des mains si celles-ci ne sont que lgrement souilles, dans les cas o il est malcommode ou impossible de se les laver correctement. Il ne faut cependant pas perdre de vue que lthanol est sans effet sur les spores et peut ne pas dtruire tous les types de virus non lipidiques. Les alcools sont volatils et inammables aussi ne faut-il pas les utiliser proximit de ammes nues. Les solutions de travail doivent tre entreposes dans des rcipients appropris pour viter lvaporation. Les alcools peuvent provoquer un durcissement du caoutchouc et dissoudre certains adhsifs. Il est trs important de procder un inventaire minutieux et un entreposage adquat des rserves dalcool pour viter quil ne soit utilis dautres ns que la dsinfection. Les acons ou bouteilles contenant des solutions dalcool doivent tre clairement tiquets pour viter tout autoclavage intempestif. Iode et iodophores Laction de ces dsinfectants est comparable celle du chlore, encore quils puissent tre lgrement inhibs par les matires organiques. Liode peut tacher le tissu et les surfaces environnantes aussi nest-il gnralement pas utilisable comme dsinfectant. Par contre, liode et les iodophores sont de bons antiseptiques. La polyvidone iode est un antiseptique sr et efcace pour le lavage chirurgical des mains et pour lantisepsie de la peau du champ opratoire. Les antiseptiques base diode ne conviennent gnralement pas pour la dsinfection du matriel mdical ou dentaire. Liode ne doit pas tre utilis sur laluminium ou le cuivre. Liode peut tre toxique. Les composs organiques iods doivent tre conservs 410 C pour viter que des bactries potentiellement dangereuses ne sy dveloppent. Peroxyde dhydrogne et peracides Comme le chlore, le peroxyde dhydrogne (eau oxygne, H2O2) et les peracides sont des oxydants nergiques et peuvent constituer de puissants germicides large spectre. Ils sont galement moins nocifs que le chlore pour lorganisme humain et pour lenvironnement. Le peroxyde dhydrogne est fourni soit la sous forme dune solution 3 % prte lemploi, soit en solution aqueuse 30 % que lon dilue dans 5 10 fois son volume deau strilise. En fait, ces solutions 36 % de peroxyde dhydrogne ont une action relativement lente et leur pouvoir germicide est limit. Il existe maintenant des solutions contenant dautres substances destines stabiliser la teneur en peroxyde dhydrogne. Ces produits ont une action germicide plus rapide et sont moins corrosifs. On peut utiliser le peroxyde dhydrogne pour dcontaminer les paillasses et les enceintes de scurit biologique, et les solutions les plus concentres peuvent convenir pour la dsinfection du matriel mdical ou dentaire qui ne supporte pas la chaleur. La vaporisation de peroxyde dhydrogne ou dacide peractique (CH3COOOH) pour
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dcontaminer le matriel mdical ou chirurgical non rsistant la chaleur exige un appareillage spcial. Le peroxyde dhydrogne et les peracides peuvent corroder les mtaux comme laluminium, le cuivre, le laiton et le zinc et ils sont galement capables de dcolorer les tissus, le systme pileux, la peau et les membranes. Tout objet trait avec ces produits doit tre rinc fond avant dtre mis en contact avec les yeux ou les muqueuses. Le stockage doit toujours se faire labri de la chaleur et de la lumire. Dcontamination de lenvironnement local La dcontamination des locaux du laboratoire, de son mobilier et de son quipement ncessite lemploi dune association de dsinfectants liquides et gazeux. Les surfaces peuvent tre dcontamines au moyen dune solution dhypochlorite de sodium (NaOCl) ; une solution contenant 1 g de chlore actif par litre peut convenir pour lassainissement gnral des locaux, mais des solutions plus concentres sont recommandes en cas de situation haut risque. Pour la dcontamination des locaux du laboratoire, les solutions prtes lemploi contenant 3 % de peroxyde dhydrogne (H2O2) peuvent parfaitement remplacer les solutions dhypochlorite. On peut galement dcontaminer les salles et lquipement par fumigation au formaldhyde produit en chauffant du paraformaldhyde ou en faisant bouillir du formol. Ce procd est extrmement dangereux et doit tre mis en uvre par du personnel quali. Toutes les ouvertures de la pice (fentres, portes, etc.) doivent tre hermtiquement fermes avec du ruban adhsif par exemple, avant le dgagement du gaz. La fumigation doit tre effectue une temprature ambiante dau moins 21 C et une humidit relative de 70 % (voir plus loin dans ce chapitre la section consacre la dcontamination des enceintes de scurit biologique). Une fois lopration acheve, il faut ventiler abondamment les locaux avant dautoriser lentre du personnel. Le personnel oblig de pntrer dans la salle avant laration doit porter un masque respiratoire appropri. On peut utiliser du bicarbonate dammonium gazeux pour neutraliser le formaldhyde. La fumigation de petits volumes avec du peroxyde dhydrogne en phase gazeuse est galement efcace mais il faut un appareillage spcial pour la production du gaz. Dcontamination des enceintes de scurit biologique Pour dcontaminer les enceintes de scurit biologique de classes I et II, il existe un appareillage qui permet de produire, de faire circuler et de neutraliser indpendamment le formaldhyde. On peut aussi mettre la quantit dsire de paraformaldhyde (pour une concentration nale de 0,8 % de formaldhyde dans lair) dans une pole frire que lon place ensuite sur une plaque chauffante lectrique. On introduit galement dans lenceinte une autre pole contenant une quantit de bicarbonate dammonium de 10 % suprieure celle de paraformaldhyde et on la place sur une autre plaque chauffante. Les prises dalimentation des plaques chauffantes doivent se trouver hors de lenceinte, de manire pouvoir rgler les plaques depuis lextrieur
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en les branchant ou en les dbranchant selon le cas. Si lhumidit relative est infrieure 70 %, il faut galement placer dans lenceinte un rcipient ouvert contenant de leau chaude avant de fermer hermtiquement le panneau frontal avec du ruban pais (par exemple du ruban adhsif entoil). Une paisse feuille de plastique est ensuite scotche contre louverture frontale et la sortie de la gaine dvacuation de faon que le gaz ne pntre pas dans la pice. Les traverses des ls dalimentation qui passent travers le panneau frontal doivent galement tre tanchies avec du ruban adhsif entoil. On branche la plaque lectrique qui chauffe le paraformaldhyde. Une fois que celui-ci sest entirement vaporis, on la dbranche. On ne touche plus alors lenceinte pendant au moins 6 h. Pass ce temps, on branche la deuxime plaque chauffante et on laisse se vaporiser tout le bicarbonate dammonium. On dbranche ensuite la plaque et on met en marche le ventilateur de lenceinte pendant deux intervalles de 2 secondes environ chacun pour faire circuler la vapeur de bicarbonate dammonium. Lenceinte est laisse telle quelle pendant 30 minutes avant douvrir le panneau frontal (ou denlever la feuille de plastique) et de dgager la sortie de la gaine dvacuation. Avant de se servir de lenceinte, il faut lessuyer pour en liminer les rsidus. Lavage et dcontamination des mains Dans la mesure du possible, il faut porter des gants chaque fois que lon manipule du matriel prsentant un risque biologique. Toutefois, cette mesure ne remet pas en cause la ncessit, pour le personnel de laboratoire, de se laver rgulirement et convenablement les mains. Le lavage des mains est indispensable lorsque lon a manipul des animaux ou du matriel prsentant un risque biologique ou encore avant de quitter le laboratoire. Dans la plupart des cas, un lavage soigneux des mains leau et au savon est sufsant pour les dcontaminer, mais lusage de savons germicides est recommand dans les situations haut risque. Il faut bien se savonner les mains en frottant soigneusement pendant au moins une dizaine de secondes, puis les rincer leau claire et les scher avec du papier ou une serviette propre (on peut ventuellement utiliser un schoir air chaud). Il est recommand de disposer de robinets commands avec le pied ou le coude. Dans le cas contraire, on fermera le robinet en le saisissant avec une serviette en papier ou en tissu an de ne pas se recontaminer les mains. Comme indiqu plus haut, les produits pour friction base dalcool peuvent tre utiliss pour se nettoyer les mains si celles-ci ne sont que lgrement souilles et que lon ne peut pas se les laver convenablement. Dsinfection et strilisation par la chaleur La chaleur est lagent physique le plus couramment utilis pour liminer les germes pathognes. La chaleur sche , qui nest absolument pas corrosive, est utilise pour traiter de nombreux instruments et accessoires de laboratoire qui sont capables de supporter une temprature de 160 C ou davantage pendant 2 4 h. Le brlage et
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lincinration (voir ci-dessous) sont galement des formes de traitement par la chaleur sche. Lautoclavage est la manire la plus efcace dutiliser la chaleur humide . Lbullition ne tue pas ncessairement tous les micro-organismes et les germes pathognes, mais on peut y recourir comme traitement strilisateur minimum lorsque dautres mthodes (dsinfection ou dcontamination chimique, autoclavage) ne sont ni utilisables ni disponibles. Les objets striliss doivent tre manipuls et rangs de manire rester striles jusquau moment de leur utilisation.
Autoclavage
Le traitement par la vapeur saturante sous pression (autoclavage) constitue le moyen le plus efcace et le plus able pour striliser le matriel de laboratoire. Dans la plupart des cas, les cycles suivants assurent la strilisation si lautoclave a t correctement charg : 1. Temps de palier de 3 min 134 C. 2. Temps de palier de 10 min 136 C. 3. Temps de palier de 15 min 121 C. 4. Temps de palier de 25 minutes 115 C. Parmi les divers types dautoclaves, on peut citer les suivants : Autoclaves vapeur directe. Le schma dun de ces autoclaves est reprsent la gure 10. La vapeur pntre dans la chambre sous pression et dplace lair plus lourd vers le bas; celui-ci passe ensuite dans la vanne dvacuation de la chambre, travers un ltre HEPA. Autoclaves extraction dair. Dans ces appareils, lair est extrait de la chambre avant admission de la vapeur. Lair est vacu par une vanne munie dun ltre HEPA. A la n du cycle, la vapeur est automatiquement vidange. Ces autoclaves peuvent fonctionner 134 C et le cycle de strilisation peut donc tre rduit 3 minutes. Ils constituent le systme idal pour les charges poreuses, mais en raison du vide qui est fait dans la chambre, ils ne peuvent pas tre utiliss pour traiter des liquides. Autoclaves de type autocuiseur source de chauffage extrieure. Ces autoclaves ne seront utiliss que si lon ne dispose pas dun autoclave vapeur directe. Ils sont chargs par le haut et chauffs au gaz, llectricit ou dune autre manire. La vapeur est produite en chauffant leau place au fond du rcipient et lair se dplace vers le haut avant de sortir par la soupape dchappement. Lorsque lair a t vacu en totalit, on ferme la soupape dchappement et on baisse le chauffage. La pression et la temprature augmentent jusqu une valeur donne laquelle la soupape de scurit commence fonctionner. Le temps de palier se compte partir de ce moment. A la n du cycle, on coupe le chauffage et on laisse la temprature descendre 80 C ou moins avant douvrir le couvercle.
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manomtre
soupape de scurit
manomtre chambre
soupape de scurit
filtre (coton) dentre dair
double parois robinet dentre dair
systme dalimentation vapeur
vers double paroi vanne dflecteur vers chambre chambre
porte
vers pompe vide ou sortie vapeur vanne purgeurs vapeur robinet de vidange clapet anti-retour filtres de vidange
Figure 10. Autoclave vapeur directe.
Chargement des autoclaves
Le matriel ne doit pas tre entass lintrieur de la chambre pour que la vapeur puisse pntrer sans difcult et que lair puisse tre limin facilement. Il faut que la vapeur puisse atteindre le contenu des sacs.
Prcautions dutilisation
Lobservation des rgles suivantes permet de rduire les risques que comporte lutilisation dappareils sous pression. 1. Lutilisation et lentretien habituels des appareils doivent tre cons des personnes qualies. 2. Un programme de maintenance prventive, comprenant un contrle priodique des joints de la chambre et de la porte ainsi que de tous les manomtres et dispositifs de commande doit tre mis sur pied et con un personnel quali. 3. La vapeur doit tre sature et exempte de substances chimiques (par ex. des inhibiteurs de corrosion) qui pourraient contaminer le matriel striliser. 4. Tout le matriel autoclaver doit tre plac dans des rcipients qui permettent une vacuation facile de lair et une bonne pntration de la chaleur. La chambre
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ne doit pas tre encombre an que la charge puisse baigner de manire uniforme dans la vapeur. 5. Si lautoclave nest pas muni dun dispositif de scurit qui empche louverture de la porte tant que la chambre est sous pression, il est indispensable que la soupape principale soit ferme et quon laisse retomber la temprature de la chambre en dessous de 80 C avant douvrir la porte. 6. Si on autoclave des liquides, il faut utiliser un systme dvacuation faible vitesse pour viter quen raison de la surchauffe, ceux-ci se mettent bouillir lorsquon les retire. 7. Les oprateurs doivent porter des gants et un cran facial pour se protger lors de louverture de lautoclave, mme si la temprature est retombe moins de 80 C. 8. Pour tout contrle de routine du fonctionnement de lautoclave, il faut placer un indicateur biologique ou un thermocouple au centre de chaque charge. Il est vivement conseill de contrler rgulirement la temprature au moyen de thermocouples et dappareils enregistreurs en utilisant la pire charge possible , ce qui permettra de dterminer ce que doit tre le droulement du cycle. 9. Le ltre de vidange plac en bas de la chambre (sil y en a un) doit tre retir et nettoy tous les jours. 10. On veillera ce que la soupape dchappement des autoclaves de type autocuiseur ne soit pas obture par du papier, etc. prsent dans la charge. Incinration Lincinration est une mthode utile pour se dbarrasser des carcasses danimaux, des pices anatomiques ou autres dchets de laboratoire, avec ou sans dcontamination pralable (voir chapitre 3). Lincinration des matriels infectieux ne peut se substituer lautoclavage que si lincinrateur est plac sous la responsabilit du laboratoire. Pour donner satisfaction, il faut que lincinrateur comporte un dispositif efcace de rgulation de la temprature et une chambre de combustion secondaire. Un grand nombre dincinrateurs, notamment ceux qui ne comportent quune seule chambre de combustion, ne permettent pas de traiter de manire satisfaisante le matriel infectieux, les carcasses danimaux et les matires plastiques. En effet la destruction risque de ne pas tre totale et lefuent qui sort par la chemine peut polluer latmosphre du fait de la prsence de micro-organismes ou de substances et fumes toxiques. Cela tant, il existe, pour les chambres de combustion, de nombreux types de conguration qui donnent satisfaction, mais lidal est dobtenir une temprature dau moins 800 C dans la chambre primaire et dau moins 1000 C dans la chambre secondaire. Les matires et objets incinrer, mme sils ont t pralablement dcontamins, doivent tre transports dans des sacs, de prfrence des sacs plastiques. Le personnel prpos lincinration doit avoir reu des instructions appropries concernant le chargement et le rglage de la temprature de lincinrateur. A noter que le bon fonctionnement dun incinrateur dpend trs largement dun panachage judicieux des matires et objets traits.
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Ces incinrateurs, existants ou en projet, continuent susciter des inquitudes quant aux effets ngatifs quils pourraient avoir sur lenvironnement et les tudes se poursuivent pour mettre au point des appareils plus respectueux de lenvironnement et consommant moins dnergie. Elimination Llimination des dchets de laboratoire ou des dchets mdicaux est soumise diverses dispositions rglementaires rgionales, nationales ou internationales et les versions les plus rcentes de ces documents doivent tre consultes avant dlaborer et de mettre en uvre un programme portant sur la manipulation, le transport et llimination des dchets qui prsentent un risque biologique. En rgle gnrale, les cendres extraites des incinrateurs peuvent tre traites comme des cendres domestiques et prises en charge par les services locaux denlvement des ordures. Les dchets autoclavs peuvent tre limins par incinration sur un site hors de la zone du laboratoire ou enfouis dans une dcharge autorise (voir le chapitre 3). Pour de plus amples informations, le lecteur peut consulter les rfrences 13 et 29 39.
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15. Introduction au transport des matires infectieuses
Le transport des matires infectieuses ou potentiellement infectieuses est soumis une rglementation nationale et internationale rigoureuse. Cette rglementation prcise comment utiliser les matriaux demballage selon les formes prescrites et numre galement les autres dispositions respecter pour les expditions. Le personnel du laboratoire doit expdier les matires infectieuses en respectant la rglementation applicable leur transport. Lobservation de ces rgles permet : 1. De rduire le risque de dtrioration ou de fuite des colis et par voie de consquence, 2. de rduire lexposition une ventuelle infection et 3. damliorer les conditions de livraison des colis. Rglementation internationale relative aux transports La rglementation relative aux transports de matires infectieuses (quel quen soit le moyen) repose sur le Rglement type des Nations Unies pour le transport des matires dangereuses (40). Ces recommandations manent du Comit dexperts de lONU en matire de transport des marchandises dangereuses (UNCEDTG). Pour avoir force de loi, les dispositions du Rglement type des Nations Unies doivent tre incorpores dans la rglementation nationale et internationale par les autorits comptentes (par ex. les Instructions techniques pour la scurit du transport arien des marchandises dangereuses de lOrganisation de lAviation civile internationale (OACI) ou lAccord europen relatif au transport international des marchandises dangereuses par route (ADR) (42)). LAssociation du Transport arien international (IATA) publie chaque anne des directives concernant le transport des matires infectieuses (43) auxquelles les compagnies ariennes qui en sont membres doivent se conformer. Comme le Rglement type des Nations Unies pour le transport des matires dangereuses est un ensemble de recommandations qui est revu tous les deux ans, le lecteur est pri de se reporter aux tout derniers textes rglementaires nationaux et internationaux en la matire. LOMS intervient titre consultatif auprs du Comit dexperts des Nations Unies en matire de transport des marchandises dangereuses. Un certain nombre de modications importantes concernant la rglementation relative au transport des matires
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15. INTRODUCTION AU TRANSPORT DES MATIRES INFECTIEUSES
infectieuses gurent dans la 13e dition (2003) du Rglement type des Nations Unies (40). Des indications sur les tenants et aboutissants de ces modications peuvent tre obtenues auprs de lOMS (44). La rglementation internationale relative aux modes de transport nest pas destine se substituer aux prescriptions locales ou nationales en la matire. Toutefois, en labsence de telles prescriptions, cest la rglementation internationale quil convient de se conformer. Il importe de noter que le transport international des matires infectieuses est galement soumis la rglementation nationale relative limport-export. Le systme du triple emballage La gure 11 donne un exemple de triple emballage, qui constitue le meilleur systme pour le transport des matires infectieuses ou potentiellement infectieuses. Cet emballage comporte trois couches successives : un rcipient primaire, un emballage secondaire et un emballage extrieur. Le rcipient primaire, qui contient lchantillon, doit tre hermtique, parfaitement tanche, et son contenu doit tre indiqu sur une tiquette. Ce premier rcipient est envelopp dans un volume sufsant de matriau absorbant pour quen cas de bris ou de fuite, tout le liquide de lchantillon soit absorb. Le rcipient primaire est plac dans un deuxime emballage, galement hermtique et tanche, qui sert de protection. Plusieurs rcipients primaires envelopps de matriau absorbant peuvent tre placs dans un mme emballage secondaire. Certains textes rglementaires indiquent la limite de poids ou de volume autorise pour les colis de matires infectieuses. La troisime couche, qui constitue lemballage extrieur, protge demballage secondaire contre les dommages matriels qui pourraient se produire en cours de transport. Il faut galement produire des formulaires contenant des donnes sur lchantillon, des documents ou autres types dinformation qui en indiquent la nature, en donnent la description, avec mention du nom de lexpditeur et du destinataire, ainsi que tout document complmentaire, conformment aux derniers textes rglementaires en vigueur. Le Rglement type des Nations Unies prconise lutilisation de deux modles diffrents de triple emballage. Le modle de base convient pour le transport de diverses matires infectieuses, mais les prescriptions concernant le transport des microorganismes haut risque sont plus rigoureuses. Pour plus de dtails sur lutilisation des diffrents types demballage en fonction de la nature des matires transportes, il est conseill de se reporter aux textes rglementaires nationaux ou internationaux relatifs aux diffrents modes de transport. Consignes pour nettoyer des produits rpandus Au cas o du matriel biologique infectieux ou potentiellement infectieux viendrait tre rpandu, on appliquera les consignes suivantes :
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Emballage et tiquetage des substances infectieuses de catgorie A

Rcipient primaire Rcipient primaire (tube essai) (tube essai) Emballage Emballage secondaire secondaire (tanche leau) (tanche l'eau) Bouchon Bouchon Matriau absorbant Matriau absorbant Fiche de Fiche de suivi suivi de de lchantillon l'chantillon(y (y compris liste compris liste dtaille dtailledu ducontenu) contenu) Emballage Emballage extrieur extrieur Etiquette Etiquette de de sens sens de de la mauntention manutention (facultative (facultative lorsque lorsquele le volume volume du du rcipient rcipient primaire primaire ne ne dpasse dpasse pas pas 50 50 ml) ml) Etiquetage Etiquetage UN UN
Emballage et tiquetage des substances infectieuses de catgorie B

Rcipient primaire Rcipient primaire ( ( lpreuve l'preuvedes desfuites fuites ou ou non tamisant) non tamisant) Support de type porte-tubes porte-tubes Support (mousse dede polystyrne (mousse polystyrne plastiquealv alvoles ouvertes) plastique oles ouvertes) Liste Liste dtaille dtaille du du contenu contenu (che de suivi de lchantillon) (fiche de suivi de
Bouchon Bouchontanche tanche leau l'eau Matriel Matriel demballage d'emballage absorbant absorbant
l'chantillon)
Emballage Emballagesecondaire secondaire ( (lpreuve l'preuvedes desfuites fuites ou non tamisant) ou non tamisant) Emballage Emballage extrieur extrieur rigide rigide Nom Nom de de transport transportUN UN Numro Numro didentication d'identification UN UN
Etiquettes Etiquettes indiquant indiquant lexpditeur et et le le l'expditeur destinataire destinataire
Figure 11. Exemples demballages triples. (gures aimablement communiques par lIATA, Montral, Canada).
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15. INTRODUCTION AU TRANSPORT DES MATIRES INFECTIEUSES
1. Porter des gants et des vtements protecteurs, y compris une protection oculaire et faciale, si ncessaire. 2. Recouvrir le liquide avec des serviettes en tissu ou en papier pour viter quil ne continue se rpandre. 3. Verser un dsinfectant appropri sur les serviettes et la zone environnante (en gnral une solution dhypochlorite 5 % fait laffaire; toutefois si laccident survient bord dun aronef, il faut utiliser un compos dammonium quaternaire). 4. Appliquer le dsinfectant par zones concentriques en commenant par les bords du secteur contamin et en se dirigeant vers le centre. 5. Au bout dune dure approprie (par ex. 30 min), liminer les produits. En prsence de dbris de verre ou autres objets pointus ou tranchants, se servir dune pelle ou dun morceau de carton rigide pour les rassembler et les placer dans un rcipient imperforable en vue de leur limination. 6. Nettoyer et dsinfecter lemplacement o le liquide a t rpandu (si ncessaire, rpter les oprations 2 5). 7. Jeter les matriaux et produits contamins dans une poubelle tanche et imperforable. 8. Une fois la dsinfection acheve, informer les autorits comptentes que le site est dcontamin.
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PARTIE V
Introduction aux biotechnologies
16. Scurit et technologies de recombinaison de lADN
Les technologies de recombinaison de lADN galement connues sous la dnomination de gnie gntique consistent associer du matriel gntique de diverses origines pour crer des organismes gntiquement modis (OGM) qui nont probablement jamais exist dans la nature. Au dbut, les spcialistes de la biologie molculaire craignaient que ces organismes ne soient dots de proprits imprvisibles et indsirables susceptibles de les rendre dangereux sils venaient schapper des laboratoires. Ces inquitudes ont constitu le thme central des dbats qui se sont drouls lors de la confrence scientique tenue en 1975 Asilomar, en Californie Erats Unrs dAmerque (45). Les discussions qui ont eu lieu lors de cette runion au sujet des problmes de scurit biologique ont abouti lnonc des premiers principes directeurs concernant les technologies de recombinaison de lADN. Lexprience acquise aprs 25 ans de recherches montre que les travaux de gnie gntique peuvent tre effectus dans de bonnes conditions de scurit pour peu que lon value correctement le risque et que des mesures sufsantes de scurit soient prises. Les premiers travaux de gnie gntique avaient pour but de cloner des fragments dADN dans des htes bactriens an dobtenir la surexpression de certains produits gniques en vue dtudes ultrieures. Des molcules dADN recombinant sont galement utilises pour crer divers types dOGM, comme les animaux ou plantes transgniques ou les animaux knock out cest dire dont certains gnes sont inactivs ou supprims. Les technologies de recombinaison de lADN ont dores et dj des retombes considrables en biologie et en mdecine et leur inuence va probablement encore saccentuer maintenant que lon connat la squence nuclotidique complte du gnome humain. Des dizaines de milliers de gnes dont on ignore encore la fonction vont ainsi pouvoir tre tudis grce au gnie gntique. La thrapie gnique pourrait tre couramment utilises pour traiter certaines maladies et il est probable que les techniques de gnie gntique vont nous permettre de disposer de nouveaux vecteurs de clonage. Les plantes transgniques cres par recombinaison de lADN pourraient galement prendre une place de plus en plus importante dans lagriculture moderne. On ne doit procder une exprience comportant llaboration ou lutilisation dOGM quaprs une valuation ou une analyse du risque biologique quelle comporte. Il est possible que la pathognicit et les dangers que peuvent comporter ces organismes prsentent des caractristiques nouvelles et plus ou moins bien dnies.
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Il faut donc tudier les proprits de lorganisme donneur et celles de lorganisme receveur, la nature des squences dADN qui seront transfres et les caractristiques de lenvironnement. La connaissance de tous ces facteurs devrait permettre de dterminer plus facilement le niveau de scurit biologique ncessaire pour la manipulation sans danger de lOGM obtenu et les systmes de connement biologique et physique mettre en uvre. Considrations bioscuritaires applicables aux systmes dexpression biologiques Les systmes dexpression biologiques sont constitus par les vecteurs de clonage et les cellules htes. Pour que ces systmes soient efcaces et puissent tre utiliss sans danger, ils doivent rpondre un certain nombre de critres. Prenons titre dexemple un de ces systmes, le plasmide pUC18. Souvent utilis comme vecteur de clonage avec des bactries Escherichia coli K12, ce plasmide a t entirement squenc. Tous les gnes ncessaires son expression dans dautres bactries ont t supprims de son plasmide prcurseur, le pBR322. E.coli K12 est une souche non pathogne de colibacilles qui est incapable de coloniser de faon permanente lintestin des tres humains ou des animaux en bonne sant. Les techniques habituelles de gnie gntique peuvent tre utilises sans risque sur le systme E.coli/pUC18 au niveau 1 de scurit biologique, aussi longtemps que les produits exprims par lADN tranger insr dans la bactrie ne ncessitent pas le passage un niveau suprieur. Considrations bioscuritaires applicables aux vecteurs dexpression Un niveau suprieur de scurit biologique peut tre ncessaire lorsque : 1. Lexpression des squences dADN provenant de germes pathognes sont susceptibles daugmenter la virulence de lOGM. 2. Les squences insres ne sont pas parfaitement caractrises, comme cest par exemple le cas lors de la prparation de bibliothques dADN gnomique provenant de micro-organismes pathognes. 3. Les produits gniques peuvent avoir une activit pharmacologique. 4. Les produits gniques codent pour des toxines. Vecteurs viraux pour le transfert de gnes On utilise certains virus, des adnovirus par exemple, pour transfrer des gnes dans dautres cellules. Ces vecteurs sont dpourvus des gnes qui commandent la rplication et on les cultive dans des lignes cellulaires capables de compenser ce dfaut. Il peut arriver que ces vecteurs soient contamins par des virus capables de se rpliquer, virus qui apparaissent dans la ligne cellulaire la faveur de rares recombinaisons spontanes ou peuvent aussi tre prsents en raison dune purication insufsante. Ces vecteurs doivent tre manipuls au mme niveau de scurit biologique que les adnovirus dont ils drivent.
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16. SCURIT ET TECHNOLOGIES DE RECOMBINAISON DE LADN
Animaux transgniques et animaux knock out Les animaux porteurs de gnes trangers (animaux transgniques) doivent tre manipuls un niveau de connement correspondant aux caractristiques des produits de ces gnes. Les animaux chez lesquels on a procd la dltion de certains gnes particuliers (animaux knock out ) ne prsentent gnralement pas de danger sur le plan biologique. Parmi ces animaux transgniques gurent ceux qui expriment les rcepteurs de virus normalement incapables dinfecter lespce en question. Sil arrivait que de tels animaux schappent dun laboratoire et transmettent leurs gnes trangers leurs congnres sauvages, il pourrait thoriquement se constituer au sein de la population animale un rservoir pour ces virus. Cette possibilit a t voque dans le cas du virus poliomylitique et elle prend toute son importance dans le contexte de lradication de la poliomylite. Des souris transgniques exprimant le rcepteur au virus poliomylitique humain et produites par diffrents laboratoires ont pu tre infectes par ce virus en utilisant diverses voies dinoculation et la maladie rsultante sest rvle cliniquement et histopathologiquement analogue la poliomylite humaine. Toutefois, le modle murin diffre de lorganisme humain en ce sens que le virus poliomylitique administr par voie orale se rplique mal ou pas du tout dans les voies digestives. Il est donc trs peu probable que, dans lventualit o ces souris transgniques schapperaient pour retourner ltat sauvage, elles soient en mesure de constituer un nouveau rservoir animal du virus poliomylitique. Cet exemple montre nanmoins que, pour chaque nouvelle ligne danimaux transgniques, il faut procder des tudes minutieuses pour dterminer par quelles voies ces animaux peuvent tre infects, quel est le volume dinoculum ncessaire linfection et dans quelle proportion les animaux infects excrtent le virus. En outre, il faut prendre toutes les mesures ncessaires pour assurer un connement rigoureux des souris transgniques porteuses du rcepteur viral. Plantes transgniques Dans de nombreuses rgions du monde, les plantes trangniques exprimant des gnes qui leur confrent une tolrance aux herbicides ou une rsistance aux insectes sont aujourdhui au centre dune vive controverse. Le dbat porte essentiellement sur la scurit sanitaire de ces plantes en tant qualiments et sur les consquences cologiques que leur culture pourrait avoir long terme. On utilise des plantes transgniques exprimant des gnes dorigine humaine ou animale pour obtenir des produits dintrt mdical ou nutritionnel. Il convient de procder une valuation du risque pour dterminer quel niveau de scurit biologique ces plantes doivent tre produites. Evaluation du risque dans le cas des organismes gntiquement modis Dans le cas de travaux sur des OGM, lvaluation du risque doit prendre en compte les caractristiques des organismes donneurs et receveurs. On en trouvera ci-aprs quelques exemples.
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Dangers directement lis au gne insr (organisme donneur)
Une valuation du risque est ncessaire dans le cas o le produit du gne insr possde une activit biologique ou pharmacologique reconnue qui pourrait se rvler nocive, par exemple, si on a affaire des : 1. Toxines 2. Cytokines 3. Hormones 4. Rgulateurs de lexpression gnique 5. Facteurs de virulence ou daccroissement de la virulence 6. Squences oncognes 7. Facteurs dantibiorsistance 8. Allergnes. Dans chaque cas, il faut valuer le niveau dexpression ncessaire pour quune activit biologique ou pharmacologique se manifeste.
Dangers lis au receveur ou lhte
1. Sensibilit de lhte 2. Pathognicit de la souche hte, et notamment sa virulence, son infectiosit et sa production de toxines 3. Modication de la gamme dhtes 4. Etat immunitaire du receveur 5. Consquences dune exposition.
Dangers lis la modication de certains facteurs de pathognicit
Il y a beaucoup de modications qui nimpliquent pas de gnes dont les produits sont intrinsquement nocifs, mais des effets indsirables peuvent se produire par suite de la modication des facteurs pathognes ou non pathognes existants. La modication dun gne normal peut avoir des rpercussions sur la pathognicit. Pour reconnatre ces dangers potentiels, il faut se poser les questions suivantes (liste non exhaustive). 1. Y a t-il augmentation de linfectiosit ou de la pathognicit ? 2. Linsertion du gne tranger peut-elle compenser une mutation incapacitante chez le receveur ? 3. Le gne tranger code-t-il pour un facteur de pathognicit appartenant un autre organisme ? 4. Si lADN tranger contient un tel facteur de pathognicit, peut-on envisager que cela ait des consquences pour la pathognicit de lOGM ? 5. Existe t-il un traitement ? 6. La modication gntique aura t-elle des consquences pour la sensibilit de lOGM aux antibiotiques ou dautres types de thrapeutique ? 7. Lradication de lOGM est-elle possible ?
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16. SCURIT ET TECHNOLOGIES DE RECOMBINAISON DE LADN
Autres considrations Lutilisation danimaux ou de vgtaux entiers des ns exprimentales demande galement mre rexion. Les chercheurs doivent respecter la rglementation, les restrictions et les prescriptions relatives au travail sur les OGM en vigueur dans les pays ou les institutions dans lesquels ils exercent leur activit. Il peut exister dans certains pays une autorit nationale charge dtablir des directives concernant le travail sur les OGM et celle-ci peut aider les scientiques dterminer quel est le niveau de scurit biologique requis par leurs travaux. Ce niveau peut parfois varier dun pays lautre et il peut aussi arriver quun pays dcide dabaisser ou dlever le niveau de scurit exig pour tel ou tel systme vecteur/hte, la lumire de donnes nouvelles. Lvaluation du risque est un processus dynamique qui volue avec les nouvelles avances et les nouveaux progrs de la science. Si ces valuations sont menes correctement, elles permettront lhumanit de continuer tirer prot du gnie gntique dans les annes venir. Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de consulter les rfrences 17 et 46 48.
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PARTIE VI
Scurit chimique, lectrique et incendie
17. Les risques chimiques
Le personnel des laboratoires de microbiologie est expos des produits chimiques dangereux tout autant qu des germes pathognes. Il est donc primordial quil ait une bonne connaissance des effets toxiques de ces produits, de leurs voies dexposition et des risques que comportent leur manipulation et leur stockage (voir annexe 5). On peut obtenir auprs des fabricants ou des fournisseurs des ches de scurit chimique ou d autres types dinformation sur les risques de nature chimique. Le personnel des laboratoires o de tels produits sont employs doit avoir accs cette documentation sous une forme ou une autre, qui peut par exemple tre incluse dans le manuel de laboratoire ou le guide dhygine et de scurit. Voies dexposition On peut tre expos des produits chimiques dangereux par : 1. Inhalation 2. Contact 3. Ingestion 4. Piqre daiguille 5. Lsion cutane. Stockage des produits chimiques Il ne faut conserver au laboratoire que la quantit de produits ncessaire pour lusage quotidien. Les stocks doivent tre entreposs dans une rserve constitue dune pice ou dun btiment spcialement destins cet effet. Les produits chimiques ne doivent pas tre rangs par ordre alphabtique. Rgles gnrales dincompatibilit chimique Pour prvenir tout risque dincendie ou dexplosion, les produits qui gurent dans la colonne de gauche du tableau 13 doivent tre entreposs et manipuls de faon viter tout contact avec avec les substances places en regard, dans la colonne de droite. Toxicit des produits chimiques Certains produits chimiques peuvent avoir des effets indsirables sur la sant des personnes qui les manipulent ou en inhalent les vapeurs. Outre les poisons notoires, un certain nombre de produits chimiques sont connus pour leurs divers effets toxiques.
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Tableau 13. Rgles gnrales dincompatibilit chimique

TYPE DE SUBSTANCE SUBSTANCES INCOMPATIBLES
Mtaux alcalins, comme le sodium, le potassium, le csium ou le lithium Halognes Acide actique, sulfure dhydrogne, aniline, hydrocarbures, acide sulfurique
Dioxyde de carbone, hydrocarbures chlors, eau Ammoniac, actylne, hydrocarbures Oxydants, comme lacide chromique, lacide nitrique, les peroxydes ou les permanganates
Le systme respiratoire, le sang, les poumons, le foie, les reins et le tube digestif, ainsi que dautres organes et tissus, peuvent tre touchs et mme subir de graves lsions. Parmi toutes ces substances toxiques, certaines sont reconnues comme tant tratognes ou cancrognes. Les vapeurs de certains solvants sont toxiques lorsquelles sont inhales. Outre les effets plus graves indiqus ci-dessus, lexposition peut entraner une atteinte sans retentissement visible immdiat sur la sant, mais qui peut se traduire par un dfaut de coordination, une somnolence et des symptmes du mme ordre, qui augmentent le risque daccident. Une exposition rpte ou prolonge la phase liquide dun grand nombre de solvants organiques peut tre lorigine de lsions cutanes rsultant de la dissolution des graisses par les solvants ou bien encore dune action corrosive ou allergique. Des informations dtailles sur les effets toxiques des produits chimiques sont donnes lannexe 5. Produits chimiques explosifs Les azotures, qui entrent souvent dans la composition des solutions antibactriennes, ne doivent en aucun cas entrer en contact avec le cuivre ou le plomb (canalisation dvacuation et plomberie), car les azotures de ces mtaux explosent violemment au moindre choc. Les thers conservs depuis longtemps et qui ont cristallis sont extrmement instables et peuvent exploser. Lacide perchlorique, qui sche sur des surfaces de bois, sur des matriaux de construction ou du tissu explose et senamme sous leffet dun choc. Lacide picrique et les picrates dtonnent sous leffet de la chaleur et des chocs. Renversement accidentel de produits chimiques La plupart des fabricants de produits chimiques pour laboratoires fournissent des afches indiquant la conduite tenir en cas de renversement de divers produits. Ces afches ainsi que le matriel et les produits utiliser en pareil cas se trouvent galement dans le commerce. Elles devront tre apposes bien en vue dans le laboratoire. Le matriel suivant doit galement tre fourni :
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17. LES RISQUES CHIMIQUES
1. Ncessaires pour traiter les produits rpandus 2. Vtements protecteurs, tels que gants en caoutchouc pais, surchaussures ou bottes en caoutchouc, masques respiratoires 3. Pelles et copes 4. Pinces pour saisir les morceaux de verre 5. Serpillires, linges et serviettes en papier 6. Seaux 7. Carbonate de sodium (Na2CO3) ou monohydrognocarbonate de sodium (bicarbonate, NaHCO3) pour neutraliser les acides et les produits corrosifs 8. Sable (pour recouvrir les bases rpandues) 9. Dtergent non inammable. En cas de renversement important dun produit chimique, procder de la manire suivante : 1. Prvenir le dlgu la scurit comptent. 2. Faire vacuer le personnel qui nest pas indispensable. 3. Donner des soins aux personnes qui ont pu tre contamines. 4. Si le produit rpandu est inammable, teindre toutes les ammes nues, fermer larrive de gaz dans la salle et les zones voisines, ouvrir les fentres (si possible) et dbrancher les appareils lectriques susceptibles de produire des tincelles. 5. Eviter de respirer les vapeurs mises par le produit rpandu. 6. Ventiler les locaux en chassant lair vers lextrieur, si lopration est sans danger. 7. Se procurer le matriel ncessaire pour nettoyer (voir ci-dessus). Gaz comprims et liqus Le tableau 14 donne des conseils pour le stockage des gaz liqus et comprims.
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Tableau 14. Stockage des gaz liqus et comprims

BOUTEILLE CONSEILS POUR LE STOCKAGE
Bouteilles de gaz comprims Doivent tre solidement attaches (avec une chane par ex.) et conteneurs un mur ou une paillasse solide de faon ne pas tre de gaz liqusa,b dplaces par inadvertance. Doivent tre transportes munies de leur bouchon protecteur, au moyen dun chariot. Si elles sont en grande quantit, doivent tre entreposes dansun btiment appropri distance du laboratoire. Cette rserve doit tre ferme clef et identie par un panneau. Ne doivent pas tre places proximit dun radiateur, de ammes nues ou dautres sources de chaleur, ni de matriel lectrique producteur dtincelles, ni directement exposes au soleil. Petites cartouches de gaz usage uniquea,b
a
Ne doivent pas tre incinres.
La vanne haute pression principale doit tre ferme lorsque la bouteille nest pas utilise et que la salle est inoccupe. Les pices dans lesquelles on utilise ou entrepose des bouteilles de gaz inammables doivent tre identies par des panneaux placs sur les portes.
Pour plus de plus amples informations, le lecteur est pri de consulter les rfrences 1 et 49 51 ainsi que lannexe 5.
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18. Autres types de risques au laboratoire
Le personnel de laboratoire peut tre expos des dangers lis diverses formes dnergie et notamment au feu, llectricit, aux rayonnements et au bruit. On trouvera dans ce chapitre, les donnes essentielles concernant chacun deux. Risque dincendie Il est essentiel quil y ait une collaboration troite entre les dlgus la scurit et les responsables locaux de la scurit incendie. Outre les risques de nature chimique, tout incendie prsente un risque de dissmination de matriel biologique infectieux quil faut prendre en compte, ventuellement pour dcider sil est prfrable dteindre lincendie ou de le circonscrire. Il est souhaitable de faire appel aux responsables locaux de la scurit incendie pour la formation du personnel de laboratoire la prvention, aux mesures immdiates prendre en cas de sinistre et lutilisation du matriel de lutte contre les incendies. Des panneaux, judicieusement placs bien en vidence dans chaque salle, dans les couloirs et les halls, devront mettre en garde le personnel et indiquer la conduite tenir ainsi que les issues de secours emprunter. Les causes les plus courantes dincendie au laboratoire sont les suivantes : 1. La surcharge lectrique 2. Le mauvais entretien du circuit lectrique, par ex. une isolation dfectueuse ou en mauvais tat 3. La longueur excessive des tuyaux de gaz et des rallonges lectriques 4. Les appareils laisss allums inutilement 5. Des appareils ou quipements qui nont pas t conus pour une utilisation en laboratoire 6. Les ammes nues 7. Des tuyaux de gaz endommags 8. Des ngligences dans la manipulation et lentreposage des produits inammables ou explosifs 9. Des ngligences dans la sparation des substances chimiques incompatibles 10. La prsence dappareils ou dquipements produisant des tincelles proximit de produits ou de vapeurs inammables 11. Une ventilation mal adapte ou insufsante.
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Tableau 15. Les divers types dextincteurs et leur usage

TYPE UTILISER SUR NE PAS UTILISER SUR
Eau
Papier, bois, tissu
Feux dorigine lectrique, liquides inammables, mtaux incandescents Mtaux alcalins, papier
Dioxyde de carbone (CO2) Gaz extincteurs Poudre
Liquides et gaz inammables, feux dorigine lectrique Liquides et gaz inammables, mtaux alcalins, feux dorigine lectrique Liquides inammables
Instruments et matriel rutilisables car les rsidus sont trs difciles liminer Feux dorigine lectrique
Mousse
Le matriel de lutte anti-incendie doit tre plac proximit des portes des salles et en divers points stratgiques des couloirs et des halls. Ce matriel peut consister en tuyaux souples, seaux ( eau ou sable) et extincteurs. Les extincteurs doivent tre rgulirement vris et entretenus et on veillera ce quils ne soient pas prims. Les divers types dextincteurs et leur usage sont indiqus dans le tableau 15. Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de consulter la rfrence 49. Risques lectriques Il est essentiel que toutes les installations et lappareillage lectriques soient vris et contrls rgulirement, y compris la mise la terre. Des disjoncteurs et notamment des disjoncteurs diffrentiels doivent tre installs sur les circuits lectriques des laboratoires. Les disjoncteurs ne protgent pas les personnes; leur rle est de protger les circuits dune surcharge et, par consquent, dviter les incendies. Les disjoncteurs diffrentiels sont eux destins protger les personnes des chocs lectriques. Tout lappareillage lectrique du laboratoire doit tre reli la terre, au moyen de prises de terre, de prfrence. La totalit des appareils et circuits lectriques du laboratoire doit tre conforme aux normes nationales de scurit lectrique. Bruit Les effets dune exposition durable un bruit excessif sont insidieux. Certains appareils de laboratoire, comme par exemple certains types de lasers ou encore les installations qui abritent des animaux, peuvent entraner une importante exposition de ce genre. On peut procder des mesures acoustiques pour dterminer le risque dexposition au bruit. Si les donnes obtenues le justient, on pourra envisager des
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18. AUTRES TYPES DE RISQUES AU LABORATOIRE
mesures techniques telles que lencoffrage des quipements bruyants ou la pose de barrires ou dcrans anti-bruit autour de ces quipments ou entre les zones bruyantes et les autres zones de travail. Si lon ne peut pas rduire le niveau de bruit et que le personnel soit expos en permanence un bruit excessif, il faudra mettre en place un programme de protection auditive prvoyant le port doreillettes de protection pour les travaux en ambiance bruyante ainsi quune surveillance mdicale du personnel pour dterminer les effets de cette nuisance. Rayonnements ionisants La radioprotection a pour but de mettre les sujets humains labri des effets nocifs des rayonnements ionisants, effets qui consistent notamment : 1. En effets somatiques, par ex. des symptmes cliniques observables chez les sujets exposs. Il sagit en particulier de cancers radio-induits, par exemple des leucmies ou encore des cancers osseux, pulmonaires ou cutans, qui peuvent napparatre que plusieurs annes aprs lirradiation. Dautres effets moins graves peuvent consister en petites lsions cutanes, alopcie, anomalies sanguines, lsions des voies digestives ou cataracte. 2. En effets hrditaires, par ex. des symptmes qui sobservent dans la descendance des sujets exposs. Les effets hrditaires de lirradiation des gonades consistent notamment en anomalies chromosomiques ou mutations gniques. Lirradiation forte dose des cellules germinales prsentes dans les gonades peut galement entraner la mort cellulaire, avec pour consquence des troubles de la fertilit chez les deux sexes et une modication du cycle menstruel chez la femme. Une exposition du ftus pendant son dveloppement, en particulier entre la huitime et la quinzime semaine de la grossesse, peut accrotre le risque de malformations congnitales, darriration mentale ou de cancers radio-induits plus tard dans la vie.
Les principes de la radioprotection contre les rayonnements ionisants
Pour limiter les effets nocifs des rayonnements ionisants, il faut rglementer lutilisation des radio-isotopes, qui doit toujours respecter les normes nationales en la matire. La mise en uvre de la radioprotection repose sur quatre principes : 1. Rduire le plus possible la dure dexposition 2. Se tenir le plus loin possible de la source de rayonnement 3. Disposer un blindage autour de la source de rayonnement 4. Substituer aux radionuclides dautres techniques non radiomtriques. Les mesures de protection sont les suivantes : 1. Dure dexposition. On peut rduire la dure dexposition au cours des manipulations de substances radioactives : En sexerant pratiquer les techniques nouvelles et non familires sans utiliser de radionuclide jusqu ce quon les matrise parfaitement
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En utilisant les radionuclides en temps voulu, avec prudence et sans prcipitation En veillant ce quune fois utilises, toutes les sources radioactives soient immdiatement replaces dans leur lieu de stockage En liminant frquemment du laboratoire les dchets radioactifs En passant le moins de temps possible dans la zone ou dans le laboratoire o il y a risque dirradiation En sexerant bien grer et planier les manipulations de substances radioactives et leur dure. Moins on passe de temps dans le champ dirradiation, plus la dose reue individuellement est faible, comme le montre lquation suivante :
Dose = Dbit de dose temps
2. Distance la source. Pour la plupart des rayonnements g ou X, le dbit de dose varie comme linverse du carr de la distance une source ponctuelle :
Dbit de dose = Constante 1 distance 2

On voit donc que si on double la distance entre la source de rayonnement et loprateur, lexposition sera divise par quatre au cours de la mme dure. On utilise divers dispositifs et systmes mcaniques pour augmenter la distance entre loprateur et la source, par ex. des pinces de divers types et notamment long manche ainsi que des dispositifs pour le pipettage distance. A noter quune petite augmentation de la distance peut se traduire par une rduction non ngligeable du dbit de dose. 3. Blindage. En plaant entre la source et loprateur ou les autres membre du personnel des crans capables dabsorber lnergie rayonne ou de lattnuer, on peut limiter leur exposition. Le choix du type dcran et de son paisseur dpend de la capacit de pntration du rayonnement (cest-a-dire de sa nature et de son nergie). Des crans en rsine acrylique, en bois ou en mtal lger, dune paisseur de 1,3 1,5 cm protgent contre les particules b trs nergtiques, mais pour protger contre le rayonnement g ou X de haute nergie, il est ncessaire dutiliser des crans au plomb de densit leve. 4. Substitution. Il ne faut pas utiliser de radionuclides sil existe dautres techniques. Si lon ne peut pas substituer une autre technique une mthode radio-isotopique, il faudra utiliser le radionuclide dont le rayonnement soit le moins pntrant ou le moins nergtique possible.
Rgles de scurit pour le travail avec des radionuclides
Il y a quatre types de rgles pour le travail avec des substances radioactives, savoir : 1. Celles qui concernent la zone dirradiation
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En utilisant les radionuclides en temps voulu, avec prudence et sans prcipitation En veillant ce quune fois utilises, toutes les sources radioactives soient immdiatement replaces dans leur lieu de stockage En liminant frquemment du laboratoire les dchets radioactifs En passant le moins de temps possible dans la zone ou dans le laboratoire o il y a risque dirradiation En sexerant bien grer et planier les manipulations de substances radioactives et leur dure. Moins on passe de temps dans le champ dirradiation, plus la dose reue individuellement est faible, comme le montre lquation suivante :
2. Distance la source. Pour la plupart des rayonnements g ou X, le dbit de dose varie comme linverse du carr de la distance une source ponctuelle :
On voit donc que si on double la distance entre la source de rayonnement et loprateur, lexposition sera divise par quatre au cours de la mme dure. On utilise divers dispositifs et systmes mcaniques pour augmenter la distance entre loprateur et la source, par ex. des pinces de divers types et notamment long manche ainsi que des dispositifs pour le pipettage distance. A noter quune petite augmentation de la distance peut se traduire par une rduction non ngligeable du dbit de dose. 3. Blindage. En plaant entre la source et loprateur ou les autres membre du personnel des crans capables dabsorber lnergie rayonne ou de lattnuer, on peut limiter leur exposition. Le choix du type dcran et de son paisseur dpend de la capacit de pntration du rayonnement (cest-a-dire de sa nature et de son nergie). Des crans en rsine acrylique, en bois ou en mtal lger, dune paisseur de 1,3 1,5 cm protgent contre les particules b trs nergtiques, mais pour protger contre le rayonnement g ou X de haute nergie, il est ncessaire dutiliser des crans au plomb de densit leve. 4. Substitution. Il ne faut pas utiliser de radionuclides sil existe dautres techniques. Si lon ne peut pas substituer une autre technique une mthode radio-isotopique, il faudra utiliser le radionuclide dont le rayonnement soit le moins pntrant ou le moins nergtique possible.
Rgles de scurit pour le travail avec des radionuclides
Il y a quatre types de rgles pour le travail avec des substances radioactives, savoir : 1. Celles qui concernent la zone dirradiation

18. AUTRES TYPES DE RISQUES AU LABORATOIRE
Figure 12. Symbole international indiquant un risque dirradiation
ATTENTION
RADIOACTIVITE
2. Celles qui concerne la paillasse o seffectue la manipulation 3. Celles qui concernent la gestion des dchets 4. Celles qui concernent les dossiers et la conduite tenir en situation durgence. Parmi les rgles les plus importantes, on peut citer les suivantes : 1. Zone dirradiation Nutiliser de substances radioactives que dans les zones spcialement destines cet usage. Seul le personnel indispensable doit tre prsent. Porter un quipement protecteur individuel, notamment une tenue de laboratoire approprie, des lunettes de scurit et des gants jetables. Porter un dosimtre personnel pour la surveillance de lexposition au rayonnement. Les laboratoires o sont manipuls des radionuclides doivent tre conus de manire ce que le connement, le nettoyage et la dcontamination soient simplis. La zone de travail sur les radionuclides doit tre situe dans une pice de petites dimensions contigu au laboratoire principal ou dans un secteur spcial de celui-ci, distance des autres zones de travail. Des panneaux portant le symbole international de risque dirradiation doivent tre apposs lentre de la zone dirradiation (gure 12). 2. Paillasse o seffectue la manipulation Utiliser des plateaux contenant des matriaux absorbants jetables pour recueillir les liquides rpandus. Limiter la quantit de radionuclide utilise. Disposer un cran de protection autour des sources de rayonnement, de la paillasse et des secteurs o sont placs les dchets radioactifs. Marquer le symbole de radioactivit sur les conteneurs de produits radioactifs en indiquant galement la nature du radionuclide, son activit et la date de la mesure.
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Utiliser des radiodosimtres pour le contrle des zones de travail, des vtements protecteurs et des mains une fois le travail achev. Utiliser des conteneurs de transport correctement blinds. 3. Dchets radioactifs Eliminer frquemment les dchets radioactifs de la zone de travail. 4. Dossiers et conduite tenir en situation durgence Tenir un registre exact de lutilisation et de llimination des produits radioactifs. Compulser les dossiers dosimtriques la recherche dun dpassement ventuel de la dose limite pour certains produits. Mettre au point des plans daction en cas de situation durgence et faire procder rgulirement des exercices. En cas durgence, soccuper en premier lieu des accidents. Nettoyer fond les zones contamines. En cas de ncessit, demander laide des services de scurit. Rdiger un rapport en cas dincident et larchiver.
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PARTIE VII
La scurit : organisation et formation
19. Le responsable de la scurit et le comit de scurit
Il est indispensable que tout laboratoire ait un rglement de scurit dtaill, un manuel de scurit et un programme pour leur mise en application. La responsabilit en incombe normalement au directeur ou au chef de ltablissement ou du laboratoire, lequel peut cependant dlguer certaines tches un responsable de la scurit (dlgu la scurit) ou dautres membres comptents du personnel. La scurit au laboratoire est galement laffaire de tous, quil sagisse des chefs de service ou de leurs subordonns, et chaque membre du personnel est responsable de sa scurit et de celle de ses collgues. Chacun est tenu de travailler dans le respect des rgles de scurit et doit rendre compte son suprieur hirarchique de toute action ou situation qui y contreviendraient ainsi que de tout incident. Il est souhaitable de charger des consultants extrieurs ou des membres du personnel de procder des audits priodiques sur les conditions de scurit. Le dlgu la scurit Dans la mesure du possible, on nommera un responsable de la scurit biologique qui sera charg de veiller ce que le rglement et les programmes de scurit soient systmatiquement respects partout dans le laboratoire. Cest le dlgu la scurit qui remplit ces obligations au nom du directeur de ltablissement ou du laboratoire. Dans les petites units, le dlgu la scurit peut tre un microbiologiste ou un membre du personnel technique, qui assure ces fonctions temps partiel dans des conditions dtermines. Quelle que soit la part dactivit consacre la scurit, la personne dsigne doit possder les comptences professionnelles requises pour proposer, examiner ou approuver les mesures prendre dans le prolongement des oprations de connement ou de scurit biologiques. Le dlgu la scurit doit faire appliquer la rglementation et les directives nationales et internationales en matire de scurit biologique et aider le laboratoire tablir des mthodes de travail normalises. Il doit avoir une formation technique en microbiologie et en biochimie avec des connaissances de base en sciences physiques et en biologie. Il est galement tout fait souhaitable que le dlgu la scurit connaisse bien les pratiques et les rgles de scurit au laboratoire et dans le domaine clinique, notamment en ce qui concerne le connement du matriel biologique et les principes techniques relatifs la conception, au fonctionnement et la maintenance des installations. Il doit galement
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tre capable de communiquer efcacement avec le personnel administratif et technique ainsi quavec le personnel de maintenance et de nettoyage. Les tches du dlgu la scurit consisteront notamment : 1. Procder des consultations sur la conformit aux rgles de scurit et de sret biologiques ainsi quaux impratifs techniques. 2. Organiser des audits de bioscurit internes priodiques,sur les techniques,les modes opratoires et les protocoles, les agents biologiques, le matriel et lquipement. 3. Sentretenir avec les personnes concernes des infractions aux consignes et protocoles de scurit biologique. 4. Vrier auprs de tous les membres du personnel que ceux-ci ont reu une formation approprie en matire de scurit biologique. 5. Assurer une formation continue en matire de scurit biologique. 6. Enquter aprs tout incident d la dissmination ventuelle de matriel, potentiellement infectieux ou toxique, rendre compte des rsultats au directeur du laboratoire et au comit de scurit biologique en leur faisant des recommandations appropries. 7. Cooprer avec le service mdical touchant la possibilit dinfections contractes par le personnel du laboratoire dans lexercice de ses activits. 8. Veiller ce que la dcontamination soit correctement effectue aprs renversement accidentel de liquides ou autres incidents survenus avec du matriel infectieux. 9. Veiller la bonne gestion des dchets. 10. Veiller ce que tout appareil ou quipement soit convenablement dcontamin avant une rparation ou un contrle. 11. Sensibiliser le personnel aux attitudes de la collectivit vis--vis des questions touchant la sant et lenvironnement. 12. Etablir la marche suivre approprie pour limportation et lexportation par le laboratoire de matriel biologique pathogne, en conformit avec la rglementation nationale. 13. Analyser, sous langle de la scurit, tous les plans, protocoles et modes opratoires utiliss dans les travaux de recherche. 14. Etablir un systme pour faire face aux situations durgence. Le comit de scurit biologique Il convient de constituer un comit de scurit biologique dont le rle sera de dnir la politique de ltablissement en matire de scurit biologique et dlaborer un code de bonnes pratiques. Le comit doit galement examiner les protocoles de recherche comportant la manipulation dagents infectieux, lutilisation danimaux, la mise en uvre de techniques de recombinaison de lADN ou lutilisation dorganismes gntiquement modis. Le comit pourra galement avoir pour fonctions dvaluer les risques, dlaborer un nouveau rglement en matire de scurit biologique et darbitrer les conits sur les questions de scurit.
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19. LE RESPONSABLE DE LA SCURIT ET LE COMIT DE SCURIT
La composition dun comit de scurit doit tre reprsentative des diverses branches professionnelles de ltablissement ainsi que de ses spcialits scientiques. La composition dun comit de scurit devrait, au minimum, tre la suivante : 1. Un ou plusieurs dlgus la scurit 2. Des scientiques 3. Du personnel mdical 4. Un ou plusieurs vtrinaires (en cas dexprimentation animale) 5. Des reprsentants du personnel technique 6. Des reprsentants de la direction du laboratoire. Le comit de scurit biologique doit galement prendre conseil auprs des dlgus la scurit des divers services et des spcialistes de la scurit (par ex. de la radioprotection, de lhygine et scurit industrielles, de la lutte contre lincendie, etc.) et il pourra loccasion faire appel des spcialistes extrieurs de diffrents domaines apparents, aux autorits locales et aux organismes nationaux de rglementation. Lorsquun protocole particulirement sensible ou litigieux est en discussion, il peut galement tre utile davoir lavis de membres de la communaut.
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20. La scurit du personnel de maintenance et dentretien
Le bon fonctionnement dun laboratoire et sa scurit reposent dans une large mesure sur le personnel de maintenance et dentretien et il est donc essentiel quil reoive la formation voulue aux questions de scurit. Services de maintenance des appareils et des btiments Les ingnieurs et les ouvriers qualis qui assurent la maintenance et la rparation des btiments, des installations et de lappareillage doivent avoir une certaine connaissance des activits du laboratoire ainsi que des rgles et consignes de scurit. Lessai des appareils aprs rvision, par exemple les contrles defcacit des enceintes de scurit biologique aprs le remplacement des ltres pourra tre con au dlgu la scurit biologique ou effectu sous sa direction. Les tablissements et laboratoires qui ne disposent pas de leurs propres services techniques de maintenance doivent entretenir de bonnes relations avec les prestataires de services locaux et les familiariser avec leurs quipements et leurs activits. Les ingnieurs et le personnel de maintenance ne doivent pas pntrer dans des laboratoires de connement scurit biologique niveaux 3 ou 4 sans une autorisation dlivre par le dlgu la scurit ou le chef de laboratoire ou sans leur surveillance. Nettoyage Dans les laboratoires de connement scurit biologique niveau 3 ou de connement de haute scurit scurit biologique niveau 4, le nettoyage doit tre fait par le personnel du laboratoire. Dans le cas contraire, lquipe de nettoyage ne doit intervenir dans ces laboratoires quavec lautorisation du dlgu la scurit biologique ou du chef de laboratoire ou sous leur surveillance.
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21. Programmes de formation
Une formation continue en cours demploi est indispensable pour maintenir la sensibilisation aux questions de scurit parmi le personnel de laboratoire et le personnel de maintenance ou dentretien. Il appartient aux chefs de laboratoire, avec laide du dlgu la scurit et dautres personnes comptentes, dassurer la formation du personnel. Lefcacit de cette formation, comme dailleurs de toute formation en sant et scurit au travail, dpend dun certain nombre de facteurs : engagement de la Direction, motivations des uns et des autres, bonne formation professionnelle initiale, bonne communication interpersonnelle et en n de compte, buts et objectifs de ltablissement. Les points ci-dessous sont essentiels pour lefcacit du programme de formation la scurit biologique. 1. Evaluer les besoins. Il sagit par l de dnir les tches accomplir, par ordre dimportance (eu gard leur frquence, ncessit et complexit) et dtail des oprations ncessaires leur ralisation. 2. Fixer les objectifs de la formation. Cest--dire les comportements observables que le personnel est suppos adopter dans son travail lissue de sa formation. Ces objectifs pourront tre xs en tenant compte des conditions dans lesquelles le personnel effectue certaines activits ou adopte certaines attitudes et du niveau de comptence exig. 3. Prciser le contenu de la formation et les moyens pdagogiques utiliss. On entend par contenu de la formation les connaissances ou comptences que le personnel doit acqurir pour atteindre les objectifs xs en matire de comportement. Ce sont les personnes qui connaissent le type de travail et ses exigences qui sont le mieux mme de dnir le contenu du programme de formation la scurit biologique. On peut galement insister sur les rsultats dexercices consistant rsoudre divers problmes ou mettre au point un systme dapprentissage pour corriger les erreurs commises par le personnel dans lutilisation dune technique donne. Il nest pas certain quil existe une mthode pdagogique (confrences, enseignement tlvis, enseignement assist par ordinateur, vido interactive, etc.) qui soit meilleure que les autres. Les besoins particuliers du personnel en formation, la composition du groupe, etc. jouent cet gard un rle trs important. 4. Prendre en compte les aptitudes individuelles lapprentissage. Une formation bien pense doit prendre en compte les caractristiques et particularits des individus. Chaque individu ou groupe dindividus peut diffrer par ses aptitudes, son
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bagage, sa culture, la langue dans laquelle il sexprime et son niveau de comptence avant formation. La mthode utilise pourra tre dicte par le jugement que les personnes en formation portent sur la manire dont le programme peut amliorer leur comptence professionnelle et leur scurit personnelle. Par exemple, certains individus ont une approche visuelle ou plutt pratique de lapprentissage, alors que dautres prfrent travailler sur des documents crits. Il faut galement tre lcoute de tout besoin particulier exprim par les personnes en formation; par exemple adapter les cours pour les malentendants. Outre la prise en compte de tous ces aspects, il est recommand toute personne qui prpare un programme de formation la scurit de se familiariser avec les principes de la formation des adultes. 5. Prciser les conditions de lapprentissage. Aucun lment de la formation, quil sagisse dun cours, dune vidocassette que lon visionne ou de documents crits que lon consulte, ne doit tre en contradiction ou sans rapport avec lapprentissage de la technique ou de la question enseigne ou encore provoquer un blocage de cet apprentissage. Par exemple, si le but de la formation est damliorer laptitude rsoudre des problmes, la mthode pdagogique doit privilgier la rexion et le raisonnement plutt que la mmorisation pure et simple. La formation dispense doit requrir des apprenants quils se montrent productifs et ragissent de manire approprie (rponse positive, exacte ou crdible). En outre, tout lment de la formation qui fournit une occasion dapplication pratique dans des conditions analogues celles du poste de travail facilitera la mise en uvre en situation relle de la comptence acquise par lapprenant. 6. Evaluer la formation. Elle a pour but de fournir des informations qui permettront de savoir si linstruction dispense a atteint son but. Cette valuation se fait gnralement de quatre manires : mesure de la raction de lapprenant la formation dispense mesure du degr de restitution dont lapprenant est capable ou de ses rsultats apprciation des changements de comportement dans le poste de travail recherche et valuation de rsultats tangibles par rapport aux buts et objectifs de ltablissement. Pour procder une valuation exhaustive de la formation, il faut rpondre ces quatre points. Le mode dvaluation le moins efcace consiste ne prendre en considration que les ractions de lapprenant linstruction dispense car elles peuvent tre sans vritable rapport avec ce qui a t effectivement appris. Il ne faut en aucun cas utiliser cette mthode comme seule mesure de lefcacit de la formation. 7. Rviser la formation. Du fait de la multiplicit des critres de mesure des rsultats, il est rare quune valuation conduise la conclusion que le programme de formation est un succs ou un chec total. En gnral, les rsultats de lvaluation indiquent que certaines parties du cours ont t mieux comprises, retenues ou
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21. PROGRAMMES DE FORMATION
appliques que dautres. Si, la suite dun programme de formation, on constate des hauts et des bas ou des lacunes dans les connaissances ou les comptences souhaites, cest peut-tre le signe quil faut envisager de prolonger la formation, de changer de mthodes pdagogiques ou de recruter des formateurs plus comptents. LOMS peut fournir divers outils pour la formation la scurit microbiologique.
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PARTIE VIII
Liste des contrles de scurit
22. Liste des contrles de scurit
Cette liste est destine faciliter lvaluation du degr de scurit et de sret microbiologiques dans les laboratoires biomdicaux. Locaux 1. Les principes directeurs relatifs la mise en service et lagrment du laboratoire ont-ils t pris en compte pour la construction des installations ou les expertises ultrieures ? 2. Les locaux sont-ils conformes la rglementation nationale et locale en matire de travaux publics, notamment en ce qui concerne la rsistance aux catastrophes naturelles ? 3. Les locaux sont-ils gnralement en bon ordre et non encombrs ? 4. Sont-ils propres ? 5. Y a t-il des dfauts de structure au niveau des sols ? 6. Les sols et les marches descaliers sont-ils rguliers et antidrapants ? 7. Est-ce que lespace est sufsant pour pouvoir travailler sans danger ? 8. Est-ce que les dgagements et les couloirs sont assez larges pour le passage du personnel et des gros appareils ? 9. Les paillasses et autres plans de travail, le mobilier et les installations sont-ils en bon tat ? 10. La surface des paillasses et autres plans de travail est-elle rsistante aux solvants et aux produits chimiques corrosifs ? 11. Y a-t-il un lavabo dans chaque salle du laboratoire ? 12. Est-ce que la construction et lentretien des locaux permettent dempcher lentre et linstallation de rongeurs ou darthropodes ? 13. Est-ce que toutes les conduites deau chaude ou de vapeur apparentes sont isoles ou protges pour que le personnel ne se brle pas ? 14. Le laboratoire dispose-t-il dun groupe lectrogne pour assurer le relais en cas de panne lectrique ? 15. Laccs aux locaux du laboratoire peut-il tre limit aux seules personnes autorises ? 16. A-t-on procd une valuation du risque pour sassurer que le laboratoire dispose des installations et quipements voulus pour lexcution de ses tches ?
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Entreposage 1. Les systmes dentreposage et de rangement (tagres, etc.) sont-ils conus pour que le matriel entrepos ne puisse ni glisser, ni se renverser, ni tomber ? 2. Les aires dentreposage sont-elles encombres de dbris, dobjets inutiles et inutilisables sur lesquels on pourrait trbucher, qui pourraient prendre feu ou hberger de la vermine ? 3. Les conglateurs et aires dentreposage peuvent-ils tre ferms clef ? Assainissement et locaux pour le personnel 1. Les locaux sont-ils propres, bien tenus et dans de bonnes conditions dhygine ? 2. Dispose-t-on deau potable ? 3. Y a-t-il des toilettes et les lavabos spars pour les hommes et les femmes et sontils satisfaisants et propres ? 4. Y trouve-t-on de leau chaude et froide, du savon et des essuie-mains ? 5. Les vestiaires sont-ils spars pour les hommes et pour les femmes ? 6. Chaque membre du personnel peut-il laisser ses vtements de ville dans un endroit prvu cet effet (armoires, par ex.) ? 7. Une pice est-elle rserve au personnel pour le djeuner, etc. ? 8. Le niveau sonore est-il acceptable ? 9. Le ramassage des poubelles contenant les dchets ordinaires est-il satisfaisant ? Chauffage et ventilation 1. La temprature du lieu de travail est-elle confortable ? 2. Y a-t-il des stores aux fentres situes en plein soleil ? 3. La ventilation est-elle satisfaisante (air renouvel par ex. au moins six fois par heure) en particulier dans les pices o elle est mcanique ? 4. Le systme de ventilation est-il muni de ltres HEPA ? 5. La ventilation mcanique perturbe-t-elle les ux laminaires lintrieur et autour des enceintes de scurit biologique et des hottes ou sorbonnes ? Eclairage 1. Lclairage gnral est-il satisfaisant (par ex. 300 400 lux) ? 2. Un clairage local est-il fourni au-dessus des paillasses ? 3. Les pices sont-elles partout bien claires ou subsiste-t-il des coins sombres dans les pices et les couloirs ? 4. Les tubes uorescents sont-ils parallles la surface des paillasses et des plans de travail ? 5. Les tubes uorescents ont-ils un spectre quilibr ? Services 1. Chaque salle du laboratoire est-elle quipe avec sufsamment dviers, de robinets deau et de gaz et de prises de courant pour que lon puisse travailler sans danger ?
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22. LISTE DES CONTRLES DE SCURIT
2. A-t-on mis en place un programme convenable dinspection et de maintenance pour les fusibles, les lampes et tubes, les cbles, les canalisations, etc. ? 3. Les pannes sont-elles rpares dans un dlai raisonnable ? 4. Existe-t-il un service technique interne charg de la maintenance avec des ingnieurs et des ouvriers comptents ayant une certaine connaissance des travaux qui sont effectus dans le laboratoire ? 5. Laccs de ce personnel technique de maintenance aux locaux du laboratoire est-il rglement et enregistr ? 6. Sil nexiste pas de service technique interne charg de la maintenance, a-t-on pris contact avec des ingnieurs et des constructeurs du lieu pour les familiariser avec lappareillage et les activits du laboratoire ? 7. Le laboratoire dispose-t-il dun service de nettoyage ? 8. Laccs de lquipe de nettoyage aux divers locaux du laboratoire est-il rglement et enregistr ? 9. Existe-t-il un service informatique et ce service est-il scuris ? Sret biologique en laboratoire 1. A-t-on procd une analyse qualitative des risques pouvant peser sur le laboratoire an de dterminer contre quels risques le laboratoire doit tre protg ? 2. A-t-on dni les risques acceptables et les paramtres pour la planication de la rponse aux incidents ? 3. Lorsquil ny a personne, le btiment est-il bien totalement ferm clef ? 4. Les portes et les fentres sont-elles construites pour rsister une effraction ? 5. Les pices contenant des matriels dangereux et des appareils coteux sont-elles fermes clef lorsquil ny a personne ? 6. Laccs ces pices, appareils et matriels est-il rglement et enregistr ? Prvention des incendies et protection contre le feu 1. Y a-t-il un systme dalarme incendie ? 2. Les portes coupe-feu sont-elles en bon tat ? 3. Le laboratoire dispose-t-il de dtecteurs dincendie et ces dtecteurs sont-ils en bon tat de marche et rgulirement vris ? 4. Les postes dalarme incendie sont-ils accessibles ? 5. Les sorties sont-elles toutes indiques par un panneau lumineux adquat ? 6. Laccs aux sorties est-il indiqu lorsquil nest pas directement visible ? 7. Toutes les sorties sont-elles dgages et non dissimules ou encombres par des lments dcoratifs, du mobilier ou des appareils et les portes sont-elles dverrouilles lorsque le btiment est occup ? 8. Laccs aux sorties est-il prvu pour que lon puisse fuir sans avoir traverser une zone haut risque ? 9. Les sorties dbouchent-elles toutes lextrieur ?
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10. Les couloirs, dgagements, passages, etc. sont-ils libres et dgags pour permettre la circulation du personnel et du matriel de lutte anti-incendie ? 11. Le matriel et les quipements de lutte anti-incendie sont-ils facilement identiables par un code de couleur appropri ? 12. Existe-t-il des extincteurs portatifs toujours pleins, en bon tat et la place prvue ? 13. Les salles du laboratoire o existe un risque dincendie sont-elles quipes dextincteurs et de couvertures anti-feu utilisables en cas durgence ? 14. Si des gaz ou des liquides inammables sont utiliss dans une pice, la ventilation mcanique est-elle sufsante pour liminer les vapeurs avant quelles natteignent une concentration dangereuse ? 15. A-t-on appris au personnel comment se comporter en cas dincendie ? Stockage des liquides inammables 1. Est-ce que les rserves de liquides inammables sont stockes dans un endroit spar du btiment principal ? 2. Un panneau de risque incendie est-il visiblement appos lentre du local ? 3. Le local est-il quip dun systme de ventilation naturelle ou force distinct du btiment principal ? 4. Les interrupteurs lectriques sont-ils antidagrants ou placs lextrieur du btiment ? 5. Le systme dclairage du local est-il antidagrant pour que les vapeurs ne risquent pas de senammer au contact des tincelles ? 6. Les liquides inammables sont-ils conservs dans des rcipients ventils appropris, fabriqus avec des matriaux incombustibles ? 7. Le contenu des rcipients est-il correctement indiqu sur ltiquette ? 8. Des extincteurs ou des couvertures anti-feu appropris sont-ils placs lextrieur, mais proximit de la rserve de liquides inammables ? 9. Des panneaux Dfense de fumer sont-ils apposs bien visiblement lintrieur et lextrieur de la rserve ? 10. Est-ce que la quantit de produits inammables conservs dans les salles du laboratoire est la plus faible possible ? 11. Ces produits sont-ils conservs dans des armoires de scurit anti-feu ? 12. Ces armoires portent-elles des panneaux indiquant la prsence de produits inammables et un risque dincendie ? 13. Le personnel a-t-il appris transporter et utiliser correctement les liquides inammables ? Gaz comprims et liqus 1. Chaque bouteille de gaz portable est-elle tiquete correctement (code de couleur et contenu) ? 2. Le bon tat des bouteilles de gaz et de leurs manodtendeurs est-il rgulirement vri ?
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3. Les manodtendeurs sont-ils rgulirement entretenus ? 4. Quand une bouteille est utilise, se sert-on dun manodtendeur ? 5. Quand les bouteilles ne sont pas utilises ou sont transportes, sont-elles fermes par un bouchon protecteur ? 6. Toutes les bouteilles de gaz comprims sont-elles ranges de manire ne pas pouvoir tomber, notamment en cas de catastrophe naturelle ? 7. Les bouteilles et les fts de gaz de ptrole liqu sont-ils placs loin des sources de chaleur ? 8. Le personnel a-t-il appris utiliser et transporter correctement les gaz comprims ou liqus ? Risques lectriques 1. Toutes les installations neuves, remplaces, modies ou rpares sont-elles conformes aux normes nationales en matire de scurit lectrique et maintenues telles ? 2. Le cblage intrieur des btiments est-il reli la terre ? 3. Tous les circuits du laboratoire sont-ils munis de disjoncteurs et de disjoncteurs diffrentiels ? 4. Les appareils lectriques sont-ils tous agrs par un laboratoire dessai ? 5. Les cbles dalimentation souples de tous les appareils sont-ils aussi courts que possible, en bon tat, sans usure, dommage ou raccord ? 6. Chaque prise nest-elle utilise que pour un seul appareil (pas dadaptateurs) ? Protection individuelle 1. Tous les membres du personnel du laboratoire disposent-ils de vtements protecteurs dont le modle et ltoffe ou le matriau sont approuvs, tels que blouses, sarraus, combinaisons, tabliers ou gants ? 2. Le personnel qui travaille sur des produits chimiques dangereux ou sur des substances radioactives ou cancrognes dispose-t-il daccessoires de protection supplmentaires tels que tabliers et gants de caoutchouc pour la manipulation des produits chimiques et le traitement des liquides rpandus ou gants rsistants la chaleur pour le dchargement des autoclaves et des fours ? 3. Le personnel dispose-t-il de lunettes de scurit, de lunettes coques et dcrans faciaux (visires) ? 4. Existe-t-il des postes pour le rinage des yeux ? 5. Existe-t-il des douches durgence ? 6. Les mesures de radioprotection sont-elles conformes aux normes nationales et internationales, et comportent-elles la fourniture de dosimtres individuels ? 7. Le laboratoire dispose-t-il de masques respiratoires rgulirement nettoys, dsinfects, vris et rangs de manire hyginique dans un endroit propre ? 8. Les masques respiratoires sont-ils dots des cartouches ltrantes de modle appropri, notamment de ltres HEPA pour retenir les micro-organismes et de ltres spciaux pour les gaz ou les particules ?
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9. Vrie-t-on si les masques respiratoires sont bien adapts aux personnes qui doivent les porter ? Sant et scurit du personnel 1. Existe-t-il un service de mdecine du travail ? 2. Y a-t-il des armoires pharmacie ou trousses de premiers soins aux endroits adquats ? 3. Y a-t-il des secouristes qualis ? 4. Ces secouristes sont-ils forms pour les premiers soins correspondant aux dangers propres au laboratoire : contact avec des produits chimiques corrosifs, ingestion accidentelle de toxiques ou de matriel biologique infectieux ? 5. Le personnel qui ne travaille pas dans le laboratoire (nettoyage et administration) est-il inform des risques que reprsente le matriel biologique manipul ? 6. Des afches judicieusement places indiquent-elles o se trouvent les postes de premiers secours, les numros de tlphone des services durgence, etc. 7. Les femmes en ge de procrer sont-elles informes des consquences que peut avoir la manipulation de certains micro-organismes, substances cancrognes, mutagnes ou tratognes ? 8. A-t-on dit aux femmes en ge de procrer que si elles sont enceintes, ou pensent ltre, elles doivent prvenir le membre responsable du service mdical ou du personnel scientique, de faon que des mesures concernant leur travail puissent tre prises si ncessaire ? 9. Existe-t-il un programme de vaccination adapt au travail du laboratoire ? 10. Peut-on pratiquer des tests cutans ou existe-t-il un service de radiologie pour la surveillance mdicale du personnel qui travaille sur des matriels contenant des bacilles tuberculeux ou dautres matriels justiant ce genre de contrle ? 11. Existe-t-il un registre bien tenu des accidents et des maladies ? 12. Des panneaux de prvention des accidents et de mise en garde sont-ils utiliss pour rduire les accidents du travail ? 13. Le personnel est-il entran suivre les instructions appropries pour la scurit biologique ? 14. Le personnel du laboratoire est-il invit signaler les risques dexposition ? Appareils et quipements de laboratoire 1. Tous les appareils sont-ils agrs sur le plan de la scurit ? 2. Existe-t-il des protocoles pour la dcontamination du matriel avant la maintenance ? 3. Les enceintes de scurit biologique et les hottes ou sorbonnes sont-elles rgulirement vries et rvises ? 4. Les autoclaves et autres appareils fonctionnant sous pression sont-ils rgulirement inspects ?
148
5. Les rotors et les pots centrifuger sont-ils rgulirement inspects ? 6. Les ltres HEPA sont-ils rgulirement changs ? 7. Utilise-t-on des aiguilles hypodermiques au lieu de pipettes ? 8. La verrerie fle ou brche est-elle toujours jete et non rutilise ? 9. Existe-t-il des conteneurs de scurit pour le verre cass ? 10. Utilise-t-on du plastique plutt que du verre lorsque cest possible ? 11. Existe-t-il des conteneurs spciaux pour les objets tranchants ou pointus et sontils effectivement utiliss ? Matriel infectieux 1. Reoit-on les chantillons dans de bonnes conditions de scurit ? 2. Tient-on un registre des arrives de matriel biologique ? 3. Lemballage des chantillons est-il ouvert avec soin et prudence, en prvision dune casse ou dune fuite possibles ? 4. Porte-t-on des gants ou tout autre type de protection pour dfaire lemballage des chantillons ? 5. Le personnel a-t-il t form pour expdier les substances infectieuses conformment la rglementation nationale ou internationale ? 6. Les paillasses et plans de travail sont-ils propres et en ordre ? 7. Le matriel infectieux jet est-il limin tous les jours ou plus souvent, et conformment aux normes de scurit ? 8. Tous les membres du personnel sont-ils informs des mthodes utiliser pour le nettoyage aprs casse ou renversement accidentel de rcipients contenant des cultures ou du matriel biologique infectieux ? 9. Le fonctionnement des strilisateurs est-il vri au moyen dindicateurs chimiques, physiques ou biologiques ? 10. Est-il prvu de dcontaminer les centrifugeuses rgulirement ? 11. Dispose-t-on de pots tanches pour les centrifugeuses ? 12. Utilise-t-on les bons dsinfectants ? Sont-ils utiliss correctement ? 13. Y a-t-il une formation spciale pour le personnel qui travaille dans les laboratoires de connement scurit biologique niveau 3 et les laboratoires de connement haute scurit scurit biologique niveau 4 ? Produits chimiques et matires radioactives 1. Les produits chimiques incompatibles sont-ils bien entreposs ou manipuls sparment les uns des autres ? 2. Les produits chimiques sont-ils tous correctement tiquets, avec nom et mise en garde ? 3. Les panneaux de risque chimique sont-ils bien en vidence ? 4. Existe-t-il des ncessaires contenant le matriel voulu pour nettoyer les liquides rpandus accidentellement ?
149
5. Le personnel connat-il la conduite tenir en cas de renversement accidentel ? 6. Les produits inammables sont-ils entreposs correctement et en petite quantit dans des armoires agres ? 7. Dispose-t-on de portoirs pour les bouteilles ? 8. Y a-t-il un responsable de la radioprotection ou un manuel que lon puisse consulter ? 9. Le personnel a-t-il suivi une formation pour le travail avec des matires radioactives dans de bonnes conditions de scurit ? 10. Un registre des stocks et de lutilisation des matires radioactives existe-t-il et estil tenu correctement ? 11. Le laboratoire dispose-t-il dcrans de blindage pour la protection contre la radioactivit ? 12. La surveillance dosimtrique du personnel est-elle assure ?
150
PARTIE IX
Bibliographie, annexes et index
Bibliographie
1. Safety in health-care laboratories. Genve, Organisation mondiale de la Sant, 1997, (http://whqlibdoc.who.int/hq/1997/WHO_LAB_97.1.pdf). 2. Garner JS, Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Guideline for isolation precautions in hospitals. American Journal of Infection Control, 1996, 24:2452, (http://www.cdc.gov/ncidod/hip/isolat/isolat.htm). 3. Hunt GJ, Tabachnick WJ. Handling small arbovirus vectors safely during biosafety level 3 containment : Culicoides variipennis sonorensis (Diptera : Ceratopogonidae) and exotic bluetongue viruses. Journal of Medical Entomology, 1996, 33:271277. 4. National Research Council. Occupational health and safety in the care and use of research animals. Washington, DC, National Academy Press, 1997. 5. Richmond JY, Quimby F. Considerations for working safely with infectious disease agents in research animals. In : Zak O, Sande MA, eds. Handbook of animal models of infection. London, Academic Press, 1999:6974. 6. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 4th ed. Washington, DC, United States Department of Health and Human Services/Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health, 1999. 7. Class II (laminar ow) biohazard cabinetry. Ann Arbor, MI, National Sanitation Foundation, 2002 (NSF/ANSI 49-2002). 8. Richmond JY, McKinney RW. Primary containment for biohazards : selection, installation and use of biological safety cabinets, 2nd ed. Washington, DC, United States Department of Health and Human Services/Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health, 2000. 9. Microbiological safety cabinets. Recommendations for information to be exchanged between purchaser, vendor and installer and recommendations for installation. London, British Standards Institution, 1992 (Standard BS 5726-2:1992). 10. Microbiological safety cabinets. Recommendations for selection, use and maintenance. London, British Standards Institution, 1992 (Standard BS 5726-4:1992). 11. Biological containment cabinets (Class I and II) : installation and eld testing. Toronto, Canadian Standards Association, 1995 (Standard Z316.3-95 (R2000)). 12. Collins CH, Kennedy DA. Laboratory acquired infections : history, incidence, causes and prevention, 4th ed. Oxford, Butterworth-Heinemann, 1999. 13. Sant Canada. Lignes directrices en matire de bioscurit en laboratoire, 2e d., Ottawa, Ministre des Approvisionnements et Services Canada, 1996. 14. Biological safety cabinets biological safety cabinets (Class I) for personnel and environment protection. Sydney, Standards Australia International, 1994 (Standard AS 2252.1-1994). 15. Biological safety cabinets laminar ow biological safety cabinets (Class II) for personnel, environment and product protection. Sydney, Standards Australia International, 1994 (Standard AS 2252.2-1994).
153
16. Standards Australia/Standards New Zealand. Biological safety cabinets installation and use. Sydney, Standards Australia International, 2000 (Standard AS/NZS 2647:2000). 17. Advisory Committee on Dangerous Pathogens. Guidance on the use, testing and maintenance of laboratory and animal exible lm isolators. London, Health and Safety Executive, 1990. 18. Standards Australia/Standards New Zealand. Safety in laboratories microbiological aspects and containment facilities. Sydney, Standards Australia International, 2002 (Standard AS/NZS 2243.3:2002). 19. Centers for Disease Control and Prevention. Recommendations for prevention of HIV transmission in health-care settings. Morbidity and Mortality Weekly Report, 1987, 36 (Suppl. 2) :1S18S. 20. Bosque PJ et al. Prions in skeletal muscle. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2002, 99:38123817. 21. Bartz JC, Kincaid AE, Bessen RA. Rapid prion neuroinvasion following tongue infection. Journal of Virology, 2003, 77:583591. 22. Thomzig A et al. Widespread PrPSc accumulation in muscles of hamsters orally infected with scrapie. EMBO Reports, 2003, 4:530533. 23. Glatzel M et al. Extraneural pathologic prion protein in sporadic Creutzfeld-Jakob disease. New England Journal of Medicine, 2003, 349:18121820. 24. Brown P, Wolff A, Gajdusek DC. A simple and effective method for inactivating virus infectivity in formalin-xed tissue samples from patients with Creutzeld-Jakob disease. Neurology, 1990, 40:887890. 25. Taylor DM et al. The effect of formic acid on BSE and scrapie infectivity in xed and unxed brain-tissue. Veterinary Microbiology, 1997, 58:167174. 26. Safar J et al. Prions. In : Richmond JY, McKinney RW, eds. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 4th ed. Washington, DC, United States Department of Health and Human Services, 1999:134143. 27. Bellinger-Kawahara C et al. Puried scrapie prions resist inactivation by UV irradiation. Journal of Virology, 1987, 61:159166. 28. Health Services Advisory Committee. Safe working and the prevention of infection in clinical laboratories. London, HSE Books, 1991. 29. Russell AD, Hugo WB, Ayliffe GAJ. Disinfection, preservation and sterilization, 3rd ed. Oxford, Blackwell Scientic, 1999. 30. Ascenzi JM. Handbook of disinfectants and antiseptics. New York, NY, Marcel Dekker, 1996. 31. Block SS. Disinfection, sterilization & preservation, 5th ed. Philadelphia, PA, Lippincott Williams & Wilkins, 2001. 32. Rutala WA. APIC guideline for selection and use of disinfectants. 1994, 1995, and 1996 APIC Guidelines Committee. Association for Professionals in Infection Control and Epidemiology, INC. American Journal of Infection Control, 1996, 24:313342. 33. Sattar SA, Springthorpe VS, Rochon M. A product based on accelerated and stabilized hydrogen peroxide : evidence for broad-spectrum germicidal activity. Canadian Journal of Infection Control, 1998, 13:123130. 34. Schneider PM. Emerging low temperature sterilization technologies. In : Rutala WA, eds. Disinfection & sterilization in health care. Champlain, NY, Polyscience, 1997:7992. 35. Springthorpe VS. New chemical germicides. In : Rutala WA, eds. Disinfection & sterilization in health care. Champlain, NY, Polyscience, 1997:273280. 36. Steelman VM. Activity of sterilization processes and disinfectants against prions. In : Rutala WA, eds. Disinfection & sterilization in health care. Champlain, NY, Polyscience, 1997:255271.
154
BIBLIOGRAPHIE
37. Taylor DM. Transmissible degenerative encephalopathies : inactivation of the unconventional causal agents. In : Russell AD, Hugo WB, Ayliffe GAJ, eds. Disinfection, preservation and sterilization, 3rd ed. Oxford, Blackwell Scientic, 1999:222236. 38. Guide de prvention des infections : lavage des mains, nettoyage, dsinfection et strilisation dans les tablissements de sant, 2e d. Ottawa, Laboratoire de lutte contre la maladie, Bureau des maladies infectieuses, Sant Canada, 1998. 39. Springthorpe VS, Sattar SA. Chemical disinfection of virus-contaminated surfaces. CRC Critical Reviews in Environmental Control, 1990, 20:169229. 40. Recommandations relatives au transport des marchandises dangereuses, treizime dition rvise, New York et Genve, Nations Unies, 2003, (http://www.unece.org/trans/danger/ publi/unrec/rev13/13les_f.html). 41. Instructions techniques pour la scurit du transport arien des marchandises dangereuses, dition de 20032004. Montral, Organisation de lAviation civile internationale, 2002. 42. Comit des Transports Intrieurs de la Commission conomique pour lEurope. ADR restructur en vigueur le 1er Janvier 2003. New York et Genve, Nations Unies, 2002, (http://www.unece.org/trans/danger/publi/adr/adr2003/ContentsF.html). 43. Infectious substances shipping guidelines. Montreal, International Air Transport Association, 2003, (http://www.iata.org/ads/issg.htm). 44. Transport des substances infectieuses. Genve, Organisation mondiale de la Sant, 2004, (http://www.who.int/csr/resources/publications/WHO_CDS_CSR_LYO_2004_9Fr/en/). 45. Berg P et al. Asilomar conference on recombinant DNA molecules. Science, 1975, 188:991994. 46. Union Europenne, Directive 98/81/CE du Conseil du 26 octobre 1998 modiant la directive 90/219/CEE relative lutilisation conne de micro-organismes gntiquement modis. Journal ofciel des Communauts europennes, 1998, L330:1331. 47. OMalley BW Jr et al. Limitations of adenovirus-mediated interleukin-2 gene therapy for oral cancer. Laryngoscope, 1999, 109:389395. 48. Organisation mondiale de la Sant. Maintenance and distribution of transgenic mice susceptible to human viruses : memorandum from a WHO meeting. Bulletin of the World Health Organization, 1993, 71:497502. 49. Furr AK. CRC handbook of laboratory safety, 5th ed. Boca Raton, FL, CRC Press, 2000. 50. Lenga RE. The Sigma-Aldrich Library of Chemical Safety Data, 2nd ed. Milwaukee, WI, Aldrich Chemical Company, 1988. 51. Lewis RJ. Saxs dangerous properties of industrial materials, 10th ed. Toronto, John Wiley and Sons, 1999.
155
ANNEXE 1
Premiers secours
Les premiers secours consistent dans lapplication immdiate, par des personnes qualies, de principes mdicaux reconnus sur le lieu dun accident. Cest la mthode admise pour traiter un accident en attendant quil puisse tre pris en charge par un mdecin en vue du traitement dnitif de ses lsions. Le matriel minimum pour les premiers secours se compose dune trousse de premiers soins, de vtements de protection et dquipements de scurit pour le secouriste ainsi que dun dispositif dirrigation oculaire.
Trousse de premiers soins
Cette trousse doit tre faite dun matriau qui protge le contenu de la poussire et de lhumidit. Elle doit tre place bien en vue et tre facilement reconnaissable. Par convention internationale, elle est marque dune croix blanche sur fond vert. La trousse de premiers soins doit contenir : 1. Une che dinformation donnant des conseils gnraux 2. Des pansements adhsifs striles de diverses tailles en emballage individuel 3. Des tampons oculaires avec leurs bandages de xation 4. Des bandages triangulaires 5. Des compresses striles pour couvrir les plaies 6. Des pingles de nourrice 7. Un assortiment de pansements striles mais non imprgns 8. Un manuel de premiers soins faisant autorit, publi par ex. par la Croix-Rouge. Equipement de protection pour le secouriste : 1. Une protection buccale pour le bouche bouche 2. Des gants et autres dispositifs de protection mcanique pour viter une contamination par le sang1, et 3. Un ncessaire pour nettoyer le sang rpandu (voir chapitre 14). Il faut galement un dispositif pour lirrigation oculaire et le personnel doit avoir appris sen servir.
1
Garner JS, Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Guideline for isolation precautions in hospitals. American Journal of Infection Control, 1996, 24:2452 (http://www.cdc.gov/ncidod/hip/ isolat/isolat.htm).
156
ANNEXE 2
Vaccination du personnel
Il faut sentretenir en dtail avec chaque chercheur des risques que comporte le travail sur tel ou tel agent infectieux. Avant de commencer travailler sur ces agents, il convient de se renseigner sur la possibilit de se procurer localement des vaccins et des mdicaments (par ex. des antibiotiques), sur leur autorisation de mise sur le march et sur leur utilit. Certains membres du personnel peuvent tre dj immuniss en raison dune vaccination ou dune maladie infectieuse antrieures. Si un vaccin ou une anatoxine appropris sont autoriss la vente sur le march local et que lon puisse se les procurer, il faut en proposer ladministration si une valuation du risque et lexamen clinique de la personne en cause concluent la possibilit dune exposition. Il faut galement que ltablissement dispose dune installation o les personnes victimes dune contamination accidentelle puissent bncier de la prise en charge clinique correspondant leur cas.
157
ANNEXE 3
Centres collaborateurs de lOMS pour la scurit biologique

Pour obtenir des renseignements sur les cours, outils et matriels pdagogiques dans le domaine de la scurit biologique, le lecteur peut sadresser par crit aux organismes suivants : Programme de scurit biologique, Dpartement maladies transmissibles : surveillance et action, Organisation mondiale de la Sant, 20 Avenue Appia, 1211 Genve 27, Suisse (http://www.who.int/csr/). WHO Collaborating Centre for Biological Safety, Swedish Institute for Infectious Disease Control, Nobels Vg 18, S-171 82 Solna, Sude (http://www.smittskyddsinstitutet.se/English/english.htm). WHO Collaborating Centre on Biosafety Technology and Consultative Services, Bureau de la scurit des laboratoires, Sant Canada, 100 Colonnade Road, Loc. : 6201A, Ottawa, Ontario, Canada K1A 0K9 (http://www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl). WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Training, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, 1600 Clifton Road, Mailstop F05, Atlanta, GA 30333, Etats-Unis dAmrique (http://www.cdc.gov/). WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Research, Division of Occupational Health and Safety, Ofce of Research Services, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, 13/3K04 13 South Drive, MSC 5760, Bethesda, MD 20892-5760, Etats-Unis dAmrique (http://www.nih.gov/). WHO Collaborating Centre for Biosafety, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, 10 Wreckyn St, Nth Melbourne, Victoria 3051, Australie. Adresse postale : Locked Bag 815, PO Carlton Sth, Victoria 3053, Australie (http://www.vidrl.org.au/).
158
ANNEXE 4
Scurit demploi des appareils et instruments

Lutilisation de certains appareils et instruments peut comporter un risque microbiologique. Dautres, au contraire, sont spcialement conus pour prvenir ou rduire les risques biologiques (voir chapitre 11). Appareils et instruments dont lutilisation peut comporter un risque Le tableau A4-1 donne la liste des appareils, instruments et manipulations qui comportent un risque et fournit des indications sur la manire dliminer ou de rduire ce risque.
Tableau A41. Appareils, instruments et manipulations comportant des risques

APPAREILS ET INSTRUMENTS RISQUES ELIMINATION OU RDUCTION DU RISQUE
Aiguilles hypodermiques
Inoculation accidentelle, arosols, renversements
Ne pas recapuchonner ni casser

les aiguilles.
Utiliser des aiguilles avec

systme de blocage pour viter la sparation accidentelle de laiguille et de la seringue ou utiliser un systme jetable dans lequel laiguille et la seringue sont indissociables. Appliquer de bonnes techniques de laboratoire : Remplir soigneusement la seringue pour rduire la formation de bulles et de mousse. Eviter dutiliser des seringues pour mlanger des liquides infectieux; si on ne peut faire autrement, veiller ce que lextrmit de laiguille soit sous la surface du liquide qui se trouve dans le rcipient et viter dexercer trop de pression.
159
APPAREILS ET INSTRUMENTS
RISQUES
ELIMINATION OU RDUCTION DU RISQUE
Avant de retirer une aiguille plante dans un bouchon de caoutchouc fermant un acon, envelopper laiguille et le bouchon dans un tampon de coton imprgn dun dsinfectant appropri. Rejeter lexcs de liquide et les bulles dair en tenant la seringue verticalement, dans un tampon de coton imprgn dun dsinfectant appropri ou dans un petit acon contenant du coton. Utiliser une enceinte de scurit biologique pour toutes les manipulations sur du matriel biologique infectieux. Placer les animaux dans un dispositif de contention pour les inoculer. Utiliser des aiguilles ou des canules mousses pour linoculation intranasale ou orale. Employer une enceinte de scurit biologique. Aprs usage, autoclaver et veiller liminer convenablement. Si on utilise un ensemble jetable aiguille-seringue, ne pas les dsolidariser avant lautoclavage. Centrifugeuses Arosols, projections et bris de tubes Utiliser des pots centrifuger (de scurit) ou des rotors scells. Nouvrir les pots ou les rotors quaprs les avoir laiss reposer pendant 30 min ou le faire dans une enceinte de scurit biologique. Monter un ltre HEPA entre la centrifugeuse et la pompe vide. Tenir un registre dutilisation pour chacun des rotors et mettre en uvre un programme de maintenance prventive pour rduire le risque de pannes mcaniques. Remplir et vider les pots centrifuger dans une enceinte de scurit biologique. Vrier que le panier mtallique qui renferme le catalyseur est en bon tat.
Ultracentrifugeuses
Arosols, projections et bris de tubes
Jarres anarobies
Explosion, dispersion de matriel infectieux
160
RISQUES
Dessiccateurs
Implosion, dispersion de morceaux de verre et de matriel infectieux Arosols, fuites et casse
A placer dans une cage mtallique solide. Faire fonctionner et ouvrir dans une enceinte de scurit biologique. Utiliser des modles spcialement conus pour viter les fuites au niveau des paliers des rotors et des joints circulaires ou utiliser un broyeur de type stomacher. Attendre 30 min avant douvrir le bol de lhomogniseur pour que larosol ait le temps de se dposer. Rfrigrer pour condenser larosol. Si lon utilise un broyeur manuel, tenir le tube dans un tampon de matriau absorbant. Faire fonctionner et ouvrir lappareil dans une enceinte de scurit biologique. Isoler lappareil pour le protger des ultrasons. Porter des gants pour protger les mains contre les effets chimiques des dtergents. Oprer dans une enceinte de scurit biologique ou une enceinte de connement primaire spcialement conue. Utiliser des acons culture solides munis dun bouchon vis et dont louverture comporte un ltre solidement x, si ncessaire. Utiliser des raccords circulaires permettant de maintenir lappareil hermtiquement ferm. Utiliser des ltres air pour protger le circuit de vide. Utiliser une mthode satisfaisante pour la dcontamination; par voie chimique par exemple. Prvoir un pige humidit entirement mtallique et un condenseur de vapeur.
Homognisateurs et broyeurs de tissus
Sonicateurs, nettoyeurs ultrasons
Arosols, lsions de lappareil auditif, dermite
Mlangeurs de cultures, agitateurs
Arosols, projections et renversement de liquides
Lyophilisateurs
Arosols et contamination par contact direct
161
RISQUES
Vrier avec soin que les acons de verre ne sont pas endommags. Nemployer que des acons conus spcialement pour utilisation sous vide. Bains-marie Prolifration de Nettoyer et dsinfecter micro-organismes. Lazoture rgulirement. de sodium forme des Ne pas utiliser dazoture de composs explosifs avec sodium pour viter la prolifration certains mtaux. des germes.
Outre les risques microbiologiques, il faut galement prvoir et viter ceux que comportent les appareils et quipements utiliss. Le tableau A4-2 ci-dessous numre quelques causes courantes daccidents. Tableau A42. Causes courantes daccidents avec des appareils ou quipements
ACCIDENT CAUSE DE LACCIDENT RDUCTION OU LIMINATION DU RISQUE
Dfaut de conception ou de construction Feu dorigine lectrique Pas dinterrupteur de dans un incubateur surcharge Electrocution Utilisation incorrecte Accident de centrifugeuse Pas de mise la terre Dfaut dquilibrage des pots centrifuger sur les rotors oscillation libre
Respect des normes nationales.
Former et encadrer le personnel. Former et encadrer le personnel.
Explosion dun incubateur anarobie Equipement mal adapt Explosion dans une ole vide usage domestique Explosion dans un rfrigrateur usage domestique Mauvaises conditions de transport de lazote liquide Produit chimique dangereux non plac dans un conteneur anti-tincelles et antidagrant, par exemple de lther thylique dans un acon dont le bouchon fuit Mauvais remontage des pices du photomtre pendant la maintenance
Utiliser du matriel spcialement conu. Ne ranger les solvants et les extraits bas point dclair que dans des rfrigrateurs ou des enceintes anti-tincelles et antidagrants. Former et encadrer le personnel.
Maintenance dfecteuse Feu dans un photomtre amme
162
ANNEXE 5
Produits chimiques : dangers et prcautions prendre

On trouvera dans cette annexe les donnes de sant et de scurit connatre au sujet dun certain nombre de produits chimiques couramment utiliss dans les laboratoires danalyses biologiques et de recherche, accompagnes de quelques donnes gnrales et des prcautions observer.
163
Tableau A5-1. Produits chimiques : dangers et prcautions prendre

RISQUE DINCENDIE PRCAUTIONS PRENDRE INCOMPATIBILITS CHIMIQUES AUTRES RISQUES
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUES POUR LA SANT
Actaldhyde CH3CHO
Liquide ou gaz incolore lodeur piquante et fruite; point de fusion -121C, point dbullition 21C.
Lgrement irritant pour les yeux et les voies respiratoires. Effets sur le systme nerveux central, lappareil respiratoire et le rein. Pourrait tre cancrogne.
Extrmement inammable; les mlanges dair et de vapeurs sont explosifs; point dclair -39C, limites dinammabilit 457 %.
164
Pas de ammes nues ni dtincelles, interdiction de fumer, viter tout contact avec des surfaces chaudes. Conserver dans des rcipients hermtiquement ferms entreposs lcart de produits oxydants; nentreposer que si le produit est stabilis. Utiliser dans une sorbonne ou dans de bonnes conditions de ventilation. Porter des gants de caoutchouc, des lunettes coques et une protection respiratoire.
Peut donner naissance des peroxydes par contact avec lair. Peut se polymriser sous laction des acides, de substances alcalines ou en prsence de traces mtalliques. Rducteur nergique : ragit violemment avec les oxydants, divers composs organiques, les halognes, lacide sulfurique et les amines.
Actate de thallium TlC2H3O2
Cristaux blancs dliquescents; point de fusion 110C, trs soluble dans leau.
Extrmement toxique en cas dingestion avec risque deffets cumulatifs. Atteinte du systme nerveux central et de lappareil cardiovasculaire. Nocif en cas de contact oculaire ou cutan.
ANNEXE 5. PRODUITS CHIMIQUES : DANGERS ET PRCAUTIONS PRENDRE
165
Trs inammable; point dclair -18C; limites dexplosibilit 2,212,8 %. Entreposer les rcipients dans un endroit bien ventil; tenir distance de toute source dignition. Ne pas inhaler les vapeurs. Utiliser une protection respiratoire; porter une protection oculaire.
Tenir les rcipients bien ferms; manipuler le solide sous une sorbonne ou une hotte avec dispositif dvacuation des vapeurs. Porter des vtements protecteurs ainsi quun masque antipoussires, des lunettes coques pour laboratoire de chimie et des gants en caoutchouc ou en plastique. Ragit violemment avec les oxydants (par ex. lacide chromique et lacide nitrique) et avec le chloroforme en prsence dune base. Incompatible avec les mlanges dacide sulfurique et dacide nitrique concentrs. Mettre la terre les grands rcipients ou conteneurs pour viter les effets de llectricit statique.
Actone CH3COCH3
Liquide incolore lodeur doucetre; point de fusion -95C, point dbullition 56C; miscible leau.
Lgrement irritant pour les yeux, le nez et la gorge. Linhalation peut provoquer des tourdissements, une narcose et le coma.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
INCOMPATIBILITS CHIMIQUES
AUTRES RISQUES
Actonitrile CH3CN
Liquide incolore odeur aromatique; point de fusion -46C, point dbullition 82C.
Irritant pour les yeux, les voies respiratoires et la peau. Lexposition peut provoquer des convulsions, la perte de conscience et une intoxication cyanure.
Trs inammable; point dclair 12,8C; limites dexplosibilit 3,016 %.
166
Pas de ammes nues ni dtincelles; interdiction de fumer; viter tout contact avec des oxydants. Nutiliser que dans des endroits situs distance de toute source dignition. Entreposer dans des rcipients hermtiquement ferms et sparment du lieu de stockage des oxydants. Travailler sous ventilation force. Eviter tout contact avec les muqueuses. Porter une protection respiratoire et des gants de caoutchouc.
Ragit avec les acides et les bases en solution aqueuse en dgageant des vapeurs toxiques. Ragit avec les oxydants nergiques. Attaque certains types de plastique, de caoutchouc et de revtement. Se dcompose par combustion en donnant naissance du cyanure dhydrogne et des oxydes dazote.
Actylne CHCH
Gaz incolore dot dune lgre odeur thre ou alliace; transport sous pression, en solution dans lactone; point de fusion -81C; se sublime -84C.
Asphyxiant. Gelures en cas de contact avec la peau.
Extrmement inammable; limites dinammabilit 2,5100 %.
Pour se protger la peau, porter des gants isolants contre les gelures ainsi que des lunettes coques ou un cran facial. Pas de ammes nues ni dtincelles; interdiction de fumer. Travailler avec un dispositif local de ventilation force; les appareils lectriques et lclairage doivent tre antidagrants. Ne pas inhaler les vapeurs. En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement avec de leau et consulter un mdecin. Porter des gants en caoutchouc nitrile et une protection oculaire. Raction violente, voire explosive avec les oxydants.
Rducteur nergique; ragit violemment avec les oxydants ainsi quavec le uor et le chlore sous laction de la lumire. Ragit avec le cuivre, le mercure ou leurs sels pour former des composs sensibles aux chocs.
167
Inammable; point dclair 40C, limites dinammabilit 5,416 %.
Acide actique CH3CO2H
Liquide incolore lodeur piquante; point de fusion 17C, point dbullition 118C; miscible leau.
Corrosif; provoque de graves brlures; vapeurs irritantes. Les effets peuvent tre retards.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Acide chromique Oxyde de chrome VI Anhydride chromique CrO3
Paillettes ou poudre inodores de couleur rouge fonc; souvent utilis en solution aqueuse; point de fusion 197C.
Dcomposition 250C en oxyde chromique (oxyde de chrome III) et oxygne avec important risque dincendie. De nombreuses ractions de ce compos sont dangereuses.
Irritant pour les yeux, la peau et les voies respiratoires. Un contact rpt ou prolong peut provoquer une dermite, des ulcres chromiques ou une sensibilisation cutane. Risque de ractions asthmatiformes ou de perforation de la cloison nasale en cas dinhalation. Cancrogne pour lhomme.
Eviter tout contact avec la peau et les yeux ainsi que linhalation de poussires nes et de brouillards. Travailler sous ventilation, avec un dispositif local dvacuation ou une protection respiratoire.
168
La solution aqueuse est un acide fort corrosif qui ragit avec les bases. Oxydant nergique, ragit avec les matires combustibles, les composs organiques et autres matriaux facilement oxydables (papier, bois, soufre, aluminium, plastique, etc.). Corrode les mtaux.
Acide nitrique (5070 %) HNO3
Liquide fumant incolore jaune ple; point de fusion -42C, point dbullition 83121C; miscible leau.
Corrosif; cause de graves brlures oculaires et cutanes. Linhalation des vapeurs peut provoquer un dme pulmonaire.
Oxydant; risque dincendie en cas de contact avec des matires combustibles; dgagement de vapeurs toxiques en cas dincendie.
Acide actique, acide chromique, acide cyanhydrique, aniline, carbone, sulfure dhydrogne, bases, mtaux et de nombreuses autres substances.
Les ractions que lacide nitrique concentr est susceptible de produire le rendent plus dangereux que tout autre produit chimique.
169
Combustible. En cas dincendie, dgagement de vapeurs ou de gaz toxiques ou irritants.
Ne pas inhaler les vapeurs; porter une protection respiratoire. En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement et consulter un mdecin; en cas de contact cutan, laver immdiatement et ter les vtements contamins. Porter des gants en PVC, un tablier en plastique et des lunettes coques pour laboratoire de chimie. Travailler sous une sorbonne. Eviter tout contact avec la peau et les yeux; porter une protection oculaire et des gants. Oxydants; argent, mercure et leurs drivs.
Acide oxalique HO2CCO2H
Cristaux incolores; soluble dans leau; point de fusion 190C, avec dcomposition.
Nocif en cas dingestion ou de contact avec la peau. La poussire est irritante pour les voies respiratoires et les yeux. Les solutions sont irritantes pour les yeux et peuvent causer des brlures cutanes.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Acide perchlorique HClO4
Liquide incolore; miscible leau.
Corrosif; cause de graves brlures en cas dingestion ou de contact avec les yeux, la peau ou les voies respiratoires. Linhalation peut provoquer un dme pulmonaire.
Oxydant nergique. Incombustible mais facilite la combustion dautres substances.
Eviter dinhaler les vapeurs et toute autre forme dexposition; porter des vtements protecteurs ainsi que des gants en caoutchouc nitrile, ainsi quune protection oculaire ou un cran facial. Manipuler les solutions chaudes sous une sorbonne ou une hotte.
Matires combustibles et rducteurs; anhydride actique, bismuth et alliages, alcool, mtaux, papier, bois et autres matires organiques.
170
Attaque de nombreux mtaux avec dgagement dhydrogne; dgagement de vapeurs toxiques en cas dincendie.
Oxydant nergique; peut former des produits explosifs en cas de contact avec des composs minraux ou organiques; les planchers ou paillasses en bois souills par de lacide perchlorique peuvent exploser aux chocs.
Acide phosphorique H3PO4
Liquide visqueux incolore ou cristaux blancs hygroscopiques; point de fusion 42C; se dcompose endessous du point dbullition 213C; soluble dans leau.
Corrosif; cause des brlures cutanes et oculaires.
En cas de contact avec les yeux, rincer avec de leau et consulter un mdecin. Porter des gants en caoutchouc nitrile et une protection oculaire.
Acide picrique 2,4,6-trinitrophnol C6H2(NO2)3OH
Cristaux jaunes humidis avec de leau ou dissous dans lalcool; point de fusion 122C; lgrement soluble dans leau.
Toxique par ingestion, inhalation ou contact cutan. Lingestion peut provoquer des cphales et des nauses. Irritant pour les yeux.
Explosif sec.
Doit toujours rester humide par adjonction deau ou nutiliser quen solution alcoolique.
Colore la peau en jaune.
171
Forme des sels avec de nombreux mtaux qui sont plus explosifs que lacide lui-mme. En cas de contact avec du bton, risque de formation de picrate de calcium pouvant exploser par simple frottement. Peut ragir vigoureusement avec les rducteurs.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Acide sulfurique H2SO4
Liquide visqueux incolore et inodore; point de fusion 10C, point dbullition 340C (dcomposition).
La solution concentre (15 %) est corrosive et cause de graves brlures; les arosols et les vapeurs sont trs corrosifs pour les voies respiratoires en cas dinhalation; les solutions dilues sont irritantes pour les yeux et la peau; risque de brlures et de dermite.
Lorsque lacide concentr est vers dans leau, risque dbullition au point de versement.
172
Peut dgager des vapeurs toxiques en cas dincendie. De nombreuses ractions peuvent provoquer des incendies ou des explosions. La dilution dans leau dgage de la chaleur et il peut se produire des projections ou une bullition du liquide. Toujours verser lacide dans leau. Ne jamais verser leau dans lacide.
En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement et consulter un mdecin; en cas de contact cutan, laver immdiatement et ter les vtements contamins. Porter des gants en caoutchouc nitrile ainsi quune protection oculaire ou faciale. Eviter tout contact avec des matires inammables.
Oxydant et dshydratant nergique qui ragit violemment avec de nombreuses substances et notamment les drivs organiques nitrs, le permanganate de potassium, les mtaux alcalins et les perchlorates, les matires combustibles, les oxydants, les amines, les bases, leau, une chaleur excessive et la plupart des mtaux.
Acide trichloractique CCl3COOH
Cristaux blancs hygroscopiques lodeur piquante; point de fusion 58C, point dbullition 197,5C; soluble dans leau, lthanol et lther thylique.
Corrosif; cause de graves brlures des yeux, de la peau et des voies respiratoires.
Incombustible. Peut dgager des vapeurs toxiques en cas dincendie.
Eviter tout contact avec les yeux ou la peau; porter des gants en caoutchouc ou en plastique et des lunettes coques pour laboratoire de chimie ou un cran facial ainsi quune protection respiratoire. En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement et consulter un mdecin. Eviter tout contact avec la peau et les yeux. Travailler sous une sorbonne ou avec une bonne ventilation. Oxydants, acides, bases alcalines, ammoniac, amines. En labsence dinhibiteur (gnralement de lhydroquinone), se polymrise spontanment. Peut former au cours du temps des peroxydes sensibles aux chocs.
Raction violente avec les mlanges de cuivre et de dimthylsulfoxyde ainsi quen prsence de bases, doxydants nergiques et de mtaux comme le fer, le zinc ou laluminium.
Entreposer dans un endroit sec. Les solutions aqueuses concentres peuvent subir une dcomposition violente.
173
Trs inammable; point dclair -26C; limites dexplosibilit 2,831 %.
Acroline CH2=CHCHO
Liquide incolore jaune dot dune odeur pntrante dsagrable; point de fusion -87C, point dbullition 53C.
Larmoiement. Fortement irritant pour les voies respiratoires; dme pulmonaire en cas dexposition intense. Les effets peuvent tre retards.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Ammoniac et solutions
Liquide incolore dot dune odeur piquante; gaz ammoniac : point de fusion -78C, point dbullition -33C; solution 25 % : point de fusion -58C, point dbullition 38C; miscible leau. Inammable; dgage des vapeurs ou des gaz irritants ou toxiques en cas dincendie; point dclair 49C, limites dexplosibilit 2,710,3 %. Pas de ammes nues ni dtincelles, interdiction de fumer. Eviter tout contact avec les yeux ou la peau. Ragit violemment avec leau bouillante, la vapeur deau, les oxydants nergiques, les alcools, les amines, les bases fortes et de nombreux autres composs. Attaque de nombreux mtaux en prsence deau.
Corrosif pour les yeux, les voies respiratoires, la peau et les voies digestives en cas dingestion; dme pulmonaire en cas dexposition intense au gaz ou aux vapeurs.
Gaz ammoniac : limites dinammabilit 1528 %
Tenir les rcipients bien ferms. En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement et consulter un mdecin. Travailler sous sorbonne. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et des lunettes coques pour laboratoire de chimie.
Ragit violemment avec les mtaux lourds tels que le mercure et leurs sels pour former des composs explosifs.
174
Anhydride actique (CH3CO)2O
Liquide incolore lodeur forte et cre de vinaigre; point de fusion -73C, point dbullition 139C.
Extrmement irritant pour les yeux et les voies respiratoires suprieures; action corrosive. Les effets peuvent tre retards.
Aniline C6H5NH2
Liquide huileux incolore brun dot dune odeur amine aromatique; point de fusion -6C, point dbullition 185C.
Cyanose mthmoglobinmique. Irritant pour les yeux et la peau. Peut traverser la barrire cutane; des expositions rptes peuvent provoquer une sensibilisation.
Combustible; point dclair 70C, limites dexplosibilit 1,211 %
Conserver dans des rcipients hermtiquement ferms, sparment des oxydants. Eviter tout contact avec la peau ou les yeux. Travailler sous ventilation force locale ou avec une protection respiratoire, porter des gants et des vtements de protection ainsi quun cran facial. Travailler avec un dispositif local dvacuation des vapeurs. Porter des gants et des lunettes de scurit ou un masque respiratoire complet pour se protger des vapeurs et de la poussire dargent. Incompatible avec lactylne, les sels dammonium, lacide oxalique et lacide tartrique.
Oxydants nergiques et acides forts.
175
Incombustible, sauf sous forme pulvrulente.
Argent Ag
Mtal blanc, sassombrissant par exposition lozone, au sulfure dhydrogne ou au soufre; point de fusion 962C, point dbullition 2212C.
Linhalation dune quantit importante de vapeurs dargent peut causer des lsions et un dme pulmonaires. Il peut y avoir coloration grisbleu des yeux, du nez, de la gorge et de la peau en cas dexposition prolonge ou rpte (argyrie).
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Auramine Paillettes ou 4,4-carbonoimidoylbis poudre jaunes; (N,N-dimthylbenzamine) point de fusion 136C; insoluble dans leau.
Effets nocifs en cas dingestion, dinhalation ou de contact avec la peau. Peut provoquer une irritation cutane. Pourrait tre cancrogne.
Eviter tout contact avec la peau; ne pas inhaler la poussire. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et des lunettes coques pour laboratoire de chimie. Travailler sous sorbonne ou porter un masque antipoussires. Se dcompose de manire explosive par chauffage audessus du point de fusion. Le chauffage provoque un dgagement de vapeurs toxiques; ne pas utiliser deau pour teindre un feu. En cas de contact avec la peau, laver immdiatement. Ne pas inhaler la poussire. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique ainsi quune protection oculaire. Raction explosive avec le brome, le sulfure de carbone et le chlorure de chromyle. Raction ltat solide avec les mtaux lourds comme le cuivre, le plomb et le mercure pour former des azotures explosifs. En prsence dun acide, dgagement de gaz trs toxiques et explosifs.
Oxydants nergiques.
Azoture de sodium N3Na
176
Solide cristallin incolore; point de fusion 300C, soluble dans leau.
Trs toxique en cas dingestion, dinhalation ou de contact cutan; peut causer des brlures. La poussire et la solution sont irritantes pour les yeux et la peau; peut traverser la barrire cutane.
Benzne C6H6
Liquide volatil incolore dgageant une odeur aromatique caractristique; point de fusion 6C, point dbullition 80C.
Trs inammable, point dclair -11C, limites dinammabilit 1,38 %.
Peut ragir violemment avec les oxydants comme dacide chromique, le permanganate de potassium et loxygne liquide.
177
Combustible, dgagement de vapeurs ou de gaz toxiques en cas dincendie. Eviter toute exposition. Porter une protection oculaire et cutane. Travailler sous sorbonne avec ventilation force.
Linhalation des vapeurs entrane des effets neurologiques centraux se traduisant par des vertiges et des cphales; forte concentration, il y a perte de conscience pouvant aboutir la mort. Risque danmie aplasique, de leucmie, de lsions hpatiques en cas dexposition prolonge ou chronique. Peut traverser la barrire cutane. Conserver les rcipients dans un endroit bien ventil et distance de toute source dignition. Travailler sous sorbonne ou sous une hotte correctement ventile. Porter une protection oculaire ainsi que des gants en caoutchouc nitrile ou en PVC. Eviter la formation de charges lectriques par mise la terre. Usage interdit ou rglement dans de nombreux pays.
Benzidine 1,1-biphnyl-4,4diamine
Poudre jaune clair, point de fusion 128C, point dbullition 400C, lgrement soluble dans leau mais trs soluble dans les acides et les solvants organiques.
Peut traverser la barrire cutane. Risque de cancer de la vessie. Eviter toute exposition.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Brome Br2
Liquide fumant de couleur brun-rouge fonc, dgageant une odeur cre; point de fusion -7,2C, point dbullition 58,8C.
A utiliser en vase clos et sous ventilation. Porter des gants et des vtements protecteurs, des lunettes coques, un cran facial ou un masque respiratoire complet.
Corrosif. Les vapeurs sont corrosives pour les yeux et les voies respiratoires; linhalation peut provoquer un dme pulmonaire et des effets neurologiques centraux. Le contact avec les yeux peut rendre la vision trouble, provoquer rougeurs et douleurs et entraner de graves brlures tissulaires.
Non combustible, mais facilite la combustion dautres substances. Donne lieu de nombreuses ractions pouvant provoquer incendies et explosions. Le chauffage peut provoquer une augmentation de la pression avec risques de brlures. Oxydant nergique; ragit violemment avec les matriaux combustibles et rducteurs. Ragit violemment avec lammoniaque, les oxydants, les mtaux, les composs organiques et le phosphore.
Attaque certains types de plastique, de caoutchouc et de revtements.
178
Bromure de cyanogne BrCN
Cristaux incolores ou blancs dots dune odeur piquante; point de fusion 52C, point dbulllition 61C.
Trs irritant pour les yeux, la peau et les voies respiratoires; linhalation des vapeurs peut provoquer un dme pulmonaire susceptible dentraner des convulsions, une perte de conscience, une insufsance respiratoire et la mort.
Non combustible, mais donne naissance par chauffage un gaz inammable. En cas dincendie, dgagement de vapeurs ou de gaz irritants et toxiques.
Travailler en vase clos et sous ventilation. Porter des gants et des vtements protecteurs, des lunettes coques, un cran facial ou un masque respiratoire complet.
179
Dcomposition par chauffage ou contact avec des acides avec dgagement de cyanure dhydrogne trs toxique et inammable et de bromure dhydrogne corrosif. Ragit avec les oxydants nergiques. Lente raction avec leau ou en prsence dhumidit pour donner du bromure et du cyanure dhydrogne. Attaque de nombreux mtaux en prsence deau.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Chlore Cl2
Gaz jaune verdtre lodeur cre; point de fusion -101C, point dbullition -34C.
Non combustible, mais facilite la combustion dautres substances.
Travailler en vase clos sous ventilation. Porter des gants isolants, des vtements protecteurs, des lunettes de protection coques ou un masque respiratoire complet.
Attaque de nombreux mtaux en prsence deau. Attaque les plastiques, le caoutchouc et les revtements.
180
Corrosif pour les yeux, la peau et les voies respiratoires. Linhalation du gaz peut provoquer une pneumonie et un dme pulmonaire, avec pour consquence une dysfonction ractive des voies ariennes. Lvaporation rapide du liquide peut entraner des gelures. Lexposition une forte concentration peut entraner la mort. Possibilit deffets retards; la mise en observation mdicale est indique.
La solution aqueuse est un acide fort, ragit violemment avec les bases et de nombreux composs organiques, lactylne, le butadine, le benzne et diffrents autres produits ptroliers, lammoniac, lhydrogne, le carbure de sodium, la thrbentine et les mtaux nement diviss avec risque dincendie et dexplosion.
Chloroforme CHCl3
Liquide volatil incolore lodeur caractristique; point de fusion -63C, point dbullition 61C; lgrement soluble dans leau.
Porter des vtements protecteurs, des gants en caoutchouc nitrile et une protection oculaire. Travailler sous sorbonne.
Bases fortes; certains mtaux comme laluminium et le magnsium, la poudre de zinc; les oxydants nergiques.
Par chauffage, se dcompose en formant du phosgne. Attaque les plastiques et le caoutchouc.
181
Nocif en cas dinhalation, dingestion ou de contact avec la peau. Peut avoir des effets hpatiques, rnaux ou neurologiques centraux se traduisant par des cphales, de la nause, un lger ictre, une perte dapptit et une narcose. Une exposition prolonge provoque lapparition de cancers chez lanimal; pourrait tre cancrogne pour lhomme.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Chlorure dhydrogne HCl Acide hydrochlorique (1037 %)
Liquide fumant incolore lodeur piquante; point dbullition -121C; miscible leau.
Corrosif pour les yeux, les voies respiratoires et la peau; linhalation rpte des vapeurs peut causer une bronchite chronique.
Dgagement de vapeurs trs toxiques en cas dincendie.
182
Ne pas inhaler les vapeurs; porter une protection respiratoire. En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement avec de leau et consulter un mdecin; en cas de contact avec la peau, laver immdiatement grande eau. Travailler sous une sorbonne. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et une protection oculaire (lunettes de scurit ou lunettes coques).
Ragit violemment avec les bases (solides et solutions concentres) et de manire explosive avec le permanganate de potassium solide. Dgagement de gaz toxiques ou explosifs en prsence de nombreux mtaux.
Cuivre Cu
Solide rougetre, inodore, brillant et mallable; poudre rouge, vire au vert par exposition lair humide; point de fusion 1083C, point dbullition 2567C.
Linhalation de vapeurs de cuivre peut causer la vre des fondeurs.
Combustible.
Travailler avec un dispositif local dvacuation ou une protection respiratoire, des gants et des lunettes coques.
183
Des composs sensibles aux chocs se forment avec les drivs actylniques, loxyde dthylne, les azotures et le peroxyde dhydrogne. Ragit avec les oxydants nergiques et les chlorates, bromates et iodates avec risque dexplosion.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Cyanure de sodium NaCN
Poudre cristalline blanche dgageant une odeur damande amre; point de fusion 563C, point dbullition 1496C; trs soluble dans leau.
Extrmement toxique en cas dingestion, dinhalation ou de contact cutan; fortement irritant pour les yeux. Peut traverser la barrire cutane. Atteinte thyrodienne possible en cas dexposition rpte.
Peut donner lieu un dgagement de vapeurs toxiques en cas dincendie.
Eviter dinhaler la poussire; porter une protection respiratoire. Eviter tout contact avec les yeux et la peau; en cas de contact cutan, laver immdiatement avec de leau et ter les vtements contamins. Porter des lunettes coques pour laboratoire de chimie ainsi que des gants en caoutchouc ou en plastique. Entreposer dans un local ventil et ferm cl.
En prsence dacides ou deau contenant du dioxyde de carbone dissous, dgagement de cyanure dhydrogne gazeux (HCN) extrmement toxique. Peut former des mlanges explosifs avec les nitrites.
184
En cas de dversement, traiter la zone touche avec de lhypochlorite de sodium en poudre et laisser reposer 24h. Balayer soigneusement les dbris solides et les dverser dans de leau additionne dhypochlorite; laisser reposer 24 h avant de jeter. Le laboratoire doit disposer dun ncessaire pour le traitement des empoisonnements par le cyanure.
Cytochalasine (A-J)
Poudre blanche; point de fusion variable.
Toxique en cas dingestion, dinhalation ou de rsorption cutane. Peut causer des malformations congnitales.
Eviter le contact avec les yeux, la peau ou les vtements; porter des lunettes coques pour laboratoire de chimie ainsi que des gants en caoutchouc ou en plastique. Peut ragir avec les oxydants et le mercure.
Oxydants nergiques.
Dimthylamine (CH3)2NH
185
Gaz liqu volatil dot dune odeur pntrante; point de fusion -93C, point dbullition 7C; miscible leau.
Trs irritant pour les yeux et les voies respiratoires. Linhalation peut provoquer un dme pulmonaire. Lvaporation rapide peut causer des gelures. La solution est corrosive pour les yeux et la peau.
Extrmement inammable; point dclair -26C; limites dinammabilit 2,814 %. La solution est trs inammable; point dclair -18C.
Tenir distance de toute source dignition; en cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement et consulter un mdecin. Travailler sous sorbonne. Porter des gants en caoutchouc nitrile et des lunettes coques pour laboratoire de chimie. Maintenir humide pour rduire le risque dexplosion. Porter un masque antipoussires, des gants en caoutchouc ou en plastique et des lunettes coques pour laboratoire de chimie.
2,4dinitrophnylhydrazine 1-Hydrazino-2,4dinitrobenzne C6H3(NO2)2NHNH2
Poudre cristalline rouge orang; (point de fusion 200C; lgrement soluble dans leau.)
Irritant pour la peau et les yeux. Nocif en cas dingestion, dinhalation ou de contact cutan.
Peut ragir vigoureusement avec les oxydants et les rducteurs.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Dioxane Dioxyde de dithylne C4H8O2
Liquide incolore lodeur caractristique; point de fusion 12C, point dbullition 101C.
Trs inammable; inammation distance possible; lcoulement, lagitation, etc. peuvent entraner la formation de charges dlectricit statique.
186
Irritant pour les yeux et les voies respiratoires. Latteinte du systme nerveux central peut se traduire par des cphales, des nauses, de la toux, des maux de gorge, des douleurs abdominales, des vertiges, de la somnolence, des vomissements et une perte de conscience. Peut traverser la barrire cutane. Lsions rnales et hpatiques. Probablement cancrogne pour lhomme.
Travailler sous ventilation, avec un dispositif local dvacuation. Pas de ammes nues ni dtincelles, interdiction de fumer et viter tout contact avec des oxydants nergiques ou des surfaces chaudes. Ne pas utiliser dair comprim pour le remplissage, la vidange ou la manipulation; utiliser des outils anti-tincelles. Porter des gants et des vtements protecteurs, un cran facial ou un masque respiratoire complet. Porter des gants protecteurs isolants. Nentreposer que dans une pice ventile ou dans un rcipient ouvert. Mtaux alcalins, bases fortes.
Peut former des peroxydes explosifs. Ragit vigoureusement avec les oxydants nergiques et les acides forts concentrs. Raction explosive en prsence de certains catalyseurs. Attaque de nombreux plastiques.
Dioxyde de carbone (solide; carboglace ) CO2
Solide blanc translucide -79C; se sublime la temprature ambiante.
Risque dasphyxie dans les locaux conns ou mal ventils; le contact avec la carboglace provoque des gelures.
Dioxyde de chlore ClO2
Gaz jaune rouge ou liquide rouge brun; point de fusion -59C, point dbullition 10C.
Fortement irritant pour les yeux, la peau et les voies respiratoires. Linhalation du gaz peut provoquer un dme pulmonaire. Possibilit deffets retards; la mise en observation mdicale est indique.
Non combustible, mais facilite la combustion dautres substances, peut exploser par chauffage, exposition la lumire solaire, en cas de chocs ou en prsence dtincelles.
Travailler en vase clos sous ventilation. Porter des gants et des vtements protecteurs, des lunettes de scurit coques ou un masque respiratoire complet.
Oxydant nergique; ragit violemment avec les combustibles et les rducteurs, le phosphore, lhydroxyde de potassium, le soufre, lammoniac, le mthane, la phosphine et le sulfure dhydrogne. Ragit violemment avec les oxydants nergiques.
187
Trs inammable; point dclair 12C, limites dinammabilit 319 %. Tenir les rcipients bien ferms et distance de toute source dignition.
Ethanol CH3CH2OH
Liquide volatil incolore dot dune odeur lgre et caractristique; point de fusion -117C, point dbullition 79C; miscible leau.
Nocif en cas dingestion. Irritant pour les yeux. Peut provoquer des troubles neurologiques centraux.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Ethanolamine 2-aminothanol H2NCH2CH2OH
Liquide incolore, visqueux et non volatil dgageant une odeur ammoniacale; point de fusion 10C, point dbullition 171C; miscible leau.
Corrosif pour les yeux, les voies respiratoires et la peau; peut provoquer une sensibilisation cutane.
Point dclair 85C.
Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et une protection oculaire.
Ragit avec les oxydants nergiques.
188
Ether thylique Dithylther C2H5OC2H5
Liquide incolore et trs volatil lodeur sucre caractristique; point de fusion -116C, point dbullition 34C; lgrement soluble dans leau.
Irritant pour les yeux et les voies respiratoires. Son action sur le systme nerveux central peut entraner une somnolence et une perte de conscience. Effet addictif possible en cas dexposition rpte.
Extrmement inammable; point dclair -45C, limites dinammabilit 1,748 %.
Entreposer les rcipients dans un endroit bien ventil; tenir distance de toute source dignition; mettre les rcipients la terre pour viter les dcharges dlectricit statique. Travailler sous sorbonne. Porter des gants en caoutchouc nitrile pour viter la dlipidation de la peau.
Lexposition lair et la lumire peut conduire la formation de peroxydes explosifs. Peut ragir violemment avec les oxydants et les halognes.
189
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Formaldhyde en solution (3741 % de formaldhyde avec 1114 % de mthanol) HCHO
Liquide incolore lodeur piquante; point dbullition 96C; miscible leau.
Point dclair 50C.
Se protger par le port dun tablier en plastique, de gants en caoutchouc ou en plastique et de lunettes coques pour laboratoire de chimie. Travailler sous une sorbonne ou dans un endroit bien ventil.
190
Fortement irritant pour les yeux et la peau, irritant pour les voies respiratoires; une exposition prolonge aux vapeurs peut provoquer des symptmes asthmatiformes, une conjonctivite, une laryngite, une bronchite ou une bronchopneumonie. Peut entraner une sensibilisation par contact cutan. Risque deffets nocifs irrversibles. Pourrait tre cancrogne.
Peut ragir vigoureusement avec les oxydants et le nitromthane pour donner des produits explosifs ainsi quavec lacide chlorhydrique pour former un cancrogne puissant, le bis(chloromthyl) ther.
Les solutions concentres de formaldhyde se troublent si on les conserve moins de 21C; elles doivent donc tre conserves entre 21 et 25C. Les solutions dilues (15 %) et moyennement concentres (525 %) prsentent peu prs autant de risques que les solutions concentres.
Glutaraldhyde OHC(CH2)3CHO
Solution incolore jaune ple lodeur pntrante; point de fusion -14C, point dbullition 189C; miscible leau. Porter des vtements protecteurs. Oxydants.
Fortement irritant pour les yeux et les voies respiratoires suprieures; une exposition prolonge par la voie respiratoire ou des contacts cutans peuvent entraner une sensibilisation.
Travailler sous une sorbonne ou dans un endroit bien ventil. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et une protection oculaire.
Peut ragir vigoureusement avec les oxydants.
Souvent livr en solutions aqueuses de concentration variable contenant un additif pour amliorer la stabilit.
Hydroslnite de sodium Bislnite de sodium NaHSeO3
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Poudre cristalline incolore ou blanche; soluble dans leau.
Toxique en cas dingestion ou dinhalation de la poussire; risque deffets cumulatifs. Lexprimentation a rvl des effets tratognes. Un contact cutan prolong peut provoquer une dermite.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Hydroxyde de potassium Potasse KOH
Paillettes, poudre, pastilles ou btonnets de couleur blanche; point de fusion 360C, point dbullition 1320C; trs soluble dans leau.
Corrosif pour les voies respiratoires, les yeux et la peau; linhalation de la poussire provoque un dme pulmonaire.
En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement avec de leau et consulter un mdecin; en cas de contact avec la peau, laver immdiatement et ter les vtements contamins. Porter des gants et une protection oculaire, mme pour manipuler les solutions, mme dilues. Incombustible. En prsence deau ou dhumidit, la chaleur dgage peut tre sufsante pour enammer des matires combustibles. En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement et consulter un mdecin; en cas de contact avec la peau, laver immdiatement avec de leau et ter les vtements contamins. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et une protection oculaire, mme pour manipuler des solutions dilues. Important dgagement de chaleur lors du mlange avec de leau. Ragit vigoureusement avec les mlanges chloroformemthanol et avec les acides forts. Conserver au sec dans des rcipients bien ferms.
Ragit violemment avec les acides et le nitrobenzne et de nombreux dtergents. Important dgagement de chaleur par mixtion avec leau; conserver dans des rcipients bien ferms.
Attaque un certain nombre de mtaux (aluminium, tain, zinc) en prsence dhumidit.
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Hydroxyde de sodium Soude NaOH
Paillettes, poudre, pastilles ou btonnets incolores; point de fusion 318C, point dbullition 1390C; soluble dans leau.
Trs dangereux en cas dingestion ou de contact oculaire et cutan avec le produit solide ou une solution concentre. Linhalation de la poussire peut provoquer des lsions des voies respiratoires et un dme pulmonaire. Les solutions dilues sont irritantes pour les yeux et peuvent provoquer de graves lsions en cas de contact oculaire prolong.
Hypochlorite de sodium (solution 1014 % de chlore libre) NaOCl
Solution incolore jaune ple dgageant une odeur de chlore; miscible leau.
Corrosif pour les yeux, la peau, les voies digestives et respiratoires; linhalation peut provoquer un dme pulmonaire. Une exposition rpte peut entraner une sensibilisation cutane.
Oxydant nergique. Risque de dgagement de vapeurs toxiques en cas dincendie.
193
En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement avec de leau et consulter un mdecin; en cas de contact cutan, laver immdiatement avec de leau. Eviter dinhaler les vapeurs; porter une protection respiratoire. Travailler dans un endroit bien ventil. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et une protection oculaire pour laboratoire de chimie.
Dgagement de gaz trs toxiques en prsence dacides. Peut ragir vigoureusement avec les matires combustibles et les rducteurs. Peut ragir avec les drivs azots pour former des composs Nchlors explosifs; risque de raction violente avec le mthanol.
Les manations de chlore pendant le stockage rduisent la teneur en chlore actif; les solutions dilues utilises comme dsinfectants se dteriorent rapidement. Conserver distance des acides, labri de la lumire et au frais dans un local bien ventil.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Iode I2
Irritant pour les yeux, les voies respiratoires et la peau. Une exposition rpte peut provoquer une sensibilisation cutane. Des effets sont possibles sur la thyrode.
Ne pas inhaler les vapeurs; viter tout contact avec les yeux. Porter des gants en caoutchouc nitrile.
Ragit violemment avec les mtaux, et notamment laluminium, le potassium et le sodium, ainsi quavec les mlanges thanol/phosphore, lactylne et lammoniac.
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Paillettes cristallises de couleur noire bleutre dgageant une odeur caractristique; point de fusion 114C, point dbullition 184C; pratiquement insoluble dans leau.
Non combustible, mais facilite la combustion dautres substances. De nombreuses ractions peuvent provoquer des incendies ou des explosions. En cas dincendie, dgagement de vapeurs ou de gaz irritants ou toxiques.
Mercure Hg
Liquide argent trs dense; point de fusion -39C, point dbullition 357C; insoluble dans leau.
Peut traverser la barrire cutane. Une exposition rpte peut avoir des effets nocifs sur les reins et le systme nerveux central; elle peut provoquer des vomissements, de la diarrhe, des cphales, des nauses, un gonement gingival et un dchaussement des dents.
Non combustible. Dgagement de vapeurs irritantes ou toxiques en cas dincendie.
Tenir les rcipients bien ferms. Travailler sous une sorbonne ou dans un endroit bien ventil. Sefforcer dviter les renversements accidentels. Observer une hygine rigoureuse. Porter des gants en caoutchouc nitrile.
Actylne, acide fulminique. Ragit avec lammoniac, les azotures et loxyde dthylne pour former des composs explosifs. Ragit violemment avec le brome. Forme des amalgames avec de nombreux mtaux.
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Ranger les rcipients et travailler audessus de plateaux rebords pour viter que le mtal ne se rpande; aspirer les gouttelettes fragmentes laide dune petite ole vide munie dun capillaire et relie une pompe; traiter les endroits o du mercure sest rpandu avec de la poudre de zinc pour former un amalgame.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Mthanol CH3OH
Liquide volatil incolore dot dune odeur caractristique; point de fusion -98C, point dbullition 65C; miscible leau.
Effets sur le systme nerveux central entranant une perte de conscience; irritation des muqueuses. Une exposition chronique peut provoquer des lsions de la rtine et du nerf optique. Un contact prolong avec la peau peut provoquer une dermite. Peut traverser la barrire cutane. Combustible. Eviter toute exposition; porter des vtements protecteurs appropris. Travailler sous une sorbonne ou une hotte ou avec un dispositif dvacuation des vapeurs. Usage interdit ou rglement par la loi dans de nombreux pays.
Trs inammable; point dclair -16C; limites dinammabilit 737 %.
Tenir les rcipients bien ferms et distance de toute source dignition. Eviter dinhaler les vapeurs et tout contact avec la peau. Travailler sous une sorbonne ou dans un endroit bien ventil. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et une protection oculaire.
Peut ragir vigoureusement avec les oxydants. Avec le magnsium ou le brome, la raction peut galement tre violente et prendre une allure explosive avec les oxydants nergiques et le chloroforme.
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Naphtylamine (alpha et bta) N-phnyl-anaphtylamine et N-phnyl-bnaphtylamine C10H9N
Cristaux de couleur blanche rose dots dune odeur caractristique; alpha : point de fusion 50C, point dbullition 301C; bta : point de fusion 113C, point dbullition 306C; peu soluble dans leau, mais le chlorhydrate est soluble.
Les deux isomres sont trs toxiques par inhalation, ingestion et contact cutan. Ils provoquent chez lhomme des cancers de la vessie. Lexprience rvle des proprits mutagnes et tratognes. Traversent la barrire cutane.
Ninhydrine C9H6O4
Solide jaune ple qui se dcompose avant fusion 241C. Livr en bombes arosol sous forme de solution 0,5 % dans le butanol; soluble dans leau. Incombustible, mais facilite la combustion dautres substances.
Nocif par ingestion ou inhalation. Irritant pour les yeux, les voies respiratoires et la peau. Une exposition rpte peut provoquer une sensibilisation cutane.
Solide inammable et combustible; point dclair 39C.
Eviter dinhaler larosol ou les vapeurs; viter galement tout contact avec les yeux. Porter des gants en caoutchouc ou en plastique et des lunettes coques pour laboratoire de chimie.
Coloration violette persistante de la peau en cas de contact.
Nitrate dargent AgNO3
Cristaux blancs, point de fusion 212C, point dbullition 444C; soluble dans leau.
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Peut causer une forte irritation et de graves brlures oculaires et cutanes. Corrosif en cas dingestion. Peut provoquer une coloration bleutre de la peau en cas dexposition prolonge ou rpte (argyrie).
Eviter la dispersion de la poussire. Observer une hygine rigoureuse. Porter des gants protecteurs en caoutchouc ou en plastique et un cran facial ou encore un masque respiratoire complet. En cas de contact avec les yeux, rincer leau et consulter un mdecin.
Les solutions ammoniacales peuvent former un prcipit de nitrite dargent en prsence de base ou de glucose. Possibilit de formation de produits explosifs en prsence dthanol ou de polymrisation explosive de lacrylonitrile. Risque dinammation ou dexplosion par mlange avec du charbon de bois, du magnsium, du phosphore ou du soufre.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Nitrobenzne C6H5NO2
Liquide huileux de couleur jaune ple dgageant une odeur caractristique; point de fusion 6C, point dbullition 211C.
Mthmoglobinmie accompagne de cyanose, lsions hpatiques; symptmes : les lvres, les ongles et la peau prennent une couleur bleue; tourdissements, nauses, faiblesse, perte de conscience. Peut traverser la barrire cutane.
Combustible; risque dincendie et dexplosion; point dclair 88C.
Travailler sous ventilation, avec un dispositif local dvacuation ou une protection respiratoire. Porter des gants et des vtements protecteurs ainsi que des lunettes coques.
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La combustion dgage des vapeurs corrosives et notamment des oxydes dazote. Ragit violemment avec les oxydants nergiques et les rducteurs, avec risque dincendie et dexplosion. Attaque de nombreux plastiques. Forme des produits ou des mlanges explosifs (thermiquement instables) avec de nombreux composs minraux.
Oxygne O2
Gaz incolore comprim; point de fusion -218,4C, point dbullition -183C.
Irritant pour les voies respiratoires trs forte concentration.
Incombustible, mais facilite la combustion dautres substances. Le chauffage fait monter la pression dans la bouteille avec risque dclatement.
Pas de ammes nues ni dtincelles, interdiction de fumer, viter tout contact avec des matires inammables.
Oxydant nergique qui ragit sur les matires combustibles et les rducteurs avec risque dincendie et dexplosion. Ragit avec les huiles, les graisses, lhydrogne et les gaz, liquides et solides inammables.
Pentoxyde de phosphore P2O5
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Cristaux hygroscopiques ou poudre de couleur blanche; point de fusion 340C, point de sublimation 360C.
Son action corrosive sur la peau, les yeux et les voies respiratoires provoque des maux de gorge, de la toux, une sensation de brlure et un essouement; risque de brlures cutanes douloureuses avec phlyctnes et des brlures oculaires. Linhalation des vapeurs peut entraner un dme pulmonaire. Lingestion peut provoquer des douleurs abdominales, une sensation de brlure, de la diarrhe, des douleurs larynges et des vomissements.
Incombustible, mais facilite la combustion dautres substances. Nombreuses ractions susceptibles de provoquer un incendie ou une explosion. Dgagement de vapeurs ou de gaz irritants ou toxiques en cas dincendie.
Travailler avec un dispositif local dvacuation des vapeurs. Porter des gants et des vtements protecteurs, un cran facial ou un masque respiratoire complet. Ne pas manger, boire ou fumer pendant le travail.
La solution aqueuse est un acide fort; ragit violemment avec les bases; corrosif. Ragit violemment avec lacide perchlorique avec risque dincendie ou dexplosion. Ragit violemment avec leau pour donner de lacide phosphorique. Attaque de nombreux mtaux en prsence deau.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Permanganate de potassium KMnO4
Cristaux violets; point de fusion 240C (dcomposition); facilement soluble dans leau.
Corrosif en cas dingestion ou dinhalation de la poussire. Extrmement irritant pour les yeux et les voies respiratoires; linhalation de la poussire peut provoquer un dme pulmonaire.
Oxydant nergique; risque dinammation des matires combustibles.
Porter des vtements protecteurs et une protection oculaire, ainsi quun masque muni dun ltre particules sil y a production de poussire.
Ragit de manire violente voire explosive en prsence de nombreux composs minraux ou organiques ou encore de mtaux pulvrulents.
Peroxyde dhydrogne Perhydrol H2O2
200
Liquide incolore; point de fusion -39C (70 %), point dbullition 125C (70 %); miscible leau; livr en solution aqueuse de concentration variable.
Corrosif forte concentration (60 %) et galement faible concentration (6 %) en cas de contact prolong avec la peau. Les solutions dilues sont irritantes pour les yeux, les voies respiratoires et la peau.
Oxydant; risque dincendie en cas de contact avec des matires combustibles.
En cas de contact avec la peau, laver immdiatement grande eau. Porter des gants en caoutchouc nitrile et une protection oculaire si la concentration dpasse 20%.
Ragit vigoureusement avec diverses substances chimiques et notamment les oxydants et les bases. Attaque la plupart des mtaux ou leurs sels, les liquides inammables et autres matires combustibles (papier, textiles), laniline et le nitromthane.
Peut se dcomposer en dgageant de loxygne, ce qui augmente la pression dans le rcipient. Entreposer dans un endroit frais labri de la lumire. Ne pas utiliser de rcipients ou dquipements mtalliques, par ex. en laiton, cuivre ou fer.
Phnol C6H5OH
Cristaux incolores ou rose ple dgageant une odeur caractristique; point de fusion 41C, point dbullition 182C; soluble dans leau.
Point dclair 80C, limites dinammabilit 1,76 %.
Ragit avec les oxydants avec risque dincendie et dexplosion.
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Le solide et ses vapeurs sont corrosifs pour les yeux, la peau et les voies respiratoires; ils peuvent causer de graves brlures. Peut traverser la barrire cutane. Troubles du systme nerveux central pouvant aboutir au coma. Lsions rnales et hpatiques. Symptmes : douleurs abdominales, vomissements, diarrhes, irritation cutane, douleurs oculaires. Un contact prolong avec une solution dilue peut provoquer une dermite.
Eviter dinhaler les vapeurs; utiliser une protection respiratoire. Eviter tout contact avec la peau et les yeux. Travailler sous une sorbonne. Porter des gants en caoutchouc nitrile et une protection oculaire. En cas de contact avec les yeux, rincer immdiatement et consulter un mdecin; en cas de contact cutan, ter tous les vtements contamins et badigeonner la rgion touche avec du glycrol, du polythylne-glycol 300 ou un mlange de polythylneglycol liquide (70 %) et dalcool dnatur (30 %), puis rincer abondamment leau.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Propanol-2 Isopropanol (CH3)2CHOH
Liquide incolore dot dune odeur alcoolique; point de fusion -89C, point dbullition 82C; miscible leau.
Irritant pour les yeux et les voies respiratoires. Peut agir sur le systme nerveux central en provoquant cphales, tourdissements, nauses, vomissements et coma.
Trs inammable; point dclair 112C, limites dinammabilit 2,312,7 %.
Tenir les rcipients bien ferms et distance de toute source dignition. Travailler sous une sorbonne. Porter des gants en caoutchouc nitrile et une protection oculaire.
Peut ragir vigoureusement avec les oxydants pour former des peroxydes instables en cas dexposition prolonge lair et la lumire.
202
La solution aqueuse de propanol-2 7085 % utilise en arosol dsinfectant prsente tout de mme un risque dinammation et ne doit pas tre utilise proximit dune source dignition.
Pyridine C5H5N
Liquide incolore dot dune odeur caractristique; point de fusion 42C, point dbullition 115C.
Trs inammable; point dclair 20C; limites dexplosibilit 1,812,4 %. Dgagement de vapeurs ou de gaz irritants ou toxiques en cas dincendie. Les mlanges air/vapeurs sont explosifs.
Travailler sous ventilation, avec un dispositif local dvacuation des vapeurs ou porter une protection respiratoire; porter des gants et des vtements protecteurs.
Ragit violemment avec les oxydants nergiques et les acides forts.
203
Agit sur le systme nerveux central en provoquant des cphales, des tourdissements, des nauses, un essoufement et une perte de conscience. Peut traverser la barrire cutane, en provoquant des rougeurs et une sensation de brlure. Lingestion entrane des douleurs abdominales, de la diarrhe, des vomissements, de la faiblesse. Une exposition rpte peut provoquer des troubles hpatiques et rnaux.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Slnium Se
Irritant pour les yeux et la peau. Linhalation de la poussire peut provoquer un dme pulmonaire. Chute des ongles et troubles gastro-intestinaux en cas dexposition rpte.
Combustible. Dgagement de vapeurs ou de gaz irritants ou toxiques en cas dincendie.
Solide inodore se prsentant sous diverses formes : solide amorphe brunrouge fonc bleu-noir, cristaux de couleur rouge, transparents, ou gris mtallique noir. Point de fusion 170C217C, point dbullition 685C.
Eviter la dispersion de la poussire. Observer une hygine rigoureuse. Travailler avec un dispositif local dvacuation des vapeurs. Porter des gants et des vtements protecteurs ainsi quune protection oculaire.
204
Ragit violemment avec les oxydants et les acides forts. Ragit avec leau 50C en formant de lhydrogne inammable et de lacide slnieux. Ragit avec incandescence par chauffage mnag en prsence de phosphore et de mtaux comme le nickel, le potassium, le platine, le sodium et le zinc.
Sulfure dhydrogne Hydrogne sulfur H2S
Gaz incolore forte odeur dufs pourris; point de fusion -85C, point dbullition -60C.
Les effets qui peuvent se produire sur le systme nerveux central entranent des cphales, des tourdissements, de la toux, des maux de gorge, des nauses, des difcults respiratoires, une perte de conscience et la mort. Linhalation peut provoquer une dme pulmonaire. Rougeur, douleurs, brlures graves et profondes au niveau des yeux. Porter des vtements protecteurs.
Extrmement inammable; limites dexplosibilit 4,346 %.
Travailler sous ventilation, avec un dispositif local dvacuation. Porter des lunettes de protection coques ou un masque respiratoire complet.
Oxydants nergiques et acide nitrique concentr. Attaque de nombreux mtaux et plastiques.
Lodorat est vite satur et ne constitue pas un moyen able de dceler ce gaz si celui-ci est prsent en permanence.
Tellurite de potassium K2TeO3
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Non combustible. En cas dincendie, dgagement de vapeurs ou de gaz irritants ou toxiques.
Cristaux blancs dliquescents; trs soluble dans leau. Eviter tout contact. Travailler sous ventilation, avec un dispositif local dvacuation des vapeurs ou porter une protection respiratoire; porter des gants en caoutchouc nitrile, des vtements protecteurs ainsi quun cran facial ou un masque respiratoire complet.
Toxique par ingestion ou inhalation de la poussire. Irritant pour la peau et les yeux.
Ttrachlorure de carbone CCl4
Liquide incolore lodeur thre caractristique; point de fusion -23C, point dbullition 76,5C.
Peut traverser la barrire cutane; risque de dermite en cas dexposition prolonge. Irritant pour les yeux. Peut provoquer des lsions hpatiques et rnales et des troubles neurologiques centraux se traduisant par des cphales, des nauses, un lger ictre, une perte dapptit et une narcose. Cancrogne pour lanimal.
Se dcompose par contact avec des surfaces chaudes ou des ammes avec formation de vapeurs ou de gaz toxiques et corrosifs (chlorure dhydrogne, chlore, phosgne). Ragit avec certains mtaux comme laluminium, le magnsium et le zinc.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Ttrahydrofuranne C4H8O Oxyde de dithylne Oxyde de ttramthylne
Liquide incolore dot dune odeur thre caractristique; point de fusion -108,5C, point dbullition 66C.
Dpression du systme nerveux central conduisant une narcose. Irritant pour les yeux, la peau et les voies respiratoires.
Travailler sous ventilation, avec un dispositif local dvacuation des vapeurs ou en portant une protection respiratoire, des gants ainsi que des lunettes de scurit.
206
Trs inammable; peut former des peroxydes explosifs; point dclair -14C. Leau peut se rvler inefcace pour combattre des feux de ttrahydrofuranne, mais on peut sen servir pour refroidir les rcipients exposs au feu.
Ragit violemment avec les oxydants nergiques et les bases fortes, ainsi quavec certains halognures mtalliques, avec risque dincendie et dexplosion. Attaque certains types de plastique, de caoutchoucs et de revtements. Le ttrahydrofuranne peut se polymriser en prsence dinitiateurs de polymrisation cationiques. Le chauffage reux avec de lhydroxyde de calcium peut provoquer des explosions.
Ttroxyde dosmium OsO4
Cristaux jaune ple dgageant une odeur pntrante; point de fusion 40C, point dbullition 130C; se sublime endessous de son point dbullition; soluble dans leau.
Trs toxique en cas dinhalation, dingestion ou de contact cutan, avec forte irritation, voire brlures graves. Les vapeurs, le solide et les solutions sont corrosives pour la peau et les voies respiratoires; linhalation peut causer un dme pulmonaire.
Oxydant nergique. Non combustible, mais facilite la combustion dautres substances.
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Combustible. Dgagement de vapeurs ou de gaz toxiques ou irritants en cas dincendie.
Tenir les rcipients bien ferms, dans un local bien ventil. Manipuler le solide et les solutions sous une sorbonne ou une hotte. Porter des gants protecteurs et des lunettes coques pour laboratoire de chimie. Pour prparer les solutions, introduire lampoule ferme dans le volume deau voulu, boucher et agiter jusqu rupture de lampoule. Eviter tout contact; porter une protection oculaire et des gants. Oxydants.
o-Tolidine 3,3-dimthyl-(1,1biphnyl)-4,4-diamine (CH6-(3CH3)-(4NH2))2
Cristaux incolores; point de fusion 131C, point dbullition 200C; peu soluble dans leau.
Nocif en cas de contact cutan ou dingestion. La poussire est irritante pour les voies respiratoires et les yeux. Probablement cancrogne pour lhomme.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Tolune Mthylbenzne C7H8
Liquide incolore dot dune odeur caractristique; point de fusion -95C, point dbullition 111C; non miscible leau.
Dpression du systme nerveux central. Irritant pour les yeux, les muqueuses et la peau. Une exposition rpte peut avoir des effets indsirables sur la reproduction et le dveloppement humains.
Peut ragir avec les acides et les bases fortes ainsi quavec les oxydants.
208
Trs inammable; les vapeurs peuvent causer un embrasement instantan; point dclair 4C; limites dinammabilit 1,47 %. Produits dextinction en cas de feu limit : produits secs, anhydride carbonique, mousse, brumisation deau ou gaz inerte (azote).
Tenir les rcipients hermtiquement ferms et distance de toute source dignition; mettre les rcipients la terre pour viter les dcharges dlectricit statique. Eviter dinhaler les vapeurs; porter une protection respiratoire. Travailler sous une sorbonne ou dans un endroit bien ventil. Porter des gants en caoutchouc nitrile.
Trichorthylne CHClCCl2
Liquide incolore odeur caractristique; point de fusion -73C, point dbullition 87C.
Irritant pour les yeux et la peau; une exposition prolonge peut provoquer une dermite et des troubles du systme nerveux central conduisant des pertes de mmoire. Possibilit de troubles hpatiques et rnaux. Probablement cancrogne pour lhomme.
Combustible dans certaines conditions.
Travailler sous ventilation ou avec un dispositif local dvacuation. Porter des gants, des lunettes de scurit ou autre type de protection oculaire avec une protection respiratoire ou un masque complet.
209
En cas de contact avec des surfaces chaudes ou une amme, se dcompose en produisant des gaz toxiques et corrosifs (phosgne, chlorure dhydrogne). Dcomposition en prsence de bases alcalines fortes avec formation de dichloractylne; raction violente avec les mtaux tels que laluminium, le baryum, le magnsium et le titane ltat pulvrulent; lente dcomposition en prsence dhumidit, avec formation dacide chlorhydrique.
PRODUIT CHIMIQUE
PROPRITS PHYSIQUES
RISQUE DINCENDIE
PRCAUTIONS PRENDRE
AUTRES RISQUES
Xylne (mlanges disomres) Dimthylbenzne C6H4(CH3)2
Liquide incolore dgageant une odeur aromatique; point de fusion -95 -13C, point dbullition 136145C; insoluble dans leau.
Liquide inammable; point dclair 2732C.
Eviter tout contact avec les yeux. Porter des gants en caoutchouc nitrile et une protection oculaire. Tenir les rcipients hermtiquement ferms et distance de toute source dignition.
Peut contenir de lthybenzne comme impuret. Lthybenzne pourrait tre cancrogne pour lhomme.
210
Peut provoquer des troubles du systme nerveux central se traduisant par des cphales, des tourdissements, de la fatique et des nauses. Le liquide et les vapeurs sont irritants pour les yeux, la peau, les muqueuses et les voies respiratoires. Nocif en cas dingestion. Un contact cutan prolong peut provoquer une dlipidation cutane. Dcit neurologique non spcique. Lexposition peut accrotre les lsions auditives provoques par le bruit. Lexprimentation animale incite penser que ces produits exercent des effets indsirables sur la reproduction et le dveloppement humains.
Index
acariens 37 accs animaleries 32, 33, 34, 35 laboratoire 11, 23, 2930 accidents 11 appareils/quipements 162 voir aussi premiers secours, blessures, renversement actaldhyde 164 actate de thallium 165 actone 165 actonitrile 166 actylne 167 acide actique 167 chromique 168 nitrique 169 oxalique 169 perchlorique 122, 170 phosphorique 170 picrique 122, 171 sulfurique 172 acroline 173 arosols activits gnrant des 57 enceinte de scurit biologique 16, 57 quipement de scurit 68 potentiellement dangereux 89 risques dus au pipettage 70 agitateurs secoueurs 71, 82 agrment enceintes de scurit biologique 66 laboratoires/installation 4142 aiguilles hypodermiques 11, 84, 160 limination 1921 pour injection, viter linoculation 80 alarmes 23, 67
alcools 9899 alimentation lectrique 15, 31 en eau 15, 24 aliments, 11 allergie au latex 74 amnagement du laboratoire classication par groupe de risque 1 scurit biologique niveaux 1 et 2 : 1315 scurit biologique niveau 3 : 2324, 25 scurit biologique niveau 4 : 29, 31 ammoniac et solutions 174 ampoules contenant du matriel infectieux ouverture 83 stockage 83 anhydride actique 174 aniline 175 animaleries 11, 3237 invertbrs 3637 niveau de connement 32 scurit biologique niveau 1 : 33 scurit biologique niveau 2 : 3334 scurit biologique niveau 3 : 3435 scurit biologique niveau 4 : 3536 animaux limination des carcasses 34 ne servant pas aux expriences 11, 33 transgniques et knock out 115 anses de transfert usage unique 17, 69, 71 micro-incinrateurs 69, 72 utilisation sans risque 78 antimicrobiens 92 antiseptiques 92, 9798, 99 appareils respiratoires (quipement de protection) 23, 7374
211
argent 175 arthropodes animaleries 37 lutte contre les 12, 34 Association du Transport arien international (IATA) 106 audit 41, 42 auramine 176 autoclavage 19, 102104 autoclaves 70, 102104 deux portes 31 extraction dair 102 animaleries 3436 source de chauffage extrieure 102 vapeur directe 102 chargement 103 conformit 17 disponibilit 15, 17, 24, 31 prcautions dutilisation 103104 azoture 122, 176 azoture de sodium 176 bains-marie 162 bec Bunsen 78, 79 benzne 177 benzidine 177 bicarbonate 123 dammonium 100 biocide 92 1,1-Biphnyl-4,4-diamine 177 bislnite de sodium 191 blessures conduite tenir en cas durgence 89 personnel de lanimalerie 34 prvention 80 blouses de laboratoire 72, 73 boissons 11, 15, 34, 80 bonnes techniques microbiologiques 912, 7787 brome 178 bromure de cyanogne 179 broyeurs de tissus 82, 161 bruit 126127 cages 34, 3536 animaux 34, 35 insectes volants 37
carbonate de sodium 123 4,4-carbonoimidoylbis N,Ndimthylbenzamine 176 carte de surveillance mdicale 2526, 27 catastrophes, naturelles 88, 9091 centres collaborateurs de lOMS pour la scurit biologique 158 centrifugeuses 81, 160 appareils, connement 2425 bris des tubes 90, 160 utilisation incorrecte 162 chaleur dsinfection et strilisation 101104 humide 102 sche 101 chaussures 11, 22, 28, 73 chef du laboratoire 12, 133 programme de formation 18, 137139 chloramines 94, 96 chlore 9495, 180 chloroforme 181 chlorure dhydrogne 182 circulation de lair alarmes 23, 67 animalerie 34, 35, 36 enceintes de scurit biologique 5960, 61 scurit biologique niveau 3 : 23 scurit biologique niveau 4 : 30 code de bonnes pratiques scurit biologique niveaux 1 et 2 : 912 scurit biologique niveau 3 : 2223 scurit biologique niveau 4 : 28 combinaisons de laboratoire 72, 73 comit de scurit biologique 134135 composs chlors 9495 composs dammonium quaternaire 98 conception, laboratoire principes directeurs 3839 scurit biologique niveaux 1 et 2 : 1215 scurit biologique niveau 3 : 2324, 25 scurit biologique niveau 4 : 2931 conduite daspiration (circuit de vide) 24, 70 connement primaire 29 conformit, quipements 17
212
INDEX
conglateurs 8283 consignes pour nettoyer des produits rpandus 107109 consommation daliments 11, 15, 34, 80 conteneurs chantillons 77, 84, 107 matriels contamins 2021 objets tranchants 20, 70 rcipients casss 8990 tanches 69 contrles, scurit du laboratoire 4142 formulaires 4348 cosmtiques 11 coupures 89 cuivre 183 cyanure de sodium 184 cytochalasine 185 dchets 1921 animaleries 34, 36 contamins par des prions 86 dcontamination 19, 24 invertbrs 3637 radioactifs 130 scurit biologique niveau 4 : 31 traitement/limination 1921, 24, 105 dcontamination dchets 1920, 24 dnition 92 des mains 101 efuents/liquides 12, 31 enceintes de scurit biologique 67, 100101 environnement local 100 liquides biologiques 85 matriels contamins par des prions 8587 voir aussi nettoyage, dsinfection dlgu la scurit biologique 18, 90, 133134 drivs phnoliques 9798 dsinfectants 93, 94100 dsinfection 92105 autoclavage 102104 chimique 93100 dchets 2021
dnition 93 enceintes de scurit biologique 6667 nettoyage pralable 93 produits rpandus 107109 voir aussi dcontamination, strilisation dessiccateurs 161 dichloroisocyanurate de sodium (NaDCC) 94, 9596 dithylther 189 3,3-dimthyl-(1,1-biphnyl)-4,4-diamine 207 dimthylamine 185 dimthylbenzne 210 2,4-dinitrophnylhydrazine 185 dioxane 186 dioxyde de carbone, solide 186 de chlore 96, 187 de dithylne 186 directeur du laboratoire 12, 133 disjoncteurs 126 dispositif anti-retour 15, 24 dissmination de matriel infectieux, viter la 7879 douches 29, 35 bullition 102 chantillons 7778 conteneurs 77, 84, 107 tiquetage 8384 ouverture des colis 7778 des tubes et chantillonnage 84 pour lesquels les informations sont limites 8 prcautions dusage 8385 rception 77 rcolte 8384 systme du triple emballage 107, 108 transport 77, 84 clairage 14, 144 coulement, laboratoire de connement 31 cran anti-projections 69 crans faciaux (visires) 11, 7273 efuents/liquides contamins 11, 12, 31 enceinte vacuation totale 64
213
enceinte de laboratoire de classe III 2930 rgulation de la ventilation 3031 enceintes de scurit biologique (ESB) 5767, 69 agrment 66 animaleries 3435 choix 58, 6364 classe I 5862 classe II 5962 type A1 5960, 62 types A2, B1 et B2 6162 classe III 62 laboratoire 2930 contamination par des prions 86 dcontamination 67, 100 emplacement 24, 64 raccordements pour lvacuation de lair 6263 utilisation et maintenance 65 systmatique 16, 2324 sans risque 6467, 79 encphalopathie spongiforme bovine (ESB) 85 enfants 10 quipement et vtements de protection individuelle 7274 animaleries 34, 36 enceinte de scurit biologique 67 laboratoire de base 11 laboratoire de connement 2223 haute scurit 29, 30 liste de contrle 148 prions 86 quipement et matriel de secours 91 de scurit 21, 6874 liste des contrles 148149 laboratoire de base 1617 connement 2425 risques 159162 rosion 89 Escherichia coli K12 114 thanol (alcool thylique ) 98, 187 thanolamine 188 thanolamine-2-aminothanol 188 thers 122
tiquetage, modle 8384 valuation du risque microbiologique 12, 78 animalerie 3233 organismes gntiquement modis 115117 excrta, prcautions dusage 8385 extincteurs 126 femmes en ge de procrer 18, 148 fentres animaleries 34, 35 laboratoire 12, 15, 23 locaux pour invertbrs 37 ltres air, voir ltres HEPA ltres particules de haute efcacit (HEPA) animalerie 34 contamination par des prions 86 enceinte de scurit biologique 57, 58, 59, 60, 62, 63 scurit biologique niveau 3 : 2324, 25 scurit biologique niveau 4 : 2930, 31 oles vide 162 xateurs formols 85 acons bouchon viss 17, 70 ambes, tiologie de maladies inconnues 8 ammes nues 66, 78 formaldhyde 9697, 190 formation 137139 personnel danimaleries 34, 36 de laboratoire 18 scurit biologique 5152 utilisation des enceintes de scurit biologique 67 formol 97 friction base dalcool pour le lavage des mains 9899, 101 frottis, pour microscopie 84 fumigation 100 gants 11, 67, 73, 74 gaz alimentation du laboratoire 15 comprims et liqus 123, 146147 gnrateurs dultrasons 71, 82, 8485, 161
214
INDEX
gnie gntique 113 germicides chimiques 93100 glutaraldhyde 97, 191 gouttes paisses 84 grillages empchant le passage des arthropodes 37 groupes de risque, microbiologique 9 classication 12 laboratoire de base 9 niveau de scurit biologique 23 homognisateurs et broyeurs de tissus 161 hotte ux laminaire horizontal ou vertical 57 1-hydrazino-2,4-dinitrobenzne 185 hydroslnite de sodium 191 hydroxyde de potassium 192 de sodium 192 hypochlorite de calcium 94, 95 de sodium 9495, 100, 193 incendies 21, 125126 listes, contrles pour la prvention et la protection 145146 procdures durgence 9091 risques 125, 162 incidents, voir accident, renversements incinrateurs 104105 incinration 21, 104105 ingnieurs 136 ingestion de matriel infectieux 7980, 89 inoculation accidentelle 80 insectes volants 37 inspection du laboratoire 4142 interdiction de fumer 11, 34 invertbrs 36, 37 iode 99, 194 iodophores 99 isolateurs dpression en lm ou feuille de plastique souple 6869, 70 isopropanol, propanol-2 98, 202 jarres/incubateurs anarobie 160, 162
laboratoire agrment 4142 formulaire, contrles de scurit 4348 locaux, liste de contrle 143 principes directeurs 3840 scurit biologique 5153 services, listes, contrles de scurit 144145 techniques 7787 zones de travail 12 voir aussi laboratoire de base, laboratoire de connement, laboratoire de connement haute scurit laboratoire de base (niveaux de scurit 1 et 2) 1, 921 code de bonnes pratiques 912 conception et amnagement 1215, 16 quipement 1317 formation 18 formulaires, contrles de scurit 4348 scurit chimique, lectrique, incendie, radioprotection et scurisation de lappareillage 21 surveillance mdico-sanitaire 17 traitement des dchets 1921 laboratoire de connement (scurit biologique niveau 3) 1, 2, 2226 appareils et quipement 2425 code de bonnes pratiques 2223 conception 2324 formulaire, contrles de scurit 48 surveillance mdico-sanitaire 2526 laboratoire de connement haute scurit (scurit biologique niveau 4) 1, 2, 2831 code de bonnes pratiques 28 conception et amnagement 2931 lavage des mains 11, 74, 101 animaleries 34 lavabos 15, 23, 34 lentilles de contact 11 liquides biologiques, prcautions dusage 8385 liste des contrles de scurit 143150 litire, animaux 34, 35 lumires ultraviolets 65
215
lunettes coque 71 lutte contre les rongeurs 12, 34 lyophilisateurs 161162 maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) 85 matriel contamin voir matriel infectieux matriel infectieux autoclavage et rutilisation 20 contact avec la peau et les yeux 7980 dcontamination voir dcontamination limination 1920, 24 viter la dissmination 7879 ingestion 7980, 89 liste, contrles de scurit 149 lyophilis, ouverture des ampoules 83 projections 1112, 8990, 107109 mlangeurs 71, 82, 161 mercure 194 mesures de scurit 15, 145146 mthanol 97, 196 mthylbenzne 208 meubles, laboratoire 1415 microbicide 93 micro-incinrateurs 69, 72 microscope, frottis et gouttes paisses 84 murs 14, 23 naphthylamine 196 nettoyage enceintes de scurit biologique 6667 quipe de 136 matriel de laboratoire 93 rfrigrateurs et conglateurs 8283 nettoyeurs ultrasons 161 ninhydrine 197 nitrate dargent 197 nitrobenzne 198 niveau de connement, animaleries 32 niveau de scurit biologique de lanimalerie (NSBA) 32 N-phnyl-a-naphthylamine 196 N-phnyl-b-naphthylamine 196 objets tranchants 20 animaleries 34 conteneurs pour llimination 20, 70 viter les blessures 74, 80, 84
OGM voir organismes gntiquement modis Organisation de lAviation civile internationale (OACI) 106 Organisation mondiale de la Sant (OMS) centres collaborateurs pour la scurit biologique 158 Programme de scurit biologique 28 organismes gntiquement modis (OGM) 113117 autres considrations 117 valuation du risque 115116 o-Tolidine 207 oxyde de chrome VI 168 de dithylne 206 de ttramthylne 206 oxygne 199 panneau de danger biologique 9, 22, 33 paraformaldhyde 97, 100 peau contact avec la 7980 coupure, inoculation et rosion 89 voir aussi blessures pentoxyde de phosphore 199 peracides 99100 priode de garantie, matriel de laboratoire 3839 permanganate de potassium 200 peroxyde dhydrogne 99100, 200 personnel dentretien et de maintenance 136 formation voir formation gestion de la scurit biologique 12 locaux, liste de contrle 144 objets/vtements personnels 15 rgles de scurit 5152 responsable de la scurit 133135 surveillance mdico-sanitaire voir surveillance mdico-sanitaire vaccination 157 phnol 201 photomtre amme 162 pipettage 78 la bouche 11, 70 dispositif 1617, 7071, 78
216
INDEX
pipettes 17, 78 plafonds 14, 23 plans durgence 8889 plans de travail animaleries 34 laboratoire 12 plantes transgniques 113, 115 plasmide pUC18 114 portes animaleries 34 laboratoire 15, 23, 29 prcautions dusage 8386 prlavage 93 premiers secours 15, 156 primates 33 principes directeurs, laboratoires/ installation 3840 prises relies la terre 126 produit blanchissant (hypochlorite de sodium) 9495, 100, 193 produit pour friction des mains base dalcool 9899, 101 produits chimiques (risques) 21, 121123 enceinte de scurit biologique 64 explosifs 122, 162 incompatibles 122 listes, contrle de scurit 149150 renversements 122123 spciques 163210 stockage 121 toxicit 121122 voies dexposition 121 2-propanol 98, 202 protection auditive 126127 de la face 11, 7273 des produits 58, 60 des yeux 11, 7273, 80 pyridine 203 radionuclides enceintes de scurit biologique 64 rgles de scurit pour le travail avec des 128130 substitution 128 rayonnements ionisants 21, 127130 effets nocifs 127
liste, contrles de scurit 149150 paillasses o seffectue la manipulation 129 principes de radioprotection 127128 rfrigrateurs 8283, 162 rglementation internationale relative aux transports 106107 renversements dans les enceintes de scurit biologique 66 de matriel infectieux 11, 8990, 107109 de produits chimiques 122123 de sang 85 reprsentant de ltablissement 39 risques lectriques 21, 126, 162 liste, contrles de scurit 147 salle de repos 15 sang, prcautions dusage 8385 sas air 29, 30, 36 scurit biologique 5152 en laboratoire 5153 gestion 12 scurit biologique niveau 1 : 1, 2, 921 animalerie 3233 classication des micro-organismes infectieux 14 conception du laboratoire 1315 formulaire, contrles de scurit du laboratoire 4345 surveillance mdico-sanitaire 17 voir aussi laboratoire de base scurit biologique niveau 2 : 1, 2, 921 animalerie 32, 3334 conception du laboratoire 1315 formulaire, contrles de scurit du laboratoire 4647 surveillance mdico-sanitaire 1718 voir aussi laboratoire de base scurit biologique niveau 3 : 1, 2, 2226 animalerie 32, 3435 conception du laboratoire 2324 formulaire, contrles de scurit du laboratoire 48 voir aussi laboratoire de connement
217
scurit biologique niveau 4 : 1, 2, 2831 animalerie 32, 3536 conception du laboratoire 2931 voir aussi laboratoire de connement haute scurit slnium 204 seringues 11, 20 srum, sparation du 80 service dentretien des btiments 136 services de secours 91 sols 14, 23 souris susceptibles dtre porteuses de poliovirus 115 sporocide 93 strilisation 31, 92105 chaleur 101104 dnition 93 matriel contamin par des prions 8687 nettoyage avant 92, 93 voir aussi dcontamination, dsinfection stockage ampoules contenant du matriel infectieux 83 espace, laboratoire 15 gaz comprims et liqus 123, 146147 liquides inammables 146 locaux, liste des contrles de scurit 143144 produits chimiques 121 sulfure dhydrogne 205 surveillance mdico-sanitaire laboratoire de base 1718 laboratoire de connement 2526, 27 liste, contrles de scurit 148 symbole international indiquant un risque dirradiation 129, 130 systme dexpression biologique 114 systme de chauffage, ventilation et air conditionn 2324 liste, contrles de scurit 144 systme de circulation dair combinaison pressurise 29 enceintes de scurit biologique 5762, 6364 voir aussi systmes de ventilation
systme, demballage 107, 108 du triple emballage 107, 108 systme de communication 28 systme de refroidissement, arthropodes 37 systmes de ventilation animaleries 34, 35, 36 laboratoire de base 15 de connement 23 haute scurit 3031 liste, contrles de scurit 144 tablier de laboratoire 72 technologie de recombinaison de lADN 113117 tellurite de potassium 205 ttrachlorure de carbone 205 ttrahydrofuranne 206 ttroxyde dosmium 207 tiques 37 tissus contenant des prions 86 prcautions dusage 85 toilettes 144 tolune 208 transfert de gne 114 transport 12, 106109 chantillons 77, 8384 matriel infectieux 2021, 24 rglementation internationale 106107 systme du triple emballage 107, 108 Transport des Marchandises dangereuses, Comit dexperts de lONU en matire de (UNCEDTG) 106 travail en binme 28, 36 trichlorthylne 209 triclosan 9798 2,4,6-trinitrophnol (acide picrique) 122, 171 trousse de premiers secours 156 tubes bouchon viss 17 bris dans les centrifugeuses 90
218
INDEX
ultracentrifugeuses 160 urgences 8891 conduite tenir 8991 plan d 8889 scurit biologique niveau 4 : 28, 31 vaccination, du personnel 157 vecteurs 114 dexpression 114 viraux 114 ventilation animaleries 34 enceintes de scurit biologique 24, 30, 5860, 62, 63
laboratoire de connement 23, 24 haute scurit 30 verre 84 manipulation de dbris de 89, 90, 109 prcautions pour lutilisation 80, 84 vestibules 23, 35, 36 vtements de protection 29 combinaisons 29 pressurises 2930 xylne 210 zone dirradiation 128129 zones de travail, laboratoire 11, 12
219

Manuel de Sécurité Biologique en Laboratoire

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MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE TROISIME DITION

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

Organisation mondiale de la Sant

MANUEL DE SCURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

ORGANISATION MONDIALE DE LA SANT Genve 2005

Table des matires

SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE MANUEL DE SECURITE

TABLE DES MATIRES

SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE MANUEL DE SECURITE

TABLE DES MATIRES

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

De base niveau de scurit biologique 1 De base niveau de scurit biologique 2

Connement niveau de scurit biologique 3

Connement haute scurit niveau de scurit biologique 4

Manipulation de germes pathognes dangereux

Tableau 3. Normes applicables aux diffrents niveaux de scurit biologique

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

Les principes directeurs de la scurit biologique

2. Evaluation du risque microbiologique

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

3. Les laboratoires de base Scurit biologique niveaux 1 et 2

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2

3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2

4. Le laboratoire de connement Scurit biologique niveau 3

4. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 3

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

4. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 3

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

4. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 3

SURVEILLANCE MEDICALE Nom photographie du titulaire

Figure 5. Modle propos de carte mdicale.

5. Le laboratoire de connement haute scurit Scurit biologique niveau 4

5. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT HAUTE SCURIT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 4

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

5. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT HAUTE SCURIT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 4

NSBA, niveau de scurit biologique de lanimalerie; ESB, enceinte de scurit biologique

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

7. Principes directeurs pour la mise en service des laboratoires ou installations

7. PRINCIPES DIRECTEURS POUR LA MISE EN SERVICE DES LABORATOIRES OU INSTALLATIONS

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

8. Principes directeurs pour lagrment des laboratoires/ installations

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

8. PRINCIPES DIRECTEURS POUR LAGRMENT DES LABORATOIRES/INSTALLATIONS

Tableau 5. Laboratoire de base scurit biologique niveau 1 : contrle de scurit

Niveau de scurit biologique: Joindre le formulaire de contrle bioscuritaire correspondant

MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE)

SANS OBJET OBSERVATIONS

8. PRINCIPES DIRECTEURS POUR LAGRMENT DES LABORATOIRES/INSTALLATIONS

POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE)

SANS OBJET OBSERVATIONS

Signature du contrleur :. . . . . . . . . . Date dachvement du contrle : . . . . . . . . .

Tableau 6. Laboratoire de base Scurit biologique niveau 2 : contrle de scurit.