HST

L'CHANTILLONNAGE
ET L'ANALYSE DES
AROSOLS MICROBIENS

ND 2222 - 198 - 05

3 Bioarosol
3 Micro-organisme
3 chantillonnage
3 Analyse

h Philippe

L'exposition aux bioarosols peut tre associe des maladies infectieuses et des effets sanitaires
de type toxinique, allergique et cancrogne. Il existe beaucoup de mthodes de mesurage permettant
de vrifier la prsence de particules biologiques dans l'air sur les lieux de travail et pour les quantifier.
L'chantillonnage des bioarosols peut tre effectu par impaction sur milieu glos, par filtration de
l'air travers un milieu filtrant mais d'autres mthodes permettant de collecter les micro-organismes
dans une solution sont disponibles. La dtection et la quantification des micro-organismes dans les
chantillons peuvent tre effectues par le biais des mthodes d'analyse utilises en microbiologie.
Toutefois, le mesurage des bioarosols en routine se heurte deux problmes. D'une part, les
mthodes de mesurage ne sont pas totalement caractrises et un effort de standardisation est
encore ncessaire pour pouvoir comparer les rsultats obtenus par diffrents oprateurs avec une
mme technique. D'autre part, l'absence de valeurs de rfrence rend dlicate l'interprtation des
rsultats. Dans ces conditions, l'exploitation des rsultats doit prendre en considration le maximum
d'informations rassembles lors de l'chantillonnage du transport et de l'analyse des chantillons.

es arosols biologiques ou bioarosols sont dfinis comme des

particules d'origine microbienne,
animale, ou vgtale en suspension dans l'air. L'intrt pour l'tude de ces
arosols s'est accru ces dernires annes
et il est actuellement reconnu que l'exposition aux bioarosols peut tre associe
des maladies infectieuses et des effets
sanitaires de type toxinique, allergique et
cancrogne [1, 2].

L'chantillonnage et l'analyse des

bioarosols peuvent tre effectus dans
le but de vrifier la prsence de particules biologiques dans l'air ou de les quantifier. Dans la pratique, le mesurage permet, entre autre, d'valuer l'exposition

des personnes aux agents biologiques,

d'identifier des sources de contamination et de vrifier l'efficacit de mesures
correctives. Plusieurs normes existent
pour le mesurage des micro-organismes
dans l'atmosphre des lieux de travail.
Parmi celles-ci, on peut citer la norme
NF EN 13098 qui donne les recommandations pour le mesurage des microorganismes dans l'air [3] et la norme
EN 14031 sur le mesurage des endotoxines [4]. En pratique, il existe une
multitude de mthodes et d'appareils
utilisables pour l'tude des bioarosols,
mais la majorit d'entre elles n'est pas
standardise et leur caractrisation est
souvent incomplte.

DUQUENNE,
Guylaine GREFF-MIRGUET
INRS, Dpartement Mtrologie des polluants

SAMPLING AND ANALYSIS

OF MICROBIAL AEROSOLS
Exposure to bioaerosols may be linked to both
infectious diseases and health effects of
toxinic, allergic and carcinogenic type. There
a many measuring methods for controlling
the presence of and quantifying biological
particles in the workplace. Bioaerosol
sampling can be conducted by impaction on
a gelose medium or by filtration through a
filtering medium, but other methods allowing
microorganisms to be collected in a solution
are also available. Detection and quantification
of microorganisms in samples can be
performed using microbiological analysis
methods. However, two problems confront
routine bioaerosol measurement. Firstly,
measuring methods are not fully characterised
and a standardisation effort is still required
to be able to compare results obtained by
different operators applying the same
method. Secondly, the lack of reference values
makes interpretation of results delicate.
Under these conditions, interpretation of
results must consider a maximum amount of
information collected during not only
sampling, but also sample transport and
analysis.

3 Bioaerosol
3 Micro-organism
3 Sampling
3 Analysis

INRS - Hygine et scurit du travail - Cahiers de notes documentaires - 1er trimestre 2005 - 198 / 23

FIGURE 1

Les diffrentes tapes du mesurage

des bioarosols
Different stages of bioaerosol measurement

Air

viables proprement parler, les virus

entrent galement dans cette catgorie.
Les lments non viables d'origine
microbienne sont essentiellement constitus de fragments cellulaires et d'autres produits ou mtabolites microbiens
(endotoxines, mycotoxines, composs
organiques microbiens volatiles).

chantillonage

REMARQUE
Transport de lchantillon

Analyse

Rsultats

Des lments d'origines animale et

vgtale peuvent galement tre
prsents dans les bioarosols. Parmi
les structures d'origine animale, on
recense les excrments ou fragments
d'insectes, les squames ou phanres
de mammifres et autres rsidus ou
produits d'organismes animaux tels
les enzymes. Les structures d'origine
vgtale (grains de pollen et rsidus)
ou produits d'organismes vgtaux
(fibres et enzymes) peuvent entrer
dans la composition des bioarosols.

Interprtation des rsultats

Le schma de mesurage comprend

plusieurs tapes qui influencent chacune
le rsultat final et son interprtation
(Figure 1). Ainsi, le prlvement, le
transport des chantillons et leur analyse
sont des oprations indissociables dont
il faut tenir compte pour mener ces
mesurages dans de bonnes conditions.
En attendant des avances significatives
dans le domaine de la caractrisation et
de la standardisation des mthodes,
nous proposons de faire un rappel sur
les principales mthodes disponibles
actuellement pour l'chantillonnage et
l'analyse des arosols microbiens.

Dans l'air, ces lments peuvent

tre prsents sous les formes suivantes :
a) lments biologiques individualiss (spores, cellules bactriennes, virus
isols),
b) agrgats ou des assemblages
constitus de plusieurs lments biologiques individualiss et/ou d'autres
matriels d'origine biologique,
c) produits ou fragments d'lments
biologiques individualiss ou autres
matriels d'origine biologique,
d) particules d'origine biologique
associes des particules d'origine non
biologique.

CARACTRISTIQUES
DES BIOAROSOLS

L'CHANTILLONNAGE
DES BIOAROSOLS

La composition des bioarosols est

complexe. Elle varie en fonction des
sources, des conditions environnementales et du temps. Parmi les principaux
lments qui peuvent entrer dans la
composition d'un arosol biologique on
peut distinguer les structures viables et
non viables. Les structures microbiennes
viables comprennent les cellules ou
spores bactriennes, les fragments de
myclium et les spores fongiques, les
cellules ou les kystes de protozoaires.
Bien que n'tant pas des structures

Les principes physiques de base et

les bonnes pratiques (cf. Encadr) qui
rgissent l'chantillonnage des arosols
biologiques sont les mmes que ceux
appliqus l'chantillonnage des arosols non-biologiques. A ces principes
s'ajoutent des spcificits lies la manipulation de matriel biologique, savoir :
a) l'application des protocoles et
l'utilisation du matriel dans des conditions aseptiques,
b) la prise en compte de la viabilit des
agents biologiques lors du prlvement,

INRS - Hygine et scurit du travail - Cahiers de notes documentaires - 1er trimestre 2005 - 198 / 24

c) l'utilisation de substrats de collecte spcifiques pour l'chantillonnage,

d) l'emploi de mthodes d'analyses
spcifiques l'tude des agents biologiques.
Les appareils destins l'chantillonnage des arosols microbiens font appels
trois principes fondamentaux - l'impaction, la filtration et l'impingment dcrits ci-aprs.

CHANTILLONNAGE PAR IMPACTION

L'air aspir passe travers une
srie d'orifices (grille) et les particules
viennent s'impacter sur une surface
cible (support de collecte) place sur le
trajet du flux d'air. Dans le cas des bioarosols, la surface interpose est gnralement un milieu de culture glos
[Figure 2 (a, f, g)]. Il existe diffrentes
mthodes d'impaction qui se diffrencient par les mcanismes mis en jeu
pour collecter les particules, le support
de collection et les caractristiques du
matriel utilis. Selon ces critres, on
peut distinguer les impacteurs orifices circulaires, les impacteurs fentes
etlesimpacteurscentrifuges.
L' impingment est galement une
forme d'impaction qui sera voque
plus loin.

Les impacteurs mono-tage sont

constitus d'un seul ensemble grillesupport de collecte. Avec le dbit de l'air
chantillonn, les caractristiques de la
grille tels le nombre, le diamtre et la
rpartition des orifices, sont des lments dterminants dans l'efficacit
d'chantillonnage des appareils correspondants. La distance entre la grille et le
support de collecte influence galement
l'efficacit d'chantillonnage. Les impacteurs plusieurs tages sont constitus
de deux huit tages unitaires superposs. D'un tage l'autre, les caractristiques des grilles voluent de sorte que la
vitesse d'impaction des particules augmente et que chaque tage collecte une
fraction particulaire aux proprits arodynamiques donnes.

CHANTILLONNAGE PAR FILTRATION

La mthode par filtration consiste
sparer les particules de l'air en le faisant
passer travers un mdia filtrant
[Figure 2 (b, d)]. L'efficacit de captage est
fonction de la vitesse d'aspiration et du
diamtre de l'orifice d'aspiration. La