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Journal des matériaux et des

JMES, 2017 Volume 8, Numéro 3, Page 831-836
sciences de l'environnement
ISSN : 2028-2508
http://www.jmaterenvironsci.com/
Droits d'auteur © 2017,
Université Mohammed 1er ICMES2016, 1-3 déc. 2016, Oujda
Oujda Maroc

Lutte post-récolte contre la moisissure grise de la tomate à l'aide d'extraits d'algues

N. Bahammo1, O. Chérifi1*, H. Bouamama2, K. Chérifi3, T.Moubchir3et M. Bertrand4

1Laboratoire Alimentation, Environnement et Santé, Département de Biologie, Faculté des Sciences et Techniques, Cadi Ayyad
Université, Marrakech, Maroc
2Laboratoire de Chimie Organique et Macromoléculaire, Département de Biologie, Faculté des Sciences et Techniques, Cadi Ayyad
Université, Marrakech, Maroc
3Laboratoire de Biotechnologie et Valorisation des Ressources Naturelles, Département de Biologie, Faculté des Sciences, IBn Zohr
Université, Agadir, Maroc
4INTECHMER – CNAM-LUSAC, BP324, F-50103 Cherbourg Cedex, France

Reçu le 28 octobre 2016,

Résumé
révisé le 28 janvier 2017, L'étude a été réalisée pour évaluer l'effet des extraits bruts d'algues brunes deCystoseira
accepté le 30 janvier 2017 tamariscifoliaetBifurcaria bifurcatacontre le mycélium (croissance de)Botrytis cinérea
provoquant la moisissure grise pendant la post-récolte des tomates. Les résultats ont montré
Mots clés que l'extrait hexanique (91 000 ppm) et l'extrait aqueux (49 600 ppm) ont un pouvoir inhibiteur
très important contre les champignons testés avec une très petite quantité de 100 µL. L'activité
importante a été obtenue avec l'extrait hexanique deC. tamariscifoliacontreB. cinereaavec une
- Extraits de macroalgues,
zone d'inhibition jusqu'à 2 ± 0,18 cm. Le traitement des fruits de tomate inoculés avec l'espèce
- Contrôle biologique,
fongique, avec l'extrait aqueux de l'algue brune assure leur protection contre la
- Moisissure grise,
phytopathogénicité du champignon. Une protection importante a également été obtenue avec
- Tomate,
l'extrait aqueux deB. bifurcata. L'analyse de la teneur en métaux montre que ces deux algues ne
- Post-récolte,
sont pas nocives.
L'utilisation pratique des algues en post-récolte ouvre une nouvelle voie dans la lutte biologique. Leurs
extraits pourraient constituer une alternative écologique pour la protection des cultures contre les
agents pathogènes.
cherifiouafa@gmail.com
Téléphone : (+212)667739621

1. Introduction
Les pertes post-récolte de fruits et légumes frais sont dues à une infection fongique et bactérienne [1, 2]. Ils sont estimés
pour la tomate à 4 % lors de la récolte et 62 % le long de la chaîne de distribution [3] ce qui entraîne de lourdes pertes
économiques.
La pourriture grise de la tomate, causée parBotrytis cinéreaPers., est une maladie grave dans le monde entier sur la tomate où des
technologies de stockage avancées sont disponibles [4]. Le principal moyen de lutte contre la maladie ci-dessus repose encore
principalement sur l'utilisation de fongicides chimiques. Cependant, des méthodes de contrôle alternatives sont nécessaires concernant les
risques des fongicides sur la santé humaine et l'environnement. Les propriétés antimicrobiennes et biostimulantes des algues sont explorées
pour une utilisation en agriculture [5, 6, 7].
Bien que le Maroc s'étende de la mer Méditerranée à l'océan Atlantique au nord et à l'ouest avec une large gamme de
biodiversité de macroalgues, il n'y a que peu de rapports dérivés des activités antimicrobiennes des algues [7, 8, 9],
avec relativement peu d'attention à leur propriétés antifongiques potentielles pendant la post-récolte.
Ainsi, l'étude actuelle représente une tentative de combler l'écart et a été conçue pour évaluer les activités antifongiques de
deux algues brunesCystoseira tamariscifoliaetBifurcaria bifurcatacontre le mycélium (croissance de)Botrytis cinérea
provoquant la moisissure grise pendant la post-récolte des tomates.

2. Matériels et méthodes
2.1.Collections
Cystoseira tamariscifoliaetBifurcaria bifurcataa été collecté sur des rochers à marée basse en mars 2016 sur la côte de Sidi
Bouzid, près de la ville d'El Jadida (33° 13′ 52″ N, 8° 32′ 51″ O). Les échantillons ont été lavés à l'eau de mer à la station de
prélèvement, placés dans des sacs en plastique et transportés au laboratoire dans une glacière. Au laboratoire, les algues
ont été rincées à l'eau de mer pour éliminer le sable et les épiphytes et lavées à l'eau distillée pour éliminer l'excès de sel.

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2.2.Extraction
Les algues ont été séchées à température ambiante, coupées en petits morceaux et broyées dans un robot thermomix. Soixante
grammes de chaque échantillon de poudre d'algues ont été soumis au CHCl3/EtOH (5/5) extraction par trempage pendant une nuit à
température ambiante. Les extraits combinés ont été concentrés par évaporation sous pression réduite, pour donner l'extrait brut
final sous forme d'huile vert foncé. L'extrait brut a ensuite été extrait avec de l'hexane.
L'extrait aqueux a été obtenu selon le protocole décrit dans la littérature [10] avec quelques modifications de la
quantité de poudre d'algues utilisée afin d'obtenir un extrait plus concentré.
Les extraits ont été filtrés à travers des filtres bactériens (Millipore, 0,45 µm) et stockés à 4°C avant d'être utilisés.

2.3.Isolement et culture de souches fongiques

La soucheBotrytis cinéreaa été isolé à partir de tomates infectées et transféré de manière aseptique sur des géloses inclinées à la pomme de
terre et au dextrose (PDA) pour le maintien de la culture. Le champignon a ensuite été purifié par isolement d'une seule spore et maintenu
sur PDA. L'agent pathogène a été identifié sur la base de caractères morphologiques.

2.4.Test antifongique
2.4.1. Essais d'inhibition in vitro
Lain vitroles dosages ont été effectués selon la technique des billes. Dans un premier temps, les suspensions de
champignons de Botrytis cinérea(3.8x105sporesmL-1) l'ensemencement en profondeur a été fait à raison de 1 mL par boîtes
de pétri, puis on a versé le milieu de culture en super refroidissement (45°C à 50°C). Ensuite, les puits créés par les billes ont
été empoisonnés avec des extraits d'algues (50μL et 100μL). Le solvant et l'eau ont été considérés comme témoins négatifs
et le Fluconazole comme témoin positif. Dans cette expérience, nous avons testé deux volumes (tableau 1) et tous les tests
ont été effectués en triple exemplaire. La croissance des isolats fongiques a été notée après 4 jours d'incubation à 25°C. La
zone d'inhibition a été calculée en mesurant le rayon de la zone d'inhibition autour du puits (en mm). Les lectures ont été
prises dans trois directions fixes différentes.

Tableau 1:Volumes testés d'hexane et d'extraits aqueux et leur équivalence massique.

Volumes testés Équivalence massique de l'extrait hexanique Équivalence massique de l'extrait aqueux
µL par puits (mg) par puits (mg)
50 32,7 49,5
100 65,4 99

2.4.2. Test in vivo

Pour les conditions de stockage des tomates, nous avons choisi 7 kg de la variétéCalviavec bon état. Après le lavage des tomates,
elles ont été désinfectées à l'alcool à 90° et rincées à l'eau distillée stérile pour éliminer toute trace de désinfectant. 5 lots d'environ 1
kg chacun ont été créés. Pour les extraits aqueux testés, chaque tomate a été plongée dans un bécher contenant 100 ml d'extrait
aqueux (4,96 g L-1), alors que 1 g de poudre d'algues a été appliqué sur chaque lot de tomates. Pour les contrôles, nous avons utilisé
de l'eau distillée stérile. Après 24 h, chaque tomate a été inoculée avec une suspension de spores (3,8x105mL-1) d'une colonie âgée
de 7 jours à l'aide d'un vaporisateur stérile. Ensuite, tous les lots de tomates ont été répartis séparément dans des bassines
désinfectées à l'alcool à 90° et rincées à l'eau distillée stérile. Ensuite, les bassines ont été recouvertes d'un film alimentaire percé
pour favoriser la croissance des champignons et incubées à température ambiante (15-18°C) pendant 15 jours. Le développement
des pourritures a été évalué en mesurant le diamètre de l'expansion de l'infection pendant les 7ème, 9ème et 15ème jours, ce qui
nous a permis de calculer le pourcentage d'inhibition, à l'aide de la formule suivante :

Inhibition (%) = (D- Di) / D x 100

Oùréest le diamètre des pourritures du fruit non traité etDile diamètre des pourritures des fruits traités avec l'extrait.

2.5.Teneur en métaux lourds

La minéralisation de l'étoupe d'algues brunes a été réalisée selon le protocole décrit par Mazlani, 1995 [11]. 1 g
d'échantillons a été digéré avec 3 ml d'acide nitrique. Après incubation à température ambiante pendant 24 heures, 3 ml
d'eau distillée ont été ajoutés. Les tubes ont ensuite été fermés et incubés à 60°C pendant 24 heures. Les quantités de
métaux (Cd, Cu et Zn) dans le filtrat ont été déterminées par spectrophotomètre d'absorption atomique.

2.6.analyses statistiques
Toutes les expériences ont été réalisées en triple et les valeurs moyennes avec écart type sont présentées. Les écarts-types
se sont révélés être±1,5 %. Lorsque les barres d'erreur sont plus petites que les symboles, elles ne sont pas

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montré. Les données ont été testées pour la normalité et l'homogénéité de la variance, et des tests de signification entre les
traitements à l'aide d'un programme Statistica 6 en mesurant l'indice de Ficher (p < 0,05).

3. Résultats et discussion
3.1.Conditions in vitro de l'activité antifongique des extraits d'algues
Les résultats rapportés dans la figure 1 ont montré une action inhibitrice sur le développement du mycélium deB. cinerea.
Cette action est liée à la concentration de l'extrait hexanique ; l'activité plus élevée sur le mycélium deB. cinerea a été obtenu
avec la quantité la plus élevée, 65,4 mg par puits. Aussi, nous constatons une différence significative entre
C. tamariscifoliaetB. bifurcataactivités sur ce champignon (F = 6,5666, P <0,05). Par conséquent, les extraits hexaniques
dépassent l'activité du fluconazole.
L'effet antifongique des extraits aqueux deC. tamariscifoliaetB. bifurcatasurB. cinereaa montré une
différence significative entre les quantités testées (F= 6,0925 ; P<0,05), où l'équivalent massique de
l'extrait aqueux (99 mg par puits) deB. bifurcataa donné une activité antifongique importante (2,18 ± 0,5
cm) (Figure. 2).
Les résultats de l'activité antifongique ont montré que les extraits hexaniques et aqueux deC. tamariscifoliaet
B. bifurcataont produit une zone d'inhibition marquée surB. cinereacroissance du mycélium. Cette constatation a été
rapportée par certains auteurs qui ont montré l'activité antimicrobienne de ces deux macroalgues [7, 12, 13, 14, 15,
16, 17, 18]. Cela peut être dû aux composants actifs présents dans les extraits d'algues. composés phénoliques ont
été isolés des algues brunesC. tamariscifoliaetB. bifurcata[19, 20]. D'autres substances terpéniques ont été isolées
d'espèces deCystosèregenre [7, 12, 21, 22]. Un métabolite méroditerpénoïde a été isolé de l'algue bruneC.
tamariscifoliaet a montré une activité antifongique contre trois champignons pathogènes de la tomate, Botrytis
cinérea,Fusarium oxysporumsp.MycopersicietVerticillium alboatrum[sept].
L'efficacité de l'extrait hexanique par rapport à la même quantité de Fluconazole est une découverte très prometteuse pour
de futures applications. La littérature montre également que l'algue rouge :Solieria robustaagit mieux contre Fusarium
solanique le fongicide commercial -Topsin-M [23]. D'autres auteurs ont trouvé que l'extrait méthanolique deAcanthaphora
spicifèrea un effet presque similaire à l'amphotéricine contre trois espèces de champignons [24].

Figure 1:Evaluation de l'activité antifongique (rayon d'inhibition) deC. tamariscifoliaetB. bifurcatahexanique

extraits contreB. cinerea. (Moyenne [n=3] ± écart type).

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 Figure 2:Evaluation de l'activité antifongique (rayon d'inhibition) deC. tamariscifoliaetB. bifurcataaqueux
extraits contreB. cinerea. (Moyenne [n=3] ± écart type).

3.2.Activité antifongique sur les tomates infectées

Lain vivoLe test montre les changements des valeurs de pourcentage de décomposition des fruits de tomates traités et non
traités pendant leur stockage (Figure. 3). Les traitements ont significativement réduit les symptômes d'infection sur les
tomates par rapport à ceux détectés chez les témoins négatifs au cours des 9 premiers jours. Mais après 11 jours de la
période de stockage, seul l'effet deB. bifurcatale traitement persiste avec une grande efficacité de l'extrait aqueux où le
pourcentage d'inhibition au cours du 15ème jour d'incubation est de 50 ± 7 %. L'effet deC. tamariscifoliale traitement n'est
efficace que pendant les 11 premières où la réduction de la gravité de la blessure causée parBotrytis cinéreadépasse 60 %.
D'après ces résultats, nous pouvons conclure que l'application de l'extrait aqueux des deux espèces d'algues brunes testées
sur tomates a montré une activité protectrice contreB. cinereapar rapport au traitement avec leur poudre. Cela peut être dû
à la concentration plus élevée du composé actif dans les extraits aqueux, qui peut contribuer à la stimulation des
mécanismes de défense. Il a été signalé que l'algue bruneLaminaria digitataa un pouvoir protecteur contreBotrytis cinéreaet
Plasmopara viticolapar une stimulation des mécanismes de défense [6]. De nombreux auteurs ont montré l'activité
antifongique des extraits d'algues. Par exemple, l'algue verteUlva linzal'extrait a un effet protecteur contrePénicillium
digitatum[25], l'activité de l'algue bruneC. tamariscifoliacontre les microbes phytopathogènes a été démontrée [18]. De plus,
l'action antifongique de certaines algues rouges contre les champignons, en particulierB.cinereaa montré des résultats
prometteurs [26].

Figure 3:Effet deC. tamariscifolia(Ct) etB. bifurcata(Bb) extraits aqueux (A. E) (4,96 g L-1) et
poudre (1 g par fruit) sur l'infection du fruit de la tomate causée parB. cinerea(Moyenne [n=7] ± norme
déviation).

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3.3.Teneur en métaux lourds
Les résultats des teneurs en métaux lourds ont montré que les deux algues C.tamariscifoliaetB.bifurqueaccumulent des métaux
lourds avec des pourcentages différents (tableau 2). Les teneurs métalliques Zn et Cu observées dans les deux algues brunes ne
semblent pas suffisamment élevées pour entraîner un risque potentiel de contamination métallique au niveau agricole. La station
de Sidi Bouzid peut donc être considérée comme un site non contaminé par ces deux types de métaux. Le Cd est l'un des métaux les
plus toxiques des algues comme de nombreux autres êtres vivants. Cette teneur un peu plus élevée pourrait être liée aux courants
océaniques responsables de l'upwelling, particulièrement riche en métaux traces, dont le Cd [27].
L'abondance relative des métaux dansC.tamariscifoliaetB.bifurqueaugmente dans l'ordre Cd < Cu < Zn. Ces résultats sont en
accord avec ceux rapportés par d'autres auteurs [28] qui ont montré que les algues de la ville d'El Jadida accumulent plus de
Fe > Zn > Mn > Cu > Cd. Cependant, ces métaux ont, en général, des valeurs inférieures à celles enregistrées dans d'autres
zones géographiques.
Avec l'intensification de l'urbanisation, des activités socio-économiques et des activités industrielles, le taux de métaux lourds va
probablement augmenter, et pourrait entraîner des risques de contamination du produit final d'algues.

Tableau 2:Teneur en métal (μg par g de poids sec) deC.tamariscifoliaetB.bifurquepar rapport aux valeurs limites
des sites pollués dans différentes algues (Moyenne [n=3] ± écart-type).
Échantillons Zn (μg par g) Cu (μg par g) Cd (μg par g)

C. tamariscifolia 20,00 ± 0,17 2.10± 0.01 0,50 ± 0,00

B. bifurcata 29,50 ± 1,04 1,40 ± 0,03 0,20 ± 0,00
Concentrations de métaux dans
différentes algues pour 42 à 160 14 à 134 0,2 à 1
sites contaminés[29,
30, 31, 32, 33]

4. Conclusion
Les trois produits (extrait hexanique, extraits aqueux et poudre) des deux algues brunesC. tamariscifolia etB.
bifurcataont montré leur activité antifongique contreBotrytis cinérea.
Parmi ces produits, l'extrait aqueux écologique devrait être considéré comme une source potentielle de composés bioactifs et
pourrait servir de contrôle biologique dans les régions côtières du Maroc connues pour leur production et leur stockage de tomates
(par exemple Agadir et Dakhla). Cela peut encourager l'utilisation de produits naturels en remplacement des fongicides chimiques
nocifs utilisés tout au long de la chaîne alimentaire agricole. Par conséquent, l'étude des concentrations de métaux lourds dans les
espèces d'algues peut fournir des informations utiles sur le transfert d'éléments potentiellement toxiques des compartiments
abiotiques (eau et sédiments) vers les consommateurs supérieurs, y compris les êtres humains.
Des études complémentaires doivent être réalisées pour définir et caractériser, aux niveaux chimique et biochimique, l'effet
préférentiel des extraits d'algues sur les microorganismes ayant des effets néfastes. Une détermination des molécules réellement
responsables de cette activité antifongique est également nécessaire pour promouvoir le produit.

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