Mimoire Master

République Algérienne Démocratique et Populaire
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de La Recherche Scientifique

Université L’Arbi Ben Mhidi Oum El Bouaghi
Faculté Des Sciences Exactes Et Des Sciences de La Nature et de la Vie
Département Des Sciences de La Nature et de la Vie
N° d’ordre……………… N° de série……………..
Mémoire
Présenté pour l’obtention du diplôme de
Master
Filière : Sciences biologiques
Option : Biochimie appliquée
Thème
Extraction, dosage des composés phénoliques et

évaluation de l’activité antioxydante par le test
DPPH de la propolis et pollen de l’est Algérien
Présenté par :
Belkhiri Bousseta et Bouab Chahrazad
Devant le jury :
Président : Derouiche Kamel MCB Université Oum el Bouaghi
Rapporteur : Zellagui Amar Prof Université Oum el Bouaghi
Examinateur : Bouhbila Azziz MAA Université Oum el Bouaghi
Année universitaire : 2017-2018

DEDICACE
Dedicace
A mes parents Mohamed lakhdar et El Wiza,
Pour vos mains qui ont tant travaillées,
Pour votre cœur qui m’a tant donné
Pour votre sourire qui m’a tant réchauffé,
Pour vos yeux qui furent parfois mouillés,
Pour vous qui m’avez tant aimé.
A mes frères : Farid et Abd El-Baki.
A mes sœurs : Hamama, Fairouz, Touzer, Noura, Mlouka, Fouziya et Salima.
A mes amies : Abd El-Hamid, Ayoub, Taki eddine, Mohemed Amin, Mensaf,
Ramzi, Hamada, Salah, Nabil, Yazid, Abd El-Bassit, Dhia, Azzeddine,
Aymene, Mohemed, Abd El-Majid, Yassin, Adem, Farid, Radwan, Mourad,
Sadam, Lahbib, Rida, Chahrazed, Nour El-Hoda, Hadjar, Rahma, Sabrina,
Hanan, Rahifa et Yasmine.
que j’ai vécues avec elles des beaux
moments au cours de mon cursus à l’université.
A tous qui me connaisse de près ou de loin.
Bousseta
DEDICACE
Dédicace
C’est avec un très grand honneur que je dédie ce
modeste travail à :
Mes chers parents Mohammed et Amel pour leurs

patiences, leurs soutiens et leurs encouragements tout
en long de ma vie
A mon cher frère Imad
A ma chere sœur Ikram
A tous ma famille
A tous mes collègues et mes amies
A mon binôme d’étude Boussetta

Chahrazad
Remerciement
Avant toutes choses, nous remercions Dieu, le tout puissant pour nous avoir
donné la force et la patiente, pour achever ce mémoire.
Nous premiers remerciements vant a notre directeur de mémoire monsieur

le Professeur Zellagui Amar à l’université d’oum el bouaghi qui nous a
permis d’effecteur notre travaux ou sein de laboratoire pour son soutien
moral et ses conseils.
Nous adressons notre sincères remerciements à M meYasmine Arab, et

MrSaber Boutellaa, Ce travail aurait été incomplet sans ses disponibilités,
ses rigueurs scientifiques, ses précieux conseils et ses compétences
techniques.
Nous tenons également nos vifs remerciements à AbdElrahman Allague et

AbdElbasset Zagdoud, qui nous aidé à obtenir la propolis, qui sont les
essences fondamentaux dans notre travail.
C’est un grand merci que nous adressons à Mahimoudi Taki El Din et

Merzkani Khawlla pour leurs efforts moraux qui nous ont donné la force
d'atteindre la fin de cet humble travail.
Nous adressons aussi nos remerciements à tous les travailleurs bibliothèque

de nous mettrons un coup de main pour facilité la tache de la recherche
bibliographique.
Aux personnels du laboratoire de l'université L’Arbi Ben M’hidi pour leur

aide, en particulier Mme Sonya, MmeDjouhra, MrSalem, Azzeddine, Diyaf et
Ali.
Nous tenons particulièrement à remercier les membres du jury d’avoir

accepté de juger ce travail en être l’examinateur de ce mémoire.
Enfin nous remercions toute personne qui a participé de prés ou de loi,

directement ou indirectement à la réalisation de ce travail.
Sommaire
Liste des figures
Liste des tableaux
Liste des abréviations
Introduction
Synthèse bibliographique
Chapitre I. Les produits de la ruche

I. Les produits de la ruche
I.1. Le pollen...............................................................................................................................3
I.2. La propolis............................................................................................................................3
I.3. Le miel..................................................................................................................................3
I.4. La cire...................................................................................................................................4
I.5. La gelée royale......................................................................................................................4
I.6. Le venin................................................................................................................................4
II. Le pollen
II.1. Origine.................................................................................................................................5
II.2. Compositions chimique.......................................................................................................5
II.3. Récolte.................................................................................................................................5
II.4. Conservation........................................................................................................................6
II.5. Propriétés pharmacologiques..............................................................................................6
II.6. Indications thérapeutiques à l’officine................................................................................6
III. La propolis
III.1. Origine...............................................................................................................................7
III.2. Compositions chimique......................................................................................................7

Sommaire
III.3. Récolte...............................................................................................................................7
III.4. Conservation......................................................................................................................8
III.5. Propriétés pharmacologiques.............................................................................................8
III.6. Indications thérapeutiques à l’officine...............................................................................8
Chapitre II. Les polyphénols

II.1. Les polyphénols…………………………………………………………..10
II.2. Classification des polyphénols…………………………………………..10
II.2.1. Phénols simples et les acides phénoliques.....................................................................10
II.2.2. Lignanes et Lignines......................................................................................................11
II.2.3. Coumarines....................................................................................................................12
II.2.4. Tannins...........................................................................................................................12
II.2.4.1. Tannins hydrolysables.................................................................................................12
II.2.4.2. Tannins condensés.......................................................................................................13
II.2.5. Flavonoïdes....................................................................................................................13
II.2.5.1. Classification...............................................................................................................14
II.2.5.2. Biosynthèse.................................................................................................................16
II.2.5.3. Propriétés physico-chimiques......................................................................................17
II.2.5.3.1. Solubilité et l’extraction ..........................................................................................17
II.2.5.3.2. Dosage......................................................................................................................17
II.2.5.3.3. Stabilité.....................................................................................................................17
II.2.5.3.4. Absorption des rayons UV.......................................................................................17
II.2.5.4. Rôles des flavonoïdes..................................................................................................18
II.2.5.4.1. Pour la plante............................................................................................................18

Sommaire
II.2.5.4.2. Pour la santé humaine et l’industrie.........................................................................18
II.3. Biosynthèse des polyphénols…………………………………………….19
II.3.1. Voie de shikimat.............................................................................................................19
II.3.2. Voie de l’acide malonique..............................................................................................20
II.4. Propriétés pharmacologiques des polyphénols………………………...20
Chapitre III. Activité antioxydants

III.1. Stress oxydatif…………………………………………………………..23
III.2. Radicaux libres………………………………………………………….23
III.3. Oxygène, espèces réactives de l’oxygène (ERO) ……………………..23
III.4. Les antioxydants………………………………………………………..24
III.4.1. Superoxyde dismutase ou (SOD)...................... ...........................................................24
III.4.2. Catalase ou (CAT)...................... .................................................................................25
III.4.3. Glutathion peroxydase ou (GPx)...................... ............................................................25
III.4.4. Vitamine E (tocophérol)...................... .........................................................................25
III.4.5. Vitamine C (acide ascorbique)...................... ...............................................................25
III.4.6. Polyphénols...................................................................................................................26
III.5. Les maladies liées au stress oxydatif…………………………………..26
Étude expérimentale
Chapitre I. Matériel et méthodes

I. Etude phytochimique
I.1. Présentation de la matière première....................................................................................29

Sommaire
I.2. Préparation des échantillons...............................................................................................29
I.3. Extraction ...........................................................................................................................29
I.3.1. Extraction des polyphénols..............................................................................................29
I.3.2. Extraction des composés phénoliques.............................................................................30
I.3.3. Rendement.......................................................................................................................32
I.4. Analyse chromatographique (chromatographie sur couche mince)...................... ............32
I.4.1. Principe............................................................................................................................32
I.4.2. Mode opératoire...............................................................................................................32
I.4.3. Dépôt................................................................................................................................33
I.4.4. Révélation........................................................................................................................33
I.5. Dosage des polyphénols.....................................................................................................33
I.5.1. Principe............................................................................................................................33
I.6. Dosage des flavonoïdes......................................................................................................34
I.6.1. Principe............................................................................................................................34
II. Activité antioxydante
II.1. Activité antiradicalaire par le test DPPH………………………………………………..35
II.1.1. Principe...........................................................................................................................35
II.1.2. Mode opératoire.............................................................................................................35
Chapitre II. Résultats et discussion

II.1. Rendement d'extraction…………………………………………………38
II.2. Résultat de la chromatographie sur couche mince…………………….39

Sommaire
II.3. Résultats de dosage des polyphénols……………………………………45
II.4. Résultats de dosage des flavonoïdes…………………………………….46
II.5. Corrélation entre les teneurs en flavonoïdes et polyphénols………….48
II.6. Activité antioxydante……………………………………………………49
II.6.1. Détermination du pourcentage d’activité antiradicalaire……………………………...49
II.6.2. Corrélation entre la teneur en polyphénols totaux et le pouvoir antiradicalaire.............54
Conclusion
Références bibliographiques
Annexe
Résumé
Liste des figures
Figure 1 : Principaux constituants de la lignine……………………………………………...12
Figure 2 : Structure chimique d’acide gallique (A) et d’acide éllagique (B)………………...13
Figure 3 : Squelette général des flavonoïdes………………………………………………...14
Figure 4 : Voie de biosynthèse des flavonoïdes……………………………………………...16
Figure 5 : La voie de shikimate………………………………………………………………20
Figure 6 : Polyphénols à effets santé………………………………………………………...21
Figure 7 : Principales étapes d’extraction des polyphénols………………………………….30
Figure 8 : Principales étapes d’extraction des composés phénoliques ……………………...31
Figure 9 : Réaction du Chlorure d’aluminium et les Flavonoïdes…………………………...34
Figure 10 : Rendement d'extraction de propolis de différentes régions……………………...38
Figure 11 : Rendement d'extraction de pollen d’El Taref……………………………………38
Figure 12 : CCM de l’extrait d’Acétate d’éthyle (Système solvant : A : n-hexane 7 ml /

Chloroforme 3 ml / Ethanol 0.5 ml. B : Ether d’éthyle 3 ml / n-hexane 1 ml)……………….39
Figure 13 : CCM de l’extrait de n-butanol (Système solvant : n-hexane 7 ml / Chloroforme

4ml / Ethanol 1 ml)…………………………………………………………………………...40
Figure 14 : CCM de l’extrait de Chloroforme (Système solvant : A : Chloroforme 3 ml/

n-hexane 1 ml / Ethanol 1 ml. B : n-hexane 1 ml / Ether d’éthyle 1 ml)……………………..40
Figure 15 : Structure chimique des composés phénoliques possibles identifiés dans les
extraits………………………………………………………………………………………...44
Figure 16 : Courbe d'étalonnage de l'acide gallique…………………………………………45
Figure 17 : Courbe d'étalonnage de la quercétrine…………………………………………...47
Figure 18 : Corrélation entre les teneurs en flavonoïdes et polyphénols des extraits de

propolis et pollen.......................................................................................................................48
Figure 19 : % d’activité antiradicalaire en fonction des concentrations de l’extrait…………49

Liste des figures
Figure 23 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire de propolis d'Ain El Beida et

de l'acide ascorbique………………………………………………………………………….51
Figure 24 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire de propolis d'Ain Fakroun et

de l'acide ascorbique………………………………………………………………………….51
Figure 25 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire de propolis de Farllah et de

l'acide ascorbique……………………………………………………………………………..52
Figure 26 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire de pollen d'El Taref et de

l'acide ascorbique……………………………………………………………………………..52
Figure 27 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire des propolis de différentes

régions, pollen et de l'acide ascorbique……………………………………………………….53
Figure 28 : Corrélation entre la teneur en polyphénols totaux et le pouvoir antiradicalaire…54

Liste des tableaux
Tableau 1 : Quelques exemples des acides hydroxybenzoïques et des acides hydroxy-
cinnamiques…………………………………………………………………………………..11
Tableau 2 : Les principales classes des flavonoïdes…………………………………………15
Tableau 3 : Espèces réactives de l'oxygène………………………………………………….24
Tableau 4 : Les systèmes solvant utilisée……………………………………………………33
Tableau 5 : Les classes des composés phénoliques identifiés dans les extraits……………...41
Tableau 6 : Teneurs en polyphénols des différents échantillons de propolis et pollen……...45
Tableau 7 : Teneurs en flavonoïdes des différents échantillons de propolis et pollen………47
Tableau 8 : Activités antioxydantes des extraits des propolis, pollen et l'acide ascorbique à
une concentration de 10 mg/ml……………………………………………………………….53
AlCl3 : Trichlorure d’Aluminium.
UV : Ultra-Violet.
nm: nanometer.
DPPH : 2,2-diphényle-1-picrylhydrazyl.
ADN : Acide Désoxyribonucléique.
O2- : Superoxydes.
LDL : Low Density Lipoprotein.
CoA : Coenzyme A.
SO : Stress oxydatif.
ERO : Espèces réactives de l’oxygène.
RL : Radicaux libres.
H2O2 : Peroxyde d’hydrogène.
1O2 : Oxygène singulet.
HOCL : Acide hypochlorique.
O3 : Ozone.
NO● : Radical oxyde nitrique.
O2●– : Radical superoxyde.
LOO● : Radical peroxylipidique.
: Radical hydroxyle.
ONOO– : Peroxynitrite.
SOD : Superoxyde dismutase.
CAT : Catalase.
GPx : Glutathion peroxydase.

DHA : Déhydrascorbique.
CCM : Chromatographie sur Couche Mince.
NH3 : Ammoniac.
RF : Rapport frontal.
Na2CO3 : Carbonate de sodium.
ug EAG/ mg : microgramme d'équivalents d'acide gallique par milligramme.
AlCl3 : Trichlorure d’aluminium.
μg EQ/mg : microgramme d'équivalents de quercétine par milligramme.
Abs : Absorbance.
Introduction
Introduction
Depuis l’aube des temps, l’homme a toujours été intéressé par la nature qui l’entourait. Il a
su tirer partie des ressources naturelles pour s’adapter à son environnement et ainsi évoluer,
créant la domestication et l’agriculture. Parmi les espèces animales domestiquées, il est une
particulièrement exceptionnelle : L’abeille. Les vertus de ce petit insecte ont tout de suite
séduit la curiosité humaine et depuis les temps les plus reculés, l’homme a su profiter des
produits de la ruche tels que la propolis et le pollen (Biri, 2003).
La propolis c’est une substance naturelle résineuse et adhésive produite par les abeilles
(Apis mellifera), a été utilisé plus récemment comme aliment de santé et additif dans les
aliments fonctionnels, bien qu'il ait servi de médecine populaire pendant des milliers d'années.
Des études antérieures ont montré que la propolis peut avoir de nombreux attributs bénéfiques
(Farré et al., 2004; Vargas-Sánchez et al., 2013).
Le pollen est la partie reproductrice mâle des plantes qui est recueillie par les abeilles
ouvrières comme granules et utilisée comme nourriture pour les abeilles en développement.
C'est un aliment complet naturel car il contient presque tous les nutriments nécessaires. Le
pollen est une centrale électrique de composés phytochimiques (Kaur et al., 2013).
Ces produits issus de la ruche sont perçus par les consommateurs comme des aliments
sains, naturels, diététiques et stimulants pour l'organisme et ses défenses immunitaires. Ils
sont utilisée dans l'apithérapie pour traiter de nombreuses maladies et également dans
l'industrie alimentaire en tant qu'additif à des fins diverses, la cosmétologie et pour de
nombreux objectifs (Pereira et al., 2002).
L’objectif de notre étude s’articule sur le dosage des polyphénols et des flavonoïdes,
l’étude analytique des composés phénoliques et estimer l’activité antioxydante de propolis et
pollen.
Notre travail a été divisé en deux grande parties, la première est une étude bibliographique
qui se scinde en trois chapitres, dans le premier nous avons commencé par ses origines
botaniques, ses compositions chimique, ses récoltes, ses propriétés pharmacologiques et ses
indications thérapeutiques à l’officine de la propolis et le pollen.
Le deuxième chapitre, représente une étude bibliographique des composés phénoliques,

classification, biosynthèse et leurs propriétés pharmacologiques.
Le troisième chapitre comporte un rappel sur le stress oxydatif, les radicaux libres, les
antioxydants, mécanismes d’action des antioxydants, et les maladies liées au stress oxydatif.
Introduction
La deuxième partie comporte l’étude expérimentale, et subdivisée en deux chapitres :
 Le premier a groupé les matériels et les méthodes utilisés dans l’extraction d’analyses
qualitatives (par chromatographie sur couche mince) et quantitatives des polyphénols
et flavonoïdes, contenus dans nos extraits éthanoliques, ainsi une évaluation de
l'activité antioxydante de la propolis et pollen étudiées.
 Le deuxième présente nos résultats et leurs discussions.
Synthèse
bibliographique
Chapitre I
Les produits de
la ruche
Chapitre I : Les produits de la ruche Synthèse bibliographique
I. Les produits de la ruche
L’apiculture pratiquée depuis la plus haute antiquité connait ces derniers temps un
développement important dans notre pays. Il est un art autant qu’une science d’élevage et des
soins à donner aux abeilles en vue d’obtenir de leur travail dirigé, le miel, la cire, le pollen, la
propolis et la gelée royale (Biri, 2003).
I.1. Le pollen
Le pollen d'abeille, communément appelé «poussière vivifiante», résulte de l'agglutination

de pollens de fleurs avec du nectar et des substances salivaires des abeilles et sert de
nourriture à tous les stades de développement de la ruche (Almeida-Muradian et al., 2005).
La collecte de ce produit naturel est un développement relativement récent, qui dépend
principalement du concept de base de racler le pollen des pattes des abeilles lorsqu'elles
pénètrent dans la ruche (Feás et al., 2012).
I.2. La propolis
Le terme propolis vient de grec : pro polis qui signifié « devant la ville » (Ravazzi, 2003).
La propolis est un produit à base de résines provenant de germes résineux et d'exsudats de
certaines espèces d'abeilles de l'espèce Apis mellifera. Lorsque les abeilles récoltent la
propolis, elles mélangent la substance résineuse recueillie des plantes avec l'enzyme 13-
glucosidase de leur salive. L’hydrolyse des flavonoïdes glucosylés, en provenance des
flavonoïdes aglycones (Pereira et al., 2002).
La couleur de propolis est variable selon la source florale et l’âge de la colonie (Marcucci,
1995; Sforcin, 2007). Elle est généralement de couleur brune à rougeâtre, voire noir
(Darrigol, 1979; Cousin, 2010).
I.3. Le miel
Le miel est un produit naturel fabriqué par les abeilles Apis mellifera à partir du nectar des
plantes mellifères, qui est transformé et modifié. Par la suite, il est stocké dans des ruches
pour une utilisation ultérieure, par exemple pour l'alimentation (Codex Stan, 1981). Le miel
hérite de tous de ses propriétés à partir de plantes; par conséquent, ses propriétés biologiques
sont liées aux espèces végétales qui ont produit le nectar (Montenegro et al., 2003, 2004).
3
I.4. La cire
La cire est le matériau utilisé par les abeilles pour construire leur nid. Elle sert également à
operculé des alvéoles (contenant par exemple des larves ou du miel).
Les abeilles construisent des rayons du haut vers le bas. Pour se faire, elles se suspendent
et forment une chaîne d’abeilles. Pour rappel, la cire est produite au niveau des glandes
cirières des jeunes ouvrières, sous forme d’écailles transparentes de 1,5 mm de long sur 1 mm
de large environ (Jean-Prost, 2005). Lorsqu’une abeille a produit une écaille, elle remonte
sur le lieu de la construction pour y ajouter sa cire (Bradbear, 2010). La cire a au départ une
couleur blanchâtre l’égerment translucide, et prend une couleur jaunâtre après avoir été
malaxée par l’abeille (Cousin, 2010). Elle se compose d’ester 71%, acides libres 40%, sucre
12%, eau 3%, divers autres éléments (Kameda et Tamada, 2009).
I.5. La gelée royale
C’est une substance blanchâtre à jaune, gélatineuse, crémeuse, et très sucrée (Lefief-
Delcourt, 2010), secrétée par les glandes hypopharyngiennes et mandibulaires des jeunes
abeilles nourrices, au stade ou ces glandes sont les plus développées. Elle est fabriquée à
partir des protéines et des nutriments du pollen qu'elles ont ingèrent (Gharbi, 2011). C’est la
substance centrale de la ruche : elle assure son existence et son fonctionnement. En effet, elle
est la nourriture unique et exclusive de toutes les larves pendant leurs trois premiers jours de
vie puis de la reine pendant toute son existence (Rossant et Desmouliere, 2011). Elle se
compose d’eau 60-70%, Lipide 18% (surtouts des acides gras), glucides 11%, protéines 2%,
vitamines ; des hormones ; des enzymes, et des minéraux (Wytrychowski et al., 2013).
I.6. Le venin
C’est un produit mineur de la ruche. En effet, il faut environ 10 000 abeilles pour récolter 1
gramme de venin (Bradbear, 2010). Il est produit au niveau de la glande acide de l’appareil
vulnérant. La glande alcaline jouera un rôle dans la production de venin (Jean-Prost, 2005).
C’est un liquide incolore, à forte odeur amère, qui rend les abeilles agressives. Il est utilisé par
l’homme pour ses propriétés thérapeutiques, notamment contre les rhumatismes (Bruneau,
2004).
4
II. Le pollen
II.1. Origine
Les grains de pollen constituent les gamétophytes males des angiospermes : ils se forment
dans les deux loges polliniques situées dans les anthères, à l'extrémité des étamines. Chaque
loge comporte deux sacs polliniques qui contiennent et protègent les cellules mères des
microspores. Celles-ci donnent naissance, après une méiose puis une mitose, a des grains de
pollen (Raven et al., 2007). La rupture d'une zone de moindre résistance située entre les deux
sacs polliniques d'une même loge permet la libération des grains de pollen arrives à
maturation (Gharbi, 2011).
II.2. Compositions chimique
Le pollen est un produit végétal assez varié riche en substances biologiquement actives
(Campos et al., 2010).
Les principaux composants du pollen d'abeille sont les hydrates de carbone, les fibres
brutes, les protéines et les lipides dans des proportions respectives de 13% à 55%, 0,3% à
20%, 10% à 40%, 1% à 10% (Villanueva et al., 2002).
Le pollen d'abeille est considéré comme le «seul aliment parfaitement complet», car il
contient tous les acides aminés essentiels nécessaires à l'organisme humain. Cependant, la
composition du pollen d'abeilles dépend fortement de la source de la plante, ainsi que d'autres
facteurs tels que les conditions climatiques, le type de sol et les activités apiculteurs (Morais
et al., 2011).
II.3. Récolte
Une colonie en récolte environ 20 à 40 kg par an (Bradbear, 2010). Le pollen

majoritairement commercialise et consommé sous forme de pelotes que les abeilles butineuses
ramènent à la ruche. Pour collecter ce pollen, l'apiculteur doit donc équiper ses ruches de
trappes à pollen. Ces trappes sont des grilles en plastique ou en acier inoxydable dont les
mailles sont assez larges pour permettre le passage des abeilles mais assez étroites pour
retenir les pelotes accrochées à leurs pattes lors de leur passage. Elles se placent à l'entrée ou
plus rarement sous la ruche ou dans le haut de la ruche. Un bac de réception des pelotes est
installé sous la trappe pour recueillir les pelotes : il doit être bien aère mais protège de
5
l'humidité et doit être surmonte d'un tamis permettant le passage des pelotes mais empêchant
les abeilles de les récupérer (Bruneau, 2011; Gharbi, 2011).
En observant des rayons dans lesquels sont stockés du pollen, on constate qu’il y a de
nombreuses couleurs différentes : cela montre que les abeilles d’une colonie récoltent le
pollen de différentes espèces de plantes (même si une abeille se concentre sur un type de
fleurs) (Bradbear, 2010).
II.4. Conservation
Avec une teneur en eau de 30 à 40 %, les risques de moisissures sont importants. De plus
les nombreuses enzymes, les pigments et les vitamines qui le composent le rendent très
sensible à une exposition prolongée à la lumière et à la chaleur. La congélation du pollen
préserve les lactoferments détruits lors du chauffage du pollen sec (Bruneau, 2011). Pour
cela, il doit être récolté deux fois par jour et trié rapidement pour être congelé dans les heures
qui suivent. Après décongélation, il sera conservé entre 4 et 8 C° pour être consommé dans les
15 jours (Clément, 2011).
II.5. Propriétés pharmacologiques
Le pollen d'abeille est considéré comme un aliment santé avec un large éventail de
propriétés thérapeutiques, parmi lesquelles : les activités antimicrobiennes, antifongiques,
antioxydants, antiradiations, hépato protectrices, chimio protectrices et/ou chimio préventives
et anti-inflammatoires (Abdella et al., 2009; Bariliak et al., 1996; Viuda-Martos et al.,
2008; Fatrcová-Šramková et al., 2013).
II.6. Indications thérapeutiques à l’officine
Le pollen a été signalé comme ayant des effets bénéfiques sur la prévention des problèmes
de prostate, l'artériosclérose, la gastro-entérite, les maladies respiratoires, la désensibilisation
aux allergies, l'amélioration des systèmes cardiovasculaire et digestif, l'immunité corporelle et
le retardement du vieillissement (Estevinho et al., 2012). La promotion de la réparation des
tissus, qui résulte de l'accélération du taux mitotique, a également été saluée (Morais et al.,
2011). Ces effets thérapeutiques et protecteurs ont été liés à la teneur en polyphénols
(Almeida-Muradian et al., 2005).
6
III. La propolis
III.1. Origine
Etymologiquement, « pro » (devant) et « polis » (cité) veut dire « devant la cité » ou «

protège la cité ». Son nom résume bien à lui seul les propriétés et les rôles de cette substance
d’origine à la fois végétale et animale. Bien que la composition soit relativement différente
selon l’origine géobotanique, l’activité des diverses propolis reste commune (Apimondia,
2001).
La propolis est formée à partir d'une résine que les abeilles prélèvent sur les bourgeons et
l'écorce de certains arbres comme le peuplier qui constitue la principale source de propolis en
Europe mais également le bouleau, le chêne, l'orme, l'aulne, le pin, le sapin et le marronnier
(Bogdanov, 2014; Gharbi, 2011).
III.2. Compositions chimique
La composition chimique de la propolis varie selon l’origine botanique (Bankova et al.,

2000; Negri et al., 2000; Popova et al., 2002). La propolis est composée de résines (50%), de
cires (30%), d'huiles essentielles volatiles (10%), de composés chimiques organiques et
inorganiques (5%) et de pollen (5%) (Farré et al., 2004).
III.3. Récolte
La propolis peut en récolter en grattant des cadres ou de manière plus spécifique, en

plaçant une grille dans la ruche, dont les espaces libres vont être bouchés par de la propolis
(Jean-Prost, 2005).
La première méthode ne permet pas de récolter une propolis de qualité car elle peut être
assez ancienne donc partiellement dégradée et elle contient souvent des résidus indésirables
(cire, particules de bois, métal).
La seconde méthode consiste à intercaler une grille sur la tête des cadres. Les nombreux
petits interstices de cette grille vont être combles par les abeilles avec de la propolis. Il suffit
alors à l'apiculteur de retirer la grille et de la mettre au réfrigérateur ou au congélateur ce qui
permettra le durcissement de la propolis. La propolis devenue cassante peut facilement être
retirée de la grille : elle peut alors être commercialisée à l'état brut ou sous forme de solution
alcoolique (Bruneau, 2011; Ravazzi, 2003).
7
III.4. Conservation
Par mesure de précaution, la propolis doit être conservée à l’abri de la lumière, de

l’humidité, de la chaleur et doit être utilisée aussi fraiche que possible. On peut la conserver
sous forme lyophilisée, ce qui lui permet de garder toutes ses propriétés sur une très longue
durée (Vannier, 1998; Minh-Ha, 1999; Donadieu, 1987).
III.5. Propriétés pharmacologiques
La propolis présente de nombreuses propriétés biologiques et pharmacologiques, telles que

les activités immunmodulatrices, antitumorales, anti-inflammatoires, antioxydants,
antibactériennes, antivirales, antifongiques, antiparasitaires, entre autres (Sforcin et al., 2000,
2001; Gekker et al., 2005; Orsi et al., 2005, 2006; Freitas et al., 2006; Búfalo et al., 2009).
C’est un antibiotique naturelle a une action sur la gorge et la vois respiratoires (Shiva et al.,
2007).
III.6. Indications thérapeutiques à l’officine
La propolis et ses composés isolés peuvent être utiles dans différentes pathologies telles
que tumeurs, infections, allergies, diabètes et ulcères puisque de nouvelles formulations
contenant de la propolis ou ses composés isolés ont été préparées récemment, mais avant
d'établir une stratégie utilisant ce produit, nécessaire de comprendre dans quelles conditions il
peut promouvoir la santé (Jose et Vassya, 2011).
Ce produit naturel a éveillé l'intérêt pour l'industrie pharmaceutique, principalement dans

les pays asiatiques, en introduisant la propolis dans différents produits destinés à la
consommation humaine comme les boissons, les aliments et les cosmétiques (Pereira et al.,
2002).
8
Chapitre II
Les polyphénols
Chapitre II : Les polyphénols Synthèse bibliographique
II.1. Les polyphénols
Les polyphénols ou composés phénoliques, sont des molécules spécifiques du règne végétal.
Cette appellation générique désigne un vaste ensemble de substances aux structures variées
qu’il est difficile de définir simplement (Bruneton, 1993). A l’heure actuelle, plus de 8000
molécules ont été isolés et identifiés (Mompon et al., 1998).
Ces composés ont taux en commun la présence d’un ou de plusieurs cycles benzéniques
portant une au plusieurs fonction hydroxyles (Urquiaga et Leighton, 2000). La structure des
composés phénoliques naturels varie depuis les molécules simples (acide phénolique)
(Macheix et al., 2005).
II.2. Classification des polyphénols
Les composés phénoliques sont classés selon le nombre d’atome de carbone dans le
squelette de base, ces structures peuvent être sous forme libres ou liées à l’ester ou hétérosides
(Bruneton, 1999). Ils sont communément subdivisés en acides phénoliques (dérivés de l’acide
benzoïque ou dérivés de l’acide cinnamique), coumarines, stilbènes, flavonoïdes, lignanes,
lignines, tanins (Cheynier, 2005).
II.2.1. Phénols simples et les acides phénoliques
Selon Bruneton (1999), les phénols simples ce sont des composes à noyaux benzénique liés
à des groupements hydroxyles libres au engagés dans les liaisons hétérosidiques, éther ou ester.
Les acides phénoliques sont des composes formés d’un ou de plusieurs noyaux benzéniques
présentant une ou plusieurs fonctions carboxyliques. Ils dérivants des acides benzoïques et
cinnamiques basés sur C6 – C1 et C6 – C3 (tableau 1) (Rong, 2010; Vermerris et Nicholson,
2006). Les acides hydroxycinnamiques sont plus fréquents que les acides hydroxybenzoïques
(Pandey et Rizvi, 2009).
10
Tableau 1 : Quelques exemples des acides hydroxybenzoïques et des acides hydroxy-
cinnamiques (Rong, 2010; Vermerris et Nicholson, 2006).
Acides hydroxybenzoïques Acides hydroxycinnamiques
Structure
R1=R2=R4=H, R3=OH Acide p-hydroxybenzoïque R1=R2=H Acide cinnamique

R1=R4=H, R2=R3=OH Acide protocaatéchique R1=H, R2=OH Acide p-coumarique
Exemples
R1=R4=H, R2=OCH3, R3=OH Acide vanillique R1=R2=OH Acide caféique
R1=H, R2=R3=R4=OH Acide gallique R1=OCH3, R2=OH Acide férulique
R1=OH, R2=R3=R4=H Acide salicylique
II.2.2. Lignanes et lignines
Les lignanes répondent à une représentation structurale de type (C6-C3)2, l’unité (C6-C3)
est considérée comme un propylbenzène. Ils ont été définit comme étant les dimères des
phénylpropanoïdes où deux unités de phénylpropane C6-C3 sont liés par leur carbone 8
(Sainvitu et al., 2012).
Les lignanes sont des substances phénoliques apparentées aux lignines polyphénol
naturellement présentes dans les plantes supérieures (Descheemaeker et Provoost, 2011).
La lignine est un polymère fortement ramifié, formés par trois alcools phénoliques simples
(figure 1). Les alcools sont oxydés en radicaux libres par une enzyme ubiquiste chez les plantes
; la peroxydase. Les radicaux libres réagissent ensuite spontanément et au hasard pour former la
lignine (Hopkins, 2003).
11
Figure 1 : Principaux constituants de la lignine (Hopkins, 2003).
II.2.3. Coumarines
Elles se trouvent dans la nature soit à l’état libre ou bien combiné avec des sucres. Elles
sont responsables de l'odeur caractéristique du foin (Cowan, 1999).
Les coumarines qui sont aussi les dérivés de C6-C3, généralement hydroxylés en position
7, en 6,7.8.les coumarines sont des composés aromatiques dérivant de l’acide O-hydroxy-Z,
cinnamique de même que la coumarine elle-même dérivé de l’acide ortho-coumarique
constituer trois type : les furano-coumarine, les pyrano-coumarines et les hydro-coumarines
(Collin et Crouzet, 2011).
II.2.4. Tanins
Les tanins sont des substances polyphénoliques de structures variées, les tanins comme
toux les polyphénols, sont des composes non azotés présentant des cycles aromatiques greffés
d’un ou plusieurs fonctions hydroxyles libre ou non (Bruneton, 1997).
Les tannins peuvent être classés en deux groupes : tanins hydrolysables et tanins condensés
(Jarrige et al., 1995).
II.2.4.1. Tanins hydrolysables
Les tanins hydrolysables ou acides tanniques sont des polymères de l’acide gallique ou de
son produit de condensation ; l’acide éllagique (figure 2). Ils ont un poids moléculaire plus
faible et précipitent beaucoup moins les protéines que les tanins condensés. Ils sont divisés en
12
éllagitannins et gallotannins, Les gallotannins libèrent par hydrolyse acide, hydrolyse basique,
à l'eau chaude ou par action enzymatique de l'acide gallique (Collin et Crouzet, 2011).
A B
Figure 2 : Structure chimique d’acide gallique (A) et d’acide éllagique (B) (Morreel et
al., 2006).
II.2.4.2. Tanins condensés
Les tanins condensés sont des polyphénols de masse molaire élevée. Ils résultent de la
polymérisation auto-oxydative ou enzymatique des unités de flavan-3,4-diol liées
majoritairement par les liaisons C4-C8 (parfois C4-C6) des unités adjacentes, et se nomment
ainsi proanthocyanidines de type B. Lorsque la condensation se produit entre les unités
adjacentes par la liaison C4-C8 et par une liaison d’éther additionnelle entre C2 et C7, les
proanthocyanidines sont dits de types A (Wollgast et Anklam, 2000; Dykes et Rooney,
2006).
II.2.5. Flavonoïdes
Les flavonoïdes sont des produits largement distribués dans le règne végétal et sont
couramment consommés quotidiennement sous forme de fruits, légumes et boissons. Ils sont
capables de moduler l’activité de certaines enzymes et de modifier le comportement de
plusieurs systèmes cellulaires, suggérant qu’ils pourraient exercer une multitude d’activités
biologiques, notamment des propriétés antioxydantes, vasculoprotectrices, antihépato-
toxiques, antiallergiques, anti-inflammatoires, antiulcéreuses et même antitumorales
significatives (Ghedira, 2005).
Les flavonoïdes ont été isolés par les scientifiques (E.Chervreul en 1814). Mais ont été
réellement couvert qu’en 1993 par (Albert Sgent - Gyorgui) (Nijveldt et al., 2001).
13
Ce sont des composés phénoliques poly-substituées constituent un groupe d’une extrême
diversité (environ 9000 molécules), donc sont des pigments quasiuniversale des végétaux
presque toujours hydro solubles (Alan et Miller, 1996; Rajnera yanama et al., 2001).
II.2.5.1. Classification
La structure des flavonoïdes s’organise autour d’un squelette 1,3-diphenylpropanoide C6-

C3-C6, dans le quel deux cycles aromatiques C6 (nomme A et B) sont réalisés par
l’intermédiaire d’un Chain propanoide C3 conduisant a la formation d’un hétérocycle (nomme
C) (Marais et al., 2007) (figure 3).
Figure 3 : Squelette général des flavonoïdes (Dacosta, 2003).
Les diverses classes de flavonoïdes diffèrent en fonction de la cyclisation et du degré

d’insaturation et d’oxydation du cycle C alors que les composés individuels au sein d’une
classe diffèrent par la substitution des cycles A et B. Parmi les nombreuses classes de
flavonoïdes présentées (tableau 2), nous citerons les principales : anthocyanes, flavanols,
flavones, flavanones, isoflavones et proanthocyanidols (Harborne, 1988).
14
Tableau 2 : Les principales classes des flavonoïdes (Narayana et al., 2001; W- Erdman et
al., 2007).
Classes Structure chimique R3' R4' R5' Exemple
H OH H Apigénine
Flavones OH OH H Lutéoline
OH OCH3 H Diosmétine
HO OH H Kaempférol
Flavonols H OH H Quercétine
OH OH OH Myrecétine
OH OH H Catéchine
Flavanols
H OH H Naringénine
Flavanones OH OH H Eriodictyol
R5 R7 R4' /
Isoflavones OH OH OH Genisteine
H O-Glu OH Daidezine
15
II.2.5.2. Biosynthèse
Les flavonoïdes est synthétisés à partir d’un précurseur commun la 4,2’,4’,6’-
tétrahydroxychalcon. Cette chalcone est ensuit métabolisée en différentes bases des
flavonoïdes par l’action successive d’enzymes (Bruneton, 1999).
ANR, anthocyanidine réductase

ANS, anthocyanidine synthase
CHI, chalcone isomérase
CHR, chalcone réductase
CHS, chalcone synthase
DFR, dihydroflavonol 4-réductase
F3H, flavanone 3-hydroxylase
FLS, flavonol synthase
FNSI et FNSII, flavone synthase I et II
F3’H et F3’5’H, flavonoïde 3’ et 3’,5’-
hydroxylase
IFS, isoflavone synthase
LAR, leucoanthocyanidine réductase
Figure 4 : Voie de biosynthèse des flavonoïdes (Marais et al, 2007; Winkel, 2007).
16
II.2.5.3. Propriétés physico-chimiques
II.2.5.3.1. Solubilité et l’extraction
Les génines sont, pour la plupart, solubles dans les solvants organiques apolaires ;
lorsqu’elles ont au moins un groupe phénolique libre, elles se dissolvent dans les solutions
d’hydroxydes alcalins. L’extraction est réalisée après broyage, lequel peut être précédé d’une
congélation (azote liquide), ou d’un séchage conventionnel (Bruneton, 2009).
II.2.5.3.2. Dosage
Les méthodes de dosage classiques sont colorimétriques ou spectrophotométriques (ex:

mesure de l’absorbante après réaction avec d’AlCl3). La chromatographie liquide offre la
possibilité d’une estimation rapide et précise de tous les flavonoïdes présents dans une plante.
Pour la détection, l’UV est une méthode de choix, les cycles A et B des flavonoïdes absorbant
respectivement vers 240-285 nm et 300-550 nm (Bruneton, 2009).
II.2.5.3.3. Stabilité
La lumière, le pH, la température, la nature du solvant, la présence d’enzyme, d’ion

métallique et d’oxydant ont été décrits comme des paramètres influençant la stabilité des
flavonoïdes.
Ainsi, une élévation de la température et du pH, la présence d’ions métalliques favorisent

la dégradation des flavonoïdes. La stabilité est plus faible à des pH basiques en raison d’une
augmentation de l’oxydation de ces molécules due soit à une déprotonation de ces composés
(diminution du potentiel d’oxydation), soit à une stabilisation de l’oxydant (anion
superoxyde). La nature du solvant affecte le mécanisme de dégradation des flavonoïdes. En
effet, lors de l’étude de la dégradation de la quercétine par le DPPH, Fargeix., 2000, a
observé la formation de produits différents en milieu protique et aprotique. De même,
Tommasini et al., 2004, ont rapporté, lors de l’étude de la photostabilité du 3-
hydroxyflavone, des voies de dégradation différentes selon la nature du solvant avec une
amélioration de la stabilité en présence de cyclodextrines.
II.2.5.3.4. Absorption des rayons UV
Plusieurs facteurs peuvent affecter le spectre d’absorption et le coefficient d’extinction des

flavonoïdes comme la nature du solvant, le pH, la nature des substituants (hydroxylation,
17
méthylation, glycosylation, acylation) et leur position, et la présence d’interaction intra et/ou
inter-moléculaire. Les spectres UV des flavonoïdes exhibent deux bandes d’absorption
principales dans la région 240-400 nm. La bande I (300-395 nm) est considérée comme étant
associée à l’absorption de la partie cinnamoyle (noyau B) du flavonoïde et la bande II (240-
280 nm) à celle de la partie benzoyle (Chebil, 2006).
II.2.5.4. Rôles des flavonoïdes
II.2.5.4.1. Pour la plante
Les flavonoïdes sont synthétisés au niveau des fleurs, des fruits, des feuilles et des graines
d’un grand nombre de végétaux. Leur accumulation confère des avantages écologiques et
physiologiques majeurs (Koes et al., 1994; Harborne et Williams, 2000; Winkel-Shirley,
2002; Dixon et al., 2005). Ils assurent en premier lieu une protection contre un éventail de
stress abiotiques. En effet, les flavones, les flavonols, de même que les anthocyanes, sont
synthétisés en réponse aux UV-B dans les cellules épidermiques des feuilles. Du fait de leur
spectre d’absorption dans les UV, les flavonoïdes agissent ainsi comme des filtres, mais ils
peuvent aussi agir en se liant directement à l’ADN pour le protéger (Harborne et Williams,
2000; Dixon et al., 2005; Aron et Kennedy, 2008; Lindoo et Caldwell, 1978; Ormrod et
al., 1995; Mendez et al., 1999; Pradhan et al., 2008).
D’autre part, les pigments absorbant dans la lumière visible, comme les anthocyanes, les
flavonols et les aurones, sont en outre responsables de la coloration du pollen, des fleurs et
des fruits (Harborne et Williams, 2000; Tanaka et al., 2008).
II.2.5.4.2. Pour la santé humaine et l’industrie
Les flavonoïdes possèdent des propriétés anti-inflammatoires, analgésiques, antifongiques

et antibactériennes, mais également spasmolytiques permettant une relaxation des muscles
lisses. De plus, en éliminant les espèces oxygénées telles que les anions superoxydes (O2-),
ainsi que les radicaux hydroxyles et peroxydes, et en réduisant la peroxydation des lipides, les
flavonoïdes jouent un rôle d’antioxydants. D’autre part, les flavonoïdes peuvent agir sur le
système vasculaire en limitant l’agrégation des plaquettes, et présentent des propriétés
antitumorales par induction de l’apoptose, et par l’inhibition à la fois de la multiplication des
cellules carcinogènes et la prolifération des lymphocytes T (Harborne et Williams, 2000;
Aron et Kennedy, 2008). Enfin, les flavonoïdes peuvent affecter la stabilité et la fluidité des
membranes cellulaires (Harborne et Williams, 2000; Yilmaz et Toledo, 2004; Aron et
18
Kennedy, 2008), permettant en outre de lutter contre les maladies cardiaques coronariennes,
en inhibant l’oxydation des lipoprotéines de faible densité (LDL, Low Density Lipoprotein).
De par leurs nombreuses propriétés médicinales, les composés phénoliques naturellement
présents dans les végétaux et leurs dérivés présentent donc un intérêt certain et grandissant
pour la nutrition humaine, les industries pharmacologiques et cosmétiques.
Les flavonoïdes sont également utilisés en tant que colorants pour les industries
agroalimentaires, pharmaceutiques et cosmétiques.
II.3. Biosynthèse des polyphénols
Les composés phénoliques sont issus par deux grandes voies métaboliques :
 La voise la plus courante est celle qui, via le shikimate (l’acide shikimique), conduit
des oses aux amino-acides aromatiques (phénylalanine et tyrosine) puis par
désamination de ces derniers, aux acides cinnamiques et à leur très nombreux dérivés :
acides benzoïques, acétophénones, lignanes et lignines, coumarines, etc.;
 L’autre voie part de l’acétate et conduit à des poly-β-cétoesters de longueur variable -
les polyacétates- qui engendrent, par cyclisation des composés souvent polycycliques :
chromones, isocoumarines, orcinols, depsides, depsidones, xanthones, quinones, etc
(Bruneton, 2009).
II.3.1. Voie de shikimat
Le 3-déhydroshikimate, formé à partir de la condensation du phosphoénolpyruvate avec

l’érythrose-4-phosphate, est réduit en shikimate, puis la phosphorylation de ce dernier et sa
condensation avec une autre molécule de phosphoénolpyruvate, conduit à la formation du
chorismate. Le chorismate occupe une position-clé dans le métabolisme, en particulier dans la
formation des acides aminés aromatiques. Les phénylpropanes, tel l’acide cinnamique, sont
des métabolites du shikimate susceptibles de se cycliser et d'aboutir à la formation des
coumarines, de se dimériser comme dans le cas des lignanes, ou de se polymériser formant
alors des lignines. Les flavonoïdes et les stilbènes résultent d'un allongement de la chaîne
latérale (Krief, 2003) (figure 5).
19
Figure 5 : La voie de shikimate (Floss, 1997).
II.3.2. Voie de l’acide malonique
La glycolyse et la β oxydation aboutissent à la formation de l’acétyle-CoA donnant le

malonate.
C’est a travers cette voie que s’effectué la cyclisation des chaines poly cétonique de
l’acétyle-CoA. Cette réaction est catalysée par l’enzyme acétyle-CoA carboxylase (Richter,
1993).
II.4. Propriétés pharmacologiques des polyphénols
Les polyphénols, métabolites exclusivement d’origine végétale, apparaissent comme des

molécules d’un grand intérêt. Ils démontrent des propriétés préventives contre les maladies.
Les enjeux de la recherche sur les polyphénols sont aujourd’hui de confirmer chez l’homme
leurs effets protecteurs contre les diverses pathologies, de définir la nature des polyphénols les
20
plus efficaces et les niveaux d’apports optimaux et de préciser la nature des aliments qui
constituent les meilleures sources de ces polyphénol (Edeas, 2007). À titre d’exemple,
plusieurs enquêtes épidémiologiques ont montré´ les effets bénéfiques de la consommation
des fruits et des légumes ayant une forte concentration en composés phénoliques dans la
prévention des maladies liées au stress oxydant telles que les maladies cardiovasculaires, les
maladies cérébrovasculaires, les maladies métaboliques et le cancer (Hertog et al., 1993;
Hertog et al., 1997; Hertog et al., 1997; Muldoon et Kritchevsky, 1996).
Plusieurs polyphénols avec leurs sources alimentaires sont donnés en (figure 6). Il s’agit
de la quercétine, un flavonol très présent dans les oignons qui est anti-inflammatoire et
antioxydant, une procyanidine de la famille des tannins très concentrée dans les pommes. Elle
est vasculo-protectrice. L’hespérétine de l’orange est neuroprotectrice et hypo-
cholestéroléminante. Cette figure montre aussi l’apigénine, une flavone du persil antioxydante
et anti-inflammatoire, le resvératrol, un stylbène du vin rouge qui est anticancéreux, la
génistéine une isoflavone du soja qui prévient les troubles de la ménopause et l’ostéoporose,
et la curcumine un acide férulique du curcumine qui est anticancéreuse. Tous ces composés
sont présents dans les végétaux sous des formes conjuguées à des glycosides mais le transit
dans les voies digestives les hydrolyse et libère des formes aglycones. Celles-ci passent
ensuite la barrière intestinale. La biodisponibilité de ces composés est très variable. À part les
isoflavones dont 80 % des molécules ingérées sont retrouvées en 48 heures dans l’urine
(Shinkaruk et al., 2012), la biodisponibilité des autres polyphénols est en général plus faible,
variant de 4 à 30 %. Les polymères comme les tannins ne passent pas la barrière intestinale et
sont préalablement hydrolysés en dimères ou trimères pour atteindre le sang (Serra et al.,
2013).
Figure 6 : Polyphénols à effets santé (Bennetau-Pelissero, 2014).
21
Chapitre III
Activité
antioxydants
Chapitre III : Activité antioxydants Synthèse bibliographique
III.1. Stress oxydatif
Le stress oxydatif (SO) est la conséquence d’un déséquilibre entre la production de

substances oxydantes qui sont principalement des ERO (espèces réactives de l’oxygène) et leur
neutralisation par des antioxydants (Lemineur et al., 2006). Le SO est susceptible d’attaquer
des cibles cellulaires (lipides, protéines, acides nucléiques) induisant ainsi la formation de
produits d’oxydation (Therond, 2006). Ces espèces réactives constituent un facteur non
spécifique de la genèse de processus inflammatoire et néoplasique. De nombreux agents et
substances induisent la production des radicaux libres (UV du soleil, tabagisme, toxines,
métaux lourds et bien d’autres agents nocifs), mais ils sont aussi et surtout produits dans
l’organisme pendant la respiration cellulaire. La génération de ces radicaux libres est vitale
pour la cellule, mais c’est l’exacerbation de cette production qui est délétère. Les dommages
cellulaires engendrés peuvent alors être induits par une surproduction des radicaux libres et/ou
par un déficit des systèmes antioxydants protecteurs (Bidri et Choay, 2071).
III.2. Radicaux libres
Les radicaux libres (RL), sont des atomes ou molécules possédant un ou plusieurs électrons
célibataires, ce qui les rend très instables. Elles tendent, ainsi, à réagir avec de nombreux
composés, et notamment les macromolécules situées à proximité de leur site de génération. Les
RL sont générés au sein de la cellule, via des mécanismes multiples et variés, la source
principale d’anions superoxyde étant la mitochondrie à travers la chaîne de transport des
électrons (Hokayem et al., 2012).
III.3. Oxygène, espèces réactives de l’oxygène (ERO)
Les ERO sont une famille d’entités chimiques regroupant les dérivés non radicalaires et les
radicaux libres oxygénés (tableau 3) (Belkheiri, 2010). En effet, la molécule d'oxygène
diatomique (O2) ne réagit pas spontanément avec d'autres molécules, car elle contient 2
électrons non appariés (biradical). Pour permettre la réaction de l'oxygène avec les molécules
organiques, il y a 2 possibilités: (1) la molécule organique est transformée en une monoradical
(une molécule contenant 1 électron non apparié) par l'élimination de 1 électron (oxydation), et /
ou (2) l'oxygène est converti en monoradical par l'addition de 1 électron (réduction) (Jean-
Charles, 2012).
L’oxygène, en tant que récepteur final d’électrons dans l’organisme, se transforme en

molécules d’eau au niveau de la chaîne respiratoire mitochondriale. Le processus de réduction
23
de l’oxygène en eau n’est toutefois pas parfait car 2 à 3 % de l’oxygène sont transformés en
ERO particulièrement réactionnelles (Koppenol, 2001). Dans une première étape, le radical
libre anion superoxyde est formé, ce qui conduit par la suite à la production d’autres ERO
comme le peroxyde d’hydrogène, l’oxygène singulet, le radical hydroxyle, l’acide
hypochloreux, des dérivés nitrés, ... (Joël et al., 2002).
Tableau 3 : Espèces réactives de l'oxygène (Jean-Charles, 2012).
Non radicalaires Radicaux libres
- Peroxyde d’hydrogène (H2O2) - Radical superoxyde (O2●–)
- Oxygène singulet (1O2) - radical peroxylipidique (LOO●)
- Acide hypochlorique (HOCL) - Radical hydroxyle (˙OH )
- Ozone (O3) - Peroxynitrite (ONOO–)
- Radical oxyde nitrique (NO●)
III.4. Les antioxydants
La production physiologique d’ERO est régulée par des systèmes de défense composés
d’enzymes (superoxyde dismutase, la catalase et la glutathion peroxydase) dont les formes
actives sont constituées par l’addition posttraductionnelle de métaux sur le site actif. Ces
métaux, comme le cuivre, le zinc ou le manganèse pour les superoxydes dismutases, le
sélénium pour la glutathion peroxydase et le fer pour la catalase, jouent ainsi un rôle indirect
dans la protection de l’organisme contre le stress oxydant. D’autres molécules issues des
aliments peuvent contrecarrer l’initiation de la réaction radicalaire en piégeant les ERO et/ou
les métaux de transition (caroténoïdes, polyphénols), voire d’arrêter la réaction radicalaire par
piégeage et stabilisation par résonance moléculaire de l’électron surnuméraire (tocophérols,
acide ascorbique et polyphénols) (Rock et Fardet, 2014).
III.4.1. Superoxyde dismutase ou (SOD)
L’enzyme superoxyde dismutase (SOD) est impliquée dans la neutralisation des ions
superoxyde (O2●–) en le transformant en peroxyde d’hydrogène (H2O2), évitant ainsi la
formation de dérivés plus toxiques comme la peroxynitrite (ONOO–) ou le radical hydroxyle
24
(HO●). L’activité SOD constitue un élément essentiel dans le système cellulaire antioxydant
pour protéger la matrice extracellulaire ainsi que les cellules des effets délétères de l’O2●– et de
ces dérivés (Afonso et al., 2007).
Chez l’homme, trois isoformes compartimentées de l’enzyme SOD ont été caractérisées de
façon biochimique et moléculaire. La Cu/Zn-SOD ou SOD1 cytosolique, et la EC-SOD ou
SOD3 extracellulaire, utilisent le cuivre et le zinc comme cofacteurs nécessaires à l’activité
enzymatique, alors que la SOD2, mitochondriale, utilise le manganèse (Afonso et al., 2007).
III.4.2. Catalase ou (CAT)
La catalase est une enzyme tétramère constituée de quatre sous-unités identiques de 60 KDa,
et ayant une masse moléculaire d'environ 240 KDa. CAT réagit très efficacement avec H2O2
pour former de l'eau et de l'oxygène moléculaire qui sont des composés stables (Matés et al.,
1999).
III.4.3. Glutathion peroxydase ou (GPx)
La fonction biochimique de la glutathion peroxydase est de réduire les hydroperoxydes

lipidiques en alcools correspondants et de réduire le H2O2 libre en eau. Contrairement à la
catalase, la peroxydase possède une haute affinité pour H2O2 et peut l'éliminer même lorsqu'elle
est présente en faible concentration (Kohen et Nyska, 2002).
III.4.4.Vitamine E (tocophérol)
Elle est considérée comme le principal antioxydant attaché à la membrane utilisé par la
cellule pour inhiber la peroxydation lipidique (Pryor, 2000; Valko et al., 2006). Durant la
réaction antioxydant, le α-tocophérol est converti en radical α-tocophérol beaucoup plus stable
en perdant un hydrogène arraché par une espèce radicalaire (radical peroxyle).
III.4.5. Vitamine C (acide ascorbique)
L’activité vitaminique, antiscorbutique de l’acide ascorbique résulte de la perte de la

capacité de synthèse de ce composé par l’homme (Nishikimi et al., 1994).
Ce cétolactone hydrosoluble possède deux groupes hydroxyles qui lui confèrent la propriété
réductrice par formation successive du radical ascorbyl et de l’acide déhydrascorbique (DHA).
Cette vitamine est capable de détoxifier une espèce radicalaire par piégeage de l’électron
25
surnuméraire et stabilisation de cet électron par résonance, rendant la forme ascorbyl moins
réactive que l’espèce radicalaire initiale (Buettner, 1993).
III.4.6. Polyphénols
Il existe une relation étroite entre la concentration d’un aliment en polyphénols et sa

capacité à neutraliser les radicaux libres. En effet, plus cet aliment est riche en ces éléments,
plus il présenterait un fort pouvoir antioxydant (Seeram et al., 2006).
L’activité anti-oxydante des composés phénoliques présents dans les plantes est
principalement due à leurs propriétés redox qui leurs permettent d’agir en réduisant les agents
donneurs d’hydrogène et d’extinction de l’oxygène singulet. Les composés phénoliques
peuvent aussi avoir des propriétés de chélation des métaux (Spiridon et al., 2011).
III.5. Les maladies liées au stress oxydatif
Le stress oxydatif joue un rôle central dans le développement des maladies humaines. Les
espèces réactives de l'oxygène (ERO) sont impliquées dans la croissance, la différenciation, la
progression et la mort de la cellule. Ils peuvent réagir avec les lipides membranaires, les acides
nucléiques, les protéines, les enzymes et d'autres petites molécules. De faibles concentrations
de ERO jouent un rôle indispensable dans la signalisation intracellulaire et la défense contre les
pathogènes, tandis que de plus grandes quantités de ERO jouent un rôle dans le nombre de
maladies humaines telles que l'arthrite, le cancer, le diabète, l'athérosclérose, l'ischémie.
(Rajendran et al., 2014).
26
Étude
expérimentale
Chapitre I
Matériel et
méthodes
Chapitre I : Matériel et méthodes Étude expérimentale
I. Étude phytochimique
I.1. Présentation de la matière première
Dans notre étude on a utilisé deux matières : la première c’est « Le pollen » qui a été
collecté dans la région de El Taref. Et la deuxième c’est « La propolis » qui a été récolté de
deux différentes régions de la wilaya d’Oum El Bouaghi (Ain El Beida et Ain Fakroun) et de
la wilaya de Constantine (Ibn Ziad -Farllah-) situés dans l’est Algérien. La récolte de la
propolis a été effectuée par le raclage des cadres.
Le poids de pollen est 60 g et de la propolis varie entre 20 g à 70 g. Les échantillons

doivent être conservés dans le réfrigérateur jusqu’à l’utilisation.
I.2. Préparation des échantillons
Les échantillons sont congelés pendant une nuit puis, broyées à l’aide d’un broyeur
électrique.
I.3. Extraction
L’extraction est une étape très importante avant l’analyse quantitative et qualitative
proprement dite, elle est choisie en fonction des composées phytochimique à étudier dans ce
travail.
Dans notre étude pour l’analyse des composées phytochimique. L’extraction solide-
liquide, est la procédure la plus couramment utilisé donc est une opération consiste à laisser la
poudre de matière en contact avec des solvants organique comme éthanol, chloroforme, n-
butanol…etc.
I.3.1. Extraction des polyphénols
Il existe plusieurs méthodes d’extraction des polyphénols, nous avons utilisées la méthode
de Romani et al., 2006.
Suivant le protocole (figure 7), 2 g de la poudre de chaque échantillon soumis sous une
macération dans 02 ml d’Ethanol à 96 % avec une agitation manuelle simple a été effectuée
au début pour assurer que toute la surface de la poudre est imprégnée par le solvant. Après
une période d’incubation de 10 jours à température ambiante, le mélange est filtré par un
papier filtre.
29
Figure 7 : Principales étapes d’extraction des polyphénols.
I.3.2. Extraction des composés phénoliques
Selon le protocole d’extraction (figure 8), 5 g de chaque échantillons soumis sous une
macération dans 02 ml de n-hexane, après 24h le mélange est filtré par papier filtre, la
macération est répétée (3 x 24h) avec (Chloroforme, Acétate d’éthyle, n-butanol).
30
Figure 8 : Principales étapes d’extraction des composés phénoliques (Markham, 1982).
31
I.3.3. Rendement
Le rendement d’extraction est le rapport entre le poids de chaque extrait et le poids de la

poudre sèche à traiter de pollen et propolis. On peut l’exprimé sous la forme suivant :
R= PE / PP x 100
R : Le rendement en %.
PE : Poids de l’extrait sec en g.
PP : Le poids sèche de l’échantillon en g.
I.4. Analyse chromatographique (chromatographie sur couche mince)
I.4.1. Principe
La Chromatographie sur Couche Mince (CCM) est une technique analytique rapide et
simple, utilisée au cours de la séparation et de l’identification des métabolites.
La CCM repose principalement sur des phénomènes d'adsorption : la phase mobile est un
solvant ou un mélange de solvants, qui progresse le long d'une phase stationnaire fixée sur
une plaque de verre ou sur une feuille semi-rigide de matière plastique ou d'aluminium. Après
que l'échantillon ait été déposé sur la phase stationnaire, les substances migrent à une vitesse
qui dépend de leur nature et de celle du solvant (Antonot et Marchel, 1998).
I.4.2. Mode opératoire
Tous les extraits obtenus à partir des propolis et pollen étudiées, ont été analysés
qualitativement par CCM.
a. Phase stationnaire
Dans notre étude, nous avons utilisé des plaques de silice prêtent à l’emploi de longueur 10
cm pour les trois extraits (Chloroforme, Acétate d’éthyle et n-butanol) obtenus à partir de
pollen et propolis étudiées.
b. Phase mobile
Pour avoir une idée sur les bons systèmes de séparation, on a essayé plusieurs systèmes et
on a choisi ceux qui donnent la meilleure séparation (tableau 4).
32
Tableau 4 : Les systèmes solvant utilisée.
Extrait Systèmes solvants Proportion

n-hexane / Chloroforme / Ethanol 7:3:0,5
Extrait d’Acétate d’éthyle
Ether d’éthyle / n-hexane 3:1
Extrait de n-butanol n-hexane / Chloroforme / Ethanol 7:4:1
Chloroforme / n-hexane / Ethanol 3:1:1
Extrait de Chloroforme
n-hexane / Ether d’éthyle 1:1
I.4.3. Dépôt
Pour effectuer la séparation, on a déposé quelque goutes à l’aide d’une micropipette sur un
trait de départ déterminé sur une distance de 1 cm du font de la plaque. Ensuite la plaque de
silice est placée dans une cuve fermée contenant le système solvant choisi.
I.4.4. Révélation
Après migration et séchage, les plaques ont été observées sous lampe UV à 365 nm (nous
avons utilisé les vapeurs d’Ammoniac (NH3) pour donner une bonne vision des taches). Puis
on a déterminé le rapport frontal (RF) qui peut être comparée à celle de la littérature.
RF = D1/D2
RF : Rapport Frontal.
D1 : Distance parcourue par l’échantillon.
D2 : Distance parcourue par le front du solvant.
I.5. Dosage des polyphénols
I.5.1. Principe
La teneur en polyphénols a été déterminée en utilisant le réactif Folin-Ciocalteu, suivant la

méthode de Singleton (Dewanto et al., 2002).
La réaction est basée sur la réduction en milieux alcalin de la mixture d’acide

phosphotungstrique (H3PW12O40) et l’acide phosphomolybdique (H3PMO12O40) de réactif de
Folin-ciocalteu, ce dernier, est de couleur jaune, par les groupements oxydables des composés
phénolique, conduisant à la formation de produits de réduction de couleur bleue. Ces derniers
présentent un maximum d’absorbance à 765 nm dont l’intensité est proportionnelle à la
quantité de polyphénols présents dans l’échantillon (Georgé et al., 2005).
33
Un volume de 500 μl de chaque extrait à des dilutions appropriées a été ajouté à 2500 μl de
réactif de Folin-Ciocalteu et 2000 μl de solution de Na2CO3. L'absorbance a été mesurée à
765 nm, après une incubation de 60 min dans l'obscurité. La teneur en composés phénoliques
totaux a été exprimée en microgramme d'équivalents d'acide gallique par milligramme
d’extrait (ug EAG/ mg) à travers la courbe d'étalonnage avec l'acide gallique.
Le blanc est préparé de la même façon sauf que l’extrait est remplacé par le solvant.
I.6. Dosage des flavonoïdes
I.6.1. Principe
La méthode de trichlorure d’aluminium (AlCl3) a été utilisée pour déterminer la teneur

totale en flavonoïdes (Lesjak et al., 2011).
Les flavonoïdes possèdent un groupement hydroxyle (OH) libre qui forme une liaison
covalente avec le trichlorure d’aluminium (figure 9) ce qui donne des complexes jaunâtre
(Ribéreau et al., 1972) ; ceci se traduit par le fait que le métal (Al) a perdu deux électrons
pour s’unir à deux oxygènes de la molécule phénolique agissant comme donneurs d’électrons
(Ribéreau, 1968).
Figure 9 : Réaction du Chlorure d’aluminium et les Flavonoïdes (Ribéreau et al., 1972).
Le complexe jaune présente une absorbance maximale à 430 nm dont l’intensité est
proportionnelle à la quantité des flavonoïdes présents dans l’échantillon.
34
Un volume de 250 μl de chaque extrait + 750 μl d’Ethanol sont ajoutés à 1000 μl d'une
solution à 2% d’AlCl3 éthanolique. L'absorbance a été mesurée à 430 nm, après une
incubation à température ambiante pendant de 10 min.
La teneur en flavonoïdes a été exprimée en microgramme d'équivalents de quercétine par

milligramme d’extrait (μg EQ/mg) à travers la courbe d'étalonnage avec la quercétine
(Miliauskas et al., 2004).
Le blanc est préparé de la même façon sauf que l’extrait est remplacé par le solvant.
II. Activité antioxydante
II.1. Activité antiradicalaire par le test DPPH.
II.1.1. Principe
Pour étudier l’activité antiradicalaire des différents extraits, nous avons opté pour la
méthode qui utilise le DPPH comme un radical libre relativement stable qui absorbe dans le
visible à la longueur d’onde de 515 à 528 nm.
Le test consiste à mettre le radical DPPH (de couleur violette), en présence des molécules
dites antioxydantes afin de mesurer leur capacité à le réduire. La forme réduite (diphényl-
picryl-hydrazine : de couleur jaune) n’absorbe plus à 515 nm, ce qui se traduit par une
diminution de l’absorbance (Sanchez-Moreno, 2002).
II.1.2. Mode opératoire
Selon le protocole décrit par Mansouri et al., 2005. La solution de DPPH est préparée par
solubilisation de 2,4 mg de DPPH dans 100 ml de méthanol (6x10-5 M). 25 μl des solutions
d’extraits ou standard (acide ascorbique) sont ajoutés à 975 μl de solution méthanolique de
DPPH, le mélange est laissé à l’obscurité pendant 30 min et la décoloration par rapport au
contrôle contenant la solution de DPPH et d’éthanol est mesurée à 517 nm. L’activité
antiradicalaire est estimée selon l’équation ci-dessous :
% d’activité antiradicalaiire = [(Abs contrôle – Abs échantillon)/ Abs contrôle] x 100
Nous avons utilisé différentes concentrations (2, 4, 6, 8,10 mg/ml) des échantillons étudiés
en même temps que le control acide ascorbique.
35
Le contrôle : est préparé de la même façon sauf que l’extrait est remplacé par le solvant :
975 μl de solution méthanolique de DPPH + 25 μl d’éthanol, le mélange est laissé à
l’obscurité pendant 30 min.
Le blanc : pour réglage d’appareil est constitué par 1 ml d’éthanol.
36
Chapitre II
Résultats et
discussion
Chapitre II : Résultats et discussion Étude expérimentale
II.1. Rendement d'extraction
L’extraction des composés phénoliques des propolis et pollen étudiés permet de déterminé
leurs rendements. Ces derniers sont illustrés dans les figures 10, 11.
40%
35%
30%
Rendement %
25%
20% 38%
15% 33%
10% 26%
5%
0%
Propolis Ain
Fakroun Propolis
Férella Propolis Ain
Farllah
El Beida
Les régions
Figure 10 : Rendement d'extraction de propolis de différentes régions.
Pour la propolis, les résultats obtenus lors de cette étude montrent que l’extrait de la région
d’Ain Fakroun représente le rendement le plus élevé (38%), suivi par l’extrait de Farllah
(33%), puis l’extrait d’Ain El Beida possède le plus faible rendement (26%).
35%
30%
Rendement %
25%
20%
15% 32%
10%
5%
0%
Pollen El Taref
La région
Figure 11 : Rendement d'extraction de pollen d’El Taref.
Pour le pollen, nous avons enregistré que l’extrait d’El Taref possède un rendement de
(32%), Sachant que l’extraction a été réalisée par l’Ethanol à 96%.
38
Ces résultats sont inférieur à ceux de Trusheva et al., 2007 qui ont trouvé un rendement de
55% pour la propolis d’ Italie, et aussi pour l’étude menée par Solange et al., 2007 sur le
pollen de Vienne (Allemand) ont révélé un rendement de 40%, en revanche Rebiai et al. en
2013 ont trouvé un rendement très faible de 0.72% pour la propolis de Ghardaïa et seulement
2.41% pour celle de Khenchla.
Toutes ces différences pourraient être expliquées par les différents solvants utilisés,
différentes méthodes d'extraction, le PH du milieu d’extraction, la température et bien sûr par
les différentes origines géographiques.
II.2. Résultat de la chromatographie sur couche mince
La CCM de trois extraits (Acétate d’éthyle, n-butanol et Chloroforme) de la propolis et

pollen permet de séparer des substances qui sont apparus sous différentes formes de spots.
L’identification des composés était basée sur la comparaison des Rf et les couleurs
observés sous lampe UV des taches apparues sur CCM avec ceux de la littérature (tableau 5).
Les figures 12, 13 et 14 représentent les résultats de la CCM de la propolis (1: Ain El
Beida, 2: Ain Fakroun et 3: Farllah) et le pollen (4: El Taref) avec les vapeurs d’Ammoniac.
1 2 3 4 1 2 3 4
A B
Figure 12 : CCM de l’extrait d’Acétate d’éthyle (Système solvant : A : n-hexane 7 ml /
Chloroforme 3 ml / Ethanol 0.5 ml. B : Ether d’éthyle 3 ml / n-hexane 1 ml).
39
1 2 3 4
Figure 13 : CCM de l’extrait de n-butanol (Système solvant : n-hexane 7 ml / Chloroforme
4ml / Ethanol 1 ml).
1 2 3 4 1 2 3 4
A B
Figure 14 : CCM de l’extrait de Chloroforme (Système solvant : A : Chloroforme 3 ml/
n-hexane 1 ml / Ethanol 1 ml. B : n-hexane 1 ml / Ether d’éthyle 1 ml).
40
Tableau 5 : Les classes des composés phénoliques identifiés dans les extraits.
L’extrait Système Échantillon Couleur Rf Type de Composé

solvant sous UV (cm) possible
(Markham, 1982)
L’extrait n-hexane 7 - Propolis Acide phénolique,
Bleue 0,09
d’Acétate Chloroforme 3 d’Ain El Beida Coumarines
d’éthyle Ethanol 0.5 - Propolis Anthocyanidine 3-
d’Ain Fakroun 0,17 glucoside,
Marron
- Propolis 0,26 Flavonols, Flavones,
Farllah Aurones
0,22
Jaune Flavonols
0,42
Anthocyanidine 3-
Mauve 0,66
glycosides
Violet 0,93 Flavones
- Pollen d’El Anthocyanidine 3-

Taref
glucoside,
Marron 0,26
Flavonols, Flavones,
Aurones
Anthocyanidine 3-
Mauve 0,66
glycosides
Ether d’éthyle - Propolis 0,07
3 d’Ain El Beida Jaune 0,14 Flavonols
n-hexane 1 - Propolis 0,64
d’Ain Fakroun Acide phénolique,
Bleue 0,28
- Propolis Coumarines
Farllah Anthocyanidine 3-
0,38
glucoside,
Marron 0,50
0,85
Aurones
violet 0,78 Flavones
- Pollen d’El 0,07
Jaune Flavonols
Taref 0,64
41
L’extrait de n-hexane 7 - Propolis Jaune 0,17 Flavonols
n-butanol Chloroforme 4 d’Ain El Beida Anthocyanidine 3-
0,32
Ethanol 1 - Propolis glucoside,
Marron 0,46
d’Ain Fakroun Flavonols, Flavones,
0,73
- Propolis Aurones
Farllah 0,57
Violet Flavones
0,68
- Pollen d’El Anthocyanidine 3-
Taref glucoside,
Marron 0,46
Aurones
L’extrait de Chloroforme 3 - Propolis 0,20
Jaune Flavonols
Chloroforme n-hexane 1 d’Ain El Beida 0,46
Ethanol 1 - Propolis Anthocyanidine 3-
Mauve 0,53
d’Ain Fakroun glycosides
- Propolis
Férilla
- Pollen d’El
Taref
n-hexane 1 - Propolis Acide phénolique,

Bleue 0,25
Ether d’éthyle1 d’Ain El Beida Coumarines
- Propolis Anthocyanidine 3-
d’Ain Fakroun 0,31 glucoside,
Marron
- Propolis 0,50 Flavonols, Flavones,
Farllah Aurones
0,38
Jaune Flavonols
0,88
- Pollen d’El Acide phénolique,
Bleue 0,25
Taref Coumarines
42
Anthocyanidine 3-
Marron 0,31 glucoside, Flavonols,
Flavones, Aurones

Jaune 0,94 Flavonols
43
Flavones Flavonols
Aurones Anthocyanidines
Acides phénoliques (Acides hydroxybenzoïques, Acides hydroxycinnamiques)
Figure 15 : Structure chimique des composés phénoliques possibles identifiés dans les
extraits (Narayana et al., 2001; W- Erdman et al., 2007).
44
II.3. Résultats de dosage des polyphénols
La teneur des différents extraits de propolis et pollen en polyphénols a été déterminée par
la méthode utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu, en utilisant comme standard l'acide gallique
(figure 16), elle est exprimée en μg EAG/mg d’extrait.
0,300
y = 0,0054x + 0,1257
0,250 R² = 0,9944
Absorbance à 765 nm
0,200
0,150
0,100
0,050
0,000
0 5 10 15 20 25 30
Concentration (ug/ml)
Figure 16 : Courbe d'étalonnage de l'acide gallique.
Les résultats de dosage des polyphénols totaux dans les échantillons de propolis et pollen
analysés sont rapportés dans le (tableau 6).
Tableau 6 : Teneurs en polyphénols des différents échantillons de propolis et pollen.
Les échantillons Quantité de polyphénols en μg EAG/mg d'extrait
Propolis Ain El Beida 362,00 ± 5.091
Propolis Ain Fakroun 292,40 ±0.566
Propolis Farllah 280,00 ± 5.657
Pollen El Taref 253,20 ±1.697
Dans cette étude on a obtenu des teneurs en polyphénols totaux qui varient entre 253.20 ±
1.697 μg EAG/mg à 362.00 ± 5.091 μg EAG/mg d’extrait de la propolis et pollen, ces
résultats montrent que la propolis d’Ain El Beida représente la teneur la plus élevé en
polyphénols 362.00 ± 5.091μg EAG/mg par rapport aux autres régions, suivi par l’échantillon
d’Ain Fakroun dont la teneur est de 292.40 ± 0.566 μg EAG/mg d’extrait, puis l’extrait de
45
Farllah 280.00 ± 5.657 μg EAG/mg, alors que l’extrait de pollen d’El Taref représente la
teneur la plus faible en polyphénols 253.20 ± 1.697 μg EAG/mg.
Les résultats obtenus durant cette étude sont différents de ceux trouvés par quelques
auteurs. Les travaux de Can et al., 2015 sur la propolis de quelques régions d'Azerbaïdjan ont
trouvé une teneur très faibles en polyphénols entre 10,94 et 79,23 μg EAG /mg, alors que les
travaux de Ahn et al., 2007 sur la propolis chinoise ont trouvé une teneur en polyphénols de
302 ± 4,3 μg EAG/mg. En plus, l’étude menée par Choi et al., 2006 sur la propolis coréenne
a montré une teneur de 212,7 ± 7,4 μg EAG /mg. Ainsi, l’étude de Kumazawa et al., 2004
sur la propolis chinoise a révélé une teneur en polyphénols de 299 ± 0.5 μg EAG /mg . En
outre, Laskar et al., en 2010 ont trouvé une moyenne de teneur en polyphénols de 159 ± 0.69
μg EAG /mg d’extrait de propolis Indian.
Une étude faite par Boufadi et al., 2014 montrent que la propolis d’ Ain El Arba (wilaya
Aïn Témouchen) contient 194 ± 14 μg EAG /mg de polyphénols et celle de Ksar el hirane
( wilaya de Laghouat) contient 91 ± 1 μg EAG /mg. Alors que les traveaux de Ananias et al.,
2014 sur le pollen de Portugal ont trouvé une valeur inferieur de notre résultat avec une
teneur en polyphénols de 27.82 ± 2.80 μg EAG /mg, et sur le pollen d'Espagne une teneur de
32,15 ± 2,12 μg EAG /mg.
Toutes ces différences dans la teneur en polyphénols peut revenir aux conditions
environnementaux (le climat, la nature du sol) de chaque région de l’échantillon récoltée,
ou/et aux conditions expérimentaux (les procédures d’extraction, le dosage et les différents
solvants utilisés).
II.4. Résultats de dosage des flavonoïdes
La teneur des différents extraits de propolis et pollen en flavonoïde a été réalisé selon la
méthode de trichlorure d’aluminium (AlCl3), en utilisant comme standard la quercétine
(figure 17), elle est exprimée en μg EQ/mg d’extrait.
46
1,200
y = 0,0298x + 0,2589
1,000
R² = 0,9672
Absorbance à 430 nm
0,800
0,600
0,400
0,200
0,000
0 5 10 15 20 25 30
Concentration (ug/ml)
Figure 17 : Courbe d'étalonnage de la quercétrine.
Les résultats de dosage des flavonoïdes dans les échantillons de propolis et pollen analysés
sont rapportés dans le (tableau 7).
Tableau 7 : Teneurs en flavonoïdes des différents échantillons de propolis et pollen.
Les échantillons Quantité de flavonoïdes en μg EQ/mg d'extrait

Propolis Ain El Beida 39.724 ± 0.195
Propolis Ain Fakroun 27.103 ± 0.488
Propolis Farllah 18.00 ± 0.488
Pollen El Taref 8.897 ± 0.878
La détermination quantitative des flavonoïdes totaux par la méthode du trichlorure

d’aluminium révèle que l’extrait riche en flavonoïdes c’est la propolis d’Ain El Beida avec
une teneur de 39.724 ± 0.195 μg EQ/mg, alors que le pollen d’El Taref représente la teneur la
plus faible en flavonoïdes 8.897 ± 0.878 μg EQ/mg.
Les résultats obtenus durant cette étude sont différents de ceux trouvés par quelques
auteurs. Les travaux de Ananias et al., 2014 sur le pollen de Portugal ont trouvé une valeur
inferieur de nos résultat avec une teneur en flavonoïdes de 7.51 ± 0.96 μg EQ/mg, et sur le
pollen d'Espagne une teneur de 4.91 ± 0.83 μg EQ/mg. Alors que l’étude faite par Boufadi et
al., 2014 sur la propolis d’Ain ouassara (Wilaya de Djelfa) ont trouvé une teneur en
flavonoïdes de 32 ± 1 μg EQ/mg , et celle de Ksar el hirane (wilaya de Laghouat) contient
14.4 ± 0.9 μg EQ/mg.
47
La différence entre les anciens résultats et les résultats actuels peut revenir à différents
facteurs : l’environnement, la période de récolte, la technique d’extraction, la méthode et le
volume du solvant utilisé pour le dosage.
II.5. Corrélation entre les teneurs en flavonoïdes et polyphénols
La courbe ci-dessous (figure 18) représente la corrélation entre la teneur en polyphénols et

la teneur en flavonoïdes.
400 y = 3,408x + 217,05

Teneur en polyphénols en ug EAG/mg
350 R² = 0,9353
300
250
d'extrait
200
150
100
50
0
0 10 20 30 40 50
Teneur en flavonoides en ug EQ/mg d'extrait
Figure 18 : Corrélation entre les teneurs en flavonoïdes et polyphénols des extraits de

propolis et pollen.
On remarque qu’il existe une corrélation significative (R = 0,96) entre la teneur des
extraits de propolis et pollen des différentes régions en flavonoïdes et en polyphénols. Ce
résultat (R = 0,96) est plus élevé par rapport à celui trouvé dans les travaux de Miguel et al.,
2014 sur la propolis de Portugal, ils sont respectivement de (R = 0,79).
48
II.6. Activité antioxydante
II.6.1. Détermination du pourcentage d’activité antiradicalaire
Les résultats obtenus lors du test de mesure de pourcentage d’inhibition du radical DPPH
sont enregistrés dans les figures 19, 20, 21 et 22.
Puis on a calculé les pourcentages (%) de l’activité anti-radicalaire et on a obtenu les

résultats suivants :
Figure 19 : % d’activité antiradicalaire en fonction des concentrations de l’extrait.
49
D’après les courbes illustrées précédemment, on remarque que le pourcentage d’activité

antioxydant augmente avec l’augmentation de la concentration pour tous les extraits de
propolis et aussi pour le pollen. Il semble que l’activité antiradicalaire est fortement
dépendante aux concentrations des extraits de propolis et pollen, Plus l’extrait est concentré,
plus le pourcentage d'activité est élevé.
50
Figure 23 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire de propolis d'Ain El Beida et

de l'acide ascorbique.
Figure 24 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire de propolis d'Ain Fakroun et

de l'acide ascorbique.
51
Figure 25 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire de propolis de Farllah et de

l'acide ascorbique.
Figure 26 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire de pollen d'El Taref et de

l'acide ascorbique.
52
Figure 27 : Histogramme comparatif de l’activité antiradicalaire des propolis de différentes

régions, pollen et de l'acide ascorbique.
Tableau 8 : Activités antioxydantes des extraits des propolis, pollen et l'acide ascorbique à
une concentration de 10 mg/ml.
Extrait Activité antioxydante (%)
Propolis Ain El Beida 77.44
Propolis Ain Fakroun 80.69
Propolis Farllah 81.39
Pollen El Taref 83.48
Vit C 96.95
D’après la figure 27 et le tableau 8 ci-dessus, la vitamine C est la piégeur du radical

DPPH la plus puissante avec un pourcentage d’activité antiradicalaire de l’ordre de 96.95 %,
suivi par l’extrait de pollen d’El Taref 83.48 %, puis l’extrait de Farllah 81.39 %, ensuite
l’extrait d’Ain Fakroun 80.69 %, alors que l’extrait d’Ain El Beida avec un faible pourcentage
de 77.44 %. En comparaison avec la vitamine C, l’extrait de pollen d’El Taref testés s’avère
très actifs.
Selon l’étude de Rebiai et al., 2013 sur la propolis de Ghardaia et Khanchla ont révélent
un pourcentage d’activité antiradicalaire inferieur de nos résultas de l’ordre de 39.17 %, et
12.11 %, en plus l’étude menée par Boufadi et al., 2014 sur la propolis d’Ouled ali (wilaya
53
de Guelma), Ain Ouassara (Wilaya de Djelfa) et Ksar el hirane (wilaya de Laghouat) ont
trouvé un pourcentage d’activité antiradicalaire > 50%.
En effet, le pourcentage d’activité antiradicalaire d’extrait de pollen trouvé dans cette

étude est supérieur à ceux de pollen Portugal qui variaient de 2,16 % à 5,87 % (Almaraz-
Abarca et al., 2004). Par contre, nos résultats sont inférieurs à ceux de Thaliny et al., 2017
qui ont trouvé un pourcentage d’activité antiradicalaire de 89.36 ± 2.30 % de propolis
Brésilienne.
Les recherches faites sur l’activité antiradicalaire de pollen et propolis sont nombreuses,
les résultats sont différents d’une étude à l’autre, cela peut être expliqué par plusieurs facteurs
influençant l’efficacité de l’extraction, la nature et le volume du solvant utilisé.
II.6.2. Corrélation entre la teneur en polyphénols totaux et le pouvoir antiradicalaire
Pour déterminer la relation entre la teneur en polyphénols et l'activité antioxydante, on a

établi une courbe de corrélation représenté dans la figure suivante :
400
y = -18,347x + 1778,4
Teneur en polyphénols en ug /mg
350
R² = 0,9817
300
250
200
150
100
50
0
77 78 79 80 81 82 83 84
Pouvoire antiradicalaire (%)
Figure 28 : Corrélation entre la teneur en polyphénols totaux et le pouvoir antiradicalaire.
Au vu de cette figure 28, on constate que la corrélation est très bonne entre ces deux
paramètres (R = 0,99), Ce résultat est un peu supérieur à ce trouvé dans la propolis
d’Azerbaijan (R = 0.98) (Can et al., 2015).
Ces différences peut revenir aux différentes origines géographiques, c'est pour cela
l'activité antiradicalaire dépend de la nature des composés phénoliques disponibles.
54
Conclusion
Conclusion
Les recherches entreprises sur la propolis et le pollen ont permis de montrer que ces
derniers pouvait être une alternative efficace d’un bon nombre de troubles et pathologies, bien
que la composition en principes actifs diffère fortement en fonction de l’origine botanique, les
effets thérapeutiques de ces différentes propolis et pollen soient les mêmes.
Ce travail avait pour objectifs d’évaluer l’activité antioxydante des extraits éthanoliques de
la propolis provenant de deux régions différentes de la wilaya d’Oum El Bouaghi (Ain El
Beida et Ain Fakroun) et de la wilaya de Constantine (Ibn Ziad -Farllah-), alors que le pollen
provenant de la wilaya d’El Taref relativement à sa teneur polyphénolique.
L’extraction des composés phénoliques des propolis et pollen étudiés permet de déterminé
leurs rendements. Nous avons obtenu un rendement plus élevé de propolis d’Ain Fakroun
(38%) par contre le plus faible a été obtenu par l’extrait d’Ain El Beida (26%), et un
rendement de (32%) pour le pollen.
L’analyse quantitative représentée par le dosage spectral des composés phénoliques et des
flavonoïdes contenus dans l’extrait éthanolique de propolis et pollen révèle que la propolis
d’Ain El Beida est plus riche en polyphénols et en flavonoïdes que celle des autres régions.
Alors que le pollen représente la teneur la plus faible.
En outre, les analyses qualitatives effectuées par la chromatographie sur couche mince
(CCM), ont montré sous UV la présence d’une multitude de variétés de : les acides phénols,
les anthocyanidines, les glucosides, les Flavonols, les flavones, et les aurones.
L’estimation de l’activité antioxydante effectuée par la méthode de DPPH sur les

échantillons de propolis et pollen a confirmé les propriétés puissantes des extraits
éthanoliques à piéger les radicaux libres. En effet, les résultats obtenus lors de cette étude ont
prouvé que la vitamine C présente le pouvoir antioxydant le plus élevé avec un pourcentage
de (96,95%), suivi par le pollen d’El Taref (83,48%), puis la propolis d’Ibn Ziad -Farllah-
présente le pouvoir antioxydant le plus élevé avec un pourcentage de (81,39%) que celle des
autres régions.
Nos principales perspectives sont :
 Evaluation des propriétés thérapeutiques des extraits de propolis et pollen.

 Une étude quantitative plus approfondie pour déterminer la teneur des autres
composes phénoliques.
 une étude comparative sur le plan chimique et biologique entre la propolis et le pollen
de chaque région.
Références
Bibliographiques
Abdella, E.M., Tohamy, A., Ahmad, R.R., 2009. Antimutagenic activity of Egyptian
propolis and bee pollen water extracts against cisplatin-induced chromosomal abnormalities
in bone marrow cells of mice. Iranian Journal of Cancer Prevention 2, 175-181.
Afonso, V., Champy, R., Mitrovic, D., Collin, P., Lomri, A.R., 2007. Radicaux libres
dérivés de l’oxygène et superoxydes dismutases: rôle dans les maladies rhumatismales. Revue
du Rhumatisme 74: 636-643.
Ahn, M., Kumazawa, S., Usui, Y., Nakamura, J., Matsuka, M., Zhu, F., Nakayama, T.,
2007. Antioxidant activity and constituents of propolis collected in various areas of China.
Food Chemistry, 1383-1392.
Alan, L., Miller, N.D., 1996. Antioxydant flavonoids: structure, function and clinical usage.
Alt Med Rev l (2). Pp: 103-111.
Almaraz-Abarca, N., Campos, M.G., Avila-Reyes, J.A., Naranjo-Jimenez, N., Herrera-

Corral, J., Gonzalez-Valdez, L.S., 2004. Variability of antioxidant activity among
honeybee-collected pollen of different botanical origin. Interciencia 29, 574-578.
Almeida-Muradian, L.B., Pamplona, L.C., Coimbra, S., Barth, O., 2005. Chemical
composition and botanical evaluation of dried bee-pollen pellets. Journal of Food
Composition and Analysis 18, 105-111.
Ananias, P., Sandra, R., Alfredo, T., Xesus, F., Leticia, M., Estevinho., 2014. Biological
activities of commercial bee pollens: Antimicrobial, antimutagenic, antioxidant and anti-
inflammatory. Food and Chemical Toxicology 63, 233-239.
Antonot, E., Marchel, R., 1998. Chromatographie.
Apimondia-standing commission of apitherapy., 2001. Traité d’Apithérapie, La médecine

par les abeilles [cédérom] v.1.01 PC-Mac Produit par Api-Ar International SA Ŕ Brussels.
2001 ISBN : 2-9600270-0-0.
Aron, P., Kennedy, J., 2008. Flavan-3-ols: nature, occurrence and biological activity.
Molecular Nutrition and Food Research 52(1): 79–104.
Bankova, V.S., Decastro, S.L., Marcucci, M.C., 2000. Apidologie 31, 3-15.
Bariliak, I.R., Berdyshev, G.D., Dugan, A.M., 1996. The antimutagenic action of apiculture
products. The Journal of Cytology and Genetics 30, 48-55.
Belkheiri, N., 2010. Dérivés phénoliques à activités Antiathérogènes. Thèse de Doctorat.

Université de Toulouse, France.
Bennetau-Pelissero, C., 2014. Polyphénols et voies de signalisation, données récentes.

Cahiers de nutrition et de diététique, http://dx.doi.org/10.1016/j.cnd.2014.02.004.
Bidri, M., Choay, P., 2071. Regain d’intérêt pour la grenade, un fruit majestueux aux
multiples propriétés. Phytothérapie 15: 91-103.
Biri, M., 2003. Le grand livre des abeilles. Cour d’apiculture moderne. Ed vecchi S. 10 éd.
Bogdanov, S., 2014. Pollen: Production, nutrition and Health; a review. Bee product science
[www.bee-hegagon.net] (consulté le 28/05/2015).
Boufadi, Y.M., Soubhye, J., Riazi, A., Rousseau, A., Vanhaeverbeek, M., Nève, J.,
Boudjeltia, K.Z., Antwerpen, P.V., 2014. Characterization and Antioxidant Properties of
Six Algerian Propolis Extracts: Ethyl Acetate Extracts Inhibit Myeloperoxidase Activity. 15,
2327-2345.
Bradbear, N., 2010. Le rôle des abeilles dans le développement rural. Manuel sur la récolte,
la transformation et la commercialisation des produits et services dérivés des abeilles.
Organisation des nations unies pour l’alimentation et l’agriculture. Rome, 238 p.
Bruneau, E., 2004. Les produits de la ruche In : Bruneau, E., Barbançon, J.M., Bonnaffé, P.,
Clément, H., Domerego, R., Fert, G., Leconte, Y., Ratia, G., Reeb, C., Vaissière, B. Le traité
Rustica de l’apiculture. Rustica éditions, Paris, 352-387.
Bruneau, E., 2011. Chapitre IX : Les produits de la ruche. In : Clément et al., Le traité rustica
de l’apiculture. Editions Rustica, Paris, p 354-387.
Bruneton, J., 1993. Pharmacognosie: Phytochimie, Plantes médicinales. 2ème édition,

Lavoisier Techniques & Documentation, Paris.
Bruneton, J., 1997. Pharmacognosie: phytochimie, plants médicinales. Impr. CEE. Pp: 314-
334.


Buettner, G.R., 1993. The pecking order of free radicals and antioxidants: lipid peroxidation,
[alpha]-tocopherol, and ascorbate. Arch Biochem Biophys 300: 535-43.
Bufalo, M.C., Candeias, J.M.G., Sforcin, J.M., 2009b. In vitro cytotoxic effect of Brazilian
green propolis on human laryngeal epidermoide carcinoma (HEp-2) cells. Evidence-based
Complementary and Alternative Medicine 6, 483-487.
Campos, M., Firgerio, C., Lopes, J., Bogdanov, S., 2010. “What is the future of Bee-
Pollen?” Journal of Analytical Atomic Spectrometry, vol. 2, pp. 131-144.
Can, Z., Yildiz2, O., Şahin, H., Asadov, A., Kolayli, S., (2015). Phenolic Profile and
Antioxidant Potential of Propolis from Azerbaijan., 15(1):16-28.
Chebil, L., 2006. Acylation des flavonoïdes par les lipases de Candida antarctica et de
Pseudomonas cepacia: études cinétique, structurale et conformationnelle. Thèse de doctorat.
L’Université de Lorraine.
Cheynier, V., 2005. Polyphenols in foods are more complex than often thought1-3. Am. J.
Clin. Nutr.81 (suppl), 223S-229S.
Choi, Y.M., Noh, D.O., Cho, S.Y., Suh, H.J., Kim, K.M., Kim, J.M., 2006. Antioxidant
and antimicrobial activities of propolis from several regions of Korea. Lwt-Food Science and
Technology 39, 756-761.
Clément, H., Conte, Y.L., Barbancon, J.M., Vaissière, B., Collectif., 2011. Le traité rustica
de l’apiculture.
Codex Stan,. 1981. Revised Codex Standard for Honey Codex Stan 12-1981, Rev.1 (1987),
Rev. 2 (2001).
Collin, S., Crouzet, J., 2011. Agence universitaire de la francophonie. Polyphénols et

procédés : Transformation des polyphénols au travers des procédés appliqués à l’agro-
alimentaire. Edition Lavoisier, p 13.
Collin, S., Crouzet, J., 2011. Polyphenols et procédés. Ed.TEC & DOC, paris, 339 p.
Cousin, N., 2010. Les trésors de la ruche, Miel, gellée royal, pollen…, Paris, Editions du club
France loisirs avec l’autorisation des Editions Rustica, 143 p.
Cowan, M.M., 1999. Plant Products as Antimicrobial Agents. Clin. Microbiol Re, 12 (4):
564- 582.
Dacosta, E., 2003. Les phytonutriments bioactifs. Yves Dacosta (Ed). Paris, 317 p.
Darrigol, J.L., 1979. Le miel pour votre santé, St-Jean-de-braye(France), Edition Dangles,
140 p.
Descheemaeker, K., Provoost, C., 2011. L’impact de la nutrition sur la santé screening of
some species of Iranian plants. Iranian journal of pharmaceutical research, 77-82.
Dewanto, V., Wu, X., Adom, K.K., Liu, R.H., 2002. Thermal processing enhances
thenutritional value of tomatoes by increasing total antioxidant activity. J. Agric.Food Chem.
50, 3010-3014.
Dixon, R.A., Xie, D.Y., Sharma, S.B., 2005. Proanthocyanidins - a final frontier in flavonoid
research? New Phytologist 165: 9-28.
Donadieu, Y., 1987. Le pollen thérapeutique naturelle, 7° Edition, Paris, Maloine, 62p.
Dykes, L., Rooney, L.W., 2006. Sorghum and millet phenols and antioxidants. Journal of
cereal Sciences 44, 236-241.
Edeas, M., 2007. Les polyphénols et les polyphénols de the´1. Phytothérapie 5: 264–270.
Estevinho, L.M., Rodrigues, S., Pereira, A.P., Feas, X., 2012. Portuguese bee pollen:
palynological study nutritional and microbiological evaluation. International Journal of Food
Science and Technology 47, 429–435.
Fargeix, D., 2000. Etude des mécanismes d'oxydation des flavonoides en relation avec leur
activité antioxydante. Effets anti- et pro-oxydants dans l'inhibition de la peroxydation
lipidique par les flavonoïdes. Université Claude Bernard- Lyon 1: Lyon.
Farré, R., Frasquet, I., Sánchez, A., 2004. El propolis y la salud. Ars. Pharma 45: 21-43.
Fatrcova-Šramkova, K., Nozˇkova, J., Kacˇaniova, M., Mariassyova, M., Rovna, K.,
Stricˇik, M., 2013. Antioxidant and antimicrobial properties of monofloral bee pollen.
Journal of Environmental Science and Health 48, 133-138.
Feas, X., Vazquez-Tato, M.P., Estevinho, L., Seijas, J.A., Iglesias, A., 2012. Organic bee
pollen: botanical origin nutritional value bioactive compounds antioxidant activity and
microbiological quality. Molecules 17, 835-837.
Floss, H., G., 1997. Natural products derived from unusual variants of the shikimate pathway.
Natural Product Reports 14: 433-434.
Freitas, S.F., Shinohara, L., Sforcin, J.M., Guimaraes, S., 2006. In vitro effects of propolis
on Giardia duodenalis trophozoites. Phytomedicine 13, 170–175.
Gekker, G., Hu, S., Spivak, M., Lokensgard, J.R., Peterson, P.K., 2005. Anti-HIV-1
activity of propolis in CD4 (+) lymphocyte and microglial cell cultures. Journal of
Ethnopharmacology 102, 158–163.
Georgé, S., Brat, P., Alter, P., Amiot, J.M., 2005. Rapid determination of polyphénols and
vitamin C in plant-derived products. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53, 1370-
1373.
Gharbi, M., 2011. Les produits de la ruche : Origines-Fonctions naturelles - Composition -

Propriétés thérapeutiques. Apitherapie et perspectives d’emploi en médecine vétérinaire.
Thèse Med. Vét. Université Claude Bernard, Lyon, 247p.
Ghedira, K., 2005. Les flavonoïdes: structure, propriétés biologiques, rôle prophylactique et
emplois en thérapeutique. Phytothérapie. Numéro 4: 162-169.
Harborne, J.B., 1988. The flavonoids, Advances in research since 1980. Chapman & Hall.
London.
Harborne, J.B., Williams, C.A., 2000. Advances in flavonoid research since 1992.
Phytochemistry 55: 481-504.
Hertog, M.G.L., Feskens, E.J.M., Hollman, P.C.H., 1993. Dietary antioxidant flavonoids
and risk of coronary heart disease: the Zutphen elderly study. Lancet 342: 1007-11.
Hertog, M.G.L., Sweetnam, P.M., Fehily, A.M., 1997. Antioxidant flavonols and ischemic
heart disease in a Welsh population of men. The caerphilly study. Am J Clin Nutr 65: 1489-
94.
Hertog, M.G.L., Sweetnam, P.M., Fehily, A.M., 1997. Potentially anticarcinogenic

secondary metabolites from fruit and vegetables. Clarendon Press, Oxford, pp, 313-29.
Hokayem, M., Bisbal, C., Lambert, K., Avignon, A., 2012. Quelle place pour les
antioxydants dans la prévention du diabète de type 2 ? Médecine des maladies Métaboliques
Vol. 6 - N°4.
Hopkins, W.G., 2003. Physiologie végétale. De Boeck Supérieur, p 280.
Jarrige, R., Ruchebusch, Y., Demarquilly, C., Faree, M.H., Journet, M., 1995. Nutrition
des ruminants domestique . paris, INRA Edition.
Jean-Charles, P., 2012. Oxidative Stress, Journal of Parenteral and Enteral Nutrition 36: 147.
Jean-Prost, P., 2005. 7e édition revue et complétée par LE CONTE Y. Apiculture : Connaître
l'abeille. Conduire le rucher, 698 p.
Joël, P., Karine, B., Karine, C., Jean-Olivier, D., 2002. Mécanismes physiologiques de la
défense antioxydante. Nutrition clinique et métabolisme 16: 233-239.
Jose, M.S., Vassya, B., 2011. Propolis: Is there a potential for the development of new drugs?
Journal of Ethnopharmacology 133, 253-260.
Kameda, T., Tamada, Y., 2009. Variable-temperature 13C solid-state NMR study of the
molecular structure of honeybee wax and silk. International Journal of Biological
Macromolecules, Volume 44, Issue 1, Pages 64-69.
Kaur, R., Kumar, N.R., Harjai, K., 2013. Phytochemical analysis of different extracts of
bee pollen. 0976-285x.
Koes, R.E., Quattrocchio, F., Mol, J.N.M., 1994. The Flavonoid Biosynthetic-Pathway in
Plants - Function and Evolution. Bioessays 16: 123-132.
Kohen, R., Nyska, A., 2002. Oxidation of biological systems: oxidative stress phenomena,
antioxidants, redox reactions, and methods for their quantiﬁcation. Toxicol Pathol 30(6): 620-
50.
Koppenol, W.H., 2001. The Haber-Weiss cycle, 70 years later. Redox Rep 6: 229-34.
Kreif, S., 2003. Métabolites secondaire des plantes et comportement animal. Thèse pour
obtenir le grade de docteur du Muséum National. D’histoire naturelle. Surveillance sanitaire
et observation de l’alimentation de chimpangeés en Ouganda, 349 p.
Kumazawa, S., Hamasaka, T., Nakayama, T., 2004. Antioxidant activity of propolis of
various geographic origins. Food Chemistry 84, 329-339.
Laskar, R.A., Sk, I., Roy, N., Begum, N.A., 2010. Antioxidant activity of Indian propolis
and its chemical constituents. Food Chem, 122, 233-237.
Lefiel-Delcourt, A., 2010. Le miel malin, paris, Leduc.s éditions, 2010, 186 p.
Lemineur, T., Deby-Dupont, G., Preiser, J.C., 2006. Biomarkers of oxidative stress
incritically ill patients: what should be measured, when and how. Curr OpinClin Nutr Metab
Care 9:704-10.
Lesjak, M., Beara, I., Orc-ic, D., Anac-kov, G., Balog, K., Francis-kovic, M., Mimica-
Dukic, N., 2011. Juniperus sibirica Burgsdorf. as a novel source of antioxidant and anti-
inflammatory agents. Food Chemistry, 124, 850-856.
Lindoo, S.J., Caldwell, M.M., 1978. Ultraviolet-B radiation-induced inhibition of leaf

expansion and promotion of anthocyanin production. Plant Physiology 61: 278-282.
Macheix, J.J., Fleuriet, A., Jay-Allemand, C., 2005. Les composés phénoliques des
végétaux: un exemple de métabolites secondaires d’importance économique. Ed presses poly
technologiques et universitaire romandes, P 4-5.
Mansouri, A., Embarek, G., Kokkalou, E., Kefalas, P., 2005. Phenolic profile and
antioxidant activity of the Algerian ripe date palm fruit (Phoenix dactylifera). Food
Chemistry, 89, 411-420.
Marais, J.P.J., Deavours, B., Dixon, R.A., Ferreira, D., 2007. The Stereochemistry of
Flavonoids. In The Science of Flavonoids, E. Grotewold, Ed. Springer; pp 1-46.
Marcucci, M.C., 1995. Propolis: Chemical composition, biological properties and therapeutic
activity. Apidologie 26, 83-99.
Markham, K.R., 1982. Téchniques of Flavonoid identification. Biological Techniques

Series. Ed. Treherne J. E. et Rubery P. H. AcademicPress. 113p.
Matés, J.M., Perez-Gomez, C., Nunez, D.E., Castro, I., 1999. Antioxidant enzymes and
human diseases. Clinical Biochemistry, Vol. 32 (8), 595-603.
Mendez, M., Jones, D.G., Manetas, Y., 1999. Enhanced UV-B radiation under field
conditions increases anthocyanin and reduces the risk of photoinhibition but does not affect
growth in the carnivorous plant Pinguicula vulgaris. New Phytologist 144: 275-282.
Miguel, M.G., Nunes, S., Dandlen, S.A., Cavaco, A.M., Antunes, M.D., 2014. Phenols,
flavonoids and antioxidant activity of aqueous and methanolic extracts of propolis (Apis
mellifera L.) from Algarve, South Portugal. 34(1): 16-23.
Miliauskas, G., Venskutonis, P.R., Beek, T.A., 2004. Screening of radical scavenging
activity of some medicinal and aromatic plant extracts. Food Chem. 85, 231-237.
Minh-ha, P.D., 1999. Connaître et découvrir les abeilles, Genève, Minerva, 206p.
Mompon, B., Lemaire, B., Mengal, P., Surbled, M., 1998. Extraction des polyphénols: du
laboratoire à la production industrielle. Ed. INRA, Paris (les Colloques, N° 87).
Montenegro, G., Pizapro, R., Avila, G., Castro, C., Rios, C., Muñoz, O., Bas, F., Gomez,
M., 2003. Botanical origin and chemical properties of honeys from an Arid Mediterranean
Region of Chile. Cien. Inv. Agr 30,161-174.
Montenegro, G., Mujica, A.M., Peña, R.C., Gomez, M., Serey, I., Timmermann, B.N.,
2004. Similitude pattern and botanical origin of the Chilean propolis. Phyton 73, 145-154.
Morais, M., Moreira, L., Feas, X., Estevinho, L.M., 2011. Honeybee-collected pollen from
five portuguese natural parks: palynological origin phenolic content antioxidant properties
and antimicrobial activity. Food and Chemical Toxicology 49, 1096–1101.
Morrel, K., Goeminne, G., Storme, V., Sterek, L., Ralpha, J., Coppieters, W., Breyne, P.,
Steenachers, M., Georges, M., Messens, E., Boerjan, W., 2006. Genetical metabolomics of
Flavonoids biosynthesis in populous: a case study. Plant J 47, 224-37.
Muldoon, M.F., Kritchevsky, S.B., 1996. Flavonoids and heart disease. Brit Med J 312:
458-9.
Narayanan, K.R., Reddy, M.S., Chaluvadi, M.R. Krishna, D.R., 2001. Bioflavonoid
classification, pharmacologicale, biochemical effects and therapeutic potential. Indian journal
of pharmacology (33) P: 2-16.
Negri, G., Marcucci, M.C., Salatino, A.M., Salatino, L.F., 2000. Comb and propolis waxes
from Brazil (states of Sao Paulo and Panama). J Braz 1, 5453-457.
Nijveldt, R.J., Van Nood, E., Van Hoorn, D.E.C., Boelens, P.G., Van Norren, K., Van
Leeuwen, P.A.M., 2001. Flavonoids: a review of probable mechanisms of action and
Potential applications. American journal of clinical nutrition 74: 418-425.
Nishikimi, M., Fukuyama, R., Minoshima, S., et al., 1994. Cloning and chromosomal
mapping of the human nonfunctional gene for L-gulono-gammalactone oxidase, the enzyme
for L-ascorbic acid biosynthesis missing in man. J Biol Chem 269: 13685-8.
Ormrod, D.P., Landry, L.G., Conklin. P.L., 1995. Short-term UV-B radiation and ozone
exposure effects on aromatic secondary metabolite accumulation and shoot growth of
flavonoid-deficient Arabidopsis mutants. Plant physiology 93: 602-610.
Orsi, R.O., Sforcin, J.M., Rall, V.L.M., Funari, S.R.C., Barbosa, L., Fernandes Jr., A.,
2005. Susceptibility profile of Salmonella against the antibacterial activity of propolis
produced in two regions of Brazil. The Journal of Venomous Animals and Toxins 11, 109-
116.
Orsi, R.O., Funari, S.R.C., Barbattini, R., Giovani, C., Frilli, F., Sforcin, J.M., Bankova,
V., 2006. Radionuclides in honeybee propolis (Apis mellifera L.). Bulletin of Environmental
Contamination and Toxicology 76, 637–640.
Pandey, K.B., Rizvi, SI., 2009. Plant polyphenols as dietary antioxidants in human health
and disease. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. Vol. 2 (5), pp 270-278.
Pereira, A.D.S., Seixas, F.R.M.S., Aquino-Neto, F.R., 2002. Propolis: 100 years of research
and future perspectives. Quimica Nova 25, 321-326.
Popova, M., Bonkova, V., Chimov, A., Sileva, M., 2002. A scientific note on the high
toxicity of propolis that comes from Myroxylan balsamum trees. Apidologie 33, 87-88.
Pradhan, M.K., Nayak, L., Joshi, P.N., Mohapatra, P.K., Patro, L., Biswal, B., Biswal,
U.C., 2008. Developmental phase-dependent photosynthetic responses to ultraviolet-B
radiation: damage, defence, and adaptation of primary leaves of wheat seedlings.

Photosynthetica 46: 370-377.
Pryor, W.A., 2000. Vitamin E and heart disease: basic science to clinical intervention trials,
Free Rad. Biol. Med 28: 141-164.
Rajendran, P., Nandakumar, N., Rengarajan, T., Palaniswami, R., Nesamony-

Gnanadhas, E., Lakshminarasaiah, U., Gopas, J., Nishigaki, I., 2014. Antioxidants and
human diseases. Clinica Chimica Acta.
Rajnera yanama, K., Reddy, M., Charluvadi, M.R., Krishna D. R., 2001. Bioflavonoid:
Classification, pharmacological, biochemical effect and therapeutic potential. Indian Journal
of Pharmacology 33, pp: 2-16.
Ravazzi, G., 2003. Les autres produits de la ruche In « Abeilles et apiculture ». Ed: Vecchi,
118-121.
Raven, P., Johnson, G.B., Losos, J., Singer, S., Mamecier, A., 2007. Biologie. Bruxelles
De Boeck, 1250 p.
Rebiai, A., Lanez, T., Belfar, M.L., 2013. Total polyphenol contents, radical scavenging and
cyclic voltammetry of Algerian propolis. International Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical Science, 6 (1), 975-1491.
Ribéreau-Gayon., 1968. Les composés phénoliques des végétaux. Ed. Dunod Paris, page
254.
Ribéreau-Gayon, J., Peynaud, M., Ribéreau-Gayon, P., Sudraud, P., 1972. Sciences et
techniques du vin, analyse et contrôle des vins. Tome1. Paris : Dunod, P 671.
Richter, G., 1993. Métabolisme des végétaux. Physiologie et biochimie. Ed. Presses
polytechniques et universitaire Romandes, 322-323 p.
Rock, E., Fardet, A., 2014. Les antioxydants des agrumes: action en solitaire ou matricielle ?
Phytothérapie 12: 66-75.
Romani, A., Pinelli, P., Cantini, C., Cimato, A., Heimler, D., 2006. Characterization of
Violetto di Toscana, a typical Italian variety of artichoke (Cynara scolymus L.). J. Food
Chem. Vol 95, pp 221-225.
Rong, T., 2010. Chemistry and biochemistry of dietary polyphenols. Nutrients 2, 1231-1246.
Rossant, A., Desmouliere, A., 2011. Le miel, un composé complexe aux propriétés
surprenantes, 132 p. Thèse de doctorat : Pharmacie. Limoges.
Sainvitu, P., Nott, K., Richard, G., Blecker, C., Jérôme, C., Wathelet, J.P., Paquot, M.
Deleu, M., 2012. Structure, properties and obtention routes of flaxseed lignan
secoisolariciresinol: a review. Biotechnol. Agron. Soc. Environ 16(1), 115-124.
Sanchez-Moreno, C., 2002. Methods used to evaluate the free radical scavenging activity in
foods and biological systems. International Journal of Foods Science and Technology, 8, 121-
137.
Seeram, N.P., Henning, S.M., Zhang, Y., et al., 2006. Pomegranate juice ellagitannin
metabolites are present in human plasma and some persist in urine for up to 48 hours. J Nutr
136: 2481-5.
Serra, A., Macià, A., Rubió, L., et al., 2013. Distribution of procyanidins andtheir
metabolites in rat plasma and tissues in relation to inges-tion of procyanidin-enriched or
procyanidin rich cocoa creams. Eur J Nutr 52(3):1029-38.
Sforcin, J.M., Fernandes Jr, A., Lopes, C.A.M., Bankova, V., Funari, S.R.C., 2000.
Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. Journal of Ethnopharmacology 73,
243–249.
Sforcin, J.M., Fernandes Jr, A., Lopes, C.A.M., Funari, S.R.C., Bankova, V., 2001.
Seasonal effect of Brazilian propolis on Candida albicans and Candida tropicalis. Journal of
Venomous Animals and Toxins 7, 139–144.
Sforcin J.M., 2007. Propolis and the immune system. Journal of Ethnopharmacology,
Volume 113, Issue 1, Page 1-14.
Shinkaruk, S., Durand, M., Lamothe, V., et al., 2012. Bioavailability of glycitein relatively
to other soy isoflavones in healthy young Caucasian men. Food Chem 135(3): 1104-11.
Shiva, M., Mohammad, S., Manoochehr, H., Reza, A.H., Nasrin, S., Seyed, N.O., 2007.
Chemical composition, oral toxicity and antimicrobial activity of Iranian propolis. Science
direct. Food Chemistry 103, 1097-1103.
Solange, T.C., Rosicler, B., Severino, M.A., Maria, L.M., 2007. Study of preparations of
bee pollen extracts, antioxidantand antibacterial activity.
Spiridon, I., Bodirlau, R., Teaca, C.A., 2011. Total phenolic content and antioxidant
activity of plants used in traditional Romanian herbal medicine. Cent. Eur J Biol 6(3): 388-96.
Tanaka, Y., Sasaki, N., Ohmiya, A., 2008. Biosynthesis of plant pigments: anthocyanins,
betalains and carotenoids. Plant Journal 54: 733-749.
Thaliny, B., Jaqueline, F.C., Tamaeh, M.A., José, B., Perrella, B., Claudia Andrea Lima
Cardoso., Paredes-Gamero, E.J., Souza, K.P., dos Santos1, E.L., 2017. Antioxidant,
Cytotoxic, and Toxic Activities of Propolis from Two Native Bees in Brazil: Scaptotrigona
depilis and Melipona quadrifasciata anthidioides.
Therond, P., 2006. Oxidative stress and damages to biomolecules (lipids, proteins, DNA).
Ann Pharm Fr 64:383-9.
Tommasini, S., Raneri, D., Ficarra, R., Calabro, M.L., Stancanelli, R., Ficarra, P., 2004.
Improvement in solubility and dissolution rate of flavonoids by complexation with [beta]-
cyclodextrin. J. Pharm. Sci 35: 379-387.
Trusheva, B., Trunkova, D., Bankova, V., 2007. Different extraction methods of
biologically active components from propolis: a preliminary study. 10.1186/1752-153X-1-13.
Urquiaga, I., Leighton, F., 2000. Plant polyphenol antioxidants and oxidative stress.
Biological Research, 33 (2): 55-64.
Valko, M., Rhodes, C.J., Moncol, J., Izakovic, M., Mazur, M., 2006. Free radicals, metals
and antioxidants in oxidative stress-induced cancer. Chem. Biol Interact 160: 1-40.
Vannier, P., 1998. Au pays du miel, Flammarion, 159 p.
Vargas-Sánchez, R.D., Torrescano-Urrutia, G.R., Sánchez-Escalante, A., 2013. El

propóleos: conservador potencial para la industria alimentaria. Interciencia 38: 705-711.
Vermerris, W., Nicholson, R., 2006. Phénolic compound biochemistry. Springer, Dordrecht.
ISBN: 101-4020-5163-8.
Villanueva, M.T.O., Marquina, A.D., Serrano, R.B., Abellan, G.B., 2002. The importance
of bee-collected pollen in the diet: a study of its composition. International Journal of Food
Sciences and Nutrition 53, 217–224.
Viuda-Martos, M., Ruiz-Navajas, Y., Fernandez-Lopez, J., Perez-Alvarez, J.A., 2008.

Functional properties of honey, propolis, and royal jelly. Journal of Food Science 73, 117 124.
W-Erdman, J., Balentine, J.D., Arab, L., Beecher, G., Dwyer, J.T., Folts, J., Harnly
Hollman, J.P., L-Keen, C., Mazza, G., Messina, M., Scalbert, A., Vita, J., Williamson,
G., Burrowes, J., 2007. Flavonoids and health: proceeding of the ILSI North America
flavonoids workshop may 31- June 1, 2005, Washington. Journal of nutrition 137 (3supp 1:
718 s- 731s).
Winkel, B.S.J., 2007. The Biosynthesis of Flavonoids. In The Science of Flavonoids, E.

Grotewold, Ed. Springer, pp 71-95.
Winkel-Shirley, B., 2002. Biosynthesis of flavonoids and effects of stress. Plant Biology 5:
218-22.
Wollgast, J., Anklam, E., 2000. Review on polyphenols in Theobroma cacao: changes in
composition during the manufacture of chocolate and methodology for identification and
quantification. Food Research International 33, 423-447.
Wytrychowski, M., Chenavas, S., Daniele, G., Casabianca, H., Batteau, M., Guibert, S.,
Brion, B., 2013. Physicochemical characterisation of French royal jelly: Comparison with
chemical royal jellies and royal jellies produced through artificial bee- feeding. Journal of
Food Composition and Analysis, Vol 29, Issue 2, Pages 126-133.
Yilmaz, Y., Toledo, R.T., 2004. Major flavonoids in grape seeds and skins: antioxidant
capacity of catechin, epicatechin and gallic acid. Journal of Agricultural and Food Chemistry
52: 255-260.
Annexe
Annexe
Annexe 01 : Matériel technique et réactifs.
Equipements Matériels Réactifs
Balance analytique de précision (de Spatule. Ethanol 96%.

type OHAUS ADVENTURERTM).
Verre à montre. Méthanol.
Balance électrique.
Erlenmeyer. Chlorure d’aluminium.
Spectrophotomètre (de type UV-
Buchner. Carbonate de sodium.
Visible double faisceau).
Boites de pétri. Folin-ciocalteu.
Étuve.
Fioles. Ammoniac.
Lampe UV
Papier aluminium. Ether d’éthyle.
Broyeur
Éprouvettes graduées. n-hexane.
Entonnoirs. n-butanol.
Papier filtres wattman. Acétate d’éthyle.
Flacons. Chloroforme.
Pipettes et micropipette.
Tube à aussi.
Tube sec.
Pipette pasteur.
Plaque CCM.
Annexe
Annexe 02 :
Figure : Histogramme comparative des Teneurs en polyphénols des différents échantillons de

propolis et pollen.
Annexe 03 :
Figure : Histogramme comparative des Teneurs en flavonoïdes des différents échantillons de

propolis et pollen.
Annexe
Annexe 04 :
Figure : Activité antiradicalaire de la vitamine C.

Résumés
Résumé
L’objectif de cette étude était de quantifier les substances bioactifs contenus dans la
propolis et le pollen Algérienne, particulièrement les polyphénols et les flavonoïdes et
d’en évaluer leur activité antioxydante, à partir de différentes variétés de propolis
provenant de deux régions différentes de la wilaya d’Oum El Bouaghi (Ain El Beida et
Ain Fakroun) et de la wilaya de Constantine (Ibn Ziad -Farllah-), alors que le pollen
provenant de la wilaya d’El Taref. Les quatre échantillons ont été soumis à une
macération dans l’éthanol de 96%, les rendements de cette extraction varient entre 26%
et 38% pour la propolis, et 32% pour le pollen.
La teneur en polyphénols totaux a été déterminée en utilisant le réactif de Folin-

Ciocalteu, elle est varié entre 280 à 362 μg EAG/mg d’extrait de propolis et 253,20 μg
EAG/mg d’extrait de pollen. Les flavonoïdes ont été évalués par la méthode utilisant le
chlorure d’aluminium AlCl3, la teneur est varié entre 18 et 39,724 μg EQ/mg d’extrait de
propolis et 8,897 μg EQ/mg d’extrait de pollen. Ces résultats révèlent la richesse de
propolis et pollen étudiées en composés phénoliques dont différentes classes de ces
derniers ont été identifiés (les anthocyanidines, les acides phénoliques, les flavones, les
aurones, et les flavonols) par CCM avec plusieurs systèmes solvants.
L’activité antioxydante a été réalisée par la méthode de DPPH/ Acide Ascorbique est
varié entre 77,44% et 81,39% pour la propolis et 83.48% pour le pollen, alors que celle
du témoin positif acide ascorbique est de 96.95%. Les résultats indiquent que la propolis
de la région de Ibn Ziad -Farllah- (81,39%) et le pollen d’El Taref (83,48%) possèdes le
pouvoir antioxydant le plus puissant qui est en relation avec ses fortes teneurs en
composés phénoliques, ceci prouve la corrélation positives obtenues entre ces deux
paramètres (R² = 0.981).
Les mots clé : La propolis, le pollen, les polyphénols, les flavonoïdes, l’activité antioxydante.
‫‪Résumé‬‬
‫َهذف يٍ خالل هذِ انذراست إنً ححذَذ يحخىي كم يٍ ػذَذاث انفُُىل و انفالفىَىَذاث انًخىاجذة فٍ‬
‫يسخخهض انؼكبز و حبىة انطهغ انجشائزٌ‪ ،‬إػبفت إنً حقُُى َشبؽهًب انًؼبد نألكسذة‪ ،‬اَطالقب يٍ‬
‫يُطقخٍُ يخخهفخٍُ يٍ والَت أو انبىاقٍ (ػٍُ انبُؼبء و ػٍُ فكزوٌ)‪ ،‬و والَت قسُطُُت (ابٍ سَبد –فزنت)‪،‬‬
‫بًُُب حبىة انطهغ يٍ والَت انطبرف‪.‬‬
‫حى إخؼبع انؼُُبث األربؼت نؼًهُت َقغ فٍ االَثبَىل ‪ ،% 96‬و حزاوح يزدود هذا االسخخالص بٍُ‬
‫‪ % 26‬و ‪ % 38‬ببنُسبت نهؼكبز‪ ،‬و ‪ ،% 32‬نحبىة انطهغ‪.‬‬
‫حى ححذَذ يحخىي ػذَذاث انفُُىل انكهٍ ببسخخذاو كبشف ‪ ، Folin-Ciocalteu‬ححظهُب ػهً َخبئج‬
‫حزاوحج يب بٍُ ‪ 280‬إنً ‪ 362‬يُكزوغزاو يكبفئ حًغ انغبنُك‪/‬يغ يٍ يسخخهض انؼكبز‪ ،‬و ‪253320‬‬
‫يُكزوغزاو يكبفئ حًغ انغبنُك‪/‬يغ يٍ يسخخهض حبىة انطهغ‪ .‬فٍ حٍُ حى حقُُى انفالفىَىَذاث بىاسطت‬
‫ؽزَقت اسخخذاو كهىرَز األنًُُىو‪ ،‬و انًحخىي هى يب بٍُ ‪ 18‬و ‪ 393724‬يُكزوغزاو يكبفئ انكزسُخٍُ‪/‬يغ‬
‫يٍ يسخخهض انؼكبز و ‪ 83897‬يُكزوغزاو يكبفئ انكزسُخٍُ‪/‬يغ يٍ يسخخهض حبىة انطهغ‪ .‬هذِ انُخبئج‬
‫حكشف ػٍ ثزاء انؼكبز و حبىة انطهغ ببنًزكببث انفُُىنُت و انخٍ حى ححذَذ فئبث يخخهف يُهب‬
‫(األَخىسُبَُذٍَ‪ ،‬األحًبع انفُُىنُت‪ ،‬انفالفىٌ‪ ،‬األوروٌ و انفالفىَىل) بىاسطت كزويبحىغزافُب انطبقت‬
‫انزقُقت بىاسطت انؼذَذ يٍ أَظًت انًذَببث‪.‬‬
‫حى حقُُى انُشبؽ انًؼبد نألكسذة ببػخًبد ؽزَقت ‪ / DPPH‬حًغ األسكىربُك‪ ،‬ححظهُب ػهً َخبئج‬
‫حزاوحج بٍُ ‪ ℅77344‬و ‪ ℅81339‬ببنُسبت نهؼكبز و ‪ ℅83.48‬ببنُسبت نحبىة انطهغ‪ ،‬فٍ حٍُ حًغ‬
‫األسكىربُك ‪ .℅ 96395‬حشُز هذِ انُخبئج إنً أٌ انؼكبز انخبص بًُطقت ابٍ سَبد –فزنت‪ )℅81339( -‬و‬
‫حبىة انطهغ انخبطت بىالَت انطبرف (‪ )℅83.48‬نهًب أػهً َشبؽ يؼبد نألكسذة انًزحبؾ ببنًقذار انكبُز‬
‫يٍ انًزكببث انفُُىنُت‪ ،‬و هذا َثبج انؼالقت اإلَجببُت انًخحظم ػهُهب انخٍ حزبؾ بُُهًب )‪.(R = 0.981‬‬
‫الكلمات المفتاحية ‪ :‬انؼكبز‪ ،‬حبىة انطهغ‪ ،‬ػذَذاث انفُُىل‪ ،‬انفالفىَىَذاث‪ ،‬انُشبؽ انًؼبد نألكسذة‪.‬‬
Préparé par : Belkhiri Bousseta et Bouab Chahrazad Date de soutenance : 13/06/2018
Diplôme : Master en sciences biologique

Option : Biochimie Appliquée
Thème
Extraction, dosage des composés phénoliques et évaluation de
l’activité antioxydants de la propolis et pollen
Résumé
L’objectif de cette étude était de quantifier les substances bioactifs contenus dans la propolis
et le pollen Algérienne, particulièrement les polyphénols et les flavonoïdes et d’en évaluer leur
activité antioxydante, à partir de différentes variétés de propolis provenant de deux régions
différentes de la wilaya d’Oum El Bouaghi (Ain El Beida et Ain Fakroun) et de la wilaya de
Constantine (Ibn Ziad -Farllah-), alors que le pollen provenant de la wilaya d’El Taref. Les
quatre échantillons ont été soumis à une macération dans l’éthanol de 96%, les rendements de
cette extraction varient entre 26% et 38% pour la propolis, et 32% pour le pollen.
La teneur en polyphénols totaux a été déterminée en utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu,

elle est varié entre 280 à 362 μg EAG/mg d’extrait de propolis et 253,20 μg EAG/mg d’extrait de
pollen. Les flavonoïdes ont été évalués par la méthode utilisant le chlorure d’aluminium AlCl3, la
teneur est varié entre 18 et 39,724 μg EQ/mg d’extrait de propolis et 8,897 μg EQ/mg d’extrait
de pollen. Ces résultats révèlent la richesse de propolis et pollen étudiées en composés
phénoliques dont différentes classes de ces derniers ont été identifiés (les anthocyanidines, les
acides phénoliques, les flavones, les aurones, et les flavonols) par CCM avec plusieurs systèmes
solvants.
L’activité antioxydante a été réalisée par la méthode de DPPH/ Acide Ascorbique est varié
entre 77,44% et 81,39% pour la propolis et 83.48% pour le pollen, alors que celle du témoin
positif acide ascorbique est de 96.95%. Les résultats indiquent que la propolis de la région de Ibn
Ziad -Farllah- (81,39%) et le pollen d’El Taref (83,48%) possèdes le pouvoir antioxydant le plus
puissant qui est en relation avec ses fortes teneurs en composés phénoliques, ceci prouve la
corrélation positives obtenues entre ces deux paramètres (R² = 0.981).
Mots clés : La propolis, le pollen, les polyphénols, les flavonoïdes, l’activité antioxydante.

Mimoire Master

Transféré par

Informations du document

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Mimoire Master

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de La Recherche Scientifique

Extraction, dosage des composés phénoliques et

Année universitaire : 2017-2018

A mes parents Mohamed lakhdar et El Wiza,

Pour vos mains qui ont tant travaillées,

Pour votre cœur qui m’a tant donné

Pour votre sourire qui m’a tant réchauffé,

Pour vos yeux qui furent parfois mouillés,

Pour vous qui m’avez tant aimé.

A mes frères : Farid et Abd El-Baki.

A mes sœurs : Hamama, Fairouz, Touzer, Noura, Mlouka, Fouziya et Salima.

que j’ai vécues avec elles des beaux

moments au cours de mon cursus à l’université.

A tous qui me connaisse de près ou de loin.

Mes chers parents Mohammed et Amel pour leurs

A mon cher frère Imad

A ma chere sœur Ikram

A tous mes collègues et mes amies

A mon binôme d’étude Boussetta

Nous premiers remerciements vant a notre directeur de mémoire monsieur

Nous adressons notre sincères remerciements à M meYasmine Arab, et

Nous tenons également nos vifs remerciements à AbdElrahman Allague et

C’est un grand merci que nous adressons à Mahimoudi Taki El Din et

Nous adressons aussi nos remerciements à tous les travailleurs bibliothèque

Aux personnels du laboratoire de l'université L’Arbi Ben M’hidi pour leur

Nous tenons particulièrement à remercier les membres du jury d’avoir

Enfin nous remercions toute personne qui a participé de prés ou de loi,

Chapitre I. Les produits de la ruche

I.5. La gelée royale......................................................................................................................4

II.2. Compositions chimique.......................................................................................................5

II.5. Propriétés pharmacologiques..............................................................................................6

II.6. Indications thérapeutiques à l’officine................................................................................6

III.2. Compositions chimique......................................................................................................7

III.5. Propriétés pharmacologiques.............................................................................................8

III.6. Indications thérapeutiques à l’officine...............................................................................8

Chapitre II. Les polyphénols

II.2. Classification des polyphénols…………………………………………..10

II.2.1. Phénols simples et les acides phénoliques.....................................................................10

II.2.2. Lignanes et Lignines......................................................................................................11

II.2.4.1. Tannins hydrolysables.................................................................................................12

II.2.4.2. Tannins condensés.......................................................................................................13

II.2.5.3. Propriétés physico-chimiques......................................................................................17

II.2.5.3.1. Solubilité et l’extraction ..........................................................................................17

II.2.5.3.4. Absorption des rayons UV.......................................................................................17

II.2.5.4. Rôles des flavonoïdes..................................................................................................18

II.2.5.4.1. Pour la plante............................................................................................................18

II.3. Biosynthèse des polyphénols…………………………………………….19

II.3.1. Voie de shikimat.............................................................................................................19

II.3.2. Voie de l’acide malonique..............................................................................................20

II.4. Propriétés pharmacologiques des polyphénols………………………...20

Chapitre III. Activité antioxydants

III.2. Radicaux libres………………………………………………………….23

III.3. Oxygène, espèces réactives de l’oxygène (ERO) ……………………..23

III.4. Les antioxydants………………………………………………………..24

III.4.1. Superoxyde dismutase ou (SOD)...................... ...........................................................24

III.4.2. Catalase ou (CAT)...................... .................................................................................25

III.4.3. Glutathion peroxydase ou (GPx)...................... ............................................................25

III.4.4. Vitamine E (tocophérol)...................... .........................................................................25

III.4.5. Vitamine C (acide ascorbique)...................... ...............................................................25

III.5. Les maladies liées au stress oxydatif…………………………………..26

Chapitre I. Matériel et méthodes

I.1. Présentation de la matière première....................................................................................29

I.3. Extraction ...........................................................................................................................29