BMF ReIplication 1 2022-2023

Biologie Moléculaire Fondamentale
Année 2022 – 2023
L3 BCPO et PCB
Daniela LENER, MCU, responsable de l’UE
d.lener@ibmc-cnrs.unistra.fr
UdS – Faculté des sciences de la Vie – BMF 2022-2023 – Daniela Lener

Description de l’UE Biologie Moléculaire Fondamentale
Le cours portera sur les mécanismes moléculaires du transfert et utilisation de

l’information génétique chez les procaryotes et les eucaryotes :
Ø Mécanismes de la réplication
Ø Réparation de l’ADN.
Ø Mécanismes de la transcription
Ø Modifications post-transcriptionnelles de l’ARN
Ø Mécanismes de la traduction
Ø Approches expérimentales simples
Acquérir et apprendre à exploiter des connaissances sur :

• Les mécanismes du transfert et de l’expression de l’information génétique
• Les réactions enzymatiques mises en œuvre
• Les méthodes expérimentales impliquées
2
Modalités de contrôle des connaissances CM
Trois CC pour évaluer les connaissances théoriques acquises au travers

d’épreuves QCM et/ou rédactionnelles
Les épreuves CC1 (30 min) et CC2 (45 min) sont sans convocation
L’épreuve CC3 (1h) est avec convocation
3
Bibliographie :
ü Principle of Biochemistry : Lehninger, Nelson, Cox (6ème édition)

ü Lewin’s Gene XII : Krebs, Goldstein, Kilpatrick (12ème édition ou
précédentes)
ü Biochemistry : Voet & Voet (4ème édition)
ü Molecular Biology : Robert F. Weaver (2ème à 5ème édition)

ü Biochimie : Berg, Tymoczko, Gatto, Stryer, (8ème édition)
ü Molecular Cell Biology : Lodish et al. (7ème édition)
Les diapositive du cours sont mises à disposition sur Moodle

(https://moodle3.unistra.fr) : BMF
4
Révisions prérequises pour BMF
Avant de commencer BMF il faudrait réviser le cours sur les

nucléotides et acides nucléiques donné par M. Ryckelynck, UE
Biochimie en L2S3 :
Ø Diapositives de 4 à 42 sur les nucléotides
Ø Diapositives de 43 à 78 sur l’ADN
Tous les concepts et connaissances énoncés dans ces diapositives sont

considérés acquis pour BMF.
5
La naissance de la Biologie Moléculaire :
un aperçu historique

Le génome et les gènes
Hérédité à génome
Génome = longue séquence d’ADN qui porte toutes les « informations » héréditaires (gènes)
d’un organisme/une cellule
Informations à génome pas de rôle actif dans le développement mais les produits de
l’expression des séquences nucléotidiques du génome déterminent le développement
7
L’hérédité, le génome et les gènes : un historique
1920 Les scientifiques ne savent pas si c’est l’ADN (nucléine ou acide thymonucléique) ou les
protéines à transmettre l’information génétique.
Hypothèse plus répandue à protéines (20 aa – grand nombre de combinaisons différentes),
l’ADN est écarté car il est composé que de 4 nucléotides.
1928 Griffith à découverte révolutionnaire en travaillant sur Streptococcus pneumoniae

(pneumonie). En mélangeant une souche non virulente avec une souche virulente mais morte
(traitement à la chaleur), il observe que la souche non virulente est transformé en souche
virulente et que elle tue la souris dans laquelle est inoculé.
Ce processus est appelé transformation. Le facteur transformant n’est pas identifié par Griffith
mais juste observé.
8
L’hérédité, le génome et les gènes : un historique
Expérience de Griffith sur Streptococcus pneumoniae
Bactéries Bactéries non Bactéries virulentes (S) Bactéries R vivantes + bactéries

encapsulées*/virulentes (S) encapsulées*/non virulentes tuées à la chaleur S tuées à la chaleur injectées
vivantes injectées dans la (R) vivantes injectées dans la injectées dans la souris dans la souris
souris souris
Bactéries S Bactéries R x xx
x
La souris meurt La souris reste en bonne La souris reste en bonne La souris meurt
santé santé
Bactéries encapsulées* Quelques bactéries non Pas de bactéries isolées Bactéries

isolées de la souris morte encapsulées isolées de la de la souris sacrifiée encapsulées* isolées
souris sacrifiée de la souris morte
* Capsule de polysaccharides qui protège la bactérie du système immunitaire
9
L’hérédité, les gènes et l’ADN : un historique
1944 Avery, Macleod et McCarty à l’information génétique réside dans l’ADN.
Après l’expérience de Griffith, Avery découvre que : bactéries non virulentes «R» vivantes +
forme virulente «S» inerte (non vivante) dans un tube à essai à la forme «R» devenait la forme
mortelle «S».
Les souris n’étaient pas nécessaires à qu’est-ce qui a permis la «transformation»?

La question est biochimique : quelle est la substance responsable?
Avec Macleod et McCarty, Avery a entrepris de purifier le «facteur de transformation».
Dès 1936, Avery a noté qu’il ne semblait pas s’agir d’une protéine ou d’un glucide, mais d’un
acide nucléique.
Une analyse plus approfondie a montré qu’il s’agissait d’ADN.
10
1944 Avery, MacLeod et McCarty à l’information génétique réside dans l’ADN.

Expérience de Avery, MacLeod et McCarty 1- Elimination des lipides et
carbohydrates de l’échantillons de
S.pneumoniae virulent inactivé à la
chaleur. Les protéines, ADN et ARN
restent.
2- Traitement de l’échantillons avec

des enzymes qui dégradent soit les
protéine, soit l’ARN, soit l’ADN.
3- Addition de une aliquote de

chaque échantillon à une culture
contenant des S. pneumoniae non
virulent.
Observation de la culture : si il y a
présence de bactéries encapsulées
alors la transformation a eu lieu.
La transformation n’a pas lieu si l’ADN est absent. Matériel héréditaire à ADN.
Des doutes pourtant persistent, la pureté des préparations enzymatiques est mise en cause.
11
1952 A. Hershey et M. Chase utilisent la relative simplicité des bactériophages, qui sont
constitués juste de protéines et ADN, pour montrer de façon formelle que le matériel
héréditaire est l’ADN.
Produire des bactériophages radioactifs à protéines marquées avec du soufre 35 (35S) et acides
nucléiques marqués avec phosphore 32 (32P)
1- Mélanger les phages radioactives avec les bactéries. Les phages infectent les cellules
bactériennes à capside protéique extérieure et l’acide nucléique intérieur.
2- Agiter la culture dans un mixeur pour séparer les phages, à l’extérieur, des bactéries et leur
contenu.
3- Centrifuger la culture pour sédimenter les bactéries et leur contenu.
4- Mesurer la radioactivité dans le culot et dans le surnageant.
12
1952 A. Hershey et M. Chase utilisent la relative simplicité des bactériophages, qui sont
constitués juste de protéines et ADN, pour montrer de façon formelle que le matériel
héréditaire est l’ADN.
Conclusion : les protéines du bactériophage T2 restent à l’extérieur de la bactérie, alors que l’ADN rentre
et permet l’infectionà le matériel héréditaire est l’ADN.
13
1950 La composition de l’ADN est connue depuis long temps. Plusieurs résultats suggèrent
que les molécules d’ADN cellulaire soient constituées de deux ou plusieurs polynucléotides
assemblés de quelque sorte.
1953 Watson et Crick proposent une structure pour l’ADN.

Trois types d’informations différentes :
1. la densité de l’ADN à deux chaines polynucléotidiques
2. diffractions au rayon X de molécules d’ADN (R. Franklin et M. Wilkins) à hélice régulière
3. rapport entre les bases : A = T et G = C (E. Chargaff)
Modèle à ADN a une structure hélicoïdale en forme de double hélice antiparallèle au sein de
laquelle les bases s’apparient par paires obligées : A avec T et G avec C.
Caractéristique qui fait proposer que un brin d’ADN sert de modèle pour recréer l’autre brin
pendant la réplication : Hp. de la réplication semi-conservative.
14
1958 Kornberg et col. découvrent la première ADN polymérase de E.coli à ADN pol I
Enzyme capable d’ajouter des deoxyribonucléotides à l’extrémité 3’OH d’un filament d’ADN
préexistant hybridé à un autre filament, qui est utilisé comme matrice.
Deoxyribonucléotide
triphosphate entrant
Filament d’ADN
amorce
Filament d’ADN
matrice
Leur résultats sont en accord avec le modèle semi-conservatif de la réplication de l’ADN.
Kornberg et Ochoa auront le prix Nobel de physiologie ou médecine en 1959.
15
1957 Crick, dans une allocution « Sur la Synthèse des Protéines », propose des idées qui ont
définitivement modifié la logique de la biologie.
Il soutient que la fonction principale de l’ADN est la fabrication de protéines. Les gènes
semblaient contrôler l’assemblage ordonné des acides aminés en protéines.
16
Deux principes généraux.
1. L’hypothèse de séquence : l’ordre des bases de l’ADN à code pour la séquence d’acides
aminés d’une protéine. 4 bases d’ADN et 20 acides aminés à trois bases coderaient pour un
seul acide aminé (43 = 64) .
17
Deux principes généraux.
1. L’hypothèse de séquence : l’ordre des bases de l’ADN à code pour la séquence d’acides
aminés d’une protéine. 4 bases d’ADN et 20 acides aminés à trois bases coderaient pour un
seul acide aminé (43 = 64) .
2. Le « dogme central » : l’information est transmise de l’ADN à l’ARN et de l’ARN aux

protéines, mais l’information ne peut pas être transmise d’une protéine à l’ADN.
18
1957 Le « dogme central » ou la Théorie Fondamentale de la Biologie Moléculaire :

l’information est transmise de l’ADN à l’ARN et de l’ARN aux protéines, mais l'information ne
peut pas être transmise d’une protéine à l'ADN.
Current Biology 25, R523–R548, June 29, 2015
19
1958 Meselson et Stahl montrent de façon formelle que la réplication de l’ADN est semi-
conservative.
Utilisation d’azote 15 (15N), isotope lourd de l’azote (14N), comme source d’azote dans le milieux
de croissance de E.Coli.
Incorporation dans les bases azotées à ADN lourd, plus dense, lors de la réplication de l’ADN
avant la division cellulaire.
20
1958 Meselson et Stahl montrent de façon formelle que la réplication de l’ADN est semi-
conservative. Expérience de Meselson et Stahl
Extraction de l’ADN et centrifugation isopycnique sur gradient de chlorure de césium (CsCl)
Contrôles
Contrôles
Culture dede E.coli
E.coli dans
dans
Culture ADNparental
ADN parentallourd
lourd PP
milieu «« lourd
milieu
15
lourd »» 15NN Contrôles
Culture de E.coli dans ADN parental
léger lourd P
Culture de E.coli
E.coli15dans
dans ADN léger
Culture
milieu «delourd » 14 N
milieu « leger »
milieu « leger » N14 N
ADNmélangé
ADN
ADN mélangé
léger
Culture de E.coli dans
milieu « leger » 14N Contrôles
Expériences
Expériences
ADN mélangé
Culture de E.coli dans ADN après
parental P
ADN unelourd
réplication F1
milieu « lourd » 15N ADN après une
Expériences
Densité
réplication
intermédiaire F1
Densité intermédiaire
Culture de
de E.coli
E.coli alourdi
alourdi au 15N
au 15
Culture N ADN après
léger deux
dans Culture
milieu «de E.coli
leger » dans
14
14NN ADN
ADN après deux réplications
une réplication
réplications F2
F1 F2
dans milieu « leger » 14 Densité intermédiaire etlégère
légère
milieu « leger » N Densité intermédiaire et
Culture de E.coli alourdi au 15N ADN après trois
ADN mélangé
dans milieu « leger » 14N ADN après
ADN deux
après réplications
trois
réplications F2 F3
F3
réplications et légère
Expériences
ADN après trois
réplications F3
ADN après une réplication F1
Conclusion
Culture : les résultats
de E.coli alourdi au 15Nobservés s’expliquent seulement si chaque molécule d’ADN « fille » est
dansconstituée
milieu « leger 14N ADN après deux réplications F2
» filament parental et un filament néo-synthétisé à réplication est semi-conservative.
d’un Densité intermédiaire et légère 21
ADN
UdS – Faculté des sciences de la Vie – BMF après trois– Daniela Lener
2022-2023
réplications F3
La réplication bactérienne

La réplication
ü La réplication est l’événement de duplication du génome qui a lieu

avant chaque division d’une cellule
ü La copie du génome doit être rapide et sans erreur
Génome 1copie
Réplication
2 copies à 1copie par cellule fille
23
Comment est répliqué l’ADN ?
La confirmation que la réplication est semi-conservatrice a fait surgir

une foule de questions :
24
Comment est répliqué l’ADN ?
La confirmation que la réplication est semi-conservatrice a fait surgir

une foule de questions :
1. Est-ce que les brins d’ADN parental sont-ils complètement

déroulés avant que chacun ne soit répliqué ?
2. La réplication commence-t-elle à des endroits aléatoires ou à un

point unique ?
3. Après l’initiation à n’importe quel point de l’ADN, la réplication

se déroule-t-elle dans une direction ou les deux ?
25
La réplication chez E.coli
Expérience de John Cairns

Article de 1963 « The bacterial chromosome and its manner of replication as seen by
autoradiography »
L’ADN d’E. Coli a été

marqué avec de la thymidine
tritiée (3H) ;
Molécule d’ADN intacte

déposée sur une lame de
microscope
Recouverte d’une émulsion

photographique et incubé 2
mois avant d’être développé.
26
La réplication des 2 brin d’ADN est simultanée
Expérience de John Cairns

Article de 1963 « The bacterial chromosome and its manner of replication as seen by
autoradiography »
Cairns montre que l’ADN de E.coli est une seule molécule qui se réplique à partir d’un seul
locus mobile (la fourche de réplication) auquel les deux de nouveaux brins d’ADN sont en
cours de synthèse.
27
La réplication d’un ADN circulaire
Apparition d’un œil
Réplication d’un ADN

circulaire génère une
structure en thêta (q)
Images de microscopie électronique de l’ADN

en cours de réplication 28
La réplication initie toujours au même endroit : l’origine
ü En 1966 mise au point de la cartographie par dénaturation à

caractérisation de l’ADN à dénaturation à la chaleur différentielle selon la
composition en nucléotides
29
La dénaturation de l’ADN
Séquence riche en AT
Séquence riche en GC
30

ü Ross Inman a montré que l’ADN pouvait être dénaturé sélectivement au

niveau de séquences riche en AT à motif reproductible de « bulles »
simple brin
31
L’ADN peut être dénaturé sélectivement

simple brin
32


simple brin
ü L’ADN isolé contenant des boucles de réplication peut être partiellement

dénaturé.
33
La réplication d’un ADN circulaire
Apparition d’un œil
Réplication d’un ADN

circulaire génère une
structure en thêta (q)
Images de microscopie électronique de l’ADN

en cours de réplication 34


simple brin
ü L’ADN isolé contenant des boucles de réplication peut être partiellement

dénaturé.
ü La technique a révélé que dans ce système, les boucles de réplication

démarrent toujours à un point unique riche en AT, appelé origine et la
réplication est généralement bidirectionnelle.
35
Comment est la synthèse de l’ADN ?
En 1966 on savait :
ü nouveau brin d’ADN toujours synthétisé dans la direction 5’ → 3’ en lisant
la matrice à partir du 3’
ü synthèse des nouveaux brin est simultanée sur les 2 brins parentaux
Comment concilier la polarité 5’→ 3’ de la synthèse de l’ADN avec la

simultanéité de la synthèse sur des brins antiparallèles?
5’
3’
36
En 1966 : comment concilier la polarité 5’ → 3’ de la synthèse de l’ADN avec

la simultanéité de la synthèse sur des brins antiparallèles?
5’
?
3’
5’
3’ Synthèse continue
37

5’
?
3’
5’
5’
3’
5’ ?
3’
5’
3’
Synthèse semi-discontinue
38

5’
?
3’
5’
5’ 5’
3’
5’
? ?
3’
3’
5’
5’
3’ 3’
5’ 5’
3’
3’
Synthèse semi-discontinue Synthèse discontinue
39
La synthèse de l’ADN est semi-discontinue
ü En 1968 R. & T. Okazaki à Incubation courte de bactéries en présence de

thymidine 3H à Arrêt de la synthèse et extraction de l’ADN à Analyse par
ultracentrifugation isocinétique de l’ADN dénaturé
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
40

Souche sauvage 5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
41

Accumulation de fragments
Souche sauvage Mutant dépourvu de ligase
d’ADN de 1-2 kb à
fragments d’Okazaki
Présence de courts
fragments d’ARN (10-12
bases)
42
ü En 1968 R. & T. Okazaki à synthèse de l’ADN est continue pour la copie

d’un des brins et discontinue pour la copie de l’autre brin
Le brin à synthèse continue est appelé :

brin précoce = brin directeur = leading strand
Le brin à synthèse discontinue est appelé :

brin tardif = brin retardé = lagging strand
43
La réaction de polymérisation
Deoxyribonucléotide
Les ADN polymérases triphosphate entrant
synthétisent de l’ADN
Filament d’ADN
amorce
ü Nécessitent une amorce Filament d’ADN

présentant une extrémité matrice
3’OH
ü Synthèse de 5’→ 3’
3’
44
La réaction de polymérisation
Les ADN polymérases

synthétisent de l’ADN
ü Nécessitent une amorce

présentant une extrémité
3’OH
ü Synthèse de 5’→ 3’
ü 2 ions Mg 2+ importants
pour le mécanisme
catalytique
45
L’ADN polymérase I
1953 ADN polymérase I à 3 activités catalytiques dans 3 grand domaines

1) activité polymérase
2) activité 3’→ 5’ exonucléase
46
L’ADN polymérase I : activité 3’→ 5’ exonucléase
47
L’ADN polymérase I : activité 5’→ 3’ exonucléase
Déplacement de la cassure
48
1953 ADN polymérase I à 3 activités catalytiques dans 3 grand domaines

1) activité polymérase
1970 Klenow digère l’ADN polymérase I par la subtilisine à un grand fragment

avec les activités polymérase et 3’→ 5’ exonucléase (fragment de Klenow) et un
petit fragment avec activité 5’→ 3’ exonucléase
1985 Première structure à fragment de Klenow de l’ADN polymérase I
49
L’ADN polymérase I à structure du fragment de Klenow
ü La structure de la polymérase divisée en 3 sous-domaines, qui sont, par
analogie avec une main droite, la paume, les doigts et le pouce.
Domaine
polymérase
5’ à 3’
Domaine
exonucléase
3’ à 5’
50
ü L’ADN se lie dans une grande fente composée de trois domaines.
Domaine
polymérase
5’ à 3’
Domaine
exonucléase
3’ à 5’
51
üLa paume à aa importants pour le site

catalytique actif
Domaine
polymérase
5’ à 3’
Domaine
exonucléase
3’ à 5’
52

catalytique actif
Domaine
polymérase üLes «doigts» à positionnement correct
5’ à 3’ de la matrice et dNTP dans le site actif
Domaine
exonucléase
3’ à 5’
53

catalytique actif
Domaine
üLe «pouce» lie l’ADN à la sortie de

l’enzyme à processivité
Domaine
exonucléase
3’ à 5’
54

catalytique actif
Domaine
üLe «pouce» lie l’ADN à la sortie de

l’enzyme à processivité
Domaine üL’activité exonucléase à domaine

exonucléase
3’ à 5’ indépendant avec son propre site
catalytique
55
Site actif de l’ADN polymérase comprend deux parties :
1) le site d’insertion du nucléotide entrant à liaison

phosphodiester
56
Site actif de l’ADN polymérase comprend deux parties :
1) le site d’insertion du nucléotide entrant à liaison

phosphodiester
2) site de post-insertion à polymérase glisse vers l’avant

sur l’ADN à nouvelle paire dans cette position
57
Fidélité de copie des ADN polymérases
ü L’intégrité du génome doit être maintenue lors de la réplication.

E. coli : le taux erreur de la biosynthèse de l’ADN est de 10-9 10-10
génome 4,6 x 106 pb à 1 erreur / 1000 –10000 réplications
ü En cas d’erreur, le nucléotide erroné est éliminé,
58

Comment ce contrôle est-il assuré?
• Sélection géométrique au sein du site actif, contrôle avant la réaction

d’addition, avant la formation de la liaison phosphodiester
59

Comment ce contrôle est-il assuré?
• Sélection géométrique au sein du site actif, contrôle avant la réaction

d’addition, avant la formation de la liaison phosphodiester
• Elimination du nucléotide après la réaction d’addition, ce contrôle est appelé

lecture de l’épreuve (proofreading)
60
ü Sélection géométrique au sein du site actif, contrôle avant la

réaction d’addition
L’ajustement de la paire de
bases est testé avant la
polymérisation
Seules les paires de bases

W-C donnent un stacking
correct à formation liaison
phosphodiester
Les données cristallographiques sont en faveur de l’ajustement induit

61
Fidélité des ADN polymérases : sélection géométrique
L’ajustement de la paire de bases est

testé avant la formation de la liaison
phosphodiester
La base incorrecte peux être rejetée

avant la liaison
Erreurs de polymérisation 1/104 – 105
62
ü Sélection géométrique au sein du site actif, contrôle avant la

réaction d’addition
X
L’ajustement de la paire de
bases est testé avant la A
polymérisation
A
Si la base n’est pas correcte

il n’y aura pas de rotation
de l’hélice O à pas de
liaison phosphodiester
X
Les données cristallographiques sont en faveur de l’ajustement induit

63
ü Proofreading, élimination du nucléotide après la réaction d’addition

• L’addition d’un nucléotide erroné empêche la translocation de l’ADN
polymérase
Site actif de
Mode polymérisation
la polymérase
Brins orange et rouge
~ 30 Å
Mode édition
Site actif de
Brins bleu et vert
l’exonucléase
3’à5’
Fragment de Klenow de l’ADN polymérase I à enzyme dépourvu de son domaine N-ter (5’-3’ exonucléase) 64

polymérase
Site actif de
la polymérase
~ 30 Å
Mode édition
Site actif de
Brins bleu et vert
l’exonucléase
3’à5’

polymérase
• Elimination du nucléotide par l’activité 3’→ 5’ exonucléase
• Augmentation de la fidélité de 102 – 103 à taux d’erreur de 1/106 – 108
Site actif de
la polymérase
~ 30 Å
Mode édition
Site actif de
Brins bleu et vert
l’exonucléase
3’à5’
Modèle pour la polymérisation et la correction d’épreuve
Mode polymérisation Fingers
Mode édition
Le passage en mode édition nécessite

une rupture locale des interactions
primer-template et une translocation
de l’extrémité 3’
Fragment de Klenow de l’ADN polymérase I

67
Les ADN polymérases bactériennes
ADN Pol I II III IV V

N° de
1 1 22 (9 ≠) 1 3 (2 ≠)
sous-unités
Masse
103 88 1065 39 110
(kDa)
N°/cellule 400 ? 10 – 20 ? ?
Exo 3’ à 5’ + + + – –
Exo 5’ à 3’ + – – – –
Vitesse synthèse
16 – 20 40 250 – 1000 2–3 1
(nt/s)
Processivité (nt) 3 – 200 1500 >500000 1 6–8
Réplication/ Réparation Réparation
Fonction majeure Réparation Réplication
Réparation (a) (b)
Année de
1955 début 1970 début 1970 1999 1999
découverte
ü ADN Pol I et III : réplication ADN

ü ADN Pol II, IV et V : réparation ADN et réplication ADN endommagé
(a) : mutation spontanée (non ciblée, réponse SOS)

(b) : réparation (réponse SOS, synthèse à travers la lésion, error prone)
68

BMF ReIplication 1 2022-2023

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Biologie Moléculaire Fondamentale

Année 2022 – 2023

Daniela LENER, MCU, responsable de l’UE

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Le cours portera sur les mécanismes moléculaires du transfert et utilisation de

Acquérir et apprendre à exploiter des connaissances sur :

Trois CC pour évaluer les connaissances théoriques acquises au travers

L’épreuve CC3 (1h) est avec convocation

ü Principle of Biochemistry : Lehninger, Nelson, Cox (6ème édition)

ü Molecular Biology : Robert F. Weaver (2ème à 5ème édition)

Les diapositive du cours sont mises à disposition sur Moodle

Avant de commencer BMF il faudrait réviser le cours sur les

Ø Diapositives de 4 à 42 sur les nucléotides

Ø Diapositives de 43 à 78 sur l’ADN

Tous les concepts et connaissances énoncés dans ces diapositives sont

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1928 Griffith à découverte révolutionnaire en travaillant sur Streptococcus pneumoniae

Expérience de Griffith sur Streptococcus pneumoniae

Bactéries Bactéries non Bactéries virulentes (S) Bactéries R vivantes + bactéries

Bactéries encapsulées* Quelques bactéries non Pas de bactéries isolées Bactéries

* Capsule de polysaccharides qui protège la bactérie du système immunitaire

1944 Avery, Macleod et McCarty à l’information génétique réside dans l’ADN.

Les souris n’étaient pas nécessaires à qu’est-ce qui a permis la «transformation»?

Avec Macleod et McCarty, Avery a entrepris de purifier le «facteur de transformation».

Une analyse plus approfondie a montré qu’il s’agissait d’ADN.

1944 Avery, MacLeod et McCarty à l’information génétique réside dans l’ADN.

2- Traitement de l’échantillons avec

3- Addition de une aliquote de

3- Centrifuger la culture pour sédimenter les bactéries et leur contenu.

4- Mesurer la radioactivité dans le culot et dans le surnageant.

1953 Watson et Crick proposent une structure pour l’ADN.

Leur résultats sont en accord avec le modèle semi-conservatif de la réplication de l’ADN.

Kornberg et Ochoa auront le prix Nobel de physiologie ou médecine en 1959.

Deux principes généraux.

Deux principes généraux.

2. Le « dogme central » : l’information est transmise de l’ADN à l’ARN et de l’ARN aux

1957 Le « dogme central » ou la Théorie Fondamentale de la Biologie Moléculaire :

Current Biology 25, R523–R548, June 29, 2015

UdS – Faculté des sciences de la Vie – BMF 2022-2023 – Daniela Lener

ü La réplication est l’événement de duplication du génome qui a lieu

ü La copie du génome doit être rapide et sans erreur

La confirmation que la réplication est semi-conservatrice a fait surgir

La confirmation que la réplication est semi-conservatrice a fait surgir

1. Est-ce que les brins d’ADN parental sont-ils complètement

2. La réplication commence-t-elle à des endroits aléatoires ou à un

3. Après l’initiation à n’importe quel point de l’ADN, la réplication

Expérience de John Cairns

L’ADN d’E. Coli a été

Molécule d’ADN intacte

Recouverte d’une émulsion

Expérience de John Cairns

Apparition d’un œil

Réplication d’un ADN

Images de microscopie électronique de l’ADN

ü En 1966 mise au point de la cartographie par dénaturation à

ü En 1966 mise au point de la cartographie par dénaturation à

ü Ross Inman a montré que l’ADN pouvait être dénaturé sélectivement au

ü Ross Inman a montré que l’ADN pouvait être dénaturé sélectivement au

ü En 1966 mise au point de la cartographie par dénaturation à

ü Ross Inman a montré que l’ADN pouvait être dénaturé sélectivement au

ü L’ADN isolé contenant des boucles de réplication peut être partiellement

Apparition d’un œil

Réplication d’un ADN