Chapitre 2 : Transport membranaire |.MEMBRANE PLASMIQUE ET LES ESPACES LIQUIDIENS La membrane plasmique a deux fonctions, en apparence contradictoires. La premigre fonction et de former une barriére de séparation entre deux milieux aqueux dont la composition chimique est fort différente (Tableau 1). La deuxiéme fonction est de permettre la communication entre les cellules et leur milieu environnant, communication sans laquelle la vie des cellules, et partant celle de lorganisme, serait impossible. La bicouche lipidique de la membrane remplit essentiellement la fonction de séparation pour les substances hydrophiles. Elle est en effet une barriére quasi infranchissable pour l'eau, les ions inorganiques et pour des substances organiques telles que le glucose (Figure. 1). En revanche, la bicouche est trés perméable a I'0,, au CO,, et bien évidemment a des molécules organiques liposolubles. Tableau 1. Composition des liquides corporels Espéce Liquide intra- chimique cellulaire (mM) cellulaire (mM) 145 15 4 150 1 1S 12 10 10 40 Acides aminés 8 Glucose 1 ATP 4 Protéines 4 Adapté de “Human Physiology” par Vander et al. (1994)Figure. 1 Passage de différentes molécules a travers une bicouche lipidique (sans transport facilité) Certaines protéines de la membrane plasmique permettent la fonction de communication. Plus précisément, ces protéines représentent des voies de transport transmembranaire, en général d'une grande spécificilé. C'est le cas des nombreux canaux ioniques, des canaux d'eau (aquaporines), des divers transporteurs du glucose, etc. A noter cependant que les protéines membranaires ne sont pas toutes des voies de transport; certaines sont impliquées dans une série d'autres fonctions telles que récepteurs d'hormones, enzymes membranaires, et marqueurs immunologiques I Volume et composition des liquides corporels Ueau est quantitativement le principal constituant de lorganisme. Chez l'adulte, elle représente environ 60% du poids corporel; autrement dit un homme de 70 kg porte en lui 42 L d'eau. Ceux-ci vont se répartir de la fagon suivante (Figure. 2): 2/3 (28 L) se trouvent dans l'espace intracellulaire; 1/3 (14 L) dans l'espace extracellulaire. Dans ce dernier, une subdivision est encore a signaler : environ 3 L (soit 1/5 ou 20% du liquide extracellulaire) sont confinés dans le compartiment intravasculaire et constituent le plasma sanguin; le reste, ca. 11 L (soit 4/5 ou 80 % du liquide extracellulaire) constitue le liquide interstitiel dans lequel baignent les cellulesArtériole Eau totale (a2u) Eau intracellulaire (ze) Eau interstitielle ab 4 Eau extracellulaire (14 L) Capillaires. Veinute Figure. 2 Distribution de l'eau 4) la composition est différente entre le liquide intracellulaire et le liquide extracellulaire 2) la composition est assez semblable entre le plasma et le liquide interstitiel. L’asymétrie de composition entre les liquides intra- et extracellulaire est absolument Vitale Les différences les plus marquées concernent a) lion Na’, qui est le cation principal du liquide extracellulaire, tandis que sa concentration intracellulaire est faible; b) ion K" qui, a fopposé du Na’, est abondant dans le liquide intracellulaire et peu concentré a 'extérieur; c) anion CI, dont la distribution ressemble a celle du Na’; d) les phosphates et les protéines qui sont fortement concentrés dans le milieu intracellulaire.En ce qui concere le liquide interstitiel, la concentration des protéines y est environ 4-5 fois plus faible que dans le plasma Ill, Aspects dynamiques du transport membranaire lll.1, Transport membranaire La cellule est un systéme thermodynamique ouvert qui opére dans des conditions hors d’équilibre, c'est-8-dire qu’elle échange continuellement avec le milieu extérieur de la matigre et du combustible. Mais la composition interne de la cellule ne peut varier que dans d’étroites limites sous peine de se mettre en danger; aussi, pour maintenir l'équilibre intracellulaire, la membrane cellulaire joue le réle de barriére hautement sélective en imposant a chacune des substances qui la traversent un bilan positif ou négatif. Ces échanges permettent a la cellule de maintenir des concentrations de solutés dans le cytoplasme différentes de celles du milieu extracellulaire 1/Diffusion simple Définition: Le mouvement des molécules de / des régions oi! la substance est plus concentrée vers les régions ol! sa concentration est moins élevée. Compartiment unique ® distribution uniforme (agitation thermique de la molécule i) Figure .3 : Par diffusion, des solutés distribués de maniére inhomogéne (a gauche) se redistribuent de maniére homogéne (a droite) Dans un compartiment subdivisé par une partition qui laisse passer la substance i, la diffusion conduit dans un intervalle de temps déterminé a une égalisation des concentrations de i de part et d’autre de la partition (Figure. 4).Compartiment 1 Compartment 2 Haute concentration de Basse concentration de solutés sohutés Flux unidirectonnel de 1.6.2 Flux uridirectionnel de 2 a 1 La Les molécules d’un liquide ou d'un gaz se déplacent continuellement, sans direction préférentielle et a trés grande vitesse. Par exemple, a la température de notre corps, une molécule d'eau se déplace @ 2500 km/h et une molécule de glucose, qui est dix fois plus lourde, a 850 km/h. Malgré cela, ces molécules parcourent d'infimes distances dans une direction donnée, a cause des collisions (plusieurs millions par seconde) avec d'autres molécules et aux changements aléatoires de direction apres chaque collision moléculaire (random walk). C’est la raison pour laquelle fa diffusion est un processus extrémement lent lorsqu’il s’agit de franchir des distances au-dela de quelques um. En effet, comme il a été démontré par Einstein, le temps de diffusion pour aller d’un point A a un point B est proportionnel au carré de la distance qui sépare ces deux points sur une trajectoire rectiligne. Par exemple, une molécule qui prendrait 4 microsecondes pour parcourir 0,1 um, mettrait 4 secondes pour 0,1mm, environ 46 jours pour 10 cm et environ 12,5 ans pour un métre. D’autre part ce temps de diffusion est inversement proportionnel a la température absolue, ce qui signifie que la diffusion se fait l¢gérement plus rapidement a 37°C qu’a 27°C.temps A temps B temps C bi | q ee Ga to mmol. concentration du glucose (mmolf) temps —+ Figure. 5 Equilibration exponentielle des concentrations Quelle est l’expression analytique qui relie le flux diffusionnel net au gradient de concentration transmembranaire 7 Soit une membrane attifcielle de surface A et d’épaisseur Ax ayant des pores aqueux assez larges (Figure.6). La membrane sépare deux compartiments aqueux 1 et 2, contenant des solutions d’une substance j, non chargée, respectivement aux concentrations C, et C,, avec C, > C,. Ax Ax Figure.6. Membrane artificielle> Membrane artificielle: A; Surface de la membrane Ax: Lépaisseur de la membrane Di: Coefficient de diffusion (Ji)A : est proportionnel: Di_ et C1-C2= AC _ inversement proportionnel: Ax (JI)A = dnildt = - Di A (C1 - C2)/ Ax ou dhildt indique le nombre de molécules qui traversent la membrane par unité de temps. Si Ji est le flux net par unité de surface, on obtient l'expression plus simple Ji/=Di (C1 - C2) Ax Ji= - Di ACI/ Ax La 1ére loi de Fick. (On remarque la présence du signe “-” dans la formule. Il indique que, Physiquement, le flux de diffusion se fait toujours dans le sens contraire du gradient. Par ailleurs, la vitesse de diffusion de i augmente avec la température. Ceci devient évident si l'on tient compte de Ia relation D, = u, RT dérivée par Einstein, oul u, est la mobilité de i, Pour une molécule sphérique, D, est inversement proportionnel au rayon r,de la molécule i et a la viscosité n du milieu de diffusion. Tout ceci est incorporé dans expression générale (RTIN) ( nr, ou 6rmnr, est la force de frottement visqueux, ou force de Stokes, et N est le nombre d’Avogadro.> Membrane lipidique pure Soit maintenant une membrane lipidique pure, constituée de phospholipides identiques a ceux de la membrane plasmique (Figure.7). Figure.7 : Membrane lipidique pure Le flux net J, dépend maintenant du coefficient Di" dans la membrane et des concentrations C,” et C,” aux deux surfaces de la membrane, lesquelles sont différentes de C, et C,. On peut calculer C,” et C," si fon fait appel au coefficient K,, ou coefficient de partition de 7. Voyons de quoi il s’agit. Pour que la substance / traverse cette membrane, il faut qu'elle puisse se dissoudre dans les lipides de celle-ci, un phénoméne qui dépend de la liposolubilité de /. Cette derniére propriété peut étre caractérisée a l'aide du coefficient K,, lequel n'est autre que la constante d’équilibre des concentrations de i dans un systéme huile/eau Avec une trés bonne approximation, la méme valeur de K, est aussi valable pour un systéme lipides membranaires/eau. Autrement dit, si C’“ est la concentration d'une substance i dans un milieu aqueux, sa concentration dans la membrane sera C”, avec K=C"/C™*Le flux net de J, travers la membrane lipidique est donc donné par l’équation J,= du, / dt =(Di"/ Ax) (C"- C3") Du fait que ("= KC; et C= KC). alors Cy" - Co" = K(Ci-C2) et l'on obtient J, = (DPK, / Ax)AC, L’expression Di" Ki/ Ax définit un paramétre fort important dans le transport membranaire: il s'agit de Pi, , le coefficient de perméabilité, lequel dépend des propriétés de la substance / et de la membrane. Lorsqu’on examine la perméabilité d'une méme membrane a une série de molécules, on observe une corrélation étroite entre P, et K, (Figure. 8). Par ailleurs, si lon applique a D;” l'expression générale dérivée pour Dj, on constate aisément que, pour une membrane biologique, P, augmente lorsque T ou K, augmentent et diminue lorsque, n, r, et Ax augmentent. Finalement, si fon introduit P, dans 'équation précédemment dérivée pour J,, on artive a expression trés simple Ax IANA WU GAOL AN : AMAIA Wu >Electrodifusion et potentiel membranaire |. Introduction Les membranes lipidiques artiicielles sont presque étanches aux ions inorganiques tels que le Na’ et le K’. Cependant, ces mémes ions peuvent traverser assez facilement les membranes biologiques, ce qui suggére lexistence de voies membranaires autres que les lipides pour le transport ionique. Ces voies sont multiples et de plusieurs types: canaux, pompes, symports et antiports (Figure. 1). @ 08> S ‘Closed y ‘Open ATP ADP +P, evteso ATP-powered pump lon channel Transporter (100-103 lons/s) (107 — 10% ions/=) (102 — 104 motecutes/s) (or Uniperter Symporter Antiportor Figure. 1: Pompes, canaux ioniques et transporteurs Il.Les canaux ioniques On trouve canaux ioniques dans toutes les cellules mais les mieux étudiés sont ceux des cellules excitables, soit nerveuses soit musculaires. Les canaux ioniques sont des structures protéiniques qui traversent toute I'épaisseur de la membrane plasmique. Certains ont une sélectivité ionique trés grande. On a identifié 2 ce jour des canaux spécifiques pour le transport du Na’, du K", du Ca’ et du Ci, Le transport par des canaux ioniques est un transport passif par diffusion , déterminé par la différence de potentiel électrochimique transmembranaire. On y distingue deux termes 1) la différence de concentration transmembranaire AC, d'un ion i;2) la différence de potentie! électrique AW. C'est pourquoi on parle d'électrodiffusion La diffusion d'une espace ionique est par conséquent un processus de transport un peu plus complexe que celui d'une espéce chimique non chargée. La diffusion d'un électrolyte a travers une membrane peut donner lieu a un phénoméne nouveau : Vapparition d'une différence de potentiel électrique transmembranaire V4. appelée potentiel de diffusion 1I.1,Définitions de transport de solutés chargés Plusieurs facteurs entrainent une distribution différente des ions ou des molécules de part et d'autre d'une membrane = «la présence diions de part et d'autre « laperméabilité sélective de la membrane l'activité des canaux ioniques et des pompes ioniques Les conséquences sont +> La création d'un gradient de concentration des ions ou des molécules. “ Une différence de potentiel électrique entre : la face de la membrane du Coté du milieu intracellulaire (négatif) et la face de la membrane du cote du milieu extracellulaire (positif) + cette difference constitue le potentiel de membrane qui varie de -50 mV a -200 mV selon le type de cellule (exemple : - 65 a -70 mV pour les neurones a l'état basal) Le potentiel de membrane influe sur le mouvement des molécules chargées : les molécules positives se dirigent vers le milieu intracellulaire (négatif) et inversement pour les molécules négatives. ine de I’activité électrique de l'axone + A\létat de repos l'axone est chargé positivement a l'extérieur et négativement a l'intérieur. Cette répartition des charges entre extérieur et intérieur est a la base de activité électrique de ’'axone. Elle donne naissance @ une ddp entre extérieur et I'intérieur appelée : Potentiel de membraneChaque cellule vivante d'un organisme développe et maintient une difference de potentiel électrique entre les deux versants, interne et externe, de sa membrane plasmique.On parle alors de potentiel de membrane ou de potentiel transmembranaire Qu’elle est l’origine de ce potentiel de membrane ? Concentrations en ions de part et d’autre de la membrane Extérieur de la membrane: + lons positifs = Na surtout (un peu de K aussi) + Ions négatifs = Cl surtout Intérieur du neurone: + Ions positifs = K surtout (un peu de Na aussi) + Ions négatifs = présence de protéines et ions phosphates Origine de l'activité électrique Il existe un gradient de concentration pour le sodium et le potassium. Le sodium est plus concentré a l'extérieur et le potassium est plus concentré a lintérieur Mouvements des ions Na et K au repos Au repos, il y a un mouvement continu de Na vers l'intérieur et de K vers lextérieur @ travers des canaux ouverts appelés canaux de fuite. Ces mouvements ont tendance a équilibrer les concentrations des deux ions entre Vintérieur et lextérieur ‘fin de maintenir un gradient de concentration, un transport actif de Na vers lextérieur et de K vers l'intérieur s'effectue grace a une pompe appelée pompe Na- K. Cette pompe utilise 'ATPPotentiel de repos POTENTIEL DE REPOS DU NEURONE Cette différence de potentiel est maintenue grace a la pompe Na /K Calcul du potentiel de membrane : Em + Emest calculé par I'équation de Goldmann + Cette équation prend en considération la concentration des ions a l'intérieur et a l'extérieur et la perméabilité de la membane vis-a-vis des ions Na , K et cl In EEE eee Raa Em = F Pra [Nale + Py IKle + Poy - [Cll Em est exprimé en V et doit étre transformé en mV T: Température en °K : 273 +ten°C R_: Constante des gaz parfaits = 8,32 J/ mol.° K F : Constante de Faraday = 96500 CP: perméabilité de la membrane pour Vion X Potentiel d’équilibre d’un ion, E ion Le potentiel d'équilibre d'un ion est la différence de potentiel (ddp) quill faudrait appliquer de part et d’autre de la membrane pour que le gradient électrique de cet ion s‘oppose trés exactement en direction, en sens et en amplitude au gradient de concentration de cet ion, chaque ion étant pris séparément. ‘Autrement dit, au potentiel d'équilibre de cet ion, le flux net de cet ion est nul. s'exprime par la relation de Nernst.Expérience de NERNST Llexpérience de Nernst est schématisée figure A. Au début de experience (t0), 2 compartiments A et B remplis de solutions de KC! a concentrations différentes sont séparés par une membrane strictement perméable aux ions K+ Seuls les ions K+ vont passer sous action du gradient de concentration du compartiment oi ils sont le plus concentrés (A) vers le compartiment ou ils sont le moins concentrés (B). Simultanément (t1) a la diminution de d[k+ JA-B, un gradient de potentiel électrique (GIEJA-B) apparatt & travers la membrane ; ce gradient de potenti! résulte de accumulation des ions K+ dans B et d'un excédent concomitant de Cl- dans A. Al équilibre les 2 gradients de potentiel et de concentration sont de méme intensité mais dirigés en sens contraire : il en résulte que les ions K+ soumis a 2 forces de méme intensité dirigges en sens contraire ne se déplacent plus @ travers la membrane A 'équilbre la valeur du potentiel transmembranaire est égale au potentiel d'équilibre thermodynamique pour les ions potassium (EK) donné par 'équation de Nernst. renin orn Pe lisa (peek 7) Fag ices | Figure A: Equation de NernstCalcul du potentiel d’équilibre d’un ion cas du K i kK +E, est caloulé par l’équation de Nernst + Cette équation prend en considération uniquement la concentration de lion Vintérieur et a l'extérieur de la cellule + Le rapport des concentrations est toujours ext / int E, est exprimé en V et doit étre transformé en mV T : Température en °K: 273+ten°C_ R : Constante des gaz parfaits = 8,32 J/ mol.° K Application : Cas du K + On veut calculer le E,, dans le cas d'un axone place & 25°C ; + Ona: [KJe =5 mMet [K]i = 140 mM. z.F a. i+ - Fig [Ke + Poy 8,32-x(278 +25) {Cle E> Si la membrane de l'axone était perméable uniquement au K’, le potentiel de la membrane serait égal a - 85 mV. LE POTENTIEL D'ACTION Les neurones peuvent réagir a une stimulation: ce sont des cellules excitables. La réponse du neurone est un message nerveux formé de potentiels d'action Le potentiel d'action est déclenché par une dépolarisation dp inv) La dépolarisation doit dépasser une valeur seuil Le potentiel d'action est un phénomeéne tout ou rien Le potentiel d’action se propage sans atténuation Pendant le potentiel d'action le potentiel membranaire Sinverse