Module d’Enzymologie FSTT- 2020-2021

Travaux Dirigés N 7

Exercice N°1:

1. Citer des enzymes allostériques en précisant la réaction enzymatique, le substrat,

le produit, les activateurs, inhibiteurs, la structure quaternaire, les sous unités
catalytiques et régulatrices et expliquer
2. Citer des enzymes coopératives

Exercice N2 :

La cétostéroïde-isomérase catalyse l'isomérisation de différents Δ5-3-cétostéroïdes

pour former des Δ4-3-cétostéroïdes conjugués tels que la Δ4-androstene-3,17-dione

ou la testostérone.On étudie donc la réaction catalysée par cette enzyme (E) sur la

Δ5-androstene-3,17-dione, en absence et en présence d'un inhibiteur (I),

la 19-nortestostérone

On suit la réaction enzymatique en mesurant l'absorbance à λ = 248 nm

et on obtient les résultats présentés dans le tableau ci-dessous.

[S]0 (mM) vi (U.A.min-1) / [I] = 0 vi (U.A.min-1) / [I] = 5.5 µM

0.083 0.08 0.051
0.122 0.11 0.072
0.195 0.15 0.106
0.238 0.17 0.122

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0.340 0.20 0.150

0.580 0.26 0.200
0.870 0.29 0.240
1.170 0.30 0.270

1. Est-on en condition de substrat saturant ?

2. Déterminez Vmax, KM et kcat (en s-1) par la représentation des doubles inverses.
3. Déterminez les paramètres cinétiques Vmaxapp et KMapp en présence de

l'inhibiteur.

4.Calculez la constante KI. De quel type d'inhibition s'agit-il ?

5. Que suit-on à λ = 248 nm ?

Données : [E]0 = 7.3 pM ; εMproduit = 17000 M-1.cm-1; U.A. = unité d'absorbance

Exercice N°3 : inhibition par excès de substrat

La lactate déshydrogénase catalyse la réduction réversible du pyruvate

en lactate : pyruvate + NADH + H+ <===> lactate + NAD+

Les vitesses initiales de la réaction sont déterminées pour différentes

concentrations [S]0 de pyruvate.

La concentration du NADH est constante et égale à 5,4 10-4 M et KMNADH = 5,4 10-5 M.

On suit la disparition du NADH à λ = 340 nm en fonction du temps.

[S]0 (mM) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,8 1 2 3 4 5 9

vi (U.A.min-1) 0,075 0,125 0,157 0,180 0,200 0,212 0,232 0,250 0,270 0,270 0,250 0,240 0,190

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1. Tracez la courbe de saturation et commentez l'allure.

2. Déterminez Vmax et KM par la représentation des double inverses.

Données : εMNADH = 6000 M-1.cm-1; U.A. = unité d'absorbance