Cours de Microbiologie Gnrale LV342 Cours 4 Microorganismes agents de maladies chez lhomme

Catherine Esnault, Matre de Confrences

Universit Pierre et Marie Curie (Paris 6) UFR 927 Sciences de la Vie Licence de Sciences et Technologie Mention Sciences de la Vie L3
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Relations avec un hte ou d'autres organismes dfinitions

Saprophytisme : microorganisme se dveloppant dans l'environnement aux dpends de la matire organique morte. Exemple : champignons. Commensalisme : microorganisme se dveloppant sur un hte sans le gner et en l'aidant indirectement. Par exemple, les bactries de la peau et des muqueuses. Symbiotisme : association troite de deux ou plusieurs organismes dissemblables. On parle d'endosymbiose lorsqu'un microorganisme se trouve l'intrieur de son partenaire. Exemple : lichen, symbiose algue-champignon Mutualisme : association de deux ou plusieurs organismes, dans laquelle tous les membres sont avantags par bnfice rciproque. C'est un symbiotisme au sens large, chaque membre pouvant aussi tre autonome. Exemple : rhizobium-lgumineuse

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Dfinitions (suite)
Syntrophisme (du grec "se nourrir mutuellement") ou cross feeding : association de deux microorganismes, qui cooprent pour une activit mtabolique globale bien prcise sans que leur dpendance mutuelle ne puisse tre remplace par une simple addition de substrat ou de nutriment. C'est un cas particulier du symbiotisme. Exemple : le rumen Parasitisme : microorganisme profitant de l'association aux dpends de l'hte. Les microorganismes pathognes ainsi que l'ensemble des virus sont des parasites, mme si en mdecine ce terme est plutt rserv aux microorganismes eucaryotes. La parasitologie est ltude des maladies provoque par les parasites eucaryotes. Exemple : la maladie du sommeil provoque par Trypanosome Opportunisme : microorganisme commensal profitant d'une faiblesse de l'hte pour devenir pathogne. Exemple : E. Coli intestinal devient pathogne dans les voies urinaires.

Cette situation est un bon exemple indiquant qu'il n'y a pas de frontires strictes entre les catgories dfinies ci-dessus : Symbiotisme Mutualisme Commensalisme Parasitisme
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Localisation des microorganismes

Peau Voies respiratoires suprieures Poumons Les voies digestives Le tractus urognital

Infection : multiplication dun microorganisme pathogne dans un organe Maladie : infection qui produit des symptmes Exemple dinfection aigu la diphtrie, par contre la tuberculose est une infection chronique (fatale), la peste pulmonaire une infection fulgurante. Il peut exister des infections sans maladie, inapparente (gonorrhe) ou la typhode (porteur sain).

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Chez un individu immuno-dprim on observe des infections dites opportunistes (flore naturelle non pathogne) ex sidens.

On appelle virulence la capacit dun microbe raliser une infection.

On appelle facteur de virulence un produit qui contribue linfection de lhte. Remarque pour certaines maladies comme la tuberculose cest la rponse immunitaire qui est responsable de la maladie (voir endotoxine) en effet ce sont les cytokines (mdiateurs) librs par les cellules lymphodes qui sont responsables des dommages chez lhte .
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Les tapes de linfection

Adhsion une surface (suite par exemple une blessure Adhsion gnralement spcifique (Neisseria.gonnorrha) Les facteurs dadhsion:capsule, fimbri, pilus, flagelles Invasion: lymphe et sang

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Facteurs de virulence (1)

contribuent la colonisation et linvasion de lhte Colonisation: apports nutritionnels de lhte
causent des dommages lhte Toxicit et pouvoir denvahissement Toxicit: Clostridium tetani, Corynebacterium diphteri Envahissement: Streptococcus pneumoni Mesure de la virulence: LD5O Nombre de bactries entranant la mort de 50 % des animaux Exemple: Streptococcus pneumoniae (S5O) et Salmonella enterica (S5OOO)

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Les facteurs de virulence (2)

Contrle de linvasion: caillot Lyse: streptokinase Production: coagulase Les toxines Exotoxines:hmolysine, toxine diphtrique, botulinique, ttanique. Entrotoxine: V.choler Autres cas: E.coli, S.enterica Endotoxines : Drives du LPS des gram- , Lipide A, core polysaccharide, O-polysaccharide Superantignes: stimulation massive des lymphocytes (Staphylococcus aureus)

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Modification de cytosquelette et secrtion de type III

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Modification de lactine
EPEC :Enthero Pathogenic E Coli, Shigella. Par le SS de type III, EPEC injecte les protines Tir, il y a recrutement des protines cellulaires WASP et Arp2/3 dans la cellule et il se forme un pidestal qui va permettre le contact avec les adhsines bactriennes, les protines intimin .

Nature, 2000, Donnenberg MS

Ce pidestal est un rcepteur pour la bactrie Shigella qui va ainsi sinternaliser. Une fois internalise, elle dpolymrise lactine et provoque leffondrement de la structure des microvillosits de la brosse et la polymrise en nouvelles structures (comte dactine) qui vont permettre le passage de cellule en cellule (processus dinvasion). Ces modifications de lactine contribuent ainsi la phagocytose des bactries par des cellules qui nont pas naturellement cette proprit. Lentre dans les cellules fait que les bactries chappent au systme immunitaire. 10

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Acquisition du fer

Enterobactin is a 669-Da catecholate that is synthesized by Escherichia coli and Salmonella typhumuriun, but is used by all known enterobacteria
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Survivre la phagocytose

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Camouflage de Mycobacterium tuberculosis

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Echapper aux anticorps

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Endotoxine : le LPS

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Ilots de pathognicit:structure gnrale

V1-V4: gnes de virulence DR: squences rptes directes Int: gne de mobilit IS: squence dinsertion entire (Isc) ou dfective (Isd)
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Phages et virulence
Phages temprs et conversion lysognique Transferts horizontaux Toxine botulinique (Clostridium botulinum) Souche pathognes et non pathognes Toxine diphtrique: (Corynebacterium diphteri) phage et gne tox. Toxine cholrique: (Vibrio choler) phage CTX Shiga toxine: (Shigella) Phage et traitement antibiotique. Transfert E.coli (STEC)

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Maladies et biofilms : Dfinitions

Matrice* ou Slime (Staphylococcus epidermidis)

Forme planctonique Surface non-biologique (abiotique) biologique (biotique)

Forme attache ( sessile ) * La matrice comprend un ou plusieurs exopolysaccharides (glycocalyx), des protines, des acides nucliques, des lments minraux, mtalliques etc. Elle enchsse les bactries
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Les biofilms sont universels

- toutes les surfaces sont colonisables (lentilles de contact, mail dentaire, pipelines, conduites deau potable, roches immerges, implants mdicaux) - le support peut tre une source de nutriments (cellulose du papier, chitine) - certains matriaux retardent ladhsion, aucun ne l empche totalement - aucune espce bactrienne connue nexiste que sous forme planctonique - les bactries cultives sur support solide ne forment par toujours un biofilm (Ex : culture sur milieu glos)
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Biofilm microscopie lectronique balayage

Biofilm sur support mtallique (conduite d eau) Donlan and Costerton (2002) Clin Microbiol Rev, 15, 2:167-193 LV342 cours 4 Catherine Esnault 2012 20

Biofilm microscopie confocale

Vue transversale d un biofilm Donlan and Costerton (2002) Clin Microbiol Rev, 15, 2:167-193

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Biofilm modle structural actuel

Cellules vivantes : 15% vol.tot. Matrice : 85% vol.tot

Zones de dispersion champignons tours

Flux hydriques
canaux support

Donlan and Costerton (2002) Clin Microbiol Rev, 15, 2:167-193 22

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Gense des biofilms

Cellules planctoniques

1m

Cellules attaches

Microcolonie
2m

Biofilm
2m 20m 10m

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Gntique des biofilms

L activit biologique des formes attaches et des formes planctoniques est diffrente (ex: production mtabolites diffrents, taux division altr etc.) Les protines sont produites des niveau diffrents et/ou sont diffrentes (ex: disparition des protines flagellaires) Le profil transcriptionnel des gnes est diffrent

Mthodes d tude...
Analyse diffrentielle des transcriptomes Analyse diffrentielle des protomes Analyse fonctionnelle : recherche des gnes par mutagense
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Apport de la protomique Analyse dun biofilm L.monocytogenes

Milieu liquide Biofilm

Gels 2D Coloration argentique

Identification des protines par MALDI-TOF-MS et squenage N-terminal

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Apport de la mutagnse
bactries Phage+insertTn10 (KanR)

Isolement sur milieu slectif (Kan)

Inoculation des clones en plaque (polystyrne) 96 puits

Rplique

Lavages et coloration (cristal violet)

Identification des mutants non-adhrents Identification des gnes muts

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Rle(s) protecteur(s) des biofilms

- contre les antibiotiques et dautres agents antibactriens (acide hypochloreux, dtergents comme le SDS, U.V.)

- contre les variations brusques de lenvironnement (pH)

- contre la dessiccation - contre les bactriophages (?) - contre certaines amibes - contre la rponse anticorps et cellules phagocytaires
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Les biofilms sont des communauts mono- ou polymicrobiennes

- Les biofilms peuvent tre mono- ou polyspcifiques
- Les inter-relations entre les bactries dans les biofilms sont complexes

- comptition trophique
- intoxication - coopration trophique - coopration dans les phases dadhsion - changes dinformations

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Biofilm et plaque dentaire (1)

Le support bactrien. Les glycoprotines salivaires Colonisation; les espces pionnires Streptococcus mutans et S.sanguis Synthse de dextrane fortement adhsif partir de sucrose par la dextrane sucrase. Evolution du biofilm; les nouvelles espces colonisant le biofilm Fusobacterium, Borelia puis Actinomyces

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Biofilm et plaque dentaire (2)

S.mutans: microscope balayage

dveloppement du biofilm avec (au dessus) ou sans brossage (au dessous).

Dveloppement de la plaque dentaire sans lavage des dents J1 et J10

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tapes schmatises de la pathognie du cholra

Voir poly de cours 31

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Bordure en brosse de la muqueuse intestinale

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Action de la toxine cholrique

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lot de pathognicit de la toxine cholrique

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