UNIVERSITÉ DE LUBUMBASHI

FACULTÉ DES SCIENCES

Département de Chimie

ISOLEMENT ET CARACTERISATION DE LA
TRIGONELLINE EXTRAITE DE DIOSPYROS
MWEROENSIS

CT SHENGO LUTANDULA
Recherches pour l’obtention du Diplôme d’Etudes Supérieures (2006-2007)
Orientation: Chimie
PLAN DE PRESENTATION

INTRODUCTION
1. Choix de Diospyros mweroensis
2. Données bibliographiques
3. Présentation du matériel végétal
4. Résultats et discussions
CONCLUSION
 Introduction

But de la recherche

 Étudier les espèces végétales locales appartenant

au genre Diospyros
 caractériser leurs substances naturelles
 Contribuer à la recherche des molécules d’intérêt
pharmacologique
1. Choix de Diospyros mweroensis
 Plantes tropicales appartenant aux Ebenaceae
et accessibles au Katanga

Plantes très utilisées en médecine traditionnelle

Plantes ichtyotoxiques
Nombreuses recherches y relatives à cause de
l’intérêt suscité auprès des chercheurs
notamment les chimistes et les pharmaciens
2. Données bibliographiques

Le genre Diospyros est une source:

1. Des naphtoquinones et leurs dérivés
2. Des triterpènes
3. Des quelques hétérosides

- Substances d’intérêt pharmacologique

- Sources potentielles des médicaments
 Quelques molécules actives
Molécules Espèce Propriétés Structures
actives végétale
Diospyros
Plumbagine maritima et O
et ses Antibactériennes2 R3 1
R1
D.
7 9

dérivés
8 2

novoguinensi 6
5
10
4
3
R2
s OH O

O O

Elliptinone Diospyros Ichtyotoxiques31 H3C CH3

mweroensis OH O OH O

[Glu] [Glu]
O OH OH O
Diospyros
Diospyrol Anthelminthiques1
mollis CH3
CH3O
3. Présentation du matériel végétal
Nom scientifique Nom vernaculaire Langue vernaculaire

Diospyros batocana33 Lushilamboto Bemba

Diospyros Kasangola Sanga

mespiliformis33
Katula Bemba, Sanga, Lamba

Kampombwe ou
Diospyros mweroensis31 Mtumbatupa Bemba

mupeta Tabwa

Diospyros pallens24 Muntufita Bemba

Diospyros mweroensis
Intérêt de la trigonelline

La trigonelline est une molécule active

possédant les propriétés suivantes:
- Anticancéreuse
- Antiseptique
- Anticholestérolémique
- hypoglycémiante
4. Résultats et discussions
4.1. Extraction des substances naturelles

4.2. Travaux de purification

4.2.1. Purification par extraction
solvant-solvant
4.2.2. Purification chromatographique

4.3. Détermination de la structure de la

trigonelline
4.1 Extraction des substances naturelles

500g d’écorces de tiges 750ml

Filtrat CH2Cl2

Ecorces de tiges séchées

3x750ml
MeOH

Filtrat évaporé
(20.0g) Ecorces de tiges épuisées
(marc)
4.2.Travaux de purification

4.2.1. Purification par extraction

solvant-solvant

4.2.2.Purification chromatographique
- Sur colonne sur silice RP-C18
- Par HPLC sur silice RP-C18
 Extrait brut
(8.00g)
4.2.1. Extraction par solvants
50ml HCl à 0,1%

Filtrat Dépôts
organiques

2x50ml hexane

Phase organique
Phase aqueuse Résidu
(0.0902g)

2x50ml Ether diéthylique

Phase organique
Phase aqueuse Résidu
négligeable

2x50ml Acétate d’éthyle

Phase org. Phase aqueuse

Résidu Résidu
(0.0528g) (1.582g)
 4.2.2. Purification chromatographique

• Par chromatographie sur colonne remplie de silice RP-C18

avec le système des solvants MeOH/H2O exploitant le
gradient de rapports en volume 80 à 40% du MeOH

• HPLC: Chromatographie liquide à haute performance

- Sur silice RP-C18 avec le système des solvants MeOH/H2O
- Débit d’injection 1ml/min et un gradient d’élution de 100 à
70 % en volume de MeOH
 1582 mg

Chromatographie sur silice RP-C18

246,8mg 378,1mg 170,9mg 170,9mg 189,8mg 118,6mg 117,1mg 189,8mg

(15,6%) (23,9%) (10,8%) (10,8%) (12,0%) (7,5%) (7,4%) (12,0%)

Purification par HPLC

31,64mg de Trigonelline (0,40%)

 0,40% du poids de l’extrait brut (20g) et Rf 0,39 sur couche mince de silice dans
EtOH/H2O 9:1
4.3 . Détermination de la structure de la
trigonelline

1. Spectre RMN-proton dans le méthanol deutérié avec

TMS comme étalon interne à 300MHz

2. Spectre UV-visible dans le système des solvants

MeOH/H2O (100 à 30% de MeOH)

3. Spectrométrie de masse à impact électronique utilisant

70eV
 Données spectrales RMN-proton
Attribution des Données de la Données
signaux et littérature37-39 obtenues
O multiplicité (δ en ppm) (δ en ppm)
4
-
5
3 O-
6 + 2 CH3, s 4,45 4,43
1
N
H5, t 8.09 8.06 (7Hz)
CH3
H4 et H6, d 8,85 (8Hz) 8,90 (8Hz) 8,86
8.84 (6Hz) (6Hz)
H2, s 9,13 9,20
 Trigonelline
H2O MeOH
26

+
N CH3

2
4+6 5
 Données spectrales UV-Visible
Données de la littérature26, 36 Données obtenues

Système de solvants Bande Système de solvants Bande d’absorption

(proportions) d’absorption (proportions) maximale
( longueurs d’onde en nm) maximale ( longueurs d’onde en nm) (nm)
(nm)

DEA+AcOH
(pH=5,3)/MeOH 263.3
(7÷3) MeOH / H2O
(260 à 400nm) (1÷ 0, 8÷ 2 à 7÷3) 265.5
(210 à 390nm)
H2O/MeOH/AcOH
(20÷79÷1 à 0÷99÷1) 264.0
(260 à 400nm)
Données spectrales de masse
Masse du fragment ionique Intensité du signal ou
(dalton) abondance relative du
fragment (%)
138 48
(M + H) +

123 [(M + H) + - °CH3] 53

107 [(M + H+)- °OCH3] 49

94 [(M + H) + - CO2] 100

(pic de base)
 O
4
-
5
3 O -, H
6 + 2

1
N
Trigonelline 26
CH3
 Conclusion
1. Extraction des substances naturelles : 4% (20g
d’extraits bruts obtenus à partir de 500g du matériel
végétal)

2. Purification des substances naturelles (Extraction

par solvant et chromatographies) : elle a permis
d’obtenir 31,64mg de trigonelline (0,40%)

3. Données spectrales ( celles de RMN-H, UV-Vis et SM

comparées à celles de la littérature ): Elles sont
concordantes pour la structure de la trigonelline isolée
de Diospyros mweroensis.
Annexes
Unité HPLC à double détection UV-Visible et SM
Pilotage d’une HPLC par un logiciel CHEM
STATION (Agilent technologies Inc)
Système d’injection de l’échantillon
Caractéristiques de la colonne HPLC

Précolonne ou colonne de garde:L=0,4-1cm,

DI=4,5mm avec traitement de passivation,
chemisage en verre ou PEEK (polymère en
polyethylene-etherketone)

Disque en verre fritté: porosité 0,5µm

Colonne standard Zorbax: L=10cm, DI=4,5mm
Colonne avec des faibles DI=2-4mm,1-2mm et
0,1-1mm pour les capillaires
Silice RP-C18
 Détecteurs utilisés en chromatographie

 Détecteur à conductibilité
thermique (universel)

 Détecteur à ionisation de
flamme (spécifique aux
composés organiques en
CPG)

 Détecteur
thermoionique(spécifique aux
composés de P et de N)
 Détecteurs utilisés en chromatographie

 Détecteur à capture
électronique (spécifique
aux dérivés halocarbonés)

 Détecteurs à photo-
ionisation (spécifique aux
hydrocarbures et les
composés de S et de P)
Détecteur par réfractométrie différentielle
Principe de l’analyse en spectroscopie RMN
Appareil RMN (BRUKER avance 500)
Principe de la spectrométrie de masse
Spectromètre de masse