Dr ABBASSEN — N Dosage de |’ lobi > Principe: Lhémoglobine est transformée en cyan méthémoglobine. La densité optique de la solution est mesurée & 540 nm (maximum d’absorption de la cyan méthémoglobine ou n’Interférent nl la bilirubine ni les pigments). La quantité d’hémoglobine est déterminée par rapport 4 une courbe d’étalonnage. > — Réactifs * Sang Prélévement capillaire ou veineux recueilli sur EDTA * Solution de Drabkin: Ferricyanure de potassium. Cyanure de potassium Phosphate monopotassiqui Eau distillée Fourni en solution concentrée (Toxique) de bonne conservation & l'abri de la lumire et 44°C ou T’Cambiante. * Solution étalon : e : « wp pa de 10mi, a conserver & 4°C, La solution est titrée au voisinage de Livrée en ampoule de verre brun, Omg de cyan méthémoglobine. Eile est ramenée a °C ambiante avant utilisation. * Matériels: - Pipettes de sahli de Sm! ~ Micropipettes de 20 = Tubes a essai de 5ml - Spectrophotometre ou un Hémoglobinometre > — Technique: Aprés homogénéisation soigneuse (sang veineux) prélever 201 de sang et les introduire dans 5 mi de DRABKIN. Mélanger soigneusement et attendre 3mn la lyse totale. Mesurer la DO & 540, Se reporter 8 la courbe d’étalonnage.— Etablissement de la courbe d’étalonnage: %, 1/3 et % faite avec le solute condant a chacune de ces solutions. Porter ces valeurs en ot DO correspondants. On obtient une droite ‘a chaque changement de la ‘ion au Mesurer la DO de la solution étalon pure et de dilution at DRABKIN. Calculer la quantité d 'Hb corres| abscisses sur le papler millimatre et en ordonnées les Las passant par origine. Cette courbe d’étalonnage doit étre refaite solution Drabkin. > Précision de la méthode: Dans ces conditions de dosage, le pourcentage d’erreur ne dépasse pas 2% > Valeurs Normales: Hb = 13-17 g/dl pour l'homme Hb = 12-16 g/dl pour la femme Hb = 14-20 g/dl pour le Nné Hb = 11~14.5 g/d! pour enfant de 10ans. Le dosage de I'Hb est précis & condition d’avoir une lecture optique. il est préférable a la numeration des globules rouges. * Hématocrite (Ht) Principe + Cest le volume occupé par les hématies dans une quantité de sang total connues. Il s'exprime en %. La détermination s'etfectu _ Par méthode directe:_ *macro_hématocrite de Wintrobe * micro_hématocrite Par méthode indirecte: Calcul & partir du volume moyen et du chiffre de la numération. Méthode directe UHt de Wintrobe, nécessite un volume relativement important délicate et de précision relative, est actuellement abandonné au profil du micro_ Ht. Micro- Ht Prélevement : sang caplllaire ou sang veineux, recueilli sur anticoagulant sec. Matériel: tubes capillaires, soigneusement calibrés; Longueur: 75mm Diamétre intérieur : 1mm. ne eT Page 2pans le cas de prélévement capillaire, utiliser des dubes héparines. Centrifugeuse spécial pouvant tourner & 10 000t/mn lecteur spécial équipé d'une loupe si possible. Technique : Plonger l'extrémité du tube dans ’échantillon du sang veineux soigneusement homogénéisé +++. Ou dans la goutte de sang par piqure de la pulpe du doigt. Laisser le sang s‘élever par capillarité jusqu’a environ icm de l'extrémité supérieur. Fermer.lextrémité par une pate spéciale ou par chaleur. Placer les tubes sur le plateau de la centrifugeuse, l'extrémité fermer vers la périphérie. Centrifuger Smn 4 10 000t/mn. Lire I'Ht sur le lecteur. Causes d’erreur: la plus grande, réside dans la variation du diametre du tube capillaire Soit la hauteur vient ensuite la vitesse et le temps de centrifugatior Pate a [ Repéte modeler coloré LL Centrifugation L- > Lecture ----—»— Pate & r Goutte de Leded iano aunsen : 2 Gabarit de lecture la vitesse doit étre de 10 000t/mn et le temps de Smn. Précision : elle est de 3% pour un sang normal + Méthode indirecte * L'Ht est calculé & partir du volume moyen des hématies et des nombres d’hématies au mm’. * Les opérations sont effectuées automatiquement dans les compteurs hématologiques munis d'une calculatrice spéciale * Le résultat obtenu est souvent < de 1.5 a 3% a celui donné par le micro-Ht, car le volume de plasma retenu dans le culot globulaire n’entre pas en ligne de compte. * D’autre part, ce résultat est influencé par I'étalonnage de l'appareil.+ Résultats -Adultes:; Homme: — 47+/-7% Femme: 42+/- 5% = Nné 54 +/- 10% +Enfant — 3mois 38+/- 6% 3a6ans 40+/- 4% 10312ans 41+/- 4% La Vitesse de sédimentation (VS| - Est représenter par le temps que prennent les hématies du sang pour se déposer ; est augmentée dans les phénomenes infectieux et inflammatoires, du fait notamment de I'augmentation des globulines au dépend des albumines. - Examen de routine qui, en dépit des quelques imprécisions qu'il présente, garde néanmoins un intérét en particulier dans le diagnostic de tres nombreuses affections ainsi dans la surveillance des maladies inflammatoires. - _ Lavs dépend de nombreux facteurs érythrocytaires: (nombre, volume, la forme) et plasmatique(en présence des protéines sanguins anormales et des globulines en taux plus élves que normaux. - Principe Quand un échantillon de sang recueilli sur anticoagulant est laissé au repos dans un tube vertical, les hématies sédimentent. Elles se disposent en rouleaux trés denses qui progressivement se tassent, laissant ainsi surnager une couche de plasma. La formation de ces rouleaux d’hématies est due a I’existence de force électrostatiques neutralisées par les protéines plasmatiques chargées pour la plupart négativement ; Les hématies ne se repoussent plus mais au contraire s’agrégent « en pile d’assiettes » qui sédimentent plus facilement. La vitesse de sédimentation (VS) dépend donc du courant descendant des cellules et du courant ascendant du plasma. Elle se traduit par la mesure de la hauteur du plasma (en mm) obtenue au bout d’un certain temps (1 heure). * Réactifs Solution de dilution Citrate trisodique ssssees 30,888 Eau distillée . qsp 100m! lr Page 4Aprés dissolution, filtrer sur membrane stérilePdans un récipient stérile et conserver sans adjonction de conservateur, Matériels - Pipette de Westergreen : longueur 300mm/2,5mm diamétre intérieur, graduée en mm de 0.8 200 de haut en bas -Tube de verre, rectilignes - Support spécial permettent de maintenir les strictement verticaux. Prélavement . Aprés une ponction veineuse, franche et rapide, mélanger immédiatement le sang avecla solution de citrate dans les propositions suivantes: 4volumes Sang volume Solution de citrate .. Et homogénéiser par retournement successifs Technique - la plus utilisée est la technique de Westergreen = Le test doit étre pratiqué dans les 2heures qui suivent le prélévement si |'échantillon est gardé a température ambiante, dans les 6 heures, s'il est conservé a 4°C - Aprés homogénéisation soigneuse, aspirer le mélange sang- solution dans le tube Westergreen jusqu’au repére 0abri des - Placer le tube vertical, sur son support et abandonner aT°C ambiante, a l’abri vibrations et de la lumiére directe. Au bout de 1 heure, lire la hauteur du plasma surnageant, depuis la base du ménisque supérieur jusqu’au sommet de la colonne d’hématies. r ~ Exprimer le résultat en mm Résultats Valeurs normales moyennes 7a15mm Homme Causes d’erreur * non verticalité du tube * anémie * erreur de dilution * défaut de calibrage du tube * thérapeutique médicamenteuse + Interprétation Test rion spécifique, imprécis, &’interpréter avec prudence, surtout utile dans la surveillance d’une affection. On peut toutefois noter, qu’en régle générale la VS: - est augmentée dans la grossesse (& partir de la 10 & 12 semaines, pour revenir ala normale 3 4 4 semaines aprés l'accouchement).. = augmente avec I’age (20 mm a la 1" heure aprés 60 ans). «est augmentée dans: * les maladies rhumatismales : * la tuberculose * les infections chroniques ou aigués * les syndromes néoplasiques * les maladies dégénératives Page 6