03 0693 Rapp Technique Biodisp Ecot

Devenir et comportement des mtaux dans l'eau : biodisponibilit et modles BLM
Rapport technique
Ministre de lEcologie et du Dveloppement Durable Direction de lEau 20, avenue de Sgur 75302 PARIS 07 SP Convention DE n CV03000081 Opration n 2
Franois LE GOFF - Vincent BONNOMET Direction des Risques Chroniques Unit Evaluation des Risques Ecotoxicologiques
MARS 2004
INERIS DRC-03-46822-FLg/JL-03.0693
Devenir et comportement des mtaux dans l'eau : biodisponibilit et modles BLM

Rapport technique
Ministre de lEcologie et du Dveloppement Durable Direction de lEau 20, avenue de Sgur 75302 PARIS 07 SP Convention DE n CV03000081 Opration n 2
MARS 2004
PERSONNES AYANT PARTICIPE A LETUDE : J.P. BLANQUET - V. BONNOMET - M. COQUERY - A. GAUDILLOT - F. GONDELLE - N. HOUEIX - F. LE GOFF - H. MAGAUD L. MEUNIER - W. SANCHEZ
Ce document comporte 85 pages (hors couverture)
Rdaction NOM Qualit

F. LE GOFF
Vrification
H. MAGAUD
Approbation
E. THYBAUD Responsable de lUnit Evaluation des Risques Ecotoxicologiques
V. BONNOMET Ingnieurs lUnit Evaluation des Risques Ecotoxicologiques Ingnieur lUnit Evaluation des Risques Ecotoxicologiques
Visa
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RESUME
La directive europenne 2000/60/CE tablit un cadre pour maintenir et amliorer la qualit des eaux dici 2015. Cette directive prsente, en particulier, une stratgie pour le contrle de la pollution par les substances les plus proccupantes en imposant de dfinir des normes de qualit. Ces normes de qualit sont des concentrations seuils qui ne doivent pas tre dpasses dans leau pour assurer la protection des cosystmes et de la sant humaine. Quatre mtaux font partie de la liste des substances prioritaires accompagnant cette directive : le cadmium, le plomb, le mercure et le nickel. La dtermination des normes de qualit est problmatique pour les mtaux : Les lments mtalliques sont prsents, de faon ubiquitaire, en traces dans lenvironnement. Il est ncessaire de distinguer les contributions dorigine naturelle des apports anthropiques. Les organismes vivants ont volu en prsence des lments mtalliques. Les tres vivants ont besoin de mtaux qualifis d'essentiels et certains sont adapts pour vivre dans des environnements particulirement riches en mtaux. Dans leau, les mtaux sont prsents sous forme d'ions libres mais ils peuvent aussi se complexer avec des ligands inorganiques et organiques prsents, sous forme dissoute, en solution. Seules certaines formes du mtal peuvent tre assimilables et induire un effet sur les organismes : ce sont les formes biodisponibles.
L'ensemble de ces particularits fait que l'valuation des risques lis aux mtaux ne peut tre conduite de la mme manire que pour les substances chimiques organiques. De nouvelles mthodes dvaluation prenant en compte ce particularisme ont commenc tre appliques dans les valuations des risques pour les mtaux au niveau europen1. C'est notamment le cas pour le cadmium, le nickel, le zinc, le chrome, le plomb et le cuivre, ces deux derniers faisant l'objet d'valuations des risques proposes par l'Industrie. Les interactions entre les espces mtalliques en solution et les organismes vivants font l'objet de nombreuses tudes. De la mme manire que pour la spciation des mtaux avec les ligands inorganiques et organiques, des programmes de calcul ont t dvelopps pour modliser la fixation du mtal au niveau des ligands biotiques (sites de fixation des mtaux sur les organismes vivants). Ces modles dits Biotic Ligand Models ont t mis au point, pour quelques espces aquatiques et quelques mtaux, afin de prdire la toxicit (aigu) de ces mtaux en fonction des conditions physico-chimiques d'un milieu donn. Dans le cadre du rglement CE/793/93 pour lvaluation et le contrle des risques prsents par les substances existantes, lvaluation des risques lis la production et lutilisation du zinc pour le milieu aquatique tient compte de la biodisponibilit de celui-ci suivant les milieux tudis. La mthodologie retenue utilise les BLM dvelopps pour le zinc, pour diffrents organismes vivants (une algue, un invertbr et un poisson). Des approches similaires seront peut-tre proposes dans les annes venir pour la dtermination de seuils de qualit. Toutefois ces modles rcents sont encore en cours d'laboration pour certains et ncessitent des tapes de validation supplmentaires pour d'autres. L'tude prsente ici a montr lintrt mais aussi les limites des BLM proposs pour l'estimation de la biodisponibilit des mtaux dans les milieux naturels. En effet, les incertitudes sur les rsultats sont encore trs importantes et de nombreuses hypothses nont pas encore t valides. Par ailleurs, il est indispensable de bien cerner le domaine dutilisation des modles dvelopps compte tenu du peu de validation de leur applicabilit diffrentes espces, diffrents stades de dveloppement et milieux aquatiques.
Evaluation des risques des substances existantes (Rglement CE/793/93)
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TABLE DES MATIERES

RSUM ____________________________________________________________________________ 1 TABLE DES MATIRES_______________________________________________________________ 2 TABLE DES ILLUSTRATIONS _________________________________________________________ 4 INTRODUCTION _____________________________________________________________________ 7 1. GNRALITS SUR LES MTAUX ________________________________________________ 8 1.1. ORIGINE ET DEVENIR DES MTAUX DANS LENVIRONNEMENT_____________________________ 8 Apports telluriques naturels : rosion, transport, sdimentation________________________ 8 Autres apports dorigine naturelle_______________________________________________ 9 Apports anthropiques_________________________________________________________ 9 Devenir des mtaux dans lenvironnement aquatique _______________________________ 10 Dtermination des concentrations naturelles en mtaux _____________________________ 10
Concentrations de rfrence ______________________________________________________ 11 Modlisation gochimique _______________________________________________________ 18
1.1.1. 1.1.2. 1.1.3. 1.1.4. 1.1.5.
1.1.5.1. 1.1.5.2.
1.2.
EVOLUTION DES ORGANISMES EN PRSENCE DES MTAUX ______________________________ 19 Le caractre essentiel de certains mtaux ________________________________________ 19 Acclimatation, adaptation, slection ____________________________________________ 21
Acclimatation _________________________________________________________________ 21 Slection et adaptation.__________________________________________________________ 21 Implications __________________________________________________________________ 22
1.2.1. 1.2.2.
1.2.2.1. 1.2.2.2. 1.2.2.3.
2.
COMPORTEMENT DES MTAUX ET BIODISPONIBILIT __________________________ 23 2.1. FORMATION DE COMPLEXES INORGANIQUES _________________________________________ 24 Rappels sur les complexes inorganiques _________________________________________ 24 Modles de spciation inorganique _____________________________________________ 25
2.1.1. 2.1.2. 2.2.
COMPLEXATION AVEC LA MATIRE ORGANIQUE ______________________________________ 25 Gnralits sur la matire organique dissoute ____________________________________ 25 Ractions de complexation avec les mtaux ______________________________________ 27 Analyse et mthodes de mesure ________________________________________________ 27
Mesure des concentrations en matire organique ______________________________________ 27 Caractrisation qualitative de la matire organique dissoute par fractionnement ______________ 28
2.2.1. 2.2.2. 2.2.3.
2.2.3.1. 2.2.3.2.
2.2.4.
Modlisation de la complexation des mtaux avec la matire organique ________________ 29

WHAM ______________________________________________________________________ 30 Modle NICA - Donnan _________________________________________________________ 38
2.2.4.1. 2.2.4.2.
2.3.
COMPLEXATION AVEC LE LIGAND BIOTIQUE ______________________________________ 40 Gnralits________________________________________________________________ 40 Les ligands biotiques I : chez les poissons (les branchies) ___________________________ 41 Les ligands biotiques II : chez les invertbrs _____________________________________ 42 Les ligands biotiques III : chez les algues ________________________________________ 43
2.3.1. 2.3.2. 2.3.3. 2.3.4.
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2.3.5.
Modlisation de la complexation mtal / ligand biotique ____________________________ 43

Le FIAM (Free Ion Activity Model)________________________________________________ 44 Le FIAM modifi ______________________________________________________________ 44 GSIM _______________________________________________________________________ 48 Limites des modles ____________________________________________________________ 49
2.3.5.1. 2.3.5.2. 2.3.5.3. 2.3.5.4.
3.
LE BLM : UN MODLE INTGR ________________________________________________ 51 3.1. 3.2. UNE APPROCHE CONCEPTUELLE __________________________________________________ 51 LES INTERACTIONS PRISES EN COMPTE _____________________________________________ 52 Influence des ions comptiteurs sur la toxicit des mtaux ___________________________ 52
Duret de leau (Ca2+, Mg2+) _____________________________________________________ 52 pH (ions H+, OH-)______________________________________________________________ 55 Lalcalinit (ions CO32-) _________________________________________________________ 56 Autres ions comptiteurs (Na+, K+, S2-, Cl-) __________________________________________ 56
3.2.1.
3.2.1.1. 3.2.1.2. 3.2.1.3. 3.2.1.4.
3.2.2. 3.2.3. 3.3.
Influence de la matire organique sur la toxicit des mtaux _________________________ 56 Accumulation du mtal au niveau du ligand biotique et toxicit _______________________ 57
UN EXEMPLE : BLM-CUIVRE POUR LES DAPHNIES ____________________________________ 60 Construction d'un BLM-cuivre pour les daphnies (invertbrs) _______________________ 60 Validation du modle mis au point______________________________________________ 62 Test du BLM-cuivre pour les daphnies __________________________________________ 62 65
3.3.1. 3.3.2. 3.3.3.
3.4. ETUDE EXPRIMENTALE 1 : INFLUENCE DE LA MATIRE ORGANIQUE SUR L'ACCUMULATION DE CUIVRE AU LIGAND BIOTIQUE ___________________________________________________________ 3.4.1.
Etudes prliminaires ________________________________________________________ 65

Modlisation du devenir du cuivre en prsence de matires organiques dissoutes _____________ 65 Modlisation de la toxicit du cuivre vis--vis de Pimephales promelas ____________________ 66
3.4.1.1. 3.4.1.2.
3.4.2. 3.4.3. 3.5. 3.6.
Matriels et mthodes _______________________________________________________ 68 Rsultats et discussion _______________________________________________________ 69
ETUDE EXPRIMENTALE 2 : TEST DE MODLES DE SPCIATION ___________________________ 71 LIMITES DES BLM_____________________________________________________________ 73
CONCLUSION ______________________________________________________________________ 75 RFRENCES_______________________________________________________________________ 76
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TABLE DES ILLUSTRATIONS

Equations
quation 2-1 : Constantes de dissociation pour les diffrents sites protons de la matire humique (d'aprs Tipping, 1994) ________________________________________________________________________ 31 quation 2-2 : Raction d'change proton / mtal au niveau des sites de complexation avec la matire humique et constante d'quilibre associe ___________________________________________________ 31 quation 2-3 : Effet des interactions lectrostatiques sur les constantes de dissociation des protons de la matire humique ______________________________________________________________________ 32 quation 2-4 : Expression du facteur d'interaction lectrostatique ________________________________ 32 quation 2-5 : Relation entre les constantes d'affinit des mtaux pour les sites A (pKMHA) et B (pKMHB) _ 33 quation 2-6 : Constante de complexation mtal / substances humiques ___________________________ 37 quation 2-7 : Constantes d'quilibre pour les systmes bidendate et tridendate _____________________ 37 quation 2-8 : Raction de complexation entre le mtal et le ligand biotique________________________ 43 quation 2-9 : Raction de complexation du mtal au niveau du ligand biotique _____________________ 44 quation 2-10 : Expression de l'activit du complexe {ligand biotique / mtal}______________________ 45 quation 2-11 : Relation entre la rponse biologique et la concentration en mtal ____________________ 45 quation 2-12 : Relation entre la rponse biologique et l'activit du complexe {ligand biotique / mtal} __ 45 quation 2-13 : Gnralisation de la relation entre la rponse biologique et l'activit du complexe {ligand biotique / mtal} diffrentes allures de courbes dose / rponse _________________________________ 45 quation 2-14 : Expression de la rponse biologique au niveau 1 ________________________________ 47 quation 2-15 : Expression de l'activit du complexe {ligand biotique / mtal}______________________ 47 quation 2-16 : Linarisation de la rponse biologique en fonction de la concentration en mtal ________ 47 quation 2-17 : Extension de la linarisation de la rponse biologique en fonction de la concentration en mtal en fonction de l'allure de la courbe dose / rponse________________________________________ 47 quation 2-18 : Expression de la rponse biologique au niveau 1 en fonction de l'allure de la courbe dose / rponse______________________________________________________________________________ 47
Figures
Figure 1-1 : Devenir des particules sdimentaires dans le cours deau : graphique empirique de Hjulstrm (Hjulstrm, 1935) ______________________________________________________________________ 8 Figure 1-2 : Classement biologique des lments chimiques (Biological System of the Elements, extrait de Markert, 1994) ________________________________________________________________________ 20 Figure 1-3 : Evolution de l'activit biologique en fonction des concentrations en mtaux essentiels (A) et non essentiels (B) _________________________________________________________________________ 21 Figure 2-1 : Phnomnes de complexation des mtaux dans l'eau_________________________________ 23 Figure 2-2 : Mthodologie de fractionnement de la matire organique dissoute issue d'eaux du milieu naturel (d'aprs Ma et al., 2001) ________________________________________________________________ 26 Figure 2-3 : Classification de la matire organique dissoute (d'aprs Leenheer et Crou, 2003) _________ 28 Figure 2-4 : Reprsentation du systme des branchies _________________________________________ 41 Figure 2-5 : Aspect de diffrentes courbes dose-rponse thoriques, avec diffrentes valeurs de pente (avec n la valeur de la pente de la courbe dose-rponse) ______________________________________________ 46 Figure 2-6 : Raction de complexation mtal / ligand biotique (membranes des branchies)_____________ 48
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Figure 2-7 : Concentrations en Pb dans les cellules de l'algue Chlorella kesslerii, pH 6, aprs 50 min, lors dune exposition au plomb libre Pb2+ constante (pour des concentrations croissantes en Pb total et en acides fulviques (SRFA)). D'aprs Slaveykova et al., 2003. __________________________________________ 49 Figure 3-1 : Schmatisation du fonctionnement du BLM _______________________________________ 52 Figure 3-2 : Influence de la duret de l'eau sur la toxicit des mtaux envers les organismes vivants _____ 53 Figure 3-3 : Distribution de certaines espces inorganiques du cuivre en fonction du pH ______________ 55 Figure 3-4 : Accumulation de cuivre dans les branchies de Lepomis gibbosus exposs des concentrations proches des concentrations ltales (d'aprs Anderson et Spear, 1980) _____________________________ 58 Figure 3-5 : Dtoxication des branchies de poissons ayant subis une exposition au cuivre (d'aprs Anderson et Spear, 1980) ________________________________________________________________________ 59 Figure 3-6 : Reprsentation de la mortalit en fonction de laccumulation de cuivre sur les branchies ____ 60 Figure 3-7 : Influence des paramtres du BLM sur la toxicit du cuivre vis--vis de Daphnia magna. Sur les graphiques sont indiqus, en abscisse, les paramtres tests et, en ordonnes, la LC50 calcule et exprime en cuivre dissous. Calculs effectus avec le Cu-BLM pour Daphnia magna (Hydroqual, 2002). ___________ 63 Figure 3-8 : Modlisation de la complexation du cuivre (cuivre libre) avec la matire organique dissoute (eau des msocosmes, [Cu]init = 10 M) WinHumic V version 6____________________________________ 65 Figure 3-9 : Modlisation de la complexation du cuivre (cuivre libre) avec la matire organique dissoute (eau des msocosmes, [Cu]init = 0.39 M) WinHumic V version 6 __________________________________ 66 Figure 3-10 : Evolution de la toxicit du cuivre vis--vis de Pimephales promelas calcule au moyen du BLM (Hydroqual, 2002). Les caractristiques physico-chimiques du milieu employ pour les tests conduits sur l'pinoche Svecevicius et Vosyliene, 1996 ont t utilises. __________________________________ 67 Figure 3-11 : Distribution des concentrations en cuivre mesures dans les branchies des pinoches en prsence (1) ou non (2) de matires organiques dissoutes _______________________________________ 70 Figure 3-12 : Comparaison entre des mesures de la concentration en cuivre libre par ISE (Ion Selective Electrode) et des donnes obtenues par modlisation __________________________________________ 72
Tableaux
Tableau 1-1 : Concentrations de rfrence pour la Mer du Nord pour les mtaux dissous dans l'eau, sur les matires en suspension (MES) et dans les sdiments __________________________________________ 12 Tableau 1-2 : Concentrations de rfrence pour la Manche pour les mtaux dissous dans l'eau, sur les matires en suspension (MES) et dans les sdiments __________________________________________ 12 Tableau 1-3 : Concentrations de rfrence pour l'Atlantique pour les mtaux dissous dans l'eau, sur les matires en suspension (MES) et dans les sdiments __________________________________________ 12 Tableau 1-4 : Concentrations de rfrence pour la Mditerrane pour les mtaux dissous dans l'eau, sur les matires en suspension (MES) et dans les sdiments __________________________________________ 13 Tableau 1-5 : Concentrations en mtaux dans les matires en suspension (MES) et dissous dans l'eau: rfrences donnes par la littrature pour des cours d'eau rputs non-pollus _______________________ 13 Tableau 1-6 : Concentrations de rfrence en mtaux dans les matires en suspension (MES) pour la Seine 15 Tableau 1-7 : Concentrations de rfrence en mtaux dans les matires en suspension (MES) pour le bassin Artois-Picardie________________________________________________________________________ 15 Tableau 1-8 : Intervalles des concentrations mesures dans les sdiments de ruisseaux et dans les sols en fond de vallons sur le bassin Loire-Bretagne _____________________________________________________ 16 Tableau 1-9 : Concentrations mesures dans les alluvions anciennes sur le bassin Adour-Garonne. ______ 17 Tableau 1-10 : Concentrations de rfrence (nerlandaise) en mtaux dans les matires en suspension (MES) pour le Rhin __________________________________________________________________________ 17 Tableau 1-11 : Liste (non exhaustive) des lments essentiels et non essentiels et exemples de proprits des lments connus pour leur essentialit______________________________________________________ 19
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Tableau 2-1 : Dimension des jeux de donnes utiliss pour la calibration du Model V (partie complexation entre la MO et les cations mtalliques) _____________________________________________________ 33 Tableau 2-2 : Valeurs par dfaut des paramtres dcrivant les proprits de la matire organique (WHAM 1.0 - Model V) ___________________________________________________________________________ 34 Tableau 2-3 : Principales caractristiques des eaux tudies pour tester le WHAM, Model V (d'aprs Dwane et Tipping, 1998) ______________________________________________________________________ 36 Tableau 2-4 : Nouveaux paramtres utiliss dans le Model VI ___________________________________ 38 Tableau 2-5 : Etapes de l'interaction mtal / organisme et hypothses ncessaires la modlisation (d'aprs Campbell et al., 2002) __________________________________________________________________ 40 Tableau 3-1 : Qualification des eaux en fonction de leur duret __________________________________ 53 Tableau 3-2 : Mise en parallle des constantes dtermines pour Daphnia magna et Pimephales promelas 61 Tableau 3-3 : Caractristiques physico-chimiques de l'eau utilise pour la modlisation _______________ 62 Tableau 3-4 : Rcapitulatif des essais cotoxicologiques testant les effets du cuivre sur lpinoche ______ 67 Tableau 3-5 : Qualit de leau utilise pour la modlisation _____________________________________ 67 Tableau 3-6 : Caractristiques des aquariums utiliss au-cours du test _____________________________ 68 Tableau 3-7 : Paramtres physico-chimiques de l'eau des diffrents aquariums ______________________ 69 Tableau 3-8 : Suivi de la temprature, du pH et de l'oxygne dissous au cours du test _________________ 70 Tableau 3-9 : Concentrations en cuivre accumul au niveau des branchies des pinoches ______________ 70
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INTRODUCTION
La directive europenne 2000/60/CE tablit un cadre pour maintenir et amliorer la qualit des eaux dici 2015. Cette directive prsente, en particulier, une stratgie pour le contrle de la pollution par les substances les plus proccupantes en imposant de dfinir des normes de qualit. Ces normes de qualit sont des concentrations seuils qui ne doivent pas tre dpasses dans leau pour assurer la protection des cosystmes et de la sant humaine. Quatre mtaux font partie de la liste des substances prioritaires accompagnant cette directive : le cadmium, le plomb, le mercure et le nickel. L'ensemble des particularits des mtaux (prsence naturelle - Cf. point 1.1, essentialit - Cf. point 1.2.1, biodisponibilit - Cf. point 2, etc.) fait que lvaluation des risques lis leur utilisation diffre de celle des autres substances chimiques. De nouvelles mthodes prenant en compte ce particularisme ont commenc tre appliques dans les valuations des risques pour les mtaux au niveau europen2. C'est notamment le cas pour le cadmium, le nickel, le zinc, le chrome, le plomb et le cuivre, ces deux derniers faisant l'objet d'valuations des risques proposes par l'Industrie. Des modles permettant d'estimer la biodisponibilit des mtaux pour les organismes aquatiques, en fonction des caractristiques physico-chimiques des milieux (BLM : Biotic Ligand Models ), ont fait leur apparition dans ce contexte, et notamment pour le zinc, le nickel et le cuivre. Il est important de mieux apprhender des outils tels que les BLM afin de pouvoir porter des jugements critiques et tays sur leur ventuelle utilisation pour l'application de la directive cadre sur l'eau (i.e., dfinition et application des normes de qualit environnementale). Cette meilleure apprhension passe : par une tude bibliographique sur la biodisponibilit des mtaux comprenant des lments sur leur comportement dans l'eau (complexation inorganique - Cf. point 2.1 - et organique - Cf. point 2.2, affinit pour les organismes vivants - Cf. point 2.3) ainsi que sur le dveloppement des BLM (Cf. point 3), par des tudes exprimentales permettant, d'une part, de tester certaines hypothses des modles, dans des conditions de laboratoire (Cf. point 3.4) et, d'autre part, de tester les modles eux-mmes (Cf. point 3.5).
La majeure partie des exemples utiliss tout au long de ce rapport, aussi bien dans la partie analyse bibliographique que dans la section exprimentale, font rfrence au cuivre. En effet, l'INERIS, une tude en msocosmes, ralise sur ce mtal, a servi de support la ralisation des expriences exposes en fin de rapport. En outre, lvaluation des risques lis au cuivre, propose par l'Industrie la Commission Europenne, a conduit, entres autres, au dveloppement de BLM pour ce mtal. Ce rapport a pour thme principal la biodisponibilit des mtaux, et en particulier l'utilisation de modles permettant de l'valuer. La partie 2 traite ainsi du comportement des mtaux et de leur biodisponibilit pour les organismes vivants dans les milieux aquatiques tandis que la partie 3 repose sur la description et lutilisation de modles dits BLM . Il est galement ncessaire dintroduire galement les autres lments qui font des mtaux un groupe de substances chimiques particulier (partie 1), et notamment : leur prsence ubiquitaire la surface du globe. Les origines la fois naturelle et anthropique des mtaux ncessitent la diffrenciation des concentrations de fond (naturelle) de celles ajoutes par l'homme (point 1.1), le caractre essentiel de certains mtaux pour les organismes vivants (point 1.2.1), les phnomnes d'acclimatation, de slection et d'adaptation (point 1.2.2).
Evaluation des risques des substances existantes (Rglement CE/793/93)
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1. Gnralits sur les mtaux

1.1. Origine et devenir des mtaux dans lenvironnement
1.1.1. Apports telluriques naturels : rosion, transport, sdimentation Les mtaux sont naturellement prsents dans la crote terrestre. Les mtaux sont des lments lourds, concentrs dans le magma granitique. Depuis la formation de la Terre, ils suivent un cycle gochimique qui conduit une distribution htrogne de leurs concentrations la surface du globe (Garret, 2000). Les mtaux sont prsents dans tous les compartiments de lenvironnement, mais en gnral en quantits trs faibles (en traces). Nanmoins, des concentrations importantes peuvent tre mesures dans certains sites, tout particulirement autour des massifs granitiques. Lrosion de lcorce terrestre est susceptible denrichir les cours deau en lments mtalliques. En tte de bassin, les roches sont altres et dsagrges par laction mcanique de lrosion (agents mtoriques) et par lattaque des acides forms dans latmosphre (acide carbonique) ou issus de la dcomposition de la matire organique (acides humiques). Les mtaux fixs dans les roches sous forme doxydes ou de silicates sont peu altrables chimiquement : les oxydes et silicates mtalliques sont librs de la roche par rosion et transports sous forme de particules. Les mtaux prsents dans les roches sous forme de sulfures et de carbonates sont au contraire attaqus chimiquement et trs facilement dissous dans leau. Leau transporte en aval les dbris rocheux et les divers sels mis en solution. En plaine, lorsque le courant de leau devient insuffisant pour assurer le transport des particules rocheuses, celles-ci saccumulent dans le lit du cours deau : il y a sdimentation. Erosion, transport et sdimentation sont fonction du dbit de leau et de la taille des particules (Cf. Figure 1-1).
Figure 1-1 : Devenir des particules sdimentaires dans le cours deau : graphique empirique de Hjulstrm (Hjulstrm, 1935)
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Dans les conditions environnementales, les mtaux sont relativement peu solubles dans leau et restent majoritairement associs la phase solide. Les concentrations en lments mtalliques dans la phase aqueuse sont comparativement bien moindres par rapport celles dans la phase solide. Ainsi, le dpt des particules au fond du lit des cours deau conduit potentiellement une accumulation des lments mtalliques dans les sdiments. Ces particules solides sont plus ou moins riches en lments mtalliques selon la nature gologique du terrain dont elles sont issues. Quatre fractions minralogiques majeures peuvent tre distingues : carbonates (calcaires), quartz (silices), argiles (aluminosilicates), matire organique. Comparativement aux terrains siliceux, les terrains carbonats sont pauvres en lments mtalliques. Les mtaux (lectropositifs) sont prfrentiellement associs chimiquement aux aluminosilicates (chargs ngativement). Les mtaux inclus dans la matrice rocheuse des particules sdimentaires ne sont pas susceptibles de se dissoudre directement dans leau. Les mtaux dissous dans leau, notamment ceux apports ultrieurement par lactivit humaine, ont tendance sadsorber la surface des particules en suspension. Ces mtaux adsorbs peuvent tre remis en solution en cas de changements des conditions physico-chimiques du milieu (Windom, 1988). Ladsorption sur les particules dpend de la surface expose et donc de la granulomtrie du sdiment. Plus les particules sdimentaires sont petites et plus la surface de contact avec le milieu est importante. Les mtaux sadsorbent en particulier trs facilement sur les argiles, trs fines particules daluminosilicates. Ladsorption est galement favorise lorsque les concentrations en matire organique sont leves (Cf. partie 2.2). 1.1.2. Autres apports dorigine naturelle Des apports par la voie atmosphrique existent galement : volcanisme, rosion et transport oliens de poussires, transport darosols dorigine ocanique, feux de forts, etc. Certaines eaux souterraines, en particulier dans les rgions volcaniques ou les nappes profondes, sont trs riches en mtaux. Pour le cas particulier des eaux marines, lactivit tectonique et le volcanisme sous-marins sont galement lorigine dun apport en lments mtalliques. 1.1.3. Apports anthropiques Du fait de leurs proprits physiques intressantes (bons conducteurs de chaleur et dlectricit, caractristiques de duret, de mallabilit, possibilits dalliages, proprits catalytiques, etc.) les mtaux sont trs largement utiliss par lhomme. Cette utilisation na apport aucun changement quant aux quantits de mtaux prsentes sur Terre : lactivit humaine ne cre ni ne dtruit des lments mtalliques3. En revanche, elle modifie trs significativement leur rpartition et les formes chimiques sous lesquelles ils sont prsents dans lenvironnement (Miquel, 2001). Les gisements et les filons mtallifres sont exploits, parfois de trs longue date. Mais lactivit minire peut tre lorigine dune dispersion des mtaux dans lenvironnement. Le milieu aquatique, notamment, peut tre contamin via les eaux de ruissellement. Suite un durcissement des rglementations mais aussi aux efforts importants des industriels euxmmes, les missions industrielles en mtaux ont fortement diminu. Toutefois lindustrie est toujours responsable de la majorit des rejets directs dans leau. Par ailleurs, le traitement des minerais et lindustrie mtallurgique restent lorigine dmissions atmosphriques importantes. Les mtaux transports par latmosphre peuvent tt ou tard contaminer les milieux aquatiques
La transmutation dun lment vers un autre, ncessite dintervenir directement sur le noyau atomique. Cela requiert des nergies considrables et nest effectu que pour des applications nuclaires trs spcifiques et trs contrles.
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La combustion du charbon et du fioul lourd, souvent chargs en mtaux, est aussi responsable dune dispersion atmosphrique significative de ces derniers. Lutilisation du plomb comme antidtonant dans lessence a constitu un mode de contamination majeur de lenvironnement par cet lment. Les rejets associs la mise en dcharge ou lincinration des produits arrivs en fin de vie sont galement notables : par exemple pour le plomb et le cadmium dans les piles, batteries et accumulateurs ; pour le mercure dans les instruments de mesure (e. g. thermomtres, baromtres). Les activits agricoles sont galement lorigine dune contamination de lenvironnement. Le sulfate de cuivre (bouillie bordelaise) est utilis pour traiter les vignes et les arbres fruitiers. Larsniate de plomb ou des drivs mercuriels ont t utiliss dans le pass comme pesticides. Certains engrais, fabriqus partir de minerais riches en phosphates, peuvent aussi avoir de fortes concentrations en cadmium prsent en impuret. Les boues des stations dpuration, les composts dordures mnagres ou le lisier utiliss pour amender les surfaces agricoles sont galement susceptibles dtre contamins par les mtaux. Certaines utilisations posent encore des problmes particuliers : par exemple, dispersion des plombs de chasse, usure des pneus (le zinc, accompagn du cadmium comme impuret, est utilis comme durcisseur pour la fabrication des pneus). 1.1.4. Devenir des mtaux dans lenvironnement aquatique Les diffrentes formes chimiques sous lesquelles peuvent tre retrouvs les mtaux, dpendent de la physico-chimie du milieu (Cf. partie 2). Par exemple, les mtaux dissous peuvent prcipiter en cas de changements de pH ou de conditions redox, ce qui peut tre le cas au niveau des zones de confluences de cours deau par exemple. A mesure que le cours deau grandit, la concentration en carbone organique dissous augmente. Ceci permet la formation de complexes stables entre les mtaux et la matire organique. Par ailleurs, par lactivit bactrienne, les conditions peuvent devenir anoxiques et rductrices ; les mtaux tendent alors prcipiter sous forme de sulfures mtalliques. Cest galement dans ces conditions rductrices que le mercure est mthyl par les bactries rductrices de sulfate. Le mercure mthyl est trs fortement accumul par les organismes vivants. Le cas particulier du devenir des mtaux dans les eaux saumtres et sales des estuaires et du milieu marin, peut poser des problmes particuliers qui ne seront pas traits dans ce rapport. 1.1.5. Dtermination des concentrations naturelles en mtaux Il est essentiel de distinguer la concentration naturelle en mtaux de la concentration ambiante. La concentration naturelle (ou concentration de fond) nest imputable quaux phnomnes naturels de dispersion exposs dans les paragraphes 1.1.1 et 1.1.2. La concentration ambiante inclut les concentrations naturelles auxquelles sajoute la pollution induite par les activits humaines telles celles exposes dans le paragraphe 1.1.3. Les concentrations naturelles sont en gnral dtermines par des prlvements en des sites de rfrence, prservs de la pollution, ou grce la modlisation partir de donnes gologiques et hydrologiques.
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1.1.5.1.
Concentrations de rfrence
Il est en gnral problmatique de trouver des sites prservs de toute pollution en Europe. Des pollutions par les mtaux peuvent tre mises en vidence par carottage dans des couches sdimentaires parfois trs profondes, tmoignages dactivits mtallurgiques trs anciennes (ElbazPoulichet et al., 2001). Mme pour les sites prservs de toute pollution directe, on ne peut pas exclure quintervienne la pollution diffuse, notamment la pollution atmosphrique. Plutt que des concentrations vritablement naturelles, ce sont en pratique des concentrations ambiantes qui sont mesures. Elles peuvent toutefois tre utilises comme concentrations de rfrence, utiles pour dtecter une source ponctuelle de pollution. Il est par contre beaucoup plus problmatique d'valuer l'ampleur d'une pollution diffuse par les mtaux. 1.1.5.1.1 Concentrations de rfrence pour les eaux marines
Des concentrations ambiantes pour les 4 mtaux lists dans la Directive Cadre, compiles par l'Ifremer, sont donnes titre indicatif dans les tableaux suivants (Tableau 1-1 Tableau 1-4). Elles ne reprsentent pas vritablement des concentrations naturelles : les apports dus la pollution diffuse, notamment atmosphrique, ne peuvent en effet pas tre exclus. Dans la mesure du possible, pour la dtermination de concentrations de rfrence, il est ainsi prfrable de privilgier les mesures effectues au large, relativement prserv de la pollution. Les concentrations en mtal dissous sont variables selon les mers. Ces variations peuvent s'expliquer par les diffrences sur le temps de rsidence des eaux (qui dpend notamment des courants et de l'enclavement des masses d'eau) et par les diffrences dans la production primaire (plus importante dans les eaux froides qui sont mieux oxygnes). En pratique, le degr d'industrialisation des pays avoisinants a galement une influence4. Les concentrations dans les sdiments et dans les matires en suspension dpendent de la physicochimie et de la granulomtrie des particules solides. L'eau marine est gnralement peu charge en matire en suspension ; en surface il s'agit surtout de phytoplancton. Lors de bloom algaux, l'adsorption des polluants sur le phytoplancton peut tre importante et influencer en particulier la distribution des mtaux : d'une part, la proportion de mtal dissout dans la phase aqueuse sera ainsi respectivement moins importante par rapport au mtal adsorb ; d'autre part, le mtal peut contaminer la chane alimentaire via l'ingestion du phytoplancton. Les diffrences de production primaire peuvent tre l'origine de variations spatio-temporelles sur les concentrations mesures : La densit du phytoplancton est maximale au printemps et en t. Ces variations saisonnires influenceront sur l'anne la distribution des mtaux entre les diffrentes phases: aqueuse, solide et biotique. En profondeur, labsence de production primaire et la minralisation des matires en suspension (phytoplancton qui meurt ou pelotes fcales mises par le zooplancton) se traduisent par une augmentation de la fraction dissoute dans l'eau.
En rsum, il existe des disparits gographiques sur les concentrations naturelles en mtaux dans l'eau marine. Mais il n'est en pratique pas possible de faire abstraction de la contamination par les apports anthropiques. En outre les niveaux mesurs dans l'eau dpendent des variations saisonnires et de la profondeur du prlvement. Les mesures dans les sdiments et les matires en suspension dpendent quant elles de la nature des particules solides.
C'est particulirement le cas pour le mercure, dont les apports sont principalement d'origine atmosphrique, et dont la contamination est principalement conditionne par les missions et les vents dominants. Les ocans du Nord sont ainsi plus contamins au mercure que les ocans du Sud.
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Tableau 1-1 : Concentrations de rfrence pour la Mer du Nord pour les mtaux dissous dans l'eau, sur les matires en suspension (MES) et dans les sdiments
Cd Hg Pb Ni Eau (ng/L) 5.6 - 19.1 (au large)
Balls, 1985
MES (g/g)
Sdiments (g/g) 0.10 - 0.30 (au large, tamis 63 m)

Laane et al., 1999
Coquery et Cossa, 1995 Brgmann et al., 1985, Haarich et al., 1993 Mart et Nuernberg, 1986, Haarich et al., 1993
< 0.05 - 0.80 (au large) 30 - 60
Tappin et al., 1995, Haarich et al., 1993 Haarich et al., 1993
15 - 64 40 - 72
35 - 135 (mer des Wadden),

Hagner, 2002 Lichtfuss et Brmmer, 1981
100 - 900
20
Tableau 1-2 : Concentrations de rfrence pour la Manche pour les mtaux dissous dans l'eau, sur les matires en suspension (MES) et dans les sdiments
Eau (ng/L) Cd Hg
Tappin et al., 1993
MES (g/g)
Sdiments (g/g)
(RNO sed 98)
5.6 - 22.48 0.1 - 1.3 (au large) 12 - 60
1.01
Cossa et al., 1994, Cossa et Fileman, 1991
Pb Ni
Brgmann et al., 1985, Statham et al., 1999, JF Chiffoleau (comm pers) Statham et al., 1999, JF Chiffoleau (comm pers)
JF Chiffoleau (comm pers)
21 - 33 18 - 20
3 - 35 3 - 33
100 - 400
JF Chiffoleau (comm pers)
rmannsson et al., 1985, RNO sed 2001
Tableau 1-3 : Concentrations de rfrence pour l'Atlantique pour les mtaux dissous dans l'eau, sur les matires en suspension (MES) et dans les sdiments
Eau (ng/L) Cd 2.25 - 13.49 (large, surf.) 30.35 (large, prof: 800 m) 39.34 (large, prof: 3300 m)
(B. Boutier, comm pers)
MES (g/g)
Sdiments (g/g) 0.10 - 0.66 (Golfe de Gascogne, plateau continental)

Hg Pb
0.1 - 2.0 (Golfe de Gascogne)

Cossa et al., 1992 Patterson, 1983, Lambert et al., 1991
< 0.05 - 0.52 (Golfe de Gascogne)

(donnes RNO)
30 - 40 (prof: 0-200 m) Shaule et 5 (prof: 200-4000 m) Shaule et

Patterson, 1983,
(donnes PNOC Atlantique)
6 - 32 (Golfe de Gascogne)
(RNO sed 99)
Ni
11 - 49 (Golfe de Gascogne, Sud Bretagne) Boutier et al., 1993 120 - 240 (prof: 0-200 m)
Bruland et Franks, 1983, Kremling, 1985, Kremling et Pohl, 1989
(JF Chiffoleau, comm pers)
29 (Golfe de Gascogne)
Turekian et Wedepohl, 1961
79
Yeats et Campbell, 1983, Sclater et al., 1976
180 - 400 (prof: 200-4000 m)
(RNO sed 99)

Kraepiel et al., 1997
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Tableau 1-4 : Concentrations de rfrence pour la Mditerrane pour les mtaux dissous dans l'eau, sur les matires en suspension (MES) et dans les sdiments
Eau (ng/L) Cd Hg 5.62 - 12.37 (au large, en surface)
Morley et al., 1990
MES (g/g)
Sdiments (g/g) 0.068 (au large)
(Donnes du programme UE, Eros2000)
< 0.05 - 0.50 (au large, Golfe du Lion) 31 - 120 (prof: 0-200 m)
(Donnes du programme UE, Eros2000) (JF Chiffoleau, comm pers)
< 0.05 - 0.2 (au large, Golfe du Lion) 6 - 30
Pb
Nicolas et al., 1994, Laumond et al., 1984
Nicolas et al., 1994, Laumond et al., 1984
22 - 44 (prof: 200-4000 m) 130 - 260 (prof: 0-200 m)
17 - 64 (Golfe du Lion)
(RNO sdiment)
Ni
(JF Chiffoleau, comm pers), Spivack et al., 1983
29 - 130 (prof: 0-200 m)

9 - 44
240 - 300 (prof: 200-4000 m)

Boyle et al., 1985
Nolting et Helder, 1990

Zhang et Wollast, 1990
1.1.5.1.2
Concentrations de rfrence pour les eaux continentales
Des concentrations en mtaux pour les fleuves rputs peu pollus peuvent tre trouves dans la littrature, aussi bien dans les matires en suspension (MES) que dissous dans l'eau. Ces concentrations sont prsentes dans le Tableau 1-5.
Tableau 1-5 : Concentrations en mtaux dans les matires en suspension (MES) et dissous dans l'eau: rfrences donnes par la littrature pour des cours d'eau rputs non-pollus
Cd MES (g/g) 0.3 - 0.8 (Thomas et Meybeck, 1992) Dissous (ng/L) 1 - 3 (Thomas et Meybeck, 1992) 10 - 350 (Laane, 1992) 2 (van de Berg et Zwolsman, 2000) 20 (Mrian, 1991) 2 - 130 (Laane, 1992) 1 (van de Berg et Zwolsman, 2000) 20 - 40 (Thomas et Meybeck, 1992) 50 - 8400 (Laane, 1992) 70 (van de Berg et Zwolsman, 2000) 200 (Frstner et Wittman, 1983) 500- 13300 (Laane, 1992) 1200 (van de Berg et Zwolsman, 2000) 7000 (Mrian, 1991) 300 (Frstner et Wittman, 1983)
Hg Pb 20 - 40 (Thomas et Meybeck, 1992)
Ni
Les valeurs rapportes dans Laane, 1992 sont extrmement variables. Elles sont principalement issues de deux tudes celle de Zuurdeeg et al., 1992 et celle de Bewers et Yeats, 1989. Dans l'tude de Zuurdeeg et al., 1992, commande par le ministre de l'environnement nerlandais, 11740 donnes ont t compiles pour les eaux naturelles (i.e., a priori peu pollues) situes dans des rgions gologiquement comparables au Pays Bas (rgions sdimentaires allant du Nord de la France la Bilorussie). Ces donnes proviennent majoritairement de littrature grise (non publie). Pour la slection de ces donnes, il a t vrifi que les chantillons prlevs taient issus de zones pargnes de toute pollution directe (situes plus de 50 km d'industries ou d'activits agricoles intensives), et rpondaient au critre d'oligotrophie (concentration en oxygne > 8 mg/L, faible concentration en azote et en matire organique: DBO5 < 1 mg/L). Compte tenu de 13/85
l'volution des exigences qualitatives pour l'analyse, les donnes antrieures 1978 ont t exclues5. Pour cette mme raison, des donnes de la littrature ont t slectionnes par rapport la rputation des laboratoires, dans l'tude de Bewers et Yeats, 1989. Il est difficile de savoir si la variabilit des concentrations observes reflte une relle variabilit des concentrations naturelles, ou de protocoles de prlvement et d'analyse perfectibles. Les valeurs provenant de van de Berg et Zwolsman, 2000 ont t finalement retenues par les autorits nerlandaises (Struijs et al., 2000). Thomas et Meybeck, 1992 ont calcul la moyenne des concentrations en mtaux dans les fleuves considrs comme peu pollus (Amazone, Orenoque, Parana, Mackenzie, Huang He, Purari) partir de publications prcisant l'utilisation de mthodes ultra-propres. Les valeurs de Mrian, 1991 et de Frstner et Wittman, 1983 sont cites dans Baqu et al., . Les valeurs fondes sur des moyennes sont relativement basses. Des concentrations plus importantes peuvent tre attendues localement, pour les petits cours d'eau drainant des terrains fortement minraliss. Pour les fleuves plus importants les concentrations en mtaux diminuent rapidement vers l'aval par effet de dilution (dans l'eau, et dans les sdiments par apport de matriaux faiblement minraliss). La distribution du mtal entre la phase aqueuse et la phase solide peut varier dans le temps et l'espace. Elle dpend des facteurs physico-chimiques. Pour la France, Meybeck, 1986 a tudi la chimie de l'eau de 232 bassins versants monolithologiques pour 25 diffrents types de roches. Par exemple, les eaux draines par un socle cristallin ou basaltique sont caractrises par un faible pH et une faible charge anionique ce qui favorise la dissolution des mtaux dans l'eau. Les pisodes forte pluviomtrie conduisent au transport de grandes quantits de matires en suspension sur lesquelles les mtaux vont avoir tendance s'adsorber. Les variations saisonnires de la population en phytoplancton, sur lequel les mtaux sont galement susceptibles de s'adsorber, influent galement sur la distribution des mtaux. 1.1.5.1.2.1 Seine - Normandie Pour le programme PIREN Seine6, la concentration naturelle en mtaux a t value partir de prlvements (particules en suspension et sdiments principalement) sur des ruisseaux forestiers pargns par la pollution7. Le lit lithologique du bassin de la Seine est trs homogne : il est constitu 97% de roches sdimentaires et, en particulier, 78% de carbonates. Seule la source de lYonne, situe dans le Morvan, est en terrain siliceux. Du fait de cette homognit gologique, la gochimie pour les sites de rfrence peut tre considre comme reprsentative de celle pour lensemble du bassin. Les carbonates tant trs pauvres en lments mtalliques, les apports naturels en mtaux via lrosion tellurique sont donc faibles pour la Seine. En outre le site archologique (dpts vieux de 5000 ans) prs de Bercy permet davoir une ide des concentrations prhistoriques. Les concentrations de fond dtermines partir des ruisseaux forestiers sont similaires celles releves sur le site de Bercy et galement aux concentrations de fond dtermines sur des terrains calcaires dAmrique du Nord (Horowitz et al., 1999).
Les mesures dans l'eau (fraction dissoute) sont particulirement dlicates et ncessitent des protocoles de prlvement et d'analyse ultra-propres (Cf Monbet et Coquery, 2003). C'est rarement le cas pour les tudes antrieures 1980. Programme Interdisciplinaire de Recherche Environnementales sur la Seine : http://www.sisyphe.jussieu.fr/internet/piren/ Il faut toutefois noter que les couverts forestiers, compte tenu de la plus grande surface de contact offerte par le feuillage aux dpts ariens, ne sont pas ncessairement prservs des pollutions diffuses dorigine atmosphrique (Biger, E., 1996). Sajoutent cela les biais introduits par lactivit forestire (djections doiseaux, nids, ruches, etc.) et lapport important en carbone organique (Azimi, S., 2000).
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Meybeck et al., 2003 ont estim les concentrations naturelles dans la Seine partir de prlvements dans des cours d'eau situs en tte de bassin (50 lithologies homognes). Ces prlvements sont considrs comme relativement prservs de la pollution anthropognique directe. Ce sont les particules sdimentaires en suspension qui ont t analyses. L'analyse se fait aprs une digestion totale triacide (HF/HClO4/HNO3) 200C: la totalit des particules sdimentaires est donc dissoute, ce qui n'est pas reprsentatif de la fraction biodisponible. Les valeurs donnes dans le Tableau 1-6 sont ajustes pour une concentration en aluminium moyenne de 3.3 0.2 % (normalisation selon la taille des particules). Les valeurs de rfrence retenues antrieurement par l'agence de l'eau Seine-Normandie (AESN), galement prsentes dans le Tableau 1-6, sont sensiblement diffrentes. Elles ont t calcules pour l'ensemble du bassin Seine-Normandie par une mthode statistique utilisant la distribution des rsultats par classes de concentrations. Il sagit donc de concentrations ambiantes (pouvant intgrer des apports anthropiques) plutt que de concentrations vritablement naturelles (Pereira-Ramos, 1989).
Tableau 1-6 : Concentrations de rfrence en mtaux dans les matires en suspension (MES) pour la Seine
MES (g/g), Meybeck et al., 2003 Cd Hg Pb Ni 0.22 0.05 0.03 0.015 20 3 16 2 MES (g/g), rfrence AESN, Pereira-Ramos, 1989 0-1 0 - 0.1 37.5 12.5
1.1.5.1.2.2 Artois Picardie Le bassin Artois-Picardie draine galement majoritairement des terrains carbonats. Les concentrations de rfrence retenues par l'agence de l'eau Artois-Picardie (AEAP) sont prsentes dans le Tableau 1-7. Elles sont dtermines partir des valeurs les plus basses obtenues parmi les stations de mesures du bassin (asymptote basse de la distribution statistique des concentrations mesures). Il sagit l encore de concentrations ambiantes plutt que de concentrations naturelles.
Tableau 1-7 : Concentrations de rfrence en mtaux dans les matires en suspension (MES) pour le bassin Artois-Picardie
Cd Hg Pb Ni MES (g/g), rfrence AEAP 1.0 0.2 40 -
1.1.5.1.2.3 Loire Bretagne Dautres bassins ont des gochimies naturelles plus complexes. En effet, en cas de prsence dun gisement ou dun filon mtallifre, la concentration dun mtal peut tre localement importante. Parce que ces sites peuvent prsenter un intrt pour lexploitation minire, le BRGM8 et la SNEA (P)9 ont procd, entre 1975 et 1993, un inventaire des formations gochimiques en France. Des donnes gochimiques sont ainsi disponibles pour les principaux mtaux dintrt mtallurgique (17 lments ; le mercure et luranium nen font nanmoins pas partie). Ces donnes ont t recueillies dans les sdiments de ruisseaux et dans les sols en fond de vallons (voir Tableau 1-8).
8 9
Bureau de Recherches Gologiques et Minires Socit Nationale Elf Aquitaine (Ptroles)
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Les rsultats de cet inventaire minier ont t utiliss pour tablir un atlas gochimique du bassin Loire-Bretagne (Leduc et al., 1996). Prs du tiers (235000 points de prlvements) de la superficie du bassin Loire-Bretagne (en priorit dans les massifs cristallins, a fort potentiel mtallique, et au dtriment des bassins sdimentaires, qui sont a priori faiblement minraliss) a t couvert dans le cadre de cette prospection.
Tableau 1-8 : Intervalles des concentrations mesures dans les sdiments de ruisseaux et dans les sols en fond de vallons sur le bassin Loire-Bretagne
Sdiments de ruisseaux, sols en fond de vallons (g/g), donnes BRGM & SNEA (P) 1 - 776 6 - 953 1 -213
Cd Pb Ni
Cet inventaire met en vidence une trs grande htrognit gochimique du bassin de la Loire et des concentrations en mtaux qui peuvent tre localement trs importantes. 300 400 sites prsentant des anomalies gochimiques naturelles ont t recenss, notamment lors de la prsence de filons mtalliques, ou encore, l o les roches d'origine ruptive prdominent. Globalement, le plomb et le cadmium (souvent associs sous forme de sulfures dans les minerais) se rencontrent surtout aux bordures du Massif central (nord du dpartement de la Haute Loire, aux bordures nord et nord-est du Massif central) mais aussi dans le Morvan, et dans le Massif armoricain (prs de la limite nord du dpartement de Loire-Atlantique, sur la presqu'le de Plougastel, au nord-est de Saint-Brieuc). Le nickel se retrouve surtout dans le Massif central (coules basaltiques du Velay, Cantal, Chane des Puys), dans les roches volcaniques du Tertiaire et du Quaternaire (hauts bassins de la Loire et de l'Allier), la bordure est du Morvan, sur la rive droite du Maine, au sud-est de la zone BretagneVende. Mais il est difficile de synthtiser les rsultats de cette tude et de donner des tendances globales. Les concentrations mesures peuvent varier fortement, et ce, l'chelle du kilomtre. Ainsi, par exemple, des concentrations en plomb jusqu' 953 g/g ont t mesures dans des roches non mtamorphiques du Palozoque infrieur du Massif Armoricain. Pourtant la concentration mdiane parmi les 22 475 prlvements effectus dans ce type de roche n'est que de 28 g/g. A contrario, la concentration mdiane parmi les 1835 prlvements effectus dans les roches du Mzoque (Trias, Jurassique et Crtac) est de 78 g/g, mais la concentration maximale mesure dans ce type de roche n'excde pas 395 g/g. 1.1.5.1.2.4 Garonne Pour le bassin de la Garonne, des enrichissements mtalliques spcifiques certaines formations gologiques ont galement t observes localement. Une tude gochimique de ce bassin a t ralise par l'universit Paul Sabatier de Toulouse (Baqu et al., ). Le mercure n'y a pas t considr. L'tude a rvl que les concentrations en mtaux mesures dans les rivires taient principalement induites par la pollution diffuse. Compte tenu de la gologie du bassin, certains sites sont aussi naturellement plus riches en lments mtalliques. Des alluvions anciennes (sur diffrentes strates gologiques anciennes) ont t prleves proximit des rivires. Le Tableau 1-9 donne une ide de la variabilit des concentrations naturelles entre les diffrents sites. Le site de Salat se singularise ainsi par une forte concentration en cadmium et en plomb.
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Tableau 1-9 : Concentrations mesures dans les alluvions anciennes sur le bassin Adour-Garonne.
Concentrations dans les alluvions anciennes (g/g) Agout Gers Garonne Brax Garonne Muret Arige (amont) Salat Garonne aval St Gaudens
0.6 ; 0.6 29.3 ; 25.4 59.9 ; 52.4
0.7 ; 0.5 0.4 0.6 ; 0.7 0.7 ; 0.5 0.2 ; 0.2 2.1 ; 3.0 Cd 43.6 ; 15.7 20.6 18.6 ; 30.1 30.1 ; 24.6 9.4 ; 16.2 222.2 ; 324.3 Pb 44.9 ; 25 27.7 34.3 ; 45.9 59.3 ; 49.7 32.9 ; 44.5 52.5 ; 52.0 Ni Pour certains sites, les prlvements ont t effectus sur deux strates gologiques (deux valeurs)
1.1.5.1.2.5 Rhin Le Rhin est majoritairement aliment par la fonte des glaciers alpins en t, alors quen hiver ce sont le lessivage des plaines par la pluie et les eaux de ruissellement qui apportent la plus grosse contribution aux eaux du fleuve. Une variation saisonnire de la gochimie du Rhin est ainsi observe (van der Weijden et Middelburg, 1989). Pour ces derniers cas, il est beaucoup plus difficile de choisir des sites de rfrence reprsentatifs de lensemble du bassin et sur lensemble de lanne. Le Tableau 1-10 prsente des valeurs extraites de l'tude de Zuurdeeg et al., 1992. Elles ont t calcules sur la base de MES comprenant 20% de matire organique, et partir de prlvements raliss dans des sdiments datant de l'poque mdivale, proximit d'Utrecht (Pays Bas). Ces valeurs issues de mesures sur sdiments anciens intgrent les concentrations sur une longue priode, ce qui permet de lisser les variations saisonnires. Elles peuvent donner une ide des concentrations naturelles attendues prs de l'embouchure du Rhin, l o les particules sdimentaires sont dilues par des matires faiblement minralises. Mais, il faut probablement s'attendre des concentrations naturelles plus fortes et variables en tte de bassin.
Tableau 1-10 : Concentrations de rfrence (nerlandaise) en mtaux dans les matires en suspension (MES) pour le Rhin
MES (g/g), Zuurdeeg et al., 1992 Cd Hg Pb Ni 0.23 0.15 21 41
1.1.5.1.2.6 Rhne - Mditerrane Il n'y a pas, notre connaissance, d'tudes publies permettant de dfinir des concentrations de fond pour le bassin versant du Rhne. Signalons tout de mme le programme ORME (Observatoire Rgional Mditerranen sur lEnvironnement), en cours, pour lequel des tudes sur la gochimie du bassin versant du Golfe du Lion devraient tre ralises.
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1.1.5.2. 1.1.5.2.1
Modlisation gochimique Apports telluriques
La gochimie dun cours deau, et en particulier les concentrations naturelles en mtaux, sexpliquent, nous lavons vu (Cf. point 1.1.1), en grande partie par lrosion des roches en tte de bassin. La composition naturelle dun fleuve est donc conditionne par la lithologie de son bassin versant, cest dire par la nature gologique des terrains drains par le fleuve. En Grande Bretagne, pour plusieurs bassins versants aboutissant la Mer d'Irlande, Ridgway et al., 2003 ont mis en vidence une trs bonne corrlation entre les concentrations prdites partir de la lithologie et les concentrations mesures dans des cours deau de rfrence, pargns de toute pollution. Les proportions relatives des diffrents lments traces constituent une signature gochimique caractristique dune lithologie. Par des analyses multifactorielles on peut tudier les relations existant entre ces signatures gochimiques et les donnes gologiques, gographiques, etc. et identifier des traceurs caractristiques (Selinus et Esbensen, 1995 ; Rantisch, 2000). Il est ainsi possible de prdire les apports naturels dorigine tellurique (Ridgway et al., 2003) :

dune part en dterminant les signatures gochimiques pour chaque lithologie dun bassin, et dautre part en tenant compte des proportions des diffrents types de lithologies rencontres sur un bassin (pour pondrer leur contribution la gochimie gnrale du cours deau).
Les signatures gochimiques peuvent tre suivies et compares en diffrents points du bassin et au cours du temps. Les excs ventuellement observs entre les concentrations prdites et les concentrations effectivement mesures peuvent tre attribus une influence anthropique. En pratique, il est difficile de recenser toutes les lithologies susceptibles dtre rencontres sur un bassin. De larges variations spatiales sont en effet couramment observes. 1.1.5.2.2 Autres apports
Les traceurs chimiques ou isotopiques permettent didentifier plus particulirement la contribution de certaines sources. Certains lments ou isotopes sont en effet caractristiques dune rgion gologique (Ngrel et al., 2003). Il est galement possible de prendre en compte les apports atmosphriques en analysant les eaux de pluies en diffrents points du bassin versant. La proportion dlments provenant des arosols marins peut tre value en utilisant les chlorures comme traceur (en faisant lhypothse que les chlorures sont exclusivement dorigine marine). On considre que les lments qui ne concordent pas avec les concentrations dans leau de mer sont dorigine anthropique (Markich et Brown, 1998). Par ailleurs, le 7Be peut tre utilis comme traceur de la fraction deau apporte par ruissellement direct. Le 7Be est en effet un lment radioactif naturel produit dans latmosphre et entran par les eaux de pluies. Les apports de 7Be dans les eaux de surface sont donc fonction de lintensit et de la frquence des pluies (Tessier et al., 2002).
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1.2. Evolution des organismes en prsence des mtaux

1.2.1. Le caractre essentiel de certains mtaux Les organismes vivants ont volu en prsence des lments mtalliques. Certains mtaux sont mme essentiels aux processus biologiques. Les lments mtalliques ont la proprit de se fixer sur des protines et ainsi de modifier la structure molculaire et le mode d'action de ces dernires. Ces modifications de structure peuvent tre essentielles la bonne fonctionnalit de certaines protines (enzymes, pigments respiratoires), ou au contraire induire un effet toxique en les inactivant. Les organismes sont capables, dans une certaine mesure, dutiliser et de rguler les concentrations en mtaux qui leur sont essentiels (Cf. partie 1.2.2). Des effets toxiques apparaissent lorsque cette rgulation ne peut plus avoir lieu. Il est important de diffrencier les mtaux qui sont essentiels la vie de ceux qui ne le sont pas ou dont on ne connat pas de proprit vitale pour au moins une catgorie d'organismes. En effet, le caractre essentiel d'un mtal dpend aussi des organismes : un mtal donn pouvant tre essentiel un organisme tout en ne l'tant pas pour d'autres. Le Tableau 1-11 propose une liste des mtaux prsentant un intrt pour les organismes vivants.
Tableau 1-11 : Liste (non exhaustive) des lments essentiels et non essentiels et exemples de proprits des lments connus pour leur essentialit
Proprits connues Impliqu dans le mtabolisme du glucose (insuline) Prsent dans la vitamine B12 intervenant dans la formation de l'hmoglobine Prsent dans les cytochromes et l'hmocyanine, des molcules impliques dans la Cuivre (Cu) respiration cellulaire Fer (Fe) Prsent dans l'hmoglobine pour le transport de l'oxygne Prsent dans la thyroxine et li aux composants assurant le bon fonctionnement du systme Iode (I) thyrodien Rle dans le mtabolisme des sucres (pyruvate carboxylase) Manganse (Mn) Impliqu dans la synthse des acides gras et des glycoprotines Impliqu dans les transferts d'lectrons Molybdne (Mo) La fixation de l'azote est aussi couple une raction au molybdne Nickel (Ni) Composant de l'urase et fait donc partie du cycle du CO2 Slnium (Se) Active la glutathion peroxydase pour l'limination des radicaux libres Rgulation des messages intracellulaires Vanadium (V) Cofacteur d'enzymes impliques dans le mtabolisme nergtique Agent thrapeutique possible pour les diabtes Ncessaire au fonctionnement des dshydrognases, aldolases, isomrases, transphosphorylases, ARN et ADN polymrase, anhydrase carbonique, Cu-Zn superoxyde Zinc (Zn) dismutase (et autres) Mtaux non essentiels : Antimoine (Sb) ; Argent (Ag) ; Arsenic (As) ; Cadmium (Cd) ; Etain (Sn); Mercure (Hg) ; Plomb (Pb) ; Thallium (Tl) Mtal Chrome (Cr) Cobalt (Co)
Les lments prsents dans le Tableau 1-11 ont t ajouts la liste des lments essentiels au fur et mesure de la dcouverte de leur implication au cur de processus biologique, c'est dire de manire exprimentale. Une approche empirique a galement t mise au point pour prdire le caractre d'essentialit d'un lment. Ce systme a t ralis suivant une dmarche similaire celle adopte en son temps par les chimistes Mendeleyev et Meyer (1869) lors de l'invention de leur classement priodique des lments, bas sur un certain ordre dans l'volution de leurs proprits caractristiques. Les proprits dun mtal sont conditionnes en particulier par sa charge ionique, son lectrongativit (qui influe sur lassociation avec dautres lments), son rayon atomique (encombrement strique). Les mmes variations que l'on observe pour ces caractristiques physiques et chimiques influent aussi sur les proprits biologiques, la forme chimique et les fonctions possibles des lments. Aprs plusieurs essais de classification biologique des lments 19/85
Mtaux essentiels
pour les ions mtalliques (Nieober et Richardson, 1980) un systme biologique des lments a t mis au point : Biological System of the Elements ou BSE (Markert, 1994). De cette premire vraie tentative de systmatisation des lments selon leurs fonctions biologiques rsulte le diagramme suivant (Figure 1-2).
Figure 1-2 : Classement biologique des lments chimiques (Biological System of the Elements, extrait de Markert, 1994)
Les donnes ayant servies la ralisation de cette premire version du BSE sont varies. Elles proviennent pour la plupart de l'observation : des caractristiques chimiques des lments, des fonctions physiologiques de certains lments de la manire dont les lments et leurs composs sont incorpors aux matrices vivantes.
Les diffrentes configurations dans le BSE permettent de supposer, a priori, l'essentialit de certains lments tels que le brome (Br), le strontium (Sr), le csium (Cs), le germanium (Ge) ou le tellure (Te). Ceux-ci seront sans doute reconnus comme essentiels dans le futur, au moins pour certains groupes d'organismes. De la mme manire, la non essentialit d'autres lments peut galement tre souponne. C'est le cas du thallium (Tl), du plomb (Pb), du mercure (Hg) et du cadmium (Cd), qui n'ont rvl que des effets toxiques sur les espces vivantes. Les mtaux essentiels peuvent aussi tre dsigns sous lappellation doligo-lments. Les oligolments rpondent aux critres fixs par Cotzias, 1967 : Etre prsents dans les tissus vivants une concentration relativement constante, Provoquer, par leur absence de l'organisme, des anomalies structurelles et physiologiques voisines chez plusieurs espces, Prvenir ou gurir ces troubles par l'apport de ce seul lment.
Comme tout compos chimique, l'effet de l'apport d'un mtal dpend de la dose. Mais lorsque le mtal est essentiel, aussi bien sa carence que son excs sont dommageables. 20/85
Figure 1-3 : Evolution de l'activit biologique en fonction des concentrations en mtaux essentiels (A) et non essentiels (B)
La Figure 1-3 illustre la rgulation homostatique qui entre en jeu chez les organismes vivants la fois pour les mtaux essentiels (A) et non essentiels (B). Pour ces deux groupes, des effets nfastes sur l'activit biologique apparaissent lorsque ce processus de rgulation sature. Pour les mtaux essentiels, ces effets nfastes interviennent la fois en prsence de trop faibles ou de trop fortes concentrations dans l'environnement alors que, dans le cas des mtaux non-essentiels, seules des concentrations environnementales excessives conduisent l'apparition d'effets. 1.2.2. Acclimatation, adaptation, slection 1.2.2.1. Acclimatation
Les organismes sont, dans une certaine mesure, capables de dvelopper une acclimatation physiologique pour faire face une exposition continue aux mtaux. Des protines appeles mtallothionines ont la proprit de chlater et de complexer les mtaux. La synthse de ces protines est induite par une augmentation de lexposition aux mtaux. Ces protines assurent ainsi la rgulation des concentrations intracellulaires de diffrents lments mtalliques essentiels ou non (Hamilton et Mehrle, 1986). Les mtallothionines sont dailleurs utilises comme biomarqueurs, indices prcoces dune pollution aux mtaux lourds. Les mtaux peuvent aussi tre squestrs au sein de granules ou vsicules (Depledge et Rainbow, 1990). Il faut noter que, si les mtaux ainsi squestrs ninduisent plus deffet toxique pour lorganisme (ne sont plus biodisponibles), ils ne sont pas pour autant ncessairement excrts, et peuvent saccumuler dans les tissus (McGeer et al., 2003). Ils peuvent ainsi reprsenter un danger pour les prdateurs. 1.2.2.2. Slection et adaptation.
Les mcanismes physiologiques de dtoxication dcrits prcdemment sont nanmoins saturables. Lorsque lexposition aux mtaux est excessive, des effets dltres apparaissent. Les espces sont plus ou moins tolrantes aux variations de leur environnement. Certaines espces, dites stnoces, sont sensibles de faibles variations des conditions environnementales. Au contraire, les espces dites euryces tolrent des variations importantes. Les espces stnoces sont le plus souvent des espces trs bien adaptes leur environnement, optimises pour vivre dans une niche cologique particulire. Au contraire les espces euryces sont le plus souvent des espces opportunistes et invasives avec une stratgie de colonisation rapide. Toutes modifications (augmentation ou diminution) des concentrations en mtaux dans le milieu sont ainsi susceptibles 21/85
de porter atteinte la biodiversit des milieux. Cest sur ce principe que sont fonds les bioindicateurs cologiques : linventaire et les mesures dabondance des organismes aquatiques indicateurs de pollution prsents dans le milieu permet de diagnostiquer le niveau de contamination de ce milieu (Vindimian et Garric, 1993). Pour une mme espce, des diffrences interindividuelles sont galement observes. Les individus les plus sensibles sont dabord affects alors que les plus rsistants (cest dire ceux qui sont capables de survivre et de se reproduire) sont slectionns. En accord avec le paradigme darwinien, cette diffrence de sensibilit nest pas induite pas le stress toxique ( lexception possible des composs mutagnes) mais est prexistante. Elle est hrditaire et sexplique par les diffrences de gnotype des individus (Cf. exprience classique de Luria et Delbrck, 1943). Les gnotypes rsistants sont favoriss et finissent par devenir majoritaires au sein de la population. Sur le long terme, la population peut ainsi sadapter progressivement en raction la pression slective. Toutefois, la diversit gntique de la population soumise une pression slective trop forte est appauvrie. Les populations avec une faible diversit gntique sont vulnrables et moins souples face un nouveau stress : tous les individus de la population ragiront dune faon similaire. 1.2.2.3. Implications
Il semble que les organismes vivant dans des rgions avec une concentration de fond leve en un mtal y sont gnralement comparativement moins sensibles que les organismes qui vivent au sein de milieux pauvres en lments mtalliques (pour une revue bibliographique voir Klerks et Weis, 1987 ; voir aussi articles rcents tels que McLaughlin et Smolders, 2001 ; Barata et al., 2002). Toutefois, ce nest pas systmatiquement le cas. Par ailleurs il est possible que les rsultats publis ne soient pas reprsentatifs de la situation relle : les rsultats ngatifs sont jugs moins intressants sur le plan scientifique et ne sont pas ncessairement publis (Klerks et Weis, 1987). Il faut aussi rappeler que la pression induite par la pollution anthropognique sopre sur une chelle de temps beaucoup plus courte que celle ncessaire aux populations pour sadapter (au moins en ce qui concerne les macro-organismes). Dautre part, nous avons vu que les populations spcifiquement adaptes une contrainte donne sont souvent plus vulnrables face aux variations de leur environnement, par exemple lors de pollutions multiples (Klerks et Moreau, 2001). Il convient donc de ne pas surestimer les capacits dadaptation des espces.
Quelques lments retenir
Les lments mtalliques sont des constituants naturels de lcorce terrestre qui peuvent se dissminer naturellement dans le milieu aquatique. Certains cosystmes peuvent donc tre naturellement trs riches en lments mtalliques et abriter des communauts despces qui y sont adaptes. Sous leffet de la pression des activits anthropiques (activits industrielles, agricoles), la contamination mtallique des milieux aquatiques peut augmenter significativement. Au-del dune certaine concentration (parfois trs faible) dans le milieu, les mtaux ont des effets nfastes. Les concentrations naturelles varient en fonction de la nature gologique du milieu. Il est ainsi difficile, pour les cosystmes affects par la prsence de mtaux, d'estimer la part de mtal d'origine naturelle. Certains mtaux prsentent la particularit dtre, pour les organismes vivants, la fois essentiels mais aussi toxiques au-dessus dune certaine concentration. Les seuils dessentialit et de toxicit peuvent tre trs variables suivant les espces. Les organismes vivants sont adapts aux concentrations naturelles en mtaux prsentes dans leur environnement. La sensibilit des diffrentes espces peut ainsi tre trs variable entre les rgions. De mme, les organismes sauvages peuvent avoir des sensibilits trs diffrentes de ceux tests en laboratoire.
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2. Comportement des mtaux et biodisponibilit

Dans les milieux aqueux, les mtaux sont prsents sous diffrentes formes chimiques. Les lments et composs chimiques inorganiques (anions majeurs tels que les carbonates, chlorures et hydroxydes) et organiques (e. g. composs formant la matire organique dissoute) prsents dans ces milieux constituent des ligands capables de complexer les ions mtalliques. C'est ce que l'on appelle complexation inorganique dans le premier cas (voir point 2.1) et complexation organique dans le second (voir point 2.2). La Figure 2-1 illustre les interactions entre un ion mtallique libre (M2+) et les ligands avec lesquels des complexes peuvent se former.
Figure 2-1 : Phnomnes de complexation des mtaux dans l'eau
L'interaction entre les organismes vivants et le mtal dpend entre autres de la forme sous laquelle ce dernier se trouve dans le milieu. Par analogie, on appelle galement complexation avec le ligand biotique la fixation du mtal par les organismes (voir point 2.3). Les phnomnes de complexation faisant intervenir les mtaux sont gouverns par un ensemble de paramtres physico-chimiques. Ceux-ci modifient la spciation des mtaux, c'est dire qu'ils influent sur la rpartition des diffrentes formes chimiques mtalliques, mais agissent galement sur lassimilation par les organismes vivants. Parmi ces paramtres, on peut citer le pH, le potentiel doxydorduction et bien sr la quantit de ligands disponible (aussi appele capacit complexante). Cest ainsi que, dans la plupart des cas, les concentrations mtalliques totales (voir dfinitions dans l'encadr ci-dessous) sont connues pour tre de mauvais indicateurs deffets sur les organismes du compartiment aquatique (Meyer, 2002). Pour quelques mtaux (e. g. Ag, Cd, Cu, Ni, Pb, Zn), les concentrations en ions mtalliques libres ainsi que celles de certains complexes sont, semble-t-il, principalement responsables de la toxicit (Campbell, 1995).
Quelques dfinitions : termes frquemment utiliss pour qualifier la fraction des mtaux mesure dans l'eau

Mtal total : quantit totale de mtal, sous toutes ses formes. Le mtal total englobe la fois les quantits fixes sur les particules (mtal particulaire) et celles dissoutes dans le milieu (mtal dissous). Mtal particulaire : quantit de mtal fixe sur des particules retenues par un filtre de 0,45 m. Mtal dissous : quantit de mtal en solution qui nest pas retenue par un filtre de 0,45 m. Mtal libre : espce mtallique la plus simple, sous sa forme ionise (ex : Cu2+), accompagne, en solution aqueuse, de sa sphre dhydratation (ex : Cu(H2O)62+). Les espces libres appartiennent la fraction mtallique dissoute.
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Pour que les mtaux prsents dans les diffrents compartiments de l'environnement aquatique exercent un effet sur les organismes, ils doivent tre sous une forme chimique ayant la capacit datteindre les cibles biologiques. En dautres termes, il est ncessaire quils soient biodisponibles. Certains auteurs considrent quun mtal est biodisponible sil est assimilable par les organismes, pour dautres il faut en plus quil soit susceptible dinduire un effet : Selon Newman et Jagoe, 1994, la biodisponibilit est dfinie comme la possibilit quun contaminant soit assimil et/ou adsorb sur un organisme vivant. Selon Campbell, 1995, un mtal est considr comme biodisponible quand il est assimil par un organisme et peut entraner un effet sur celui-ci.
Les effets biologiques associs aux mtaux (M) ont souvent t relis la concentration de lion mtallique libre (Mn+) mais aussi celles de certaines formes complexes des ligands inorganiques (Campbell, 1995) et organiques. Les modles mis au point pour valuer la toxicit des mtaux dans des conditions physico-chimiques spcifiques (Biotic Ligand Models) sont d'ailleurs bass sur ce type de relations. Des mthodes danalyse de ces diffrentes formes chimiques10, cest dire dvaluation des concentrations en ions libres et en complexes inorganiques et organiques, sont donc ncessaires une bonne interprtation des effets des mtaux sur les organismes vivants.
2.1. Formation de complexes inorganiques

2.1.1. Rappels sur les complexes inorganiques Les mtaux, en solution aqueuse, subissent un phnomne de solvatation. Ils fixent autour de leurs atomes, plus ou moins fortement, des molcules deau. Certains de ces composs ainsi forms peuvent tre stables : les liens entre lion et les molcules deau sont alors de vritables liaisons chimiques. Cest par exemple le cas de lhydrate de cuivre [Cu(H2O)4]2+. Ces hydrates sont des exemples dions complexes : lassociation dun cation mtallique, au centre, et dun certain nombre despces molculaires ou ioniques (les ligands). Les mtaux de transition (e. g. Cu, Zn, Ni, Cr, Au, Ag, Cd, Hg) sont particulirement susceptibles de former des complexes avec des ligands varis (Arnaud, 1997). Un bref rappel sur la formation d'un complexe inorganique partir des mtaux est prsent dans l'encadr ci-dessous.
La formation d'un complexe entre un ligand (L) et un cation Mn+ peut tre dcrite par l'quation suivante :
Lm + M n + LM n m
La constante de stabilit correspondante est dfinie selon l'quation :
K=
[ LM n + ] [ Lm ][ M n m ]
Parmi les ligands possibles pour les mtaux, on trouve les anions suivants : chlorure (Cl-), bromure (Br-), cyanure (CN-), nitrite (NO2-), carbonate (CO32-), hydroxyde (OH-) etc.
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A ce sujet, se reporter au rapport technique tablissant une revue des mthodes analytiques de spciation chimique (Monbet and Coquery, 2003).
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2.1.2. Modles de spciation inorganique Les modles de spciation permettent de calculer les parts relatives des diffrentes formes chimiques prsentes dans diffrentes phases (dissoute, adsorbe, solide ou gazeuse). Les calculs sont raliss pour des systmes aqueux naturels ou reconstitus en laboratoire, sous l'hypothse qu'ils soient l'quilibre. Les donnes indispensables la modlisation se composent en gnral des concentrations totales dissoutes des diffrentes espces (mtaux tudis, ions majeurs) ainsi que d'autres donnes caractrisant le milieu d'tude comme le pH, le pe (potentiel rdox) ou encore la prsence de composs solides pouvant se solubiliser avant qu'un quilibre ne soit atteint. De nombreux exemples de ces modles sont disponibles dans la littrature et plusieurs programmes informatiques sont mis la disposition des utilisateurs. Parmi les modles les plus couramment utiliss, on peut citer MINEQL+ (Schecher et McAvoy, 1998), MINTEQA2 (Allison et al., 1991 ; HydroGeoLogic, 1998) ou encore PHREEQC version 2.8 (Parkhurst et Appelo, 1999).
Ce type de programmes de calcul fait partie du package informatique11 des Biotic Ligand Model . Ils sont chargs de calculer la rpartition des diffrentes formes chimiques d'un mtal, dans un systme donn. Cette rpartition est ensuite reprise pour servir de donne d'entre aux autres modules de calcul.
2.2. Complexation avec la matire organique

La place importante accorde, dans ce rapport, aux phnomnes de complexation des mtaux avec la matire organique est proportionnelle linfluence que ces phnomnes ont sur la biodisponibilit des mtaux. Il est donc important de dfinir la matire organique, de prsenter les moyens de la quantifier et de la qualifier avant de sintresser la manire dont elle est prise en compte dans le dveloppement de modles type BLM .
Quelques sigles

COD : carbone organique dissous. La mesure du COD permet de quantifier la matire organique dissoute. COP : carbone organique particulaire. La mesure du COP permet de quantifier la matire organique en suspension. COT : carbone organique total, somme des fractions particulaire et dissoute. Cette mesure permet de quantifier la totalit de la matire organique. MO : matire organique, terme gnrique. MOD : matire organique dissoute.
2.2.1. Gnralits sur la matire organique dissoute Les matires organiques dissoutes (MOD) sont souvent responsables de la couleur, du got ou de l'odeur de l'eau. Mais elles interviennent aussi au sein de diffrents processus biogochimiques en tant que source de carbone et d'nergie pour les organismes vivants. Elles agissent galement sur les niveaux d'oxygne dissous, d'azote, de phosphore, de sulfures, de mtaux traces ou encore d'acidit. La matire organique dissoute possde souvent des caractristiques similaires l'humus du sol. De ce fait on estime, pour simplifier, qu'environ 50% de la MOD d'une rivire type est constitue de substances humiques. Ce sont des composs macromolculaires complexes produits par la dgradation biologique et chimique des rsidus de plantes et d'animaux. En fonction du milieu aquatique tudi, ces substances se composent de polysaccharides, d'acides organiques hydrophiles, d'acides gras aliphatiques, de protines et de lignine en diffrentes proportions. Les substances humiques reprsentent entre un tiers et la moiti du carbone organique dissous (COD) dans les eaux, en milieu naturel (Ma et al., 2001).
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Comprenant galement les programmes de complexation avec la matire organique et ceux spcifiquement ddis aux interactions entre le mtal et les organismes vivants (voir points 2.2 et 2.3).
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Les substances humiques peuvent tre fractionnes en plusieurs sous ensembles : les acides humiques (AH), les acides fulviques (AF) et les composs hydrophiles (Hy) (voir Figure 2-2).
Figure 2-2 : Mthodologie de fractionnement de la matire organique dissoute issue d'eaux du milieu naturel (d'aprs Ma et al., 2001)
Les concentrations en matires organiques dissoutes, leurs compositions ainsi que leurs caractristiques chimiques sont extrmement variables et dpendent principalement des sources de matires organiques (source allogne - d'origine pdologique - ou autogne - produits par les macrophytes, les algues ou les bactries, etc.), de la temprature, de la force ionique, du pH, de la composition de l'eau en cations majeurs, de la qualit des couches superficielles des sdiments ou encore de l'activit photolytique et microbiologique. La MOD, dont les diffrents composants prsentent une masse molaire comprise entre quelques centaines et 100 000 Da12, est un mlange complexe de composs organiques aromatiques et aliphatiques accueillant des groupements amide, carboxylique, hydroxyle, ctone, etc.
Le dalton est une unit de masse dfinie de la faon suivante : le dalton est la douzime partie de la masse d'un atome de 12C. De cette dfinition dcoule que la masse molaire du 12C est 12 uma (unit de masse atomique) ou 12 g.mol-1. Soit 1 Da = 1 g.mol-1.
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2.2.2. Ractions de complexation avec les mtaux La matire organique (MO) est connue pour jouer un rle important dans la chimie des polluants puisqu'elle a la capacit de former des complexes avec les mtaux. Les mtaux peuvent tre complexs par les substances composant la MO et plus particulirement par les sites carboxyliques (groupements contribuant la majorit des sites de complexation), azots et sulfurs qui s'y trouvent. La capacit totale de fixation des ions mtalliques par la MO dans les eaux a t estime entre 200 et 600 mol.g-1. Mme si certains mtaux sont connus pour se fixer prfrentiellement sur certains sites (cas du cuivre avec les groupes carboxyles ou bien le mercure pour les groupements sulfurs), la plupart des lments entrent en comptition pour l'accs aux sites de complexation de la MO. Une squence de stabilit des complexes a t tablie, pour les sols, par Irving-Williams (1948), cit dans Frstner et Wittman, 1983. L'ordre de stabilit dcroissant est le suivant : Pb > Cu > Ni > Co > Zn > Cd > Fe > Mn > Mg. Certaines tudes ont par ailleurs montr que les fortes concentrations en certains mtaux (Al et Fe) empchaient en partie des mtaux moins prsents de se fixer la matire organique (Takacs et al., 1999).
Pour mieux apprhender les mcanismes de la complexation des mtaux par la matire organique, il est ncessaire, d'une part, de pouvoir la caractriser et la quantifier et, d'autre part, de connatre prcisment la nature des ligands (sites carboxyliques, protines, etc.) impliqus dans ce type de ractions.
Des outils analytiques ont t dvelopps de manire dfinir qualitativement et quantitativement la MO. La partie 2.2.3 en donne un aperu.
2.2.3. Analyse et mthodes de mesure Il existe deux principales techniques de caractrisation de la MOD selon que l'on s'intresse aux concentrations prsentes dans l'eau (caractrisation globale - sparation dissous / particulaire) ou bien aux diffrentes fractions qui la compose (caractrisation qualitative). 2.2.3.1. Mesure des concentrations en matire organique
La mesure du carbone organique total (COT) permet de prendre en compte et de quantifier la totalit de la MO d'un systme aquatique analys, la MO tant constitue en grande partie d'atomes de carbone. Il est admis que cette mesure reflte la concentration en matires organiques (MO), pour les milieux naturels. En effet, les contaminants organiques dans les systmes naturels reprsentent normalement une faible fraction du COT. Cette mesure du COT peut ensuite tre subdivise en diffrentes fractions selon les objectifs des tudes. Les mesures du carbone organique dissous (COD) et de sa fraction associe, le carbone organique particulaire (COP), permettent d'accder des informations plus oprationnelles dans certains cas, i.e. l'utilisation de la concentration en COD pour valuer les phnomnes de complexation des mtaux avec la MOD. La fraction de COP reprsente en gnral moins de 10% du COT mais cette proportion augmente avec la taille et le dbit d'une rivire par exemple (et donc avec la concentration en matires en suspension dans l'eau). Les concentrations en COD varient entre 0,1 mg/L dans les eaux souterraines et 50 mg/L dans les marais. Ces concentrations ne dpendent pas uniquement de la nature des bassins versants mais sont galement sujettes aux variations saisonnires et aux apports de MO lors de blooms algaux13 par exemple.
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Prolifration d'algues, par exemple lors d'une eutrophisation (processus naturel d'enrichissement en lments minraux nutritifs des eaux d'un cosystme).
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2.2.3.2.
Caractrisation qualitative de la matire organique dissoute par fractionnement
La MOD est constitue d'un ensemble vari de composs chimiques. Ceux-ci prsentent des affinits diffrentes pour les mtaux avec lesquels ils peuvent former des complexes. C'est pourquoi il est galement important de procder une analyse qualitative de la MOD. Les diffrentes mthodes et techniques employes pour y parvenir sont prsentes dans cette partie. Fractionnement par rsines adsorbantes : la MOD est couramment caractrise par son fractionnement en diffrents sous-ensembles au moyen de rsines adsorbantes. L'utilisation de rsines XAD-8 par exemple, est frquente pour l'isolement des substances humiques (acides fulviques et humiques). Cette tape est la base de la dtermination d'un rapport caractristique de la MO : la distribution des fractions humique / non-humique. Une autre technique de fractionnement base de rsines est aussi utilise. Celle-ci met en uvre deux colonnes contenant des rsines, disposes en srie. Ce systme permet de sparer la MOD en diffrentes catgories : hydrophobe, hydrophile, acide, basique et neutre. Un fractionnement supplmentaire de la partie hydrophile, l'aide d'une troisime rsine, permet de diffrencier la fraction charge de la fraction neutre. Le schma suivant (Figure 2-3) prsente les diffrents niveaux de caractrisation de la MOD.
Figure 2-3 : Classification de la matire organique dissoute (d'aprs Leenheer et Crou, 2003)
Analyses spectrophotomtriques : des mesures spectrophotomtriques, telles que l'absorbance ultraviolet (UV) ou encore la fluorescence, viennent complter la caractrisation de la MOD. L'absorption dans les domaines du visible et de l'ultraviolet des eaux de surface est principalement imputable aux groupements aromatiques chromophores prsents sur les molcules (acides humiques pour la plupart) composant la matire organique dissoute. Les molcules d'acides humiques sont aussi connues pour tre responsables de la fluorescence des eaux naturelles. Du fait d'un grand nombre de groupes chromophores et de l'impossibilit de dtecter des rponses spcifiques permettant de les caractriser, la plupart des recherches menes en milieu aquatique se sont limites des mesures de l'absorbance 254 nm ; cette mesure servant d'indicateur de la concentration en MO. Un autre indicateur, l'absorbance UV spcifique (SUVA ou SUVA254 : Specific UV Absorbance) se dfinit comme le rapport de l'absorbance de l'chantillon 254 nm et de la concentration en COD. Des eaux ayant un fort SUVA sont gnralement riches en substances 28/85
hydrophobes telles que les acides humiques (composs aromatiques). Il faut cependant noter que de faibles concentrations en COD associes de fortes concentrations en nitrates peuvent fausser ce type de mesure. Enfin, mme si seulement moins de 1% des groupes aromatiques inclus dans la MO sont fluorophores, les techniques d'analyse spectroscopique de la fluorescence en trois dimensions constituent un outil intressant dans la mesure o elles sont environ un ordre de grandeur plus sensibles que les techniques d'absorption UV. Nanmoins, l'utilisation de la mthode par absorption UV 254 nm n'est pas recommande pour l'estimation de la distribution des masses molaires des diffrents constituants de la MO. En effet, cette technique ne permet la dtection que d'un nombre limit de composs (chromophores) comme on l'a vu ci-dessus ; de plus l'absorbance n'est pas homogne d'un compos dtect l'autre ce qui conduit en fin de compte la surestimation des substances humiques par rapport aux autres composants de la MO. C'est pourquoi ce type de mthode ne convient pas des analyses quantitatives des masses molaires et ne devrait tre utilis que pour certaines mesures qualitatives (Her et al., 2002). La mesure de la concentration en COD associe une technique de sparation donne de meilleurs rsultats quantitatifs. Fractionnement de la MO par taille : les mthodes de caractrisation de la MO par taille dpendent fortement de son tat d'agrgation et de ses interactions avec les milieux utiliss pour la sparation. L'ultrafiltration squentielle est utilise pour des sparations basse rsolution alors que la chromatographie d'exclusion (par taille) est employe pour des caractrisations haute rsolution. Une multitude de techniques d'ultrafiltration sur membranes ont t utilises pour la caractrisation de la MOD en tenant compte du fait que les distributions de poids molculaires apparentes taient influences par un grand nombre de paramtres tels que le pH, la force ionique, le type de membrane, la pression ou encore les standards de calibration. Une tude rcente (Schfer et al., 2002) a montr qu'aucune des deux techniques prcdentes ne donnaient des mesures absolues des masses molaires de la MO. D'autres techniques telles que la pyrolyse suivie d'une sparation par chromatographie phase gazeuse (GC) couple un spectromtre de masse (MS) permettent de descendre des niveaux encore plus prcis dans la caractrisation de la MOD. Cette technique est ddie la dtection des biopolymres prsents dans la MO : polysaccharides, acides amins, protines, polyphnols, lignine, etc.
Il existe diffrentes approches pour dterminer la composition de la MOD. Ces approches sont de plus en plus complexes et coteuses mettre en uvre au fur et mesure que l'analyse se fait prcise. De plus, les fractions de MO identifies dpendent de la mthode analytique employe.
2.2.4. Modlisation de la complexation des mtaux avec la matire organique Diffrents problmes se posent lorsqu'il s'agit d'appliquer les connaissances dont on dispose sur la complexation des mtaux avec la matire organique au milieu naturel. D'une part les substances humiques tudies sont trs diverses et peuvent prsenter des affinits diffrentes pour les mtaux selon leur composition ou leur origine. D'autre part, les phnomnes entrant en jeu lors de l'adsorption des espces mtalliques sur la matire organique dissoute sont multiples et complexes. Des modles ont donc t labors qui prennent en compte, entre autres, les effets de la comptition entre les cations (y compris les protons) ou encore l'influence de la force ionique. Parmi ces modles, le WHAM sera prsent en dtail dans ce rapport, pour deux raisons principales. Tout d'abord il s'agit d'un modle ayant bnfici d'un certain nombre de phases de calibrations, de validations et d'amliorations. Ensuite, c'est galement le modle qui a t retenu pour effectuer les calculs de complexation des mtaux avec la matire organique dissoute au sein des Biotic Ligand Models , modles pour lesquels une tude plus dtaille est ralise en partie 3.
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2.2.4.1.
WHAM
Le Windermere Humic Aqueous Model (WHAM, Tipping, 1994) est un logiciel de spciation incluant un programme de calcul de spciation chimique inorganique ainsi qu'un modle de complexation avec la matire organique : le Model V (Tipping et Hurley, 1992) ou le Model VI (Tipping, 1998) incorpor la version la plus rcente du logiciel. 2.2.4.1.1 Description du Model V
Le Model V est un dveloppement du Model IV dcrit par Tipping et Woof, 1991 et ddi la description chimique des eaux et sols acides. L'hypothse est faite que la fixation des mtaux a lieu sur un nombre discret de sites chimiques distincts de la matire organique. Cette fixation du mtal sur le site rcepteur ne pouvant se faire qu'aprs dprotonation14 de ce dernier. Les attractions ou rpulsions lectrostatiques non-spcifiques sont galement prises en compte. Le Model V ne tient compte que de deux groupes de sites constitus des groupes donneurs de protons les plus ractifs (COOH - groupements carboxyles nots A et OH - groupes phnoliques nots B). La prsence d'un petit nombre de sites de fixation qualifis de forts tels que ceux contenant des atomes d'azote ou de soufre n'est pas prise en compte. Les substances humiques portent des groupements carboxyles (A) prsentant des pK15 gnralement infrieurs 7 ainsi que des groupements phnoliques (B), plus faiblement acides, ayant des pK plus forts16. A l'intrieur de chaque type de groupements, il existe donc une certaine variabilit des pK. C'est pourquoi, de manire dcrire ces deux types de groupements, des valeurs caractristiques sont retenues :

la valeur mdiane des pK est retenue pour chaque groupe : pKA et pKB, les intervalles des valeurs des pK sont galement pris en compte : pKA et pKB.
La perte d'un atome d'hydrogne (proton H+) par le groupement chimique situ sur la MO permet l'apparition d'une charge ngative sa surface. Le cation mtallique, charg positivement, peut ainsi se lier la MO.
15 16
14
Grandeur caractrisant leur ractivit potentielle avec les mtaux.
Les groupements carboxyliques sont plus acides. Ils sont donc plus susceptibles de librer un proton (H+) que les composs phnoliques. La raction correspondante est la suivante :
pour
les
groupements
+
carboxyliques
pKA R1 COOH R1COO + H+ ,
avec
pK A = log
[R1COO ] [ H ] [ R1COOH]
+ pK B R2 OH R2 O + H + , avec pK B = log [ R2O ] [ H ]
pour les groupements phnoliques :
[ R2OH ]
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Le Model V prend en compte huit sites de dissociation de protons dfinis par les paramtres prsents ci-aprs (quation 2-1).
quation 2-1 : Constantes de dissociation pour les diffrents sites protons de la matire humique (d'aprs Tipping, 1994)
pK i = pK AouB
pK1 = pK A
pK 5 = pK B
( 2i 5) pK AouB 6
pK A pK A pK A pK A ; pK 2 = pK A ; pK 3 = pK A + ; pK 4 = pK A + 2 6 2 6
pK B pK B pK B ; pK 6 = pK B ; pK 7 = pK B + ; pK 8 = pK B + pK B 6 2 6 2
On prsume qu'il y a un nombre identique de sites 1 4 et de sites 5 8. La concentration totale en sites de type A est gale nA (en q.g-1). Sur la base d'autres travaux, la concentration en sites de type B est estime nA/2. La fixation du mtal intervient donc sur un seul site (monodendate) ou bien, lorsque les sites sont suffisamment proches, sur deux sites simultanment (bidendate). Les quilibres peuvent s'crire sous la forme suivante :
quation 2-2 : Raction d'change proton / mtal au niveau des sites de complexation avec la matire humique et constante d'quilibre associe
K R1 H + M Z + R1 M ( Z 1) + + H +
et
R1 H + M
R2H
Z+
R1 M
R2
( Z 2)+
+ 2H
log K (i ) = pK A +
( 2i 5) pK A pK MHA 6
Pour rduire les temps de calcul, les combinaisons de sites doubles sont restreintes aux couples de sites protons suivants : 1-2, 1-4, 1-6, 1-8, 2-3, 2-5, 2-7, 3-4, 3-6, 3-8, 4-5, 4-7. L'change entre un proton et un ion mtallique est dcrit par une constante d'quilibre (K). Lorsque deux sites interviennent dans la fixation de l'ion, les constantes correspondant chaque site sont simplement multiplies entre elles. Ces constantes sont diffrentes suivant le type de site. On note donc KMHA et KMHB les constantes d'quilibre pour les sites de types A et B, respectivement. Un autre paramtre, fpr, le facteur de proximit, dfinit la proportion de sites monodendates capables d'intervenir dans des liaisons bidendates. Ce facteur, initialement fix l'unit dans le Model IV, entranant une trop forte proportion de sites forts , est donc rvalu 0.4 dans le Model V.
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L'effet des interactions lectrostatiques sur la fixation des ions des sites spcifiques est reli la charge nette (Z) de la substance humique. Les constantes d'quilibre sont ainsi modifies par un terme de la forme exp(2w.z.Z) o z est la charge du cation et w le facteur d'interaction lectrostatique. Par exemple, la dissociation d'un proton d'un groupe carboxyle est dfinie par les quations suivantes :
quation 2-3 : Effet des interactions lectrostatiques sur les constantes de dissociation des protons de la matire humique
R COOH R COO + H + ; K ( Z ) =
[ R COO ]( H + ) = Ke 2 wZ [ R COOH ]
[ ] indique les concentrations et ( ) les activits17. K est une constante intrinsque, la valeur de K(Z) lorsque Z est nulle, et K(Z) est appel quotient d'quilibre et varie avec la charge nette de la substance (Z). Dans le Model V, ces constantes sont indpendantes de la force ionique. Les valeurs de w peuvent tre drives des potentiels de surface et des dimensions des molcules en appliquant les thories lectrostatiques de Debye-Hckel et de Gouy-Chapman. Cependant ici, w est dtermin exprimentalement partir de donnes de la littrature faisant intervenir des phnomnes de dpendance de la force ionique. Pour certaines substances humiques, w varie avec Z ; cela permet de relier w la force ionique (I) et Z dans cette expression :
quation 2-4 : Expression du facteur d'interaction lectrostatique
w = P log10 I e
QZ
Z reprsente le module de la charge nette sur la substance humique. Des tudes ont montr galement que, pour les plus petites molcules de type acide fulvique , Q pouvait tre fix 0. Ainsi, seul P (variable reprsentant les interactions lectrostatiques) demeure comme paramtre ajustable pour les optimisations des calculs. Les interactions lectrostatiques crent, d'une part des modifications dans les fixations au niveau des sites discrets, mais l'attraction lectrostatique engendre aussi une accumulation de contre-ions dans la partie diffuse de la double couche lectrique des substances humiques. Ainsi, dans le Model V, un volume est cr dans lequel suffisamment de contre ions sont disposs de manire assurer l'lectroneutralit. La concentration de contre ions dans cette couche diffuse est estime partir d'expressions de type Donnan. Le volume de cette couche diffuse est galement estim. De manire le caler aux donnes exprimentales sur la dissociation des protons, le Model V dispose de sept paramtres ajustables : nA, pKA, pKB, pKA, pKB, P et Q (mme si pour les acides fulviques Q est gal 0). De plus, pour chaque cation susceptible de se fixer aux sites dprotons, il existe deux autres paramtres : pKMHA et pKMHB (logarithmes ngatifs des constantes d'affinit intrinsques d'un compos pour la matire organique : plus sa valeur sera faible et plus le mtal aura d'affinit pour la matire organique). Le Model V prend galement en considration la complexation des premiers produits de l'hydrolyse des espces (e. g. CuOH+ dans le cas de Cu2+). La constante d'affinit de ce compos pour la MO est prise arbitrairement comme tant gale celle utilise pour l'espce parente.
lactivit est dfinie selon lquation suivante : ai = i . Xi, o ai, i et Xi sont respectivement, dans le cas des solutions aqueuses, lactivit du constituant i, le coefficient dactivit et la concentration molaire du constituant i. Le coefficient dactivit est gal 1 si la solution laquelle appartient le constituant i est idale, cest dire sil nexiste aucune interaction entre les particules (molcules, ions) qui la constituent. La valeur de i est dautant plus voisine de 1 que la concentration des solutions est faible (cette condition minimise les interactions).
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Le logiciel WHAM prend aussi en compte la formation de deux espces solides : les hydroxydes de fer et d'aluminium (III). Ces espces ne sont pas capables, d'aprs le modle, de servir de ligands pour les ions. Leur surface active est considre comme nulle. Ceci permet de reflter les conditions retrouves dans les systmes environnementaux correspondant aux eaux acides et aux sols pour lesquels le modle a t dvelopp. D'autres applications pourraient par contre ncessiter la prise en compte de la formation et de la dissolution d'autres phases comme les carbonates et les sulfures. 2.2.4.1.2 Calibration du Model V
Un ensemble de donnes exprimentales a servi de base la calibration du modle, les mesures d'ions mtalliques libres et de protons permettant de calculer les quantits complexes la matire organique. L'ajustement du modle aux jeux de donnes disponibles a t conduit pour Z, la charge nette des substances humiques, en utilisant la mthode des moindres carrs. Les meilleures valeurs obtenues (celles qui rendaient le mieux compte de la majorit des observations) pour les diffrents paramtres ajustables ont ensuite t conserves pour l'analyse des donnes concernant la complexation avec les cations mtalliques. Les deux paramtres ajustables pour ce phnomne, pKMHA et pKMHB, ont t optimiss partir des jeux de donnes les plus importants (voir Tableau 2-1).
Tableau 2-1 : Dimension des jeux de donnes utiliss pour la calibration du Model V (partie complexation entre la MO et les cations mtalliques)
Cations mtalliques Mg2+ Ca2+ Mn2+ Fe2+ Co2+ Ni2+ Cu2+ Zn2+ Cd2+ Pb2+ Nombre de donnes (substances Nombre de donnes (substances humiques du sol) humiques aquatiques) 1 jeu de donnes (2 donnes) 2 jeux de donnes (19 et 2 3 jeux de donnes (30, 60 et 18 donnes) donnes) 1 jeu de donnes (2 donnes) 1 jeu de donnes (2 donnes) 1 jeu de donnes (2 donnes) 1 jeu de donnes (2 donnes) 3 jeux de donnes (60, 2 et 27 donnes) 1 jeu de donnes (2 donnes) 1 jeu de donnes (27 donnes) 3 jeux de donnes (2, 29 et 46 donnes) 3 jeux de donnes (39, 22 et 24 donnes) 1 jeu de donnes (7 donnes) 1 jeu de donnes (33 donnes) 2 jeux de donnes (41 et 20 donnes) Type d'acide humique d'origine aquatique Suwannee River humic acid 4 fractions d'acides fulviques (proportion de C estime, 50%) Suwannee River fulvic acid (proportion de C estime, 53.5%) Acides fulviques aquatiques Substances humiques aquatiques Acides fulviques aquatiques Acides fulviques aquatiques
Les diffrentes estimations de ces paramtres ralises pour un mme mtal partir de jeux de donnes diffrents correspondent relativement bien. Cependant, il faut noter que les sources de matires organiques utilises semblent trs proches (Cf. Tableau 2-1). Cette recherche des paramtres caractrisant la fixation des ions mtalliques sur les sites A et B a permis de dcouvrir une relation entre eux (quation 2-5). L'analyse par rgression permet ainsi d'exprimer pKMHB en fonction de pKMHA. Cette relation explique 60% de la variance de pKMHB (mais avec un coefficient de corrlation ~ 0.53) :
quation 2-5 : Relation entre les constantes d'affinit des mtaux pour les sites A (pKMHA) et B (pKMHB)
pK MHB = 1.38 pK MHA + 2.57
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Cette nouvelle relation est donc implmente au modle de complexation avec la matire organique et la capacit d'une substance se lier la MO n'est donc plus fonction que d'une seule constante : pKMHA. De l, Tipping et Hurley, 1992 ont compar les valeurs des constantes de complexation entre les mtaux et les substances humiques obtenues grce au modle, une base de donnes regroupant galement des constantes de complexation des mtaux mais avec diffrents ligands simples. Il ressort de cette comparaison que l'acide lactique semble prsenter une capacit complexante similaire celle offerte par la MO. Cette dcouverte ouvre donc la possibilit d'estimer les valeurs des pKMHA dans le cas o la complexation entre les substances humiques et un mtal n'aurait pas t value. Le Tableau 2-2 donne un rcapitulatif des valeurs attribues par dfaut aux paramtres dcrivant les proprits des acides fulviques (AF) et humiques (AH) dans la version 1.0 du WHAM.
Tableau 2-2 : Valeurs par dfaut des paramtres dcrivant les proprits de la matire organique (WHAM 1.0 - Model V)
Paramtre nA nB pKA pKB pKA pKB P fpr pKMHA pKMHB KZ fDL Ko Description Concentration en groupements carboxyliques (mol.g-1) Concentration en groupements phnoliques (mol.g-1) = nA/2 pK mdian pour les sites de type A pK mdian pour les sites de type B Gamme des pK des sites de type A Gamme des pK des sites de type B Paramtre dfinissant l'interaction lectrostatique Facteur de proximit pour la formation de sites bidendates Masse molaire (g.mol-1) Rayon molculaire (nm) Paramtre caractristique de l'affinit entre un mtal et les groupements carboxyliques En fonction de pKMHA Facteur de charge pour le volume de la couche diffuse (d'aprs des expriences sur des substances humiques du sol ; ce facteur n'a pas t optimis) Facteur pour le volume maximal de la couche diffuse (ce facteur n'a pas t optimis) Paramtre de distribution Paramtre d'adsorption Paramtre d'adsorption AF 4.73.10-3 2.37.10-3 3.26 9.64 3.34 5.52 -103 0.4 1500 0.8 Fonction du mtal considr 3.96.pKMHA 103 (par dfaut) 0.25 (par dfaut) 1 104 1 AH 3.29.10-3 1.65.10-3 4.02 8.55 1.78 3.43 -374 0.5 15000 1.72 Fonction du mtal considr 3.pKMHA - 3 103 (par dfaut) 0.25 (par dfaut) -
En conclusion, le Model V prend en compte les proprits moyennes des substances humiques. En principe, il pourrait galement tre dvelopp en prenant en compte une distribution de composs de masses molaires diffrentes ayant des capacits de dprotonation diffrentes mais cette approche suppose la mise en uvre, trop complexe, d'outils analytiques.
Le principal dfaut de la calibration de ce modle rside dans la pauvret, quantitative et qualitative, des donnes utilises. En effet, la calibration grce des tudes ralises avec des substances humiques aquatiques ne sest faite que pour cinq mtaux (Ca2+, Cu2+, Zn2+, Cd2+, Pb2+). Les types de substances humiques utilises ne sont pas suffisamment varis et, parfois, leur origine nest pas prcise. La relation mise en vidence entre les constantes d'affinit des mtaux pour les sites A et B permet de simplifier le modle. Nanmoins, l'incertitude attache cette relation augmente d'autant les incertitudes lies modle.
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2.2.4.1.3
Validation du Model V
Tous les modles doivent subir des tapes de validation permettant de confronter les donnes calcules des mesures issues d'exprimentations. C'est le cas pour le WHAM dont les modules de complexation avec la matire organique (Model V) et de spciation inorganique ont t tests, entre autres, sur des chantillons naturels. Peu de temps aprs sa mise au point, le Model V a t test, en guise de validation, par un jeu de donnes runissant les mesures de neuf mtaux ralises deux niveaux de pH, dans le sol (Schnitzer et Skinner, 1966; Schnitzer et Skinner, 1967). Ces donnes furent assez correctement modlises mme si les valeurs calcules avaient tendance montrer une sous-estimation de la complexation aux pH les plus bas et une surestimation aux plus hauts. Les constantes de complexation calcules partir des tudes prcdentes donnent l'ordre croissant de complexation avec la matire organique suivant : Mg2+ < Ca2+ < Mn2+ < Cd2+ < Co2+ < Ni2+ ~ Zn2+ < Pb2+ < (Fe2+) < Cu2+ < VO2+ (vanadyl) On peut noter que l'ion ferreux possde gnralement une capacit de complexation avec la MO de l'ordre de celle du cobalt. Lors de cette tude, les ions ferreux ont pu se transformer en ions ferriques qui eux se lient plus fortement avec les substances humiques. Dwane et Tipping, 1998 ont ralis un test du WHAM (version incluant le Model V) grce des chantillons deau naturelle enrichis en cuivre. Lors de la modlisation, les lments suivants ont t pris en compte : pH, DOC, Na, Mg, Al, K, Ca, Cl, NO3, SO4, alcalinit tandis que les concentrations en ions Cu2+ taient suivies l'aide d'une lectrode spcifique. La base de constantes d'affinit par dfaut a t utilise et le modle n'a t optimis, par la mthode des moindres carrs, que par l'ajustement des concentrations en acides fulviques actifs (AF) dans les solutions. Une concentration en acides fulviques optimale ([FA]opt) a donc t dtermine en comparant les rsultats des mesures aux donnes modlises. Des eaux naturelles prleves dans le Nord de l'Angleterre et prsentant des caractristiques diffrentes ont t testes. Les caractristiques de ces eaux ainsi que les valeurs de [FA]opt dtermines sont dtailles dans le Tableau 2-3.
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Tableau 2-3 : Principales caractristiques des eaux tudies pour tester le WHAM, Model V (d'aprs Dwane et Tipping, 1998)
Dsignation Mares de la rgion de Pennine (RU) Caractristiques principales 5 m ; 0.2 m de profondeur, rgion de tourbires. COD = 7-13.4 mg/L pH = 4.2-6.5 Lac Windermere (RU) 14.76 km ; profondeur moyenne 21.3 m, rgion de landes et de forts. COD = 1.8 mg/L pH = 7.2 0.15 km ; profondeur moyenne 9.4 m, lac acide oligotrophique, Lac Levers (RU) rgion de landes et de roches affleurantes. COD = <0.5 mg/L pH = 5 Rivire Aire (RU) Reoit des effluents industriels et municipaux. Forte alcalinit et forts taux de calcium. COD = 14 mg/L pH = 7.9 Reoit des effluents industriels et municipaux. Rivire Calder (RU) Forte alcalinit et forts taux de calcium. COD = 13.9-22.5 mg/L pH = 7.6 Rivire Derwent (RU) Traverse des terres agricoles et reoit quelques effluents d'gouts. Forte alcalinit et forts taux de calcium. COD = 1.4 mg/L pH = 8.2 Rivire Ouse (RU) Traverse des terres agricoles et reoit quelques effluents d'gouts. Forte alcalinit et forts taux de calcium. COD = 3.6 mg/L pH = 8.2 Facteur optimis [FA]opt = 9.2-26.9mg/L [FA]opt = 3.1-4.2 mg/L
[FA]opt = 1.2-1.7 mg/L
[FA]opt = 9.8-10.6 mg/L
[FA]opt = 11.8-20.9 mg/L
[FA]opt = 1.7-2.3 mg/L
[FA]opt = 2.5-3.2 mg/L
D'aprs les rsultats obtenus pour la dtermination des concentrations en acides fulviques optimales ([FA]opt), deux catgories ressortent. La premire regroupe les lacs et les mares et est caractrise par un fort rapport [FA]opt/ COD (environ 1.6) alors que la deuxime catgorie englobe les rivires de plaine et se caractrise par des rapports d'environ 0.8. Comme on fait l'hypothse que la matire organique d'origine naturelle est constitue pour moiti de carbone, alors la simple interprtation de ces rapports permet de conclure que 80% de la MO pour les lacs et les mares et 40% de la MO pour les rivires de plaine peuvent tre assimils des acides fulviques actifs tandis que le restant est qualifi d'inerte. D'une manire gnrale, en l'absence d'informations complmentaires, Dwane et Tipping, 1998 proposent d'assimiler 50% de la MO, exprime en COD, des substances humiques (acides fulviques) actives. Mme si les donnes calcules sont trs proches des mesures, aprs optimisation de la concentration en acides fulviques, les auteurs de ces travaux soulvent nanmoins quelques questions concernant les rsultats obtenus. En effet, plusieurs cas de figure sont envisageables. Premirement, il est possible que, concernant la MO, une partie soit rellement assimilable des acides fulviques actifs et que l'autre soit inerte aux phnomnes d'adsorption. Cependant, les procdures d'isolation des acides fulviques qui supposent une exposition de fortes concentrations d'acides et de bases, peuvent entraner une altration chimique de ces substances en augmentant le nombre de groupes ionisables. Dans ce cas, le modle surestimerait la proportion de mtal fix la MO. Il se peut galement que les phnomnes de comptition soient plus importants dans les eaux naturelles. Cette tude aura en outre montr que les concentrations en oxyde de fer (III) par exemple n'avaient, dans des concentrations raisonnables, que peu d'influence sur la complexation du cuivre avec la matire organique. Enfin, les paramtres fixs par dfaut et dtermins partir de mesures sur des acides fulviques isols peuvent ne pas tre reprsentatifs des chantillons naturels tudis.
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Mme si ltape de validation, sur un nombre limit de donnes, a fourni des rsultats satisfaisants, il est toutefois ncessaire de noter quun paramtre du modle a subi un ajustement ([FA]opt). Dans des conditions dutilisation oprationnelle de ce modle, de tels ajustements ne seraient pas permis. Les rsultats sans ajustement du paramtre [FA]opt (dans des conditions dutilisation oprationnelle du modle) ne sont pas disponibles. Il est donc difficile de porter un jugement sur la pertinence de ce modle.
2.2.4.1.4
Particularits du Model VI
Dans une autre tude plus rcente (Tipping, 1998), les limites du Model V sont discutes et un nouveau modle (Model VI) est propos. D'une part ce modle est bas sur une approche tenant compte, d'une meilleure manire, d'une distribution de sites de fixation des mtaux. D'autre part, il est recalibr non seulement partir des jeux de donnes utiliss auparavant pour le Model V mais galement partir de nouvelles donnes. La dfinition des constantes de dissociation des protons aux sites A (sites carboxyliques) et B (sites phnoliques) reste inchange sauf en ce qui concerne l'abondance de ces sites au niveau des matires humiques qui est redfinie de la faon suivante : nA/4 mol.g-1 de substances humiques pour les sites de type A et nA/8 mol.g-1 pour ceux de type B. L'quilibre entre les sites de la matire humique et les mtaux prcdemment dfini par l'quation 2-2 est maintenant dcrit par l'quation 2-6. Cette notation est ainsi calque sur celle de l'quilibre de dissociation des protons.
quation 2-6 : Constante de complexation mtal / substances humiques
K (i ) = log K MA +
( 2i 5) LK1 6
et
K (i ) = log K MB +
( 2i 13) LK1 6
La constante LK1 est estime partir de diffrents calibrages du modle au moyen de jeux de donnes. Si le jeu de donnes est assez fourni, une constante peut tre obtenue pour chaque type de sites. Le Model V prenait dj en compte des liaisons faisant intervenir deux sites simultanment, la constante d'quilibre correspondante tant alors dfinie par le produit des constantes d'quilibre associes chacun des sites. Le Model VI propose un systme plus abouti pour les complexations mettant en jeu deux et mme trois sites. Les constantes d'quilibre associes ces phnomnes sont alors dfinies selon l'quation 2-7.
quation 2-7 : Constantes d'quilibre pour les systmes bidendate et tridendate
Sites bidendates : log K (i, j ) = log K (i ) + log K ( j ) + x LK 2 Sites tridendates : log K (i, j, k ) = log K (i ) + log K ( j ) + log K ( k ) + y LK 2 Les valeurs prises par x et y permettent la prise en compte d'une gamme de forces complexantes : pour les sites bidendates, x est fix 0 pour 90.1% des sites, 1 pour 9% et 2 pour 0.9%. Pour les sites tridendates, y vaut 0, 1.5 et 3 pour 90.1%, 9% et 0.9% des sites respectivement. En gnral, chaque mtal possde un LK2. La fraction de sites bidendates est note fprB (0.42 pour les acides fulviques et 0.50 pour les acides humiques) et celle des sites tridendates fprT (0.03 pour les AF et 0.065 pour les AH). Ces dernires volutions entranent une augmentation des combinaisons prises en compte (ici encore, pour des contraintes lies aux temps de calcul, toutes les combinaisons de sites possibles ne sont pas autorises). Les sites bidendates et tridendates sont reprsents par 72 possibilits auxquelles viennent s'ajouter les huit sites monodendates. La partie faisant intervenir les effets lectrostatiques sur la complexation des mtaux avec les substances humiques reste quant elle inchange.
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Au final, six paramtres ncessitent d'tre ajusts pour dcrire les phnomnes de dissociation des protons (nA, pKA, pKB, pKA, pKB, P), comme pour le Model V et quatre paramtres au maximum dcrivent la complexation des mtaux (logKMA, logKMB, LK1, LK2).
Tableau 2-4 : Nouveaux paramtres utiliss dans le Model VI
Paramtre log KMA log KMB LK1 LK2 fprB fprT Description Constante d'quilibre intrinsque pour la complexation des mtaux aux sites de type A Constante d'quilibre intrinsque pour la complexation des mtaux aux sites de type B Terme de distribution modifiant log KMA Source Calibr partir de donnes exprimentales
Calibr partir de donnes exprimentales ou corrl au log KMA Calibr partir de donnes exprimentales ou fix de manire universelle Terme de distribution modifiant la force des sites bidendate Calibr partir de donnes exprimentales ou et tridendate corrl au log KNH3 Fraction des sites protons pouvant former des sites Calcul par gomtrie bidendates Fraction des sites protons pouvant former des sites Calcul par gomtrie tridendates
2.2.4.1.5
Calibration du Model VI
La calibration du Model VI diffre de celle du Model V du fait que les jeux de donnes utiliss ont t, cette fois-ci, tris en fonction des substances humiques testes : acides fulviques ou acides humiques. Les donnes utilises auparavant pour la calibration du Model V (Tipping et Hurley, 1992) ont t remployes. Avec les nouveaux jeux de donnes utiliss, les limites du Model V et de ses deux paramtres ajustables ont t dvoiles. La possibilit d'influer sur quatre paramtres grce au Model VI permet une meilleure correspondance entre les rsultats calculs et les mesures. De plus, des interprtations plus fines des rsultats obtenus sont dsormais permises grce ce nouveau modle. Il apparat ainsi que Ca et Cd sont plus influencs par LK1 ce qui traduit une forte dpendance de la complexation au pH alors que la fixation de Cu sur les matires humiques est plus contrle par LK2, traduisant une plus grande importance d'un petit nombre de sites fortement complexants. La limite de la calibration des diffrents paramtres du Model VI vient, encore une fois, de la faible quantit de donnes exprimentales disponibles. De ce fait, des paramtres universels, obtenus soit partir de moyennes soit partir de corrlations, sont recherchs.
Le Model VI utilise, comparativement au Model V, un plus grand nombre de paramtres. Deux inconvnients majeurs sont associs de telles modifications : la ncessit de disposer de donnes exprimentales en plus grand nombre et la difficult demploi de tels modles, plus complexes, de faon oprationnelle. sans phase de validation, il nest pas possible de sassurer de la meilleure pertinence dun modle plus complexe. Laugmentation du nombre de paramtres amliore lajustement aux donnes exprimentales ayant servies la construction du modle mais nimplique pas ncessairement une amlioration du pouvoir prdictif du modle pour de nouvelles donnes.
2.2.4.2.
Modle NICA - Donnan
Le modle NICA-Donnan (Benedetti et al., 1995) est un programme de calcul permettant de dcrire la complexation des mtaux avec la matire organique, de la mme faon que les Model V et VI. Il considre aussi bien un nombre dfini de sites de la MO ayant des affinits diffrentes pour les mtaux que des phnomnes de complexation non-spcifiques comme l'interaction lectrostatique. Ce modle est compos de deux parties distinctes : la complexation spcifique , c'est dire la formation d'une liaison covalente entre le mtal et un site de la MO, est dcrite par le modle NICA tandis que la complexation non spcifique, c'est dire les interactions lectrostatiques, est prise en charge par le modle de Donnan. 38/85
Le modle NICA (Non-Ideal Competitive Adsorption Model) fait l'hypothse que la fixation monodendate du mtal sur la MO se fait grce des sites capables de librer des protons. Ces sites de complexation prsentent une distribution continue d'affinits pour le mtal considr dfinie par deux paramtres : le premier rendant compte de l'htrognit prsente par les substances humiques, le deuxime tant spcifique l'ion mtallique en question. Deux distributions de ce type sont ncessaires : l'une pour caractriser les groupes carboxyliques (acides forts), l'autre pour les groupements phnoliques (acides plus faibles). L'approche de Donnan : les substances humiques prsentent une structure tridimensionnelle dont les proprits pourraient tre rapproches des gels poly-lectrolytes. L'hypothse est mise que des groupes carboxyliques et phnoliques sont prsents au sein de la MO. La dissociation des protons partir de ces groupes cre donc un potentiel. Le modle simple de Donnan fait l'estimation que l'lectroneutralit globale du systme doit tre conserve tout moment par l'action de sels, c'est dire grce la prsence de contre-ions, de charge positive, tels que les cations mtalliques. Le modle NICA-Donnan ncessite sept ou huit paramtres qui permettent de dcrire l'affinit des protons pour les sites de complexation diffrentes forces ioniques : deux paramtres dcrivant la densit des sites, deux constantes d'quilibre mdianes, deux paramtres de distribution et un paramtre lectrostatique. La charge initiale des substances humiques est, si ncessaire, traite comme un paramtre ajustable. Quatre paramtres sont enfin ncessaires par mtal. Ces paramtres ont t dtermins pour Ca, Cu, Cd et Pb (Benedetti et al., 1995 ; Kinniburgh et al., 1996) ce qui ne permet pas la modlisation de la complexation simultane d'une certaine varit de mtaux.
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2.3. Complexation avec le ligand biotique

Par dfinition, le ligand biotique est la cible biologique prfrentielle dun contaminant. Dans la smantique de la spciation chimique, les espces mtalliques peuvent former, avec dautres espces chimiques appeles ligands, des entits nommes complexes. Par assimilation, les sites de fixation des mtaux sur les organismes vivants sont galement dsigns par le terme ligand (biotique) et on appelle complexe la formation de liens mtal / organisme. A l'origine, la plupart des tests cotoxicologiques mis en uvre dans le contexte de l'tude de la biodisponibilit ont port sur des poissons. C'est pourquoi, la plupart du temps, le terme de ligand biotique est rapprocher des branchies, site reconnu comme site d'expression de la toxicit aigu des mtaux. Ce rapport s'attachera donc dtailler la partie concernant les ligands biotiques des poissons. En cela il sera fidle la part qu'occupe ce genre d'tudes dans la littrature mme si, plus rcemment, des travaux sur les invertbrs (Cf. point 2.3.3) et les algues (Cf. point 2.3.4) ont t mens. 2.3.1. Gnralits De manire s'accumuler et/ou provoquer un effet, le mtal doit avant tout interagir avec une membrane biologique. La paroi cellulaire est constitue d'une grande varit de groupes fonctionnels base d'oxygne (e. g. COH, COOH, P(O)(OH)2 - phospholipides). A des pH proches du pH neutre, de nombreux sites seront ioniss, offrant aux complexes mtalliques biodisponibles une matrice hydrophile charge ngativement au travers de laquelle ils pourront migrer et, ventuellement, atteindre le plasma membranaire. Il existe cependant d'autres voies d'entre possibles comme des protines capables de traverser la double couche lipidique des cellules, des transporteurs de protines ou encore des canaux ions. Les diffrentes tapes conduisant l'adsorption / absorption du mtal au niveau des organismes vivants sont rcapitules dans le Tableau 2-5.
Tableau 2-5 : Etapes de l'interaction mtal / organisme et hypothses ncessaires la modlisation (d'aprs Campbell et al., 2002)
Hypothses simplificatrices Le transport (diffusion) du mtal en solution et la complexation avec le ligand biotique interviennent rapidement (d'une manire plus Diffusion du mtal partir de l'eau vers la surface rapide que l'assimilation du mtal et que l'expression d'une rponse biologique. biologique). On prend ainsi en compte un quilibre entre les espces mtalliques prsentes dans la phase dissoute de l'eau et celles complexes la surface des membranes cellulaires. La membrane plasmatique est le site principal de l'interaction Adsorption (complexation) du mtal la surface de la d'un mtal avec un organisme vivant. Cette interaction se traduit par membrane cellulaire ou la surface de la membrane un change de ligand pour former le complexe mtal / ligand biotique {M-X-cell}. plasmatique. La rponse biologique est fonction de la concentration en {M-Xcell}. Les variations de {M-X-cell} peuvent s'exprimer selon [Mz+] en solution grce une loi classique d'adsorption de type Langmuir. Si la concentration en sites membranaires reste constante dans l'intervalle Assimilation du mtal (transfert travers la de concentrations environnementales en mtal, alors les variations membrane plasmatique). de {M-X-cell} suivront celles de [Mz+] en solution. Tout au long de l'exposition au mtal considr, la nature de la surface biologique demeure constante (i. e. le mtal n'induit pas de changement dans la nature de la membrane plasmatique ni des transporteurs d'ions). Etapes de l'interaction mtal / organisme
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Les critres d'effets biologiques (rponse biologique) pris en compte dans le cas de l'valuation de la toxicit d'un mtal vis--vis des organismes, par exemple, sont gnralement : l'accumulation (comprenant la fois l'adsorption et l'assimilation) et la modification de l'activit photosynthtique, de la mobilit ou de la croissance.
L'interaction des mtaux traces avec les organismes aquatiques peut tre dcrite en trois tapes principales : l'advection ou la diffusion du mtal vers la surface de la membrane cellulaire, la complexation du mtal au niveau de sites la surface des membranes, le transport du mtal de la surface de la cellule l'intrieur de l'organisme.
2.3.2. Les ligands biotiques I : chez les poissons (les branchies) Les branchies des poissons sont constitues de membranes respiratoires et ionorgulatrices sensibles et reprsentent le premier point de contact entre le poisson et les mtaux prsents dans leau environnante. En effet, elles constituent la plus grande partie de la surface de contact totale des poissons et sont, ainsi, le lieu principal dchange deau et dions entre le sang et lenvironnement (Randall et al., 2000). Les branchies forment une structure comparable un tamis form par les arcs branchiaux, les filaments et les lamelles (voir Figure 2-4).
Figure 2-4 : Reprsentation du systme des branchies
Les cellules pithliales des branchies sont souvent recouvertes dune matrice extracellulaire, le mucus, contenant diffrentes glycoprotines. Cette matrice poly anionique peut fonctionner comme un systme changeur dions avec des affinits diffrentes suivant les mtaux. Mme si, dune manire simple, on peut voir ladsorption des mtaux sur des sites des parois et membranes cellulaires, ce processus devient plus compliqu si lon inclut le rle du mucus secrt par les branchies. Les ions mtalliques sont donc dplacs du milieu environnant vers le mucus puis du mucus vers les sites des branchies. Ce mucus sert ainsi de stockage intermdiaire pour les mtaux (Tao et al., 2000).
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A des concentrations infrieures ou gales la LC50 (96h)18, la fixation dions mtalliques des sites spcifiques perturbe la fois labsorption et lexcrtion des autres ions. Le schma est le suivant : Les mtaux monovalents (Ag+, Cu+) affectent le transport des Na+. Les mtaux divalents (Cd2+, Zn2+) affectent l'action de Ca2+ dans le mtabolisme des organismes. Les mtaux peuvent galement traverser les branchies et agir au sein mme de lorganisme. Dans le cas du cuivre, dont la forme prdominante dans les milieux aqueux est divalente (Cu2+), il y a probablement une rduction pralable en Cu+ avant le transport travers les membranes biologiques. Lhypothse est alors faite que le cation se dbarrasse de son ligand (anionique) avant le transport via les membranes pithliales. Mais la littrature rvle aussi que certains complexes du cadmium, du cuivre et du zinc peuvent tre capts par les globules rouges (Campbell et al., 2002). Dans le cas du cuivre et de largent, labsorption de Na+ se trouve bloque. Les processus de rgulation qui sensuivent conduisent une baisse du sodium, du chlorure et des autres ions dans le plasma, puis des accidents cardiovasculaires et enfin la mort (e. g. une baisse de 30% de sodium dans le plasma suffit causer la mort). En ce qui concerne le systme de transfert dions sans contre-ion, le processus doit saccompagner de la libration dun ion de mme charge pour respecter llectroneutralit : Na+ contre NH4+ ou H+ et Cl- contre HCO3-. Les paramtres principaux influant sur ce systme de rgulation ionique sont : le pH, les concentrations en ions Na+, Cl-, HCO3- et Ca2+ ainsi que les concentrations en ions mtalliques. Largent et le cuivre entrent en comptition avec Na+. Leffet modrateur des ions Ca2+ nest alors pas seulement d une comptition entre ions mais aussi au fait quavec laugmentation de Ca2+ les pertes de Na+ diminuent. Ca2+ joue le rle de stabilisateur des jonctions troites des membranes pithliales ce qui rduit les pertes de Na+ et Cl-. La mesure dans laquelle Ca2+ est protecteur de la toxicit exerce par les mtaux dpend peut tre aussi des espces ; la physiologie entrera donc en jeu pour tendre le Biotic Ligand Model (BLM) aux autres espces de poissons par exemple (Grosell et al., 2002b ; Paquin et al., 2002). Il est aussi important de noter que, dans le cas des organismes marins, la situation est diffrente car les fortes concentrations en ions sodium inversent les directions des flux ioniques. 2.3.3. Les ligands biotiques II : chez les invertbrs La plupart des connaissances sur les effets physiologiques des mtaux sur les organismes aquatiques sont bases sur des tests cotoxicologiques aigus effectus sur des poissons. Ces effets physiologiques chez les poissons ont t relis l'inhibition de la rgulation ionique du calcium (voir point 3.2.3). En ce qui concerne les invertbrs, et en particulier les daphnies (Daphnia sp.), des travaux complmentaires sur les mcanismes de toxicit physiologique aigu seraient mener. Actuellement, dans la plupart des travaux visant la mise au point de modles pour les invertbrs, des extrapolations sont ralises partir des connaissances disponibles sur les poissons (De Schamphelaere et Janssen, 2002a). Un cas de dveloppement de BLM pour les daphnies sera report plus en dtail au point 3.3.1.
18
concentration ltale pour 50% des organismes tests, aprs 96 heures.
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2.3.4. Les ligands biotiques III : chez les algues Chez les algues, comme chez les autres organismes, on distingue deux types d'accumulation : l'adsorption et l'internalisation. Le premier phnomne s'exprime par la fixation du mtal sur les parois des membranes cellulaires (polysaccharides, peptidoglycanes, etc.) alors que le second fait intervenir des protines facilitant le transport membranaire (Slaveykova et Wilkinson, 2002). L'adsorption des mtaux sur les parois cellulaires des algues peut intervenir par attraction lectrostatique. Avec une augmentation du pH, les parois cellulaires des algues, constitues de groupements donneurs de protons (acide polygalacturonique ou pectine, polyactylglucosamine chitine, cellulose, polysaccharides, etc.) peuvent se charger ngativement (formation de groupes anioniques) et ainsi fixer les ions mtalliques ainsi que les complexes mtalliques chargs positivement (cations). Crist et al., 1990 on ainsi identifi deux processus de protonation des parois cellulaires des algues lors d'une diminution de pH : l'un rapide correspondant la neutralisation des sites anioniques (carboxylates) et l'autre, plus lent, correspondant au relargage du mtal et son remplacement par les ions hydronium (H+). Crist et al., 1988 ont montr que les membranes cellulaires des algues prsentent une srie continue de diffrents sites de fixation pour les mtaux (ou les protons). De plus, Campbell, 1995 a fait l'hypothse que les mtaux se complexent rapidement avec ces cellules et qu'ils sont ensuite transports, plus lentement, l'intrieur de celles-ci o ils provoquent un effet toxique. La premire raction ayant, par hypothse, la cintique la plus courte, un quilibre avec le milieu est alors atteint. Les membranes constituant les parois cellulaires sont donc considres comme tant les ligands biotiques des algues.
Certains sites d'accumulation et/ou d'expression de la toxicit aigu des mtaux sur les organismes vivants sont considrs comme des ligands biotiques. L'analogie entre la fixation des mtaux auniveau des membranes biologiques et les phnomnes de complexation permet le dveloppement de modles de la mme manire que pour la spciation chimique (inorganique et organique).
2.3.5. Modlisation de la complexation mtal / ligand biotique Les membranes branchiales peuvent tre considres comme des ligands ( ligand biotique ) et, ce titre, une constante conditionnelle19 de stabilit, lquilibre, peut tre calcule (Kmtal-branchies). Celle-ci est fonction de laffinit du mtal considr pour se fixer ces cellules. Une fois calcule, cette constante peut servir alimenter des programmes existants de spciation chimique en milieu aqueux. De la mme manire que pour les phnomnes de complexation avec des ligands inorganiques, la raction de fixation des ions mtalliques au niveau du ligand biotique peut tre dfinie grce une constante de complexation. Celle-ci peut sexprimer sous la forme suivante :
quation 2-8 : Raction de complexation entre le mtal et le ligand biotique
M + Ligand_Biotique M-Ligand_Biotique
(K)
log( K ) =
[ M Ligand _ Biotique] [ M ] [ Ligand _ Biotique]
Les modles prsents ci-aprs ont servi de base au dveloppement des Biotic Ligand Models .
19
Les techniques de dtermination de ces constantes de stabilit, qui rgissent les ractions de complexation, sont mises en uvre dans les conditions spcifiques propres tout test. Elles sont donc qualifies de conditionnelles puisquelles sont soumises aux proprits physico-chimiques de leau (et en particulier au pH).
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2.3.5.1.
Le FIAM (Free Ion Activity Model)
Ce modle pose, comme hypothse principale, que la toxicit dun mtal est mieux prdite grce la concentration en ions libres que grce la concentration totale (Morel, 1983), hypothse que viennent appuyer plusieurs rsultats d'tudes. Il ne faut pas pour autant en dduire que seul l'ion mtallique hydrat (Mn+, nH2O) est responsable d'un effet toxique observ chez l'organisme. Ainsi, quelques exceptions apparentes au FIAM ont t dceles. Il suffit qu'un complexe mtallique ML (L tant un ligand prsent dans la phase aqueuse) ragisse avec la surface des cellules d'un organisme pour engendrer une rponse biologique non plus directement relie l'activit (Cf. note 17, page 32) de l'ion libre (Mn+) mais fonction des activits de Mn+ et ML. Les hypothses du FIAM (selon Campbell, 1995) sont les suivantes : 1. La membrane cellulaire est le premier site d'interaction entre le mtal et l'organisme. 2. L'interaction entre un site libre la surface de la membrane cellulaire {-X-cell} et le mtal (Mn+) peut tre dcrite de la mme faon qu'une raction de complexation (voir quation 2-9).
quation 2-9 : Raction de complexation du mtal au niveau du ligand biotique
K1 M + X cell M X cell
L'activit du complexe form {M-X-cell} peut alors s'crire : {M-X-cell}=K1{X-cell}[M] avec K1 la constante de la raction de complexation, { } et [ ] les activits des espces adsorbes et dissoutes respectivement. 3. Un quilibre s'tablit rapidement entre les espces mtalliques en solution et la surface des cellules de l'organisme. 4. La rponse biologique (BR : Biological Response), exprime soit en fonction de l'accumulation / absorption de la substance, soit en fonction de sa toxicit, est directement proportionnelle l'activit du complexe la surface de la membrane cellulaire. On a alors BR=kK1{X-cell}[M] avec k une constante de proportionnalit. 5. Dans l'intervalle d'activits mtalliques induisant une rponse biologique, l'activit des sites membranaires libres {X-cell} est directement proportionnelle l'activit de l'ion libre en solution [Mn+]. 6. Pendant la dure de l'exposition un mtal, la nature de la surface de la membrane cellulaire reste inchange.
Le modle FIAM (Free Ion Activity Model) a t dvelopp pour expliquer la corrlation entre l'activit (Cf. note 17, page 32) de l'ion mtallique libre en solution et les effets biologiques observs. En cela, il est un prcurseur des Biotic Ligand Models.
2.3.5.2.
Le FIAM modifi
Le FIAM modifi (Brown et Markich, 2000) prend pour base le FIAM auquel vient se greffer la thorie du rcepteur biologique (Biological Receptor Theory : BRT) utilis en pharmacodynamique. Les hypothses du BRT (reprises par Brown et Markich, 2000) sont reprises ci-dessous : 1. Un rcepteur d'une surface cellulaire et une espce mtallique peuvent former, de faon rversible, un complexe (similaire l'hypothse 2 du FIAM). 2. Une rponse biologique (BR) rsulte de l'occupation des sites rcepteurs la surface de la cellule {X-cell} l'quilibre ou lorsqu'un pseudo-quilibre est ralis (Cf. hypothse 3 du FIAM).
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3. La rponse biologique est directement proportionnelle la fraction du nombre total de sites ({X-cell}T) occupe par l'espce mtallique ({M-X-cell}) (Cf. hypothse 4 du FIAM). 4. La rponse biologique maximale (BRmax) est atteinte quand le nombre total de rcepteurs {X-cell}T est occup par l'espce mtallique. 5. L'activit de l'espce mtallique fixe aux sites rcepteurs {M-X-cell} est faible compare l'activit du mtal en solution [M]. La principale modification rside donc dans le fait que dans un cas (FIAM) on suppose que l'activit des sites libres la surface des cellules {X-cell} reste constante dans l'intervalle de la rponse biologique, c'est dire que l'on fait l'hypothse (hypothse 5 du FIAM) que {X-cell} est indpendante de BR et que dans l'autre cas (BRT) {X-cell} doit ncessairement diminuer lorsque que la rponse biologique augmente et l'on atteint le niveau maximal de la BR (BRmax) lorsque {Xcell}=0 c'est dire lorsque tous les sites sont associs une espce mtallique. Nanmoins, et malgr cette contradiction, le FIAM s'est rvl apparemment correct dans un certain nombre d'tudes. La suite d'hypothses initialement poses dans le cas du FIAM modifi permet d'aboutir diverses relations exposes ci-aprs :
La loi d'action de masse permet d'crire la relation suivante : {X-cell}T={M-X-cell}+{Xcell} On obtient ainsi l'expression de l'activit du complexe form entre les sites actifs de l'organisme (le ligand biotique ) et l'espce mtallique considre (Cf. quation 2-10).
quation 2-10 : Expression de l'activit du complexe {ligand biotique / mtal}
{M X cell} =
K 1{ X cell}T [ M ] { X cell}T [ M ] = 1 + K1 [ M ] K 1 + [ M ]
Avec K-1 la constante de dissociation du complexe {ligand biotique / espce mtallique}.
si BR est directement proportionnelle {M-X-cell} (hypothse 3 du BRT) alors :
quation 2-11 : Relation entre la rponse biologique et la concentration en mtal
BR =
BRmax [ M ] K 1 + [ M ]
Diverses tudes ont montr que la rponse biologique maximale (BRmax) tait mesure alors que la totalit des sites rcepteurs n'tait pas encore occupe. De plus, la fraction de sites occups la BRmax semble dpendre du mtal considr. C'est pourquoi, de la mme faon que {M-X-cell} est reli [M], on relie la rponse biologique (BR) {M-X-cell}. On obtient alors la relation :
quation 2-12 : Relation entre la rponse biologique et l'activit du complexe {ligand biotique / mtal}
BR =
BRmax {M - X - cell} BRmax {X - cell}T [ M ] = K E + {M - X - cell} K E K 1 + ({X - cell}T + K E )[ M ]
Avec KE la concentration en complexes (mtal) / (ligand biotique) qui entrane 50% de la rponse biologique maximale. De manire mieux affiner l'allure des courbes dose / rponse gnres par cette quation, l'quation prcdente est transforme de la faon suivante :
quation 2-13 : Gnralisation de la relation entre la rponse biologique et l'activit du complexe {ligand biotique / mtal} diffrentes allures de courbes dose / rponse
BR =
n BRmax {M - X - cell}n BRmax {X - cell}T [ M ]n = n n n KE + {M - X - cell}n K E ( K 1 + [ M ]) n + {X - cell}T [ M ]n
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Figure 2-5 : Aspect de diffrentes courbes dose-rponse thoriques, avec diffrentes valeurs de pente (avec n la valeur de la pente de la courbe dose-rponse)
La Figure 2-5 nous indique, outre l'allure des courbes dose-rponse thoriques, l'existence de zones linaires pouvant servir leur approximation. Ces zones linaires peuvent tre dcrites, moyennant certaines transformations, par les quations suivantes.
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On pose les galits suivantes :
{M X cell} =
1 2 K E et [ M ] = K 1 1 1 1 2
O x1 et x2 sont, respectivement, la fraction de la rponse biologique maximale (BRmax) induite par {M-X-cell}, c'est dire BR1001, et la fraction du nombre de sites rcepteurs en surface du ligand biotique devant tre complexe pour induire une rponse biologique gale BR1001.
On en dduit les deux relations suivantes :
quation 2-14 : Expression de la rponse biologique au niveau 1
BR100 1 = ( BRmax / K E )(1 1 ){M - X - cell}

quation 2-15 : Expression de l'activit du complexe {ligand biotique / mtal}
{M X cell} = (1 2 ) K 1{X - cell}T [ M ]
Enfin, il en ressort que chaque portion de la courbe dose / rponse (de pente n=1) pouvant tre approxime de faon linaire est dfinie par une quation du type :
quation 2-16 : Linarisation de la rponse biologique en fonction de la concentration en mtal
BR = a + bK 1{X - cell}T [ M ]
Avec a et bK1{X-cell}T, l'ordonne l'origine et la pente de la droite, respectivement. Dans le cas d'une pente plus forte pour la courbe dose / rponse, on a :
quation 2-17 : Extension de la linarisation de la rponse biologique en fonction de la concentration en mtal en fonction de l'allure de la courbe dose / rponse
{M X cell} = (
1 1/ n ) KE 1 1
quation 2-18 : Expression de la rponse biologique au niveau 1 en fonction de l'allure de la courbe dose / rponse
BR100 1 = ( BRmax / K E ) 1( n 1) / n [(1 1 )1 / n ]{M - X - cell}

Dans ce cas, la valeur de la pente de la droite est dpendante de n (valeur de la pente dfinissant la courbe dose / rponse). L'quation 2-16, issue du modle FIAM modifi par la BRT, montre bien que, pour une rgion linaire de la courbe dose / rponse, la rponse biologique est directement proportionnelle l'activit de l'espce mtallique [M]. Nous avons ainsi vu prcdemment que si lion mtallique libre se fixe aux rcepteurs des cellules, la rponse biologique sera proportionnelle sa concentration. Mais si un complexe mtallique se lie galement la surface des cellules, alors la rponse biologique sera non seulement fonction de la concentration en ion libre mais aussi de celle du complexe mtallique.
Le FIAM, dans cette version modifie, permet donc de lier une rponse biologique, non plus l'activit de l'ion mtallique libre mais l'activit (Cf. note 17, page 32) des complexes forms entre le mtal et les rcepteurs de l'organisme (ou ligands biotiques). Cette mthode se rapproche donc de celle des Biotic Ligand Models.
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2.3.5.3.
GSIM
Le modle GSIM (Gill Surface Interaction Model) a t dvelopp par Pagenkopf, 1983 de manire expliquer les variations de la toxicit des mtaux traces observes chez les poissons pour diffrentes valeurs d'alcalinit, de duret et de pH. Ce modle prend en compte non seulement la spciation chimique des mtaux mais aussi les interactions la surface des branchies et les phnomnes de comptition entre ligands. Des donnes sur le cuivre, le cadmium, le plomb et le zinc ont t utilises pour l'laboration de ce modle. Les hypothses servant de base au modle sont les suivantes : 1. L'action toxique aigu des mtaux traces chez les poissons a lieu au niveau des branchies. Les mtaux provoquent, certaines concentrations, la mort des poissons par atteinte de leur systme de respiration. 2. Certaines formes chimiques des mtaux traces sont plus toxiques que d'autres20. 3. La surface des branchies a la capacit de former des complexes avec les espces mtalliques et les protons prsents dans le milieu. 4. Les cintiques d'change entre le mtal et la surface des branchies sont rapides et l'on atteint l'quilibre chimique lors de tests cotoxicologiques. 5. La surface des branchies possde un nombre donn de sites de complexation par unit de masse. 6. Des phnomnes de comptition interviennent entre les ions responsables de la duret de l'eau, les mtaux traces et les protons.
Figure 2-6 : Raction de complexation mtal / ligand biotique (membranes des branchies)
20
Les espces mtalliques adsorbes par les matires en suspension sont considres comme non toxiques.
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La Figure 2-6 nous prsente la raction prise en compte pour expliquer l'interaction entre les mtaux traces en solution21 et la surface des branchies. Cette surface correspond une couche de phospholipides charge ngativement (Sn-). La surface des branchies offre ainsi des sites de fixation pour les espces cationiques prsentes dans le milieu. La plupart des tudes cotoxicologiques montre une action protectrice des cations responsables de la duret de l'eau (voir point 3.2.1.1). Le modle GSIM prend en compte cette inhibition de la toxicit des mtaux comme une comptition entre les espces ioniques et les espces toxiques. Ce type de modles, dvelopp partir de rsultats de tests de toxicit aigu n'est applicable que dans des conditions o les concentrations en mtal dans le milieu laissent prsager l'occurrence de tels effets. Les donnes requises pour le fonctionnement du modle sont le pH, l'alcalinit, la duret ainsi que la concentration en mtal prsente. 2.3.5.4. Limites des modles
Dans la grande majorit des expriences conduites en laboratoire, la validit des prdictions ralises par des modles de type FIAM a t montre. Cependant, certaines expriences mettant en uvre des conditions souvent plus proches de la ralit environnementale ont rvl les limites de ce type de modles. Quelques expriences pour lesquelles le modle FIAM na pas donn de rsultat satisfaisant sont dveloppes ci-aprs : Test 1 : Slaveykova et al., 2003 ont test le rle des acides fulviques (de type Rivire Suwannee ) sur la bioaccumulation du plomb par une algue d'eau douce, Chlorella kesslerii. Le principal objectif tait de vrifier l'applicabilit des modles de type FIAM (Cf. point 2.3.5.1) et BLM (Cf. point 3) au cas tudi. Autrement dit, il s'agit de vrifier la relation entre les diffrentes formes de plomb dans l'eau ({Pb2+} en ce qui concerne le FIAM) et les quantits intgres par des phnomnes biologiques d'accumulation. Dans un premier temps, en prsence de petits ligands synthtiques, il a t montr, en accord avec le FIAM, que l'accumulation de Pb par l'algue verte unicellulaire tait directement proportionnelle la concentration en ions Pb2+ libres. Cependant, en prsence d'acides fulviques (SRFA22), d'importantes diffrences entre la bioaccumulation du Pb mesure et celle prdite par l'activit de l'ion libre ont t observes.
Figure 2-7 : Concentrations en Pb dans les cellules de l'algue Chlorella kesslerii, pH 6, aprs 50 min, lors dune exposition au plomb libre Pb2+ constante (pour des concentrations croissantes en Pb total et en acides fulviques (SRFA)). D'aprs Slaveykova et al., 2003.
Ici Cu2+ mais le GSIM tient aussi compte des autres formes chimiques des mtaux traces dont l'action toxique pour les organismes vivants a t montre. Pour le cuivre cela inclus CuOH+, Cu(OH)2,aq et Cu2OH22+.
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Suwannee River Fulvic Acid
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Les concentrations en plomb total et en acides fulviques ont t augmentes en parallle de manire conserver une concentration en Pb2+ libre constante. Dans ces conditions, le modle FIAM prdit une concentration cellulaire en Pb constante. Contrairement cette prvision, la Figure 2-7 montre une augmentation de la concentration en Pb l'intrieur des cellules. Test 2 : Dans l'tude mene par Errecalde et al., 1998, la toxicit de deux mtaux (zinc et cadmium) vis--vis de l'algue verte Selenastrum capricornutum a t teste en l'absence et en prsence de diffrents ligands dont le citrate, ligand de faible poids molculaire. Il a t montr que la toxicit du cadmium et du zinc tait renforce en prsence de citrate, tout autre paramtre (pH, duret, ligands inorganiques) maintenus constants par ailleurs. Des mesures ont galement montr que l'accumulation du cadmium et du zinc tait augmente en prsence de ce ligand. De plus, une accumulation du citrate a t mesure. La membrane des algues semble donc reconnatre le citrate comme un mtabolite de faible masse molaire. Il est connu que les membranes cellulaires des algues sont permables des mtabolites de faible poids molculaire comme les acides amins et que le transport travers la membrane plasmique se fait grce des acides amins (transporteurs). Diffrents systmes de transport membranaire spcifiques ont par exemple t mis en vidence, pour le citrate, chez des procaryotes. Dans au moins un cas, l'internalisation du citrate tait dpendante de la prsence de cations divalents et le complexe form entre le mtal et le citrate a t identifi comme tant le compos dissous transport travers la membrane des cellules. Ce dernier exemple montre donc que la toxicit d'un mtal vis--vis d'un organisme n'est pas seulement fonction de la concentration de l'ion mtallique libre (Mn+). D'autres formes chimiques peuvent ainsi tre l'origine d'une rponse biologique. Il avait dj t montr que certains complexes forms entre le mtal et des ligands lipophiles pouvaient traverser des membranes biologiques sans qu'une dissociation pralable n'intervienne. Dans l'exemple du test 2, il a t montr qu'un complexe entre un mtal et un ligand hydrophile biogne prsentait des capacits similaires. Test 3 : Borgmann et Ralph, 1983 se sont intresss la toxicit du cuivre envers Daphnia magna et Poecilia reticulata (guppy). Les tests d'cotoxicit ont t conduits avec et sans ajout de ligands organiques (-alanine, glycine, acide glutamique, Tris). Une grande variation des concentrations en cuivre libre (Cu2+) a t observe dans des milieux d'essai induisant pourtant une mme toxicit sur les daphnies. Ce rsultat est donc en contradiction avec la thorie du FIAM. Une certaine toxicit des complexes entre les acides amins et le cuivre a donc t observe mme si elle tait moins importante que celle engendre par le cuivre libre. De plus, il a t observ que les complexes acides amins / cuivre engendraient une plus faible toxicit pour les guppy que pour les daphnies. Cela indique donc une diffrence de sensibilit aux complexes du cuivre selon les espces.
D'importantes questions se posent au sujet des capacits de prdiction et du ralisme environnemental de modles simplifis tels que le FIAM pour la dtermination de la biodisponibilit des mtaux dans des conditions naturelles. Des tudes supplmentaires sont donc souhaitables avant l'utilisation de tels modles dans un cadre rglementaire.
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3. Le BLM : un modle intgr

3.1. Une approche conceptuelle
Les BLM reprsentent la synthse d'un grand nombre de concepts issus de disciplines scientifiques varies (chimie, physiologie, cotoxicologie) et explors depuis un certain nombre d'annes pour certains. Le BLM est un modle permettant d'estimer la toxicit aigu23 des mtaux vis--vis des organismes aquatiques. L'hypothse principale sur laquelle il repose est qu'une mortalit est observe quand le complexe form entre le mtal et le ligand biotique (les branchies par exemple) atteint une concentration critique, c'est--dire qu'une certaine accumulation de mtal sur une zone prcise d'un organisme est ltale. Le ligand biotique se dfinit ainsi comme le site daction de la toxicit pour un organisme (voir point 2.3). Le BLM prend en compte la liaison du mtal au ligand biotique (accumulation) et la relation entre laccumulation et la rponse toxicologique. Lun des principes fondamentaux du BLM est que le milieu est l'quilibre. Cela permet ainsi lutilisation de constantes thermodynamiques. En effet, pour linstant, seule la thermodynamique est prise en compte. Leffet de la cintique pourrait avoir son importance lors de faibles expositions aux mtaux. La diffusion du mtal partir de leau pourrait tre alors ltape limitante (Campbell et al., 2002). Ainsi, certains mtaux atteignent lquilibre thermodynamique lentement (Ni2+, Al3+, Co3+, Cr3+) Ma et al., 1999. Il conviendrait alors d'utiliser la modlisation de situations hors quilibre. Le BLM permet, outre lvaluation de la toxicit de lion libre (espce la plus toxique), lvaluation de celle des autres espces mtalliques en quilibre (hydroxydes, chlorures), de la mme manire que le FIAM (Morel, 1983). Le calcul de la complexation des ions mtalliques par des ligands inorganiques se fait au moyen de modles de spciation gochimique (e. g. CHESS (Santore et Driscoll, 1995) ou MINEQL+ (Schecher et McAvoy, 1998)) avec des constantes de stabilit provenant de diffrentes bases de donnes. En ce qui concerne la complexation avec la matire organique, la difficult est plus grande du fait de la variabilit rencontre dans la nature. Di Toro et al., 2001 se basent sur les quilibres chimiques de CHESS mais des modles proches tels que les modles V et VI du WHAM Tipping, 1994 sont de plus en plus employs. On peut aussi, comme McGeer et al., 2000 intgrer, un logiciel de spciation chimique inorganique (e. g. MINEQL+) un module permettant de prendre en charge la partie organique de la complexation. Le BLM est donc un assemblage de divers lments de modlisation dvelopps, entre autres, partir de tests cotoxicologiques (Cf. lien entre la complexation du mtal au ligand biotique et la rponse biologique).
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Les rsultats de diffrents travaux visant mettre au point des BLM-chroniques (essais long terme, critres d'effets autres que la mortalit) sont actuellement en cours de publication.
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3.2. Les interactions prises en compte

Les modles de type BLM permettent de dcrire et de quantifier la biodisponibilit des mtaux. Ils permettent destimer la toxicit du mtal en prenant en compte :

la complexation avec les ligands inorganiques, la complexation avec les ligands organiques, la complexation avec le ligand biotique.
Ces interactions peuvent tre schmatises (voir Figure 3-1).
Figure 3-1 : Schmatisation du fonctionnement du BLM
Les bases techniques dcrites respectivement au cours des points 2.1, 2.2 et 2.3 viendront en appui la comprhension des paragraphes suivants o l'influence, sur la toxicit pour les organismes vivants, des diffrentes interactions faisant intervenir les mtaux sera dtaille. 3.2.1. Influence des ions comptiteurs sur la toxicit des mtaux 3.2.1.1. 3.2.1.1.1 Duret de leau (Ca2+, Mg2+) Gnralits
La duret de l'eau dpend principalement de la prsence en ions calcium et magnsium. La prsence d'autres constituants, comme le fer, le manganse ou l'aluminium peuvent apporter une contribution la duret totale mais leur concentration n'est gnralement pas trs importante. La duret s'exprime normalement en quivalent de carbonate de calcium (CaCO3), mais aussi en degrs hydrotimtriques franais (H ou f). Un degr franais quivaut 10 mg/l de CaCO3. Il existe aussi des degrs allemands (1f = 0.56 allemand) et des degrs anglais (1f = 0.70 anglais).
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Tableau 3-1 : Qualification des eaux en fonction de leur duret

Duret en mg/l CaCO3 0-30 31-60 61-120 121-180 > 180 Qualification de l'eau trs douce douce moyennement douce dure trs dure
La duret de l'eau dpend essentiellement du contexte gologique. Les eaux des rgions calcaires sont dures, celles des rgions granitiques sont douces. 3.2.1.1.2 Influence de la duret de l'eau sur la toxicit des mtaux
Diffrentes tudes ont montr que l'augmentation de la duret de l'eau diminuait la mortalit des poissons exposs au cuivre (Chakoumakos et al., 1979 ; Howarth et Sprague, 1978 ; Miller et Mackay, 1980 ; Heijerick et al., 2003 ; Rathore et Khangarot, 2003).
Figure 3-2 : Influence de la duret de l'eau24 sur la toxicit des mtaux envers les organismes vivants
La Figure 3-2, ralise partir des donnes de la littrature, montre une diminution de la toxicit en fonction de la duret de l'eau pour les poissons (Oncorhynchus mykiss et Salmo clarki). Des relations similaires ont galement t mises en vidence pour les algues (Heijerick et al., 2002a). En ce qui concerne les daphnies, une baisse de la toxicit en fonction de la duret du milieu est galement mise en vidence. Nanmoins, au-del d'une duret de 250 mg CaCO3 /L, cette influence
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Les donnes ayant servies la ralisation de ce graphique sont issue d'expriences au-cours desquelles la duret des milieux d'essais est modifie en mme temps que d'autres paramtres physico-chimiques (pH ou COD principalement). Cependant, les courbes de tendance affiches rendent bien compte de l'influence de la duret de l'eau.
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n'est plus visible. Au contraire, de fortes valeurs de duret ont un effet dltre sur les populations de daphnies. Les mcanismes physiologiques impliqus dans ce phnomne ne sont pas connus. Si la duret de l'eau n'affecte pas la spciation chimique des mtaux en revanche son effet protecteur de la toxicit des mtaux sur certaines espces trouve une explication physiologique. Plusieurs travaux ont montr que le calcium affectait la permabilit des branchies des poissons et Pagenkopf, 1983 a suggr que le calcium pouvait galement jouer un rle de comptiteurs pour les sites de fixation des mtaux sur les branchies. Il existe ainsi une comptition entre les ions responsables de la duret (Ca2+ et Mg2+) et les ions mtalliques pour laccs aux sites o la toxicit peut sexercer. Playle et al., 1992 ont montr que les ions mtalliques entraient en comptition avec les autres ions sur un nombre limit de sites des branchies de poissons. Cette comptition entre ions affecte le degr daccumulation du mtal sur les branchies. Ce rsultat reflte non seulement la comptition entre les ions environnants mais aussi le degr de complexation du mtal dans le milieu. 3.2.1.1.3 Ratio Ca : Mg
Il est communment accept que la duret de l'eau affecte la toxicit des mtaux (voir ci-dessus). Cependant les ions majeurs responsables de la duret (Ca2+ et Mg2+) peuvent agir diffremment sur la toxicit cause par les mtaux. Cinq espces aquatiques ont t testes en prsence de cuivre et des ratios calcium / magnsium diffrents, tout autre paramtre (DOC, duret totale, alcalinit, pH, etc.) environ constant par ailleurs (Naddy et al., 2002). Les rsultats montrent que les concentrations ltales mdianes pour Oncorhynchus mykiss diminuent avec le rapport Ca : Mg, pour tous les tests conduits. Le calcium a donc une plus grande influence sur la toxicit du cuivre que le magnsium, pour cette espce. De la mme faon, aprs 96h, des individus appartenant l'espce Pimephales promelas, gs de moins de 24 heures en dbut de test ont montr une plus forte sensibilit au cuivre dans un milieu contenant autant de calcium que de magnsium compar un autre milieu caractris par un rapport Ca : Mg gal 3:1, pour des alcalinit et duret constantes. Dans le cas de Ceriodaphnia dubia ou de Gammarus, la toxicit du cuivre n'a pas t affecte par les changements dans les rapports Ca : Mg. En ce qui concerne Daphnia magna, l'volution de la sensibilit au cuivre selon le rapport Ca : Mg va en sens inverse de ce qui a t observ avec Oncorhynchus mykiss. Pour une duret de 180 mg/L, les individus tests dans un milieu contenant plus de calcium que de magnsium (4:0) ont montr une plus grande sensibilit que ceux dont le milieu d'exposition affichait un rapport 1:1 entre le calcium et le magnsium. Cette diffrence de sensibilit au cuivre n'a pas t observe des concentrations totales de calcium et de magnsium plus faibles (duret de 90 mg/L). Ca2+ apparat donc comme un meilleur inhibiteur de la toxicit du cuivre vis--vis d'Oncorhynchus mykiss ou de Pimephales promelas (g de moins de 24h) que Mg2+. L'explication viendrait du fait que la comptition des ions calcium empcherait les ions cuivriques (Cu2+) d'atteindre les canaux Na+ au niveau des branchies (mode d'action toxique du cuivre). Ainsi de fortes concentrations en calcium, la permabilit des branchies diminue.
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3.2.1.2.
pH (ions H+, OH-)
L'influence du pH sur les concentrations dissoutes des formes cationiques des mtaux lourds dans les rivires a t dmontre (pour le zinc voir Bourg et al., 2000). Le pH agit en effet trs fortement sur la spciation des mtaux dans l'eau, c'est dire sur les proportions de leurs diffrentes formes chimiques.
Figure 3-3 : Distribution de certaines espces inorganiques du cuivre en fonction du pH
La Figure 3-3 nous montre un exemple de la spciation chimique du cuivre, en fonction du pH (les principales espces sont reprsentes). Ce graphique a t obtenu partir d'un logiciel de calcul de spciation chimique (Hydra / Medusa : Puigdomenech, 2002). On peut observer une diminution de la fraction de cuivre libre (Cu2+) lors d'une augmentation de pH. A des pH compris entre 6 et 7, le carbonate de cuivre (CuCO3) devient l'espce majoritaire. Cu2+ est considr comme l'espce chimique la plus toxique. C'est pourquoi on observe souvent une diminution de la toxicit du cuivre avec l'augmentation du pH. L'influence du pH sur la toxicit du cuivre vis--vis de Daphnia magna a galement t mise en vidence par De Schamphelaere et Janssen, 2002a. Dans la gamme de pH teste (5.98-7.92), les EC50 observes aprs 48h varient de 88 820 nM pour le cuivre dissous et de 17 33 nM pour le cuivre libre mesur au moyen d'une lectrode slective (ISE25, Cf. Monbet et Coquery, 2003). Une partie des variations de la toxicit peut ainsi tre attribue des diffrences de spciation quand le pH varie. On peut cependant noter que Lauren et McDonald, 1986 ont conclu que le pH n'affectait pas la mortalit court terme d'Oncorhynchus mykiss expose au cuivre. D'aprs Erickson et al., 1996, une diminution de la toxicit du cuivre est observe pour Pimephales promelas. Cette diminution est de l'ordre d'un facteur trois par unit de pH supplmentaire (pH 6.5 et 7.4) et semble diminuer aux plus forts pH (entre 7.4 et 8.1). Au-del d'un pH de 8.1 (entre 8.1 et 8.8), on observe une nouvelle baisse des LC50-96h (augmentation de la toxicit).
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Ion Specific Electrode
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3.2.1.3.
Lalcalinit (ions CO32-)
En ne variant que l'alcalinit26, la duret, la concentration en ions sodium et le pH tant maintenus constants, Lauren et McDonald, 1986 ont montr qu'il s'agissait d'un paramtre majeur agissant sur la toxicit aigu du cuivre vis--vis d'Oconrhynchus mykiss. L'effet rducteur de l'alcalinit sur la toxicit rsulte de la rduction des effets du cuivre sur la fonction ionorgulatrice des branchies. L'alcalinit joue sur la forme chimique de l'lment toxique : un quilibre se cr entre les espces considres comme toxiques (Cu2+, CuOH+, CuOH2) et les espces peu ou non toxiques (CuHCO3+, CuCO3, Cu(CO3)22-) dont les concentrations sont proportionnelles l'alcalinit. Cet effet extrieur modulateur de l'alcalinit sur la toxicit du cuivre envers Oconrhynchus mykiss agit rapidement : en moins de 24h dans l'exprience de Lauren et McDonald, 1986. Erickson et al., 1996 ont galement observ une diminution de la toxicit du cuivre sur Pimephales promelas lors d'une augmentation de l'alcalinit. Ils ont galement mis en vidence une plus grande influence de l'alcalinit sur la diminution de la toxicit du cuivre aux plus forts pH. Ce qui est en accord avec les calculs de spciation (voir Figure 3-3). 3.2.1.4. Autres ions comptiteurs (Na+, K+, S2-, Cl-)
D'autres ions sont impliqus dans les phnomnes de comptitions avec les mtaux. C'est par exemple le cas de Na+, K+ ou Cl-. De schamphelaere et al., 2003 ont ainsi remarqu un effet protecteur des ces ions sur la toxicit du zinc vis--vis d'Oncorhynchus mykiss, effet cependant moins marqu que pour d'autres ions tels que Ca2+ et CO32-. De rcentes tudes ont montr l'importance de la prise en compte de la prsence des sulfures (S2-), mme dans les eaux fortement oxygnes, e. g. entre 0.62 et 570 nM de sulfures pour les rivires Bianchini et Bowles, 2002. Les modles actuels de spciation n'intgrent pas encore les sulfures en tant que ligands possibles pour les mtaux. Par voie de consquence, aucune version de BLM incluant cette possibilit n'a t publie. 3.2.2. Influence de la matire organique sur la toxicit des mtaux L'effet de la matire organique sur la biodisponibilit des mtaux est reconnu (Kim et al., 1999). Une diminution de la toxicit des mtaux a souvent t associe la prsence de matires organiques. En effet, ces ligands organiques rduisent les concentrations en ions mtalliques libres (espce majoritairement responsable de la toxicit des mtaux) dans l'environnement aquatique. Ce sont ces premires observations d'une baisse de la toxicit associe une baisse de la concentration en ions mtalliques libres qui ont conduit l'laboration des FIAM (voir point 2.3.5.1). Erickson et al., 1996 ont observ une diminution de la toxicit du cuivre (exprime en concentration de cuivre total) vis--vis de Pimephales promelas lors de l'augmentation de la concentration en COD (Carbone Organique Dissous). En effet, les complexes forms entre le cuivre et les ligands organiques sont considrs comme moins biodisponibles pour les organismes vivants. L'ajout de matires organiques une concentration de 5 mg/L a entran, dans cette tude, une complexation du cuivre 90% et une baisse de la toxicit d'un facteur 4. Ces rsultats sont en accord avec ceux obtenus par Welsh et al., 1993 sur des larves de la mme espce mme si, dans cette dernire tude, l'effet de la matire organique sur la toxicit du cuivre tait encore plus prononce.
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Lalcalinit est dfinie comme la capacit quantitative des milieux aqueux ragir avec les ions hydrogne (ISO 6107-2). L'alcalinit reprsente donc le pouvoir tampon dune eau et est exprime par le titre alcalimtrique complet (TAC). Pour une eau naturelle, elle traduit la somme des anions hydrognocarbonates, carbonates et hydroxydes alcalins (Na) ou alcalino-terreux (Ca, Mg).
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Certaines espces mtalliques ne sont pas susceptibles de ragir directement avec les sites la surface des membranes cellulaires et sont ainsi considres comme biologiquement inactives, c'est dire non biodisponibles. On sait par exemple que les mtaux associs aux collodes (Rich et Morel, 1990) ou ceux complexs des ligands organiques forts (Anderson et Morel, 1982) font partie de ces espces. 3.2.3. Accumulation du mtal au niveau du ligand biotique et toxicit Les branchies des poissons sont considres comme les organes critiques lors dexposition des concentrations toxiques de cuivre. En effet, leur importante surface de contact avec le milieu extrieur, pour assurer les fonctions respiratoires, ainsi que la faible distance entre les milieux interne (organisme) et externe (eau environnante), en font la cible privilgie des tous les polluants. La fixation des mtaux prsents dans les eaux au niveau des branchies des poissons est la cause de dysfonctionnement des fonctions respiratoire et ionorgulatrice de ce systme. Le cuivre est de plus connu pour provoquer de graves dommages au niveau de la structure lamellaire des branchies. Des altrations des cellules chlorure, charges de losmorgulation, ainsi que des cellules pavimenteuses, des hyperplasies et des fusions lamellaires des lamelles secondaires ont t observes par Arellano et al., 1999 sur une espce marine, Solea senegalensis. Mazon et al., 2002 ont obtenus des rsultats similaires en exposant une espce de poisson tropical vivant dans les eaux douces, Prochilodus scrofa. L aussi, des dgnrations cellulaires se traduisant par des ncroses27 et des apoptoses28 taient intenses pour des concentrations en cuivre comprises entre 25 et 29 g Cu/L (valeurs proches de la LC50 pour cette espce). On peut distinguer deux types de rponses laction dun toxique :
Des rponses non spcifiques telles que llongation des lamelles pithliales, les hyperplasies29, ou encore les fusions lamellaires. Ces rponses sont connues pour tre induites par de nombreux irritants des tissus des branchies. Des effets dltres directs associs une exposition des branchies des mtaux lourds. Cest le cas des hypertrophies cellulaires (notamment les cellules chlorures), et des ncroses suivies par des ruptures de lpithlium.
Les cintiques daccumulation du cuivre dans les branchies ont t tudies pour diffrents gabarits de lespce Lepomis gibbosus (Anderson et Spear, 1980). Les courbes daccumulation de cuivre dans les branchies en fonction du temps (Figure 3-4) peuvent tre caractrises par deux phases.
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Mort accidentelle des cellules cause par des facteurs extrieurs comme des dommages dus des actions physiques ou chimiques (exposition des substances toxiques). Mort cellulaire programme physiologiquement par des facteurs internes comme les hormones, dautres substances intra cellulaires ou des facteurs tissulaires. Cependant, des vnements extrieurs la cellule peuvent induire indirectement lapoptose via laction dhormones.
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Augmentation d'un tissu ou de cellules pour compenser une perte anormale ou en raction une agression. 57/85
Figure 3-4 : Accumulation de cuivre dans les branchies de Lepomis gibbosus exposs des concentrations proches des concentrations ltales (d'aprs Anderson et Spear, 1980)
Au cours de la premire phase, le cuivre saccumule rapidement. Une baisse temporaire des niveaux de contaminants prcde la seconde phase daugmentation moins rapide. En faisant lhypothse que laccumulation est relie lactivit des branchies, on peut alors imputer les changements dans les vitesses dagglomration du cuivre des modifications du systme respiratoire que forment les branchies. Le dclin temporaire observ entre ces deux phases pourrait tre attribu un rejet de mucus, et du cuivre associ, au niveau des branchies. On peut galement noter que les vitesses daccumulation du cuivre dans les branchies sont inversement proportionnelles au poids des organismes tudis. Il sagirait dun phnomne dordre allomtrique : le nombre de sites potentiels de complexation pour le cuivre tant peut tre reli la surface totale des structures lamellaires des branchies, les petits poissons, possdant une surface respectivement plus importante que les grands poissons, auraient la capacit daccumuler de plus grandes quantits de cuivre. Anderson et Spear, 1980 ont galement tudi la phase de dtoxication suivant larrt de la contamination en cuivre de Lepomis gibossus. Laccumulation de cuivre lors dexpositions des concentrations dpassant les seuils naturels est un phnomne compltement rversible ds lors que les concentrations en cuivre retrouvent leurs niveaux normaux. Au bout de trois heures, le retour aux concentrations mesures avant lexposition est atteint dans les branchies. L encore, les vitesses dlimination du cuivre excdentaire dpendent du poids de lindividu. Les cintiques dlimination tant inversement proportionnelles au poids.
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Figure 3-5 : Dtoxication des branchies de poissons ayant subis une exposition au cuivre (d'aprs Anderson et Spear, 1980)
La demi-vie biologique du cuivre chez Lepomis gibossus calcule daprs ces expriences varie de 1,6 4,8 h. en fonction du poids de lindividu. Il apparat donc que laccumulation de cuivre dans les branchies est fonction du temps. Il a t par ailleurs montr quelle dpendait aussi des concentrations en cuivre prsentes dans leau, bien que lon suppose que le cuivre capt par les branchies soit d'abord partiellement transfr au plasma et distribu ensuite lensemble de lorganisme via le rseau sanguin. Le cuivre est prsent dans les branchies essentiellement de faon intracellulaire mais aussi, partiellement sur les membranes plasmiques. Le cuivre saccumule donc dans les cellules pavimenteuses, les cellules chlorure, les cellules mucus ainsi que dans la couche de base de lpithlium des branchies. Les hyperplasies dues aux hypertrophies des cellules pavimenteuses comme celles observes chez Prochilodus scrofa pourraient jouer un rle de barrire empchant la diffusion des espces toxiques. Mais cet effet de lexposition un mtal toxique (ici le cuivre) augmente aussi les distances pour les phnomnes de diffusion pour les changes gazeux entre le sang et leau et rduit la distance entre les lamelles (donc rduction de la surface de contact) intervenant dans le captage de lO2 dans le processus de respiration. Tout ceci conduit des situations hypoxiques pouvant conduire la mort de lorganisme.
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Figure 3-6 : Reprsentation de la mortalit en fonction de laccumulation de cuivre sur les branchies
Dmonstration est faite par (MacRae et al., 1999), dun lien entre la toxicit du cuivre et son accumulation dans les branchies (voir Figure 3-6). En effet, une accumulation constante correspondant 50% de mortalit a t observe (LA50 = Lethal Accumulation) pour Oncorhynchus mykiss. Cette LA50 semble constante pour des caractristiques physico-chimiques prcises (Meyer, 1999). La LC50 est donc dfinie comme tant la concentration prdite de mtal dissous requise pour obtenir une accumulation gale la LA50 au bout de 24 h. Dans ce cas, la modlisation de la complexation du cuivre (ou dautres mtaux) au niveau des branchies permet lvaluation de la toxicit dune espce mtallique en fonction des diffrents paramtres rgissant sa spciation en milieu aqueux.
3.3. Un exemple : BLM-cuivre pour les daphnies

Nous avons vu prcdemment que l'on considre que le ligand biotique se situe la surface des branchies chez les poissons, et, plus prcisment, au niveau des protines constituant les canaux assurant la rgulation des ions sodium et calcium dans le sang. En ce qui concerne les autres organismes, on met l'hypothse qu'un ligand biotique existe galement et que la mortalit peut donc tre modlise d'une faon similaire. Nous allons ainsi dtailler, pour exemple, les tapes de construction et de validation d'un BLM mis au point pour le cuivre, pour un invertbr (Daphnia magna). 3.3.1. Construction d'un BLM-cuivre pour les daphnies (invertbrs) Dans leur tude, De Schamphelaere et Janssen, 2002a, prsentent une mthodologie de construction dun BLM pour les daphnies base sur des rsultats de tests de toxicit aigu sur 48h. Le principe dlaboration de ces tests consiste ne faire varier quun paramtre au cours dune srie, les autres restant de bas niveaux, les plus constants possibles. Cette srie de tests permet de tester sparment les effets de Ca, Mg, SO4, Cl, Na, K et du pH sur la toxicit du cuivre vis--vis de Daphnia magna. Des constantes daffinit entre le ligand biotique et ces espces chimiques peuvent ensuite tre dtermine grce la rsolution des quations mises au point dans le cadre du BLM.
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La relation entre les concentrations ltales en cuivre dans leau et les concentrations ltales sur le ligand biotique (cuivre accumul au niveau du ligand biotique) pour Daphnia magna tait inconnue. Cette relation, connue pour Oconrhynchus mykiss, MacRae et al., 1999, et partiellement vrifie pour Pimephales promelas, est applique au cas de ces invertbrs. Cette tude permet le calcul de constantes spcifiques Daphnia magna, bases exclusivement sur des rsultats de tests de toxicit. Auparavant, lhypothse tait faite que les constantes pour les poissons et les invertbrs taient similaires. On observe pourtant des diffrences (voir Tableau 3-2).
Tableau 3-2 : Mise en parallle des constantes dtermines pour Daphnia magna et Pimephales promelas
Constantes pour le ligand biotique Log KCaBL Log KMgBL Log KNaBL Log KHBL Log KCuBL Log KCuOHBL
50% f CuBL
Daphnia magna 3.47 (3.07-3.80) 3.58 (3.10-3.90) 3.19 (2.92-3.48) ~5.4 (P. promelas) 8.02 7.45 0.39
Pimephales promelas 3.6 3.6 (Log KCaBL) 3.0 5.4 7.4 0.33
[EC50(Cu2+)]0 (nM) 6.10 (5.45-6.74) 19.9 Donnes pour Daphnia magna (carts-types obtenus par simulations Monte-Carlo) : De Schamphelaere et Janssen, 2002a Donnes pour Pimephales promelas : Playle et al., 1993a ; Santore et al., 2001 ; Di Toro et al., 2001
On peut galement noter, comme on le voit dans le Tableau 3-2, que la toxicit du complexe CuOH+ a t prise en compte pour expliquer la toxicit du cuivre envers Daphnia magna. Dautres travaux proposaient galement une dmarche similaire (Blust et al., 1991 ; Allen et Hansen, 1996). Seules les concentrations de cuivre dissous ont t mesures en dbut et fin dexpriences. Les concentrations en cuivre libre correspondantes ont t calcules partir du BLM version a008. Cette version allie les capacits de modlisation en spciation chimique de CHESS (Santore et Driscoll, 1995) et celles en complexation avec la matire organique du Model V de WHAM (Tipping, 1994). Les constantes de la base de donnes NIST (Martell et al., 1997) ont t utilises pour la complexation avec les espces inorganiques. Les concentrations en ions nont pas t suivies pendant le test. Des expriences antrieures ayant montres une bonne stabilit. Les concentrations en DOC ont t mesures en dbut (271 g/L) et fin (280 g/L) de test. Ce qui donne une valeur moyenne denviron 276 g/L. Lhypothse selon laquelle en gnral, et en labsence dautres informations, il est raisonnable destimer, pour la modlisation, que 50% de la DOM est constitue dacides fulviques ayant une capacit complexante pour les ions (Dwane et Tipping, 1998) est utilise. On a donc 138 g/L de DOC compose en totalit dacides fulviques. Ces acides fulviques contiennent 50% de carbone (valeur par dfaut). Une des particularits du BLM pour D. magna rside dans le fait que le magnsium doit tre considr dans le modle comme rduisant la toxicit du cuivre, ce qui nest pas le cas pour P. promelas. Cela tend prouver lexistence de diffrences propres aux espces testes.
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3.3.2. Validation du modle mis au point Le BLM dvelopp dans l'tude prcdente est test au cours d'une autre exprience (De Schamphelaere et al., 2002b) dans le but d'affiner le modle et de le valider avec d'autres jeux de donnes. La partie complexation avec la matire organique du BLM, cest dire le modle WHAM V, doit ainsi tre calibre selon le type dacides humiques utilis. En effet, si le nombre de sites actifs pris en compte par le modle semble tre constant, les constantes de stabilit entre le cuivre et la MO doivent tre adaptes. La constante dchange entre le mtal et les protons pour la complexation avec la MO est affine en utilisant la technique des moindres carres. Les concentrations en cuivre libre mesures et modlises sont exprimes en fonction de la concentration totale en cuivre, et ce pour chaque milieu dessai. La validit des constantes ainsi dfinies, pour chaque milieu, doit ensuite tre vrifie. 3.3.3. Test du BLM-cuivre pour les daphnies Les simulations prsentes dans cette partie ont t ralises grce au BLM version Windows 1.0.0. (Hydroqual, 2002). Le module ddi l'estimation de la toxicit du cuivre sur Daphnia magna a t utilis. Le tableau suivant numre les caractristiques physico-chimiques de base du milieu choisi pour les calculs.
Tableau 3-3 : Caractristiques physico-chimiques de l'eau utilise pour la modlisation
Paramtre Temprature pH Cu DOC % acides humiques Ca Mg Na K SO4 Cl Alcalinit * valeur par dfaut du modle Valeur 18C 7.6 Variable 0.01 50* 13.23* mg/L 3.65* mg/L 5.29* mg/L 1.17* mg/L 6.63* mg/L 5.67* mg/L 52.47* mg CaCO3 /L
Les objectifs des tests conduits ici sont d'une part, d'utiliser un modle type BLM actuellement disponible, et d'autre part, d'observer l'influence des paramtres pris en compte dans les calculs sur l'volution de la toxicit du cuivre vis--vis de Daphnia magna. L'influence des diffrents paramtres tests est prsente dans la Figure 3-7.
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Figure 3-7 : Influence des paramtres du BLM sur la toxicit du cuivre vis--vis de Daphnia magna. Sur les graphiques sont indiqus, en abscisse, les paramtres tests et, en ordonnes, la LC50 calcule et exprime en cuivre dissous. Calculs effectus avec le Cu-BLM pour Daphnia magna (Hydroqual, 2002).
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La Figure 3-7 prsente l'influence dcroissante des paramtres suivants sur la toxicit du cuivre vis-vis des daphnies (Daphnia magna) : COD >> pH > Ca2+ > Na+ > alcalinit > % d'acides humiques > Mg2+ > SO42- > K+ > ClLe BLM prdit la toxicit du mtal pour un environnement aquatique donn, dfini par certaines de ses caractristiques physico-chimiques. L'utilisateur de ce programme de calcul est donc amen fournir ces donnes en entre. Certains de ces paramtres entranent des effets importants sur les calculs de toxicit alors que d'autres n'ont qu'un effet mineur sur les prdictions. COD : les concentrations de matires organiques dissoutes dans le milieu sont reprsentes par la mesure du carbone organique dissous. La matire organique dissoute joue un rle important dans la dtermination de la spciation et de la biodisponibilit des mtaux. De plus, comme l'effet de ce paramtre est important mme de faibles valeurs, il est important de s'assurer une limite de dtection analytique suffisamment basse lors de la mesure. pH : des valeurs prcises de pH sont ncessaires car elles influent de manire importante sur la spciation du mtal et sur les prdictions du modle. Le pH est galement un lment important pour la dtermination de la capacit de complexation du mtal avec la matire organique. Les cations majeurs (Ca2+, Na+, Mg2+, K+) : ces paramtres sont ncessaires au fonctionnement du modle. Le calcium et le sodium entre en comptition avec le mtal au niveau du ligand biotique. Ils auront donc un effet direct sur les prdictions de la toxicit du mtal. Pour certains organismes, le magnsium peut galement avoir une action non ngligeable sur les calculs. En ce qui concerne le potassium, aucun effet direct sur la toxicit des mtaux n'est connu actuellement. C'est pourquoi les valeurs de ce paramtre pourront tre estimes en l'absence de donnes. Les anions majeurs (SO42- et Cl-) : les ions sulfate et chlorure sont importants considrer pour les calculs du BLM (le cas des ions carbonate, anions majeurs galement, est tudi sparment). Mme si ces anions n'ont pas rellement d'effets directs sur la toxicit du cuivre en particulier, il est nanmoins important d'indiquer leurs concentrations puisqu'elles interviennent dans le calcul de la force ionique et sont ncessaires au respect de l'quilibre des charges (ces paramtres peuvent, si besoin, tre estims). La chimie des mtaux et de la matire organique dpend en effet des variations de la force ionique. Alcalinit : le BLM utilise les valeurs d'alcalinit et de pH pour calculer la concentration de carbone inorganique dissous (CID) dans l'eau. Les espces chimiques comprises dans le CID sont les ions carbonate (CO32-), hydrognocarbonate (HCO3-) et dihydrognocarbonate (H2CO3). Les ions hydrognocarbonate sont la forme prdominante dans la plupart des eaux naturelles (pour des pH compris entre 6.3 et 10.3). L'alcalinit est un paramtre important pour les calculs du BLM cause de la formation des complexes mtalliques avec les carbonates. L'alcalinit doit tre mesure sur des chantillons filtrs afin d'liminer la contribution potentielle du carbonate de calcium prcipit, en suspension.
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3.4. Etude exprimentale 1 : influence de la matire organique sur l'accumulation de cuivre au ligand biotique
Cette exprience a pour but principal de tester l'influence de la matire organique dissoute sur l'accumulation du cuivre dans les branchies de Gasterosteus aculeatus (pinoche), court terme (dure du test = 96h.). Les rsultats obtenus seront ensuite compars aux calculs du BLM dvelopp pour le cuivre sur une autre espce de poisson, Pimephales promelas (vairon tte de boule). 3.4.1. Etudes prliminaires 3.4.1.1. Modlisation du devenir du cuivre en prsence de matires organiques dissoutes
Dans un premier temps, afin de mettre en place des conditions exprimentales adquates pour le test, des modlisations ont t ralises. Celles-ci ont t menes l'aide d'un programme de calcul de spciation chimique permettant la prise en compte de la complexation des mtaux avec la matire organique : WinHumic V, version 6 (Gustafsson, 2000), intgrant le module Model V du WHAM (Cf. point 2.2.4.1.1). Deux sries de modlisations ont t ralises, la premire en prsence d'une forte concentration en cuivre (635 g/L, Figure 3-8), et la seconde en prsence d'une concentration en cuivre plus faible (25 g/L, Figure 3-9). Les graphiques suivants prsentent la fois l'volution des concentrations en cuivre dissous (symbole = carr) et en cuivre libre (symbole = losange), en fonction de la concentration en matires organiques dissoutes. Les paramtres physico-chimiques de l'eau utilise pour l'exprience ont servi de donnes d'entre au modle (voir les caractristiques de l'eau de l'aquarium F , aquarium tmoin, Tableau 3-7).
Figure 3-8 : Modlisation de la complexation du cuivre (cuivre libre) avec la matire organique dissoute (eau des msocosmes, [Cu]init = 10 M) WinHumic V version 6
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Figure 3-9 : Modlisation de la complexation du cuivre (cuivre libre) avec la matire organique dissoute (eau des msocosmes, [Cu]init = 0.39 M) WinHumic V version 6
Ces modlisations nous permettent de constater les points suivants :
En labsence de MO, le cuivre est presque entirement prsent sous forme de complexes inorganiques, donc sous forme dissoute. Cependant, la fraction de cuivre sous forme libre nest que denviron 2.5%. A 5 mg/L de matires organiques, les concentrations de cuivre sous forme dissoute et libre diminuent dun facteur 1.7 dans le cas dune forte concentration en cuivre total initiale (635 g/L) et dun facteur 45.5 pour une faible concentration en cuivre total initiale (25 g/L).
Comme la toxicit du cuivre semble lie, soit la forme dissoute (surestimation de la toxicit), soit la forme libre (sous estimation de la toxicit), ces concentrations ont besoin d'tre suivies aucours de tests cotoxicologiques. On peut alors constater que le suivi des concentrations en cuivre libre pendant le test pourra tre dlicat aux faibles concentrations en cuivre total, et particulirement en prsence de matire organique. Il semble important de prciser ici quel type danalyse permet de mesurer les diffrentes formes chimiques des mtaux et du cuivre, en particulier. De manire simplifie, on peut citer les deux mthodes suivantes (voir Monbet et Coquery, 2003 pour une revue bibliographique) :
ICP/MS : cuivre total et cuivre dissous, cest dire la majorit des espces complexes du cuivre (y compris le cuivre complex avec la matire organique). Ampromtrie : cuivre libre, sous forme Cu2+. Modlisation de la toxicit du cuivre vis--vis de Pimephales promelas
3.4.1.2.
Dans un second temps, la modlisation de la toxicit du cuivre vis--vis de Pimephales promelas a t mene en prenant en compte les paramtres physico-chimiques de tests trouvs dans la littrature et conduits sur l'pinoche. Cette modlisation a pour objectif de comparer les valeurs de toxicit du cuivre vis--vis de l'pinoche identifies dans la littrature aux prdictions faites par le BLM dvelopp pour Pimephales promelas, dans les mmes conditions physico-chimiques.
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Dans la littrature on ne trouve que peu d'essais cotoxicologiques mettant en uvre le cuivre et lpinoche. Le Tableau 3-4 en donne un rcapitulatif.
Tableau 3-4 : Rcapitulatif des essais cotoxicologiques testant les effets du cuivre sur lpinoche
Substance / organisme tests Sulfate de cuivre / Gasterosteus aculeatus (~58 mm et 1.9 g) Sulfate de cuivre / Gasterosteus aculeatus (~47 mm et 0.6 g) Rsultat LC50-24h = 2780 g/L LC50-48h = 1960 g/L LC50-72h = 1590 g/L LC50-96h = 1490 g/L LC90-24h = 2800 g/L Autres informations Essai dynamique, eau douce, pH = 8, T = 10C, duret = 284 mg CaCO3 /L, alcalinit = 244 (HCO3). Essai statique Rfrence Svecevicius et Vosyliene, 1996 Lemma et Yau, 1974
La modlisation suivante est base, en ce qui concerne les paramtres physico-chimiques du milieu d'tude, sur les donnes des tests cotoxicologiques mens par Svecevicius et Vosyliene, 1996 sur lpinoche. Les informations manquantes ont t remplaces par les valeurs par dfaut proposes dans la documentation du BLM (Hydroqual, 2002).
Tableau 3-5 : Qualit de leau utilise pour la modlisation
Paramtre Temprature pH Cu DOC % acides humiques Ca Mg Na K SO4 Cl Alcalinit S * valeur par dfaut Valeur 10C 8 Variable : 0.1-500 g/L Variable : 0.01-10 mg/L 50* 114 mg/L 3.65* mg/L 5.29* mg/L 1.17* mg/L 6.63* mg/L 5.67* mg/L 400.26 mg CaCO3 /L 1.10-10* mg/L
Les rsultats de la modlisation sont prsents sur la Figure 3-10, ci-dessous.
Figure 3-10 : Evolution de la toxicit du cuivre vis--vis de Pimephales promelas calcule au moyen du BLM (Hydroqual, 2002). Les caractristiques physico-chimiques du milieu employ pour les tests conduits sur l'pinoche Svecevicius et Vosyliene, 1996 ont t utilises.
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Les rsultats obtenus partir des calculs raliss par le BLM, pour Pimephales promelas, indiquent une toxicit du cuivre pour cette espce comprise entre 1450 et 3800 g/L en fonction de la concentration en COD, dans des conditions physico-chimiques similaires celles utilises pour l'pinoche. Mme si la concentration en matires organiques dissoutes n'est pas prcise dans l'tude de Svecevicius et Vosyliene, 1996, il est possible de supposer que cette concentration tait trs faible, comme dans la plupart des tests cotoxicologiques de laboratoire. La toxicit du cuivre calcule pour Pimephales promelas (~1450 mg/L) est donc trs proche de la toxicit mesure pour l'pinoche (1490 mg/L). 3.4.2. Matriels et mthodes La substance teste est le sulfate de cuivre (CuSO4) : M(CuSO4) = 159.62 g/mol, M(Cu) = 63.55 g/mol. L'essai mis en place est de type statique et a lieu dans une srie de six aquariums de 15 L. La charge en poisson ne dpassera pas 1 g/L soit neuf poissons par aquarium. L'organisme test est l'pinoche (Gasterosteus aculeatus), poisson d'eau douce que l'on retrouve galement en estuaire jusquau niveau des zones msohalines. De manire viter les interfrences sur l'accumulation et la toxicit du cuivre du fait de l'ingestion de particules contamines, aucun aliment n'a t introduit dans le milieu de test durant la priode d'essai (96h). Le matriel utilis a t soumis des lavages l'acide nitrique suprapur et des rinages prliminaires leau distille (dionise) de manire viter toute contamination. L'eau du robinet servant lapprovisionnement des msocosmes est utilise comme solvant. Elle a t soumise, au pralable, un bullage suivi d'une priode de repos de manire acclrer la prcipitation des carbonates. Ceci permet d'viter une ventuelle prcipitation de carbonate de cuivre au cours de l'essai. Un suivi quotidien de la concentration en oxygne dissous, de la temprature et du pH est organis tout au long du test, dans les aquariums contenant les organismes tests. Deux types de matires organiques dissoutes sont tests au-cours de l'exprience. La premire, MO(1), est constitue d'acides humiques ACROS. La seconde, MO(2), a t obtenue partir de tourbe blonde sche et broye. Les extraits des matires organiques ont t mis en solution, sous agitation magntique pendant 12h suivie d'une mise l'quilibre pendant 12h. Les solutions ont ensuite t filtres 0,45 m. Les solutions mres ainsi obtenues affichaient des concentrations en carbone organique dissous de 610 et 100 mg/L respectivement. Les caractristiques des diffrents aquariums mis en place pour le test sont prcises dans le Tableau 3-6.
Tableau 3-6 : Caractristiques des aquariums utiliss au-cours du test
Identifiant A B C D E F Caractristiques Matires organiques dissoutes de type 1 MO(1) : ajout d'une concentration nominale de 2.5 mg/L [Cu]nominale = 50 g/L MO(1) : ajout d'une concentration nominale de 5 mg/L [Cu]nominale = 50 g/L MO(1) : ajout d'une concentration nominale de 2.5 mg/L 9 organismes test [Cu]nominale = 50 g/L MO(2) : ajout d'une concentration nominale de 5 mg/L [Cu]nominale = 50 g/L pas d'ajout de MOD supplmentaire 9 organismes test [Cu]nominale = 50 g/L Blanc : eau de dilution seule
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Les mthodes utilises pour les diffrentes analyses conduites au-cours du test sont explicites dans les paragraphes suivants. Analyse du cuivre dans les branchies : les chantillons (branchies d'pinoches) sont prlevs, aprs 96h, puis acidifis (HNO3 qualit suprapure). Ils sont ensuite chauffs 120C sur plaque chauffante pendant deux heures dans des flacons tfloniss. La prparation est enfin volume 10 mL avec de l'eau milliQ avant que l'analyse ne soit ralise en ICP optique. Analyse du cuivre : l'analyse du cuivre est ralise par absorption atomique (four graphite). Les chantillons prlevs ont pralablement t acidifis. Mesure des autres ions : chromatographie changeuse d'ions (Cl-, NO3-, SO42-), NF EN ISO 99631 (TAC), analyse directe par ICP optique selon la norme NF EN ISO 1885 (Ca2+, K+, Mg2+, Na+). Analyse de la matire organique dissoute : une analyse quantitative de la matire organique dissoute a t mene au cours de l'exprience de manire rpte (t0, t+24h, t+48h et t+96h). La concentration en Carbone Organique Dissous a t mesure selon la norme NF EN 1484 Lignes directrices pour le dosage du carbone organique total (COT) et carbone organique dissous (COD) . Les chantillons ont t acidifis avec H3PO4 (1,5 mL/L), centrifugs 400 g pendant 20 minutes puis ont subi un dgazage l'oxygne pendant 15 minutes. La mesure est ensuite ralise grce un analyseur de carbone pour chantillons liquides (Shimadzu TOC 5050). 3.4.3. Rsultats et discussion Les Tableau 3-7 et Tableau 3-8 prsentent les rsultats des diffrentes mesures ralises sur l'eau des aquariums utiliss.
Tableau 3-7 : Paramtres physico-chimiques de l'eau des diffrents aquariums
Aquarium COD Ca2+ (mg/L) (mg/L) A t0 3.3 595 t+24h 3.1 t+48h 3.4 t+96h 2.8 525 B t0 6.2 565 t+24h 5.7 t+48h 6.0 t+96h 5.1 625 C t0 6.9 525 t+24h 6.4 t+48h 6.4 t+96h 6.2 625 D t0 6.7 505 t+24h 6.0 t+48h 5.2 t+96h 4.6 575 E t0 1.7* 485 t+24h 1.4 t+48h 1.5 t+96h 1.6 585 F t0 1.4* 605 t+24h 1.2 t+48h 1.2 t+96h 1.4 565 * moyenne de deux mesures K+ Mg2+ (mg/L) (mg/L) 4.80.8 13.61.3 3.30.8 13.71.3 4.90.8 14.91.3 3.30.8 14.01.3 4.80.8 13.31.3 3.50.8 14.11.3 4.90.8 13.11.3 3.30.8 13.81.3 4.90.8 13.11.3 3.30.8 14.21.3 5.20.8 13.31.3 3.30.8 14.11.3 Na+ (mg/L) 17.21.1 16.11.1 18.51.1 16.61.1 16.71.1 17.01.1 17.11.1 15.61.1 15.41.1 16.01.1 15.61.1 16.11.1 TAC (mmol Cl- (mg/L) NO3- (mg/L) SO42H+/L) (mg/L) 2.200.05 55.81.5 2.250.10 17.000.70 2.100.05 2.200.05 2.300.05 2.250.05 2.300.05 2.050.05 2.100.05 2.150.05 2.250.05 2.150.05 2.250.05 57.71.5 56.71.5 57.01.5 55.81.5 57.41.5 56.81.5 58.41.5 57.81.5 58.01.5 58.51.5 57.91.5 2.550.10 2.400.10 2.650.10 2.500.10 2.850.10 2.400.10 2.750.10 2.450.10 2.750.10 1.400.10 1.550.10 17.250.70 17.000.70 17.150.70 16.700.70 17.350.70 17.300.70 17.500.70 17.500.70 17.350.70 17.750.70 17.750.70 CuT,dissous (g/L) 51.21.5 51.21.5 53.31.5 55.91.5 50.81.5 53.81.5 52.81.5 53.01.5 53.51.5 54.81.5 55.01.5 53.61.5 46.51.5 41.01.5 39.71.5 <0.5 <0.5 <0.5
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Tableau 3-8 : Suivi de la temprature, du pH et de l'oxygne dissous au cours du test

Aquarium C t0 t+24h t+48h t+72h t+96h E t0 t+24h t+48h t+72h t+96h T (C) 18.7 16.3 15.5 14.3 14.2 18.7 16.3 15.5 14.3 14.2 [O2]dissous (mg/L) 8 7.62 7.26 7.2 6.98 8.5 7.62 7.4 7.3 7.2 pH 7.9 7.82 7.85 7.71 7.77 7.9 7.89 7.65 7.72 7.73
Les rsultats des analyses de cuivre dans les branchies des poissons exposs sont prsents dans le Tableau 3-9.
Tableau 3-9 : Concentrations en cuivre accumul au niveau des branchies des pinoches
N chantillon 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Avec ajout de matires organiques dissoutes (aq.C), [Cu]branchies (nmol/g ph30) 101 50 50 30 63 38 41 44 22 Sans ajout de matires organiques dissoutes (aq.E) , [Cu]branchies (nmol/g ph) 57 57 32 60 58 17 177 65
Les rsultats du Tableau 3-9 sont repris pour tre prsents sous forme de botes moustaches dans la Figure 3-11.
150
100
50
0 1 x 2
Figure 3-11 : Distribution des concentrations en cuivre mesures dans les branchies des pinoches en prsence (1) ou non (2) de matires organiques dissoutes
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ph = poids humide
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La comparaison des mdianes indique une plus faible concentration de cuivre au niveau du ligand biotique des poissons en l'absence de matires organiques dissoutes : 42.63 nmol/g (poids humide) en prsence de MOD et 56.94 nmol/g (poids humide) sans ajout de MOD. Nanmoins, la faible taille des chantillons utiliss lors de cette exprience n'aura pas permis de mettre en vidence une diffrence significative entre les concentrations de cuivre mesures dans les branchies des pinoches exposes, en prsence ou en l'absence de matires organiques dissoutes. Ceci vient corroborer les rsultats des tudes montrant l'influence de la matire organique dissoute sur la biodisponibilit des mtaux. Ici, la prsence de matire organique entrane une complexation du cuivre plus importante, rduisant de ce fait sa biodisponibilit pour l'organisme test. Par ailleurs, des modlisations ralises dans les mmes conditions physico-chimiques que celles des aquariums C et E montrent une diffrence de toxicit pour Pimephales promelas. En effet, les LC5031 calcules vont de 418 g/L pour l'aquarium E (sans ajout de matires organiques dissoutes) 993 g/L pour l'aquarium C (avec ajout de matires organiques dissoutes). Ces modlisations ont t ralises l'aide du BLM dvelopp pour le cuivre et Pimephales promelas Hydroqual, 2002.
3.5. Etude exprimentale 2 : test de modles de spciation

Comme nous l'avons vu tout au long de ce rapport, il est fait de plus en plus appel aux techniques de modlisation dans le cadre de l'estimation de la fraction biodisponible des mtaux. Les diffrents outils qu'il est ncessaire de mettre en uvre pour atteindre un tel but sont multiples et l'on retrouve ainsi des modles de spciation chimique avec les ligands inorganiques mais aussi des modles de complexation avec la matire organique. Les BLM intgrent tous ces outils en plus d'un module permettant la modlisation des interactions entre le mtal et le ligand biotique. L'tude qui va suivre a pour but de tester deux modles de spciation diffrents prenant en compte les phnomnes de complexation avec des espces inorganiques et organiques. Le module de spciation intgr au BLM sera bien entendu test. Les descriptions des modles tests sont prsentes ci-aprs.
Module de spciation inclus dans le Biotic Ligand Model v.AP08, interface pour Windows v.1.0.0. (Hydroqual, 2002). Ce module est bas sur une version du modle CHESS (Santore et Driscoll, 1995) modifie en prenant en compte les interactions chimiques et lectrostatiques du modle WHAM V (Tipping, 1994). WHAM 6.0 (Tipping, 1998).
Les concentrations en cuivre libre (Cu2+) sont obtenues par modlisations successives conduites partir des deux modles prsents prcdemment. Ces concentrations sont mises en parallle avec des donnes similaires, obtenues par mesure du cuivre libre, dans des conditions physico-chimiques identiques. Ces mesures ont t ralises par lectrode spcifique (ISE : Ion-Selective Electrode). Les rsultats de cette comparaison sont prsents par la Figure 3-12.
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Valeurs exprimes en cuivre total dissous
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Figure 3-12 : Comparaison entre des mesures de la concentration en cuivre libre par ISE (Ion Selective Electrode) et des donnes obtenues par modlisation
La Figure 3-12 nous permet donc de constater une certaine diffrence entre, d'une part les concentrations en cuivre libre mesures et, d'autre part, les mmes concentrations modlises. Les diffrences sont multiples :
les rsultats obtenus grce au BLM tendent sous-estimer les concentrations en cuivre libre prsentes dans le milieu. Cela entrane comme consquence directe une sousestimation, par le BLM, de la toxicit du cuivre pour les organismes vivants. les rsultats obtenus grce la dernire version du modle WHAM montrent une tendance sous-estimer la concentration en cuivre libre aux faibles concentrations et une tendance surestimer celle-ci aux concentrations plus fortes.
Ces rsultats permettent donc de se poser des questions sur la fiabilit des modles de spciation intgrs aux BLM. Il serait ncessaire, de manire valider la partie du BLM correspondant la spciation chimique des mtaux avec des ligands inorganiques et organiques, de conduire des expriences similaires celle conduite ici. Il serait alors possible de comparer des donnes modlises des valeurs mesures, dans les mmes conditions physico-chimiques.
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3.6. Limites des BLM

Les BLM ont t construits partir de diffrents modles prexistants auxquels vient se greffer un modle charg de prendre en compte l'interaction du mtal, des cations (e. g. Ca2+, Mg2+, Na+) et des organismes. Les diffrents modules de calcul intgrs au BLM ont t prsents tout au long de ce rapport. Il s'agit :

d'un modle de spciation chimique inorganique, e. g. CHESS, MINEQL+, MINTEQA2. d'un modle de complexation des mtaux avec la matire organique, e. g. WHAM, NICADonnan. d'un modle de complexation des mtaux avec les ligands biotiques, e. g. FIAM, GSIM, BLM.
Dune manire gnrale, on peut dire que certains modles constitutifs des BLM ncessiteraient des tapes de validation plus pousses. Cest par exemple le cas du Model V du WHAM. Le fait quil ait t dvelopp, initialement, pour traiter des eaux et sols acides peut faire quil ne puisse pas tre utilis pour des milieux dont les caractristiques sont trs diffrentes. Dautre part, en plus des sites de fixation des mtaux sur la matire organique, il existe, dans les eaux naturelles, d'autres ligands ayant une grande affinit pour les espces mtalliques. C'est le cas, par exemple, des sulfures (voir point 3.2.1.4). Comme tout modle, les BLM reposent sur des hypothses simplificatrices. Cependant certaines nont t encore que peu ou pas valides :
Les BLM sont fonds sur lhypothse du FIAM selon laquelle la toxicit des mtaux vis-vis des organismes vivants est directement lie la concentration (ou lactivit, Cf. note 17, page 32) de lion mtallique libre. Certaines espces mtalliques, autres que l'ion libre, sont souponnes d'exercer un effet toxique (e. g. complexes hydroxydes, certains complexes entre le mtal et la matire organique, etc.). Leur prise en compte dans le cadre de la modlisation au niveau du ligand biotique s'est limite jusqu' prsent l'ajustement de certains paramtres de manire rendre compte de diffrences observes entre les mesures et les calculs. Il serait ncessaire de mettre en place des sries d'expriences visant identifier les autres espces responsables de la toxicit (Cf. Errecalde et al., 1998). Une des hypothses des BLM veut que la stabilit des complexes entre les cations et le ligand biotique reste la mme quelles que soient les caractristiques physico-chimiques des milieux. Or, les ligands biotiques font avant tout partie d'un organisme vivant. En cela, des modifications de la stabilit des complexes peuvent survenir en fonction des ractions de l'organisme aux perturbations environnementales susceptibles de changer la nature des ligands biotiques. La modlisation BLM suppose que les relations entre le mtal et l'organisme se fassent l'quilibre thermodynamique. Cependant, certaines tudes ont montr l'importance des cintiques de raction dans lassimilation de quelques mtaux par les organismes vivants (nickel, aluminium, cobalt, chrome). Le BLM prend en compte, en entre, les paramtres physico-chimiques du milieu environnant (caractristiques de leau). Or, dans le cas du pH, par exemple, des diffrences existent entre les valeurs releves dans leau et celles mesures dans le microenvironnement du ligand biotique chez les poissons Playle et al., 1992 et les invertbrs Gensemer et Playle, 1999. Des travaux ont montr que les conditions au niveau du microenvironnement, constitu par les branchies des poissons par exemple, diffraient des conditions du milieu environnant. Des essais de modlisation de ces phnomnes ont ainsi t entrepris (Tao et al., 2001). Un modle a t dvelopp afin de calculer le pH au niveau des branchies partir des conditions de pH du milieu extrieur. Dautres modles calculent de la mme manire les changements dalcalinit et de secrtions de mucus au niveau des branchies. 73/85
Les incertitudes lies lutilisation des BLM sont nombreuses car elles englobent toutes celles des diffrents modles qui les composent. Ainsi, les incertitudes des modles de spciation avec les ligands inorganiques et organiques viennent s'associer celles des modles mettant en relation les espces mtalliques et les organismes vivants. La principale incertitude rside dans la dtermination des constantes de complexation entre un mtal et la matire organique ou entre le mtal et le ligand biotique. En effet, si des bases de constantes thermodynamiques de rfrence existent pour les ractions de formation de complexes inorganiques (Smith et al., 2003), cela nest pas le cas pour les ractions de formation de complexes organiques ou avec des ligands biotiques. Celles-ci peuvent varier selon le type de matire organique et l'espce biologique teste. Certaines limites dapplicabilit des modles dits BLM sont galement considrer. En effet, lapplication des BLM dvelopps pour une espce na pas encore t valide pour diffrentes espces, diffrents stades de dveloppement et milieux aquatiques.
Aux fortes concentrations en mtaux utilises pour les tests cotoxicologiques ayant servi au dveloppement de BLM (tests de toxicit aigu), les ligands les plus forts prsents en solution, ont pu tre saturs. Leur influence sur la spciation des mtaux n'tait donc plus mesurable. En revanche, aux plus faibles concentrations (tests de toxicit chronique), les sites de complexation les plus forts pour les mtaux ont pu jouer un rle plus important. Les BLM dvelopps pour le moment pour la modlisation deffets aigus ne devront donc tre utiliss que dans les cas dexpositions aigus aux mtaux. La majeure partie de l'activit scientifique porte sur la connaissance de l'interaction mtal / branchies (Cf. modle GSIM, point 2.3.5.3). La modlisation de la fixation du mtal la surface des cellules des algues ou des bactries mais aussi des phnomnes conduisant l'internalisation des espces mtalliques chez ces organismes ncessiterait d'tre dveloppe. Les BLM mis au point pour les algues, par exemple, partent de lhypothse que lassimilation des mtaux par ces organismes se droule selon les mmes phnomnes.
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CONCLUSION
Les lments mtalliques sont des constituants naturels de lcorce terrestre qui peuvent se dissminer naturellement dans le milieu aquatique. Certains cosystmes peuvent donc tre naturellement trs riches en lments mtalliques et abriter des communauts despces qui y sont adaptes. Sous leffet de la pression des activits anthropiques (activits industrielles, agricoles), la contamination mtallique des milieux aquatiques peut augmenter significativement. Au-del dune certaine concentration (parfois trs faible) dans le milieu, les mtaux ont des effets nfastes. Lvaluation de ces effets doit tenir compte des particularits associes aux mtaux. En effet, les concentrations naturelles varient en fonction de la nature gologique du milieu. Il est ainsi difficile, pour les cosystmes affects par la prsence de mtaux, d'estimer la part de mtal d'origine naturelle. Ensuite, certains mtaux prsentent la particularit dtre la fois essentiels pour les organismes vivants mais aussi toxiques au-dessus dune certaine concentration. Les seuils dessentialit et de toxicit peuvent tre trs variables entre les espces. Par ailleurs, les organismes vivants sont adapts aux concentrations naturelles en mtaux prsentes dans leur environnement. La sensibilit des espces peut ainsi tre trs variable entre les rgions. Enfin, les mtaux sont prsents dans les milieux aquatiques sous diffrentes formes chimiques : dans la phase aqueuse sous forme ionique ou complexs avec des ligands (organiques ou inorganiques) ou dans la phase particulaire adsorbs (voire inclus) sur les particules solides en suspension ou dans les sdiments. La biodisponibilit des mtaux est directement lie aux formes sous lesquelles ils se trouvent. Seuls les mtaux sous forme ionique et certains complexes inorganiques et organiques sont considrs comme biodisponibles. La modification des caractristiques physico-chimiques du milieu peut entraner dimportants changements de biodisponibilit. En pratique, les normes de qualit environnementale sont dtermines partir dessais dcotoxicit raliss en laboratoire. Dans les conditions de laboratoire, la majeure partie du mtal se trouve sous forme dissoute. Actuellement, on considre que la totalit du mtal introduit dans le milieu dessai est biodisponible. Ces conditions sont loignes de celles des milieux aquatiques naturels. La prdiction des effets dans des conditions environnementales spcifiques partir des essais dcotoxicit est alors problmatique. Pour pallier ce problme, les modles dits BLM ont t dvelopps, pour quelques espces aquatiques et quelques mtaux, afin de prdire la toxicit (aigu) de ces mtaux en fonction des conditions physico-chimiques d'un milieu donn. Les BLM prsentent lavantage dapporter une mthode de prise en compte des phnomnes de biodisponibilit des mtaux. Dans le cadre du rglement CE/793/93 pour lvaluation et le contrle des risques prsents par les substances existantes, lvaluation des risques lis la production et lutilisation du zinc pour le milieu aquatique tient compte de la biodisponibilit de celui-ci suivant les milieux tudis. La mthodologie retenue utilise les BLM dvelopps pour le zinc, pour diffrents organismes vivants (une algue, un invertbr et un poisson). Des approches similaires seront peut-tre proposes dans les annes venir pour la dtermination de seuils de qualit. Toutefois ces modles rcents sont encore en cours d'laboration pour certains et ncessitent des tapes de validation supplmentaires pour d'autres. L'tude prsente ici a montr lintrt mais aussi les limites des BLM proposs pour l'estimation de la biodisponibilit des mtaux dans les milieux naturels. En effet, les incertitudes sur les rsultats sont encore trs importantes et de nombreuses hypothses nont pas encore t valides. Par ailleurs, il est indispensable de bien cerner le domaine dutilisation des modles dvelopps compte tenu du peu de validation de leur applicabilit diffrentes espces, diffrents stades de dveloppement et milieux aquatiques.
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Devenir et comportement des mtaux dans l'eau : biodisponibilit et modles BLM

Devenir et comportement des mtaux dans l'eau : biodisponibilit et modles BLM

Rdaction NOM Qualit

Evaluation des risques des substances existantes (Rglement CE/793/93)

TABLE DES MATIERES

1.1.1. 1.1.2. 1.1.3. 1.1.4. 1.1.5.

1.2.2.1. 1.2.2.2. 1.2.2.3.

2.1.1. 2.1.2. 2.2.

2.2.1. 2.2.2. 2.2.3.

Modlisation de la complexation des mtaux avec la matire organique ________________ 29

2.3.1. 2.3.2. 2.3.3. 2.3.4.

Modlisation de la complexation mtal / ligand biotique ____________________________ 43

2.3.5.1. 2.3.5.2. 2.3.5.3. 2.3.5.4.

3.2.1.1. 3.2.1.2. 3.2.1.3. 3.2.1.4.

3.2.2. 3.2.3. 3.3.

3.3.1. 3.3.2. 3.3.3.

Etudes prliminaires ________________________________________________________ 65

3.4.2. 3.4.3. 3.5. 3.6.

Matriels et mthodes _______________________________________________________ 68 Rsultats et discussion _______________________________________________________ 69

ETUDE EXPRIMENTALE 2 : TEST DE MODLES DE SPCIATION ___________________________ 71 LIMITES DES BLM_____________________________________________________________ 73

CONCLUSION ______________________________________________________________________ 75 RFRENCES_______________________________________________________________________ 76

TABLE DES ILLUSTRATIONS

Evaluation des risques des substances existantes (Rglement CE/793/93)

1. Gnralits sur les mtaux

Sdiments (g/g) 0.10 - 0.30 (au large, tamis 63 m)

< 0.05 - 0.80 (au large) 30 - 60

Tappin et al., 1995, Haarich et al., 1993 Haarich et al., 1993

35 - 135 (mer des Wadden),

5.6 - 22.48 0.1 - 1.3 (au large) 12 - 60

Cossa et al., 1994, Cossa et Fileman, 1991

JF Chiffoleau (comm pers)

JF Chiffoleau (comm pers)

rmannsson et al., 1985, RNO sed 2001

Sdiments (g/g) 0.10 - 0.66 (Golfe de Gascogne, plateau continental)

0.1 - 2.0 (Golfe de Gascogne)

< 0.05 - 0.52 (Golfe de Gascogne)

30 - 40 (prof: 0-200 m) Shaule et 5 (prof: 200-4000 m) Shaule et

(donnes PNOC Atlantique)

(JF Chiffoleau, comm pers)

Turekian et Wedepohl, 1961

Yeats et Campbell, 1983, Sclater et al., 1976

180 - 400 (prof: 200-4000 m)

170 - 270 (Golfe de Gascogne)

Sdiments (g/g) 0.068 (au large)

(B. Boutier, comm pers)

(Donnes du programme UE, Eros2000)

(Donnes du programme UE, Eros2000) (JF Chiffoleau, comm pers)

< 0.05 - 0.2 (au large, Golfe du Lion) 6 - 30

Nicolas et al., 1994, Laumond et al., 1984

Nicolas et al., 1994, Laumond et al., 1984

22 - 44 (prof: 200-4000 m) 130 - 260 (prof: 0-200 m)

(JF Chiffoleau, comm pers), Spivack et al., 1983

29 - 130 (prof: 0-200 m)

(JF Chiffoleau, comm pers)

240 - 300 (prof: 200-4000 m)

240 - 480 (Golfe du Lion)

Concentrations de rfrence pour les eaux continentales

Hg Pb 20 - 40 (Thomas et Meybeck, 1992)

Bureau de Recherches Gologiques et Minires Socit Nationale Elf Aquitaine (Ptroles)

Modlisation gochimique Apports telluriques

1.2. Evolution des organismes en prsence des mtaux

2. Comportement des mtaux et biodisponibilit

Figure 2-1 : Phnomnes de complexation des mtaux dans l'eau

2.1. Formation de complexes inorganiques

Matriels et mthodes _ 68 Rsultats et discussion _ 69

ETUDE EXPRIMENTALE 2 : TEST DE MODLES DE SPCIATION _ 71 LIMITES DES BLM___________________________________ 73

CONCLUSION 75 RFRENCES_ 76