Diagnostic bactriologique de la tuberculose

Le diagnostic bactriologique de la tuberculose repose sur la mise en vidence de lagent

pathogne, Mycobacterium tuberculosis, au site de linfection. Un chantillon clinique
provenant du site de linfection est analys. Diffrentes mthodes peuvent tre utilises au
laboratoire:
La microscopie (examen direct) : il est ralis un frottis color lauramine ou la
fuchsine phnique. Un examen direct positif oriente vers une mycobactriose. Dans le
cas dun prlvement respiratoire, il signe le caractre bacillifre du malade. Lexamen
direct est rapide et peu coteux mais il ne peut pas dtecter moins de 5x103 bacilles/ml.
Sur les prlvements respiratoires (expectorations et tubages), il est rpt 3 fois en raison
de lexcrtion intermittente des bacilles. Les malades positifs lexamen direct font
lobjet dun signalement immdiat au Centre de Lutte Antituberculeuse de leur
dpartement.
La culture : La plupart des prlvements proviennent de sites non striles, ce qui exige
leur dcontamination avant la mise en culture. Plusieurs mthodes dcontamination
peuvent tre utilises, mais la mthode de Kent et Kubica, utilisant la dcontamination par
le N-Acetyl cystine/ Hydroxide de sodium est la plus recommand car le culot peut tre
utilis pour tous les types de milieux de culture et les diffrentes analyses. Le culot est
ainsi ensemenc sur deux milieux incubs 37C : un milieu solide (Lwenstein-Jensen
(LJ)) et un milieu liquide (MGIT) plac dans lautomate MGIT 960. Toutes les heures, ce
dernier dtecte la consommation doxygne induite par la croissance bactrienne, jusquau
56me jour de culture. Les LJ sont lus aprs une semaine, un mois et deux mois. La
culture en milieu liquide est plus rapide et plus sensible que celle sur LJ sur lequel M.
tuberculosis pousse en 21 jours. Lorsquune culture est positive, la coloration avec la
fuchsine phnique (kinyoun ou Ziehl neelsen chaud) vrifie quil sagit de BAAR et
oriente lidentification.
Lidentification : lidentification de lespce mycobactrienne qui a cultiv peut se faire
partir des tests biochimiques (Niacine, nitrate rductase, catalase), des tests capillaires
(qui dtecte un antigne spcifique au complexe tuberculosis MPT64) ou par des test
molculaires (hybridation des sondes spcifiques) LADN mycobactrien est prpar par
chauffage en vue dune identification molculaire par le test Hain. On choisit le kit
MTBDRplus en cas dorientation vers une tuberculose ou le kit CM en cas de
suspicion de mycobactrie atypique.
Test de sensibilit aux antituberculeux : Dans le cas de mycobactries du complexe M.
tuberculosis, le test MTBDRplus indique la sensibilit la Rifampicine et lIsoniazide,
dtectant ainsi la multi-rsistance. La sensibilit aux antituberculeux est complte par un
antibiogramme avec la mthode de rfrence, des proportions, en milieu solide, qui value
la sensibilit de la souche lIsoniazide, la Rifampicine, la Streptomycine et
lEthambutol, pour chaque nouveau malade. Sa lecture impose un dlai de 21 jours au
moins. Lantibiogramme en milieu liquide est aussi dvelopp permettant une lecture plus
rapide et automatise. Le test MTBFRsl de Hain peut renseigner sur la sensibilit aux
antibiotiques de seconde ligne.