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Institut Jacque Monod

UMR 7592

Poste dAssistant Ingnieur en CDD


Dure : 1 an (de mars 2017 fvrier 2018)

Formation : BTS en Biotechnologies ou quivalent

Equipe : Domaines chromatiniens et Rplication


Chef dquipe : Marie-Nolle Prioleau
Institut Jacques Monod
CNRS - Universit Paris Diderot
Bt. Buffon - 15 rue Hlne Brion
75205 PARIS CEDEX 13 France
Contact : Bndicte Duriez, Chercheur (E-mail : benedicte.duriez@ijm.fr)

Projet :

Notre quipe tudie la rplication de lADN dans les cellules de vertbrs. Ce processus est
fondamental pour le devenir de la cellule. Son altration peut conduire des dommages du gnome
pouvant entrainer un processus de tumorigense ou bien la mort cellulaire. Le programme de
rplication est finement contrl, et les mcanismes impliqus sont loin dtre tous compris et font
lobjet de nombreuses recherches. Depuis plusieurs annes, lquipe est tout particulirement
implique dans lidentification et lanalyse des sites de dmarrage de la rplication, galement
appels les origines de rplication. Ltude des caractristiques de ces origines et de la rgulation
temporelle de leur activation pendant la phase S du cycle cellulaire reposent sur lutilisation de
modles cellulaires avec des approches de biologie molculaire.

Dans ce cadre, le candidat va participer un projet dvelopp au laboratoire qui vise valuer
les liens entre le positionnement dans le noyau dune rgion spcifique dun chromosome et le
moment auquel elle est rplique. Globalement, il est observ que les rgions qui se rpliquent
prcocement sont plutt localises lintrieur du noyau, tandis que celles qui se rpliquent plus
tardivement sont prfrentiellement situes la priphrie du noyau et des nucloles. Pour tudier
cette question, nous avons insr dans une rgion du gnome qui se rplique plutt tardivement une
combinaison dlments de squence dote dune activit origine avec un moment de rplication
prcoce. Dans ce clone cellulaire, nous avons montr que la rgion modifie se rplique plus
prcocement que dans la ligne dorigine. Le candidat va poursuivre la construction de ce clone en
introduisant un systme de marqueurs fluorescents, dj utilis au laboratoire, qui permettra de
localiser la rgion dintrt dans le noyau. La position nuclaire de la rgion dintrt sera compare
entre la ligne dorigine et le clone avec la combinaison dlments insrs. Dautre part, le candidat
participera la mise en place dun systme qui permet de relocaliser une rgion du gnome vers la
priphrie du noyau. Cet outil sera utilis pour valuer les consquences dune telle relocalisation
nuclaire sur le moment de rplication de la rgion vise.

Le candidat sera amen construire quelques vecteurs pour introduire les marqueurs
fluorescents dans les rgions dintrt. La ligne cellulaire utilise est une ligne lymphoblastode de
poulet que le candidat utilisera pour tablir les diffrents clones stables avec les vecteurs construits.
Les acquisitions dimages pour les tudes de localisation nuclaire seront ralises avec un
microscope confocal sur la plateforme dimagerie de notre Institut (ImagoSeine), et le candidat sera
form pour son utilisation. Les images seront analyses avec un logiciel ddi lanalyse dimages en
3 dimensions.

Au total, le projet va permettre dtudier les liens entre le positionnement nuclaire et le


moment de rplication en apportant la rponse deux questions : dune part, le changement du
moment de rplication dune rgion induit-il une relocalisation nuclaire de cette rgion ?, et dautre
part, la relocalisation dune rgion vers la priphrie nuclaire entraine-t-elle un changement du
moment de rplication de cette rgion ? Ces questions restent ouvertes aujourdhui et y rpondre
contribuera mieux comprendre lorganisation du programme de rplication.

Les approches et techniques utilises :

Biologie molculaire et bactriologie : construction de vecteurs (PCR et clonage)

Culture cellulaire : tablissement de clones cellulaires stables avec les vecteurs construits (culture,
transfection, slection de clones transforms)

Imagerie : microscopie photonique avec un microscope confocal sur des cellules vivantes avec les
clones tablis

Analyse dimages : utilisation de logiciels ddis ltude dimages en 3 dimensions (Imaris)

Composition de lquipe :

Lquipe comprend actuellement 6 personnes : la chef dquipe, une chercheur, une ingnieure,
deux chercheurs post-doctoraux et un tudiant en thse. Langlais est couramment utilis dans le
laboratoire.

Page web de lquipe : http://www.ijm.fr/recherche/equipes/domaines-chromatiniens-replication/

Afin de postuler :

Veuillez envoyer une lettre de motivation ainsi que votre CV ladresse mail suivante :
benedicte.duriez@ijm.fr