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La viande de culture ou la viande sans animaux, ralit ou fiction ?

Jean-Franois Hocquette, Isabelle Cassar-Malek, Brigitte Picard, Dominique Bauchart INRA, Unit de Recherches sur les Herbivores
ALIMENTATION AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Comment aborder ce sujet ?


1. Les enjeux et pourquoi cette question ? 2. Ltat de lart 3. Les verrous techniques qui restent lever 4. Les questions conomiques, environnementales et sociales 5. Conclusion
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Contexte et Enjeux mondiaux


Ncessit de nourrir une population humaine croissante (pays en voie de dveloppement). Accroissement dmographique (6 9 Milliards en 2050) Rpondre aux dfis associs au changement climatique (la temprature va augmenter de 2 4C dici 2050). Rduire les rejets (azote, mthane, etc). Adaptation des espces (robustesse des animaux dlevage) Ncessit de rpondre aux attentes socitales (pays dvelopps vs pays en voie de dveloppement). Bien-tre animal, protection de lenvironnement (biodiversit des prairies), gestion des paysages, etc.
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La population mondiale va augmenter de 6 9 Milliards (jusquen 2050)

ALIMENTATION

www.bbc.co.uk, 2009.

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Projections de la consommation de viande dans les pays dvelopps et en dveloppement (kg/personne/an)

Source: World Agriculture: Towards 2030/2050 (adapted from Garnett 2009)


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Production de gaz effet de serre (kg CO2e/kg produit) par les animaux dlevage

Viande bovine Viande ovine Viande porcine Volaille Lait


ALIMENTATION

12.98 17.4 6.35 4.57 1.32


Foster et al (2006)

Source : N Scollan

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Les gaz effet de serre associs la production daliments pour lhomme

missions de gaz effet de serre (en kg quivalent carbone) lis la production d'un kg de nourriture. Source : Jancovici, 2000
ALIMENTATION

http://www.manicore.com/documentation/articles/annales_mines.html
ENVIRONNEMENT

AGRICULTURE

levage et GES selon les pays

Pays en voie de dveloppement

Pays dvelopps

Pitesky, Stackhouse, and Mitloehner, 2009. Advances in Agronomy, Volume 103


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Production de C02 par les animaux dlevage ?

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La vache qui pollue

http://hommelibre.blog.tdg.ch/media/01/00/766612908.jpg
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ALIMENTATION

http://www.satoriz.fr/PHOTO/83_JPG/SAT83_pict_29_0001.jpg ENVIRONNEMENT

AGRICULTURE

Le steak ou la plante ? Il faut choisir

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Les proccupations du consommateur


salmonelles salmonelles dans les oeufs dans les oeufs

Grippe Grippe Ers uEColi dans te lesColi dans a lesviandes viandes aviaire m aviaire som ux con ima n des s afivre Vache follece duit fivre Vache nfian ro folle aphteuse aphteuse o sp c le de ur rise po C
Viande rouge Viande rouge et cancer et cancer
AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

ALIMENTATION

Source : N Scollan

Facteurs de risques des maladies non transmissibles


cancer cancer

Obsit Obsit

diabte diabte
Maladies Maladies cardiovasculaires cardiovasculaires

ALIMENTATION

Source : N Scollan

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Facteurs de risques des maladies non transmissibles


cancer cancer

Obsit Obsit

diabte diabte
Maladies Maladies cardiovasculaires cardiovasculaires

Fumer
Source : N Scollan

Manque dexercice
ALIMENTATION AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Facteurs de risques des maladies non transmissibles


cancer cancer

Obeist Obeist

diabte diabte
Maladies Maladies cardiovasculaires cardiovasculaires

Fumer

Alimentation riche en MG Manque dexercice


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Source : N Scollan

Composition en AG des produits de ruminants Apports Nutritionnels Conseills


AGMI 60% AGt AGPI 15% AGt AGS 25% AGt AGPI 6% AGt

AGMI 40-45 % AGt

VIANDE BOVINE
Source : D Bauchart
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AGS 50% AGt

Les solutions ?
Manger moins de viande Produire de la viande en laboratoire ?

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Une publication dans un journal scientifique srieux

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The First In Vitro Meat workshop, June 15, 2007 First international symposium April 9-11, 2008
The symposium was held at the Norwegian Food Research Institute (Matforsk), Aas, Norway, hosted by the Norwegian University of Life Sciences (UMB) and the Norwegian Food Research Institute (Matforsk). http://invitromeat.org/
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First international symposium April 9-11, 2008

ALIMENTATION AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Le Consortium
The original steering committee was expanded to include Jason Matheny (New Harvest & Johns Hopkins Univ., USA) and Henk Haagsman (University of Utrecht, Netherlands), in addition to Stig W. Omholt (Chairman, Norwegian University of Life Sciences, Norway), Willem van Eelen (Vitro Meat BV, Netherlands), Bernard Roelen (University of Utrecht, Netherlands), Gunnar Kleppe (Norwegian Bioindustry Association, Norway), and Jose Teixeira (University of Minho, Portugal).
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Ce quon trouve aussi sur le site Register to become a Consortium member Do you want to make financial contributions to the mission?

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Comment aborder ce sujet ?


1. Les enjeux et pourquoi cette question ? 2. Ltat de lart 3. Les verrous techniques qui restent lever 4. Les questions conomiques, environnementales et sociales 5. Conclusion
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Les progrs scientifiques sur les cultures de tissus

Moreno-Borchart A. Building organs piece by piece EMBO reports 2004, 9, 1025-1028

Number of publications related to tissue engineering over the last decade. PubMed was ALIMENT TION searched for publications containing the phrase tissue Aengineering. European numbers AGRICULTURE refer to papers published in the 15 countries of theN EU Nbefore the expansion E VIRO NEMENT

Un nouveau journal scientifique


Stem cell research has progressed to the clinic and has enormous potential for treating incurable diseases such as Parkinsons disease and Alzheimers disease, and potential for alleviating suffering in chronic conditions such as diabetes and osteoarthritis. Tuesday Mar 16, 2010

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La formation du tissu musculaire


PROLIFERATION DIFFERENCIATION
Alignement Reconnaissance

Cellules musculaires

Chez le ftus Et en cas de rgnration musculaire

Fusion

Myotube

Acquisition des caractristiques adultes


AGRICULTURE

Fibre musculaire
ALIMENTATION ENVIRONNEMENT

Rgnration musculaire

ALIMENTATION

Source : G Carnac, CNRS

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Protocole de mise en culture en conditions striles


Un morceau de muscle (post-natal) des explants des cellules qui se multiplient un tapis de cellules Incubation des Fin Sortie explants des cellules de la culture

Dissection

ALIMENTATION

Source : B Picard, I Cassar-Malek

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Dissection

Aprs prlvement labattoir ou sur animal vivant (biopsie), le muscle est dcoup en petits morceaux dans une bote de Ptri recouverte de collagne avec un milieu nutritif contenant des additifs, des facteurs de croissance, des nutriments nergtiques, des acides amins, des hormones, etc.

DMEM/M-199 medium (3:1) with 10% fetal bovine serum (FBS), 10 g/ml insulin, 4 mM glutamine, 25 ng/ml fibroblast growth factor, and 10 ng/ml epidermal growth factor, Raymond et al. BMC Genomics 2010, 11:125

ALIMENTATION

Source : B Picard, I Cassar-Malek

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Incubation des explants

Les botes de Ptri contenant les morceaux de muscles ou explants, sont mises dans un incubateur o sont contrls:

- la temprature ( 37C )
- lhygromtrie ( 90 % ) - le taux de CO2 ( 5 % )
ALIMENTATION

Source : B Picard, I Cassar-Malek

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Sortie des cellules


Explant

Aprs une semaine, les cellules commencent prolifrer et sortent de lexplant.


ALIMENTATION

Source : B Picard, I Cassar-Malek

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

LES DIFFERENTES ETAPES DE LA VIE DE LA CELLULE - prolifration - confluence - diffrenciation


ALIMENTATION

Source : B Picard, I Cassar-Malek

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

LA PROLIFERATION

Cest la phase de multiplication des cellules.


ALIMENTATION AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

LA CONFLUENCE

C est la phase o les cellules sont au contact les unes des autres.
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LA DIFFERENCIATION
noyau
Myotude (prcurseur de cellule musculaire)

C est la phase o les cellules ont fusionn et sont en train dacqurir les caractristiques des fibres musculaires.
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Culture primaire de myoblastes


Prolifration
J3 Giemsa

Diffrenciation
J6 J12

MyoD et Myf5

Myognine

Desmine
ALIMENTATION

Source : B Picard

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Myoblastes ftaux de bovins culards et non culards en culture primaire Non culard
J2

Culard

J6

J8

Prolifration cellulaire suprieure Retard de fusion et de diffrenciation


ALIMENTATION

Source : B Picard

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

CULTURE DE CELLULES MUSCULAIRES

myotubes

fibres musculaires

ALIMENTATION

Source : B Picard, I Cassar-Malek

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

On se rapproche de ce qui se passe in vivo mais on ny est pas encore !

Prolifration cellulaire
Second tiers

Premier tiers de vie foetale

Diffrenciation musculaire

Source : B Picard

Troisime tiers

ALIMENTATION

AGRICULTURE

Adulte

ENVIRONNEMENT

Mais des cellules de fibres musculaires, ce nest pas du muscle !


Fibres musculaires
(nombre, taille, type)

Adipocytes

Capillaires sanguins Trame conjonctive


COULEUR FLAVEUR
ALIMENTATION

JUTOSITE Qualits nutritionnelles TENDRETE

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Diffrentes populations cellulaires sont ncessaires pour faire du muscle


pre-myoblaste

Stem cells (cellules souches)


pre-adipocyte

Fibroblasts

myoblaste

Connective tissue Fibres


ADIPOCYTE

myotube

Adipocytes

ALIMENTATION ENVIRONNEMENT

AGRICULTURE

FIBRE

Isolation and cloning of porcine preadipocytes.


Crossbred fetuses 85 days gestation 0.1% collagenase digestion: 37C, 30 min Filtration through a stainless steel mesh (75m) Centrifuge: 1,100 rpm, 7 min Pellet fraction mince

Dissection of dorsal subcutaneous tissue


A B

C D

E F
G

2~4 weeks

Cloning by limited dilution (1 cell/well) 96-well plate

24-well plate
ALIMENTATION

clones
AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Source : Ikuyo Nakajima, Japon

Hormones et facteurs de croissance contrlent la prolifration de ces diffrentes cellules


pre-myoblaste

Mesenchymal Multipotent cells


pre-adipocyte

+ -

Myostatin

myoblaste

AntiMyostatin

myotube
Artaza et al., 2005. Endocrinology, 146, 3547-3557
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ADIPOCYTE

FIBRE

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1. Les enjeux et pourquoi cette question ? 2. Ltat de lart 3. Les verrous techniques qui restent lever 4. Les questions conomiques, environnementales et sociales 5. Conclusion
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Les questions rsoudre sur lesquelles travaillent les chercheurs


Choisir les bonnes cellules de dpart Bien dfinir les conditions de culture et coculture de ces diffrentes populations cellulaires Bien dfinir la matrice sur laquelle les cellules vont crotre Bien dfinir la composition du milieu de cultures (nutriments, hormones, etc)
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Les questions techniques qui sont aussi rsoudre


Passer de cultures plates au fond dune bote du muscle en trois dimensions Reproduire linflux nerveux Reproduire la tension du muscle (fixation sur les os, contraction, relaxation) Reproduire la finesse de lirrigation sanguine (rseaux de capillaire, dbit, etc)
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La vascularisation : un dfi majeur

Moreno-Borchart A. , Building organs piece by piece. EMBO reports 2004, 9, 1025-1028


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Les questions rsoudre pour une production de muscle grande chelle


Produire des cellules souches en grande quantit Produire des hormones, des nutriments (acides amins, glucose, acide gras, etc) et des antibiotiques en grande quantit Avoir des incubateurs gants Tension, influx nerveux, dbit sanguin, etc Augmenter les rendements
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Le principe de prcaution
Lorganisation des gnes peut changer en rponse des modifications de lenvironnement = modifications pigntiques Sans mutations gntiques
Mthylation = fixation de mthyl (CH3) sur C et G

Modifications des protines autour de lADN

Autres mcanismes trs peu connus

Rle probable dans le cancer


Est-ce que les conditions de culture du muscle induisent des modifications pigntiques ? Si oui, lesquelles ? Et avec quelles consquences sur le muscle ? Pour celui qui mange le muscle ?
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Mais produire du muscle, ce nest pas produire de la viande


Duret Rigor mortis Maturation
Enzymes qui dgradent les protines : - Calpaines (plusieurs) et son inhibiteur calpastatine - protosomes (plusieurs) - cathepsines - autres ??? elles agissent squentiellement en fonction de lvolution du pH de la viande et de la temprature de refroidissement de la carcasse

Duret de base (collagne)


Abattage
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Temps post-mortem

Reproduire la biochimie de la maturation de la viande nest pas ais


Maturation

Activit de la -calpane

Duret
Activit de la m-calpane

Temps post-mortem
ALIMENTATION

Review from Dransfield, 1995

AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

Modlisation de lactivit des calpanes


Ca l pai ne CO MP LEX

Calpastatine
pH pH le v

INACTIVATION de la CALPASTATINE

faib le

Calpaine Calpaine ACTIVATION

INACTIVATION de la CALPAINE

Ca2+
Et les autres enzymes ?

Myofibrilles

ATTENDRISSAGE

ALIMENTATION

Dransfield et al., 1993 Meat Science, 34, 217-234

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Il existe aussi un trs grande variabilit naturelle de ce phnomne


45
Rsistance des fibres musculaires Rsistance des fibres (N/cm2)

40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 2 4 6 8
ALIMENTATION

musculaires (N/cm)

10

12

14

T emps p o s t - m o r t e m ( Jours )
Source : J Lepetit
AGRICULTURE ENVIRONNEMENT

La viande = un aliment vari et aux nombreuses proprits nutritionnelles


Comment matriser la composition en acides amins de la viande (bien quilibre naturellement in vivo) ? Comment matriser la composition en acides gras de la viande (cest dj difficile par lalimentation des bovins) ? Comment matriser la teneur en fer assimilable ?
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Comment aborder ce sujet ?


1. Les enjeux et pourquoi cette question ? 2. Ltat de lart 3. Les verrous techniques qui restent lever 4. Les questions conomiques, environnementales et sociales 5. Conclusion
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The In Vitro Meat Consortium Preliminary Economics Study - March 2008


Protein : 185 Euro / tonne of media Glucose : 3 Euro / tonne of media Vitamins and minerals : 22 Euro / tonne of media Serum : 147 Euro / tonne of media It has been assumed that about 193 kg of in vitro meat can be made per tonne of media. It will be possible to produce in vitro meat in large quantities for less than Euro 3300 - 3500 / tonne. This compares with the production of chicken meat at about Euro 1800 / tonne
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Dautres cots non calculs


Construction des laboratoires de production Production grande chelle dintrants (hormones, etc) Cots nergtiques associs Cots environnementaux associs (gaz effet de serre) Cot du travail (chercheurs, ingnieurs, techniciens de laboratoire, etc)
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Quelques considrations de consommateurs


Le consommateur mange aussi pour se faire plaisir. Comment reproduire le got de la viande (arme dans la fraction lipidique) ? Le consommateur refuse le buf aux hormones mais mangerait de la viande in vitro produite avec des hormones ! Le consommateur refuse les OGM mais prendrait le risque de modifications pigntiques non matrises ! Etc
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La qualit de la viande est diffrente entre races : Une bonne race viande, cest comme un bon vin !

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CONCLUSIONS
La culture de cellule musculaire est une avance scientifique indniable et utile surtout comme cellule modle dans le domaine biomdical et pour la rparation de blessure chez lhomme, la reconstruction du sphincter etc Mais cela reste compltement utopique du point de vue scientifique, social, environnemental et conomique de produire de la viande in vitro
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