Biologie molculaire

A suivre
Enzyme
DICER

ARN double brin

Alcoologie

Lenzyme DICER coupe

Les ARN
interfrents :
un concept majeur
en biologie
et en mdecine

lARN double brin en

fragments de siARN

Protine
Argonaute

Formation du complexe RISC,

compos de la protine
Argonaute et du siARN
Complexe RISC

Dgradation dun des

Le brin antisens
du siARN

ARNm

ARNm

RISC/brin antisens

Dgradation de lARNm
conduisant labsence
de synthse protique

Sources
Nathalie Cartier est directeur de recherche
lInserm U745 (Hpital Saint-Vincent
de Paul, Paris).

12

suppression sans pouvoir en dcrire le mcanisme. Cest en 1998

quA. Fire, tentant de provoquer
lextinction dun gne particulier
chez le ver Caenorhabditis elegans,
par la technique classique de blocage de la transcription par injection
dARN complmentaires de lARN
messager, dcouvre fortuitement que
linjection de molcules doubles
brins forms de la double hlice du
messager et de son brin complmentaire antisens entrane aussi une inhibition totale de lexpression du gne.
Cest lentre en scne de ces nouveaux venus, les ARN doubles brins.
On dcouvre ensuite quintroduits
exprimentalement dans la cellule
ou par une infection virale, ou mme
produits pas la cellule elle-mme, ils
sont capables de dclencher un mcanisme enzymatique extrmement
puissant, qui limine tous les ARN
correspondants de la cellule. Pour
tre actifs, ces ARN doubles brins

doivent tre coups en fragments de

21-24 nuclotides, appels petits
ARN interfrents (siARN pour small
interfering RNA) grce une nuclase appele Dicer. Ces siARN
forment alors avec des protines
spcifiques un complexe effecteur
applel RISC (RNA-Induced Silencing Complex) qui va couper lARN
messager cible au niveau dune squence spcifique. LARN messager
ainsi dgrad ne peut plus tre transcrit en protine, lexpression du
gne est inhibe.
Cette dcouverte est un outil
puissant pour comprendre le fonctionnement des gnes. On peut en effet fabriquer des siARN capables dinhiber nimporte quel gne et tudier
aprs injection chez le ver ou le mammifre les consquences de cette extinction. On peut galement faire des
banques de siARN, collection de
siARN alatoires dont on dtermine la
squence et qui peuvent tre utiliss

mme, ou inhibant sa replication, mais

aussi contre des cibles cellulaires (rcepteurs ncessaires son entre) sont
efficaces. De nombreux travaux sont
en cours dans ce domaine.

Les antisens contre

le cancer du col

sapparie un ARNm de
squence complmentaire

histoire commence en
1990, quand R Jorgensen
(Universit dArizona),
travaillait sur les mcanismes molculaires de la coloration des fleurs.
Cherchant obtenir des ptunias
plus colors, il ajoute par transgense des copies supplmentaires du
gne de lenzyme responsable de la
pigmentation, et sa grande surprise, dcouvre que les fleurs traites sont au contraire totalement
blanches ! Lexcs du gne et donc
de ses ARN messagers semble inhiber lexpression de lenzyme, un
phnomne quil qualifie de co-

Efficacit dmontre de la naltrexone dans laide

au maintien de labstinence lalcool

siARN

deux brins du siARN

Ils avaient t lus molcules de lanne par la revue

Science en 2002, leur importance est aujourdhui
reconnue travers lattribution du prix Nobel de
Physiologie et de Mdecine : il sagit des ARN
interfrents, dcouverte la plus importante en
Biologie depuis celle de la PCR.
Leur rle dans la comprhension de la fonction des
gnes et leurs applications potentielles en
thrapeutique sont dune importance extrme.

Dcouverte dun processus cellulaire majeur :

linterfrence ARN permet dinhiber
lexpression dun gne spcifique laide
dun ARN double brin.

pour un criblage grande chelle dans

des cellules. Ce type dapproche est
particulirement utile en cancrologie,
lobjectif tant de dcouvrir de nouvelles cibles thrapeutiques.
Le travail de A. Fire et
G. Mello, les deux laurats du Prix
Nobel de Physiologie et de Mdecine, ouvre galement des perspectives thrapeutiques majeures chez
lhomme dans tous les domaines, et
en particulier en cancrologie et en
pathologie infectieuse, en ophtalmologie et pour traiter les maladies neurodgnratives, mais la liste nest
videmment pas exhaustive.

SiARN et VIH
Le VIH a t le premier virus
pour lequel le phnomne dinhibition
par ARN interfrence a t dmontr.
On a montr que non seulement les
siARN dirigs contre le virus lui-

A.I.M. 120 - 2006

La plupart des cancers du col de

lutrus font suite une infection par
un papillomavirus. Lintgration du
virus provoque lactivation des gnes
viraux E6 et E7 qui perturbent le
fonctionnement des protines anti-oncognes p53 et pRB. Le blocage des
oncognes E6 et E7 reprsenterait une
voie thrapeutique intressante. Une
quipe japonaise a eu lide dagir sur
la production des protines E6 et E7
en introduisant, par lintermdiaire
dun adnovirus des ARN antisens
des gnes E6 et E7 du papillomavirus
de type 16 dans des cellules cancreuses cervicales humaines. Dans les
cellules en culture, la production de
protines E6 et E7 est supprime tandis que celle des anti-oncognes p53
et pRB augmente, associe la ractivation de lapoptose.

SiARN et cancers
colo-rectaux
Le gardien du gnome, p53, est inactiv par une mutation ponctuelle
dans 45 %-60 % des cas de cancers
colo-rectaux. Des auteurs (Martinez et
al) ont rcemment dmontr quune
seule base diffrente dans un siARN
permet de discriminer spcifiquement
entre p53 sauvage et mutant et de restaurer la fonction normale. On peut
donc utiliser les siARN pour supprimer lexpression de gnes prsentant
une mutation ponctuelle, dcouverte
qui ouvre des possibilits pour des
thrapies cibles spcifiques.
Des rsultats prliminaires in vitro
ont t obtenus pour: les produits du
gne Bcl2, qui sont impliqus dans la
rgulation de lapoptose et de la prolifration et dont la prsence est un facteur de mauvais pronostic dans plusieurs types de cancers, notamment
colo-rectaux; la tlomrase, dont lactivit est prsente dans la plupart des cellules; la DNMT1 (ADN mthyltransferase), qui est responsable de la
mthylation anormale de lADN qui
accompagne les cancers colo-rectaux.
2006 A.I.M. 120

Maladies
neurodgnratives
et siARN
Des affections neurodgnratives
comme les maladies dAlzheimer, de
Parkinson ou de Huntington ou la
sclrose latrale amyotrophique
(SLA) sont lies laccumulation
dans le systme nerveux central de
protines toxiques. Cette accumulation peut tre favorise par une mutation gntique comme dans certaines
formes familiales de SLA pour lesquelles une mutation sur le gne codant pour la superoxyde dismutase
(SOD1) a t identifie. Chez des
souris modles de SLA porteuses
dune mutation du gne SOD1, R
Smith et coll. ont inject dans le liquide cphalorachidien (LCR) un oligonuclotide anti-SOD. Ils ont obtenu, la rduction du taux de
superoxyde dismutase dans le SNC et
un ralentissement de la progression de
la maladie par rapport des animaux
tmoins. Ce type dintervention sur le
gnome, moins problmatique que la
correction du gne dfectueux par injection de vecteur viral, pourrait
conduire une utilisation thrapeutique chez lhomme. De nombreux
autres exemples du dveloppement de
siARN spcifiques sont en cours de
validation pour dautres maladies
neurodgnratives.

SiARN et maladies
oculaires : un essai
thrapeutique en cours

es Franais sont parmi les plus grands buveurs dalcool au monde

et les premiers consommateurs europens. Lalcoolo-dpendance
touche 2 3 millions de personnes en France. Six millions
dadultes seraient des buveurs excessifs. 40 000 50 000 dcs seraient imputables chaque anne cette addiction en France, soit plus de
10 % de la population mondiale. En effet, lalcool est un important facteur de morbidit et de mortalit prmatures : selon des tudes pidmiologiques, le risque de dpression chronique est multipli par 4,4 en
cas dalcoolo-dpendance ; plus de la moiti des alcoolo-dpendants dveloppent une HTA ; les cancers des voies arodigestives (bouche, pharynx, sophage et larynx) et du foie sont corrls une forte consommation dalcool.
Le mdecin gnraliste est un acteur crucial du dpistage prcoce des alcoolo-dpendants et du soutien labstinence. Mais le
recours un professionnel de sant est gnralement tardif : moins de
20 % des alcoolo-dpendants consultent et en moyenne dix ans aprs la
survenue des premiers symptmes, essentiellement en raison dune reprsentation errone des soins : le traitement tant prsent comme une
hospitalisation obligatoire et une interdiction totale et dfinitive de boire
de lalcool. Le sevrage est en fait prcd dune phase pendant laquelle
le patient sort de la dngation. Le mdecin doit faire preuve dempathie,
un climat de confiance doit sinstaller entre lui et son patient.
Vient ensuite le maintien de labstinence. Si les thrapies cognitives et
comportementales sont dune grande aide dans le maintien de labstinence,
deux mdicaments, la naltrexone et lacamprosate, aident galement le
patient rduire lapptence lalcool, et prvenir le risque de rechute en
cas de ralcoolisation.
Ltude amricaine COMBINE, contrle, randomise, publie dans le
JAMA1, a valu pour la premire fois lefficacit de lensemble des approches thrapeutiques (mdicamenteuses et non mdicamenteuses) de
lalcoolo-dpendance aux Etats-Unis. Parmi les stratgies thrapeutiques
figuraient les traitements pharmacologiques seuls ou associs (3 bras) et
un bras placebo, avec ou sans thrapie comportementale.
Les patients recevant un soutien mdical avec naltrexone, intervention comportementale combine (ICC), ou les deux, ont obtenu de meilleurs rsultats sur les critres de consommation dalcool ; en revanche, ltude tait ngative pour lacamprosate, avec ou
sans ICC. Aucune association na eu une efficacit suprieure la naltrexone ou lICC, utilises seules dans le cadre dun soutien mdical.
Les comprims placebo et les entretiens avec un professionnel de sant
avaient un effet suprieur lICC durant le traitement.
Proportion sans jour de consommation excessive
1,0
0,9

Pas dICC

0,8
0,7

La dgnrescence maculaire lie

lge (DMLA) rsulte du dveloppement de novaisseaux sanguins sur
la rtine. Une application utilisant les
siARN dirigs contre le VEGF (Vascular Endothlial Growth Factor) est
dores et dj en cours dessai clinique (le bevasiranib). Les premiers
rsultats de cette tude chez 129 patients montrent un effet de rduction
de la croissance des vaisseaux sur la
rtine et une discrte amlioration de
la vision. Ces rsultats sont extrmement encourageants. Les rsultats de
ltude de phase II sont attendus pour
fin 2006.

Dr Nathalie Cartier

0,6
0,5
0,4
0,3
Naltrexone
Pas de Naltrexone

0,2
0,1
0

8
Semaine

10

12

14

16

La posologie de la naltrexone (Revia, des laboratoires BMS) est de 1 comprim par jour pendant 3 mois, en commenant quelques mois aprs le
sevrage. En raison de la frquence de laltration de la fonction hpatique
chez les alcooliques chroniques, du mtabolisme hpatique de la naltrexone
et des modifications des tests hpatiques, une surveillance rgulire de la
fonction hpatique doit tre instaure.
Dr S.C.
Confrence de presse des laboratoires Bristol-Myers Squibb
1 - Raymond F. Anton, and al. JAMA. 2006 ; 295 : 2003-2017.