II.

Les changes du dioxygne entre les organismes et leur milieu

Pour couvrir leurs besoin nergtique, les cellules puissent les nutriments, loxygne et les prcurseurs mtaboliques dans leurs milieux de vie et y rejettent leurs dchets mtaboliques .or ces substances ntant gnralement pas disponibles et ne saccumulent pas proximit des lieux de leur consommation ou de leur production. Les processus de diffusion des gaz et des nutriments dans les liquides biologiques nassurent un rapprovisionnement satisfaisant des cellules que sur de faibles distances (<1mm).chez la plupart des organismes, la solution adopte est la mise en uvre dune convection interne c'est--dire une circulation des liquides qui baignent les cellules la convection interne ou du milieu intrieur est une repaire efficace aux limites de la distribution par simple diffusion au sein des organismes de grande taille. 1- Grce la mise en place dun clome : Cest le cas des annlides, bryozoaires et chinodermes, ce clome assure une partie des fonctions circulatoires mais son efficacit demeure limite chez les animaux de grande taille, car il est : o Soit carfiu dans un compartiment dos : vsicules clomiques (annlides) o Soit a un important volume et une grande complexit ce qui rend son efficacit limite (chinodermes) 2- Chez la plupart des coelomates, se diffrencie un autre compartiment : Un compartiment circulatoire strictement dvolu la fonction de distribution qui sajoute au clome et qui se spcialise dans le transport et lextraction des gaz corrlativement le liquide quil vhicule, se charge de molcules pigments respiratoires. Ce compartiment circulatoire peut tre : Dos est ramifi, contenant du sang (ex : Annlides, cphalopodes et vertbrs) ou non en digr, contenant de lhmolymphe (Mollusques et arthropodes). Au cours de cet essai, nous nous limitons ltude des fonctions de transport des gaz respiratoires chez les vertbrs et essentiellement chez lhomme. Nous nous rentrons de traiter les mcanismes et les processus de transport des gaz par le sang. 1) Le sang : un tissue capable de vhiculer les gaz respiratoires dans lorganisme Par son origine, le sang doit tre considr comme une varit de tissu msenchymateux (conjonctif), dont les lments cellulaire sont spars par une substance interstitielle liquide : le plasma. Le volume sanguin est suprieur 5l chez lHomme, et reprsente 6 8 % de la masse corporelle. 1.1.) Les constituants sanguins :

Par la technique de centrifugation, ou peut sparer les constituants du sang :

Autocoagutant

Plasma Sang frais Globules Centrifugation Sparation des constituants sanguins Aprs centrifugation on obtient deux phases : a---Le plasma : Cest un liquide incolore jauntre, dont lanalyse montre : 95% deau Sels minraux (Na+, Cl-) Substances organique (HCO3-, globuline et fibrinognes) Protines plasmatiques (Albumine, globuline, acides amins)

Son osmolarit est denviron 290 300mosm/l, un litre de sang renferme 55% de plasma soit 0.55l, les globules reprsentent un volume de 45% b---Les globules: Trois types de globules soit en suspension dans le plasma : Des globules rouges : Erythrocytes Des globules blanche : Leucocytes Des plaquettes : Thrombocytes Alors que les leucocytes et les thrombocytes jouent un rle primordial dans le maintien de lintgrit de lorganisme et lhmostase, les globules rouges qui sont strictement infods au sang et ne peuvent vivent que dans le plasma, elles constituent llment cl dans le transport des gaz respiratoires.

Les globules rouges sont les plus petits et les plus nombreux globules, on estime leur nombre 5.5 *10 /l de sang chez lHomme. 1. 2) Le globule rouge : une cellule spcialise dans le transport des gaz A--Le globule rouge : un sec dHmoglobine Les globules rouges sont incapables des mouvements propres, mais extrmement molles et flexibles, dont la forme dquilibre est celle de disques aplatis biconcave (chez les Mammifres). Ils prennent naissance au niveau de la moelle osseuse, partir dune cellule souche pluripotente. Au cours de leur diffrenciation, ils perdent leur appareil de golgi, leur centrosome et leur ARN. Le noyau est conserv chez tous les non Mammaliens, il est perdu, ainsi que le chondriome. Chez les Mammifres qui sont les seuls vertbrs globules rouges anucls (HEMATIE)

Les globules rouges doivent leur coloration la prsence dans leur cytoplasme dun pigment : HEMOGLOBINE. Quon peut recueillir par lexprience dHmolyse. Mais, contrairement ce que lon dit souvent, le globule rouge nest pas un simple sac lhmoglobine, mais il concerne nombreuses caractristiques physiologiques lui permettant dassurer sa fonction. B-- le mtabolisme nergtique a--- production dATP : La production dATP est ralise essentiellement sous forme par la glycolyse anarobie, et pour une plus faible part (15%), par la voie des pentoses. Le glucose, substrat mtabolique principal, pntre dans lhmatie par un transport facilit (permase). Lnergie produire est distribue alimenter les pompes ioniques (Na+/ K+) ATP ase, (CA+) ATP ase membranaires dont le fonctionnement est indispensable pour maintenir les gradients ioniques utilises dans le transport actif. b--- biosynthse active du 2.3 Diphosphoglycrate (2.3 DPG) 2 .3 DPG prsent en quantits importantes (5mM) que dans le globule rouge de la plus part des mammifres .cette molcule est produire par un shunt de la voie glycolytique court-civaritant la synthse dun ATP, catalys par un enzyme bi-fonctionnel : DPG mutase/ phosphatase. Ce compos sert deffecteur allostrique madfiant laffinit de lhmoglobine vis vis de loxygne. 2 .3DPG constitue galement une rserve nergtique importante pour lhmatie. c--- Gense dun pouvoir rducteur : NADPH et NADH deux coenzymes rduits sont produits par la voie des pentoses (NADPH) et par la glycolyse sont essentiels lalimentation les systmes anti-oxydants. Ces systmes permettent de rduire la mthmoglobine qui se forme en permanence dans le globule rouge :

Hmoglobine (Fe+) Oxydation

mthmoglobine (Fe+)

Le NADPH, peut galement tre utilis pour rduire le glutathion oxyd. Ce dernier soxyde en rduisant la mthmoglobine. CTransport ionique membranaire La membrane rythrocytaire est le sige dchanges actifs et passifs, par ailleurs, elle agit comme une barrire en sopposant la sotie de lhmoglobine et des phosphates organiques. Du point de vue fonctionnel : Les gaz O2 et CO2 diffuse simplement travers la membrane plasmique sous leffet des diffrences de pression partielle de ces gaz. Les ions (Cl-, HCO3-) traversent la membrane au niveau des mmes structures que leau. La dissociation de lacide carbonique en HCO3 et H+, la membrane tant peu permable aux cations Les H+ traversent mois rapidement hors du globule rouge, la sortie des HCO3 est compose, par lentre des ions (Cl-) qui permet le maintien dun quilibre entre les amines et les cations : Effet Hamburger (voir Figure1).Leau, pntre

travers des pores membranaires dune faon rapide et passive. Le cycle de Jacobs-Stewart permet aux ions H+ dentrer rapidement de faon indirecte dans le globule rouge. Les H+ neutralisent les ions HCO3- dans le plasma, librant du CO2 qui diffuse dans la cellule et y forme H2CO3 qui se dissocie en H+, HCO3-.Ce dernier est expuls dans le plasma grce lchangeur Cl-/HCO3-

Figure 1: Cycle de Jacobs-Stewart

D--Lhmatie : une cellule flexible : Les globules rouges ont pour fonction principale de vhiculer loxygne fix par lhmoglobine du lit capillaire pulmonaire au lit capillaire priphrique. Pour effectuer ce transport, les globules rouges, ont une forme qui leur permet une bonne diffusion de loxygne travers leur paroi .La forme biconcave circulaire permet davoir un rapport surface /volume optimum (140m/hmatie). D autre part, le globule rouge doit tre dformable, en mesure de circuler dans les capillaires les plus fins (< 3) de diamtre. Cette simplesse est rendre possible grce un cytosquelette robuste compos essentiellement de SPECTRINE et dACTINE. 2) Lhmatie est le principal transporteur doxygne vers les tissus Compte tenu de la faible solubilit de loxygne dans le sang, le ddit de ce liquide doit tre dautant plus important que les besoins des tissus sont plus grands. Ce mcanisme trouverait rapidement, ses limites defficacit si le sang ne renfermait des molcules prsentant une grande affinit pour loxygne, capable de le fixer dune faon rversible et donc daugmenter la capacit de transport en oxygne dans le sang : Cest lhmoglobine. 2.1--Lhmoglobine est une htroprotine : Lhmoglobine se compose de partie ; lune protique (la globine) et lautre est un groupement prosthtique : Cest lHEME .le poids molculaire de lhmoglobine est : 64500d a--- La globine Cest un ttra-peptide qui chacune abrite un hme, ces quatre chaines polypeptidiques ne sont pas toutes identiques, mais forme de deux couples de chaines identiques deux deux : 2chaines et deux chaines chez ladulte. Cette composition varie en cour de la vie, ftale et aprs la naissance. (Figure 2)

Figure 2: Evolution de la structure de lhmoglobine au cours de la vie.

Du point de vue structural, la chaine peptidique est forme de 141 acides amins .Et la chaine est forme de 146 acides amins. Les squences des chaines et majoritaires chez ladulte sont diffrentes, par contre, leur structure spaciale est voisine puis que lune et lautre sont pelotonnes sur elle-mme et dfinissent 8 segments hlicodaux reprs conventionnellement par une lettre A H. Les segments E et F forment une cavit dans laquelle se loge.

Figure 3: Configuration spaciale de la globine avec 8 segments A, B, C, D, E, F, G et H

Lhme est reli par de nombreuse liaisons 16 amino-acides de la globine dont 2 Histidines .Lune situe en 63 sur le segment E et lautre en 92 sur le segment F de la chaine .Pour la chaine les histidines sont situes en 58 et 87. Les chaines et se disposent dans lespace selon les structures secondaires et tertiaires qui dcoulent de leur squence en acides amins. Elles forment dabord des dimres , puis un ttramre 2 2 en prsence dhme. LHme se fixe dabord sur les chaines avec formation dun ttramre intermdiaire ne portant que deux hmes. Les structures tertiaires des chaines et permettant leur association sous forme de dimres par des contacts portant sur 34 acides amins. En suite les chaines et des deux dimres sunissent par contact au niveau de 19 acides amins .La molcule dhmoglobine qui est maintenant un ttramre globinique, comportant 4 hmes est devenue fonctionnelle

Figure 4: Molcule dhmoglobine (Adulte)

b--- Lhme : Toutes les chaines polypeptidiques contiennent un site actif constitu dun groupement organique de nature porphyrimique. Lhme dont les 4 noyaux pyrole assurant un atome de fer ferreux. Cet atome est de plus li un rsidu histidine de la protine (Histidine proximale) et peut se combiner rversiblement une molcule de dioxygne. Cette proprit de doxygnation dpend le rle physiologique de lhmoglobine et du globule rouge dans le transport de loxygne est perdue lors de loxydation du fer ferreux (Fa +) en fer ferrique (Fe +) dans la mthmoglobine. La fixation de loxygne est lie aux caractristiques de lion fer qui enformant un complexe dit : Hexacoordonn est susceptible dchanger deux autres liaisons, soit avec des acides amins de la globine (Rsidus histidine dans lhmoglobine), soit avec un ligand (O2). Dans le cas des vertbrs (sauf les cyclostomes), une molcule dhmoglobine porte quatre sites actifs, chacun peut fixer une molcule doxygne. 2 .2) Combinaison rversible de loxygne lhmoglobine La courbe A de la figure 4 dcrivant les variations de concentration totale dO2 du sang (oxygne dissous + oxygne combin lhmoglobine) en fonction de PO2 est dite courbe dAbsorption de loxygne. Cette courbe montre que lO2 combine lhmoglobine, augmente avec laugmentation de la PO2 et que la forme combine lhmoglobine est plus importante que la forme dissous. a--- Fixation doxygne par lhmoglobine : (A) (B)

Figure 5: Combinaison rversible de loxygne lhmoglobine : A) courbe dabsorption de lO2 par le sang. B) courbe de saturation de lhmoglobine par lO2

La courbe B de la figure 4 montre le pourcentage de saturation des sites actifs de la molcule dhmoglobine par lO2. Cette courbe dite de Saturation prsente un certain nombre de caractristiques : Cest une courbe obtenue Ph = 7.4 et T =37C, a une forme SIGMODE, qui reflte la complexit des phnomnes qui accompagnent loxygnation. Il sagit dun phnomne de cooprativit lintrieur du ttramre, la combinaison dune premire molcule dO2, modifi la structure quaternaire de la molcule dhmoglobine, ce qui facilite la fixation dune deuxime molcule : Comportement allostrique La plus au moins grande facilit qua lhmoglobine se combiner ou caractrise laffinit par un point remarquable qui correspond la PO2 responsable de la moiti de saturation de lhmoglobine : P50, P50=26mm hg un ph=7.4 et T =37C. plus P50 est faible, plus la combinaison de lO2 est facile et donc plus laffinit est lev. Une affinit leve favorise la charge de lhmoglobine pour loxygne au niveau des organes respiratoires. La concentration dO2 combin saturation de lhmoglobine, sappelle : La capacit oxyphorique. Elle est toujours plus leve par rapport celle de loxygne dissous, ce qui traduit le fait que lhmoglobine renforce considrablement le pouvoir de transport de lO2 par le sang. b- fixation de l'O2 par l'hme Les mcanismes molculaires mis en jeu dans la fixation d'O2 par l'hme, sont loin d'tre lucids dans tous leurs dtails, cependant, grce la spectroscopie ultra-rapide, rendue possible par des lasers, les

chercheurs ont pu sonder la raction de fixation d'O2 l'chelle de quelques millionimes de milliardime de secondes. Le modle propos suppose que l'hmoglobine existe sous deux formes "conformation" diffrentes, l'une de base affinit et l'autre de haute affinit. Pour caractriser, la dynamique de la transition d'une conformation l'autre chelle atomique, on considre la molcule d'hmoglobine comme un systme molculaire sophistiqu capable de rguler son affinit pour l'O2 par un changement de conformation. En effet, lorsque l'O2 est libr on note un mouvement du fer hminique en dehors du plan de l'hme, alors que la combinaison dune O2 provoque le retour du fer dans le plan de lhme.

Figure 6: Architecture du site actif de lhmoglobine

Figure 7: Modle de la dynamique de la transition hmoglobine/oxyhmoglobine.

Le modle deux tats proposs par Monod, wyman et changeus reste un guide prcieux dans une analyse phnomnologique du fonctionnement de l'hmoglobine. Cependant la comprhension du mcanisme de cette rgulation molculaire doit inclure la description de l'ensemble des mouvements internes de la protine. On sait aujourd'hui que la molcule en deux tats ne reprsente que deux situations extrmes d'un scnario qui doit inclure une continue d'vnements en vie le mouvement de fer en quelques centaines de fetosecondes et la rorganisation des sous-units l'chelle de la microseconde, seule la dynamique des vnements au voisinage de l'hme comment tre caractrise. Identifier et caractriser les mouvements de la protine une distance plus grande de l'hme constitue l'objectif actuel de nombreuses quipes par le monde.

c---dlivrer l'oxygne aux tissus

Figure 8: prise en charge du CO2 au niveau des tissus et dlivrance dO2 alvolaire et la libration du CO2

Figure 9: prise en charge de lO2 au niveau

2.3) les facteurs modifiant l'affinit de l'hmoglobine vis--vis de l'O2

La molcule de l'hmoglobine dont le ligand principal est l'O2, a cependant d'autres ligands physiologiques, qui par l'interaction qu'ils xercent sur l'hmoglobine, sont succeptibles de modifier son affinit pour l'O2, ces ligands sont ; H+, CO2, et 2-3DPG :

Figure 10: Les facteurs modifiant laffinit de lhmoglobine pour lO2 : la temprature

a--- temprature: La raction d'oxygnation de l'hmoglobine tant exothermique: Hb + O2 cal/mol. HbO2 + (1015)

Une augmentation de temprature dplace l'quilibre vers la gauche et diminue donc l'affinit pour l'oxygne, Cet effet est favorable la dcharge de L'O2 au niveau d'un tissu actif (les muscle par exemple) ou la temprature locale est plus leve. b--- PH et CO2 Une lvation de Pco2 diminue l'affinit pour l'O2 du sang des vertbrs. Cet effet est dit : effet Bohr

Figure 11 : facteurs modifiant laffinit de lhmoglobine pour lO2 : le PH (C) et CO2 (D)

Il est d une double action : celle des protons H+ librs par la dissociation de l'acide carbonique, et celle du CO2 molculaire lui-mme. En effet, les ions H+ et CO2 se lient l'Hmoglobine en des sites distincts de celui du site actif fixant l'O2. Les H+ interviennent en renforant les points salins interactnaires de la dsoxyhmoglobine. Cette combinaison (H+, CO2) correspond une interaction allostrique htrotrope qui entraine une diminution de l'affinit et favorise donc la dissociation de l'oxygne. L'effet Bohr normal favorise la dcharge de l'O2 de l'oxyhmoglobine dans les tissus actifs o la PCO2 est leve et le PH faible. C'est probablement la raison pour laquelle chez les mammifres, l'effet Bohr est d'autant plus marqu que la taille est faible et que le niveau du mtabolisme est lev. c- l'effet RooT phnomne dcouvert chez les poissons (Par RooT 1939), est galement connu chez les cphalopodes et les crustacs. Mme sans forte PO2, une baisse de PH est une augmentation de PCO2 diminue la capacit maximal de fixation de l'O2. Le pigment n'tant jamais totalement satur, l'effet RooT jouerait un rle important dans le fonctionnement de la vessie gazeuse des poissons tlostens.

Figure 12: Effet Root