COLE NATIONALE VTRINAIRE DALFORT

Anne 2012

PHYSIOPATHOLOGIE DE LHYPERSENSIBILIT DE TYPE III

THSE Pour le DOCTORAT VTRINAIRE Prsente et soutenue publiquement devant LA FACULT DE MDECINE DE CRTEIL
le

par

Hrald MOULIN-TRAFFORT
N le 8 mars 1986 Paris 14me

JURY Prsident : Pr. Professeur la Facult de Mdecine de CRTEIL Membres Directeur : M. Ludovic FREYBURGER Matre de confrences Vetagro-Sup Assesseur : Mme Fanny PILOT-STORCK Matre de confrences lENVA

Novembre 2011
LISTE DES MEMBRES DU CORPS ENSEIGNANT Directeur : M. le Professeur MIALOT Jean-Paul Directeurs honoraires : MM. les Professeurs MORAILLON Robert, PARODI Andr-Laurent, PILET Charles, TOMA Bernard Professeurs honoraires: MM. et Mme : BRUGERE Henri, BRUGERE-PICOUX Jeanne, BUSSIERAS Jean, CERF Olivier, CLERC Bernard, CRESPEAU Franois, DEPUTTE Bertrand, MOUTHON Gilbert, MILHAUD Guy, POUCHELON Jean-Louis, ROZIER Jacques DEPARTEMENT DELEVAGE ET DE PATHOLOGIE DES EQUIDES ET DES CARNIVORES (DEPEC) Chef du dpartement : M. POLACK Bruno, Matre de confrences - Adjoint : M. BLOT Stphane, Professeur - UNITE DE CARDIOLOGIE - UNITE DE PARASITOLOGIE ET MALADIES PARASITAIRES Mme CHETBOUL Valrie, Professeur * M. CHERMETTE Ren, Professeur * Melle GKOUNI Vassiliki, Praticien hospitalier M. POLACK Bruno, Matre de confrences M. GUILLOT Jacques, Professeur - UNITE DE CLINIQUE EQUINE Mme MARIGNAC Genevive, Matre de confrences Mme GIRAUDET Aude, Praticien hospitalier * M. HUBERT Blaise, Praticien hospitalier M. AUDIGIE Fabrice, Professeur M. BLAGA Radu Gheorghe, Matre de confrences (rattach au DPASP) M. DENOIX Jean-Marie, Professeur Mme CHRISTMANN Undine, Matre de confrences - UNITE DE PATHOLOGIE CHIRURGICALE M. MOISSONNIER Pierre, Professeur* Mme MESPOULHES-RIVIERE Cline, Matre de confrences contractuel M. FAYOLLE Pascal, Professeur Mme PRADIER Sophie, Matre de confrences M. MAILHAC Jean-Marie, Matre de confrences Melle DUPAYS Anne-Galle, Assistant denseignement et de recherche M. NIEBAUER Gert, Professeur contractuel contractuel Mme VIATEAU-DUVAL Vronique, Matre de confrences - UNITE DIMAGERIE MEDICALE Mme RAVARY-PLUMIOEN Brangre, Matre de confrences (rattache au Mme BEDU-LEPERLIER Anne-Sophie, Matre de confrences contractuel DPASP) Mme STAMBOULI Fouzia, Praticien hospitalier M. ZILBERSTEIN Luca, Matre de confrences - UNITE DE MEDECINE M. BLOT Stphane, Professeur* M. ROSENBERG Charles, Matre de confrences Mme MAUREY-GUENEC Christelle, Matre de confrences Mme BENCHEKROUN Ghita, Matre de confrences contractuel - UNITE DE MEDECINE DE LELEVAGE ET DU SPORT M. GRANDJEAN Dominique, Professeur * Mme YAGUIYAN-COLLIARD Laurence, Matre de confrences contractuel - DISCIPLINE : NUTRITION-ALIMENTATION M. PARAGON Bernard, Professeur - UNITE DE REPRODUCTION ANIMALE M. REMY Dominique, Matre de confrences (rattach au DPASP)* M. FONTBONNE Alain, Matre de confrences M. NUDELMANN Nicolas, Matre de confrences M. DESBOIS Christophe, Matre de confrences Mme CONSTANT Fabienne, Matre de confrences (rattache au DPASP) Mme MASSE-MOREL Galle, Matre de confrences contractuel (rattache au DPASP) M. MAUFFRE Vincent, Assistant denseignement et de recherche contractuel, (rattach au DPASP)

- DISCIPLINE : URGENCE SOINS INTENSIFS Mme ROUX Franoise, Matre de confrences - DISCIPLINE : OPHTALMOLOGIE Mme CHAHORY Sabine, Matre de confrences * DEPARTEMENT DES PRODUCTIONS ANIMALES ET DE LA SANTE PUBLIQUE (DPASP) Chef du dpartement : M. MILLEMANN Yves, Matre de confrences - Adjoint : Mme DUFOUR Barbara, Professeur - DISCIPLINE : BIOSTATISTIQUES - UNITE DE PATHOLOGIE MEDICALE DU BETAIL ET DES M. DESQUILBET Loc, Matre de confrences ANIMAUX DE BASSE-COUR M. ADJOU Karim, Matre de confrences * - UNITE DHYGIENE ET INDUSTRIE DES ALIMENTS DORIGINE M. MILLEMANN Yves, Matre de confrences ANIMALE M. BELBIS Guillaume, Assistant denseignement et de recherche contractuel, M. BOLNOT Franois, Matre de confrences * M. HESKIA Bernard, Professeur contractuel M. CARLIER Vincent, Professeur - UNITE DE ZOOTECHNIE, ECONOMIE RURALE Mme COLMIN Catherine, Matre de confrences M. ARNE Pascal, Matre de confrences* M. AUGUSTIN Jean-Christophe, Matre de confrences Mme GRIMARD-BALLIF Bndicte, Professeur - UNITE DES MALADIES CONTAGIEUSES M. COURREAU Jean-Franois, Professeur Mme DUFOUR Barbara, Professeur* M. BOSSE Philippe, Professeur M. BENET Jean-Jacques, Professeur Mme LEROY-BARASSIN Isabelle, Matre de confrences Mme HADDAD/HOANG-XUAN Nadia, Professeur M. PONTER Andrew, Professeur Mme PRAUD Anne, Assistant denseignement et de recherche contractuel, DEPARTEMENT DES SCIENCES BIOLOGIQUES ET PHARMACEUTIQUES (DSBP) Chef du dpartement : Mme COMBRISSON Hlne, Professeur - Adjoint : Mme LE PODER Sophie, Matre de confrences - UNITE DANATOMIE DES ANIMAUX DOMESTIQUES - UNITE DE PATHOLOGIE GENERALE MICROBIOLOGIE, M. CHATEAU Henry, Matre de confrences* IMMUNOLOGIE Mme CREVIER-DENOIX Nathalie, Professeur Mme QUINTIN-COLONNA Franoise, Professeur* M. DEGUEURCE Christophe, Professeur M. BOULOUIS Henri-Jean, Professeur Mme ROBERT Cline, Matre de confrences M. MAGNE Laurent, Matre de confrences contractuel - DISCIPLINE : ANGLAIS Mme CONAN Muriel, Professeur certifi - UNITE DE BIOCHIMIE M. BELLIER Sylvain, Matre de confrences* M. MICHAUX Jean-Michel, Matre de confrences - DISCIPLINE : EDUCATION PHYSIQUE ET SPORTIVE M. PHILIPS, Professeur certifi - UNITE DE GENETIQUE MEDICALE ET MOLECULAIRE M. PANTHIER Jean-Jacques, Professeur* Mme ABITBOL Marie, Matre de confrences -UNITE DHISTOLOGIE, ANATOMIE PATHOLOGIQUE Mme CORDONNIER-LEFORT Nathalie, Matre de confrences* M. FONTAINE Jean-Jacques, Professeur Mme LALOY Eve, Matre de confrences contractuel M. REYES GOMEZ Edouard, Assistant denseignement et de recherche contractuel, - UNITE DE PHARMACIE ET TOXICOLOGIE M. TISSIER Renaud, Matre de confrences* Mme ENRIQUEZ Brigitte, Professeur M. PERROT Sbastien, Matre de confrences - UNITE DE PHYSIOLOGIE ET THERAPEUTIQUE M. TIRET Laurent, Matre de confrences* Mme COMBRISSON Hlne, Professeur Mme PILOT-STORCK Fanny, Matre de confrences - UNITE DE VIROLOGIE Mme LE PODER Sophie, Matre de confrences * M. ELOIT Marc, Professeur - DISCIPLINE : ETHOLOGIE Mme GILBERT Caroline, Matre de confrences

* responsable dunit

REMERCIEMENTS

Nous adressons nos remerciements chaleureux au Professeur de la Facult de Mdecine de Crteil, qui nous a fait lhonneur daccepter la prsidence de notre jury de thse.

A Monsieur le Docteur Ludovic Freyburger, Matre de confrences Vetagro-Sup dans lUnit dimmunologie-microbiologie, qui nous a fait lhonneur daccepter de diriger cette thse. Quil veuille bien trouver ici toute notre gratitude pour la confiance quil nous a tmoigne tout au long de ce travail et quil nous a permis de conduire son terme avec une grande autonomie.

A Madame le Docteur Fanny Pilot-Storck, Matre de confrences lcole nationale vtrinaire dAlfort dans lUnit de physiologie-thrapeutique, qui nous a fait lhonneur dtre lassesseur de notre thse. Quelle veuille bien trouver ici toute notre gratitude pour le temps consacr la correction de ce travail.

TABLE DES MATIRES

LISTE DES TABLEAUX ET FIGURES................................................................................. 7 LISTE DES ABRVIATIONS ................................................................................................ 9 AVANT-PROPOS....................................................................................................................11 INTRODUCTION..................................................................................................................13 PREMIRE PARTIE : STRUCTURE ET FONCTIONS DES COMPLEXES IMMUNS...............................................................................................................................17

I. FORMATION DES COMPLEXES IMMUNS .............................................................. 19

A. Lantigne...................................................................................................................19 B. Lanticorps................................................................................................................. 20
1. 2. 3. Structure de base des anticorps.........................................................................................20 Site de fixation des anticorps ............................................................................................22 Isotypes et activits biologiques des anticorps.................................................................23 a. Immunoglobulines G (IgG) ................................................................................................................ 23 b. Immunoglobulines M (IgM)................................................................................................................ 24 c. Immunoglobulines A (IgA) ................................................................................................................. 25 d. Immunoglobulines E (IgE) ................................................................................................................. 26 e. Immunoglobulines D (IgD) ................................................................................................................ 27 Bases molculaires de la liaison antigne-anticorps.........................................................28 Spcificit de la raction ...................................................................................................29 Affinit de lanticorps ........................................................................................................30 Avidit de lanticorps.........................................................................................................30 Rversibilit de la raction ................................................................................................30

C. Proprits de la raction antigne-anticorps ............................................................ 28

1. 2. 3. 4. 5. 1. 2. 3.

D. Facteurs modulant la taille des complexes immuns..................................................31

Facteurs lis lantigne................................................................................................... 31 Facteurs lis lanticorps..................................................................................................32 Concentrations respectives en antigne et en anticorps ...................................................32 a. Principe de la zone d'quivalence....................................................................................................... 32 b. Application la formation des complexes immuns in vivo ........................................................... 33 4. Ractions secondaires entre le complexe immun et dautres constituants plasmatiques.....................................................................................................................34

E. Lieux de formation des complexes immuns............................................................. 35

1. 2. 3. Raction dhypersensibilit de type III locale ..................................................................35 Raction dhypersensibilit de type III systmique..........................................................37 Modles exprimentaux ....................................................................................................39 a. Raction dArthus cutane................................................................................................................... 39 b. Maladie srique exprimentale ............................................................................................................ 40

i. ii.

Maladie srique aigu.............................................................................................................. 40 Maladie srique chronique ....................................................................................................... 42 1

II. FONCTIONS MDIES PAR LES COMPLEXES IMMUNS ........................................43

A. Lopsonisation de lantigne......................................................................................43 B. La cytotoxicit mdiation cellulaire dpendante des anticorps .............................43 C. Lactivation du complment......................................................................................44 DEUXIME PARTIE : DEVENIR DES COMPLEXES IMMUNS AU SEIN DE LORGANISME....................................................................................................................47

I. PURATION DES COMPLEXES IMMUNS ...............................................................49

A. Organes impliqus.....................................................................................................49
1. 2. 1. 2. Rle du foie et de la rate chez les primates.......................................................................49 Rle des poumons chez le porc.........................................................................................55

B. Le rle du systme du complment...........................................................................57

Inhibition de la prcipitation des complexes immuns .....................................................58 Solubilisation des complexes immuns..............................................................................62 a. Rupture de la liaison primaire antigne-anticorps ............................................................................62 b. Rle de la voie alterne dactivation du complment.........................................................................65 c. Rle de la voie classique dactivation du complment.....................................................................65 3. Les rcepteurs du complment dans lpuration des complexes immuns .......................67 a. Fixation des complexes immuns aux CR1 des rythrocytes chez les primates............................67

i. ii. iii. iv.

b. c.

Fixation prfrentielle des complexes la surface des rythrocytes...............................................67 Mise en place de nombreuses interactions C3b-CR1 .................................................................68 Rpartition non homogne des CR1 la surface des rythrocytes................................................68 Variabilit dans le nombre de CR1 prsents la surface des rythrocytes ..................................69
Mcanismes de lpuration des complexes immuns par le CR1 chez les primates .....................70 Fixation des complexes immuns aux CR1 des thrombocytes chez les non primates.................73

II. DPT DES COMPLEXES IMMUNS ......................................................................75

A. Altration de la fonction dpuration des complexes immuns..................................76
1. Dficit en composants du complment ............................................................................77 a. Facteurs tiologiques.............................................................................................................................77

i. ii.
b.

Dficit primaire .......................................................................................................................77 Dficit secondaire.....................................................................................................................78

Consquences dun dficit en complment .......................................................................................79

i. Altration de la fonction dpuration des complexes...................................................................79 ii. Infections secondaires frquentes................................................................................................82 iii. Rupture de tolrance ................................................................................................................83
2. Dficit en CR1 des rythrocytes ........................................................................................85 a. Facteurs lorigine dun dficit............................................................................................................85

i. ii.
b. 3.

Facteurs hrditaires ................................................................................................................86 Facteurs acquis........................................................................................................................86

Consquences dun dficit en CR1 .....................................................................................................88 Dficience de la phagocytose............................................................................................88

B. Mcanismes de la localisation des complexes immuns ........................................... 89

1. Le corpuscule rnal, donnes histologiques essentielles (50)...........................................89 a. Le glomrule rnal ................................................................................................................................ 89 b. La capsule de Bowman......................................................................................................................... 91 c. La membrane basale glomrulaire...................................................................................................... 91 2. Formation des dpts de complexes immuns au sein des glomrules rnaux.................92 a. Dcouverte de la formation in situ des complexes immuns .......................................................... 93 b. Formation des dpts en zone subpithliale glomrulaire ........................................................... 93

i. Formation de complexes in situ................................................................................................ 93 ii. Mise en vidence du rle majeur des interactions lectrostatiques ................................................ 95 iii. Capture de complexes immuns circulants.................................................................................. 97
c. Formation des dpts en zones msangiale et subendothliale .................................................... 97

i. ii.
3. 1.

Formation de complexes in situ................................................................................................ 98 Capture de complexes immuns circulants................................................................................ 100

Place de lhypersensibilit de type III dans les glomrulonphrites ...............................101

C. Impact des proprits intrinsques des complexes immuns dans leur dpt.........104
La taille des complexes immuns..................................................................................... 104 a. Intensit de la rponse humorale...................................................................................................... 104 b. Influence sur lefficacit de lpuration des complexes................................................................. 105 c. Influence sur la localisation tissulaire des complexes.................................................................... 106 d. Rarrangement des complexes au sein des tissus .......................................................................... 107 2. Affinit de lanticorps pour lantigne............................................................................. 108 3. Charges de lanticorps et de lantigne ............................................................................111 4. Classe de lanticorps.........................................................................................................114

D. Rle des facteurs tissulaires locaux dans la localisation des complexes immuns...117
1. Facteurs anatomiques ......................................................................................................117 a. Rle dune structure vasculaire fenestre ........................................................................................ 117 b. Rle dune membrane basale............................................................................................................. 118 c. Rle dune matrice interstitielle......................................................................................................... 119 2. Facteurs physiologiques.................................................................................................. 120 a. Modulation de la permabilit vasculaire ........................................................................................ 120 b. Pression sanguine leve et flux sanguin turbulent ....................................................................... 122 c. La temprature locale ......................................................................................................................... 123

TROISIME PARTIE : MCANISMES DES LSIONS INDUITES PAR LE DPT DES COMPLEXES IMMUNS ............................................................................125

I. ACTIVATION DU SYSTME DU COMPLMENT ...................................................127

A. Composants du complment ...................................................................................127 B. Voies dactivation du complment...........................................................................128
1. Etapes initiales de lactivation du complment .............................................................. 128 a. La voie classique.................................................................................................................................. 128 b. La voie alterne ..................................................................................................................................... 130 2. Phase effectrice de lactivation du complment ............................................................. 133 a. Libration de composants solubles.................................................................................................. 134

b.

Formation du complexe dattaque des membranes....................................................................... 134

C. Rgulation du systme du complment .................................................................. 135 D. Consquences biologiques de lactivation du complment mises en jeu dans lhypersensibilit de type III ........................................................................... 138
1. 2. Action du complexe dattaque des membranes.............................................................. 138 Libration de composants biologiquement actifs du complment ................................ 140 a. Libration des opsonines C3b et iC3b ............................................................................................ 140 b. Libration des anaphylatoxines C3a et C5a .................................................................................... 142

i. Rcepteurs aux anaphylatoxines C3a et C5a : C3aR et C5aR..............................................142 ii. Actions biologiques des anaphylatoxines.................................................................................142 iii. Rgulation de lactivit des anaphylatoxines............................................................................143

II. INTRACTIONS DIRECTES AVEC DE NOMBREUX TYPES CELLULAIRES ............ 145

A. Les plaquettes sanguines......................................................................................... 146
1. 2. 1. 2. 3. 4. 1. 2. 3. 4. 5. Voies dactivation des plaquettes sanguines................................................................... 146 Consquences biologiques de lactivation plaquettaire.................................................. 146 Les macrophages, des cellules phagocytaires................................................................. 148 Droulement de la phagocytose...................................................................................... 148 Echec du processus de phagocytose............................................................................... 150 Scrtion de mdiateurs de linflammation .....................................................................151 Voies dactivation des neutrophiles ................................................................................ 152 Migration des neutrophiles jusquau site inflammatoire ................................................ 153 Activation du processus de phagocytose ........................................................................ 155 Exocytose des granules intra-cytoplasmiques................................................................ 155 Formation dun rseau extracellulaire ............................................................................ 156

B. Les monocytes / macrophages................................................................................ 148

C. Les polynuclaires neutrophiles .............................................................................. 152

D. Les polynuclaires basophiles et les mastocytes..................................................... 157

III. IMPLICATION RELATIVE DES MCANISMES EFFECTEURS DANS LTABLISSEMENT DES LSIONS TISSULAIRES ........................................................ 159
A. Contribution des rcepteurs pour le fragment Fc des immunoglobulines ............. 159
1. 2. 3. 4. 5. 6. 1. 2. 3. Le rle majeur des FcR ................................................................................................... 159 Le rle des mastocytes dans linitiation de linflammation .............................................161 Le rle des neutrophiles dans lentretien de linflammation........................................... 162 Initiation de la cascade dinflammation.......................................................................... 162 Rle rgulateur des FcRIIb ........................................................................................... 163 Pistes thrapeutiques ...................................................................................................... 163 Le rle des anaphylatoxines............................................................................................ 165 Le rle du complexe dattaque des membranes ............................................................. 167 Pistes thrapeutiques ...................................................................................................... 167

B. Action du systme du complment ......................................................................... 165

C. Influence de la localisation tissulaire des dpts.....................................................168

1. 2. 3. Formation de dpts en zone subpithliale .................................................................. 169 Formation de dpts en zone subendothliale ............................................................... 170 Formation de dpts en zone msangiale .......................................................................171

CONCLUSION .....................................................................................................................175 RFRENCES BIBLIOGRAPHIQUES.............................................................................179 ANNEXE 1 : SYNTHSE DU DOCUMENT....199

LISTE DES TABLEAUX ET FIGURES

Liste des tableaux
Tableau 1 : Proprits et activits biologiques des immunoglobulines humaines. ...................................................27 Tableau 2 : Principaux rcepteurs du complment. ..............................................................................................141

Liste des figures

Figure 1 : Reprsentation schmatique de la structure des immunoglobulines. ......................................................21 Figure 2 : Structure des cinq classes dimmunoglobulines chez lhomme.................................................................23 Figure 3 : Structure gnrale des quatre sous-classes dIgG humaines....................................................................24 Figure 4 : Reprsentation schmatique des liaisons hydrophobes...........................................................................29 Figure 5 : Quantit de prcipits forms en fonction du rapport de concentration entre lantigne et lanticorps. ...33 Figure 6 : Reprsentation schmatique des vnements survenant au cours de la maladie srique aigu induite chez le lapin .........................................................................................................................................41 Figure 7 : Reprsentation schmatique des ractions de cytotoxicit cellulaires dpendantes des anticorps. ..........44 Figure 8 : Opsonisation des complexes par le C3b chez lhomme ............................................................................45 Figure 9 : Elimination des complexes immuns dans le foie......................................................................................49 Figure 10 : Reprsentation schmatique du processus dpuration des complexes immuns dans le foie ..................51 Figure 11 : Epuration des complexes dans le foie et la rate chez des sujets sains et hypocomplmentmiques. .......53 Figure 12 : Quantification de llimination des complexes immuns dans les poumons et le foie suite une injection intraveineuse, au niveau de la veine cave crniale, de complexes radiomarqus chez le porc. .............56 Figure 13 : Quantification de llimination des complexes immuns dans les poumons et le foie, suite une injection intra-artrielle, au niveau de laorte, de complexes radiomarqus chez le porc ..................................56 Figure 14 : Schma bilan des voies dactivation classique et alterne du systme du complment. ...........................60 Figure 15 : Prcipitation des complexes immuns dans le srum dindividus sains, dficients en composant C4 ou en labsence dun systme du complment fonctionnel................................................................................61 Figure 16 : Etude de la solubilisation des complexes immuns forms en excs dantignes, lquivalence, et en excs danticorps, en fonction de laffinit des anticorps...................................................................................63 Figure 17 : Etude de la solubilisation de complexes immuns forms dIgG daffinit diffrente, lies de manire covalente et non covalente, en prsence ou en labsence dune voie classique dactivation du complment fonctionnelle ...................................................................................................................................................64 Figure 18 : Etude de la solubilisation de complexes immuns forms dIgM daffinit diffrente, lies de manire covalente et non covalente, en prsence ou en labsence dune voie classique dactivation du complment fonctionnelle. ..................................................................................................................................................64

Figure 19 : Mcanismes molculaires de la fixation des complexes immuns aux rythrocytes et de leur transfert aux macrophages............................................................................................................................................ 71 Figure 20 : Reprsentation schmatique du corpuscule rnal................................................................................. 90 Figure 21 : Coupe schmatique transversale dun lobule glomrulaire ................................................................... 91 Figure 22 : Paroi dun capillaire glomrulaire vue au microscope lectronique....................................................... 92 Figure 23 : Reprsentation schmatique des diffrents sites glomrulaires au sein desquels des dpts de complexes immuns peuvent tre observs ...................................................................................................... 94 Figure 24 : Reprsentation schmatique des principaux mcanismes amenant la formation de dpt de complexes immuns en rgion subpithliale. ................................................................................................... 98 Figure 25 : Mise en vidence de dpts glomrulaires de complexes immuns par immunofluorescence................ 103 Figure 26 : Cintique dlimination des complexes immuns par les phagocytes mononuclaires selon leur taille... 105 Figure 27 : Dpt des complexes immuns au sein du glomrule rnal en fonction de leur taille ............................ 107 Figure 28 : Modle dHSIII induite par injection dendotoxine chez la souris ......................................................... 112 Figure 29 : Impact de la commutation isotypique des anticorps, dIgM IgG2a dans lapparition spontane de la maladie complexes chez des souris NZB/NZW..................................................................................... 114 Figure 30 : Reprsentation des formes ionises des acides aspartique et glutamique en fonction du pH............... 118 Figure 31 : Effet dantagonistes des amines vasoactives sur lapparition de lsions aprs provocation dune maladie complexes immuns........................................................................................................................ 121 Figure 32 : Effet du mthysergide, un antagoniste de la srotonine, sur les lsions rnales mdies par les complexes immuns........................................................................................................................................ 122 Figure 33 : Modle dune IgM pentamrique dans sa forme plane et dans sa forme en agrafe . ...................... 129 Figure 34 : Reprsentation schmatique des tapes initiales de la voie classique dactivation du complment. .... 130 Figure 35 : Formation spontane de composants C3a et C3b dans le milieu extracellulaire .................................. 131 Figure 36 : Processus dinactivation du C3b la surface dune cellule saine ......................................................... 132 Figure 37 : Reprsentation schmatique des tapes initiales de la voie alterne dactivation du complment. ....... 133 Figure 38 : Reprsentation schmatique des voies rgulatrices de lactivation du complment ............................ 136 Figure 39 : Reprsentation schmatique des principaux rcepteurs de surface exprims par les macrophages ..... 149 Figure 40 : Reprsentation schmatique des principaux rcepteurs de surface exprims par les polynuclaires neutrophiles.................................................................................................................................................. 153 Figure 41 : Molcules impliques dans ladhrence des neutrophiles lendothlium vasculaire .......................... 154 Figure 42 : Influence de lactivation du C5aR sur lexpression des FcRIII et FcRIIb la surface des macrophage. .......................................................................................................................................... 166

Liste des annexes

Annexe 1 : Synthse du document....................................................................................................................... 197

LISTE DES ABRVIATIONS

Ac : Anticorps ADCC : Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity Ag : Antigne BSA : Bovine serum albumin C3a/C5a : Anaphylatoxines : Association de composants du complment en un complexe enzymatiquement actif
CAM : Complexes dattaque des membranes, galement not

CI : Complexe immun ou complexe antigne-anticorps CR : Rcepteur du complment CR1 : Rcepteur du complment de type 1 (CD35) CR2 : Rcepteur du complment de type 2 (CD21)

CR3 : Rcepteur du complment de type 3 (CD18/11b) CR4 : Rcepteur du complment de type 4 (CD18/11c) Fab : Fragment antigen binding Fc : Fragment cristallisable des immunoglobulines FcR : Rcepteur pour le fragment Fc des immunoglobulines FcR : Rcepteur pour le fragment Fc des IgA FcRI : Rcepteur pour le fragment Fc de type I (CD64) FcRIIa/FcRIIb : Rcepteur pour le fragment Fc de type IIa(CD32a)/IIb(CD32b) FcRIII : Rcepteur pour le fragment Fc de type III (CD16) FR : Facteur rhumatode GEM : Glomrulonphrite extra-membraneuse HBsAg : Hepatitis B surface antigen HSII : Hypersensibilit de type II HSIII : Hypersensibilit de type III Ig : Immunoglobuline IgG : Immunoglobuline de lisotype G IL : Interleukine ITAM : Immunoreceptor tyrosine-based activation motifs ITIM : Immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs LED : Lupus rythmateux dissmin LPS : Lipopolysaccharide MBG : Membrane basale glomrulaire NET : Neutrophil extracellular traps NZB/NZW : New Zealand White/ New Zealand Black PAF : Platelet activating factor

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AVANT-PROPOS

Lobjectif de ce travail est de fournir au lecteur un document autoportant qui tente de traiter de manire claire et prcise des mcanismes immunopathologiques qui caractrisent le phnomne de lhypersensibilit de type III (HSIII). La trajectoire initiale pouvait consister prsenter les mcanismes fondateurs de lHSIII puis voquer les entits cliniques connues ce jour et qui reposent de manire prpondrante sur ce phnomne. Et de la mme manire, aprs avoir ainsi dgag les mcanismes fondateurs de lHSIII et les rpercussions cliniques que ceux-ci entranent, de mener une rflexion sur la pertinence des options thrapeutiques actuellement disponibles au regard des mcanismes tablis, et dvoquer enfin les perspectives davenir. Au fur et mesure que japprofondissais le sujet, il mest apparu que la complexit des mcanismes mritait plus de concentration afin de mettre mieux en vidence les tenants et aboutissants du phnomne. Cest ainsi quil ma sembl intressant et ncessaire de modifier la trajectoire initiale afin de me concentrer sur ltude prcise des engrenages physiologiques et de leur dviation au cours du processus de lhypersensibilit de type III. Dans ces conditions, le propos a pu gagner en densit. Par ailleurs, de manire ponctuelle, des clairages histologiques, cliniques ou thrapeutiques serviront de support la dmonstration afin de replacer le propos thorique dans un contexte plus proche de la pratique. En cela, mon intention reste de jeter un pont entre, dune part, ltude spcifique du mcanisme de lHSIII, et, dautre part, ses rpercussions cliniques et thrapeutiques. Ainsi, le travail accompli a lambition de fournir un jalon utile une dmarche plus longue ; celle-ci pourra inclure une tude complmentaire qui abordera les aspects cliniques et thrapeutiques lis au phnomne HSIII. Puisse le texte propos susciter dun autre une semblable initiative !

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INTRODUCTION
Parce que le systme immunitaire organise notre survie, son tude appelle une dmarche dinvestigation approfondie et particulirement riche dintrts. Tout dabord, le systme immunitaire nest pas individualisable comme peut ltre un organe. En effet, les nombreux acteurs qui le constituent ont une localisation volutive, capable de sadapter aux agressions subies par lorganisme. Ainsi de tels acteurs peuvent tre retrouvs en tous points de lorganisme, ou presque. Ensuite, laction de ce systme repose sur la mise en uvre de nombreux mcanismes effecteurs dont les ractifs, cellulaires et humoraux, vont agir de manire coordonne afin de rpondre aux agressions environnementales de manire graduelle et cible, limitant autant que possible les dommages collatraux subis par lorganisme. Cependant, dans certaines circonstances, les mcanismes de limmunit naturelle (ou immunit inne) et de limmunit adaptative (ou immunit acquise) peuvent tre lorigine de ractions excessives ou inappropries. Au plan physiologique, de nombreux engrenages simbriquent pour dterminer la physionomie de la rponse immunitaire. En cela, il sera intressant dtudier les points critiques qui peuvent conduire une dviation de ce processus, tant dans son intensit, que dans sa cible. Dans ce contexte, laltration de lun de ces engrenages pourra conduire des lsions tissulaires indsirables. De telles ractions sont qualifies dhypersensibilits. Deux types dentre elles peuvent tre distingus : dune part, les rponses aux antignes trangers (ou exo-antignes), tels ceux rencontrs lors de la pntration dagents infectieux au sein de lorganisme, ou encore lors de greffes, peuvent tre drgules et induire des lsions tissulaires ; dautre part, les rponses immunitaires peuvent tre diriges contre des antignes du soi (antignes autologues ou autoantignes) en raison dun dfaut de tolrance au soi. Ces dernires rponses sont dsignes par le terme dauto-immunit. En 1963, Peter Gell et Robert Coombs ont dvelopp un systme de classification des hypersensibilits sur la base du mcanisme immunologique principal lorigine des lsions tissulaires et de la maladie observe. On distingue ainsi quatre types dhypersensibilit en fonction de la vitesse de la raction et des mcanismes immunologiques cls responsables des modifications pathologiques gnralises ou localises. Cette classification constitue en cela un cadre qui garde encore aujourdhui toute sa valeur, notamment en clinique. Cette classification nimplique pas que ces diffrentes formes de ractions interviennent indpendamment les unes des autres. (38, 155)

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Lhypersensibilit de type I Lhypersensibilit de type I (encore appele hypersensibilit immdiate ou

hypersensibilit lie aux immunoglobulines E ) est une raction pathologique provoque par la libration massive de mdiateurs de linflammation aigu par des mastocytes ou des polynuclaires basophiles du sang pralablement sensibiliss . En effet, lors dun premier contact avec lantigne, la mise en place dune rponse immunitaire mdiation humorale aboutit la production, par les plasmocytes, dIgE dont la rgion Fc se lie aux rcepteurs prsents la surface des mastocytes ou des basophiles du sang. Un second contact avec le mme antigne, nomm allergne dans ce contexte, conduit la dgranulation, dans les minutes qui suivent le contact, des mastocytes et des basophiles pralablement arms . Les manifestations cliniques des ractions de type I incluent le choc anaphylactique, potentiellement mortel, et des rponses localises, telles que la rhinite allergique ou lasthme. (37, 155) Lhypersensibilit de type II Lhypersensibilit de type II (ou hypersensibilit mdie par laction cytotoxique des anticorps ) apparat lorsque des anticorps, principalement de lisotype G mais aussi de lisotype M, ragissent avec des dterminants antigniques, du soi comme du non soi, exprims, ou simplement ports, la surface de cellules qui deviennent ainsi indirectement des cellules cibles. La raction peut alors induire la destruction cellulaire par activation du complment par la voie classique (opsonisation et phagocytose, libration de facteurs chimiotactiques pour les polynuclaires neutrophiles, formation du complexe dattaque des membranes) ou bien par Cytotoxicit Cellulaire Dpendante des Anticorps (ADCC pour antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity). Cette raction, relativement rapide lorsquelle repose sur lactivation du complment, peut prendre plusieurs jours plusieurs semaines lorsque quelle se base sur le processus dADCC. Les lsions sont alors limites aux cellules ou aux tissus qui portent ces antignes spcifiques. La maladie hmolytique nonatale et les ractions transfusionnelles en sont des exemples classiques. La myasthnie grave, qui repose sur la production dautoanticorps dirigs contre les rcepteurs lactylcholine prsents au sein des jonctions neuromusculaires constitue galement une hypersensibilit de type II. Dans ce dernier cas, les autoanticorps peuvent dtruire ou simplement neutraliser les rcepteurs cibls. (37, 70, 155)

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Lhypersensibilit de type III Lhypersensibilit de type III (ou hypersensibilit mdie par le dpt de complexes immuns ), qui fait lobjet de ce mmoire, est une hypersensibilit semi-diffre (quelques heures) induite par la formation de complexes immuns, produits de lagrgation danticorps et dantignes solubles, dans le lit vasculaire, au sein de tissus, ou sur la surface de membranes basales. Ces complexes immuns peuvent se dposer dans les vaisseaux sanguins et particulirement dans les sites de filtration tels que le glomrule rnal et entrainer localement une inflammation et des lsions tissulaires. Les ractions dhypersensibilits de type III peuvent tre observes au cours de maladies auto-immunes (lupus rythmateux dissmin, polyarthrite rhumatode), de maladies infectieuses ou plus gnralement lors dun contact prolong avec un antigne htrologue (pneumonies allergiques extrinsques). Ainsi, le phnomne dhypersensibilit de type III constitue probablement un facteur pathognique bien plus frquent quon ne le souponne. On distingue frquemment le phnomne dArthus, qui repose sur la formation de complexes immuns insolubles, ces derniers occasionnant des lsions tissulaires au point de pntration de lantigne dans lorganisme, et les maladies complexes immuns solubles, qui circulent et se forment distance du lieu o ils vont induire des lsions. Les tableaux cliniques sont divers, allant de ractions transitoires des atteintes chroniques multiples, svres et volutives, cardiaques, rnales, vasculaires, articulaires ou pulmonaires. Dans le cas de lhypersensibilit de type III, les lsions sont donc cres par le dpt non spcifique dans diffrents tissus de complexes pralablement forms dans le lit vasculaire et/ou dantignes non complexs avec formation de complexes en leur point de pntration dans lorganisme. (37, 155) Lhypersensibilit de type IV Lhypersensibilit de type IV (ou hypersensibilit retarde ) survient plus de 24 heures aprs la rencontre avec lantigne. Par opposition aux hypersensibilits de type I, II et III, qui reposent sur la mise en uvre dune rponse humorale, lhypersensibilit de type IV implique, quant elle, une rponse immunitaire exclusivement mdiation cellulaire. Cette hypersensibilit survient donc sans que la prsence danticorps ne soit ncessaire. Lactivation par lantigne des cellules Th1, prsentes en plus grand nombre chez un individu pralablement sensibilis, induit la libration de diverses cytokines (chimiokines, interfron-) qui provoquent une accumulation et une activation des macrophages au point de pntration de lantigne. Leffet global de cette activation est caractris par la libration denzymes lytiques lorigine de lsions tissulaires localises qui peuvent dgnrer en ractions granulomateuses chroniques lorsque lantigne persiste. La dermatite de contact, ainsi que la tuberculose bovine Mycobacterium bovis, tant par les lsions pulmonaires induites que par le test diagnostique dintradermo-tuberculination, en constituent des exemples. (37, 70, 155) 15

Annonce du plan
Notre tude se concentre sur les mcanismes physiopathogniques de lhypersensibilit de type III. Lassociation antigne-anticorps constitue un pr-requis au dclenchement dun tel processus. Il convient donc, dans un premier temps, de se remettre en mmoire les paramtres qui caractrisent la formation des complexes immuns. Ainsi, aprs avoir revu les proprits intrinsques des antignes, des anticorps, et de leur association, nous tudierons les facteurs modulant la taille et le lieu de formation des complexes immuns. Pour clore cette premire partie, nous voquerons les principales fonctions biologiques mdies par les complexes immuns au sein de lorganisme. Nous pourrons ainsi observer que la premire partie de ce mmoire sattache la description des diverses proprits des complexes immuns qui, par la suite, se rvleront dterminantes dans leur pouvoir pathogne potentiel. Les deux parties suivantes traiteront des facteurs qui conduisent les complexes immuns exprimer ce pouvoir pathogne en mettant en lumire les circonstances de sa mise en uvre ainsi que les relais directement impliqus dans le dveloppement des lsions tissulaires. Ainsi, dans la deuxime partie, nous prsenterons les mcanismes de lpuration des complexes immuns circulants et les circonstances qui favorisent leur dpt au sein de diverses structures tissulaires. Enfin, la troisime et dernire partie de ce mmoire sera consacre ltude des mcanismes effecteurs mis en jeu secondairement la formation de dpts de complexes immuns au sein des tissus et dont lactivation conduit la cration des lsions tissulaires.

N.B. Des bilans sont proposs lissu de chaque grand dveloppement afin de rendre plus agrable lappropriation du texte par le lecteur. Ils sont placs en annexe de ce document et permettent de rappeler les lments majeurs prsents et dont la bonne comprhension et ncessaire pour la poursuite de la lecture. Ces bilans jalonnent ainsi le propos et constituent des points de passages permettant au lecteur didentifier le plus clairement possible les lments cls du mcanisme physiopathologique de lhypersensibilit de type III.

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PREMIRE PARTIE

STRUCTURE ET FONCTIONS DES COMPLEXES IMMUNS

17

18

I. Formation des complexes immuns

La prsence dans lorganisme de substances reconnues comme trangres peut amener lorganisme ainsi attaqu ragir par la production danticorps (Ac). Ces derniers sont des glycoprotines, encore appeles immunoglobulines, produites in vivo lors de la mise en place dune raction humorale pour ragir spcifiquement avec l'antigne (Ag), en formant un complexe antigne-anticorps dnomm complexe immun. Immunoglobulines et anticorps dsignent donc une mme entit, et lon pourra employer lun ou lautre terme selon que lon sintresse la structure ou lactivit de la molcule. Les immunoglobulines sont prsentes dans le srum ainsi que dans dautres fluides de lorganisme comme le lait, les larmes, la salive, la bile etc. (38, 99, 155).

A.

Lantigne

Deux proprits sont distinguer (155) : limmunognicit est la capacit dune substance induire une rponse immunitaire humorale et/ou mdiation cellulaire ; lantignicit, quant elle, est la capacit dune substance se combiner spcifiquement avec les produits finaux des rponses immunitaires : les anticorps ou les rcepteurs de la surface cellulaire. Notons que si toutes les molcules qui possdent la proprit dimmunognicit ont aussi la proprit dantignicit, linverse nest pas vrai. En effet, quelques petites molcules, appeles haptnes, sont antigniques mais sont incapables de produire par elles-mmes une rponse immunitaire spcifique. Immunognicit et antignicit sont donc des proprits immunologiques apparentes, mais bien distinctes. (155) Un antigne est une molcule qui possde ces deux proprits : il est capable de se combiner avec une molcule de reconnaissance du systme immunitaire (rcepteurs des lymphocytes B ou T, anticorps) et d'induire secondairement une rponse immunitaire. La reconnaissance dun antigne par les rcepteurs membranaires des cellules B induit leur prolifration et leur diffrenciation en plasmocytes et en cellule B mmoire . Les plasmocytes scrtent des anticorps solubles avec, dans un premier temps, une spcificit pour lantigne identique celle du rcepteur de surface des cellules B parentales. Par la suite, le processus de maturation daffinit conduira la production danticorps plus affins. (155)

19

La plupart des antignes prsentent une structure complexe et contiennent de nombreux pitopes diffrents. Le systme immunitaire rpond habituellement par la production danticorps dirigs contre plusieurs pitopes de cet antigne. En cela, plusieurs clones de cellules B diffrents sont stimuls, prolifrent et se diffrencient en plasmocytes scrteurs danticorps. Les produits issus de plasmocytes drivs dun seul clone lymphocytaire B dfinissent une rponse anticorps monoclonale qui fixe spcifiquement un seul dterminant antignique. Lensemble des anticorps monoclonaux scrts par les clones de lymphocytes B stimuls constitue la rponse anticorps polyclonale lantigne immunisant. (155)

B.

Lanticorps

Les immunoglobulines sont des molcules synthtises lors de la mise en uvre dune rponse
immunitaire spcifique (ou adaptative). Tandis que les composants de limmunit inne reconnaissent des motifs partags par des groupes de molcules trangres, les immunoglobulines prsentent un plus haut degr de spcificit, en reconnaissant des dterminants antigniques spcifiques dantignes (ou pitopes). (155) Les immunoglobulines sont des glycoprotines rencontres sous formes, dune part, de constituants membranaires des lymphocytes B, elles forment alors les BCR (pour B cell receptor), dautre part, de molcules solubles scrtes par les plasmocytes. Limmunoglobuline membranaire confre aux cellules B leur spcificit antignique. Linteraction de limmunoglobuline membranaire avec lantigne qui lui est spcifique provoque la prolifration clonale des cellules B ainsi recrutes. (155)

1. Structure de base des anticorps

Les immunoglobulines prsentent des caractristiques structurales communes qui leurs permettent de remplir deux fonctions principales : dune part, induire la reconnaissance spcifique dun dterminant antignique (pitope), dautre part, conduire lactivation de systmes effecteurs ciblant lantigne ou les cellules qui lexpriment leur surface, pour faciliter sa neutralisation et son limination de lorganisme. Il existe ainsi une vritable dualit fonctionnelle des immunoglobulines. Des rgions distinctes de la molcule, que lon peut sparer aprs clivage par la mise en prsence de certaines enzymes (comme la papane ou la trypsine), assurent la ralisation de ces deux fonctions : la partie dune immunoglobuline implique dans la reconnaissance des antignes, le Fab (pour fragment antigen binding), a la caractristique essentielle de prsenter une diversit structurale considrable, adapte lhtrognit des antignes rencontrs. En revanche, la partie responsable de lactivation 20

des systmes effecteurs a une structure plutt conserve. Le fragment correspondant cette rgion de limmunoglobuline a tendance cristalliser spontanment aprs isolement do son appellation de fragment Fc pour fragment cristallisable. (38) Etudions de manire plus approfondie la structure des immunoglobulines Les molcules dimmunoglobulines sont formes de quatre chanes polypeptidiques : deux chanes lgres (L) et deux chanes lourdes (H) identiques ( Figure 1). Chaque chane lgre est relie une chane lourde par une liaison disulfure et par de nombreuses interactions non covalentes telles que les liaisons ioniques, hydrognes, et les liaisons hydrophobes. Ces liaisons covalentes et non covalentes conduisent, dune part, la formation de lhtrodimre (H-L), et, dautre part, la liaison lune lautre de deux combinaisons identiques (HL) pour former la structure de base de limmunoglobuline quatre chanes (H-L)2. Le nombre exact et les positions prcises de ces liaisons disulfures inter-chanes diffrent selon les classes et les sousclasses des immunoglobulines. (37, 155) Figure 1 : Reprsentation schmatique de la structure des immunoglobulines, daprs (155)

Les 110 premiers acides amins de la rgion amino-terminale dune chane lgre ou dune chane lourde varient grandement entre anticorps de spcificits diffrentes. Ces segments de squence trs variables sont appels rgion V : VL dans les chanes lgres et VH dans les chanes lourdes. Toutes les diffrences de spcificit prsentes par les anticorps peuvent tre rapportes ces variations dans la squence des aminoacides des rgions V. En fait, ces squences, qui prsentent une grande variabilit, sont situes lintrieur de zones appeles rgions de complmentarit (CDR, pour 21

complementarity determining region) et ce sont ces CDR, tant dans les chanes lgres que dans les chanes lourdes, qui constituent le site de liaison spcifique lantigne. Par opposition, pour une mme classe dimmunoglobuline, peu de diffrences sont observes lorsque lon compare les squences du reste de la molcule. Les rgions de squence relativement constantes ont t dnommes rgions C : CL pour les chanes lgres et CH pour les chanes lourdes (Figure 1). (155) Le squenage des rgions constantes des chanes lgres (CL) a rvl lexistence de deux types de chanes lgres : (kappa) et (lambda). Pour information, 60% des chanes lgres sont de type et 40% de type chez lhomme tandis que 95% des chanes lgres sont de type et 5 % de type chez la souris (155). Par ailleurs, les deux types de chanes lgres sont prsents chez le chien et le chat, avec un ratio / de 1/10 chez le chien et de 1/3 chez le chat. Une molcule dimmunoglobuline contient un seul type de chane lgre, soit des chanes soit des chanes mais jamais les deux (37). Le squenage des rgions constantes des chanes lourdes (CH) a rvl lexistence de cinq profils de squences bien distincts : , , , , . Les chanes lourdes dune molcule dimmunoglobuline donne dterminent la classe (ou isotype) de cet immunoglobuline : IgM (), IgG (), IgA (), IgD (), et IgE () (Figure 2). Chaque classe peut possder des chanes lgres ou . Des diffrences minimes dans les squences des acides amins des chanes et conduisent une classification plus approfondie des chanes lourdes en sous-classes. Chez lhomme, il y a deux sous-classes de chanes lourdes (1 et 2) et quatre sous-classes de chanes lourdes (1, 2, 3 et 4) (155). Bien que la structure de base des immunoglobulines soit identique dune espce lautre, certaines particularits interspcifiques ont t identifies et seront voques lors de la description plus en dtails des isotypes dimmunoglobulines.

2. Site de fixation des anticorps

La fixation de lantigne est ralise par les portions amino-terminales et les fonctions effectrices par les rgions carboxy-terminales de lanticorps. De plus, les molcules protiques ne sont pas rigides ; elles sont soumises un quilibre dynamique entre des structures qui diffrent notamment par leur aptitude former une interaction avec certains ligands. Ainsi, dans certains cas, la fixation de lantigne, et ltablissement sous-jacent de forces dinteractions, induisent des changements conformationnels de limmunoglobuline, de lantigne ou des deux. Cet lment permet dexpliquer, au moins en partie, la plus grande ractivit des complexes immuns compare celle des immunoglobulines libres avec les rcepteurs pour le fragment Fc prsents la surface de nombreux types cellulaires. (155, 172) 22

Figure 2 : Structure des cinq classes dimmunoglobulines chez lhomme, daprs (155)

3. Isotypes et activits biologiques des anticorps

a. Immunoglobulines G (IgG)

LIgG constitue la classe la plus abondante du srum et reprsente environ 80% des immunoglobulines sriques totales chez lhomme. Quatre sous-classes dIgG sont distingues chez lhomme par des diffrences dans la squence de la chane : IgG1, IgG2, IgG3 et IgG4 (Figure 3). Celles-ci sont numrotes en fonction de leurs concentrations sriques moyennes dcroissantes et reprsentent respectivement 66%, 23%, 7% et 4% des IgG sriques. Alors quil ny a pas moins de 95% dhomologie de squence entre les domaines, les rgions charnires sont notablement diffrentes, ce qui dtermine des comportements physicochimiques (flexibilit des IgG1 et IgG3, rigidit des IgG2 et IgG4) et des proprits effectrices diffrents. (155)

23

Chez le chien et le chat, lisotype semble galement exister en quatre sous-classes 1, 2, 3 et 4. Les concentrations sriques des IgG1 et IgG2 du chien sont similaires (300 1400 mg/dL) alors que les concentrations en IgG3 et IgG4 sont beaucoup plus faibles (infrieures 200 mg/dL) (37). Notons que sept sous-classes ont t dcrites chez le cheval (IgG1 IgG7) (70). Les subtiles diffrences dacides amins entre les sous-classes dIgG affectent lactivit biologique de la molcule (155) : Les IgG1, IgG3 et IgG4 passent facilement la barrire placentaire et jouent un rle important dans la protection du ftus au cours de son dveloppement ; Les IgG3 et IgG1 constituent les sous-classes dIgG activant le plus efficacement le systme du complment. Ce dernier est constitu de glycoprotines sriques et son activation se traduit par une cascade de clivages protolytiques dont les produits assurent des fonctions aussi importantes que diverses (voir paragraphe P3-0). LIgG2 est nettement moins efficace, quant lIgG4, elle nest pas du tout capable dactiver le complment ; LIgG1 et lIgG3 se lient avec une forte affinit aux rcepteurs du Fc des cellules phagocytaires et mdient ainsi lopsonisation. LIgG4 possde une affinit intermdiaire. En revanche, lIgG2 montre une affinit extrmement faible.

Figure 3 : Structure gnrale des quatre sous-classes dIgG humaines, daprs (155)

b.

Immunoglobulines M (IgM)

Les IgM sont prsentent sous forme monomrique la surface des cellules B. En revanche, les IgM sont scrtes par les plasmocytes sous forme de pentamres et reprsentent 5% 10% des immunoglobulines sriques totales. Les cinq sous-units monomriques sont maintenues ensemble par des liaisons disulfure et sont disposes de manire exposer en priphrie les dix sites de liaison 24

de l'antigne. Les fragments Fc se retrouvent ainsi au centre de la molcule. Chaque pentamre contient un polypeptide additionnel, appel chane J (pour joining), li par des liaisons disulfure la rgion carboxy-terminale de deux des dix chanes . La chane J semble tre ncessaire la polymrisation des monomres et la formation d'une IgM pentamrique. (155) L'IgM est la premire classe d'immunoglobuline produite lors d'une rponse primaire un antigne et elle est aussi la premire immunoglobuline tre synthtise par le nouveau-n. En raison de sa structure pentamrique, l'IgM srique a une plus grande valence que les autres isotypes. Toutefois, malgr la prsence de dix sites de liaison lantigne, seulement cinq molcules, ou moins, peuvent en gnral se lier simultanment une IgM pour des raisons d'encombrement strique. (155) L'IgM est aussi plus efficace que l'IgG pour activer le systme du complment. L'activation du complment ncessite deux rgions Fc proches et la structure pentamrique d'une seule molcule d'IgM satisfait cette condition (voir paragraphe P3-I.B). En raison de sa grande taille, l'IgM ne diffuse pas aisment dans le compartiment extravasculaire. Toutefois, la prsence de la chane J permet l'IgM de se lier aux rcepteurs des immunoglobulines polymriques prsents au ple basal des cellules pithliales. LIgM est ainsi internalise puis libre au sein des scrtions externes qui baignent la surface des muqueuses. Comme nous le verrons par la suite, l'IgA reste cependant le principal isotype rencontr dans ces scrtions. (155)

c.

Immunoglobulines A (IgA)

Bien que les IgA ne reprsentent que 10% 15% des immunoglobulines totales du srum, elles forment la classe d'immunoglobuline prdominante des scrtions externes telles que le lait, la salive, les larmes, ainsi que le mucus des tractus bronchique, gnito-urinaire et digestif. Les IgA constituent ainsi environ 60% des immunoglobulines synthtises par lorganisme. L'IgA srique existe essentiellement sous forme de monomre, mais des formes polymrises, telles que des dimres, des trimres et mme des ttramres, qui contiennent toutes une chane polypeptidique J, sont parfois rencontres. (155) L'IgA des scrtions externes, appele IgA scrtoire, est plutt prsente sous forme d'un dimre ou d'un ttramre. Elle est associe une chane polypeptidique, appele composant scrtoire et driv du rcepteur responsable du transport de l'IgA polymrique travers les membranes des cellules pithliales muqueuses. (155) 25

La production journalire d'IgA scrtoire est suprieure celle de toutes les autres classes d'immunoglobulines. Les plasmocytes scrteurs d'IgA sont concentrs le long des surfaces des muqueuses. L'IgA scrtoire assure une importante fonction effectrice au niveau des surfaces des muqueuses qui sont les principaux sites d'entre de la plupart des pathognes. La liaison de l'IgA scrtoire aux antignes des surfaces bactriennes ou virales empche la fixation de ces pathognes aux cellules muqueuses (70). Une fois cet attachement bloqu, l'infection virale ou la colonisation bactrienne sont inhibes. Les complexes d'IgA scrtoire et d'antigne sont aisment englobs dans le mucus, puis limins par les cellules pithliales cilies du tractus respiratoire ou par les mouvements pristaltiques de l'intestin. L'IgA scrtoire apporte une importante ligne de dfense contre des bactries, telles que Salmonella et des virus, tels que celui de la grippe (155). Chez lhomme, deux sous-classes dIgA (IgA1 et IgA2) sont codes par deux gnes de chane lourde distincts. Notons que le lapin en possde treize, dont la plupart conduisent la synthse dimmunoglobulines fonctionnelles (70). Une seule classe dIgA existe chez le chien alors que deux sous-classes dIgA (IgA1 et IgA2) pourraient tre prsentes chez le chat (37, 278).

d.

Immunoglobulines E (IgE)

La puissante activit biologique des IgE permet leur identification dans le srum en dpit de leur concentration srique moyenne extrmement faible (0,3 g/mL). Les basophiles et les mastocytes expriment un rcepteur spcifique de trs haute affinit pour le fragment Fc des IgE. Ceci explique que ces cellules sont continuellement satures dIgE, on les qualifie de cellules armes . En effet, les anticorps IgE mdient les ractions d'hypersensibilit immdiate (HSI) qui sont notamment responsables des symptmes lors de rhume des foins, dasthme, d'urticaire et de choc anaphylactique. (155) Si limmunoglobuline E sous forme libre est retrouve chez lhomme en trs faible quantit dans le compartiment circulatoire, elle est en gnral prsente des concentrations plus importantes chez les animaux domestiques. Compte tenu du rle majeur jou par cette classe dimmunoglobuline dans la dfense endoparasitaire, il se pourrait que cette diffrence sexplique par le plus haut niveau de parasitisme interne constat chez les animaux domestiques. (70)

26

e.

Immunoglobulines D (IgD)

Cette classe dimmunoglobulines constitue environ 0,2% des immunoglobulines totales du srum. LIgD, avec LIgM monomrique, est une immunoglobuline membranaire exprime par les cellules B matures dont le rle physiologique est en cours dtude. Il existe de nombreuses variations interspcifiques concernant la structure de cette immunoglobuline sans quaucune fonction effectrice biologique nait encore pu tre dcrite. (70, 155) Le Tableau 1 reprsente de manire comparative les principales proprits et activits biologiques des immunoglobulines humaines. Tableau 1 : Proprits et activits biologiques des immunoglobulines humaines selon leur classe, daprs (155) Les niveaux dactivit sont indiqus comme suit : ++ lev ; + modr ; +/- faible ; - aucun ; ? douteux.
Proprit/Activit Poids molculaire (kDa) Chane lourde Taux srique normal (mg/mL) Demi-vie dans le srum in vivo (jours) Constante de sdimentation (S) Active la voie classique du complment Passe travers le placenta Prsent sur la membrane des cellules B matures Se lie au rcepteur du Fc des phagocytes Transport travers la muqueuse Induit la dgranulation des mastocytes IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgA1 IgA2 IgM IgE IgD

150

150

150

150

150-600

150-600

900

190

150

1
9 23 7

2
3 23 7

3
1 8 7

4
0,5 23 7

1
3 6 7

2
0,5 6 7

1,5 5 19

0,0003

0,03 3 7

2,5 8

+ + ++ -

+/+/+/-

++ + ++ -

+ + -

++ -

++ -

++ + ? + -

+ -

27

C.

Proprits de la raction antigne-anticorps

L'antigne et l'anticorps interagissent entre eux selon un phnomne rversible caractris par ltablissement de nombreuses liaisons non covalentes aboutissant la formation du complexe antigne-anticorps (ou complexe immun).

1. Bases molculaires de la liaison antigne-anticorps

Les bases molculaires de la raction reposent sur la complmentarit, la spcificit et la rversibilit de la liaison entre un anticorps et un antigne. Cette interaction physique rsulte de la reconnaissance d'un pitope (dterminant spcifique de l'antigne) par le paratope (site porteur de la spcificit de l'anticorps) et de la mise en place de forces attractives et rpulsives dont la rsultante conduit ltablissement dune liaison non covalente entre lantigne et lanticorps. (99) Quatre types de forces sont impliqus (99): les liaisons lectrostatiques sont des forces d'attraction ou de rpulsion qui rsultent respectivement de ltablissement de liaisons ioniques entre des atomes ou groupes d'atomes dont les charges lectriques sont opposes ou de mme signe (groupe COO- et NH3+ dans le cas des protines) ; les liaisons hydrogne correspondent des liaisons lectrostatiques tablies entre un atome dhydrogne (lectropositif) d'une molcule et un atome lectrongatif (oxygne ou azote), d'une autre molcule ; les liaisons hydrophobes correspondent aux forces qui dtablissent entre des molcules non polaires ou des parties non polaires de molcules, c'est--dire ne contenant pas de groupements chargs, et favorisent leur agrgation en milieu aqueux. Les molcules deau ne peuvent tablir de liaisons hydrogne avec des groupements non polaires. Ainsi, lorsque de tels groupements entrent en contact troit, lors de lassociation antigne-anticorps par exemple, les molcules deau engages dans ces zones sont attires vers lextrieur par les liaisons hydrogne qui les unissent aux autres molcules deau et ont ainsi tendance former de vritables filets autour de ces groupements non polaires. Dune certaine manire, la force qui en rsulte amne les molcules deau runies entre elles exercer une pression sur les groupements non polaires qui conduit une augmentation de la stabilit de liaison qui stablie entre eux. Ainsi les liaisons hydrophobes qui stablissent entre deux groupements non polaires sont le reflet de la force qui unit les molcules deau leur voisinage. Les acides amins aromatiques en sont des exemples (Figure 4). (164) 28

les forces de Van der Waals sont dues aux mouvements des lectrons de deux molcules. Il s'agit de la force d'interaction entre les diffrents nuages lectroniques. Ces forces, assez faibles, jouent seulement un rle en cas de complmentarit troite entre lantigne et lanticorps, mais sont alors trs efficaces.

Figure 4 : Reprsentation schmatique des liaisons hydrophobes, daprs (164)

2. Spcificit de la raction
Le site de liaison de l'anticorps (Fab) est spcifique d'un dterminant antignique donn. Cette spcificit est un lment essentiel de la raction Ag-Ac. Elle repose sur une complmentarit physique troite entre paratope et pitope. Un antigne est le plus souvent une molcule complexe, porteuse de plusieurs pitopes. Chacun dentre eux peut tre reconnu par un anticorps qui lui est spcifique. Le srum d'un animal immunis par un antigne complexe contient un mlange d'anticorps de spcificits pitopiques diffrentes. Utiliss comme ractifs, ils constituent des anticorps polyclonaux, issus de plusieurs clones diffrents de lymphocytes B producteurs d'anticorps. Ces anticorps sont capables de reconnatre plusieurs pitopes, prsents sur l'antigne immunisant, mais dont certains peuvent tre prsents la surface de molcules diffrentes. Chacun des anticorps constitutifs du mlange est porteur d'une spcificit donne, et ne peut reconnatre qu'un unique pitope, une squence particulire, ou une squence trs proche. La capacit que possde un anticorps de reconnatre deux Ag non strictement identiques s'explique par une communaut antignique partielle : on parle alors de raction croise. (99)

29

3. Affinit de lanticorps
L'affinit caractrise la force et la stabilit de la liaison entre l'Ag et l'Ac. Elle est leve lorsqu'une complmentarit strique troite existe entre le paratope et lpitope permettant aux forces d'attraction de s'exercer pleinement. La liaison antigne-anticorps est une liaison dynamique. Laffinit de la liaison Ac-Ag varie en fonction de la nature des groupes qui interagissent, de la temprature, du pH et de la force ionique. L'affinit intrinsque d'un Ac vis--vis d'un Ag est dfinie par la constante d'association. Cette constante Ka = [Ag-Ac] / [Ag].[Ac] est value par la mise en prsence dun anticorps avec un antigne monovalent un pH proche de la neutralit et des concentrations physiologiques en sels. Pour des anticorps trs affins, cette constante est de l'ordre de 1010 1013 L/mol, pour des anticorps peu affins, de l'ordre de 107 1010 L/mol. A titre comparatif, la constante dassociation varie de 104 106 L/mol pour la plupart des interactions enzyme-substrat. (99)

4. Avidit de lanticorps
L'avidit correspond la force avec laquelle un anticorps multivalent se lie un antigne multivalent. Mme si l'avidit d'un anticorps pour l'antigne conditionne la rapidit avec laquelle stablie la liaison Ag-Ac, cette raction dpendra d'abord de l'affinit de chacun des sites anticorps pour les diffrents dterminants antigniques. L'avidit est donc la rsultante de l'affinit intrinsque des ractions molculaires, entre les pitopes et les paratopes, et du nombre de valences de l'anticorps et de l'antigne. Au niveau molculaire simple, l'affinit concerne une seule relation pitope-paratope dans un contexte exprimental, alors que l'avidit tient compte des nombreuses relations pitopeparatope dans un contexte physiopathologique. (99)

5. Rversibilit de la raction
Au cours de ltablissement de la liaison Ag-Ac, il n'y a ni destruction de l'anticorps, ni de l'antigne, par opposition aux liaisons enzyme-substrat o le substrat est mtabolis. La raction est donc une raction quilibre et rversible. De plus, les conditions physicochimiques (chaleur, acidification du milieu ou apport d'ions, etc.) influent sur cette raction. La rversibilit des liaisons tablies rend possible la dissociation ultrieures des complexes Ag-Ac pralablement forms (phnomne d'lution) et permet notamment la sparation et la purification en laboratoire de l'antigne ou de l'anticorps. (99) 30

D. Facteurs modulant la taille des complexes immuns

Les interactions qui soprent entre antignes et anticorps amnent la formation de complexes immuns. Lorsque plusieurs antignes et anticorps sont impliqus dans la formation du complexe, ils forment alors un rseau dont la taille dtermine les proprits biologiques du complexe. La taille dun complexe immun est fonction de lantigne, de lanticorps, de leurs concentrations respectives, et des ractions secondaires entre le complexe immun et dautres constituants plasmatiques.

1. Facteurs lis lantigne

Les antignes peuvent tre de structures biochimiques varies : protines, polysaccharides, acides nucliques, phospholipides, lipoprotines etc. Plusieurs caractristiques de l'antigne jouent un rle dans la structure et la taille des complexes immuns : la taille de lantigne, le nombre de dterminants antigniques, et les proprits physicochimiques de lantigne qui dterminent son affinit pour certaines structures cellulaires. Le nombre de dterminants antigniques accessibles dtermine la valence de la molcule antignique et, par l, sa capacit tablir des liaisons avec les anticorps qui lui sont spcifiques. En effet, les antignes multivalents favorisent la formation dun rseau et donc de complexes de grande taille. Les autoantignes qui ont souvent un nombre d'pitopes plus restreint entrent dans la composition de complexes plus petits (99). Enfin, un antigne monovalent ne peut sintgrer quau sein de structures de petites tailles de type Ag2Ac1 ou Ag1Ac1 (161). Cependant, le caractre multivalent de lantigne ne garantit pas la formation dun rseau de grande taille. Lorsquun antigne multivalent expose des dterminants antigniques identiques et spars dune distance adapte la surface de la molcule, les deux sites de fixation de lanticorps bivalent spcifique se fixent prfrentiellement sur la mme molcule antignique. En effet, lavidit de lanticorps pour lantigne est alors plus forte du fait de ltablissement de deux liaisons Ac-Ag entre les ractifs. Une telle raction est qualifie de liaison bivalente monogame et ne favorise par la formation de complexes de grande taille. En cela, ltablissement dune telle liaison sera dautant plus favoris que laffinit de lanticorps est leve. titre dexemple, les anticorps anti-ADN de haute affinit peuvent se fixer par liaison bivalente monogame des fragments dADN de taille adapte. En revanche, les anticorps anti-ADN de faible affinit nont pas tendance former ce type de liaisons. (161)

31

2. Facteurs lis lanticorps

Plusieurs caractristiques de l'anticorps jouent un rle dans la structure et la taille des complexes : la valence de limmunoglobuline selon sa classe : 2 pour IgG, 5 pour IgM ; les forces de liaison ou affinit existant entre le site antignique et le site anticorps ; la nature immunochimique de l'anticorps qui aura ou non le pouvoir de fixer le complment.

Laffinit de la liaison Ac-Ag a des rpercussions sur la taille du complexe form. En effet, de manire gnrale, des anticorps de faible affinit amnent la formation de complexes de plus petite taille que ceux forms en prsence danticorps de forte affinit. (99) Notons que la distance qui spare deux sites de fixation lantigne peut modifier la structure du complexe immun form. Pour une molcule dimmunoglobuline donne, cette distance ne varie que selon une faible amplitude, dtermine par la flexibilit des deux bras Fab au niveau de la zone charnire. Celle-ci est principalement dtermine par lisotype de limmunoglobuline. titre dexemple, les IgG3 humaines possdent une rgion charnire longue et flexible comparativement aux IgG2, dont la rgion charnire est plus courte et rigide (Figure 3). (38)

3. Concentrations respectives en antigne et en anticorps

a. Principe de la zone d'quivalence

Les trois zones prsentes sur la Figure 5 correspondent aux trois tats physiques induits par la formation de la liaison Ag-Ac. Si on ajoute des quantits croissantes d'Ag solubles une solution d'Ac de concentration fixe, chaque antigne sera recouvert dans un premier temps de plusieurs anticorps (zone o lAc est en excs), par la suite un rseau dune taille croissante se forme progressivement jusqu atteindre un rapport Ag/Ac optimal (zone d'quivalence) qui permet d'observer la prcipitation maximale du rseau. Les anticorps et antignes ne sont alors plus prsents sous forme libre mais complexe. Au-del de ce rapport Ag/Ac optimal, laddition supplmentaire dantignes entrane la dissociation partielle du rseau, permise par le caractre rversible de la liaison Ac-Ag, et la quantit de prcipits forms diminue (zone o lAg est en excs). Ceci s'explique par le dplacement de la liaison Ag-Ac grce lexcs d'Ag. En effet, la concentration de lAg est alors largement suprieure celle de l'Ac avec de nombreux sites antigniques qui restent libres d'o une rupture du rseau. Ces trois zones existent toujours pour un couple Ag-Ac donn. (99)

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L'apparition d'un prcipit s'explique par la formation d'un rseau tridimensionnel qui ne peut exister qu'en prsence d'Ag pitopes multiples et d'Ac multivalents. Les complexes immuns ainsi forms sont des difices multimolculaires dont la solubilit diminue avec la taille jusqu' la prcipitation. Plus prcisment, la raction de prcipitation comprend deux phases : la premire, rapide, se caractrise par la formation de complexes immuns solubles et conduit la formation du rseau, la seconde, plus lente, constitue la prcipitation proprement dite, rendue possible par ltablissement de ponts ioniques entre les groupes de charges diffrentes ports par les molcules danticorps devenues voisines et dont lassociation est alors plus troite et stable. (99) Figure 5 : Quantit de prcipits forms en fonction du rapport de concentration entre lantigne et lanticorps, daprs (193)

b.

Application la formation des complexes immuns in vivo

Lorsque lantigne possde plusieurs dterminants antigniques identiques, la taille du complexe immun est fonction du rapport molaire existant entre antigne et anticorps : en excs d'antigne : les complexes sont forms d'une seule molcule d'anticorps et sont de petite taille ; en excs d'anticorps : plusieurs molcules d'anticorps se fixent sur une mme molcule antignique, et les sites libres des anticorps peuvent fixer d'autres antignes, les complexes sont de plus grande taille ; lquivalence, cest--dire lorsqu'il existe autant de sites antigniques que de sites anticorps, il se forme un rseau complexe de grande taille. 33

Lorsque l'antigne ne possde qu'un ou deux dterminants antigniques, le complexe immun est de petite taille, quelles que soient les concentrations respectives en anticorps et antignes. En revanche, lorsque lantigne prsente de nombreux pitopes, les concentrations absolues en anticorps et en antignes jouent sur la taille du rseau form, indpendamment du ratio Ag/Ac. En effet, pour un mme ratio Ag/Ac, de trs faibles concentrations en Ag et Ac amnent la formation de complexes de plus petite taille que ceux forms pour des concentrations plus leves (161). Notons que lorsque l'antigne possde plusieurs dterminants antigniques de spcificits diffrentes, la structure et la taille des complexes dpendent des concentrations relatives en antigne et en anticorps mais aussi de la densit et du nombre de dterminants antigniques prsents sur une molcule d'antigne. En effet, lantigne conduit bien souvent in vivo une raction humorale polyclonale. De ce fait, plusieurs systmes de prcipitation se dveloppent simultanment. Il ny a plus alors de zone dquivalence vraie, chaque systme ayant sa propre zone dquivalence. La prcipitation du rseau in vivo est en cela complexe et difficilement reproductible in vitro (38, 161). N.B. La notion de prcipitation dcrite ci-dessus ne sapplique que dans le cas de ractions antigneanticorps faisant intervenir un antigne soluble. Dans le cas dantignes cellulaires ou particulaires, on parlera plutt dagglutination. Ce dernier mcanisme ne fait pas lobjet de notre tude qui se limite, dans le cade de lhypersensibilit de type III, au cas des antignes solubles.

4. Ractions secondaires entre le complexe immun et dautres constituants plasmatiques

Les complexes immuns forms peuvent secondairement tre modifis de manire significative par la fixation de protines plasmatiques. Le rle majeur de la fixation de certains composants du systme du complment sur la taille et la solubilit des complexes immuns sera dcrit de manire dtaille dans la suite de cette tude (voir paragraphes P2-B.1 inhibition de la prcipitation et P2-B.2 solubilisation des complexes immuns ). Ainsi, la prsence dans le milieu danticorps anticomplment (immunoconglutinine), et danticorps anti-isotype, dirigs contre le fragment Fc des anticorps constitutifs du complexe immun (facteur rhumatode), porteront consquence. De telles ractions secondaires entranent des changements de proprits physico-chimiques et biologiques des complexes immuns ainsi modifis qui seront discuts dans la suite de cette tude.

34

E.

Lieux de formation des complexes immuns

De manire trs gnrale, on distingue les complexes immuns forms partir d'un antigne prsent la surface d'une cellule, de ceux forms partir dun antigne libre. Si l'antigne se trouve la surface dune cellule, le complexe immun se forme la surface de celle-ci. Il peut sagir, dune part, dune molcule constitutive de la membrane cellulaire, reconnue tort ou raison par le systme immunitaire comme trangre. Dautre part, il peut sagir dun antigne qui va se localiser la surface cellulaire la faveur dinteractions lectrostatiques par exemple ; on parle alors dantigne adsorb ou plus communment dantigne plant (99). Ces mcanismes de formation des complexes sont plutt apparents la problmatique de lhypersensibilit de type II. La dfinition propose de lhypersensibilit de type III semble, quant elle, reposer sur la fixation danticorps des antignes libres. Par consquent, le lieu de formation des complexes immuns va dpendre de la localisation de lantigne cibl, elle-mme fonction de la voie de pntration de cet antigne dans lorganisme ainsi que de la rponse humorale mise en jeu son encontre. Les complexes immuns peuvent, dune part, se former directement dans le milieu extravasculaire et dclencher localement la mise en uvre de nombreux mcanismes effecteurs responsables des lsions tissulaires observes ; ces derniers feront lobjet de la troisime partie de cette tude. Dautre part, les complexes immuns peuvent se former dans le compartiment circulatoire et, dans certaines circonstances qui seront discutes loccasion de la deuxime partie de ce mmoire, ces complexes pourront se fixer secondairement dans les tissus, former des dpts persistants et induire des lsions tissulaires. La formation de complexes dans le milieu extra ou intravasculaire dpend ainsi de laccs de lantigne lun et/ou lautre de ces deux compartiments. En cela, la voie de pntration de lantigne est bien sr importante. Toutefois, il semble que le ratio anticorps/antigne soit galement dterminant au cours de ce processus, et permette notamment de distinguer les phnomnes dhypersensibilit locale et systmique (70).

1. Raction dhypersensibilit de type III locale

Lorsquun organisme pralablement sensibilis par un antigne exogne y est nouveau expos, il peut rpondre par la mise en place dune rponse humorale en excs danticorps qui tend contenir lantigne en son lieu de pntration dans lorganisme. Un processus inflammatoire se dveloppe localement et peut tre lorigine de lsions tissulaires. Une telle raction est connue sous le nom de raction dArthus (70). 35

Bien quil soit rare de rencontrer des entits cliniques mdies exclusivement par un seul type dhypersensibilit, certaines sont considres comme reposant principalement sur une hypersensibilit de type III locale. Les ractions de ce type les plus classiques sont les pneumopathies allergiques extrinsques comme la maladie du poumon du fermier et la maladie des leveurs doiseaux . Ces ractions touchent plus particulirement les alvoles et les bronchioles sans entraner dobstruction des voies ariennes par opposition ce qui est observ au cours de lasthme (38). Elles surviennent cependant dans des contextes diffrents. La maladie du poumon du fermier est due une inhalation rpte de spores dactinomyctes thermophiles Saccharopolyspora rectivirgula (anciennement dnomms Micropolyspora faeni) contenus dans du foin humide et moisi, dont la prsence est gnralement associe un stockage en grange prmatur. Elle touche principalement les leveurs et constitue dans ce contexte une maladie professionnelle (207), mais peut tout autant concerner les animaux dlevages logs en table pendant lhiver et nourris de manire prolonge avec un tel foin (70). La maladie des leveurs doiseaux est due l'inhalation d'antignes contenus dans les fces doiseaux, essentiellement de pigeon, perroquet, perruche ou plus rarement de poulet, prsents en suspension dans latmosphre aprs leur desschement (38, 99). La sensibilisation des patients se traduit par le dveloppement dune rponse humorale de type secondaire, caractrise par la prsence de titres sriques levs danticorps spcifiques. La rencontre des antignes et de leurs anticorps spcifiques au sein de la paroi alvolaire conduit la formation de complexes immuns et lactivation locale de mcanismes effecteurs dltres pour lintgrit tissulaire (278). Les manifestations cliniques apparaissent dans les 5 10 heures qui suivent une exposition massive lantigne et se caractrisent par lapparition d'une toux avec dyspne, rles crpitant l'auscultation, accompagns de signes gnraux. Les lsions tissulaires observes sont celles dune alvolite aigu, associe une vasculite et lexsudation dans les espaces alvolaires. Des dpts constitus d'immunoglobulines et de complment (C3) peuvent tre mis en vidence dans les parois des alvoles pulmonaires (99, 278). Pour des animaux exposs des petites doses dantignes sur de longues priodes, des lsions fibrotiques du parenchyme pulmonaire peuvent tre observes (278). Un processus pathognique identique a t galement impliqu lors de syndrome obstructif rcurrent des voies respiratoires chez le cheval, communment appel la Pousse du cheval, qui serait d, l encore, une sensibilisation de lanimal vis--vis dantignes de moisissures lorsque gard dans une curie latmosphre riche en poussires organiques. Ce syndrome impliquerait la fois la mise en jeu dune hypersensibilit de type I et de type III (70). Cependant, latteinte 36

obstructive, qui ne caractrise pas lhypersensibilit de type III (38), nous amne confrer lhypersensibilit de type I un rle relativement important au cours du processus pathognique.

2. Raction dhypersensibilit de type III systmique

Lorsquun organisme exprime des titres sriques modrs ou faibles danticorps spcifiques dun antigne donn, une exposition antignique massive conduit la mise en uvre dune rponse humorale en excs dantignes. Ceci favorise le passage de lantigne dans le compartiment circulatoire et la formation secondaire de complexes immuns circulants. Ces complexes sont en gnral de petite taille et solubles. Ils peuvent en cela chapper au processus dpuration mis en place et se fixer au sein de la paroi de vaisseaux capillaires en des sites de prdilection tels que les glomrules rnaux, le corps ciliaire de lil, la jonction dermo-pidermique, ou encore la synoviale articulaire. Les complexes peuvent alors dclencher lactivation de voies effectrices dltres pour les tissus au sein desquels ils se sont dposs. Une des consquences des vasculites touchant les vaisseaux de petites sections est la formation de microthrombi qui peuvent obstruer la lumire capillaire et conduire la ncrose ischmique des tissus irrigus par ces vaisseaux (70). Les facteurs qui favorisent de telles localisations seront largement discuts dans la seconde partie de cette tude (voir paragraphe P2-II). Parmi les principaux, citons le rle jou par les proprits intrinsques de lantigne et de lanticorps qui constituent le complexe, lefficacit de la fonction dpuration des complexes, la prexistence de lsions endothliales qui exposent le collagne de la membrane basale sous-jacente, et des paramtres hmodynamiques comme un flux sanguin turbulent et une pression vasculaire leve, propre aux sites o sopre une filtration plasmatique (70). En cela, les entits cliniques sont particulirement polymorphes, et dpendront des organes lss. Notons cependant quune hypersensibilit de type III intervient souvent comme complication dun syndrome auto-immun (lupus rythmateux dissmin, arthrite rhumatode, polymyosites) ou dun processus infectieux persistant, particulirement chez des sujets produisant de faibles quantits danticorps en rponse la stimulation antignique. En effet, de telles circonstances favorisent une production entretenue de complexes immuns dans le compartiment circulatoire et par voie de consquence leur dpt dans les tissus (70).

37

Le lupus rythmateux dissmin (LED) est une maladie auto-immune non spcifique dorgane aux dsordres immunitaires varis et complexes. Certains sont attribuables la prsence d'autoanticorps dirigs contre des cibles cellulaires, hmaties, plaquettes, leucocytes, qui interviennent en provoquant la lyse des cellules correspondantes. Cependant les anticorps antinuclaires (principalement anti-ADN) qui caractrisent l'affection ont une cible intracellulaire qui ne leur est pas accessible directement. Leur pouvoir pathogne s'exerce essentiellement par le biais de complexes immuns forms lors de la libration dans la circulation de ces antignes par des cellules lyses (99). La formation de ces complexes conduit potentiellement latteinte de nombreux organes, dont les articulations, les reins, la peau, lorigine dun tableau clinique polymorphe. Bien que les mcanismes tiopathogniques restent encore ce jour non entirement lucids, il est communment accord au processus dhypersensibilit de type III un rle prpondrant dans la cration des lsions tissulaires observes (37). Les facteurs primaires et secondaires qui favorisent, lors de LED, la persistance des complexes immuns dans le compartiment circulatoire seront discuts en dtail dans la seconde partie (voir paragraphe P2-II.A). La maladie srique constitue un exemple historique dhypersensibilit systmique. C'est Von Pirquet et Schick qui, en 1905, suspectrent les premiers limplication des complexes immuns dans une maladie humaine, qualifie de maladie du srum , survenant la suite de linjection de srum htrologue antidiphtrique des enfants. Huit treize jours aprs l'injection sous-cutane de srum quin, certains patients dveloppaient une fivre, des ruptions cutanes, des arthralgies, une leucopnie, une lymphadnopathie et une protinurie. Les auteurs, ds cette poque, avaient suggr que cette raction pouvait tre due l'interaction des anticorps de lhte forms pendant la premire semaine avec les protines contenues dans le srum quin. Ils pensaient galement que ce phnomne pouvait aboutir au dpt de complexes dans les tissus et que ces dpts taient en cause dans les lsions observes. Cette hypothse a t confirme par de nombreuses tudes. (99) Cette maladie, dcrite essentiellement lorsque des srums htrologues taient utiliss pour prvenir le ttanos ou la diphtrie, s'observe aujourd'hui le plus frquemment avec des mdicaments qui se lient des protines sriques et forment un complexe molcule porteuse-haptne contre lequel ragissent des anticorps de lhte. Au-del des signes classiques, on peut observer des arthrites, une glomrulonphrite, une neuropathie ou une vascularite. Ces manifestations ne surviennent pas lors de la premire introduction d'un mdicament, elles demandent une dose initiale immunisante (ou sensibilisante). C'est lors de la rintroduction du mdicament que les manifestations cliniques se dveloppent en 12 36 heures. Cette maladie gurit gnralement en quelques jours aprs l'arrt du traitement en cause mais peut durer plus longtemps, notamment lorsque sont utilises des substances mdicamenteuses longue dure de vie ou effet retard. Les mdicaments les plus 38

souvent en cause tant la phnylbutazone (anti-inflammatoire non strodien), la streptomycine (antibiotique de la classe des aminosides), l'acide para-aminosalicylique (antimycobactrien), les thiouraciles (antithyrodien), les sulfamides et la pnicilline (antibiotiques). (99) Depuis les annes 1980, l'utilisation possible des anticorps monoclonaux dans le traitement de diverses maladies, notamment les cancers, a suscit un grand engouement. Cependant, les patients qui avaient reu des anticorps monoclonaux thrapeutiques produits chez la souris, fabriquaient euxmmes des anticorps dirigs contre ces anticorps monoclonaux trangers. Cette raction humaine appele rponse anticorps anti-souris (HAMA pour human anti-mouse antibody response), se manifeste par des symptmes semblables ceux de la maladie srique. On sait maintenant que l'injection d'anticorps de souris provoquait une raction de type III systmique. Les anticorps thrapeutiques taient ainsi limins avant mme d'atteindre leur cibles. Pour viter la rponse de type HAMA, les anticorps monoclonaux thrapeutiques sont humaniss ou gntiquement modifis pour ne plus tre reconnus comme antignes trangers. (155) Aujourdhui la maladie srique est rarement rencontre en clinique et constitue plutt un modle exprimental adapt ltude de lhypersensibilit de type III systmique.

3. Modles exprimentaux
Afin de pouvoir tudier le phnomne dhypersensibilit de type III, des modles exprimentaux ont t dvelopps. La raction dArthus cutane constitue le prototype des ractions dhypersensibilit locales et la maladie srique exprimentale, celui des ractions dhypersensibilit systmiques. Les mcanismes lsionnels impliqus ne seront pas dcrits ici mais seront tudis en dtails dans la troisime partie de ce manuscrit.

a.

Raction dArthus cutane

En 1903, Arthus observa que, si une premire injection sous-cutane un lapin de srum quin entrane un rythme passager, des injections rptes provoquent un dme inflammatoire local, dur, et persistant, qui volue en escarre ncrotique (219). Lhte dveloppe une raction immunitaire vis--vis des antignes que contient le srum htrologue. Dun point de vue exprimental, l'injection d'un antigne par voie intradermique ou sous-cutane un animal pralablement immunis par voie gnrale, qui dveloppe donc des taux levs d'anticorps circulants spcifiques de cet antigne, conduit la formation de complexes immuns localiss qui mdient une raction d'Arthus cutane

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aigu (155). Une raction dmateuse et rythmateuse accompagne de lsions purpuriques se dveloppe en quelques heures, atteint son maximum entre 4 et 10 heures, puis sattnue et disparait gnralement aprs 48h (99, 172). L'examen histologique rvle la prsence de neutrophiles adhrant l'endothlium vasculaire, puis migrant dans les tissus au niveau du site de dpt des complexes immuns (155). On observe galement une thrombose des petits vaisseaux avec agrgation intravasculaire des plaquettes et des hmorragies locales, suivie d'une ncrose dans les formes les plus graves (99, 172). Lintensit de la raction dpend de la quantit dAg injecte et du rapport anticorps/antigne. Les complexes forms en excs d'anticorps ou en excs d'antignes produisent gnralement une raction moins svre que les complexes insolubles forms quivalence (172). Par ailleurs, la raction dArthus cutane peut tre provoque passivement par linjection dimmunoglobulines par voie intraveineuse suivie d'une injection locale de l'antigne correspondant. Une raction d'Arthus inverse a t dcrite, dans celle-ci on injecte par voie intradermique un anticorps aprs avoir inject par voie systmique l'antigne correspondant. Le rsultat est voisin de celui de la raction directe (219).

b.

Maladie srique exprimentale

Linjection intraveineuse de protines xnogniques (ou htrologue), par exemple lalbumine bovine (BSA pour bovine serum albumin), chez le lapin, peut entrainer lapparition de manifestations cliniques varies, lies au dpt de complexes immuns dans les vaisseaux. Lorsque les injections sont rptes, on peut assister la prennisation de la maladie. On parle alors de maladie srique chronique. (38)

i. Maladie srique aigu

Une maladie srique aigu peut tre produite par une injection intraveineuse unique un lapin d'une forte dose de BSA, purifie et radiomarque (J0). Dans un premier temps, la concentration srique de l'antigne inject s'quilibre puis commence dcrotre lentement selon une cintique correspondant au catabolisme normal des protines (J3-J6). Cette phase de dcroissance lente est suivie partir du 7me jour environ d'une acclration de la clairance de l'antigne. Cette seconde phase (J7-J13) correspond au dveloppement de la rponse humorale aboutissant la production d'anticorps et la formation de complexes-immuns en excs d'antignes. (99)

40

Cest pendant cette phase dimmunocomplexmie que surviennent les diffrentes manifestations viscrales, plus particulirement rnales, cutanes et articulaires (38). En effet, de petits complexes solubles se forment et se dposent dans les tissus, notamment dans les glomrules rnaux, o ils sont responsables d'une glomrulonphrite aigu spontanment rsolutive en 2 3 semaines. L'examen de coupes histologiques du rein et des vaisseaux met en vidence des dpts constitus d'antignes, d'anticorps et de composants du complment ainsi que linfiltration de cellules inflammatoires (polynuclaires neutrophiles puis macrophages). La maladie persiste aussi longtemps que des complexes immuns sont dtectables dans le compartiment circulatoire (99). Les complexes immuns forms sont dabord dtects dans la circulation en quantits croissantes, puis en quantits dcroissantes lorsque la totalit des antignes injects est prsente sous forme complexe. Au fur et mesure que les anticorps sont produits, lquilibre antigne/anticorps se dplace et des complexes de plus grande taille sont forms. Ces derniers sont limins plus activement de lorganisme (172). Les anticorps ne sont finalement dtectables sous forme libre dans le srum que vers le 14me jour (Figure 6).

Figure 6 : Reprsentation schmatique des vnements survenant au cours de la maladie srique aigu induite chez le lapin, daprs (155)

41

ii. Maladie srique chronique

La maladie srique peut se prolonger au-del de quelques jours dimmunocomplexmie si les injections dantignes sont rptes. De nouveaux complexes sont alors forms et peuvent avoir une action pathogne. Les lsions tissulaires observes sont de plus grande intensit et touchent plus particulirement les glomrules rnaux. Selon les protocoles exprimentaux mais aussi de faon imprvisible selon les animaux, trois types de situations peuvent tre observs. Certains animaux ne forment pas danticorps et ne dveloppent pas de glomrulonphrite. La formation de complexes constitue en effet une condition sine qua non ltablissement de lsions tissulaires. Parmi les animaux rpondeurs, seuls les animaux produisant de faibles quantits danticorps dveloppent une glomrulonphrite chronique, probablement parce queux seuls prsentent des concentrations danticorps susceptibles de donner avec lantigne inject de faon rpte des complexes immuns nphrotoxiques en quantit importante et surtout de faon durable. Chez ces animaux, la faible rponse anticorps, confronte une charge maintenue en antigne par des injections rptes, conduit la formation de complexes dans une situation dexcs dantignes et qui seront ainsi plutt solubles et de petite taille. Les animaux fortement rpondeurs, quant eux, ne sont pas atteints. (38) Ici encore, lintensit de la raction dpend de la quantit dantigne injecte, et du rapport anticorps/antigne. Mais, par opposition la raction dArthus cutane, au cours de la maladie srique exprimentale les complexes forms lquivalence sont rapidement purs de la circulation et produisent gnralement une raction moins svre que les petits complexes solubles forms en excs dantignes. A cause de leur petite taille, ces complexes ne sont limins que lentement par le systme phagocytaire, et persistent ds lors dans la circulation (172).

La simple fixation de lanticorps sur son antigne ne permet pas elle seule son limination de lorganisme. Pour tre efficaces les anticorps doivent non seulement reconnatre lantigne mais aussi susciter des fonctions effectrices qui limineront lantigne de lorganisme.

42

II.

Fonctions mdies par les complexes immuns

Alors que les rgions variables dun anticorps tablissent la liaison lantigne, la rgion constante de la chane lourde est en mesure dinteragir avec dautres protines ou cellules. Un aperu des fonctions effectrices essentielles mdies par ces interactions est prsent dans les paragraphes suivants. Ces fonctions confrent la rponse humorale et plus prcisment aux anticorps qui en sont les produits un rle clef dans la protection de lorganisme.

A.

Lopsonisation de lantigne

Des protines, appeles rcepteurs pour le fragment Fc (ou FcR, pour Fc receptor) sont capables de se lier la rgion constante des immunoglobulines. Ces rcepteurs sont prsents la surface de nombreux types cellulaires parmi lesquels les macrophages et des neutrophiles. La liaison simultane des fragments Fc de diffrents anticorps, complexs une mme cible, leurs rcepteurs spcifiques prsents la surface des macrophages et des neutrophiles, dclenche la transduction dun signal activateur qui conduit la phagocytose du complexe immun. Au sein de la cellule phagocytaire, lantigne devient la cible dune dgradation enzymatique qui fera lobjet dune description plus approfondie loccasion de la troisime partie de cette tude (voir P3-II.B.2 et P3-II.C.3). Cest ce mcanisme de facilitation de la phagocytose par le biais des anticorps que lon qualifie dopsonisation. (38, 155)

B.

La cytotoxicit mdiation cellulaire dpendante des anticorps

Lorsquun anticorps, pralablement fix une cellule cible, se lie au FcR de certains types cellulaires, particulirement les cellules NK (pour natural killer), mais aussi les macrophages, les neutrophiles et les osinophiles, lactivation cellulaire qui en rsulte peut provoquer la lyse de la cellule cible (Figure 7). Ce processus est appel ADCC (pour antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity. Ainsi, bien que les cellules cytotoxiques ne soient pas spcifiques dun antigne donn, la spcificit dun anticorps les dirige vers des cellules-cibles spcifiques, portant leur surface lantigne cibl. Lorsque ces cellules cytotoxiques se lient une cellule-cible par le biais du FcR, elles deviennent mtaboliquement plus actives. Il sensuit une synthse accrue des enzymes lytiques contenues au sein de leurs lysosomes ou de leurs granules cytoplasmiques dont la libration conduira la lyse de la cellule-cible. Par ailleurs, les cellules NK et les osinophiles contiennent tous deux de la perforine 43

dans leurs granules cytoplasmiques, ainsi, la cytolyse mdie par ces cellules pourrait impliquer une lsion de la membrane de la cellules-cible selon un mcanisme semblable celui mis en uvre par les lymphocytes T cytotoxiques. (155) Le processus dADCC est largement mis en cause dans le cadre de lhypersensibilit de type II et intervient dans certaines circonstances particulires au cours du processus dhypersensibilit de type III. En effet, on comprend aisment que la fixation de complexes immuns au sein de tissus pourra induire par ce mcanisme des lsions dommageables lintgrit fonctionnelle tissulaire. Lactivation des diverses cellules effectrices reste cependant conditionne par leur accs au site de dpt des complexes (voir paragraphe P2-II.B). Figure 7 : Reprsentation schmatique des ractions de cytotoxicit cellulaires dpendantes des anticorps, daprs (155)

C.

Lactivation du complment

Les IgM, ainsi que la plupart des sous-classes dIgG (IgG1, IgG3 et dans un moindre mesure IgG2), sont en mesure dactiver le systme du complment avec pour consquence le dclenchement dune cascade dactivation enzymatique dont les produits biologiquement actifs auront de nombreuses fonctions parmi lesquelles le dclenchement et lamplification des ractions inflammatoires, lattraction des cellules phagocytaires par chimiotaxie, la lyse cellulaire par la formation du complexe 44

dattaque membranaire et lopsonisation des complexes immuns (voir paragraphe P3-I.D). Les voies par lesquelles les immunoglobulines complexes sont en mesure dactiver ce systme feront lobjet dune tude ultrieure (voir paragraphe P3-I.B). (155) Un important produit driv de lactivation du complment est le composant C3b, qui se lie de faon non spcifique aux complexes immuns (au niveau du domaine CH2). De nombreux types cellulaires, comme les rythrocytes (communment appels globules rouges ), les macrophages chez les primates et les thrombocytes (communment appels plaquettes sanguines ) chez les mammifres autres que les primates, possdent leur surface des rcepteurs du C3b (nomms rcepteurs du complment de type 1 ou CR1) et peuvent ainsi se lier aux complexes immuns auxquels le C3b a adhr. Comme nous le verrons au cours du paragraphe P2-0 intitul Epuration des complexes immuns , la liaison des complexes opsoniss par le C3b (CI-C3b) aux CR1 des rythrocytes, chez les primates, assure leur acheminement jusquaux organes dpuration que sont le foie et la rate o les macrophages rsidants les liminent. Au sein de ces organes, la fixation des CI-C3b aux macrophages via leurs CR1 membranaires conduit la phagocytose des complexes (Figure 8). En cela, lactivation du complment joue un rle majeur dans lpuration des complexes immuns. (155) Figure 8 : Opsonisation des complexes par le C3b chez lhomme, daprs (155)

Notons que le caractre complment-dpendant de la fixation des complexes immuns aux rythrocytes a t dmontr de la manire suivante : il a t constat quun dficit en complment induit chez les primates, par injection intraveineuse de CVF (pour cobra venom factor) ou encore linhibition de lactivation du complment par injection de hautes doses dhparine, qui fixe notamment C3b et C4b empchant ainsi la formation des C3 convertases alterne et classique, conduit la suppression de la fixation des complexes immuns aux rythrocytes in vivo (93, 170, 293).

45

A loccasion de cette partie, nous avons prsent les proprits des complexes immuns qui, dans la suite de cette tude, se rvleront dterminantes dans le pouvoir pathogne potentiel des complexes forms. La taille du rseau Ag-Ac, de mme que les nombreux facteurs qui linfluencent, sont de premire importance. De plus, dans le cadre de dfinition de lHSIII, les CI sont forms partir dAg libres. Par consquent, le lieu de formation des CI dpend de la localisation de lAg cibl, elle-mme fonction de la voie de pntration de cet Ag dans lorganisme ainsi que de la rponse humorale mise en jeu son encontre. En cela, les concentrations relatives en antignes et en anticorps, dterminant notamment la taille des CI forms, semblent influer sur lorientation locale ou systmique du processus dHSIII. Par ailleurs, pour tre efficaces, les anticorps synthtiss doivent reconnatre lantigne mais aussi dclencher lactivation de voies effectrices conduisant son limination de lorganisme. Leur intgration au sein dun unique processus dpuration rend ce dernier particulirement efficace dans llimination des CI forms dans le compartiment circulatoire. Compte tenu du danger que reprsentent les CI pour lorganisme, on comprend que le bon fonctionnement de ce processus dpuration constitue un pr-requis pour une prvention efficace des maladies mdies par le dpt des complexes immuns. (cf. Bilan en Annexe 1.A p. 197) Ainsi, dans la partie suivante, nous raliserons une tude approfondie des mcanismes mis en jeu dans lpuration des complexes circulants. Nous prciserons tout dabord quels sont les organes au sein desquels ce processus est mis en uvre puis les voies dacheminement des complexes en ces lieux. Nous insisterons alors sur le rle central du systme du complment. Pour chacun de ces dveloppements, des diffrences majeures existent entre espces et seront voques. Cependant, les proprits intrinsques des complexes, telles que leur taille, la charge et la classe des anticorps qui les constituent, dont nous venons de rappeler les lments essentiels au cours de cette premire partie, ainsi que de nombreux paramtres tissulaires locaux, favorisent leur persistance dans le compartiment circulatoire et leur dpt secondaire dans certains tissus. Ces aspects seront discuts dans un second temps (voir paragraphe P2-II).

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DEUXIME PARTIE

DEVENIR DES COMPLEXES IMMUNS AU SEIN DE LORGANISME

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I. Epuration des complexes immuns A. Organes impliqus

Chez les primates, lpuration des complexes immuns repose sur lactivit phagocytaire des macrophages rsidants du foie et de la rate. Cependant, dimportantes diffrences interspcifiques dans les organes impliqus ont t dmontres.

1. Rle du foie et de la rate chez les primates

Dun point de vue exprimental, des complexes de
125

I-BSA/anti-BSA ont t perfuss chez des

babouins pendant une priode de 120 secondes (52). Par la suite, du sang a t prlev dans les veines rnale, porte et hpatique, et la quantit de complexes immuns lis aux globules rouges a t value par la mesure de la radioactivit de lchantillon. Les valeurs taient semblables dans les veines rnales et la veine porte ainsi que dans le sang artriel. Cependant, les complexes sont rests pratiquement absents du sang de la veine hpatique, ce qui indique que les complexes lis aux rythrocytes ont t limins durant un simple passage travers le foie (52) (Figure 9). Figure 9 : Elimination des complexes immuns dans le foie, daprs (52) Lgende de la Figure 9 : Echantillons sanguins prlevs dans lartre rnale hpatique et la veine hpatique . , la veine rnale , la veine porte

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Dautres exprimentations ont abouti des conclusions analogues (121). Parmi les sondes utilises, nous pouvons citer les suivantes : Des rythrocytes autologues, recouverts danticorps de lisotype G, ont t prpars de manire ce que la capacit de ces derniers activer le systme du complment soit faible voire absente (126). Ces sondes sont piges lorsque survient une interaction entre le domaine Fc des anticorps avec le rcepteur pour le fragment Fc des cellules du systme rticuloendothlial de la rate (lorsque le nombre danticorps par rythrocyte est faible soit approximativement de 2.500 IgG fixes par rythrocyte) ou du foie et de la rate (lorsque le nombre danticorps par rythrocyte avoisine les 10.000 IgG par rythrocyte). Les monocytes circulants peuvent galement fixer ces sondes via leurs rcepteurs pour le fragment Fc. Cependant leur rle dans lpuration des complexes immuns prsents dans la circulation sanguine est trs probablement faible (19, 293). Des complexes immuns prforms ont galement t utiliss. Ces sondes sont plutt considres comme solubles par opposition aux complexes immuns particulaires que constituent les rythrocytes sensibiliss. Ces sondes peuvent tre pures de la circulation la fois par le biais des rcepteurs pour le fragment Fc comme par les rcepteurs du complment prsents la surface des cellules phagocytaires. (121) Des antignes ont de plus t injects chez des patients immuniss de manire active ou passive. Les complexes immuns forms dans ces conditions semblent plus reprsentatifs de la situation physiologique. (121) Ces expriences ont pu mettre en lumire le rle central du foie et de la rate dans lpuration des complexes immuns prsents dans la circulation sanguine des primates. De plus, le foie, dont le volume est environ dix fois suprieur celui de la rate, constitue, chez les primates, lorgane principalement impliqu dans le prlvement sanguin de ces complexes (52). Ces expriences ont, de plus, permis de dgager des pistes concernant les mcanismes intervenant dans le prlvement des complexes par les macrophages rsidant dans ces organes. En effet, les rythrocytes sensibiliss avec un faible taux dIgG semblent faire exception puisque leur puration est presque exclusivement ralise par la rate. Cette plus grande capacit de la rate capter ces complexes immuns semble sexpliquer par le passage relativement lent de la circulation sanguine travers la pulpe rouge, par comparaison au flux rapide et turbulent traversant les sinusodes hpatiques (121). Ainsi, lorsque des complexes immuns prsentent une faible avidit pour les 50

rcepteurs des cellules phagocytaires hpatiques, et chappent ainsi au processus dpuration qui sopre dans cet organe, ils peuvent tre capts par la rate. A ce stade, nous pouvons remarquer que ltablissement dune interaction de forte avidit pour les rcepteurs des cellules phagocytaires hpatiques ncessite lintervention dun grand nombre de fragments Fc disponibles ou bien lopsonisation des complexes par les composants activs du complment (C3b). Le mcanisme principal du prlvement des complexes immuns par les cellules phagocytaires semble reposer sur linteraction du domaine Fc des anticorps avec les rcepteurs pour le fragment Fc ports par les cellules phagocytaires (FcR pour les complexes constitus dIgG, FcR pour les complexes constitus dIgA) comme reprsent sur la Figure 10. Figure 10 : Reprsentation schmatique du processus dpuration des complexes immuns dans le foie, daprs (121)

En effet, une inactivation des rcepteurs pour le fragment Fc a pu tre induite chez le babouin par linjection dagrgats dIgG directement dans la veine porte (120). Ceci a eu pour consquence de supprimer la capacit de prlvement des complexes immuns par le foie. Cependant, plusieurs 51

rcepteurs pour le fragment Fc des IgG ont t identifis la surface des macrophages (FcRI, FcRII et FcRIII), prsents notamment dans le foie. Le rle jou par chacun de ces rcepteurs au cours du processus dpuration ne semble pas tre le mme. Ainsi, alors que les FcRI et FcRII semblent intervenir dans larrimage des complexes la surface des macrophages, le blocage slectif de chacun de ces deux rcepteurs na pas conduit une altration significative du prlvement des complexes (80). En revanche, linjection danticorps visant les rcepteurs FcRIII chez le chimpanz a eu pour consquence la suppression du prlvement hpatique des complexes immuns (154). Ainsi, linteraction Fc-FcRIII semble constituer une condition ncessaire une fixation initiale efficace des complexes immuns la surface des macrophages rsidants. Par ailleurs, les FcR nagissent pas seuls. Des animaux ont t traits au facteur de venin de cobra (293). Celui-ci conduit linactivation du systme du complment. Ainsi, chez ces animaux, les complexes immuns forms nont plus la capacit dactiver le systme du complment et ne sont plus, dans ce contexte, recouverts de C3b. En consquence, les rythrocytes ne fixent plus les complexes immuns leur surface. Dans ces conditions, on s'attendrait ce que les complexes immuns persistent dans la circulation, mais c'est l'inverse qui se produit : les complexes sont rapidement prlevs de la circulation par le foie. En revanche, ce prlvement semble transitoire puisque les complexes sont ensuite nouveau librs par le foie dans la circulation. Ils peuvent alors se dposer dans des tissus comme la peau, les reins et les poumons, o ils peuvent induire des ractions inflammatoires (293). La perfusion de plasma frais contenant du complment reconstitue les capacits d'puration des complexes. Il semblerait donc quun dficit en complment ne permette quun arrimage transitoire des complexes immuns aux macrophages hpatiques. Dautres expriences ont permis de confirmer ces observations. Lpuration de complexes immuns solubles a t tudie en utilisant des complexes radiomarqus toxine/antitoxine ttanique (247). Des complexes nus ou pr-opsoniss in vitro dans du srum autologue ont t injects des sujets sains et des patients hypocomplmentmiques. Des rsultats analogues ceux prsents plus haut sont obtenus. Ainsi, les auteurs ont observ une disparition initiale rapide des complexes circulant chez les patients hypocomplmentmiques. Cette phase rapide initiale est supprime lorsque des complexes pr-opsoniss, et fixs in vitro des rythrocytes autologues normalement pourvus en CR1, sont injects (68). De plus, un nouveau modle a t dvelopp pour analyser lpuration des complexes immuns solubles en utilisant des complexes HBsAg/anti-HBsAg (pour hepatitis B surface antigen) (68). Lpuration initiale des complexes du sang de patients hypocomplmentmiques a t plus rapide (t1/2 = 2,15 min) que chez les individus sains (t1/2 = 5,15 min). Chez les patients 52

hypocomplmentmiques, lors de LED, il y a eu cependant jusqu 12% des complexes immuns relchs dans la circulation par le foie 30 40 minutes aprs leur injection. Les courbes dpuration classique sont reprsentes sur la Figure 11. Lanalyse de ces courbes indique que cette phase rapide initiale de prlvement des complexes tait bien due un prlvement rapide et massif des complexes par le foie. Par opposition, et contre toute attente, le prlvement des complexes effectu par la rate est fortement diminu chez les patients hypocomplmentmiques. Figure 11 : Epuration des complexes immuns dans le foie et la rate chez des sujets sains et hypocomplmentmiques, daprs (68)

53

Les observations prsentes ci-dessus nous amnent formuler le bilan suivant : les FcR, et plus particulirement le FcRIII, sont ncessaires la fixation initiale des complexes immuns la surface des macrophages hpatiques. Cependant, les FcR nagissent pas seuls. En effet, le processus dpuration ncessite lintervention de rcepteurs pour le complment qui permettront, dans le foie, linternalisation des complexes fixs, et, dans la rate, tant la fixation que linternalisation des complexes. Cette internalisation constitue la premire phase du processus de phagocytose ralis par les macrophages hpatiques et splniques. Ainsi, lintervention de rcepteurs pour le complment semble ncessaire la mise en uvre dun transfert durable des complexes immuns prsents la surface des rythrocytes vers la surface des cellules phagocytaires. Le mcanisme de prlvement des complexes immuns, mis en uvre par les macrophages rsidants, via leurs rcepteurs pour le complment (CR1, CR3 et CR4), sera dvelopp plus loin (voir paragraphe P2-I.B.3). On pourra noter, par ailleurs, que dans de nombreuses situations, laffinit des cellules phagocytaires pour lantigne constituant le complexe peut aussi contribuer au prlvement hpatique des complexes immuns (53, 229). A titre dexemple, lpuration de complexes immuns constitus dantignes possdant leur surface des motifs glycosyls conduit la participation de rcepteurs spcifiquement dirigs contre ces rsidus glucidiques, prsents la surface des hpatocytes. De mme, la protine de liaison du mannose (MBL pour mannose-binding lectin) pourrait jouer un rle important dans lpuration des antignes prsentant certains rsidus glucidiques leur surface (282). Dans ces conditions, bien que lantigne puisse tre limin seul par des mcanismes immunitaires appartenant au domaine inn (ou non spcifique), son association lanticorps, produit de limmunit spcifique, favorise son limination rapide de la circulation par opsonisation. Chez lhomme et les autres primates, les complexes immuns sont donc purs dans le foie et la rate. Cependant, ltude du mcanisme dpuration des complexes mis en uvre chez le porc a permis dtablir des diffrences significatives avec le mcanisme admis chez les primates.

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2. Rle des poumons chez le porc

La cintique dpuration des complexes a t suivie exprimentalement par lutilisation de

complexes immuns radiomarqus, HBsAg/anti-HBsAg (69). Il a t montr que le prlvement des complexes immuns au sein des organes, chez le porc, est diffrent de celui observ chez les primates. En effet, chez le porc, des complexes immuns ont t prlevs par le foie (36% des complexes injects prlevs t = 10 min) mais aucun prlvement significatif na t constat au sein de la rate. Par ailleurs, les poumons se sont rvls tre un important site dpuration des complexes immuns (43% t = 10 min, Figure 12) (69). En comparaison, dautres tudes utilisant des complexes immuns similaires chez des patients humains tmoins ont montr un taux de prlvement des complexes injects de 41% dans le foie et de 25% dans la rate t= 10 min. En revanche, aucun prlvement pulmonaire na t observ chez les humains (66). Des tudes sintressant lpuration de complexes immuns injects chez les primates autres que lhomme ont aussi montr que le foie et la rate sont les sites majeurs de mtabolisation et que le prlvement pulmonaire nintervient pas un degr significatif daprs les auteurs (52, 69). Par ailleurs, le prlvement des complexes immuns chez le porc, suite une injection intra-artrielle, na pas montr de diffrence significative avec celui observ lors dinjection intraveineuse (Figure 13). Ceci montre que le prlvement des complexes immuns dans le poumon nest pas une consquence de lordre dans lequel les complexes immuns traversent les organes (le foie tant perfus avant les poumons lors dune injection intra-artrielle au niveau de laorte et inversement lors dune injection intraveineuse au niveau de la veine cave crniale), mais bien de la capacit intrinsque de ces derniers intervenir dans la fonction dpuration des complexes immuns circulants. Le prlvement des complexes immuns dans les organes montre donc dimportantes variations interspcifiques. Ainsi, le foie et la rate constituent les principaux sites de prlvements chez les primates mais aussi le lapin, le chien, le rat, le cochon dInde, la souris, la tortue et le poulet (300). Les poumons semblent jouer un rle majeur chez le porc et significatif chez le chat, la chvre, le mouton et la vache (69).

55

Figure 12 : Quantification de llimination des complexes immuns dans les poumons et le foie suite une injection intraveineuse, au niveau de la veine cave crniale, de complexes radiomarqus chez le porc, daprs (69)

Figure 13 : Quantification de llimination des complexes immuns dans les poumons et le foie, suite une injection intra-artrielle, au niveau de laorte, de complexes radiomarqus chez le porc, daprs (69)

56

Par ailleurs, chez les porcs, 16% de la surface endothliale capillaire pulmonaire sont recouverts de macrophages intravasculaires, correspondant 14.103 macrophages par mm3 de parenchyme. Ces chiffres sont comparer aux 15.103 21.103 cellules de Kupffer par mm3 de parenchyme hpatique chez le rat (300). De plus, la totalit du volume sanguin passe travers les poumons alors que le foie nen reoit que 25 30%. Ces lments sont en accord avec le rle central jou par les poumons dans lpuration des complexes immuns chez le porc. Ainsi, lpuration des complexes immuns ncessite leur acheminement jusqu ces organes. Le systme du complment assure cet acheminement par plusieurs mcanismes et joue ainsi un rle majeur dans lpuration des complexes immuns.

B.

Le rle du systme du complment

Le complment ragit avec les complexes immuns afin dinhiber leur prcipitation, de solubiliser les agrgats et de promouvoir la fixation des complexes aux rcepteurs du complment ports par les rythrocytes. Ces ractions permettent dviter une accumulation localise des complexes immuns au sein des tissus en favorisant et en maintenant leur solubilit. Les complexes peuvent alors tre achemins vers leurs sites dpuration par simple diffusion depuis le site de leur formation et surtout par leur fixation aux rcepteurs du complment ports par les rythrocytes chez les primates (CR1). Le rcepteur CR1 diminue le potentiel pro-inflammatoire des complexes immuns, dune part, via leur transport dans la circulation sanguine jusquaux cellules du systme des phagocytes mononucls prsentes dans le foie et la rate, et, dautre part, du fait de son action en tant que cofacteur du facteur I qui catabolise C3b en iC3b et permet le transfert des complexes aux cellules phagocytaires qui possdent des rcepteurs pour liC3b leur surface (CR3, CR4). En cela, lacheminement des complexes immuns par les rythrocytes jusqu leurs sites dpuration ne constitue pas une condition sine qua non la fixation et linternalisation des complexes par les cellules phagocytaires hpatiques et splniques. La fixation des complexes la surface des rythrocytes prvient surtout linteraction des complexes circulants avec dautres types cellulaires (thrombocytes, polynuclaires neutrophiles), qui sen trouveraient activs, et leur dpt dans les tissus. Lefficacit du processus dpuration est en cela nettement amliore.

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1. Inhibition de la prcipitation des complexes immuns

Lorsque des anticorps sont mis en prsence de molcules qui prsentent de manire accessible les pitopes spcifiquement reconnus par ces anticorps, il se forme un rseau tridimensionnel de complexes immuns dont la solubilit diminue avec la taille jusqu la prcipitation. Ce rseau ne peut cependant exister quen prsence dantignes pitopes multiples et danticorps multivalents. La prcipitation de complexes immuns constitus dIgG1, IgM et IgA a t observe exprimentalement (139). Celle-ci est rapide et atteint en gnral son maximum en une heure. Par opposition, les IgG2 prcipitent extrmement lentement avec un maximum atteint au-del de 24 heures, sans que les auteurs naient pu en identifier la cause. Lampleur de la raction de prcipitation na pas t significativement affecte par lisotype ou laffinit des anticorps utiliss lexception possible des IgG2 qui ont t cartes de ltude (139, 205). Exprimentalement, la raction de prcipitation est inhibe lorsquanticorps et antignes sont mis en prsence dans du srum humain dont la temprature est fixe 37C (240). Lajout dEDTA, comme le chauffage du srum jusqu une temprature de 56C, conduit nouveau la formation de prcipits. En effet, ces deux circonstances ont pour consquence linactivation du systme du complment (68). Les complexes immuns, forms en prsence dun systme du complment actif, sont solubles et incorporent leur structure de nombreuses protines du systme du complment. Cest la fixation de fragments C3, et plus prcisment de C3b (lun des produits du catabolisme de C3), qui est ncessaire au maintien de la solubilit des complexes immuns (68). Le mcanisme par lequel le complment, en particulier C3b, modifie la solubilit des complexes immuns, est non entirement lucid. Deux explications sont pour autant proposes : (1) C3b diminue la valence de lantigne Lorsque le complment est activ, des molcules de C3b se fixent la fois sur les anticorps mais aussi sur les antignes qui constituent le complexe (270). Ainsi, lincorporation de molcules de C3b la surface des antignes prsents au sein du rseau se ferait de manire occuper des sites potentiels dinteractions avec les anticorps. Ceci conduirait une diminution de la valence des antignes et une prvention de lextension du rseau.

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Cette hypothse se fonde sur les travaux de Pangburn et al. (217). Ces derniers ont montr que la capacit dimmunoglobulines G diriges contre des rythrocytes de lapin se fixer sur leurs cibles est inhibe par la prsence de C3b la surface des rythrocytes cibls. Il a t dmontr que le degr dinhibition est proportionnel au nombre de molcules de C3b portes par les rythrocytes. A partir de ces observations, les auteurs ont conclu que les molcules de C3b sont en mesure de masquer des pitopes prsents la surface des rythrocytes (217). (2) C3b limite linteraction des fragments Fc entre eux Lincorporation de C3b, la surface des anticorps cette fois, interfrerait dans les interactions qui soprent entre les fragments Fc. Compte tenu du fait que ces derniers favorisent lagrgation des complexes immuns (188), la stabilit du rseau sen trouverait fortement diminue et lincorporation de molcules danticorps et dantignes supplmentaires amnerait la rupture de liaisons dj tablies. Linhibition de la prcipitation survient en trois tapes (240, 241, 243) : (1) La protine C1 retarde lagrgation des complexes immuns En effet, la fixation de cette protine aux complexes immuns rduit les interactions entre les fragments Fc (194, 244). Cependant, cet effet est relativement transitoire du fait de laction de C1inh (pour C1 inhibitor). Le C1 est un complexe macromolculaire constitu du C1q et de deux molcules de C1r et de C1s maintenues ensemble en un complexe C1qr2s2. Le C1-inh se fixe au complexe C1 et entrane la dissociation du C1q rendant le complexe inactif. La prcipitation est alors favorise (68). Leffet du C1-inh survient rapidement et ressemble celui caus par lajout dEDTA la solution. LEDTA est un chlateur du calcium qui empche lassemblage du complexe C1. (2) La formation de la C3-convertase permet la production de C3b Le complexe C1 activ entrane le clivage de C4 et la libration de C4b. La fixation de C4b aux complexes immuns a un effet discret sur lentretien de la solubilit des complexes mais permet surtout lassemblage de la C3-convertase de la voie classique dactivation du systme du complment (Figure 14) (241). Celle-ci clive le C3, gnrant le C3b, qui se fixe aux complexes immuns dont la solubilit est ainsi entretenue. Exprimentalement, lactivation de C3 est une condition sine qua non linhibition de la prcipitation des complexes immuns. Ainsi, un dficit srique en C3 ne permettra pas la mise en uvre de cette raction. De manire similaire, des dficits sriques en C2 ou C4 ne permettront pas la formation de la C3-convertase de la voie classique dactivation du systme du complment (241, 243).

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(3) La fixation de C3b permet lamplification de lactivation du systme du complment Cette tape est caractrise par la formation de complexes dune taille encore infrieure et correspond probablement la fixation de molcules supplmentaires de C3b sur le rseau antigneanticorps (68, 241). Cette phase damplification pourrait reposer sur lintervention de la voie alterne dactivation du complment. En effet, les molcules de C3b pralablement dposes la surface de certains anticorps constitutifs du rseau (lors de la phase prcdente) sont en mesure dinteragir avec le facteur B et de conduire la formation de la C3 convertase de la voie alterne (Figure 14). Celle-ci clive alors de nouvelles molcules de C3 pour librer du C3b. Ces derniers peuvent leur tour sintgrer au rseau pour en maintenir la solubilit. La participation de la voie alterne au cours de cette tape damplification rend donc le processus dinhibition de la prcipitation des complexes particulirement efficace. Figure 14 : Schma bilan des voies dactivation classique et alterne du systme du complment, daprs (155)

60

Ainsi, les composants initiaux de la voie classique dactivation du complment sont absolument ncessaires linhibition de la prcipitation des complexes immuns. En revanche, les composants forms au cours des tapes ultrieures de lactivation du systme du complment nont pas deffet significatif sur linhibition de la prcipitation (243). La voie alterne, quant elle, semble jouer un rle secondaire mais participe tout de mme au maintien des complexes immuns sous forme soluble (195). Comme illustr sur la Figure 15, les individus dficients en composant C4, i.e. en labsence dune voie classique dactivation du complment fonctionnelle, expriment une capacit dinhibition de la prcipitation des complexes fortement diminue. La prcipitation reste toutefois plus lente quen labsence totale dun systme du complment fonctionnel mettant en vidence le rle secondaire mais existant de la voie alterne dans linhibition de la prcipitation. Par la suite, malgr une voie dactivation classique non fonctionnelle, les complexes insolubles forms sont nouveau solubiliss, comme le montre linversion de la pente de la courbe de prcipitation. Ceci figure le rle majeur de la voie alterne dans la solubilisation dagrgats prforms comme nous allons le voir dans le paragraphe I.B.2 suivant. Les voies dactivation classique et alterne du systme du complment feront lobjet dune tude plus approfondie dans le paragraphe I.B de la troisime partie de ce mmoire.

Figure 15 : Prcipitation des complexes immuns dans le srum dindividus sains, dficients en composant C4 ou en labsence dun systme du complment fonctionnel, daprs (214)

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Nous pouvons noter, ce stade, que lisotype de lanticorps qui constitue le complexe immun joue donc un rle important dans lefficacit de linhibition de la prcipitation. En effet, seules les immunoglobulines disotype G ou M sont en mesure dactiver le systme du complment par la voie classique. Les IgA, quant elles, nen sont pas capables (139). Par ailleurs, une inhibition plus efficace de la prcipitation des complexes immuns constitus dIgG1 et dIgM a t observe lorsque les complexes sont forms en excs danticorps ou lquivalence par rapport ceux forms en excs dantignes (139). En effet, les prcipits forms dans ces conditions prsentent de nombreux sites disponibles pour lactivation du systme du complment. Enfin, il a t montr que les facteurs rhumatodes interfrent avec le processus dinhibition de la prcipitation (8, 185). En effet, la consommation de facteur du complment par un complexe immun ne correspond pas ncessairement sa capacit fixer le C3b. A titre dexemple, les IgM et IgG complexes au sein des facteurs rhumatodes consomment rapidement le complment mais ne semblent pas fixer le C3 efficacement (203). De manire similaire, les complexes ADN/IgM antiADN consomment plus de complment mais fixent moins de C3 que les complexes ADN/IgG anti-ADN (272).

2. Solubilisation des complexes immuns

Un chec dans linhibition de la prcipitation des complexes immuns conduit la formation dagrgats insolubles. Miller et Nussenzweig (183) ont montr que des agrgats prforms peuvent tre dissous par le complment. La solubilisation des prcipits est associe ltablissement de liaisons covalentes entre les complexes immuns et le C3b (68). Le mcanisme par lequel la fixation de C3b interfre avec les nombreuses forces qui stabilisent lagrgat reste cependant incompltement lucid. Il semble, toutefois, que la rupture de la liaison primaire antigne-anticorps par le complment soit ncessaire (140).

a.

Rupture de la liaison primaire antigne-anticorps

Czop et Nussenzweig (63) ont montr que les complexes immuns forms avec des anticorps de faible affinit sont solubiliss plus facilement que ceux forms avec des anticorps de forte affinit. En effet, cette observation a t confirme plus tard par les travaux de Johnston et al. (139) qui ont mis en vidence une relation inversement proportionnelle entre laffinit de lanticorps et lampleur de la solubilisation (Figure 16).

62

Figure 16 : Etude de la solubilisation des complexes immuns forms en excs dantignes ( gauche), lquivalence (au centre), et en excs danticorps ( droite), en fonction de laffinit des anticorps, daprs (139)

Dautre part, des complexes immuns prsentant une liaison antigne-anticorps covalente ont t utiliss. Ces complexes conservent leur entire capacit dactivation du systme du complment et ne diffrent donc aucunement, sur ce point, des complexes immuns forms de liaisons non covalentes antigne-anticorps. Cependant, les complexes immuns covalents, bien que placs dans les mmes conditions et les mmes proportions que les complexes immuns non-covalents, ne sont pas ou trs peu solubiliss (140). De manire plus prcise, quatre anticorps monoclonaux ont t utiliss. Deux dentre eux sont des IgM, L25 et L26 (Figure 17), dont laffinit est respectivement de 1,2 x 105 L/mol et 1,5 x 105 L/mol, deux sont des IgG1, 39 et 57 (Figure 18), dont laffinit est respectivement de 7,8 x 105 L/mol et 0,4 x 105 L/mol. Nous pouvons observer que ltablissement de liaisons covalentes entre lantigne et lanticorps, quel quil soit, conduit la formation de complexes immuns peu sensibles au processus de solubilisation mdi par le systme du complment. Cependant, les auteurs insistent sur le fait que les complexes covalents montrent une capacit dactivation du systme du complment conserve et intgre (140). Ces observations fournissent des lments solides en faveur du fait que la rupture de la liaison primaire antigne-anticorps est implique dans la solubilisation des agrgats. Pour autant, ces lments ne remettent pas en cause limportance de la suppression des interactions entre les fragments Fc des anticorps qui constituent lagrgat. 63

Figure 17 : Etude de la solubilisation de complexes immuns forms dIgG daffinit diffrente, lies de manire covalente labsence et non covalente , en prsence ou en dune voie classique dactivation du complment fonctionnelle, daprs (140)

Figure 18 : Etude de la solubilisation de complexes immuns forms dIgM daffinit diffrente, lies de manire covalente labsence et non covalente , en prsence ou en dune voie classique dactivation du complment fonctionnelle, daprs (140)

En revanche, le mcanisme selon lequel le C3b interfre avec la liaison primaire antigne-anticorps au cours du processus de solubilisation reste incertain. Plusieurs auteurs ont avanc que le C3b pourrait se fixer lanticorps au niveau des fragments Fab (94, 123, 270) et induire la rupture de la liaison avec lantigne. Dautres (140) pensent quau sein dun rseau, des liaisons antigne-anticorps 64

se rompent et se reforment en permanence. Quel que soit le mcanisme aboutissant la rupture de la liaison, la fixation conscutive de C3b la surface de lantigne pourrait alors empcher la rassociation par masquage dpitopes.

b.

Rle de la voie alterne dactivation du complment

La raction de solubilisation est relativement peu efficace et ncessite un niveau lev dactivation du systme du complment. Il semblerait quenviron autant de molcules de C3b quil y a danticorps qui composent le prcipit soient ncessaires (68). Cependant, seuls 10% des molcules de C3 actives peuvent se lier aux agrgats. Ainsi, dimportantes quantits de complments sont consommes au cours du processus de solubilisation. Lactivation prolonge du systme du complment amne la formation du complexe dattaque des membranes (CAM) et la production de nombreux fragments du complment, notamment les anaphylatoxines C3a et C5a, dont les effets sont subis par les tissus avoisinants. Ce dernier point sera dtaill lors de la troisime partie (voir paragraphe P3-I.D.2). Lactivation massive requise pour la solubilisation ne peut tre gnre que par le mcanisme dautoamplification de la voie alterne dactivation du complment (63). En effet, les agrgats insolubles semblent former des surfaces protges auxquelles le facteur H, protine inhibitrice, a peu daccs. Ces surfaces fournissent de nombreux sites o lamplification de lactivation du complment est favorise (92).

c.

Rle de la voie classique dactivation du complment

La place de la voie classique dactivation du complment dans le processus de solubilisation est complexe. Elle ne semble pas constituer une condition sine qua non au droulement du processus de solubilisation puisque des dficits sriques en C1, C4 ou C2 ne conduisent pas une altration du niveau final de solubilisation des agrgats. En revanche, le processus de solubilisation montre un retard son initiation et se poursuit selon une cintique significativement ralentie (63). Par ailleurs, il semble que lactivation de la voie classique, elle seule, ne suffit en gnral pas solubiliser les prcipits bien quune solubilisation partielle ait t mise en vidence (261). Des rsultats plus rcents tendent accorder la voie classique un rle bien plus important (140). Lanalyse des Figure 17 et Figure 18 permet de constater que lactivation de la voie alterne, en labsence de voie classique fonctionnelle, ne semble pas permettre une solubilisation complte des

65

agrgats non covalents. En effet, peine plus de 50% des agrgats sont solubiliss lissue des exprimentations, soit 120 minutes aprs leur mise en prsence du srum trait. Par opposition, la voie alterne, en prsence dune voie classique fonctionnelle, conduit une solubilisation complte des agrgats non covalents seulement 30 minutes aprs leur mise en prsence de srum non trait. Ces rsultats semblent en faveur dun rle majeur jou par la voie classique du complment dans le processus de solubilisation. De plus, il est intressant de mettre en relation les rsultats obtenus pour les agrgats non covalents constitus dIgG et ceux constitus dIgM. En effet, en raison de leur structure pentamrique les IgM complexes activent facilement la voie classique du complment (voir paragraphe P3-I.B.1.a). Dans ce contexte, il nest pas surprenant de constater que la solubilisation des agrgats constitus dIgM est plus rapide, bien que de manire discrte, par comparaison aux agrgats constitus dIgG. Le rle majeur attribu par cette tude la voie classique dactivation du complment peut sexpliquer de la manire suivante : le dclenchement rapide de la voie dactivation classique du complment amne la formation prcoce de C3b et contraste avec lhydrolyse spontane du C3 qui initie avec une certaine inertie la cascade dactivation de la voie alterne. La voie classique constitue en cela un effet de levier plus puissant dans le dclenchement du processus de solubilisation. En revanche, la capacit dauto-amplification propre la voie alterne devient rapidement ncessaire pour produire la quantit importante de composants C3b ncessaire la solubilisation des agrgats. Par consquent, la solubilisation est un processus qui requiert absolument lintgrit de la voie alterne dactivation du complment, mais reste plus rapidement et massivement mis en place en prsence dune voie classique dactivation du complment fonctionnelle (267). Ainsi, deux aspects sont particulirement mis en lumire : Tout dabord, la capacit qua le complment inhiber la prcipitation des complexes immuns est dix fois suprieure sa capacit de solubilisation. Ceci reflte la facilit relative de lorganisme prvenir la mise en uvre de forces dinteractions entre les fragments Fc des complexes compars la difficult que reprsente la rupture dun agrgat prform. Par ailleurs, les ractions dinhibition de la prcipitation dune part, et de solubilisation dautre part, se diffrencient nettement lune de lautre par leur rle inflammatoire potentiel. En effet, linhibition de la prcipitation gnre significativement moins danaphylatoxines C3a et C5a (245). Ainsi, la solubilisation des agrgats est associe une rponse inflammatoire plus importante, avec des consquences dltres pour les tissus. 66

Notons, ce stade, que lisotype de lanticorps qui constitue le complexe immun porte peu consquence. En effet, lefficacit de la solubilisation dpend, avant tout, de la mise en uvre de la voie alterne dactivation du complment. Celle-ci ne dpend pas de la prsence danticorps. Par ailleurs, une solubilisation plus efficace des complexes immuns constitus dIgG1 et dIgM a t observe lorsque les complexes sont forms en excs danticorps par rapport ceux forms lquivalence ou en excs dantignes (Figure 16) (139). Au regard du rle central jou par le complment dans linhibition de la prcipitation et la solubilisation des complexes immuns, et en accord avec la prvalence accrue de maladies mdies par le dpt de complexes immuns chez des patents manifestant, en particulier, des dficits en composants initiaux de la voie classique dactivation (patients atteints de LED par exemple), il semble que le systme du complment joue un rle important dans la prvention du dpt des complexes au sein des tissus. Ainsi, un dficit en composants du complment, quil soit dorigine gntique ou secondaire une consommation excessive du fait de la formation massive de complexes immuns, conduira laugmentation du potentiel pathogne des complexes immuns forms (voir paragraphe P2-II.A.1) (161).

3. Les rcepteurs du complment dans lpuration des complexes immuns

Une fonction physiologique importante de CR1 est dtre un cofacteur du facteur I dans le catabolisme de C3b en iC3b, et de iC3b en C3dg. En effet, un complexe immun opsonis par C3b pourra, dans un premier temps, se fixer sur une cellule portant le CR1 et, par la suite, tre relargu du fait du catabolisme de C3b en iC3b puis C3dg qui, tous deux, ne constituent plus un ligand pour le CR1. Chez les primates, les complexes immuns solubles sont ainsi transports dans la circulation sous forme fixe au CR1 des rythrocytes (4, 150, 179).

a.

Fixation des complexes immuns aux CR1 des rythrocytes chez les primates

i. Fixation prfrentielle des complexes la surface des rythrocytes

De nombreuses cellules circulantes portent des CR1 leur surface. Le CR1 est ainsi exprim la surface des rythrocytes, des granulocytes, des monocytes, des lymphocytes B, de certains 67

lymphocytes T4, des cellules dendritiques folliculaires, des cellules de Langerhans cutanes, et des cellules pithliales glomrulaires (40). Un petit nombre de CR1 solubles est aussi trouv dans le plasma (301). Cependant, chaque rythrocyte possde seulement quelques centaines de CR1 sa surface compars aux plusieurs milliers prsents la surface des autres types cellulaires. En effet, le nombre approximatif de CR1 par rythrocyte avoisine les 500. Pour les neutrophiles, leur nombre est de lordre 20 000, pour les lymphocytes B de 21 000 et pour les monocytes de 30 000 (121). A ce stade, nous pouvons donc nous demander comment les rythrocytes jouent un rle majeur dans lpuration des complexes immuns. Deux facteurs favorisent la fixation prfrentielle des complexes immuns aux rythrocytes chez les primates. Tout dabord, il y a beaucoup plus de cellules rouges que de leucocytes dans le sang priphrique (180). En effet, 103 globules rouges sont prsents dans la circulation pour 1 globule blanc. Ainsi, plus de 85% de lensemble des CR1 rencontrs dans la circulation sont prsents sur les rythrocytes (53, 245, 259). En consquence, chez les primates, lorsque des complexes immuns sont constitus ou injects dans la circulation sanguine, la plus grande majorit dentre eux est rapidement fixe aux rythrocytes. De plus, les CR1 ports par les rythrocytes, bien que peu nombreux, sont regroups leur surface. Ceci facilite ltablissement de liaisons de forte avidit avec les complexes immuns opsoniss (213). Cette propension des CR1 des rythrocytes au regroupement est tudie de manire plus approfondie par la suite (voir paragraphe iii. ci-dessous).

ii. Mise en place de nombreuses interactions C3b-CR1

Laffinit dune molcule de C3b pour le CR1 est faible (10-6 L/mol). Par opposition, la force de liaison dun complexe immun un rythrocyte est 10.000 fois plus forte (10-10 L/mol) (246). Cette diffrence significative sexplique par le fait que la fixation des complexes immuns aux rythrocytes ncessite la mise en place dun grand nombre dinteractions entre les complexes revtus de multiples molcules de C3b et les CR1 ports par les rythrocytes. La liaison des complexes immuns aux rythrocytes est donc multivalente (213).

iii. Rpartition non homogne des CR1 la surface des rythrocytes

Les CR1 sont regroups la surface des rythrocytes (40, 54, 78, 213). La propension des CR1 tre regroups est plus grande pour les rythrocytes que pour les leucocytes (215). En consquence, mme si les rythrocytes des primates expriment beaucoup moins de CR1 que les leucocytes, la capacit des rythrocytes fixer les complexes immuns est finalement la mme. Les complexes

68

immuns se fixent ainsi prfrentiellement aux rythrocytes qui expriment leur surface des CR1 de manire regroupe (54). En effet, il a t mis en vidence par microscopie lectronique que les CR1 sont regroups par lots, de 3 12 molcules, appels clusters . Ce regroupement des CR1 est constat sur tous les globules rouges bien que dans un degr variable. Ainsi, les rythrocytes portant un nombre lev de CR1 ne devraient pas seulement fixer plus de complexes immuns, mais montrer galement une efficacit plus grande dans ltablissement des liaisons avec les complexes, soit une plus grande avidit. De nombreuses tudes ont ainsi t menes afin de caractriser la fixation des complexes immuns aux rythrocytes. Les aspects majeurs mis en lumire sont les suivants (68, 248) : les lments requis pour lopsonisation de complexes immuns par C3b sont identiques ceux ncessaires linhibition de la prcipitation. Autrement dit, la voie classique dactivation du complment doit tre parfaitement fonctionnelle (212) ; la fixation de complexes immuns recouverts de C3b est trs efficace 37C et se met en place entre quelques secondes et quelques minutes ; il ny a presque pas de libration spontane de complexes en labsence de facteur I (204) ; lefficacit de la liaison est directement corrle au nombre de CR1 ports par lrythrocyte. En effet, Taylor et al. ont montr quil y a une corrlation directe entre le nombre de CR1 ports par la cellule et le taux de complexes immuns fixs (277).

iv. Variabilit dans le nombre de CR1 prsents la surface des rythrocytes

Un polymorphisme dans le nombre de CR1 exprim, variant de 50 500 CR1 par rythrocyte, est observ au sein dune population normale. Cette variation semble dtermine, du moins en partie, par le code gntique et a t dcouverte pour la premire fois chez des sujets sains dont les rythrocytes dfaillaient dans leur adhrence avec les complexes immuns (68, 156, 187). De plus, au sein dun mme individu, il y a une htrognit dans le nombre de CR1 ports la surface des rythrocytes. Des tudes permettant la sparation des rythrocytes suivant un gradient de densit ont montr une diffrence dans le nombre de CR1 entre des jeunes cellules, mieux quipes en CR1, et des vieilles cellules (169, 231). Cette perte de rcepteurs CR1 peut tre caus par lactivit protolytique des cellules phagocytaires avec lesquelles les rythrocytes entrent en contact, notamment au niveau du foie (162). Il a t suggr que les CR1 des rythrocytes sont dgrads in vivo de manire les priver de leur domaine extracellulaire et ne laisser sur lrythrocyte que la partie constitue des domaines intracellulaire et transmembranaire (9). La formation de complexes immuns de manire excessive ou chronique pourrait ainsi favoriser la diminution progressive de la 69

capacit de transport des rythrocytes, amener une persistance des complexes immuns dans le compartiment circulant et in fine aboutir au dpt de ces complexes dans les tissus. Cette perte de CR1 pourrait galement tre une consquence du phnomne de vsiculation. Il sagit dune perte de composants membranaires sous forme de microvsicules. En effet, il a t montr que durant un vieillissement artificiel induit par un dficit en ATP ou une surcharge en calcium, les rythrocytes larguent de petites vsicules de 200 nm de diamtre (68). Ces vsicules contiennent des lipides ainsi que plusieurs protines constitutives de la membrane dont les CR1 (72, 218).

b.

Mcanismes de lpuration des complexes immuns par le CR1 chez les primates

Lactivation du complment par les complexes immuns induit la libration de molcules de C3b qui interagissent avec les rseaux Ag-Ac pour maintenir leur solubilit et permettre leur fixation aux CR1 des rythrocytes. La fixation des complexes immuns sur les rythrocytes empche leur interaction avec dautres cellules, dont lactivation pourrait se rvler dltre pour les tissus environnants (16). Par la suite, le composant C3b est cliv par le facteur I en iC3b (pour inactivated C3b). Cependant, laffinit de CR1 pour iC3b est plus faible que pour C3b (234). A linverse, dautres rcepteurs (CR3 et CR4) montrent une affinit plus leve envers iC3b que vers C3b. CR3 et CR4 sont localiss sur les macrophages et les neutrophiles mais sont absents des rythrocytes (251). Dans le foie et la rate, les complexes revtus diC3b entrent en contact avec les macrophages rsidants et y sont transfrs (Figure 19). Les rythrocytes, quant eux, restent dans la circulation sanguine. (257) Cependant, certaines exprimentations fournissent des lments en dfaveur de cette hypothse. Tout dabord, des tudes menes sur les modalits du transfert des complexes immuns ports par les rythrocytes montrent que celui-ci survient mme en labsence de facteur I en solution (80). Il ne peut cependant tre exclu que les cellules phagocytaires synthtisent ce facteur ou lexpriment leur surface autorisant ainsi la libration du complexe (297). De plus, il semblerait que le prlvement des complexes par ltablissement de liaisons iC3b-CR3 et iC3b-CR4 la surface des macrophages hpatiques constitue un mcanisme dont la cintique, mesure in vitro, serait trop lente pour expliquer la rapidit du prlvement hpatique constat in vivo (80).

70

Figure 19 : Mcanismes molculaires de la fixation des complexes immuns aux rythrocytes et de leur transfert aux macrophages, daprs (257)

Enfin, la raction de transfert a t tudie une temprature de 4C suffisamment basse pour inhiber toute activit enzymatique (80). Le transfert rapide des complexes na cependant t que trs faiblement altr. Ceci constitue un lment fort en dfaveur de lintervention dune quelconque action enzymatique au cours du transfert des complexes immuns de la surface des rythrocytes vers les cellules phagocytaires. Lhypothse selon laquelle le facteur I, ou tout autre enzyme ventuellement prsente sous forme soluble ou bien exprime la surface des macrophages, serait ncessaire est en cela peu probable. Il ne peut cependant tre exclu quun tel processus puisse jouer un rle in vivo. Sil peut bien sr favoriser le transfert, il nest pour autant pas indispensable. De manire plus gnrale, certains auteurs ont valu la possibilit dune action directe, et non ncessairement enzymatique, des macrophages sur la liaison tablie entre les complexes immuns et les CR1 rythrocytaires (78, 274). En effet, lors du transfert du complexe, lrythrocyte portant le complexe et le macrophage rsidant peuvent utiliser le complexe comme ligand commun et tre suffisamment proches lun de lautre. Une fois ce contact tabli, les molcules de surface du macrophage pourraient modifier le CR1 de lrythrocyte et par l faciliter la libration du complexe (154, 233). De manire alternative, le macrophage pourrait tout autant librer une molcule soluble ayant leffet recherch. Cependant, il a t observ in vitro que la liaison des complexes immuns aux CR1 des rythrocytes nest pas altre par mise en prsence de macrophages (78, 274). 71

Le processus de transfert des complexes des rythrocytes aux macrophages rsidants reste donc ce stade encore non rsolu et dautres hypothses ont t formules lorsque le rle cl du CR1 dans le transfert des complexes a t mis en lumire. En effet, les macrophages hpatiques et splniques possdent galement leur surface des CR1 dont le blocage a pour consquence une suppression du transfert des complexes immuns en provenance des rythrocytes (80). Ainsi, des rcepteurs CR1 prsents la surface des macrophages seraient impliqus dans le prlvement des complexes immuns. En revanche, le blocage des CR3 a t sans consquence sur le transfert des complexes. Cependant, il nest pas exclu pour autant que le CR3 puisse jouer un rle auxiliaire in vivo. En effet, le facteur I gnre en permanence de liC3b partir du C3b. Comment peut-on alors expliquer que les complexes immuns soient transfrs des CR1 des rythrocytes aux CR1 des macrophages ? En dpit dune avidit des macrophages pour les complexes similaire celle exprime par les rythrocytes, la capacit de liaison des macrophages est bien plus grande que celle des rythrocytes du fait dun plus grand nombre de CR1 leur surface. En combinant lavidit et la capacit de fixation des macrophages, il est propos que les complexes immuns se distribuent entre les rythrocytes et les macrophages en fonction du nombre de sites de liaison disponibles. Ng et al. ont rcemment tudi le mouvement des complexes entre les rythrocytes et ont conclu que ces complexes se rpartissaient entre les diffrents rythrocytes en fonction de la densit relative de CR1 leur surface (204). Il est ainsi suggr quun mme mcanisme gouverne les mouvements des complexes des rythrocytes vers les cellules phagocytaires (80). Ainsi, lorsque le rapport [Erythrocytes]/[Phagocytes mononucles] est trs lev, dans le sang par exemple, les complexes se fixent prfrentiellement la surface des rythrocytes (180). En effet, la faible capacit individuelle de liaison des rythrocytes fait de ces cellules de trs bonnes receveuses de complexes immuns lorsquelles sont prsentes en excs relativement aux autres types cellulaires. A linverse, lorsque les rythrocytes traversent le foie, le rapport [Erythrocytes]/[Phagocytes mononucles] chute brusquement du fait de la prsence dun trs grand nombre de macrophages hpatiques. Il semblerait qualors des liaisons de plus forte avidit se crent entre les complexes et les macrophages hpatiques, ce qui pourrait expliquer le transfert rapide qui sopre (80). En effet, la faible capacit individuelle de liaison des rythrocytes fait de ces cellules de trs bonnes donneuses de complexes immuns lorsquelles sont prsentes en dfaut relativement aux autres types cellulaires. La rupture des liaisons qui unissent les rythrocytes aux complexes immuns quils portent peut par ailleurs tre fortement favorise par la forte pression hydrostatique au sein des sinusodes hpatiques.

72

Par ailleurs, la fixation des complexes immuns sur les rythrocytes est bien plus efficace pour des complexes de grande taille. En effet, les agrgats de grande taille activent plus fortement le systme du complment et sont recouverts dun plus grand nombre de fragments C3b. Lavidit de tels complexes pour les rythrocytes sen trouve grandement augmente. (80) Enfin, un nouveau rcepteur pour les fragments C3b et iC3b, impliqu dans la phagocytose a t dcouvert (119). CR1g est une protine transmembranaire uniquement exprime par certains macrophages tissulaires, en particulier les cellules de Kupffer du foie (38). CR1g reprsente une composante essentielle du systme phagocytaire responsable de llimination rapide des pathognes opsoniss de la circulation sanguine.

c.

Fixation des complexes immuns aux CR1 des thrombocytes chez les non primates

Le mcanisme dpuration des complexes immuns mis en uvre chez des mammifres autres que les primates (qualifis de non-primates pour plus de simplicit) prsente une diffrence majeure avec celui dmontr chez les primates (121). Comme nous lavons soulign prcdemment, les rythrocytes expriment leur surface des CR1 qui permettent aux complexes immuns, recouverts de C3b, de sy fixer. Cependant, chez les non primates, les rythrocytes expriment peu ou pas de CR1 et nont ainsi quune trs faible capacit fixer les complexes immuns (125). Toutefois, limage des rythrocytes des primates, les plaquettes des non-primates expriment un rcepteur du complment (CR1) qui permet aux complexes immuns revtus de C3b de sy fixer (121, 278). Ainsi, lorsque des complexes immuns prforms sont injects exprimentalement chez la souris, le lapin, ou le cochon dInde, la plupart des complexes immuns se fixent aux plaquettes circulantes dans les minutes qui suivent linjection (275, 276). Les complexes immuns ainsi fixs sont ensuite prlevs de la circulation sanguine selon le mme mcanisme que celui mis en uvre via les rythrocytes (121). Cette diffrence majeure dans la mise en uvre du processus dadhrence immunitaire chez les primates par rapport aux non-primates a t rcemment confirme, notamment chez le chien (77). Les consquences biologiques induites par lintervention des plaquettes dans lpuration des complexes immuns chez les non-primates restent non entirement lucides. Des tudes menes in vitro ont cependant montr que la fixation des complexes immuns aux plaquettes sanguines via le complment entrane lagrgation irrversible de ces mmes plaquettes (248). Ceci semble constituer

73

un dsavantage dun point de vue physiologique puisque lagrgation plaquettaire est, en gnral, suivie du relargage de molcules pro-inflammatoires telles que le thromboxane, lhistamine (chez les non-primates), des prostaglandines et le PAF (pour platelet activating factor) (121). Ce mcanisme contraste donc avec celui voqu pour les rythrocytes chez les primates puisque, dans ce dernier cas, lrythrocyte agit en tant que support inerte pour le transfert des complexes immuns depuis la circulation sanguine jusquau foie et la rate. En revanche, chez les primates, les plaquettes portent leur surface un trs faible nombre de CR1, qui fixe le C3b et le C4b, mais expriment le CR2, le CR3 et le CR4, qui fixent des composants du complment issus de la dgradation de C3b par laction du facteur I (voir paragraphe P3-I.C).

Au cours de cette partie, nous avons dcrit les mcanismes mis en jeu lors du processus dpuration des complexes immuns et les principaux organes impliqus. Ainsi, les complexes immuns activent le systme du complment et les composants C3b librs limitent la prcipitation des complexes solubles et favorisent la solubilisation des agrgats insolubles dores et dj forms. Les complexes, alors recouverts de C3b, peuvent se fixer aux rcepteurs pour le C3b, les CR1, exprims la surface des rythrocytes chez les primates, et des thrombocytes chez les autres espces de mammifres. Les complexes sont ainsi transports dans le compartiment circulatoire jusqu ce quils traversent des organes au sein desquels des macrophages rsidants seront capables dtablir des interactions de plus fortes avidit leur gard. Il sensuit un transfert des complexes de la surface des rythrocytes vers la surface des macrophages qui sactivent et accomplissent la phagocytose des complexes. Si le foie et la rate sont classiquement reconnus comme les organes majeurs exerant cette action, notamment chez lhomme et le chien, nous avons vu que les poumons jouent un rle prpondrant chez certaines espces comme le porc et dans une moindre mesure le chat. (cf. Bilan en Annexe 1.B p. 200) A ce stade, nous comprenons bien quun dsquilibre entre la formation des complexes immuns et leur puration selon ce mcanisme, lors dune insuffisance en composants du complment ou dune surcharge de la fonction de phagocytose, favorisera leur persistance dans le compartiment circulant et leur dpt dans les tissus. Cependant, de nombreux facteurs locaux vont galement favoriser le dpt des complexes au sein de localisations particulirement vulnrables. Ces nombreux facteurs font lobjet du paragraphe II de cette seconde partie.

74

II.

Dpt des complexes immuns

La localisation des complexes immuns dans les tissus dpend tout dabord dun quilibre dlicat entre la production de ces complexes et la capacit du systme des phagocytes mononucls les purer du sang. Physiologiquement, cet quilibre a plutt tendance pencher en faveur de la fonction dpuration (254). Cependant, dans certaines circonstances que nous commencerons par prsenter, le processus dpuration des complexes immuns peut tre altr et conduire leur persistance dans le compartiment circulant. Bien que la persistance des complexes ne soit pas nocive en elle-mme, elle favorise leur localisation secondaire au sein des tissus. Ce qui soulve deux questions : Comment ces complexes se dposent-ils ? Pourquoi ces complexes se fixent-ils slectivement sur certains tissus ?

Afin de rpondre ces questions, nous discuterons dans un premier temps des mcanismes qui dterminent la formation de dpts complexes immuns au sein des tissus. Lexemple plus connu du rein sera dvelopp cette occasion. Par la suite, nous tudierons les paramtres qui dterminent la localisation prfrentielle des complexes immuns dans le rein (les glomrules), les articulations (la membrane synoviale), le cerveau (le plexus chorode), le poumon, la peau, lil (le corps ciliaire) et quelques autres sites. Bien que ces paramtres soient encore incompltement connus, linfluence de nombreux facteurs a cependant t bien tablie (254). Nous voquerons successivement : les proprits intrinsques des complexes immuns : leur quantit, leur taille, la nature de lantigne et de lanticorps qui les constituent ; et des facteurs tissulaires locaux : anatomiques, propres aux organes de filtration tels quune structure vasculaire fenestre, et physiologiques, tels quune augmentation de la permabilit vasculaire ou une pression sanguine leve.

75

A.

Altration de la fonction dpuration des complexes immuns

Les engrenages du processus dpuration des complexes immuns ont t pralablement dcrits. Cependant, dans certaines circonstances, la mise en uvre de ce processus peut se trouver altre avec pour consquence directe la persistance de complexes immuns dans le compartiment circulant. Au regard du rle central jou par le systme du complment au cours de ce processus, nous pouvons dores et dj prvoir les consquences dltres impliques par une insuffisance, primaire comme secondaire, en composants du complment. Cependant, dautres lments, ncessaires au bon droulement du processus, peuvent faire dfaut et conduire une altration de la fonction dpuration. Cest notamment le cas des rcepteurs pour le complment (CR1) prsents la surface des rythrocytes chez les primates, et des thrombocytes chez les non-primates, et du processus de phagocytose mis en uvre par les macrophages rsidants au sein des organes dpuration. Ainsi, nous envisagerons successivement les rpercussions sur la fonction dpuration dun dficit en composants du complment, dun dficit en rcepteurs CR1 la surface des rythrocytes et des thrombocytes et dune altration de la fonction de phagocytose au sein des organes dpuration. A loccasion de ces dveloppements, le cas du lupus rythmateux dissmin (LED) sera pris comme exemple. Pour rappel, le LED est une maladie auto-immune non spcifique dorgane caractrise par la production danticorps anti-nuclaires (principalement anti-ADN) et par latteinte de nombreux organes, dont les articulations, les reins, la peau, lorigine dun tableau clinique polymorphe. Bien que les mcanismes tiopathogniques restent encore ce jour non entirement lucids, il est communment accord au processus dhypersensibilit de type III un rle prpondrant dans la cration des lsions tissulaires observes au sein de certains organes comme le rein, la synoviale ou la paroi vasculaire (38, 161). Bien document chez lhomme ainsi que dans lespce canine, le LED semble beaucoup plus rare chez le chat (37). Le LED constitue donc une situation pathologique qui permet de prendre la mesure de manire plus pratique des consquences occasionnes par une altration du processus dpuration des complexes immuns. Les claircissements fournis par ltude du LED permettront de mettre en perspective un dfaut de la fonction dpuration comme facteur favorisant non seulement le dpt des complexes immuns mais aussi la rupture de tolrance qui conduit lauto-immunit.

76

1. Dficit en composants du complment

a. Facteurs tiologiques

De manire gnrale, un dficit du systme du complment peut survenir, dune part, du fait dune synthse insuffisante dun ou plusieurs composants lors daffections hrditaires, on parle alors de dficit primaire, et, dautre part, suite une consommation excessive des composants lors dune maladie complexes immuns, le dficit est dans ce cas secondaire (99).

i. Dficit primaire
Chez des individus atteints dun dficit dorigine hrditaire dans la synthse dun ou plusieurs composants, les consquences biologiques seront diffrentes en fonction du composant faisant dfaut. Il est noter que pour la plupart des composants, la transmission des gnes codants est autosomique (i.e. nimplique pas les chromosomes sexuels) et lexpression des gnes est codominante. Ainsi, un dficit complet ne peut tre retrouv que chez des individus homozygotes rcessifs. Les htrozygotes quant eux nexprimeront qu moiti le gne codant le composant en question. En consquence, la quantit de composants synthtise sera elle aussi diminue de moiti (226). Des tudes ont montr que les patients atteints dun dficit en composants de la voie classique dactivation du complment sont touchs selon une incidence particulirement forte par une maladie mdie par le dpt de complexes immuns (242). A titre dexemple, lors de LED, un dficit gntique en protine du complment peut tre identifi chez certains malades (38). Une association a mme t tablie entre un dficit hrditaire en lun des composants de la voie classique du complment (C1q, C1r, C1s, C2 et C4) et une susceptibilit accrue au LED (51, 161, 189, 220, 290). Par ailleurs, la frquence de cette association est dautant plus grande que la protine dficitaire intervient prcocement au cours de la cascade dactivation. Lassociation la plus forte est ainsi observe lors dun dficit en C1q (25, 220). De manire plus prcise, pour des patients avec des dficits uniques en C1q, C1r ou C1s, C4, C2 ou C3, lincidence de la maladie mdie par les complexes immuns associe va de 58% (patients avec un dficit en C2) 93% (patients avec un dficit en C1q) (120, 280).

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A titre dexemple, des dficits complets en C4, C2 et partiels en C3 ont t dcrits chez le cochon dInde bien que seule le dficit en C4 ait fait lobjet dune tude approfondie. Les dficits en C3 chez le chien, et en C6 chez le lapin et le rat, ont galement t identifis bien que les tudes les concernant soient peu nombreuses. (91)

ii. Dficit secondaire

Lorsquun antigne est expos de manire prolonge au systme immunitaire, une raction humorale durable conduit une production danticorps spcifiques et une formation sous-jacente de complexes immuns toutes deux entretenues. Ces complexes fournissent de nombreux sites potentiels dactivation du systme du complment par la voie classique. Lorsque la consommation des composants du complment qui en rsulte dpasse les capacits de synthse de lorganisme, il sen suit un puisement progressif du systme. En cela, les expositions prolonges un agent exogne, infectieux ou non, et les affections auto-immunes peuvent conduire des dficits secondaires du systme du complment, touchant principalement les composants de la voie classique. Les dficits secondaires peuvent tre aggravs et survenir prcocement chez des atteints pralablement dun dficit primaire. Au cours du LED par exemple, les modifications subies par le systme du complment traduisent en rgle gnrale une activation de la voie classique. Elle se traduit par une diminution du taux de complment hmolytique total (CH50), qui permet dapprcier lactivit fonctionnelle de la voie classique, et des taux sriques de C3, C4 et C1q (38). Par ailleurs, un dficit secondaire en composants du complment peut suivre un dficit primaire en certains facteurs de rgulation de lactivation comme le facteur H, qui dissocie la C3 convertase de la voie alterne, ou le facteur I, qui assure le clivage du C4b et du C3b ncessaire la formation des C3 convertases des voies classique et alterne respectivement (voir paragraphe P3-I.C). En effet, dans ce contexte lactivation drgule du complment conduira un puisement rapide des composants. De manire analogue, le C3-NeF (pour C3 nephritic factor) est un autoanticorps qui stabilise la C3 convertase de la voie alterne et entrane une rduction profonde et prolonge du taux de C3 srique (120, 210). La prsence de C3-NeF est souvent associe une atteinte rnale de type glomrulonphrite membranoprolifrative, ou glomrulonphrite hypocomplmentmique, reposant sur le dpt de complexes au sein des glomrules rnaux (120).

78

Enfin, des interactions entre certaines molcules administres des fins thrapeutiques et le systme du complment ont t mises en lumire. Il a t dmontr dans le milieu des annes 1980 que lhydralazine (antihypertenseur) et lisoniazide (antimycobactrien) inhibent laction du composant C4 et par voie de consquence la formation de la C3 convertase de la voie classique (260). Il en rsulte un dfaut de clivage du C3 en C3b dont leffet mime celui dun dficit primaire en C3. Ainsi, il se pourrait que la maladie apparente au LED observe lors de lusage de ces molcules en soit la consquence (120). De nombreux facteurs peuvent donc amener une dficience du systme du complment. Tentons maintenant de mettre en lumire les consquences dune telle dficience de manire comprendre leur forte implication dans le dveloppement dune maladie complexes immuns comme le LED. Dans ce contexte, plusieurs tudes ont t menes chez un petit nombre de sujets prsentant un dficit hrditaire en complment et atteints de LED ainsi que chez un plus grand nombre de patients atteints de LED avec un dficit en complment acquise, secondaire lactivation du systme du complment par la maladie elle-mme (67, 111, 246, 290).

b.

Consquences dun dficit en complment

i. Altration de la fonction dpuration des complexes

Altration de la prvention de la prcipitation des complexes : Chez les patients atteints de LED des taux diminus de C3 et C4 (dus des facteurs gntiques et acquis) ne permettent pas une fixation suffisante des fragments C3 et C4 au rseau antignesanticorps et ainsi la formation de petits complexes immuns solubles (242). Le rle central du systme du complment dans la prvention de la prcipitation des complexes immuns, plus particulirement par la voie classique, a t pralablement mis en vidence (voir paragraphe P2-I.B). Ainsi, un dficit en composants de la voie classique aura pour consquence directe une diminution de la quantit de C3b forms et intgrs au rseau antignes-anticorps en cours formation. Or, la prvention de la prcipitation constitue le moyen le plus efficace mis en uvre pour maintenir la solubilit des complexes immuns forms. Ainsi, bien quun dficit hrditaire en composant C1q par exemple nempche pas la formation de C3b par la voie dactivation alterne, que nous savons jouer un rle clef dans la solubilisation des complexes dj 79

forms, il convient de rappeler galement que celle-ci se rvle insuffisante lorsque seule agir (voir paragraphe P2-I.B). Ceci conduit donc la formation de complexes immuns de taille augmente et dautant moins solubles que leur taille est importante. Altration de la fixation des complexes la surface des rythrocytes : La diminution de la quantit de C3b forms et intgrs au rseau antignes-anticorps conduit une diminution de la capacit des complexes se lier aux rythrocytes. En effet, la fixation des complexes la surface des rythrocytes est mdie par ltablissement de nombreuses liaisons CR1-C3b. Des tudes in vitro ont montr que des complexes immuns ADN/anti-ADN ou encore des complexes constitus dIgG agrges par un processus thermique, pralablement revtus de C3b et laisss libres en solution, sont fixs 3 5 fois plus lentement par des monocytes que lorsquils sont pralablement fixs aux rythrocytes (80). Les complexes immuns, par ailleurs de taille augmente et peu solubles, sont donc inefficacement achemins jusquaux organes o sopre normalement leur puration. Ceci favorise la persistance de ces complexes sous forme libre dans le compartiment circulant. Les complexes immuns prsentent un pouvoir pathogne potentiel trs important, non seulement du fait de leur propension se dposer secondairement dans les tissus, et notamment au sein de lendothlium vasculaire, mais aussi par leur capacit interagir avec dautres types cellulaires par lintermdiaire des fragments Fc qui les constituent (voir paragraphe P3-II) (16). Il a ainsi pu tre montr que la fixation des complexes immuns aux rythrocytes prvient lapparition de lsions endothliales en diminuant linteraction des complexes avec les neutrophiles (290). Ces interactions sont lorigine du dclenchement de processus lsionnels vis--vis des tissus environnants et feront lobjet de la troisime partie de ce mmoire. Dfaut de prlvement des complexes par les macrophages rsidant au sein des organes dpuration : Chez des patients humains montrant un dficit en complment, lors de LED notamment, il a t observ un prlvement altr des complexes immuns par la rate, corrl au degr de lhypocomplmentmie (66, 67). Linjection de plasma frais conduit la restauration des capacits de

80

prlvement de la rate. De plus, chez ces patients, les complexes sont prlevs par le foie de manire acclre et transitoire par rapport aux sujets sains (66). Lors de dficit en complment, la diminution de la quantit de C3b forms et intgrs au rseau antignes-anticorps conduit une diminution de la capacit des complexes se lier durablement aux macrophages rsidants au sein des organes dpuration. En effet, le processus dpuration ncessite lintervention de rcepteurs pour le complment qui permettent ltablissement dinteractions de forte avidit entre les complexes et les cellules phagocytaires. Les liaisons stables ainsi cres permettent linternalisation des complexes qui constitue la premire phase du processus de phagocytose ralis par les macrophages hpatiques et splniques. Il est intressant de constater la concordance des rsultats prsents jusqualors : dune part, comme nous venons de le voir, les complexes immuns, non revtus de C3b lors dhypocomplmentmie, sont capts plus rapidement par les macrophages rsidants au sein des organes dpuration (bien que de manire transitoire). Le processus dpuration mis en uvre chez les sujets sains, et servant de rfrence, repose sur le transfert des complexes, revtus de C3b, des rythrocytes aux cellules phagocytaires ; dautre part, les complexes immuns revtus de C3b fixs la surface des rythrocytes sont capts 3 5 fois plus rapidement par les cellules phagocytaires que les mmes complexes prsents sous forme libre. Les observations prcdentes montrent ensemble que les complexes immuns revtus de C3b et prsents sous forme libre sont purs plus lentement que les complexes non revtus de C3b. Ceci peut sembler paradoxal la premire lecture. En effet, comment la fixation de C3b peut elle ralentir lpuration des complexes ? Une explication est que la fixation de C3b conduit au maintien de la solubilit des complexes en sopposant lextension du rseau antignes-anticorps. Ainsi, les complexes sont de plus petite taille et solubles, et en cela plus difficiles fixer par les cellules phagocytaires rsidantes. Le rle des rythrocytes est ainsi mis en vidence : en fixant les complexes solubles via leurs CR1 de surface, ils permettent de rtablir une capture efficace des complexes par les cellules phagocytaires. En labsence de C3b, les complexes sont de taille augmente et peu solubles. De nombreux fragments Fc sont disponibles pour interagir avec les FcR prsents la surface des cellules phagocytaires. La capture des complexes est ainsi plus rapide, bien que transitoire.

81

Un dficit en complment, notamment rencontr lors de LED, conduit la persistance dans le compartiment circulant de complexes immuns de grande taille et peu solubles qui possdent ainsi un fort pouvoir pathogne potentiel et qui pourront secondairement se dposer au sein de tissus (160). Les circonstances qui favorisent le dpt de complexes persistant dans le compartiment circulant seront discutes par la suite.

ii. Infections secondaires frquentes

De manire trs schmatique, lactivation du systme du complment par la voie alterne conduit la fixation de composants du complment (C3b) directement la surface dantignes particulaires (bactries, virus). Les composants ainsi opsoniss sont plus facilement endocyts par les cellules phagocytaires et les cellules prsentatrices dantignes (CPA) ce qui favorise la mise en uvre dune raction immunitaire spcifique. Par la suite, le dclenchement dune rponse humorale permet la production danticorps spcifiques et conduit la formation de complexes immuns. Ces derniers activent le systme du complment par la voie classique et sont leur tour opsoniss par le C3b. Lefficacit de la lutte mise en place par lorganisme contre le pathogne est ainsi fortement amliore. Notons par ailleurs que les complexes opsoniss par le complment peuvent tre retenus dans le centre germinal des follicules lymphodes secondaires par liaison au CR2 exprims la surface des cellules dendritiques folliculaires (82). Les antignes ainsi retenus induisent localement la gense de signaux ncessaires la survie et la maturation daffinit des lymphocytes B qui leurs sont spcifiques ainsi qu la formation de lymphocytes B mmoire (87, 290). Enfin, la formation du complexe dattaque des membranes, produit terminal de lactivation du complment, constitue une voie importante de dfense par son action cytolytique. Compte tenu du rle jou par le complment dans la mise en place dune raction immunitaire antiinfectieuse, il nest pas surprenant dobserver le dveloppement de processus infectieux rptition chez les patients hypocomplmentmiques. Toutefois, il est important de noter que les infections frquentes observes chez les patients atteints dun dficit en un composant des voies classique et alterne ne permettent pas, en elles-mmes, dexpliquer lincidence fortement augmente des maladies mdies par les complexes immuns chez ces patients. En effet, des patients manifestant des dficits en des composants terminaux sont aussi sujets de frquentes infections tout en ayant une incidence de maladies mdies par les complexes immuns faibles compare aux patients avec un dficit dans les composants initiaux. Par exemple, pour des patients ayant des dficits uniques en C5, C6, C7, C8 ou C9, lincidence des maladies mdies par les complexes immuns varie de 8% (dficit en C7) 14% (dficit en C5) (120).

82

En effet, cest la capacit de lorganisme rpondre linfection, plus que linfection en elle-mme, qui dtermine le dveloppement ou non dune maladie complexes immuns. Ces infections frquentes conduisent une formation excessive et entretenue de complexes immuns circulants (120). Lors dun dficit en composants initiaux du systme du complment, ces complexes ne peuvent tre efficacement purs de lorganisme du fait dune liaison insuffisante aux rythrocytes qui en assurent normalement le transport et dun prlvement inefficace par les macrophages hpatiques et splniques. Ils ont ainsi une forte propension se dposer dans les tissus. En revanche, lors dun dficit en composants terminaux, les complexes immuns sont pris en charge par un processus dpuration normal du fait de lintgrit des voies classique et alterne dont les capacits restent cependant puisables. Ceci permet dexpliquer, au moins partiellement, lincidence nettement plus leve des maladies mdies par le dpt de complexes chez les patients atteints dun dficit en composants initiaux par rapport aux patients atteints dun dficit en composant terminaux. En cela, les infections frquentes constates chez les patients hypocomplmentmiques constituent un facteur aggravant et potentiellement dclenchant une maladie complexes immuns.

iii. Rupture de tolrance

Une puration altre des complexes immuns du fait dun dficit en composants initiaux du complment pourrait mme dclencher ou amplifier un LED (161). Quels sont les lments en faveur de cette hypothse ? Le complment participe llimination des cellules apoptotiques : Il a t observ que les cellules endothliales et les monocytes qui entrent en apoptose fixent leur surface le C1q et cette fixation peut conscutivement dclencher lactivation du complment et le dpt de C4 et C3 sur ces cellules apoptotiques (182, 201, 202). De la mme manire, il semblerait que le C1q puisse se fixer directement aux kratinocytes apoptotiques (159). Les cellules apoptotiques sont donc opsonises et peuvent tre prleves efficacement par les cellules phagocytaires via un mcanisme dpendant de la prsence de rcepteurs pour le complment leur surface (182, 201). Pendant lapoptose, des constituants intracellulaires normalement inaccessibles sont souvent modifis biochimiquement et redistribus au sein de la membrane des cellules apoptotiques (33, 161). Une puration inefficace des cellules apoptotiques du fait dun dficit en complment peut 83

conduire la persistance de ces constituants altrs du soi, qui pourront tre reconnus par le systme immunitaire, rompre la tolrance immunitaire, et dclencher une rponse auto-immune (161). Par lutilisation dun modle murin, Botto et al. ont t les premiers observer une accumulation de cellules apoptotiques dans les reins, le dveloppement spontan dune rponse auto-immune vis-vis dautoantignes nuclaires et le dveloppement dune glomrulonphrite dans le cas dun dficit en C1q (24). Par la suite, Taylor et al. ont not des dfauts moins svres dans lpuration des cellules apoptotiques et la production spontane dautoanticorps chez des souris dficientes en C4 (272). Ainsi le complment, et plus particulirement le composant C1q, faciliterait llimination des autoantignes prsents la surface des corps apoptotiques et un dficit en complment conduirait une accumulation dautoantignes et la rupture de tolrance (163, 173). Altration du processus de tolrance centrale des lymphocytes B et T : Le processus de tolrance centrale vise liminer les lymphocytes B autoractifs en cours de maturation au sein de la moelle osseuse et les lymphocytes T autoractifs en cours de maturation dans le thymus. Bien que les mcanismes molculaires prcis permettant la tolrance centrale des cellules B et T soient non entirement lucids, il a cependant t identifi un processus de slection ngative aboutissant llimination des lymphocytes portant des BCR ou des TCR potentiellement autoractifs, principalement par apoptose mais galement par un processus visant modifier la structure du rcepteurs appel receptor editing . La mise en uvre de ce processus ncessite la prsentation des antignes du soi au sein des organes lymphodes primaires. Les lymphocytes qui tablissent des liaisons de forte affinit avec ces autoantignes induisent le dclenchement du processus de dltion clonale aboutissant leur limination (38, 155). La colligation du CR2, ou du CR1, et du BCR augmente lactivation cellulaire des lymphocytes B par une diminution du seuil de stimulation antignique ncessaire au dclenchement du processus de dltion clonale (32, 161). Ainsi, il a t formul une hypothse selon laquelle les antignes du soi non opsoniss par C3b ou C4b (du fait dun dficit en complment) ne conduiraient pas une activation suffisante des lymphocytes autoractifs, qui, en consquence, chapperaient la slection ngative assurant la tolrance au soi. Ces cellules vades pourraient sactiver lorsquelles rencontrent les autoantignes concerns dans la priphrie, et ainsi occasionner une rupture de tolrance (161). Le dficit en complment serait ainsi responsable dune efficacit altre du processus de slection ngative des lymphocytes autoractifs et favoriserait la rupture de tolrance et le dveloppement dun LED (32, 163, 173). 84

Ainsi, au regard des donnes prcdentes, une hypocomplmentmie conduirait, dune part, une puration altre des cellules apoptotiques, considres comme la source principale dautoantignes lors de LED, et favoriserait, dautre part, la persistance de lymphocytes B autoractifs en priphrie. La mise en contact des dbris apoptotiques et des lymphocytes autoractifs conduirait la production dautoanticorps et la formation de complexes immuns supplmentaires. Cependant, bien quune association ait pu tre tablie entre un dficit en composants de la voie classique du complment et le dveloppement dun LED, une maladie auto-immune en gnral nest pas ncessairement associe une hypocomplmentmie (173, 280). A titre dexemple, dautres maladies auto-immunes, non seulement spcifiques dorganes mais aussi systmiques comme la polyarthrite rhumatode ne montrent pas dassociation avec un dficit en complment. Ainsi, un dficit en composant de la voie classique naugmente pas le risque de dveloppement dune maladie auto-immune en gnral (280). En conclusion, un dficit en composants du complment induit, dune part, une altration de la fonction dpuration des complexes et favorise, dautre part, une rupture de tolrance ainsi que des pisodes infectieux rptitions qui ont pour consquence la production de complexes supplmentaires. Ces derniers aggravent la dfaillance du systme dpuration. Il sinstalle ainsi chez les patients hypocomplmentmiques une boucle auto-aggravante qui amne au dpt des complexes au sein des tissus.

2. Dficit en CR1 des rythrocytes

Lpuration des complexes immuns ncessite leur acheminement par les rythrocytes jusquaux organes dpuration. La fixation des complexes aux rythrocytes repose sur ltablissement de nombreuses liaisons entre les composants C3b intgrs au rseau antigne-anticorps et les CR1 prsents la surface des rythrocytes. Ainsi, la fonction de transport est tout autant altre par un dficit en C3b que par un dficit en CR1.

a.

Facteurs lorigine dun dficit

Chez lhomme, il a t mis en vidence pour la premire fois en 1981 que les rythrocytes de patients atteints de LED montrent une adhrence immunitaire dfectueuse (186). Des tudes ultrieures ont permis dobjectiver chez ces patients un dficit en CR1, tant par des preuves

85

fonctionnelles (fixation de complexes immuns ou de C3b au CR1 des rythrocytes) que par des preuves antigniques (fixation danticorps dirigs contre le CR1 des rythrocytes) (128, 288, 298, 299). Gnralement les patients lors de LED possdent un taux de CR1 allant de 40 60% de celui dun individu sain. Il semble que plusieurs facteurs, gntiques et environnementaux, conduisent ces patients exprimer un nombre diminu de CR1 (68, 120). Chez les non-primates, les premires observations dun tel phnomne datent de 1975, lorsque Miller et al. ont mis en vidence une capacit fortement altre des thrombocytes fixer des complexes opsoniss par le complment et injects dans le compartiment circulatoire de souris NZB/NZW ges et atteintes dun syndrome apparent au lupus (184). Ainsi, pour ce qui concerne la perte des CR1 membranaires au cours de lpuration des complexes immuns, il semblerait quun parallle puisse tre tabli entre le processus mis en uvre chez les primates via les rythrocytes et chez les non-primates via les thrombocytes (200).

i. Facteurs hrditaires
Des tudes ont montr quune grande proportion de patients atteints de LED ainsi que des membres apparents ont un nombre diminu de CR1 (298). Parmi les sujets sains, 34% prsentent des taux de CR1 levs, 54% des taux modrs et 12% des taux faibles. Par opposition, au sein de lignes avec un membre atteint de LED, les niveaux de CR1 exprims sont levs chez 5%, modrs chez 42% et faibles chez 53%. De fait, des lments solides sont en faveur dune transmission hrditaire du nombre de CR1 ports par les rythrocytes (128, 186, 298, 299).

ii. Facteurs acquis

Dautres tudes tendent accorder aux facteurs environnementaux un rle prpondrant dans lexpression dun nombre diminu de CR1 observe chez les patients atteints de LED (48, 235, 283). Bien quil existe au sein dune population un polymorphisme gntique dans le nombre de CR1 exprims (298), un certain nombre dlments, dont les plus dmonstratifs sont prsents ci-dessous, sont en faveur dune rduction secondaire du nombre de CR1 lors de LED. Il pourrait donc sagir dun phnotype acquis (289). Des tudes menes au sein de lignes familiales ont montr lexistence de patients exprimant de faibles quantits de CR1 malgr la prsence dun gnotype familial caractris par un fort taux de CR1 (288).

86

Au cours dautres tudes, la frquence des allles dterminant une forte et une faible expression de CR1 na pas t significativement diffrente chez les patients atteints de LED par rapport aux sujets sains, pour autant les patients atteints de LED manifestaient des taux de CR1 diminus la surface de leurs rythrocytes (187).

Le nombre de CR1 exprim est corrl avec des marqueurs srologiques de lactivit de la maladie (235, 283). Une corrlation ngative a ainsi pu tre tablie entre le taux de CR1 ports par les rythrocytes et des marqueurs traduisant lactivation du systme du complment.

Des rythrocytes transfuss diminuent leur expression de CR1 lorsquils sont placs dans la circulation de patients atteints de LED qui possdent un faible nombre de CR1 (287).

Ainsi, le dterminisme primaire ou secondaire dun faible taux de CR1 membranaire ne fait pas consensus. Sans pour autant remettre en cause une transmission hrditaire du nombre de CR1, ni exclure une composante gntique chez certains patients, ces lments suggrent un dficit en CR1 principalement dorigine acquise, sans doute secondaire la maladie. En effet, pour rappel, des tudes montrent que les CR1 sont perdus par les rythrocytes au cours du processus dpuration des complexes immuns (54, 65, 287). Lhypothse la plus commune est que les CR1 sont clivs de manire protolytique au cours de linteraction des rythrocytes portant des complexes avec les cellules phagocytaires des organes dpuration (65, 287). Comme nous lavons prcdemment montr, le clivage protolytique du CR1 membranaire ne constitue pas une condition sine qua non au transfert des complexes de la surface des rythrocytes aux macrophages rsidants. Toutefois, ce clivage rend le processus de transfert dautant plus efficace et permettrait de prvenir la phagocytose des rythrocytes (200). Il est en effet surprenant que les hmaties puissent porter leur surface des complexes immuns sans quelles-mmes ne soient dtruites lors de linteraction avec une cellule effectrice. Le CR1 constituerait ainsi un site de fixation privilgi. En effet, il a t montr que la fixation dune quantit leve dIgG spcifiques des CR1 membranaires ne conduit pas la phagocytose des rythrocytes par les cellules phagocytaires (225). En revanche, lorsque les IgG sont spcifiques dun autre site membranaire, quel quil soit, les rythrocytes sont phagocyts. Par ailleurs, il est intressant de noter que des dficits en CR1 ne sont pas exclusivement observs chez des patients atteints de LED. En effet, lors de linduction dune glomrulonphrite mdie par le dpt de complexes immuns chez des singes, il a t montr que les interactions qui soprent in vivo entre les CR1 des rythrocytes et les complexes conduisent une rduction progressive du nombre de CR1 (19, 122). Enfin, des niveaux de CR1 diminus ont t galement constats lors de polyarthrites rhumatodes (271, 273).

87

Il semble donc raisonnable de concilier les tudes en reconnaissant la fois lexistence de facteurs gntiques et acquis dans le dterminisme du faible taux de CR1 exprims la surface des rythrocytes.

b.

Consquences dun dficit en CR1

Le rle des rcepteurs CR1 est trs important dans le processus dpuration des complexes. Ils contribuent fixer les complexes circulants et les transporter vers les macrophages prsents au sein des organes dpuration, les empchant ainsi de se dposer dans les parois vasculaires. En consquence, un niveau diminu de CR1 la surface des rythrocytes entrane une fixation dficiente et un acheminement insuffisant des complexes aux cellules phagocytaires. En cela, le processus dpuration dans son ensemble est altr et ses capacits seront dautant plus facilement dpasses lors de la formation massive de complexes immuns, lors dinfections persistantes par exemple. Ainsi, chez un individu sain, une expression diminue de CR1, dorigine gntique dans ce cas, peut prdisposer au dveloppement dune maladie complexes immuns. En revanche, chez un individu dj affect par une maladie complexes immuns, la formation entretenue de complexes conduit une diminution rgulire du nombre de rcepteurs CR1 la surface des rythrocytes et l'puration des complexes devient de moins en moins efficace. Une spirale auto-aggravante se met alors en place chez le patient.

3. Dficience de la phagocytose
Les complexes opsoniss par le complment sont normalement limins par les phagocytes mononucls au sein des organes dpuration. Les principaux facteurs pouvant amener une altration des capacits de phagocytose lors de maladie mdie par les complexes immuns incluent des prdispositions gntiques (121), une diminution de lexpression des rcepteurs pour le complment et le fragment Fc des immunoglobulines la surface des cellules phagocytaires du fait dinteractions rptes avec les complexes (206) ou plus rarement la prsence dautoanticorps dirigs contre les FcR (22). Enfin, lors dune stimulation antignique prolonge, un taux lev de complexes immuns circulants peut conduire la saturation du systme rticulo-endothlial, ce qui augmente le taux de complexes circulants, et ainsi la probabilit de formation de dpts dans les glomrules et autres sites (5, 81, 108, 172).

88

Il semblerait que les dficiences phagocytaires observes dans les maladies humaines complexes immuns rsultent d'une surcharge du systme phagocytaire plutt que d'une dficience primaire de la fonction de phagocytose (172).

B.

Mcanismes de la localisation des complexes immuns

Le fait que les dpts tissulaires de complexes immuns sont causs par la fixation de complexes prforms dans le compartiment circulant ne constitue quune vision partielle du problme. Il est maintenant bien tabli que les complexes immuns fixs dans les tissus ont deux origines possibles : ils peuvent saccumuler localement suite leur formation dans la circulation sanguine, ou bien, se former directement au sein des tissus. Dans un premier temps, la communaut scientifique a t en faveur de la premire hypothse mais les nombreuses tudes menes notamment sur le rein ont permis la mise en vidence de la place de la formation in situ de complexes dans le dveloppement des dpts (253). Mais quelle est la part de chacun de ces mcanismes dans la formation des dpts tissulaires ? Pour rpondre cette question nous prendrons lexemple du rein. Ainsi, aprs avoir rappel les donnes histologiques essentielles, nous poursuivrons par ltude des mcanismes de la formation des dpts au sein des glomrules rnaux.

1. Le corpuscule rnal, donnes histologiques essentielles (50)

Le glomrule rnal est une sphre de 150 250 microns (m) de diamtre, possdant un ple urinaire o sinsre le tube contourn proximal, et un ple vasculaire dans lequel pntre lartriole affrente. Le corpuscule rnal se dfinit comme lassociation du glomrule (appel aussi floculus), constitu de nombreuses anses capillaires reliant les artrioles affrente et effrente, et de la capsule de Bowman qui entoure le glomrule et recueille lurine primitive. Elle constitue ainsi la partie la plus proximale du nphron (Figure 20).

a.

Le glomrule rnal

Le rseau capillaire glomrulaire se rpartit en de nombreux lobules difficiles distinguer. Chaque

lobule est form danses capillaires disposes autour dun axe conjonctif central : le msangium.

89

Le msangium est compos de cellules msangiales dorigine msenchymateuse. Quelques

monocytes et macrophages peuvent parfois y tre associs. Ces cellules sont enchsses dans une matrice extracellulaire. Les cellules msangiales sont de forme irrgulire, elles prsentent de nombreux processus digits. Bien que leur rle ne soit pas dfini avec prcision, on leur attribue une fonction de support du glomrule et de phagocytose des dbris issus de cellules et de la membrane basale. En effet, le msangium est perfus en permanence par les macromolcules et les rsidus de filtration. Ceux-ci peuvent saccumuler dans la matrice ou tre capts par les cellules msangiales puis endocyts. Les processus digits sinsinuent sur de courtes distances entre la paroi des cellules endothliales et la membrane basale glomrulaire (MBG) pour phagocyter les rsidus de la filtration qui pourraient endommager la MBG ou gner la filtration. De cette faon, le msangium maintient lintgrit et la permabilit slective des parois des capillaires glomrulaires. Enfin, il semblerait, que les cellules msangiales synthtisent un ou plusieurs composants de la MBG.

Les anses capillaires sont de type fentr. Elles contiennent de larges pores de 500 1000
(soit 50 100 nm) de diamtre. Ces discontinuits cytoplasmiques assurent une filtration grossire. Le noyau des cellules endothliales est situ contre les cellules msangiales, loppos des podocytes, cellules constitutives de la capsule, ce qui favorise la filtration (Figure 21). Figure 20 : Reprsentation schmatique du corpuscule rnal, daprs (50)

Lgende : Trois lobules glomrulaires sont reprsents : le lobule de gauche est reprsent de manire visualiser sa structure interne en coupe transversale (voir Figure 21 pour un agrandissement) ; le lobule du centre reprsente le trajet des anses capillaires ; le lobule de droite montre la disposition des podocytes autour du lobule.

90

b.

La capsule de Bowman

La capsule de Bowman est dispose tout autour du glomrule. Elle est compose de deux feuillets, viscral et parital, entre lesquels on trouve la chambre glomrulaire : cavit dans laquelle lurine est dverse. Le feuillet viscral est au contact des anses capillaires. Les cellules le constituant sont appeles des podocytes car elles prsentent des digitations plaques aux capillaires dlimitant des espaces trs troits : les fentes de filtration qui sont en continuit avec la chambre urinaire.

c.

La membrane basale glomrulaire

La MBG est situe, dune part, entre les cellules endothliales et les podocytes, et, dautre part, entre les cellules msangiales et les podocytes (Figure 21). En revanche elle ne sintercale pas entre les cellules msangiales et les cellules endothliales et nentoure donc pas la totalit de la lumire des capillaires comme le font les autres membranes basales dans lorganisme. Figure 21 : Coupe schmatique transversale dun lobule glomrulaire, daprs (50)

La MBG est deux trois fois plus paisse (300 nm) que la plupart des membranes basales. Au microscope lectronique, trois couches peuvent tre distingues (Figure 22) : une couche interne peu dense aux lectrons ou lamina rara interna, une couche intermdiaire dense aux lectrons ou

lamina densa, qui constitue 50% de lpaisseur de la MBG, et une couche externe peu denses aux
lectrons ou lamina rara externa, qui sintercale entre la lamina densa et les processus digits des podocytes.

91

Les composants de la MBG, dont le collagne de type IV, sont synthtiss en continu par les podocytes et probablement par les cellules msangiales. Les dbris de membrane basale quant eux sont phagocyts par les cellules msangiales. Ainsi, la MBG subit un renouvellement progressif mais complet. Figure 22 : Paroi dun capillaire glomrulaire vue au microscope lectronique, daprs (35)

2. Formation des dpts de complexes immuns au sein des glomrules rnaux

Dans un premier temps, des dpts granuleux glomrulaires nont t observs quen prsence de complexes immuns circulants (58). De plus, antignes et anticorps nont pu, alors, tre retrouvs sous forme non complexe au sein des glomrules par la mise en uvre des techniques conventionnelles dimmunofluorescence. Ces premiers rsultats ont amen la conclusion suivante : les dpts granuleux observs au sein des glomrules rnaux, ainsi que la glomrulonphrite que ces dpts occasionnent, sont causs par la capture par le glomrule de complexes immuns solubles prforms dans le compartiment circulant. Dans ce contexte, le glomrule ne constitue quun filtre passif et la taille des complexes immuns joue un rle majeur dans la localisation des complexes au sein des diffrents sites de dpt glomrulaires (Figure 23) (58, 75, 76). Cette conception de la pathogense des glomrulonphrites complexes immuns tait rpandue jusque dans les annes 1980 et sappuyait notamment sur des tudes, revues dans (57), portant sur le devenir de complexes prforms et administrs des animaux de laboratoire. Ces tudes ont montr que les dpts en zones msangiale et subendothliale peuvent tre produits par la capture de complexes circulants. Cependant, lorigine des dpts subpithliaux na pas t clarifie par ces tudes. 92

a.

Dcouverte de la formation in situ des complexes immuns

La nphrite de Heymann constitue un modle de glomrulonphrite membraneuse (qualifie dextramembraneuse dans les publications francophones) chez le rat. Elle est induite par une immunisation vis--vis dun antigne prsent dans la bordure en brosse des cellules tubulaires proximales rnales (Fx1A), prleves puis rinjectes par voie intraveineuse (58). Une immunisation passive peut galement tre mise en place. Dans ce modle, les dpts se forment initialement la base des podocytes puis stendent sur le versant externe de la membrane basale glomrulaire (lamina rara externa). La mise en place dun traitement pralable avec de la puromycine prvient la formation de dpts subpithliaux (56, 237). En effet, par son analogie de squence avec lextrmit 3 des aminoacyl-ARNt, la puromycine se fixe au ribosome en lieu et place des ARN de transfert et empche ainsi la fourniture des peptides ncessaires la traduction des ARN messagers en provenance du noyau. La puromycine sapparente donc un antagoniste comptitif des ARNt qui bloque la biosynthse des protines dans le cytoplasme et qui interfre notamment avec le turnover des glycoprotines de la membrane cellulaire. Ces lments ont indiqu pour la premire fois limplication dune proprit du glomrule lui-mme dans le dpt des complexes. Par la suite, il a t montr que les dpts observs dans le modle de Heymann, initialement considrs comme rsultant de la capture de complexes circulants contenant des antignes de la bordure en brosse, pourraient tre produits par la fixation directe dun anticorps sur un antigne intrinsque glomrulaire (55, 284). En effet, la dcouverte de lexpression de lantigne de Heymann dans les puits recouverts de clathrine la surface des cellules pithliales glomrulaires a permis dappuyer cette hypothse. Des tudes ultrieures ont rvalu de manire approfondie la nature des dpts de complexes immuns en zones msangiale, subendothliale et subpithliale (Figure 23), et ont considrablement toff la comprhension du mcanisme de formation de ces dpts (58).

b.

Formation des dpts en zone subpithliale glomrulaire

i. Formation de complexes in situ

La communaut scientifique est aujourdhui plutt en faveur de dpts subpithliaux procdant de la formation locale de complexes immuns plus que de la capture de complexes circulants prforms. Cependant, ce mcanisme pourrait impliquer soit des antignes intrinsques glomrulaires, cest-dire des autoantignes glomrulaires, soit des antignes exognes, ou endognes, pralablement plants au sein du glomrule.

93

Figure 23 : Reprsentation schmatique des diffrents sites glomrulaires au sein desquels des dpts de complexes immuns peuvent tre observs, daprs (161)

Antigne glomrulaire intrinsque : Le mcanisme de formation in situ des complexes a t fortement tudi chez le rat chez lequel il a t montr pour la premire fois quun tel mcanisme tait responsable de linitiation de dpts subpithliaux lors de linduction dune nphrite de Heymann passive (55, 284). Lantigne impliqu dans linitiation des lsions glomrulaires, jusqualors qualifi dantigne de Heymann, a t identifi comme tant une glycoprotine exprime au sein de la membrane des cellules pithliales glomrulaires (152). Son poids molculaire est valu 330 kDa (151) ou 600 kDa (171) selon les tudes. Il semblerait que cette diffrence sexplique par lisolement simultan, dans la seconde tude, de la glycoprotine, baptise mgaline , et du complexe protique qui y est associ : le RAP (pour receptor-associated protein) (103). Ce dernier peut lui aussi constituer une cible antignique. A lexception de la nphrite nphrotoxique, base sur laction danticorps anti-MBG, aucun quivalent humain de la glomrulonphrite complexe immuns due la raction dun anticorps vis--vis dun autoantigne glomrulaire na t identifi. La nphrite de Heymann reste cependant un modle dintrt dans la comprhension de la formation in situ des dpts immuns et des mcanismes lsionnels secondairement mis en uvre (58).

94

Antigne non glomrulaire plant : Les dpts subpithliaux peuvent galement survenir lors de nphrites induites par des exoantignes comme cest le cas dans le modle de la maladie srique chronique par injections rptes de BSA (pour bovine serum albumin).

ii. Mise en vidence du rle majeur des interactions lectrostatiques

Plusieurs mcanismes conduisant de tels dpts ont t maintenant identifis. Ces derniers impliquent ltablissement dinteractions lectrostatiques entre des sites anioniques glomrulaires, reprsents principalement par les protoglycanes hparan sulfate chargs ngativement au sein des lamina rara interna et externa de la paroi capillaire, avec des ractifs immunitaires, antignes ou anticorps, cationiques (58). Lorsquune maladie srique chronique est induite chez des lapins par linjection de BSA chimiquement modifie de manire augmenter sa positivit, des dpts subpithliaux constitus dIgG, de C3 et de BSA se localisent principalement en zone subpithliale, plus prcisment le long de la lamina rara externa (21). Ces dpts se dveloppent indpendamment de la quantit et de la taille des complexes immuns retrouvs dans le compartiment circulant. La localisation initiale dantignes cationiques, pralablement la fixation danticorps, a pu tre dmontre la fois par les techniques dimmunofluorescence et de radio-marquage. En revanche, lantigne ne persiste pas et ne conduit pas au dveloppement dune maladie sil ny a pas fixation danticorps et formation locale de complexes immuns (21, 209, 292). Des dpts similaires peuvent tre produits lorsquun rein isol est perfus par une solution contenant des antignes cationiques, suivie de la perfusion danticorps spcifiques (292). Il a t ainsi tabli que les dpts sont dans ce cas forms localement. La nature granuleuse de ces dpts rsulte probablement de la capacit des complexes forms dantignes et danticorps multivalents oprer un rarrangement local et constituer un rseau de plus grande taille, visible en microscopie lectronique (3). Un second mcanisme de formation in situ de dpts subpithliaux implique lui aussi des interactions lectrostatiques. Celui-ci repose sur la localisation pralable dun antigne cationique de grande taille, comme la ferritine cationique, en zone subendothliale de la paroi vasculaire. La fixation secondaire de lanticorps mne la formation de larges rseaux subendothliaux (285, 286). Ces complexes peuvent secondairement se dissoudre et les ractifs, anticorps et antignes libres, peuvent individuellement traverser la paroi capillaire pour reformer des agrgats dans lespace subpithlial (285). Ce mcanisme survient probablement lorsque des dpts subpithliaux et subendothliaux coexistent comme chez les patients atteints de nphrite lupique svre (58). 95

Bien que beaucoup dtudes aient menes afin dtablir la localisation initiale des antignes cationiques au sein des glomrules, les antignes anioniques, comme la BSA native et lADN, sont clairement importants dans le dveloppement tant exprimental que clinique des glomrulonphrites complexes immuns (58). Deux mcanismes supplmentaires impliquant la charge lectrique des ractifs immunitaires peuvent ainsi intervenir dans la formation locale des dpts contenant des antignes anioniques : Tout dabord, des molcules dIgG charges positivement peuvent se localiser pralablement au sein des glomrules comme nimporte quelle autre protine cationique et ces anticorps peuvent fixer secondairement des antignes anioniques et donc initier la formation locale de complexe (2, 95). La capacit quont spontanment les IgG cationiques se localiser de cette manire est suggre par des tudes dmontrant la formation locale de complexes constitus de BSA native et danticorps anti-BSA la suite de plusieurs perfusions alternes de solution contenant lantigne seul ou lanticorps seul des reins de rat (88). Des tudes conscutives soutiennent cette hypothse et montrent que des dpts se forment dans ce systme plus largement lorsque la fraction cationique des anticorps est utilise. Des antignes anioniques facilitent peut tre la synthse de tels anticorps cationiques (255). Un second mcanisme, potentiellement trs important dans la localisation dantignes anioniques, implique une interaction initiale entre des protines cationiques non immunitaires, drives de polynuclaires neutrophiles et de plaquettes, avec les sites anioniques glomrulaires. Les antignes anioniques peuvent ensuite se fixer par affinit de charges aux protines cationiques dposes et initier la formation in situ de complexes. Plusieurs protines cationiques peuvent participer ce processus incluant les protines cationiques des neutrophiles, les produits cationiques de lactivation du complment et le facteur 4 plaquettaire (10, 29, 31, 85). Le PAF (pour platelet activating factor) libr par plusieurs cellules inflammatoires au cours de maladie complexes immuns peut avoir des effets similaires en induisant la libration de facteurs cationiques plaquettaires mais aussi damines vasoactives qui augmentent la permabilit glomrulaire et favorisent la localisation dantignes anioniques supplmentaires (30). De la mme manire, il a t montr que le polycation Polythylnimine (PEI) neutralise les sites anioniques ports par la paroi vasculaire et induit une formation augmente de dpts glomrulaires constitus dantignes anioniques (12). Ce polycation augmente la permabilit de la MBG et favorise la formation de dpts msangiaux, subendothliaux et subpithliaux de manire conscutive, tant linjection de ferritine anionique, suivie de linjection danticorps spcifiques, qu linjection de complexes contenant de la BSA native (58).

96

Des preuves en faveur dune perte de sites anioniques glomrulaires pralablement au dveloppement de dpts glomrulaires dtectables lors de modles murins de nphrite lupique suggrent quun tel processus pourrait galement oprer in vivo (36, 181). En effet, lors de LED par exemple, des histones charges positivement peuvent se fixer en zone subpithliale. LADN se fixe par la suite aux histones pralablement plantes . Enfin, la fixation danticorps dirigs contre les histones et lADN conduit la formation de dpts (249).

iii. Capture de complexes immuns circulants

Le fait que des complexes circulants puissent tre passivement pigs en zone subpithliale reste controvers (1). Au cours dtudes rapportant la localisation subpithliale de complexes immuns prforms, lutilisation danticorps de faible avidit et de complexes non covalents constitus dantignes cationiques ne permet pas dexclure une dissociation intravasculaire de lanticorps et de lantigne pralablement leur rassociation in situ en zone subpithliale (95, 100, 101). La localisation subpithliale de complexes immuns covalents cationiques a t ralise dans une seule tude (34). Cependant la neutralisation des charges ngatives glomrulaires a t suggre comme facteur facilitant la localisation subpithliale de complexes immuns prforms (12). Il est intressant de noter au passage que des rcepteurs pour le C3b (CR1) ont t identifis la surface des cellules pithliales glomrulaires (149). Leur rle dans la localisation des complexes na pas encore t tabli (161). Toutefois, les tudes menes sur des modles animaux suggrent que la prsence des CR1 ne joue pas un rle significatif dans la localisation des dpts de complexes au sein des glomrules (254). En conclusion, il semble que les dpts subpithliaux procdent principalement de la formation in situ de complexes immuns sans pour autant que la capture de complexes immuns prforms dans le compartiment circulatoire ne puisse-t-tre exclue. La Figure 24 rcapitule les principaux mcanismes qui peuvent conduire la formation de dpts de complexes immuns en rgion subpithliales glomrulaire. Quen est-il du mcanisme de formation des dpts en zones subendothliale et msangiale ?

c.

Formation des dpts en zones msangiale et subendothliale

Les dpts subendothliaux ne sont pas observs en labsence de dpts msangiaux, et les dpts en ces deux sites se dveloppent sans doute selon des mcanismes similaires (58). Les maladies dues 97

 des dpts msangiaux et subendothliaux incluent le LED, la glomrulonphrite membranoprolifrative (GNMP) de type 1 ainsi quun grand nombre de processus post-infectieux comme lendocardite bactrienne (58). Les dpts msangiaux et subendothliaux peuvent se dvelopper par la formation in situ de complexes ou par la capture de complexes immuns circulants. Figure 24 : Reprsentation schmatique des principaux mcanismes amenant la formation de dpt de complexes immuns en rgion subpithliale, daprs (103)

i. Formation de complexes in situ

Antigne intrinsque glomrulaire : Un premier mcanisme pourrait conduire au dveloppement dune glomrulonphrite associe des dpts msangiaux par laction danticorps spcifiquement dirigs contre un antigne exprim au sein de la matrice msangiale ou par les cellules msangiales elles-mmes. Cependant, aucune preuve exprimentale ou clinique de la prsence de tels anticorps na t rapporte chez lhomme (1). De mme, peu dlments seraient en faveur de la participation dantignes glomrulaires intrinsques dans le processus pathologique des dpts subendothliaux bien que des anticorps 98

dirigs vers plusieurs antignes de surface de cellules endothliales ont t identifis lors de LED et pourraient participer au processus (1). Antigne non glomrulaire plant : Le dveloppement de dpts subendothliaux et msangiaux peut en revanche sexpliquer aisment par la formation in situ des complexes immuns. Ici encore, ltablissement dinteractions lectrostatiques initiales semble jouer un rle majeur. Pour ce qui concerne les dpts subendothliaux, des antignes cationiques de grande taille comme la ferritine cationique, qui ne peuvent que difficilement pntrer la MBG, se localisent en zone subendothliale par ltablissement dinteractions lectrostatiques avec des sites anioniques de la surface interne de la paroi capillaire (285). Laffinit de certaines lectines vgtales, comme la concanavaline A (produite par le haricot sabre ou Canavalia ensiformis), pour les rsidus glucose et mannose de glycoprotines constitutives de la paroi capillaire peut aussi conduire la localisation glomrulaire dantignes. Linjection secondaire danticorps dirigs contre la concanavaline A plante conduit des dpts subendothliaux et au dveloppement dune glomrulonphrite (105). Le msangium, quant lui, est constitu dun rseau de cellules msangiales au sein dune matrice qui, comme lespace subendothlial, est contigu avec le compartiment circulant, spar de celui-ci par une couche de cellules endothliales dont les fenestrations sont denviron 44 nm (145). Le msangium constitue en cela un lieu de dpts pour une grande varit de macromolcules circulantes incluant des antignes potentiels et des complexes immuns prforms. Ces molcules parviennent au sein de la matrice msangiale et sont dgrades localement par des monocytes infiltrs ou par les cellules msangiales elles-mmes. Comme montr par des biopsies, ralises chez des patients lors de LED ou chez des patients sains, ces dpts peuvent tre prsents en des quantits significatives sans causer de lsions glomrulaires apparentes. Le processus par lequel la formation de complexes en zone msangiale conduit au dveloppement dune glomrulonphrite est encore le sujet de nombreuses investigations (1). Des sites chargs ngativement ont t identifis dans le msangium et peuvent jouer un rle dans la localisation et la persistance dantignes cationiques bien que cet effet soit bien moins vident que lors de dpts au sein de la paroi capillaire (49, 144). En effet, des dpts similaires surviennent galement avec des complexes constitus danticorps chargs ngativement suggrant que les interactions lectrostatiques ne sont pas ncessaires la constitution de dpts en zone msangiale (97).

99

Enfin, il est intressant de noter que les FcR ne sont pas exprims par les cellules msangiales humaines au repos. Cependant, la suite dune stimulation avec de lIL-1 ou du LPS, ces cellules synthtisent des ARN messagers codant pour le FcRIII (222). Lexpression de tels rcepteurs la surface des cellules msangiales pourrait ainsi favoriser la localisation et la rtention des complexes en zone msangiale glomrulaire. Les dpts subendothliaux et msangiaux, quils soient forms localement ou par la capture de complexes circulants, sont en contact direct avec des ractifs immunitaires, antignes ou anticorps libres, complexes immuns, prsents dans la circulation. Ainsi, un quilibre dynamique stablit entre les anticorps et antignes circulants et ceux dores-et-dj dposs dans les zones msangiales et surtout subendothliales (1). Les dpts constitus pourront ainsi prolonger leur dveloppement, aggravant dautant les lsions glomrulaires. Cependant, il est noter que les complexes qui nont pas subi le processus de rarrangement pourront tre nouveau solubiliss par ltablissement local dun excs dantigne qui conduit la formation de complexes de plus petite taille et donc plus solubles (174). La fixation supplmentaire de facteurs rhumatodes (89) et danticorps anti-idiotypes (302) aux IgG dores-et-dj prsentent au sein du dpt en cours de formation sont des mcanismes de formation de complexes in situ qui peuvent galement tre voqus.

ii. Capture de complexes immuns circulants

De nombreuses tudes ont montr la capacit de complexes prforms injects par voie intraveineuse tre capturs passivement en zones subendothliale et msangiale (58). Les facteurs qui rgulent le dpt glomrulaire de complexes prforms en provenance de la circulation comprennent des facteurs systmiques, glomrulaires et les proprits des complexes eux-mmes. Les facteurs systmiques comprennent notamment le flux sanguin rnal (voir paragraphe P2II.D.2) et la capacit dpuration des complexes, qui dterminent ensemble le taux plasmatique de complexes et en consquence la quantit de complexes achemins jusquaux reins (58). Les facteurs glomrulaires comprennent le dbit de filtration glomrulaire qui dtermine la propension des complexes en provenance de la circulation pntrer au sein de la paroi capillaire ou du msangium sous leffet de la pression hydrostatique, les charges et la permabilit du glomrule lui-mme, et la fonction dpuration propre au msangium (58). Les proprits des complexes sont galement trs importantes, particulirement leur taille ainsi que les facteurs qui dterminent celle-ci. Dautres proprits des complexes comme leur charge, la capacit activer et fixer le complment influencent galement le dpt et la persistance des complexes au sein des glomrules (58).

100

Ces mmes facteurs influencent galement la capture des complexes en zone subendothliale. A titre dexemple, des dpts subendothliaux et msangiaux sont ainsi observs lorsque des quantits croissantes de complexes de grande taille sont dlivres au glomrule, lors du dpassement des capacits dpuration du systme des phagocytes mononucls (SPM) et de la fonction dpuration msangiale ou dune altration du processus dpuration en gnral (voir paragraphe P2-II.A) (58). Les dpts subendothliaux les plus grands et les plus persistants sont produits exprimentalement par injection de complexes prforms de grande taille constitus danticorps cationiss (96). Enfin, une altration des charges de la paroi capillaire, par fixation massive de substances cationiques par exemple, ainsi quune augmentation de la permabilit vasculaire par rtractation endothliale, favorisent la formation de dpts (11). En cela les complexes immuns circulants seront capts plus facilement par un glomrule endommag que par un glomrule sain. La formation progressive de dpts et le dveloppement secondaire dune glomrulonphrite facilitent donc le dpt de complexes supplmentaires, initiant ainsi un processus auto-aggravant. En conclusion, ltude du rein est particulirement intressante puisquelle permet de mettre en lumire deux mcanismes majeurs qui conduisent tous deux la formation de dpts glomrulaires de complexes immuns. En effet, les dpts observs peuvent tre causs, dune part, par la capture de complexes immuns prforms dans le compartiment circulant, et, dautre part, par la formation in situ de complexes. Dans cette dernire catgorie, lantigne cibl peut tre un autoantigne glomrulaire ou bien un antigne non glomrulaire plant , endogne ou exogne. Dans le cas dune formation in situ, le dpt pralable de lantigne au sein du glomrule rnal est ncessaire, principalement par tablissement dinteractions lectrostatiques avec des composants intrinsques glomrulaires. Mais le dpt initial de lanticorps peut galement survenir.

3. Place de lhypersensibilit de type III dans les glomrulonphrites

Si le premier mcanisme de formation des dpts (capture de complexes prforms) sintgre parfaitement la dfinition classique de lhypersensibilit de type III, le second (formation in situ des complexes) semble plutt rentrer dans la dfinition de lhypersensibilit de type II. Est-il donc possible de distinguer les glomrulonphrites reposant sur une hypersensibilit de type II de celles reposant sur une hypersensibilit de type III ?

101

Au regard des donnes exposes prcdemment, nous pouvons conclure que, si les dpts subpithliaux semblent relever principalement de la formation in situ de complexes, la capture de complexes prforms dans le compartiment circulant ne peut ce stade tre exclue. De mme, si les dpts subendothliaux et msangiaux semblent principalement relever de la capture de complexes prforms, la formation in situ de complexes en ces lieux ne peut tre exclue. Ainsi, il semble raisonnable de considrer que ces deux mcanismes de formation des complexes immuns, qui ne sexcluent par ailleurs pas mutuellement, agissent en parallle au sein du glomrule rnal. En effet, un complexe prform captur au sien du glomrule pourra tout autant se dvelopper par accrtion dantignes et danticorps libres que de complexes immuns prforms en provenance du compartiment circulant. Un raisonnement analogue peut tre formul pour les complexes immuns forms in situ. De plus, la sparation traditionnelle des glomrulonphrites en deux groupes avec, dune part, les glomrulonphrites mdies par des anticorps dirigs contre des constituants de la MBG (HSII), amenant des dpts linaires en immunofluorescence, et celles mdies par des complexes immuns circulants emprisonns au cours du processus de filtration (HSIII), amenant des dpts granuleux (Figure 25), est trs simplifie. En effet, la fixation danticorps dirigs contre des antignes intrinsques glomrulaires peut conduire la formation de dpts linaires mais aussi granuleux. De plus, les dpts granuleux peuvent rsulter de la fixation danticorps des antignes plants (HSII), qui se localisent pralablement au sein du glomrule, autant que de la capture de complexes immuns circulants (HSIII) (1). En consquence, si lobservation dun dpt linaire permet didentifier la prsence de complexes constitus dantignes intrinsques glomrulaires, qui restent relativement rares, et donc une glomrulonphrite reposant sur une HSII, un dpt granuleux, en revanche, ne permet absolument aucune conclusion quant au mcanisme qui a prsid sa formation et rares sont les cas o lantigne peut tre identifi (1, 58).

Ainsi, ce qui compte le plus lors du dpt de complexes au sein des glomrules est la localisation des dpts plus que le mcanisme par lequel ces derniers sont constitus (voir paragraphe P3-III.C). En cela, une glomrulonphrite dpts granuleux de complexes ne peut raisonnablement tre associe une HSII ou une HSIII puisque cette distinction relative au mcanisme de formation des dpts ne trouve aucun cho histologique ou clinique. En consquence, et compte tenu du contexte historique, les dpts procdant de 102

complexes prforms et/ou forms in situ avec fixation pralable dun antigne non glomrulaire ( plant ), sont classiquement traits dans la problmatique des hypersensibilits de type III.

Figure 25 : Mise en vidence de dpts glomrulaires de complexes immuns par immunofluorescence, daprs (172)

Limage de gauche reprsente des dpts granuleux glomrulaires observs chez un patient atteint dun LED (HSIII) ; limage de droite permet de visualiser des dpts linaires et rguliers chez un patient atteint dun syndrome de Goodpasture caractris par la production danticorps anti-MBG (HSII). Les dpts sont rvls par lutilisation danticorps anti-Ig coupls la fluorescine.

103

C.

Impact des proprits intrinsques des complexes immuns dans leur dpt
1. La taille des complexes immuns

Comme nous lavons voqu prcdemment, la taille des complexes immuns influe sur leur potentiel pathogne et dpend principalement du ratio entre la concentration en antignes et en anticorps spcifiques (voir paragraphe P1-I.D).

a.

Intensit de la rponse humorale

A titre exprimental (75), des injections intraveineuses quotidiennes dune petite quantit dune protine antignique, la BSA, ont t ralises chez des lapins. Le niveau des rponses anticorps a t mesur chez ces animaux qui ont t diviss en trois groupes en fonction de lintensit de leur rponse immunitaire. Dans le premier groupe, une synthse danticorps en excs a t constate. La protine trangre a t fixe et limine de la circulation de manire rapide ; des complexes immuns circulants nont pas t retrouvs chez ces lapins. Dans le second groupe, la production danticorps tait faible et insuffisante pour neutraliser lantigne ; les complexes immuns circulants nont pas t dtects. Dans le troisime groupe, la synthse danticorps a t plus leve que dans le second groupe mais plus faible que dans le premier. Elle ne suffisait pas fixer toutes les protines trangres mais tait suffisante pour former des complexes immuns solubles qui persistaient dans la circulation sanguine le temps dune journe. Chez la plupart des lapins de ce dernier groupe (soit 87,8%), une glomrulonphrite sest dveloppe. Les rsultats de cette exprimentation montrent que lintensit de la rponse immune humorale constituait le principal facteur responsable dune maladie srique. Nous pouvons remarquer quun ratio de concentration en faveur dun lger excs en antignes semble reprsenter les circonstances les plus dltres pour lorganisme. Cet lment permet dexpliquer, de manire raisonnable, le fait que des ractions pathologiques soient observes chez certains individus seulement (257). Par la suite, des gnes de rponses immunitaires (Ir-genes) ont t dcouverts (14). Ces derniers dterminent la ractivit immunologique individuelle un antigne particulier. Ainsi, une relation entre le contrle gntique de la rponse immunitaire et lhypersensibilit de type III a t tablie.

104

b.

Influence sur lefficacit de lpuration des complexes

Les agrgats de grande taille, dont le rseau dpasse Ag2-Ac2 (suprieurs 19S) ou dont la masse est suprieure 1.500 kDa, sont en gnral purs rapidement du sang, notamment au niveau des cellules phagocytaires du systme rticuloendothlial hpatique (90). Cest ainsi que lun des facteurs essentiels de lpuration de ces gros complexes est le flux sanguin hpatique (99). En effet, les grands complexes : ont plus d'avidit pour les rcepteurs de Fc, notamment ceux prsents la surface des cellules phagocytaires hpatiques et splniques ; activent et fixent plus facilement le complment, ce qui favorise leur liaison avec le rcepteur CR1 des globules rouges et leur limination ; sont librs plus lentement des globules rouges sous l'action du facteur I.

A linverse, les complexes de petite taille, dont la masse est comprise entre 500 kDa et 700 kDa, ont tendance rester dans la circulation plus longtemps (Figure 26). Cependant, ils activent peu efficacement le systme du complment et interagissent faiblement avec les FcR des leucocytes (257). Ces proprits ont tendance attnuer leur pouvoir pathogne intrinsque. Toutefois, le dpt progressif de complexes de petite taille au sein des tissus conduit une augmentation progressive de la taille du dpt, qui acquerra in fine la capacit dactiver efficacement le complment et dinduire des lsions tissulaires. Figure 26 : Cintique dlimination des complexes immuns par les phagocytes mononuclaires selon leur taille, daprs (172)

105

Pour ces mmes raisons, il semblerait que les complexes de taille intermdiaire, dont la masse est comprise entre 800 kDa et 1.500 kDa, prsentent galement une forte propension induire des lsions tissulaires (45). En effet, ces derniers sont limins moins efficacement de la circulation que les agrgats de grande taille mais ont la capacit de fixer et dactiver le complment. En conclusion, bien que les complexes de taille intermdiaire, forms au voisinage de lquivalence, soient thoriquement les plus pathognes, ce sont les complexes immuns de petite taille, forms en excs d'antigne, qui sont dans l'ensemble les plus pathognes. Ils sont solubles, se fixent difficilement aux rcepteurs CR1 des globules rouges, persistent ainsi dans la circulation sanguine plus longtemps, et ont secondairement tendance se dposer dans les tissus, particulirement dans les reins, pour constituer des dpts dont la taille est croissante. (99)

c.

Influence sur la localisation tissulaire des complexes

Ce point est particulirement bien illustr par la localisation des dpts au sein du cortex rnal (Figure 27) : Les complexes de grande taille, dont la masse est suprieure 1.500 kDa, sont en gnral aisment limins par le systme rticulo-endothlial et, en cela, ne cause pas datteinte glomrulaire chez un sujet sain. Cependant, la faveur dune altration de la fonction dpuration, la persistance de ces complexes dans le compartiment circulant les rend particulirement pathognes. Leur taille ne leur permet pas de traverser la MBG, ainsi, ils s'accumulent en position subendothliale, de manire adjacente au msangium et dans la matrice msangiale. On ne trouve pas de dpt subpithlial (109). Ds lors, nous comprenons que les complexes forms partir dIgM ne sont pas non plus retrouvs en zone subpithliale. Les complexes de taille intermdiaire, dont la masse est comprise entre 800 kDa et 1.500 kDa, sont capts par le msangium, et en position subendothliale sils sont en quantit importante dans la circulation (90). Les petits complexes, dont la masse est comprise entre 500 kDa et 700 kDa, peuvent traverser la MBG et sont retrouvs sur le versant pithlial. Dans les conditions physiologiques, chez l'homme comme chez l'animal, les molcules de poids molculaire infrieur 66 kDa vont pouvoir traverser la MBG, mme si leur charge globale est neutre ou ngative. Toutefois, les molcules cationiques de poids molculaire allant jusqu' 900 kDa peuvent la franchir sans problme (211).

106

Ainsi, des petits complexes traversent la MBG dautant plus facilement quils possdent des charges positives (90). Figure 27 : Dpt des complexes immuns au sein du glomrule rnal en fonction de leur taille, daprs (172)

d.

Rarrangement des complexes au sein des tissus

Quels que soient les mcanismes qui amnent la fixation de complexes immuns au sein des tissus, leur persistance est ncessaire linduction des lsions et ncessite le rarrangement des rseaux antigne-anticorps en agrgats de plus grande taille qui pourront tre visualiss en immunofluorescence et en microscopie lectronique (3, 175). Si lon sintresse au rein, les dpts en zones subendothliale et msangiale peuvent tre observs en microscopie lectronique et sont dune taille bien suprieure aux complexes immuns injects aux animaux de laboratoire (161). Ceci suggre quaprs leur dpt initial au sein des glomrules, les complexes immuns subissent un processus de rarrangement conduisant la formation de dpts de taille suprieure. Lorsque des complexes immuns lis de manire covalente ont t injects des souris, seuls des dpts transitoires sont observs au sein des glomrules par immunofluorescence et des dpts denses, tendus, ne se dveloppent pas (175). En effet, ces complexes covalents ne pouvaient subir le processus de rarrangement. Lutilisation de tels complexes a ainsi permis de 107

montrer que la persistance des complexes au sein des tissus tait ncessaire la survenue du processus de rarrangement. En revanche, lorsque ces mmes complexes sont prpars de manire non covalente et administrs des souris, des dpts visibles en microscopie lectronique se forment et persistent (175). Ces tudes suggrent que de larges rseaux antigne-anticorps se forment au sein des glomrules de manire conscutive la concentration locale des complexes immuns. Cette concentration, rsultant de la fonction de filtration assure par les glomrules et dventuelles interactions des complexes avec des structures glomrulaires, notamment par affinit de charges, conduit au rarrangement local des complexes par dplacement de lquilibre, amenant la formation de rseaux de plus grande taille qui prcipitent. Lorsque le rarrangement des dpts survient, le dpt devient plus durable et conduit lactivation de mcanismes effecteurs dltres pour le tissu (96).

2. Affinit de lanticorps pour lantigne

Laffinit de la liaison anticorps-antigne est un autre paramtre qui influence la pathognicit des complexes immuns. Des expriences ont t menes partir de plusieurs lignes de souris se diffrenciant par leur capacit synthtiser des anticorps de faible ou de forte affinit pour la mme protine antignique, la BSA. Des administrations quotidiennes de BSA tous les animaux pendant plus de 40 jours ont amen la formation de complexes immuns circulants et leur dpt dans les reins (73). Cependant, les concentrations sanguines en complexes immuns chez les souris synthtisant des anticorps de faible affinit dpassaient de manire significative celles dtectes chez les animaux produisant des anticorps de haute affinit. De plus, laccumulation de dpts dans les reins a t suprieure dans le premier groupe par rapport au second. Paralllement, une altration du fonctionnement rnal a t dcele seulement chez les souris produisant des anticorps de faible affinit. Cette observation peut sembler surprenante au premier abord. En effet, nous avions prcdemment dmontr (voir paragraphe P2-I.B.2) que ltablissement de liaisons de faibles affinits entre antignes et anticorps est prfrable pour la solubilisation des complexes. Nous pouvons cependant expliquer cette apparente contradiction de la manire suivante : Pour rappel, le complment constitue le garant de la solubilit des complexes au sein de lorganisme. Ainsi, la prsence dun systme du complment fonctionnel favorise la formation de complexes solubles de petite taille. De plus, la prsence de complment au sein du rseau Ag-Ac permet la fixation des complexes la surface des rythrocytes mais aussi le transfert efficace des

108

complexes aux cellules phagocytaires. Ainsi, un dficit en complment conduit la formation de complexes immuns de grande taille, peu solubles, qui persistent dans le compartiment circulant. Cest ainsi que des maladies complexe immuns sont susceptibles de se dvelopper chez des individus hypocomplmentmiques (voir paragraphe P2-II.A.1). En revanche, chez un individu sain, normo-complmentmique, il a t montr que les complexes de grande taille sont plus facilement purs de lorganisme par rapport aux complexes de petite taille. En effet chez ces individus les complexes de grande taille sont opsoniss par le C3b et peuvent tablir un nombre important dinteractions avec les CR1 et les FcR, ce qui facilite grandement leur fixation aux rythrocytes dans un premier temps, et aux cellules phagocytaires dans un second temps (voir paragraphe P2-II.C.1.b). A linverse les petits complexes en sont incapables, persistent dans le compartiment circulant, et peuvent se dposer dans les tissus. En conclusion, chez un individu sain les complexes immuns seront dautant plus pathognes que leur taille sera petite. Chez un individu hypocomplmentmique, linverse, les complexes seront dautant plus pathognes que leur taille sera grande. Ainsi la fonction dinhibition de la prcipitation et de solubilisation des complexes assure par le complment, reconnue par ailleurs comme tant une de ses fonctions principales, constitue-t-elle vraiment un avantage biologique ? Il semblerait que la prsence de complment au sein des rseaux anticorps-antignes protge lorganisme plus par le transport et linternalisation des complexes que par le maintien de leur solubilit. Autrement dit, il semble que cela soit la persistance des complexes dans le compartiment circulant, avant leur taille, qui dtermine le pouvoir pathogne des complexes. En cela, la fonction dpuration des complexes mise en uvre au sein de lorganisme conduit la formation de complexes de taille plus faible, moins faciles capter par les rythrocytes, mais qui, sils se dposent, entranent des consquences tissulaires moins lourdes ; plutt qu des complexes de plus grande taille plus faciles capter mais dont lchappement au processus dpuration conduit des consquences tissulaires plus dltres. Pour reprendre des termes pidmiologiques, il nous est possible de dfinir dune part, le danger comme les lsions tissulaires induites en cas de dpt, et dautre part, le risque , ou probabilit de survenue du danger, comme la probabilit pour le complexe dchapper au processus dpuration et de se dposer au sein des tissus. Dans ce systme, le processus dpuration privilgie, par la formation de complexes de petite taille, un danger plus faible avec un risque plus fort et non pas un danger plus fort avec un risque plus faible qui accompagnerait la production de complexes de plus 109

grande taille. De manire plus image, il est prfrable pour lorganisme de laisser circuler un plus grand nombre de petits dlinquants (les complexes de petite taille) quun nombre faible de grands trafiquants (complexes immuns de grande taille) ! Le systme du complment au sein de lorganisme semble rappeler la manire dont une socit organise sa propre dfense. Si lon revient la problmatique de laffinit des anticorps, une faible affinit conduit la formation de complexes de plus petite taille qui, au regard de ce qui prcde, sont les plus pathognes chez un individu sain. Des anticorps de forte affinit, quant eux, conduiront la formation de complexes de plus grande taille, qui en dpit dune solubilisation moins aise, seront plus facilement capts la surface des cellules effectrices et seront moins pathognes. Des tudes ultrieures ont montr que chez certaines souris produisant des anticorps de faible affinit et spcifiques de la HSA (pour human serum albumin), la mise en uvre dune raction immunitaire tait accompagne dune augmentation de la constante daffinit des anticorps spcifiques synthtiss (74). Une slection ultrieure a permis la constitution dune ligne danimaux caractrise par une rponse immunitaire non accompagne par cette augmentation de laffinit de lanticorps. Cette ligne, et plus particulirement les mles, a montr une plus grande susceptibilit dvelopper des maladies complexes immuns. Ainsi, ladministration chronique dantignes aux mles a caus 52% de ltalit et 81% de ces animaux souffraient de glomrulonphrite (74). Par comparaison, ces paramtres chez les mles produisant des anticorps de haute affinit et traits avec la mme dose dantignes ont t respectivement de 6% et 19%. Les auteurs ont aussi trouv quun manque de maturation daffinit tait associ un faible niveau de production danticorps spcifiques. Les animaux concerns formaient donc les complexes immuns en excs dantignes. Par ailleurs, il est possible quun dfaut gntique, conduisant la production prfrentielle danticorps de faible affinit, puisse favoriser la formation de petits complexes et ainsi, une maladie dpt de complexes immuns. La maturation daffinit dpend des mutations somatiques et de la slection des cellules B lintrieur des centres germinatifs la suite de la liaison lantigne. Ce processus est de loin plus efficace quand lantigne, ou les complexes immuns qui stimulent les cellules B, sont couverts de complment. Des observations rcentes indiquent que lun des mcanismes en cause dans le dfaut de maturation daffinit des anticorps synthtiss serait linsuffisance dapport des complexes dans les centres germinatifs. (172)

110

En effet, ltape essentielle dans laction du complment dans le dveloppement dune rponse immunitaire spcifique est lattachement covalent de C3b lantigne. Lantigne opsonis par C3b peut tout dabord tre capt par les cellules exprimant CR1, puis, aprs la dgradation du C3b en iC3b, tre transfr aux cellules phagocytaires exprimant CR3, puis aux cellules exprimant CR2 ; ces dernires correspondant aux lymphocytes B. Les cellules dendritiques folliculaires expriment les trois types de rcepteurs et peuvent ainsi capter lantigne tous les stades de dgradation du C3b. (38) Le dpt de C3b sur lantigne a pour consquence daugmenter, de manire marque, la rponse secondaire de lorganisme vis--vis de cet antigne. En effet, laddition de deux trois molcules de C3d, ligand spcifique du CR2, par molcule dantigne diminue de 100 1000 fois la dose dantigne ncessaire pour linduction dune rponse secondaire. Le complment interviendrait dans la rponse immunitaire adaptative de deux faons : tout dabord, en abaissant le seuil dactivation des lymphocytes B par lantigne et, ensuite, en prolongeant la rtention de lantigne sur les cellules dendritiques folliculaires ce qui permet une prsentation plus efficace de lantigne aux cellules B. La liaison de lantigne opsonis par C3d aux cellules B dans les follicules lymphodes, via le BCR et le CR2, augmente fortement la slection positive des cellules B qui ragissent lantigne et leur maturation ultrieure. Leur activation, avec laide des cellules T auxiliaires, leur prolifration et leur diffrenciation terminale en plasmocytes sont par la suite galement stimules (38). En cela, le complment stimule la production dune grande quantit danticorps prsentant une forte affinit pour lantigne. Cela conduit la formation de rseaux antignes-anticorps relativement stables et de grande taille, qui sont facilement limins de la circulation sanguine.

3. Charges de lanticorps et de lantigne

Laffinit dun antigne pour un tissu semble reposer sur ltablissement de forces dinteractions de type lectrostatique. Ainsi, les charges lectriques de l'antigne et de l'anticorps semblent jouer un rle important dans la localisation des dpts au sein de lorganisme. En effet, les interactions lectrostatiques vont promouvoir ltablissement dinteractions initiales et par la suite le dpt des complexes immuns. Ce dpt sera favoris et la fixation sera plus durable pour les complexes de taille importante. Dans le LED, par exemple, les complexes immuns se localisent principalement au niveau des reins, des articulations et de la peau la jonction dermo-pidermique, alors que dans l'arthrite rhumatode, bien qu'il existe des complexes immuns circulants, le rein est habituellement pargn et ce sont les

111

articulations qui sont touches (172). Il est probable que l'antigne du complexe joue un rle dans cette spcificit d'organe. Un modle exprimental a t mis au point chez la souris : dans cette espce, linjection dendotoxine augmente la permabilit vasculaire et induit une destruction cellulaire avec libration dADN qui va se dposer sur le collagne de la MBG (Figure 28.1). Lendotoxine provoque aussi une activation polyclonale des cellules B avec synthse danticorps anti-ADN et dautoanticorps antiIgG appels facteurs rhumatodes (FR). Les anticorps anti-ADN se lient lADN fix et forment ainsi des complexes immuns locaux ( Figure 28.2). Le FR a une faible affinit pour lIgG monomrique, mais se lie avec une grande avidit au complexe ADN/anti-ADN (Figure 28.3). Ce qui entrane une formation supplmentaire de complexes in situ (172). Figure 28 : Modle dHSIII induite par injection dendotoxine chez la souris, daprs (172)

Les interactions lectrostatiques qui peuvent stablir entre des antignes et des composants tissulaires favorisent notamment la formation de complexes immuns directement au sein des glomrules rnaux (voir paragraphe P2-II.B). Toutefois, de telles forces dinteraction peuvent tout autant favoriser la localisation de complexes prforms. Pour rappel, il existe de fortes charges anioniques au niveau de la membrane basale des glomrules rnaux, ceci peut provoquer ce niveau le dpt de complexes constitus dantignes ayant une charge oppose (cationique). Les charges ngatives de la MBG rsultent de la prsence de sialoprotines sur la surface des cellules endothliales et des podocytes, ainsi que de la prsence de 112

protoglycanes hparan sulfate contenant une protine centrale et des chanes anioniques latrales de glycosamino-glycanes. Ces protoglycanes sont rgulirement disposs au sein des diffrentes couches de la membrane basale glomrulaire. De mme, le msangium synthtise des protoglycanes hparan sulfate. Le rle des sites anioniques est de contribuer au maintien d'une filtration glomrulaire normale, en empchant le passage des protines plasmatiques, de nature polyanionique (211). Lidentification de sites chargs ngativement sur la MBG a constitu le point de dpart dtudes visant identifier leffet des charges molculaires sur la fixation de complexes immuns dans les reins. A titre exprimental, la BSA a t chimiquement modifie afin dobtenir des BSA cationiques et anioniques (21). Ces protines modifies ont t injectes des lapins par voie intraveineuse. Chez les animaux traits avec de la BSA cationique, des dpts granulaires diffus constitus dIgG, de C3 et de BSA ont t observs dans les parois capillaires. Il a pu tre montr par la suite que les agrgats contenant la BSA cationique se sont principalement localiss en zone subpithliale, plus prcisment le long de la lamina rara externa de la membrane basale glomrulaire. Chez les animaux traits avec les BSA naturelle et anionique, des complexes immuns se sont prfrentiellement localiss dans le msangium. Lintensit de la protinurie chez les animaux traits avec de la BSA cationique a t cinq fois suprieure celle mesure chez les lapins traits avec de la BSA naturelle ou anionique. Des rsultats identiques ont t observs dans lespce canine (133). Pour les mmes raisons, la charge nette de l'anticorps, prise indpendamment, est importante. Des anticorps, chargs positivement et lis des antignes de charge ngative, vont quand mme pouvoir se dposer dans les glomrules en zone subendothliale et y rester lors de modles exprimentaux chez la souris (96). Mais un tel phnomne nest pas observ uniquement au sein des glomrules rnaux. Des tudes menes avec des complexes immuns prforms suggrent que des interactions lectrostatiques contribuent la formation de complexes la jonction dermo-pidermique (141). Tout dabord, il a t montr par immunofluorescence que des anticorps chargs positivement se fixent seuls au niveau de la jonction dermo-pidermique chez des souris ; ces observations soulvent lhypothse quune formation in situ des complexes peut survenir avec le dpt initial, par exemple, danticorps dirigs contre lADN et la formation secondaire de complexes avec de lADN. Par ailleurs, des complexes de grande taille prpars avec des anticorps chargs positivement se dposent ce niveau. Les complexes ainsi dposs persistent plus longtemps que les anticorps chargs positivement seuls. Enfin, des injections chroniques dantignes cationiss entranent des dpts au sein de la jonction 113

dermo-pidermique alors que linjection de ces mmes antignes non modifis selon le mme protocole (frquence et dose) nentrane pas la formation de dpts (142).

4. Classe de lanticorps
Lisotype de limmunoglobuline constitutive du complexe influe sur la taille, la localisation et lefficacit de la fonction dpuration du complexe. Chez les patients atteints de lupus rythmateux dissmin, la distribution des classes et des sousclasses d'anticorps anti-ADN varie en fonction de l'ge et du sexe. De mme, chez les souris NZB/NZW, les anticorps de classe IgG2a remplacent progressivement les IgM, qui sont majoritaires au dbut de la maladie. Cette transition se produit plus tt chez les femelles que chez les mles et concide avec l'apparition de la maladie rnale, ce qui souligne l'importance de lisotype dans le dpt tissulaire des complexes immuns (Figure 29) (172). Figure 29 : Impact de la commutation isotypique des anticorps, dIgM IgG2a dans lapparition spontane de la maladie complexes chez des souris NZB/NZW, daprs (172)

114

Pour information, les souris hybrides NZB/NZW constituent un modle animal de maladie spontane due des complexes immuns qui prsente de fortes similitudes avec le LED humain (161). Ces animaux produisent une grande diversit d'autoanticorps antinuclaires, principalement anti-ADN et forment des quantits importantes de complexes immuns circulants. Ils dveloppent en quelques semaines une glomrulonphrite et des lsions neurologiques correspondant au dpt dans le rein et dans les plexus chorodes de ces complexes. L'atteinte rnale observe constitue un trs bon modle pour ltude des nphropathies lupiques observes dans l'espce humaine. Les IgM forment des complexes de grande taille et activent fortement le systme du complment. Les IgG forment frquemment des complexes de plus petite taille. De plus, la capacit dactivation du complment des IgG humaines est leve pour les IgG3 et IgG1 et faible pour les IgG2. Les complexes immuns constitus dIgG4, quant eux, nentranent pas lactivation du complment (132). Compte tenu du rle central jou par le systme du complment au cours du processus dpuration des complexes immuns, on comprend bien que lisotype de lanticorps, qui constitue le complexe, porte consquences. Les complexes immuns constitus dIgA ne peuvent pas activer le complment par la voie classique mais peuvent activer le complment par la voie alterne (153). Ainsi, il a t montr que le niveau de solubilisation des complexes constitus dIgA est significativement plus bas que celui de complexes forms avec dautres isotypes (139). De plus, lefficacit de leur liaison aux rythrocytes est plus basse que celle observe pour des complexes constitus dIgG de mme taille. Il en rsulte une puration peu efficace des complexes immuns circulants constitus dIgA (294). En effet, les complexes immuns qui contiennent des IgG (IgG1 et IgG3), mais aussi des IgM, activent dune part, la voie classique du complment et peuvent ainsi se lier au CR1 des rythrocytes. Dautre part, ils peuvent se lier aux rcepteurs Fc des macrophages (FcR pour les IgM et FcR pour les IgG). Par ailleurs, il a t pralablement mis en vidence quune puration efficace des complexes requiert la fixation aux rythrocytes via la liaison aux CR1 prsents leur surface puis linteraction avec les FcR et les CR des cellules phagocytaires rsidant au sein des organes dpuration. Les IgA, tout comme les IgE, nactivent pas la voie classique, et peuvent seulement se lier aux rcepteurs de Fc des cellules phagocytaires (FcR pour les IgA, FcR pour les IgE) (172). Ainsi, le prlvement dans le foie et la rate des complexes immuns circulants constitus dIgA, administrs dans le compartiment circulatoire de babouins, est moins efficace que celui de complexes constitus dIgG et des dpts de complexes constitus dIgA ont t trouvs dans les poumons et les reins de ces singes (257).

115

En ralit, les complexes constitus dIgA sont purs par un mcanisme diffrent des autres isotypes, permettant de limiter leur prsence dans le compartiment circulatoire. Les antignes en provenance du tractus gastro-intestinal forment des complexes avec des IgA dimriques scrtes localement. Ces complexes sont transports par la suite aux sinusodes hpatiques o ils adhrent la surface des hpatocytes, via leurs fragments Fc (254). En effet, plusieurs tudes menes chez la souris et chez lhomme accordent au foie un rle majeur dans lpuration des complexes constitus dIgA (71). Aprs leur internalisation, les dimres dIgA sont scrts par les hpatocytes dans la bile. Un dpassement des capacits dpuration, dorigine primaire (altration de la fonction dpuration) ou secondaire (saturation de la fonction dpuration), lors dinfections chroniques des muqueuses par exemple, comme un dfaut dexcrtion biliaire des IgA polymriques (principalement dimriques), conduira leur persistance dans la circulation sanguine et leur dpt secondaire dans les glomrules rnaux notamment (39, 254). Il semblerait que de tels mcanismes soient impliqus lors de nphropathies IgA qui se caractrisent par la formation de dpts constitus dIgA en zone msangiale glomrulaire. Des complexes immuns circulants constitus dIgA ont t impliqus dans le processus pathognique. Notons cependant, que les IgA sont prsentes naturellement dans le sang sous forme de monomres et de polymres. La forme monomrique reste cependant la principale forme srique et reprsente 87% des IgA sriques totales (39). La capacit de complexes constitus dIgA monomriques et polymriques se dposer dans les reins a t compare (230). Il a ainsi t montr que les IgA monomriques ne sont pas en mesure de constituer au sein des tissus de larges rseaux de complexes pathognes, par opposition aux IgA polymriques. Il a galement t suggr quune augmentation de la teneur srique en IgA monomriques chez des sujets manifestant une rponse IgA systmique pourrait mme limiter la formation de complexes de grandes tailles constitus dIgA polymriques, limitant ainsi leur pouvoir nphritognique (39). Il est toutefois surprenant que les IgA monomriques, qui possdent tout de mme deux sites de liaisons lantigne au mme titre que les IgG, nexpriment pas une pathognicit comparable. Il semblerait que des considrations structurales amnent les IgA monomriques, bien que bivalentes dun point de vue thorique, se comporter in vivo comme des anticorps monovalents (39). La liaison dun antigne lun des sites de liaison empcherait par encombrement strique laccs au site voisin, limage de ce qui est observ en pratique pour les IgM. En cela, les IgA monomriques ne sont pas des anticorps prcipitants et ne sont pas en mesure de participer au sein des tissus la formation de rseau Ag-Ac. Le fait que les formes polymriques perdent leurs capacits de prcipitation et dagglutination lorsquelles sont ramenes sous forme monomrique est en faveur de cette thorie. 116

D. Rle des facteurs tissulaires locaux dans la localisation des complexes immuns
Un certain nombre de paramtres anatomiques et physiologiques des tissus influent sur le dpt des complexes immuns. Il existe en effet des similarits ultra structurales et fonctionnelles entre la synoviale, le glomrule, le plexus chorode et le corps ciliaire parmi lesquelles la prsence dun endothlium fenestr, dune pression vasculaire leve, dun rseau capillaire dense et la production dun ultrafiltrat (254).

1. Facteurs anatomiques
a. Rle dune structure vasculaire fenestre

Les endothliums vasculaires sont diviss en trois catgories : les endothliums continus, fenestrs, et discontinus (ou sinusodaux) (254). Un endothlium continu recouvre la paroi de toutes les artres, capillaires et veines des muscles squelettiques, cardiaques et lisses. Il est galement prsent dans les vaisseaux sanguins des poumons, de liris et de la rtine. Le transport de molcules de haut poids molculaire travers cet endothlium, relativement impermable, survient par pinocytose. Les complexes immuns ne peuvent pas traverser directement cette structure, moins de dclencher la formation de lsions inflammatoires locales. Un endothlium fenestr varie plus largement dans son paisseur que lendothlium continu. Il prsente de nombreuses fenestrations de 300 1000 de diamtre qui empchent le passage des lments figurs du sang vers le compartiment extravasculaire. En revanche, elles nopposent quasiment aucun obstacle au passage des protines. Les glycosamino-glycanes, encore appeles sialoprotines, contenant des acides amins dicarboxyliques (acides glutamique et aspartique) et de lacide sialique, entourent les cellules endothliales. Au pH sanguin (7.4) ou urinaire (5 8), les rsidus carboxylique et sialique sont ioniss et chargs ngativement (Figure 30). Les sialoprotines vont repousser les molcules charges ngativement comme lalbumine. Cette barrire lectrique permet ainsi le passage de molcules neutres ou anioniques de petite taille ou de molcules cationiques de taille suprieure. Les capillaires fenestrs sont particulirement nombreux dans les glomrules rnaux. Un endothlium fenestr est galement prsent au niveau du corps ciliaire, de la

117

membrane synoviale et du plexus chorode. Ces tissus procdent une ultrafiltration du plasma. Ainsi, la prsence de fenestrations facilite le transport de molcules travers la paroi endothliale. Les endothliums fenestrs semblent tre importants dans la capture des complexes immuns circulants par les tissus (47). Cependant, les poumons et liris, qui ne prsentent pas de vaisseaux fenestrs, sont aussi la cible de dpts de complexes (102, 130). Figure 30 : Reprsentation des formes ionises des acides aspartique et glutamique en fonction du pH

Un endothlium discontinu est retrouv dans les capillaires du foie, de la rate et de la moelle osseuse. Il se caractrise par la prsence de pores intercellulaires et dune membrane basale (MB) interrompue ou absente. Ces paramtres permettent le passage de cellules et de grandes molcules au niveau de surface dchange. A ce titre, les complexes immuns traversent librement cette structure sans sy dposer.

b.

Rle dune membrane basale

On distingue deux types de membranes basales (MB) : les MB vasculaire et pithliale (254). La MB vasculaire est une couche continue de 300 500 dpaisseur applique proximit de la face externe de lendothlium capillaire. La membrane basale vasculaire soppose physiquement au passage des molcules denviron 100 de rayon (10 nm). Les molcules dont la masse est infrieure 118

 70 kDa traversent facilement. La membrane basale contient galement des sites anioniques dont la prsence diminue la permabilit aux molcules anioniques et augmente la permabilit aux molcules cationiques. Ainsi, les grosses molcules anioniques, la ferritine par exemple (480 kDa), ou des complexes immuns chargs ngativement et/ou de haut poids molculaire (suprieur 700 kDa) ne peuvent pas la pntrer et se logent contre la MB, en rgion subendothliale. La couche interne lastique des artres restreint aussi le passage des molcules dont le poids molculaire est lev (suprieur 19S). La MB pithliale peut tre prsente ou absente et sa relation anatomique la MB vasculaire varie dun tissu lautre. Les glomrules rnaux, les poumons, la peau, le corps ciliaire et le plexus chorode ont tous une MB pithliale alors que la synoviale nen possde pas. La MB pithliale joue le rle dune seconde barrire et soppose l encore au passage des molcules de grande taille. Les fentes de filtration de 200 500 formes par les pdicelles des podocytes, par exemple, permettent le passage de molcules dont le diamtre est infrieur 90 (9nm). Le feuillet viscral est lui aussi recouvert de sialoprotines charges ngativement, ce qui tend inhiber le passage de macromolcules charges ngativement. On retrouve aussi les sialoprotines dans les pores de filtration. Ainsi, les complexes immuns de grande taille, particulirement les complexes ADN/antiADN, ont tendance se dposer sur la MB pithliale. Bien sr, sous rserve quils aient pu traverser pralablement une ventuelle membrane basale vasculaire. Cependant des tissus sans MB pithliale comme la synoviale sont aussi sujets des dpts de complexes immuns.

c.

Rle dune matrice interstitielle

Tant la quantit que la qualit de matrice interstitielle varie dun tissu lautre. Il ny a pas de matrice lintrieur de la membrane basale glomrulaire mais une petite quantit de matrice msangiale est prsente au centre du glomrule. En revanche, la synoviale, le corps ciliaire et la peau ont une matrice tendue. Au sein de la membrane synoviale et dans le liquide synovial, le mucopolysaccharide majoritairement prsent est lacide hyaluronique qui se comporte comme un tamis molculaire. En fonction de leur taille et de leur forme, les protines peuvent tre exclues de cette matrice. Chez lhomme, les protines injectes par voie intraveineuse traversent la synoviale pour arriver dans le liquide synovial un degr inversement proportionnel leur poids molculaire. Lacide hyaluronique interagit avec les protines solubles comme les complexes immuns forms en excs dantignes et conduit leur prcipitation. Cet effet est aboli par un traitement la hyaluronidase. In vivo, les complexes immuns solubles qui atteignent la synoviale peuvent de manire similaire prcipiter en dehors du lit vasculaire et rester localiss (254).

119

2. Facteurs physiologiques
a. Modulation de la permabilit vasculaire

L'augmentation de la permabilit vasculaire est probablement le facteur le plus important dans le dpt tissulaire des complexes. En effet, les amines vasoactives comme l'histamine ou la srotonine augmentent la permabilit vasculaire et semblent tre des facteurs dterminants dans le dpt de complexes immuns. Les cellules susceptibles de librer ces amines comme les plaquettes, les basophiles, les mastocytes, lorsqu'elles sont actives, jouent un rle important dans la survenue de lsions secondaires au dpt de complexes immuns dans les tissus (99). A ltat normal les complexes immuns nentrent pas en contact avec lendothlium vasculaire. En 1963, Cochrane a utilis des cochons dInde pour dmontrer exprimentalement que les complexes immuns circulants ont besoin dune augmentation de la permabilit vasculaire pour se dposer (44). Dans ce but, des complexes immuns ont t tout dabord injects dans la circulation sanguine dun certain nombre danimaux. Linjection conscutive dhistamine par voie intraveineuse ces animaux a eu pour consquence le dpt de complexes immuns et de complment dans la paroi de petits vaisseaux. Linjection de complexes immuns sans augmentation de la permabilit vasculaire nentranait pas la formation de dpts. Dautres expriences ont montr que mme des substances inertes, comme le carbone collodal, peuvent se dposer dans les parois vasculaires, si l'animal a reu pralablement des substances vasoactives comme de l'histamine ou de la srotonine (257). De mme, des complexes immuns circulants vont former des dpts sous l'action d'agents entranant lactivation des mastocytes, et la libration d'amines vasoactives, notamment d'histamine, qui sen suit. Un traitement pralable par des antihistaminiques bloque cet effet. Dans les modles exprimentaux de maladies mdies par le dpt de complexes immuns, l'administration prolonge d'antagonistes des amines vasoactives comme la chlorphniramine (antihistaminique) ou le mthysergide (antisrotoninergique) rduit fortement le dpt des complexes (Figure 31) (46, 99, 172). Ainsi, une maladie srique a t provoque chez le lapin par une injection unique dalbumine bovine srique. Les animaux ont t soit appauvris en plaquettes, soit traits par des antagonistes des amines vasoactives, soit non traits (tmoins). Comme nous pouvons le voir sur la Figure 31, le traitement diminuait considrablement les symptmes de la maladie en rduisant la permabilit vasculaire et le dpt des complexes immuns (172).

120

Figure 31 : Effet dantagonistes des amines vasoactives sur lapparition de lsions aprs provocation dune maladie complexes immuns, daprs (172)

Les complexes immuns ont, en effet, un rle actif dans l'augmentation de la permabilit des capillaires glomrulaires. Ils permettent lactivation par leur fragment Fc de nombreux types cellulaires. Les complexes immuns constitus dIgE, par exemple, ont la capacit de se fix er la surface des mastocytes et des basophiles. Cette fixation conduit lactivation de ces cellules qui dgranulent et librent leur histamine ainsi qu'un facteur agrgeant les plaquettes : le PAF (pour platelet activating factor). Ce dernier agrge les plaquettes sanguines, qui librent alors, leur tour, leurs amines vasoactives (15, 81). La libration locale de ces substances induit la rtractation des cellules endothliales et llargissement des espaces intercellulaires. La formation transitoire de pores interendothliaux expose la membrane basale qui devient en consquence facilement accessible aux macromolcules circulantes. Ainsi, le dpt de complexes prforms peut survenir par simple passage en zone subendothliale travers les pores des capillaires (148). Plus important encore, dans le cadre de la prvention des maladies mdies par le dpt de complexes immuns, il a t observ que chez les souris NZB/NZW traites par le mthysergide ds le plus jeune ge, l'atteinte rnale est moindre que chez les souris tmoins (172). Le dveloppement des lsions rnales a t suivi par la mesure de la protinurie pendant 5 mois. Les animaux non traits avaient une protinurie trs importante, contrairement aux souris traites par le mthysergide.

121

Ce mdicament, antagoniste de la 5-hydroxytryptamine (5-HT), communment appele srotonine, empchait le dpt de complexes, linfiltration des parois vasculaires par les neutrophiles et la prolifration endothliale lorigine de la glomrulonphrite (Figure 32). Figure 32 : Effet du mthysergide, un antagoniste de la srotonine, sur les lsions rnales mdies par les complexes immuns, daprs (172)

Laugmentation de la permabilit vasculaire peut rsulter de la mise en uvre de diffrents mcanismes dont limportance relative varie dune maladie lautre et dune espce lautre. Cela rend difficile linterprtation de certains modles exprimentaux. En gnral, cependant, le complment, les mastocytes, les basophiles et les plaquettes peuvent tous participer la libration damines vasoactives comme nous le verrons loccasion de la troisime partie de ce mmoire.

b.

Pression sanguine leve et flux sanguin turbulent

Une pression sanguine leve et des turbulences favorisent le dpt des complexes immuns (81, 172). La pression sanguine dans les capillaires glomrulaires, o se dposent de nombreuses macromolcules, est environ quatre fois plus leve que dans la plupart des autres capillaires (70-80 mm de mercure). Un certain nombre de rsultats chez les animaux de laboratoire prouvent que cette pression sanguine accrue joue un rle dans la pathognie. En effet, si la pression glomrulaire est rduite par ligature partielle de lartre rnale ou de luretre (ce qui entranent une diminution du dbit de filtration glomrulaire), les complexes se dposent moins (81, 172). linverse, si la pression sanguine glomrulaire est augmente, par linduction exprimentale dhypertension, les dpts augmentent et entranent une aggravation de l'volution et de la svrit des glomrulonphrites chez les animaux de laboratoire. Ainsi une nphrectomie unilatrale augmente la pression sanguine dans le rein restant et favorise les glomrulonphrites. De 122

mme, l'administration d'angiotensine II entrane un dpt plus important des complexes immuns dans le msangium (81, 172). Par consquent, lexistence dune pression sanguine leve au niveau du glomrule rnal et dune hyperfiltration favorise le dveloppement de glomrulonphrites comme cela a t vu notamment chez le chien (168). Nous comprenons ainsi aisment que le dpt de complexes est particulirement favoris chez les patients hypertendus (99). Au-del du glomrule rnal, un tel processus peut, bien sr, tre observ au niveau des diffrentes zones de filtration de lorganisme (172). En effet, lultrafiltration est une dialyse qui sopre par la simple prsence dune pression hydrostatique. Les tissus qui produisent un ultrafiltrat sont enclins piger les complexes immuns circulants. La synoviale, le plexus chorode, le corps ciliaire, le glomrule rnal produisent tous un ultrafiltrat de plasma respectivement appel liquide synovial, liquide crbrospinal, humeur aqueuse et filtrat glomrulaire. Dans le cas des trois derniers tissus, la filtration a lieu travers une membrane basale pithliale alors que pour la synoviale la filtration se fait travers une matrice interstitielle restrictive. Quoi quil en soit, le dpt des complexes y est ainsi fortement favoris. Ailleurs, les lsions les plus graves se dveloppent dans les zones de turbulences, notamment aux niveaux des bifurcations artrielles et embranchements vasculaires (81, 99, 172). Ces sites sont exposs une pression sanguine leve et des effets de cisaillement qui peuvent endommager lendothlium. On peut d'ailleurs favoriser exprimentalement le dpt de complexes immuns par striction mcanique de l'aorte chez le lapin (81). Dans ces zones, les cellules sanguines et les plaquettes ne sont pas maintenues distance de la paroi vasculaire par un courant laminaire et un contact plus troit peut stablir entre les complexes immuns et la paroi vasculaire.

c.

La temprature locale

La temprature locale prsente un effet majeur sur la circulation sanguine cutane. La plupart des vaisseaux sanguins cutans sont situs de manire superficielle dans le derme et sont exposs aux conditions extrieures de temprature. Une exposition au froid ralentit la circulation sanguine cutane et autorise une augmentation des temps de contact entre les constituants du sang et lendothlium vasculaire. En prsence de complexes immuns dans la circulation, selon toute vraisemblance, les dpts de complexes tissulaires seront favoriss, particulirement au sein de la paroi vasculaire. De plus, lexposition au froid augmente la viscosit sanguine, particulirement en prsence dune cryoprotine circulante, ce qui diminue encore le dbit circulatoire (254). 123

Au cours de cette partie, nous avons soulign quun grand nombre de paramtres peuvent concourir au dpt des CI en de nombreuses localisations de lorganisme. Ainsi, une altration dans lune des voies mises en jeu dans lpuration des CI augmente significativement le risque de dveloppement dune HSIII. Cependant, le dpt des complexes dans les tissus procde rarement de la mise en uvre dune seule cause favorisante. Bien souvent, le pouvoir pathogne des CI est dtermin par laction conjointe de plusieurs paramtres. Ainsi, des agrgats de grande taille, non fixs aux rythrocytes, montrent des proprits pro-inflammatoires marques. Paralllement, des complexes de faibles poids molculaires forms en excs dantignes pntrent dans les tissus au sein desquels ils peuvent fixer des anticorps libres nouvellement synthtiss en provenance de la circulation. Dans ce cas, la taille des agrgats va progressivement augmenter et ces derniers vont finalement acqurir la capacit fixer le complment. Ceci amnera frquemment la formation de dpts pathognes. Au-del des proprits intrinsques des anticorps et des antignes qui constituent les complexes, une production entretenue de CI, observe particulirement lors dune stimulation antignique prolonge, peut conduire un dpassement des capacits dpuration. Ce dernier peut se traduire par un puisement en certains composants ncessaires au bon droulement de lpuration, comme cest le cas pour les composants du complment et les rcepteurs pour le C3b. Le dpassement des capacits dpuration sera atteint dautant plus rapidement quun dficit primaire est prsent en lun des composants essentiels du processus. Enfin, des facteurs physiologiques semblent jouer un rle majeur et nous pourrons retenir limpact dune augmentation locale, dune part, de la permabilit vasculaire et, dautre part, de la pression sanguine. Cest ainsi que les organes de filtration, tels le glomrule rnal, la synoviale articulaire, le plexus chorode et le corps ciliaire de lil constituent des sites particulirement exposs au dpt de complexes immuns. (cf. Bilan en Annexe 1.C p. 203) Cependant, en eux-mmes, les CI sont inoffensifs. Les lsions tissulaires sont la consquence de l'activation de systmes biologiques destins liminer ces complexes. Une tude dtaille des mcanismes mis en jeu dans lapparition des lsions tissulaires est ainsi ralise dans la troisime et dernire partie : les effets pathognes mdis par les CI dposs au sein des tissus s'exercent, d'une part, par l'activation du systme du complment, et, dautre part, par linteraction des fragments Fc qui composent le complexe avec les rcepteurs pour ce fragment (FcR) prsents la surface de nombreux types cellulaires. Aprs avoir prsent les mcanismes constituant lune et lautre de ces deux voies, nous tenterons de dgager limplication relative de ces mcanismes dans la formation de lsions tissulaires. 124

TROISIME PARTIE

MCANISMES DES LSIONS INDUITES PAR LE DPT DES COMPLEXES IMMUNS

125

126

I. Activation du systme du complment

Aprs avoir brivement prsent les molcules qui constituent le systme du complment, nous effectuerons un rappel sur les voies dactivation puis de rgulation de ce systme mises en jeu par la prsence des complexes immuns au sein des tissus. En dernier lieu, nous aborderons les consquences biologiques de cette activation qui permettent dexpliquer, du moins en partie, les lsions tissulaires observes.

A.

Composants du complment

Le systme du complment est constitu dun ensemble de facteurs sriques formant un systme biologique complexe que l'on retrouve dans le srum de tous les vertbrs. Le systme du complment est trs bien conserv entre les diffrentes espces et au cours de l'volution. Les donnes rapportes ici concernent l'homme, c'est dans cette espce que les mcanismes du complment sont les mieux connus. On peut toutefois les extrapoler aux carnivores domestiques (70). Le complment est constitu d'au moins 20 glycoprotines ou lipoprotines plasmatiques et membranaires, dont la taille, les proprits physico-chimiques et la concentration sont diffrentes. Les protines constitutives du systme du complment sont essentiellement synthtises par les hpatocytes, bien que des quantits significatives soient aussi produites par les monocytes sanguins, les macrophages des tissus et les cellules pithliales des tractus gastro-intestinal et gnito-urinaire. Ces proenzymes circulent dans le srum sous une forme fonctionnellement inactive jusqu' ce qu'un clivage protolytique limine un fragment inhibiteur et expose ainsi le site actif. La squence des ractions du complment se caractrise donc par une cascade dactivations enzymatiques. (143, 155) Les composants principaux sont numrots de C1 C9, le C1 tant constitu de trois molcules : C1q, C1r et C1s. Dans la plupart des cas, le plus petit fragment rsultant du clivage d'un composant est dsign par a et le plus gros par b (ex. C3a et C3b). Dans la nomenclature nord-amricaine, le C2 fait exception, puisque C2a est le plus gros fragment rsultant du clivage. Les plus gros fragments se lient la cible proximit du site d'activation, tandis que les plus petits peuvent initier des rponses inflammatoires localises par ltablissement de liaisons des rcepteurs spcifiques cellulaires (rcepteurs aux anaphylatoxines C3aR et C5aR). Les composants du complment entrent en interaction pour former des complexes macromolculaires enzymatiquement actifs (par exemple ) comme nous le dcrirons dans le paragraphe suivant. (155) le 4 2 , le 3 127

B.

Voies dactivation du complment

Les tapes initiales de l'activation du complment peuvent se produire selon la voie classique, la voie alterne ou la voie des lectines, et se terminent par la formation dune C5 convertase et la gnration du C5b. Ces voies dactivation peuvent agir en parallle mais sont dclenches par des mcanismes distincts. De plus, elles convergent toutes vers des tapes finales identiques qui constituent la phase effectrice de l'activation du complment (Figure 14, p60). Linitiation de la voie dactivation des lectines est mdie par la fixation de la lectine spcifique du mannose (MBL, pour mannose-binding lectin) sur des motifs rpts de carbohydrates comme le mannose, la N-actyl-D-glucosamine et la N-actyl-mannosamine, prsents abondamment la surface de nombreux micro-organismes (129). La MBL possde une structure proche de celle du C1q et exploite les composants de la voie classique dactivation. Cependant, dans des conditions physiologiques, la MBL ne possde pas la capacit de se fixer aux cellules des mammifres, probablement en raison dun manque de rsidus mannose leur surface. Ainsi, seules les voies dactivation classique et alterne sont impliques dans la cration des lsions conscutives aux dpts des complexes immuns au sein des tissus. Une implication prpondrante dans le processus lsionnel est par ailleurs accorde la voie classique dactivation (161). Nous limiterons ainsi notre expos la description de ces deux voies.

1. Etapes initiales de lactivation du complment

a. La voie classique

L'tape initiale de l'activation implique les composants C1, C2, C3 et C4, qui sont prsents dans le srum sous des formes inactives. Les composants ont t numrots selon l'ordre de leur dcouverte et non selon lordre dans lequel ils ragissent (155). La voie classique est initie par la fixation du C1 un complexe Ag-Ac ou un complexe Ac-Ac anti-idiotype en labsence dantigne (70). Le C1 srique est un complexe macromolculaire constitu du C1q et de deux molcules de C1r et de C1s maintenues ensembles en un complexe (C1qr2s2) stabilis par des ions Ca2+ (155). Chaque molcule de C1 doit se lier par les ttes globulaires du C1q au moins deux fragments Fc pour qu'une interaction suffisamment stable soit tablie et dclenche la cascade dactivation (155).

128

Les IgM et certaines sous-classes dIgG (IgG1, IgG2 et IgG3 humaines) sont capables dactiver cette voie. Des tudes plus rcentes ont montr que dautres molcules, comme la protine C-ractive et lADN, peuvent galement activer le systme du complment par cette voie en interagissant directement avec le C1q (134, 135). Lorsquune IgM pentamrique est lie un antigne au niveau d'une surface cible, elle prend la configuration dite en agrafe , dans laquelle au moins trois sites de liaison du C1q sont exposs. L'IgM circulante, quant elle, se prsente dans une conformation plane dans laquelle les sites de liaison du C1q ne sont pas exposs (Figure 33) (155). Une molcule d'IgG, d'autre part, ne contient qu'un seul site de liaison au C1q. Ltablissement dune liaison stable avec le C1q n'est donc ralise que lorsque deux molcules d'IgG, distantes de 30 40 nm l'une de l'autre, sont prsentes sur une surface cible ou au sein dun complexe, exposant ainsi les deux sites d'attachement au C1q requis (155). Les complexes immuns forms avec des IgA, quant eux, ne peuvent pas fixer le C1 et ne sont pas en mesure dactiver le complment par cette voie (245). Figure 33 : Modle dune IgM pentamrique dans sa forme plane (a) et dans sa forme en agrafe (b), daprs (155)

La liaison du C1q aux fragments Fc induit un changement conformationnel du C1 et aboutie la hydrolyse le C4 en C4a et C4b, exposant ainsi un conversion du C1s en une enzyme active. Le 1 site de liaison sur le C4b. De la mme manire, le C2 est hydrolys en C2a et C2b. Le fragment C4b s'attache la surface cible et le C2a se lie alors au site de liaison expos sur le C4b. Le complexe assembl est appel C3 convertase, par rfrence son rle dans la conversion du 4 2 proenzyme C3 en une forme active (Figure 34). Le plus petit fragment rsultant du clivage du C4, le C4a, est une anaphylatoxine, ou mdiateur de l'inflammation, qui ne participe pas directement la cascade dactivation du complment. Les anaphylatoxines, qui incluent les plus petits fragments du C4, du C3 et du C5, sont tudies plus loin (voir paragraphe P3-I.D.2.b). (155) 129

Par la suite, le complexe

hydrolyse le C3 en C3a et C3b. Une seule molcule de C3

convertase peut ainsi crer plus de 200 molcules de C3b. Cette tape constitue donc une phase damplification de la squence dactivation du complment (155). Parmi les molcules de C3b libres, certaines se lient au pour former un complexe trimolculaire , appel C5 convertase. Le C3b constitutif de ce complexe permet larrimage du C5. Celui-ci est cliv son tour en C5a, qui s'limine par diffusion, et en C5b qui fixe le C6 et initie la formation du CAM. Figure 34 : Reprsentation schmatique des tapes initiales de la voie classique dactivation du complment, daprs (155)

b.

La voie alterne

La voie alterne gnre des produits actifs identiques ceux gnrs par la voie classique. Cette voie est active par une grande varit de particules biologiques (microorganismes, cellules infectes, hmaties xnogniques). Par ailleurs, les anticorps au sein de complexes sont en mesure dactiver le complment par cette voie mais ne sont pas ncessaires. En cela, la voie alterne est un constituant du systme immunitaire inn. Elle conduit la formation d'une C3 et dune C5 convertases, fonctionnellement identiques mais distinctes dun point de vue structural, de celles produites par la voie classique. La voie alterne prsente ainsi un intrt certain chez un hte non immunis. (38, 155) 130

Quatre protines sriques sont impliques au cours de cette voie dactivation : le C3, le facteur B (ou C3 proactivateur), le facteur D (ou C3 proactivateur convertase) et la properdine. Dans la voie alterne, le C3 srique, qui possde une liaison thioester instable, est sujet une lente hydrolyse spontane (216) qui gnre le C3(H2O), encore dnomm C3i (Figure 35). En prsence de Mg2+, le C3i est fix par le facteur B pour former un complexe C3iB. Secondairement, lintervention du facteur D conduit au clivage du facteur B en fragments Bb et Ba. Le fragment Bb reste fix au C3i pour former le complexe (70). Figure 35 : Formation spontane de composants C3a et C3b dans le milieu extracellulaire, daprs (70) activit C3 convertase, qui gnre son tour le C3a et le C3b

Les composants C3b librs peuvent se lier des antignes de surface trangers (tels que ceux prsents la surface des cellules bactriennes ou des particules virales) ou mme aux propres cellules de l'hte. Les membranes de la plupart des cellules de mammifres ont un taux lev d'acide sialique qui contribue l'inactivation rapide par le facteur H puis le facteur I des molcules de C3b lies la surface des cellules de l'hte. Le facteur H empche la fixation de facteur B sur le C3b, quant au facteur I, il induit le clivage du C3b en iC3b (pour inactivated C3b) (278). Par consquent, cette liaison conduit rarement des ractions sur les membranes cellulaires de l'hte (Figure 36). 131

tant donn que de nombreuses surfaces antigniques trangres, comme les parois cellulaires des bactries ou des levures, ou encore certaines enveloppes virales, expriment des taux faibles d'acide sialique, le C3b li ces surfaces demeure actif pendant de longues priodes. La rgulation de la voie alterne est donc assure par le caractre activateur ou non de la surface sur laquelle les molcules de C3b sont dposes (155, 278). Figure 36 : Processus dinactivation du C3b la surface dune cellule saine, daprs (278)

A limage du C3i, le C3b fix sur une surface activatrice peut se lier au facteur B, par l'intermdiaire d'une liaison dpendante du Mg2+. Par la suite, le facteur D clive le facteur B li au C3b en un petit fragment Ba, qui s'limine par diffusion, et en Bb qui reste li au C3b ( Figure 37). Le complexe form possde une activit C3 convertase et se prsente ainsi comme l'analogue du complexe de la voie classique. L'activit C3 convertase du n'a qu'une demi-vie limite, moins que la properdine ne se lie lui. (155) Le complexe gnr dans la voie alterne peut cliver le C3 non hydrolys pour crer de

manire auto-catalytique davantage de C3b. Ainsi, les tapes initiales sont rptes et amplifies, et plus de 2.106 molcules de C3b peuvent tre dposes sur une surface antignique en moins de 5 minutes. Enfin, certaines molcules de C3b libres peuvent se fixer aux complexes gnrer le complexe pour

qui montre une activit C5 convertase analogue celle du complexe

de la voie classique. (155)

132

Figure 37 : Reprsentation schmatique des tapes initiales de la voie alterne dactivation du complment, daprs (155)

2. Phase effectrice de lactivation du complment

La phase effectrice de lactivation du complment se caractrise dune part, par la libration de composants solubles, le C3b et les anaphylatoxines C3a et C5a, et, dautre part, par la formation du complexe C5b-9, encore appel complexe d'attaque des membranes (CAM) (99).

133

a.

Libration de composants solubles

Les molcules de C3b libres ont des devenirs nombreux. En effet, le C3b peut participer la lamplification de la voie alterne dactivation, ainsi qu la formation de la C5 convertase. Le C3b peut galement se comporter comme un facteur dopsonisation en interagissant avec son rcepteur membranaire (CR1) prsent la surface des cellules phagocytaires. De plus, rappelons que le C3b permet dinhiber la prcipitation des complexes immuns et favorise la solubilisation des agrgats en se liant de faon covalente au complexe antigne-anticorps (28, 143). Les anaphylatoxines C3a et C5a constituent, quant elles, des mdiateurs solubles puissants de l'inflammation dont la libration va avoir une srie de consquences capitales dans le droulement de la raction d'hypersensibilit de type III. Les consquences biologiques qui suivent la libration locale de ces composants solubles seront tudies de manire dtaille dans le paragraphe P3-I.D.

b.

Formation du complexe dattaque des membranes

La squence terminale de l'activation du complment implique les composants C5b, C6, C7, C8 et C9 qui interagissent de faon squentielle pour former une structure macromolculaire appele complexe d'attaque membranaire (CAM). Ce complexe sinsre entre les phospholipides membranaires et forme un large canal transmembranaire qui permet aux ions et aux petites molcules de diffuser librement travers la membrane de la cellule cible (192, 221). Les voies classique et alterne conduisent toutes deux la production d'une C5 convertase (Figure 14). Cette enzyme clive le C5 en un petit fragment C5a, qui s'limine par diffusion, et en C5b qui se lie la surface de la cellule cible et fournit un site de liaison pour le composant C6. Le composant C5b, extrmement labile, est inactiv rapidement moins que le C6 ne se lie lui et stabilise son activit. Lorsque le C5b6 se lie au C7, le complexe C5b67 assembl subit une transition structurale hydrophile-amphiphile de manire exposer des rgions hydrophobes. Celles-ci favorisent son interaction avec les phospholipides membranaires. Lorsque cette transition se droule sur la membrane d'une cellule cible, les sites de liaisons hydrophobes permettent au complexe C5b67 de s'insrer directement au sein de la bicouche phospholipidique. Cependant, lorsque la transition se produit sur un complexe immun ou une autre surface non cellulaire, les complexes C5b67 sont relchs et peuvent s'insrer dans la membrane des cellules voisines. Lassemblage du CAM sy poursuit et pourra mdier la lyse de cellules saines (innocent-bystander). (155) Lassemblage du CAM continue par la fixation du C8 au complexe C5b67 fix sur la membrane de la cellule cible. Une modification de la structure du C8 est induite et la rgion hydrophobe expose 134

entre son tour en interaction avec la membrane cellulaire. Le complexe C5b678 cre un petit pore de 10 de diamtre. La formation de ce pore peut conduire la lyse des rythrocytes. En revanche, les cellules nucles y sont insensibles. Ltape ultime consiste en la fixation et la polymrisation du C9, molcule semblable la perforine, par le complexe C5b678. Le complexe dattaque membranaire complet est constitu d'un complexe C5b678 entour d'un complexe poly-C9, pouvant impliquer jusqu 17 molcules de C9. Un pore membranaire de 70 100 de diamtre est ainsi constitu, au travers duquel les ions et petites molcules peuvent diffuser librement. La cellule, qui ne peut pas maintenir sa stabilit osmotique, est dtruite par un influx d'eau et une perte d'lectrolytes. (155)

C.

Rgulation du systme du complment

Un premier mcanisme gnral de rgulation de lactivation du complment repose sur linclusion de nombreux composants particulirement labiles qui subissent une inactivation spontane lorsquils diffusent distance de leur lieu de production. titre dexemple, la C3 convertase alterne possde une demi-vie de seulement 5 minutes malgr la prsence de properdine qui la stabilise (155). De plus, le systme du complment comporte de nombreuses protines rgulatrices qui inactivent diffrents composants du complment diffrents niveaux de la cascade dactivation (Figure 38). Celles-ci peuvent intervenir comme enzymes protolytiques (facteur I, carboxypeptidase N) ou cofacteurs denzymes protolytiques (C4bBP, CR1, MCP, facteur H), inhibiteurs de lactivit protolytique (C1-inh), facteurs assurant la dissociation des convertases (C4bBP, DAF, facteur H), ou inhibiteurs de la formation du CAM et de son insertion membranaire (MIRL, HRF, protine S) (161). De manire schmatique, certaines dentre elles vont agir en amont de la production de C3b et prviennent la formation des convertases classique et alterne. Dautres agissent en aval de la production de C3b et favorisent la dissociation des convertases dores et dj formes ou prviennent lassemblage du complexe dattaque des membranes. Par exemple, la glycoprotine inhibitrice du C1 (C1-inh) se fixe au C1r2s2 et favorise sa dissociation du C1q. Le clivage ultrieur du C4 ou du C2 est ainsi inhib (Figure 38.a) Les C3 convertases des voies classique et alterne conduisent la libration de centaines de molcules de C3b et constituent ainsi l'tape d'amplification essentielle de l'activation du complment. Deux mcanismes majeurs limitent toutefois le rayon daction des molcules de C3b gnres. Tout dabord, le C3b subit une hydrolyse spontane ds qu'il a diffus plus de 40 nm des convertases ou . Il ne conserve donc son pouvoir de liaison une surface cellulaire quau 4 2 3 135

voisinage de son lieu de production. De plus, la forte teneur en acide sialique des membranes de la plupart des cellules des mammifres contribue galement linactivation rapide des molcules de C3b qui auraient pu sy lier. (155) Figure 38 : Reprsentation schmatique des voies rgulatrices de lactivation du complment, daprs (155)

136

Par ailleurs, plusieurs protines apparentes rgulent l'activit des C3 convertases classique et alterne. Chez l'homme, toutes ces protines sont codes au niveau d'une seule localisation sur le chromosome 1, connues sous le nom de groupe de gnes rgulateurs de l'activation du complment (RCA, pour regulator of complement activation). Dans la voie classique, trois protines RCA structuralement diffrentes agissent de faon semblable pour prvenir l'assemblage de la C3 convertase (Figure 38.a2). Ces protines comprennent une protine soluble de liaison au C4b (C4bBP) et deux protines membranaires, le rcepteur du complment de type 1 (CR1) et le cofacteur protique membranaire (MCP, pour membrane cofactor protein). Chacune de ces protines rgulatrices se lie au C4b et prvient son association au C2a. Une fois que la C4bBP, le CR1 ou le MCP sont lis au C4b, une autre protine rgulatrice, le facteur I, inactive le C4b par clivage en C4d et C4c (Figure 38.a3). Une squence rgulatrice semblable intervient pour prvenir l'assemblage de la C3 convertase alterne. Dans ce cas, le CR1, le MCP ou le facteur H se lie au C3b et empche son association au facteur B (Figure 38.a4). Une fois que le CR1, le MCP ou le facteur H est li au C3b, le facteur I clive le C3b en un fragment li iC3b et un fragment soluble C3f. Un clivage supplmentaire de liC3b par le facteur I libre le C3c et laisse le C3dg li la membrane (Figure 38.a5). (155) En cela, le rcepteur CR1 permet non seulement lacheminement des complexes jusquaux organes dpuration mais joue un rle dans la rgulation de lactivation du complment en servant de cofacteur au facteur I (179). Plusieurs protines rgulatrices, parmi lesquelles la C4bBP (pour C4b binding protein), le CR1 et le facteur H mentionns prcdemment, ainsi que le facteur acclrateur de la dissociation (DAF, pour decay-accelerating factor, ou CD55), provoquent la dissociation des C3 convertases assembles. Ces protines agissent en sparant le composant enzymatiquement actif (C2a ou Bb) du composant fix la membrane cellulaire (C4b ou C3b). Ces derniers sont ensuite clivs par le facteur I afin de prvenir de manire dfinitive une rassociation ventuelle des convertases (Figure 38.b). (155) Des protines rgulatrices peuvent galement interfrer dans lassemblage du complexe d'attaque membranaire. En effet, de nombreuses protines sriques, comme la protine S (ou vitronectine) peuvent se lier aux C5b67 librs et empchent ainsi son insertion dans la membrane des cellules saines avoisinantes (Figure 38.c). Par ailleurs, deux protines, prsentes naturellement dans la membrane de nombreux types cellulaires, sont en mesure de bloquer la formation du complexe dattaque des membranes. Il sagit du facteur de restriction homologue (HRF, pour homologous restriction factor) et de l'inhibiteur membranaire de lyse ractive (MIRL, pour membrane inhibitor of ractive lysis, ou CD59). Le HRF et le CD59 protgent tous deux les cellules d'une lyse non spcifique mdie par le complment en se liant au C8, prvenant ainsi l'assemblage du poly-C9 et son insertion dans la membrane plasmique (Figure 38.c). (155) 137

A titre dexemple, les cellules glomrulaires cibles dans la plupart des formes des glomrulonphrites expriment au sein de leur membrane plusieurs protines de rgulation de lactivation du complment. Parmi celles-ci, la MCP, le DAF et le CD59 (62). Chez les rongeurs, la protine Crry assure les fonctions rgulatrices de la MCP et du DAF. Elle est exprime la surface des cellules pithliales, endothliales et msangiales glomrulaires. Lintervention de ces protines au cours du dveloppement des lsions glomrulaires mdies par le complment a t tudie in vitro par Nangaku et al. (196, 199). La surexpression de CD59 mais aussi de Crry par des cellules msangiales de rat transfectes, i.e. dont le gnome a t modifi, protge ces cellules de lattaque du CAM. De plus, la neutralisation de Crry par lutilisation danticorps spcifique aggrave significativement la plupart des altrations morphologiques constates lors de glomrulonphrite msangioprolifratives in vivo. Ainsi, linduction dune surexpression de protines rgulatrices membranaires semble constituer une stratgie thrapeutique.

D. Consquences biologiques de lactivation du complment mises en jeu dans lHSIII

La plupart des signes observs au cours dun processus inflammatoire, tumor, rubor, calor et dolor, peuvent tre mdis directement par les produits de lactivation du complment (176).

1. Action du complexe dattaque des membranes

Lactivation du complment par les voies classique et alterne conduit la formation du complexe d'attaque des membranes avec pour consquence commune la lyse cellulaire. En effet, le complexe d'attaque des membranes est capable de lyser des bactries, des parasites, des virus, des rythrocytes et des cellules nucles (155). La plupart des virus possdant une enveloppe sont sensibles une lyse mdie par le complment. L'enveloppe virale est largement drive de la membrane plasmique de la cellule hte infecte et elle est donc sensible la formation de pores par le complexe d'attaque membranaire. Par ailleurs, les lipopolysaccharides (LPS) prsents au sein de la membrane externe des bactries Gram ngatif font de la paroi bactrienne une trs bonne surface activatrice du systme du complment par la voie alterne. Pour information, sur le plan structural, les lipopolysaccharides sont constitus d'un lipide A intra-membranaire et d'une partie polysaccharidique extra-membranaire. Le lipide A est dou de proprits toxiques et il correspond l'endotoxine des bactries Gram ngatif qui n'est libre, de manire massive, qu'aprs lyse de la bactrie. La fraction polysaccharidique, quant elle, constitue l'antigne O et exprime une forte immunognicit. Celui-ci pourra tre cibl

138

secondairement par une rponse humorale spcifique. Dans ce dernier cas, lactivation du complment, aboutissant la formation du CAM, pourra tre ralise par la voie classique. Cependant, bien que le complment soit fondamental dans les mcanismes de dfense de l'organisme contre les agents infectieux, son activation peut tre l'origine d'effets pathognes. En effet, les complexes immuns prsents au sein des tissus activent le complment par la voie classique et conduisent la formation locale de complexes dattaque des membranes dont laction sera dltre pour les cellules du voisinage (157). Le CAM provoque plus facilement des lsions aux hmaties par rapport aux cellules nucles. En effet, les cellules nucles sont capables de rparer, jusqu un certain point, leurs dommages membranaires. Il y aura dans un premier temps une simple altration de leurs fonctions sans lyse cellulaire (81, 106). La lyse des cellules nucles requiert ainsi la formation de multiples CAM, tandis qu'un seul peut lyser un globule rouge sanguin. De nombreuses cellules nucles, y compris la majorit des cellules cancreuses, peuvent endocyter le CAM, rparer la lsion membranaire et restaurer leur quilibre osmotique (155). De plus, certaines cellules possdent leur surface des protines inhibitrices, dont la prsence les rend moins sensibles laction du CAM. Cest notamment le cas des thrombocytes, la surface desquels des MIRL on t identifis (190). Enfin, le CAM possde de nombreuses proprits pro-inflammatoires. Tout dabord, il stimule la production d'ions superoxyde par les cellules endothliales, msangiales, les granulocytes neutrophiles et les monocytes/macrophages (114). De plus, il semblerait qu'en se fixant aux cellules msangiales de rat ou aux monocytes humains, le CAM soit capable de stimuler la production d'une cytokine, l'interleukine-1, qui a de nombreux effets dont les suivants : chimiotactisme et activation des granulocytes neutrophiles et des macrophages ; synthse de prostaglandines par les macrophages (113), les cellules endothliales, les fibroblastes par la stimulation de la phospholipase A2 et la libration d'acide arachidonique ; prolifration des cellules pithliales, des cellules endothliales et des fibroblastes, stimulation de la production de collagne de type IV ; dclenchement et entretien dune rponse inflammatoire pyrogne endogne avec autoamplification par stimulation de la libration dIL-6 et de TNF.

139

L'acide arachidonique libr par activation de la phospholipase A2 subit une oxydation par une cyclo-oxygnase ou des lipoxygnases. Il semble que les mtabolites de la cyclo-oxygnase (prostaglandines, thromboxane) interviennent lors de glomrulonphrite. Leur synthse est attribue lactivation, par le CAM, des cellules msangiales glomrulaires et des macrophages prsents localement. (62)

2. Libration de composants biologiquement actifs du complment

Certains fragments, librs au cours de lactivation du complment, possdent de nombreuses activits biologiques. Ces dernires sont mdies par la liaison de ces fragments leurs rcepteurs, exprims la surface de diffrents types cellulaires. Ainsi, les anaphylatoxines C3a et C5a, vont, dune part, exercer un pouvoir chimiotactique vis--vis de nombreux types cellulaires au site du dpt, et, dautre part, activer ces cellules et ainsi stimuler lentretien et lamplification de linflammation locale. Quant C3b, il peut se fixer aux complexes immuns et favoriser ladhrence des cellules phagocytaires et ainsi la phagocytose conscutive des complexes immuns.

a.

Libration des opsonines C3b et iC3b

Trois rcepteurs sont mis en jeu dans la fonction dopsonisation mdie par les fragments du C3 : CR1, CR3 et CR4 (Tableau 2) (38, 172). CR1 (ou CD35) est une protine membranaire principalement retrouve sur les rythrocytes, les cellules phagocytaires, les lymphocytes B, les cellules dendritiques folliculaires et les podocytes (84, 98). CR1 a pour principal ligand le C3b, mais peut galement lier le C4b et liC3b avec une plus faible affinit. Pour rappel, les CR1 prsents la surface des rythrocytes jouent un rle majeur dans lacheminement des complexes immuns jusqu leur lieu dpuration chez les primates. De plus, les CR1 exprims la surface des macrophages hpatiques, splniques, mais aussi des monocytes achemins depuis le compartiment circulant jusquau site inflammatoire, facilitent la phagocytose. Lexpression de CR3 (ou CD18/CD11b) est restreinte aux leucocytes. CR3 est beaucoup plus exprim sur les monocytes que CR4 (ou CD18/CD11c), alors que linverse est observ pour les macrophages tissulaires. CR3 et CR4 fixent liC3b et facilitent le processus de phagocytose.

140

Lactivation du systme du complment et son amplification permettent certains fragments du C3 de recouvrir efficacement les surfaces activatrices que constituent les bactries ou les complexes immuns. En effet, lactivation du complment leur surface conduit un dpt de C3 sous forme de C3b et diC3b. Ce dpt va considrablement faciliter llimination de la cible par phagocytose. Les rcepteurs CR1, CR3 et CR4 sont impliqus dans ce phnomne dopsonisation et agissent simplement en favorisant ladhrence des micro-organismes et des complexes immuns aux cellules phagocytaires. Cependant, ces rcepteurs dlivrent un signal de dclenchement du processus phagocytaire de faible intensit. Un signal de forte intensit est le plus souvent donn par les IgG des complexes immuns. Il est noter que ce mcanisme dopsonisation reprsente la plus importante contribution du systme du complment la dfense anti-infectieuse (38, 155). Tableau 2 : Principaux rcepteurs du complment, daprs (38) *Cplt pour Systme du Complment. Pour chaque CR, les ligands principaux sont reprsents en gras. Rcepteur CR1
CD35

Ligand C3b C4b iC3b iC3b C3dg C3d C3b iC3b iC3b C3b iC3b C3a C5a C1q

Distribution cellulaire principale Erythrocytes, monocytes/macrophages, neutrophiles, podocytes, cellules dendritiques folliculaires, lymphocytes B Lymphocytes B, cellules dendritiques folliculaires Monocytes/macrophages, neutrophiles, cellule NK Monocytes/macrophages, cellules NK Macrophages tissulaires (cellules de Kupffer) Neutrophiles, osinophiles, basophiles, monocytes/macrophages Neutrophiles, osinophiles, basophiles, monocytes/macrophages, mastocytes Neutrophiles

Fonctions principales Rgulation de lactivation du Cplt*, limination des CI, phagocytose Activation des LB

CR2
CD21

CR3
CD18/CD11b

Phagocytose Phagocytose Phagocytose Inflammation Inflammation, chimiotactisme Phagocytose (corps apoptotiques)

CR4
CD18/CD11c

CR1g C3aR C5aR C1qRp

141

b.

Libration des anaphylatoxines C3a et C5a

i. Rcepteurs aux anaphylatoxines C3a et C5a : C3aR et C5aR

Lexpression membranaire des rcepteurs aux anaphylatoxines est relativement large. C3aR et C5aR sont prsents sur les monocytes/macrophages et les polynuclaires neutrophiles, basophiles, osinophiles. C3aR est abondamment exprim sur les osinophiles et les basophiles, en moindre densit sur les neutrophiles et les monocytes/macrophages (Tableau 2). C5aR a galement t identifi la surface des mastocytes mais aussi la surface des cellules pithliales du tubule proximal rnal ainsi que dans le cerveau, sur les neurones et les cellules gliales. (38, 172)

ii. Actions biologiques des anaphylatoxines

Les anaphylatoxines possdent un pouvoir chimio-attractant envers les leucocytes circulants, avec pour consquence leur accumulation au foyer inflammatoire. Secondairement, les anaphylatoxines pourront mdier leur activation locale. (38, 172) Les polynuclaires et les monocytes expriment des rcepteurs pour les anaphylatoxines qui favorisent leur adhrence aux cellules endothliales vasculaires, leur extravasation et leur migration vers le site d'activation du complment dans les tissus. En effet, les anaphylatoxines : rgulent positivement lexpression des molcules dadhrence la surface de ces cellules (changement conformationnel des intgrines favorisant ladhrence aux cellules endothliales vasculaires), diffusent distance du site dactivation, crant ainsi un gradient chimique le long duquel ces cellules inflammatoires migrent pour se rassembler au site dactivation. Par ailleurs, la liaison de C3a et surtout de C5a leurs rcepteurs membranaires dclenche aussi lactivation cellulaire. Lattraction et lactivation des polynuclaires neutrophiles et basophiles, des mastocytes, des thrombocytes et des macrophages conduit la libration locale du contenu de leurs granules intra-cytoplasmiques : nombreuses enzymes, radicaux oxygns, cytokines proinflammatoires (IL-1, IL-6, TNF-), mdiateurs vasoactifs, et de lhistamine (mastocytes, basophiles et thrombocytes chez les non primates). De plus, lactivation des thrombocytes favorise leur agrgation et conduit au dclenchement de la cascade de la coagulation. La libration des facteurs de la coagulation qui en rsulte peut conduire la formation de microthrombus.

142

Ensemble, ces produits causent une contraction des muscles lisses locaux et augmentent la permabilit vasculaire qui favorise le dpt des complexes immuns circulants, lafflux de leucocytes circulants et ainsi laggravation du phnomne. L'activation du systme du complment a donc pour rsultat un influx des fluides qui transportent des anticorps et des cellules phagocytaires vers le site inflammatoire. (38, 172) Enfin, les anaphylatoxines stimulent aussi lexpression des rcepteurs CR1 et CR3, pour les fragments de C3, la surface des cellules phagocytaires. Ceci a pour consquence daugmenter la capacit des phagocytes fixer et phagocyter les particules recouvertes de C3b et diC3b (99, 107). Il semblerait que le C5a manifeste le caractre pro-inflammatoire le plus affirm (38, 172). En effet, son pouvoir chimiotactique serait plus marqu que celui du C3a, particulirement pour les polynuclaires neutrophiles et basophiles, et les monocytes/macrophages. De plus, lactivit du C5a est constate pour des quantits picomolaires. En revanche, C3a semble prsenter un fort pouvoir chimiotactique envers les mastocytes (116) et osinophiles (64). De plus, la fixation du C3a par ces cellules dclenche leur dgranulation (158). Il semble toutefois que les osinophiles ne soient impliqus dans le processus dhypersensibilit de type III que de manire anecdotique (38). Il est important de noter que lorsque les cellules phagocytaires prennent pour cible des complexes immuns dposs dans les tissus, la phagocytose ne peut tre ralise. Il en rsulte la libration du contenu des granules intra-cytoplasmiques dans le milieu tissulaire par un processus dexocytose responsable des lsions tissulaires. Ce mcanisme fera lobjet dune tude plus approfondie dans le paragraphe P3-II.B.3.

iii. Rgulation de lactivit des anaphylatoxines

Lactivit de ces anaphylatoxines trs ractives est rgule par une protase srique appele carboxypeptidase N qui clive le rsidu arginine de l'extrmit carboxy-terminale de ces molcules. Il en rsulte la production de fragments appels C3a-ds-Arg et C5a-ds-Arg. La forme ds-Arg du C3a est compltement inactive, tandis que celle du C5a conserve une fraction de son activit chimiotactique et de sa capacit provoquer la contraction des muscles lisses. Cette activit rsiduelle du C5a-ds-Arg permet le recrutement des phagocytes mme partir de sites distants, faisant de C5a et de son mtabolite le facteur chimiotactique majeur driv du complment. (155, 172)

143

Lactivation du complment par les CI au sein des tissus conduit donc la mise en uvre de voies effectrices diverses qui, dfaut de permettre leur limination, favorisent la cration de lsions tissulaires locales. Lactivation du systme du complment conduit lassemblage local de CAM et la libration de composants solubles biologiquement actifs parmi lesquels les anaphylatoxines C3a et C5a qui constituent de puissants mdiateurs de linflammation. De nombreux types cellulaires sont notamment activs par liaison aux anaphylatoxines. Ainsi, les CI activent indirectement les granulocytes neutrophiles et basophiles, les macrophages, les mastocytes et les thrombocytes, principalement responsables des lsions tissulaires observes. (cf. Bilan en Annexe 1.D p. 207) Cependant, lactivation cellulaire peut survenir de manire directe. Elle repose alors sur linteraction des fragments Fc des Ig constitutives des CI dposs avec leurs rcepteurs spcifiques prsents la surface des cellules effectrices (FcR). Ces interactions font lobjet du paragraphe suivant.

144

II.

Interactions directes avec de nombreux types cellulaires

Les complexes immuns peuvent activer localement un grand nombre de cellules grce la prsence, leur surface, d'units de reconnaissance pour le fragment Fc des immunoglobulines. Les FcR spcifiques des IgG, IgA et IgM sont nomms respectivement FcR, FcR et FcR (172). Trois types de FcR ont t identifis la surface des leucocytes (278). Le FcRI (CD64), rcepteur de haute affinit pour le fragment Fc, est principalement retrouv la surface des cellules dendritiques, des monocytes/macrophages et dans une moindre mesure des polynuclaires neutrophiles. Le FcRII (CD32), rcepteur daffinit moyenne (278) ou faible (158) selon les auteurs, se dcline en FcRIIa (CD32a), porteur dun motif ITAM activateur (pour immunoreceptor tyrosine-based activation motifs), et FcRIIb (CD32b), porteur dun motif ITIM inhibiteur (pour immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motifs). Si le FcRIIb est principalement retrouv la surface des lymphocytes B et des mastocytes, le FcRIIa, quant lui, est retrouv la surface de nombreux types cellulaires : cellules dendritiques, thrombocytes, neutrophiles et monocytes/macrophages (208, 269). Enfin, le FcRIII (CD16), rcepteur de faible affinit, est retrouv la surface des granulocytes neutrophiles, basophiles et osinophiles, des cellules NK, des mastocytes et des monocytes/macrophages. Il nest pas observs la surface des lymphocytes B (278). Notons que des FcR ont t identifis la surface des polynuclaires neutrophiles, osinophiles et des monocytes/macrophages. Les FcR, quant eux, sont principalement retrouvs la surface des monocytes/macrophages (172). Les consquences biologiques dpendent du type cellulaire activ. Dans le cadre de lhypersensibilit de type III, un rle majeur est jou par les thrombocytes, les monocytes-macrophages et les polynuclaires neutrophiles. Les mastocytes jouent galement un rle important dans lentretien du processus inflammatoire mais semblent activs par les anaphylatoxines C3a et C5a plutt que par le biais de leurs FcR. Quant aux osinophiles et aux cellules NK, ils ne semblent jouer quun rle anecdotique dans la formation des lsions tissulaires au cours du processus dhypersensibilit de type III. Les osinophiles possdent leur surface des rcepteurs pour le fragment Fc des immunoglobulines (FcRI, FcRIIa, FcRIII, FcR) et sont capables dinitier lADCC. Bien que les osinophiles soient connus pour jouer un rle central dans la dfense antiparasitaire, ils ne jouent quun rle mineur dans lhypersensibilit de type III (278). Les cellules NK, quant elles, sont dotes de FcRIII et jouent un rle majeur dans la dfense anti-tumorale. En revanche, leur action cytotoxique est inhibe vis--vis des cellules du soi par reconnaissance du complexe majeur dhistocompatibilit de type 1 (CMH1) (38). 145

A.

Les plaquettes sanguines

1. Voies dactivation des plaquettes sanguines

Les plaquettes sanguines (ou thrombocytes) portent leur surface des rcepteurs pour le fragment Fc des immunoglobulines qui, lorsquils sont activs, induisent lagrgation plaquettaire et la libration damines vasoactives. Seules les immunoglobulines de classe IgG sont capables dinduire cette activation par le biais du rcepteur FcRIIa (38, 107, 172). L'activation plaquettaire peut galement tre secondaire des lsions endothliales, qui exposent des fibres de collagne de la membrane basale. Le collagne constitue en effet un puissant activateur de lagrgation plaquettaire (28). Les plaquettes sont galement actives par la prsence dans leur environnement de prostaglandines et de PAF, notamment suite la dgranulation des polynuclaires basophiles et des mastocytes. Comme nous lavons pralablement soulev, des diffrences majeures sont observes entre espces. En effet, les plaquettes humaines portent leur surface des rcepteurs pour le fragment Fc des immunoglobulines mais pas pour le C3b alors que, linverse, chez les non primates, les plaquettes portent leur surface des rcepteurs pour le C3b mais pas pour les immunoglobulines. La voie dactivation des plaquettes sanguines diffre donc probablement dune espce lautre.

2. Consquences biologiques de lactivation plaquettaire

Lactivation des plaquettes conduit dune part, leur agrgation et la formation de microthrombus, et, dautre part, la libration de nombreuses molcules biologiquement actives : enzymes protolytiques (lastase, cathepsine, collagnase), amines vasoactives (histamine chez les non primates, srotonine), prostaglandines, thromboxane (28). Les plaquettes produisent galement des facteurs de croissance (PDGF pour platelet derived growth factor) qui peuvent intervenir dans la prolifration cellulaire observe localement dans certaines maladies complexes immuns comme les glomrulonphrites (prolifration des cellules msangiales et endothliales) et l'arthrite rhumatode (99, 172). Le PDGF manifeste galement un pouvoir chimiotactique vis--vis des monocytes et des polynuclaires neutrophiles. Il a t montr exprimentalement que lactivation plaquettaire joue un rle dans laugmentation de la permabilit vasculaire. Les amines vasoactives et les produits drivs de lacide arachidonique librs par les plaquettes provoquent la rtractation des cellules endothliales (86). Les enzymes 146

protolytiques peuvent dgrader la membrane basale mise nue. Lactivation plaquettaire se trouve ainsi favorise et un processus auto-aggravant sinstalle. Enfin, au sein du glomrule rnal, les protines cationiques libres vont pouvoir se lier la membrane basale glomrulaire et neutraliser les charges anioniques qui jouent un vritable rle de filtre lectrostatique vis--vis des molcules circulantes (136). Ainsi, la permabilit vasculaire est accrue et favorise dune part, linitiation ou laggravation du dpt des complexes immuns circulants dans les tissus, particulirement au sein de lendothlium vasculaire, et dautre part, la migration et lextravasation de cellules mises en jeu dans le processus inflammatoire. En effet, les amines vasoactives prsentent une action chimiotactique envers les neutrophiles. Par ailleurs, laugmentation progressive de la taille et du nombre des complexes immuns dposs conduit une activation croissante du systme du complment et du processus dactivation cellulaire mdi par les FcR (136, 172). Paralllement l'activation et l'agrgation plaquettaire, les lsions endothliales induites et la libration du facteur 3 plaquettaire (PF3) dclenchent la cascade de la coagulation et le dpt de fibrine. De plus, le facteur de Hageman (facteur XII) est aussi activ par le collagne membranaire mis nu lorsque survient une lsion endothliale, quelle quen soit lorigine. Ce facteur dclenche la coagulation plasmatique avec accumulation de polymres de fibrine dans le tissu, comme cela a t observ au sein du glomrule rnal (177). Le dpt de fibrine joue un rle essentiel dans la raction inflammatoire. Celle-ci se dpose l'intrieur et l'extrieur des vaisseaux sanguins pour renforcer les tissus enflamms (177). La formation de fibrine est le stade ultime de la cascade de la coagulation. Le dpt intravasculaire de fibrine peut provoquer une ischmie tissulaire et constitue ainsi un facteur aggravant les lsions tissulaires. Une fois activ, le facteur de Hageman active galement le complment, dont les nombreux effets dltres ont t dtaills prcdemment et le systme des kinines (synthse de bradykinine) qui va accrotre le flux sanguin, la permabilit vasculaire et la migration leucocytaire (155). Ceci conduit linstallation dun cercle vicieux qui aboutit laggravation progressive des lsions tissulaires. Le fait de rendre des animaux de laboratoire dficients en thrombocytes pralablement linjection de complexes immuns na pas empch le dveloppement dune raction dHSIII mais a fortement attnu les lsions tissulaires que celle-ci implique (136). En effet, il a t constat que la dpltion spcifique plaquettaire attnue les symptmes de glomrulonphrite chez le rat en diminuant fortement la protinurie, en amliorant l'histologie glomrulaire et en diminuant le dpt de fibrine (106, 136). 147

Ces lments nous laissent donc penser que les thrombocytes ninterviennent pas seuls dans le processus de lsions tissulaires initi par le dpt des complexes immuns, mais quils constituent de manire vidente une composante aggravante (107).

B.

Les monocytes / macrophages

Les monocytes sont librs de la moelle osseuse sous une forme immature et peuvent se diffrencier dans les tissus soit en macrophages soit en cellules dendritiques. Les macrophages reprsentent la majorit des cellules phagocytaires rsidantes des tissus. Certains sont issus de monocytes ayant quitt les vaisseaux par diapdse, tels que les macrophages alvolaires des poumons, les histiocytes du tissu conjonctif, les macrophages pritonaux, pleuraux et ganglionnaires. Dautres proviennent de la maturation de monocytes dj tablis dans les tissus tels les macrophages splniques, les macrophages hpatiques ou cellules de Kpffer, les ostoclastes des os, les cellules msangiales des glomrules rnaux et les cellules de la microglie dans le systme nerveux central (38). Interviendront donc dans le processus inflammatoire des macrophages rsidants et des monocytes attirs depuis le compartiment vasculaire par chimiotactisme (effet de C3a et C5a notamment) et qui se diffrencient localement en macrophages.

1. Les macrophages, des cellules phagocytaires

Les macrophages, et plus gnralement les cellules phagocytaires, possdent une machinerie intracellulaire dont la fonction est linternalisation et la dgradation, au sein de vsicules spcialises, des particules cibles. Ils participent notamment la phagocytose des cellules apoptotiques, en particulier des neutrophiles apoptotiques, dont la mise en uvre constitue un lment clef de la rsolution de linflammation. (38)

2. Droulement de la phagocytose
La phagocytose comporte trois tapes : ladhrence du phagocyte la particule cible, suivie de linternalisation, puis la dgradation ou lyse de la particule. Ces fonctions essentielles mettent en jeu un ensemble de rcepteurs impliqus dans la reconnaissance et linternalisation des particules. Les rcepteurs des opsonines incluent les rcepteurs pour le fragment Fc des immunoglobulines de classe IgM et IgG (FcR, FcRI, FcRIIa, FcRIIb et FcRIII) et les rcepteurs aux fragments du complment activ C3b et iC3b, respectivement CR1 et CR3, CR4 (Figure 39). Les rcepteurs FcR pour le fragment Fc des IgA ont t galement mis en vidence. Les monocytes, les macrophages, 148

mais aussi les polynuclaires neutrophiles expriment des combinaisons diffrentes de FcR, ainsi la reconnaissance dune particule opsonise par des IgG se fait simultanment par diffrents types de FcR ayant soit un effet activateur car contenant un motif ITAM dans leur domaine intracellulaire aboutissant une cascade de phosphorylations intracellulaires, soit un effet inhibiteur car contenant un motif ITIM recrutant une phosphatase inhibitrice. La liaison des IgG aux rcepteurs activateurs de haute affinit (FcRI) ou daffinit moyenne faible (respectivement FcRIIa et FcRIII) dclenche linternalisation de la particule. Ce processus est rgul par liaison croise aux rcepteurs inhibiteurs FcRIIb. Les rcepteurs pour le fragment Fc cooprent avec les rcepteurs du complment pour permettre une meilleure efficacit de phagocytose. Par exemple le CR1 lie de nombreuses opsonines (C1q, C4b et surtout C3b) et la liaison dune particule au CR1 va potentialiser la phagocytose impliquant les FcR en favorisant le rapprochement de la cellule cible avec la cellule effectrice (38, 172). Figure 39 : Reprsentation schmatique des principaux rcepteurs de surface exprims par les macrophages, daprs (278)

Les mcanismes par lesquels les cellules phagocytaires occasionnent des lsions tissulaires au cours de lhypersensibilit de type III sont le reflet de leur fonction biologique, mise en jeu dans la dfense contre les agents infectieux. Au cours de ce processus, les pathognes sont internaliss et soumis une srie de systmes bactricides comprenant deux mcanismes de dfense antimicrobiens : lattaque oxydative et non oxydative (155). 149

Lattaque oxydative utilise les radicaux oxygns (ROS de reactive oxygen species) et les radicaux azots (RNS de reactive nitrogen species) (155) : Les radicaux oxygns sont produits par le complexe enzymatique NADPH phagosome oxydase (ou phox). Les particules phagocytes sont internalises dans des vacuoles appeles phagosomes, dans lesquelles les radicaux oxygns sont utiliss comme microbicides. Les radicaux oxygns incluent un mlange danion superoxyde (O2-), de peroxyde dhydrogne (H2O2), et dacide hypochlor (HOCl), composant actif de leau de javel. La production des ROS est dclenche par la phagocytose, qui active la NADPH phagosome oxydase. Le complexe enzymatique produit ensuite lanion superoxyde. Les autres espces de ractifs oxygns trs toxiques (le peroxyde dhydrogne et lacide hypochlor) sont gnres partir du superoxyde. La sensibilit trs accrue aux infections, bactriennes et mycosiques observe chez les patients dots dune phox dficiente tmoigne de son importance dans la dfense antimicrobienne. Par ailleurs, aprs leur activation, les phagocytes expriment des taux levs de lenzyme iNOS (pour inductible nitric oxide synthetase). Loxyde nitrique a une activit antimicrobienne puissante et peut se combiner avec lanion superoxyde pour donner des substances antimicrobiennes encore plus puissantes. Les dfenses non oxydatives incluent diverses enzymes (lastase, collagnase et lysozyme par exemple), qui entranent une cassure hydrolytique de composants structuraux essentiels des agents microbiens.

3. Echec du processus de phagocytose

Si la cible ne peut tre phagocyte, ce qui survient lors du dpt de complexes immuns au sein dun tissu, le contenu des lysosomes est libr proximit immdiate de la cible, selon le processus dit dexocytose. Lorsqu'elles sont libres dans le sang ou les liquides interstitiels, les enzymes lysosomiales ne dclenchent pas de processus inflammatoire car elles sont rapidement neutralises par des inhibiteurs sriques. Par contre, si les phagocytes sont troitement lis par les rgions Fc aux complexes immuns dans les tissus, les enzymes ne sont pas neutralises et dgradent le tissu sousjacent. Le processus de phagocytose drive alors vers un processus de cytotoxicit cellulaire dpendante des anticorps (ADCC) analogue celui mis en place par le biais des polynuclaires. (172)

150

4. Scrtion de mdiateurs de linflammation

La phagocytose nest pas la seule fonction des monocytes/macrophages. Au contact des pathognes ils vont galement produire toute une srie de mdiateurs solubles, de cytokines et de chemokines (ou chimiokines), aux proprits pro-inflammatoires et chimiotactiques (38). Le pontage des rcepteurs de Fc et de C3 active le phagocyte, ce qui dclenche lactivation de la phospholipase A2 et la libration subsquente de lacide arachidonique partir des phospholipides membranaires. Ce mtabolite est le prcurseur des eicosanodes, cest--dire du thromboxane, des prostaglandines et des leucotrines (86). De plus, l'activation des macrophages favorise la libration par ceux-ci de TNF-, d'IL-1, dIL-6 et de MIP-1 (pour macrophage inflammatory protein) qui contribuent amplifier les phnomnes inflammatoires locaux, notamment par laugmentation du nombre de molcules dadhrence exprimes la surface des cellules endothliales vasculaires et le recrutement des leucocytes au site inflammatoire (86). De plus, lIL-1 favorise sa propre synthse ainsi que celle dIL-6 par les macrophages et les cellules endothliales. Par ailleurs, les macrophages activs librent galement l'IL-8 qui est chimiotactique vis--vis des leucocytes et plus particulirement vis--vis des polynuclaires neutrophiles (38, 99). Toutefois, les macrophages librent galement des molcules anti-inflammatoires comme le TGF-. Le TNF-, lIL-1, et le TGF-, en tant que facteurs de croissance, vont favoriser le dveloppement de lsions prolifratives au sein des tissus (20). Enfin, les macrophages peuvent synthtiser certains facteurs de la coagulation (PAF) et composants du complment (C3) (172). Linflammation locale gnre entre autres par laction des macrophages et du complment constitue dans son ensemble un mcanisme effecteur de limmunit inne. Linflammation permet de recruter au site de linfection des cellules phagocytaires circulantes qui sont attires au sein des tissus par la libration locale de facteurs solubles chimiotactiques. On retrouve tout particulirement parmi ces phagocytes les polynuclaires neutrophiles, qui sont des cellules courte dure de vie et dont la fonction est galement la phagocytose de la particule cible.

151

C.

Les polynuclaires neutrophiles

Les neutrophiles constituent chez lhomme comme chez les carnivores domestiques 60 70% des leucocytes circulants et sont ainsi beaucoup plus nombreux que les osinophiles et les basophiles, qui ne reprsentent respectivement que 1 3% et moins de 1% des leucocytes circulants. Cependant, ce taux varie selon lespce considre. Ainsi, les neutrophiles ne reprsentent que 50% des leucocytes circulants chez le cheval et 20 30% chez les bovins, ovins et chez les rongeurs utiliss en laboratoire (278).

1. Voies dactivation des neutrophiles

Les neutrophiles humains portent leur surface des rcepteurs pour le fragment Fc des IgG (FcRIIa, FcRIII) qui, lorsquils sont activs, peuvent conduire la phagocytose de complexes immuns ou la libration locale du contenu de leurs granules intra-cytoplasmiques. Les neutrophiles possdent galement des rcepteurs pour les IgA (FcR) et les IgE (FcRII) (172). Bien que les neutrophiles soient capables dune reconnaissance directe des pathognes, la fixation et la phagocytose sont nettement amliores lorsque les cibles sont opsonises par des anticorps, des composants du complment (C3b) ou les deux. Lactivation des neutrophiles peut donc survenir par la fixation du C3b, via le CR1, et/ou du fragment Fc des immunoglobulines, via les FcR (Figure 40) (155). Le rle majeur des neutrophiles dans la gense des lsions tissulaires au cours du processus dhypersensibilit de type III a t mis en vidence exprimentalement. Chez des animaux rendus incapables de synthtiser des FcR fonctionnels, la restauration slective des capacits de synthse des FcRIIa et FcRIII des neutrophiles, les autres types cellulaires ne possdant toujours aucun FcR fonctionnel leur surface, suffit elle seule linduction de lsions tissulaires au cours de modles exprimentaux de maladie dpts de complexes immuns, notamment la raction passive dArthus inverse (281). Ceci ne permet pas, cependant, dexclure lintervention conjointe dautres types cellulaires au cours du processus lsionnel. La dure de vie des neutrophiles est courte : aprs la phagocytose, les neutrophiles sont rapidement limins par les macrophages du foyer inflammatoire, ce qui limite les lsions tissulaires. En effet, contrairement aux macrophages, les neutrophiles ne rsident pas dans les tissus mais y sont attirs par la synthse de facteurs chimiotactiques produits par lactivation locale dautres types cellulaires. (155, 172)

152

Figure 40 : Reprsentation schmatique des principaux rcepteurs de surface exprims par les polynuclaires neutrophiles, daprs (278)

2. Migration des neutrophiles jusquau site inflammatoire

Les polynuclaires neutrophiles demeurent les acteurs principaux des premires tapes de la raction inflammatoire. Ce rle privilgi par rapport aux monocytes/macrophages est lie leur capacit plus importante de migration, dadhrence, de locomotion, de phagocytose et de bactricidie (155). Pour se dplacer vers les sites inflammatoires, les neutrophiles sorientent selon le gradient de facteurs chimiotactiques, solubles ou immobiliss sur les cellules endothliales telles que lIL-8, les leucotrines B4, le PAF, les anaphylatoxines C3a et C5a (62). Linfluence conjugue du courant circulatoire et des slectines prsentes la surface des cellules endothliales favorise le roulement des polynuclaires neutrophiles le long de la paroi vasculaire. Puis la fixation de chimiokines ou dautres substances chimio-attractantes sur des rcepteurs membranaires des neutrophiles dclenche un signal dactivation qui induit un changement de conformation des intgrines de la membrane, ce qui augmente son affinit pour les molcules dadhrence intercellulaires (CAM, pour cell adhesion molecule) de lendothlium (Figure 41). La diapdse, qui constitue ltape finale de cette migration, dpend dune glycoprotine exprime spcifiquement au niveau des jonctions intercellulaires des 153

cellules endothliales. Les divers mdiateurs inflammatoires impliqus dans le processus de migration des neutrophiles (TNF-, leucotrines B4, PAF) exercent un effet de pr-activation qui se traduit par une augmentation des capacits dadhrence, de phagocytose, et de bactricidie des neutrophiles. (155) Figure 41 : Molcules impliques dans ladhrence des neutrophiles lendothlium vasculaire, daprs (155)

De plus, la fixation de complexes immuns opsoniss par le C1q aux cellules endothliales par lintermdiaire de leurs rcepteurs pour le C1q stimule lexpression de molcules dadhrence la surface des cellules endothliales ainsi actives et favorise secondairement lattachement des leucocytes et leur extravasation au site inflammatoire (167). Les neutrophiles migrent au site de linflammation avant les monocytes. Leur pouvoir bactricide repose sur les mmes mcanismes que ceux mis en jeu par les macrophages. Cependant, les neutrophiles possdent une arme supplmentaire base sur la synthse de peptides cationiques dots dune activit antimicrobienne large spectre, incluant les dfensines et les cathlicidines (155).

154

3. Activation du processus de phagocytose

La phagocytose mise en uvre par les neutrophiles est semblable celle des macrophages. Cependant, les enzymes lytiques et les substances bactricides des neutrophiles sont contenues dans des granules primaires et secondaires (155, 172) : les granules primaires, plus gros et plus denses, reprsentent un type de lysosomes contenant des hydrolases acides, des protases neutres et des protines qui jouent un rle majeur dans le pouvoir bactricide des neutrophiles (myloproxidase, lysozyme, protines cationiques et dfensines) et dans leur action pro-inflammatoire (lastase et diverses enzymes lysosomiales) ; les granules secondaires, plus petits, contiennent de la collagnase. Cette enzyme est capable dhydrolyser la matrice extracellulaire et participe ainsi la migration des neutrophiles au site inflammatoire. Un autre compartiment granulaire, appel vsicules de scrtion, et gnr par endocytose. Il constitue une rserve en rcepteurs, notamment en rcepteurs du C3b (CR1). Ces vsicules sont trs facilement mobilisables la membrane plasmique et jouent un rle essentiel dans les fonctions dadhrence et de migration des neutrophiles. Au cours du processus de phagocytose, les granules fusionnent avec les phagosomes, dont les contenus sont ensuite digrs et limins selon le mme processus que celui mis en uvre au sein des macrophages.

4. Exocytose des granules intra-cytoplasmiques

Plusieurs travaux ont mis laccent sur lambivalence des polynuclaires neutrophiles (38). En effet, leur activation aboutit la stimulation de la fonction de phagocytose mais aussi lexocytose de leurs granules intra-cytoplasmiques qui conduit la libration de protases et de radicaux oxygns. Ainsi, une action prolonge des neutrophiles au site inflammatoire peut devenir dltre pour les tissus environnants. Cet effet pro-inflammatoire des neutrophiles, rcemment tay par la dmonstration de leur capacit synthtiser la plupart des cytokines de linflammation, les rapproche des macrophages qui en demeurent cependant la principale source. Les protases qui peuvent tre libres dans le milieu extracellulaire au cours de ce processus jouent un rle particulirement dltre pour les tissus de lhte au cours dinflammations chroniques. Par

155

exemple, llastase et la protinase 3, deux srine protases actives pH neutre et proches de la trypsine, ont la capacit de dgrader llastine et de nombreuses protines de la matrice extracellulaire telles que la laminine, la vitronectine ou le collagne de type 4 (38, 137). Lexocytose des granules neutrophiliques conduit galement la lyse des cellules situes au voisinage et est probablement responsable de la majeure partie des lsions tissulaires qui suivent le dclenchement dune raction dhypersensibilit de type III (107). Cependant, pour ce qui concerne le dpt de complexes au sein des glomrules rnaux, il semble que le mcanisme majeur par lequel les neutrophiles causent des lsions glomrulaires passe par la synthse de substances ractives de loxygne plus que par la production denzymes protolytiques (1). L'afflux de polynuclaires neutrophiles est donc un lment dterminant dans la production de lsions locales. Ils interviennent en phagocytant les complexes immuns mais galement en librant par exocytose le contenu de leurs vsicules lysosomiales qui est directement en cause dans les lsions tissulaires locales : altration des membranes, ncrose, fibrose. (99)

5. Formation dun rseau extracellulaire

Une dernire arme anti-infectieuse des neutrophiles a t dcouverte et explore ces dernires annes (27). Il semble que les neutrophiles soient capables de librer des granules contenant des protines et de la chromatine qui permettent la constitution dun rseau extracellulaire pigeant, limage dune toile daraigne, les agents pathognes. Cette capacit, dnomme NET (pour neutrophil extracellular traps), conduit un meilleur ciblage du pathogne et limite ainsi les dommages collatraux subis par les tissus avoisinants. En effet, le NET semble constituer une vritable barrire physique qui prvient, dune part, la dispersion de lagent pathogne au sein du tissu, et dautre part, la diffusion des protines actives exocytes par ces mmes neutrophiles. Leur pouvoir pathogne potentiel pour les tissus sains se trouve ainsi fortement diminu. Toutefois, le NET peut avoir des effets nfastes vis--vis de lhte par la libration dans le milieu extracellulaire dhistones normalement inaccessibles au systme immunitaire. Une activation prolonge des neutrophiles, comme un dmantlement inefficace de ce rseau noform, amenant sa persistance, pourrait favoriser le dveloppement dun processus auto-immun avec synthse danticorps anti-nuclaires comme cela a t observ chez certains patients atteints de LED (110). Quoi quil en soit, au regard du rle majeur jou par les polynuclaires neutrophiles dans linduction de lsions tissulaires au cours du processus dhypersensibilit de type III, les avantages confrs par le NET lorganisme semblent largement dpasses par les nombreuses actions dltres pralablement numres.

156

D. Les polynuclaires basophiles et les mastocytes

Les seules cellules humaines qui contiennent de lhistamine sont les mastocytes et les basophiles. Chez les non primates, sajoutent les thrombocytes comme nous lavons expos prcdemment (voir paragraphe P3-II.A). Les basophiles sont des polynuclaires circulants absents des tissus normaux, mais qui peuvent tre recruts dans un site particulier par laction de diverses molcules chimioattractantes. Les mastocytes, quant eux, ne peuvent tre dtects dans la circulation mais sont prsents dans le tissu conjonctif et les surfaces muqueuses de tout lorganisme. La biologie de ces cellules peut tre trs diffrente dune espce animale lautre. Par exemple (172) : chez le lapin, lhistamine du sang priphrique est concentre presque totalement dans les plaquettes ; chez la souris, il y a peu ou pas de basophiles circulants ; chez le rat, la dgranulation des mastocytes semble se produire un granule la fois, alors que les granules humains tendent fusionner et librer ensemble leur contenu. Dans les diffrents tissus, on peut reconnatre les mastocytes leur contenu en protases. Ces protases, dont les gnes ont t clons et squencs, ont permis la distinction de deux populations mastocytaires (172) : les mastocytes des muqueuses (MMC pour mucosal mast cells) sont caractriss par la prsence de tryptase et labsence de chymase ; ils sont principalement retrouvs dans les poumons et lintestin ; par contre, les mastocytes des tissus conjonctifs (CTMC pour connective tissu mast cells) contiennent les deux types de protases et manifestent une localisation plus ubiquitaire. Les basophiles, quant eux, contiennent trs peu de ces deux protases. Les polynuclaires basophiles et les mastocytes possdent leur surface des rcepteurs pour le fragment Fc des IgE (FcRI) (38, 172) mais aussi des IgG (FcRIII) (158). Lactivation des basophiles et mastocytes peut aussi passer par la voie des anaphylatoxines C3a et C5a. Lactivation des polynuclaires basophiles et des mastocytes, par lune ou lautre voie, conduit leur dgranulation et la libration dhistamine, dhparine, de SRS-A (pour slow reacting substance of anaphylaxis) et de PAF (107). Ainsi, les basophiles et les mastocytes participent la mise en place du processus inflammatoire. Par ailleurs, limportance des mastocytes dans linduction des lsions tissulaires au cours de lhypersensibilit de type III a pu tre mise en vidence par ltude de la

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raction dArthus cutane chez des lignes de souris dficientes en mastocytes. Ces souris dveloppent une raction cutane dont lintensit est fortement diminue en comparaison avec des souris tmoins (303).

Ainsi, les lsions tissulaires qui suivent le dclenchement dun processus dHSIII sont causes par laction combine de diffrentes lignes de cellules, dont lactivation peut survenir par le biais, dune part, de leurs rcepteurs pour les composants biologiquement actifs du complment (principalement les rcepteurs pour les anaphylatoxines C3aR et C5aR) et dautre part, de leurs rcepteurs pour le fragment Fc (FcR) des Ig constitutives des CI dposs au sein des tissus. (cf. Bilan en Annexe 1.E p. 209)

In vivo, ces diffrents rcepteurs cooprent de manire favoriser le rapprochement de la

particule cible et de la cellule effectrice et ainsi permettre une meilleure efficacit de la phagocytose. Cependant, quelle est limportance relative de chacun de ces deux mcanismes dans ltablissement des lsions tissulaires lors dHSIII ? Tentons maintenant de rpondre cette question.

158

III.

Implication relative des mcanismes effecteurs dans ltablissement des lsions tissulaires

Les ractions inflammatoires induites par les complexes immuns sont dtermines, dune part, par leur capacit activer le systme du complment et entraner la synthse de mdiateurs solubles de linflammation et, dautre part, interagir avec de nombreux types cellulaires via les rcepteurs de Fc. Lutilisation de souris gntiquement dficientes en FcR, en composants du complment ou en rcepteurs du complment, a permis danalyser la contribution de chacun de ces lments dans la rponse inflammatoire. De manire pralable, notons que la plupart des exprimentations ralises sur la pathognse des lsions mdies par les complexes immuns ont repos sur lutilisation de complexes constitus dimmunoglobulines de lisotype G. Pour autant, les mcanismes mis en vidence sont gnraliss lensemble des maladies mdies par les complexes immuns. Cette premire approximation peut tre considre comme valable dans la mesure o les complexes, retrouvs in vivo dans les tissus lors de maladies mdies par les complexes immuns, sont le plus souvent constitus dIgG (107). Pour autant lintervention dautres isotypes dimmunoglobulines au cours du processus pathologique nest pas exclue. Cest ainsi que les nphropathies IgA reposent sur limplication dimmunoglobulines de lisotype A (39). Quant aux IgM, elles semblent intervenir au cours du processus pathogne de la polyarthrite rhumatode (107).

A.

Contribution des rcepteurs pour le fragment Fc des immunoglobulines

1. Le rle majeur des FcR

Un rle prpondrant jou par les rcepteurs pour le fragment Fc des immunoglobulines a pu tre dmontr. Des souris prsentant un dfaut gntique dans la chane , dterminant la transduction au sein des cellules du signal dactivation en provenance des rcepteurs FcRI, FcRIII et FcRI, ont t gnres (265, 268). Les animaux possdant un systme du complment intact mais associ des rcepteurs FcR non fonctionnels, ont manifest une raction dArthus dune intensit fortement attnue. De plus, linactivation du systme du complment par linjection de CVF (pour cobra venom factor) chez ces mmes animaux a montr un effet discret mais visible se traduisant par une attnuation supplmentaire de la raction locale. De manire similaire, lactivation des FcR est requise pour le dclenchement des glomrulonphrites mdies par les complexes immuns dans le

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modle murin de LED (41). Nous pouvons ce stade conclure que les FcR sont essentiels linitiation de la raction inflammatoire au cours de la raction dArthus et que le systme du complment agit de manire discrte mais synergique. Dautres tudes ont t menes sur des souris gntiquement modifies pour tre dficientes en composants C3 et C4 (264). Une raction cutane dArthus passive inverse, base sur linjection intradermique danticorps spcifiquement dirigs contre des antignes pralablement injects par voie intraveineuse, a t induite chez ces souris. La raction locale observe est reste inchange par cette dltion en composants du complment par rapport celle observe chez les souris tmoins. Ainsi, au regard de leurs rsultats, les auteurs ont conclu que la prsence dun systme du complment intact nest ni requise, ni dterminante dans le droulement de la raction dArthus cutane, du moins en prsence dune voie dactivation dpendante des FcR fonctionnelle. Cependant, la contribution relative des FcRI et FcRIII dans linduction des lsions reste indtermine, tout autant que limplication des cellules effectrices qui les portent. De tels rsultats peuvent surprendre. Dune part, linduction dun dficit en C3 et C4 interdit effectivement la formation des C3 et C5 convertases des voies classique et alterne. Toutefois, la synthse du C5 nest pas pour autant inhibe et certaines enzymes protolytiques libres localement par les macrophages et les polynuclaires neutrophiles sont en mesure de cliver le C5 pour former du C5a (158). Au cours de cette tude, un effet rsiduel d au C5a pourrait donc persister et conduire minorer le rle du complment au cours du processus pathologique. Pour autant, les anaphylatoxines ne constituent pas les seules molcules chimio-attractantes libres localement auxquelles les neutrophiles sont sensibles. Citons pour rappel : les prostaglandines, le leucotrine B4, les amines vasoactives, lIL-1, lIL-8, le PAF (pour platelet activating factor) et le PDGF (pour platelet derived growth factor). En cela, il serait envisageable dobserver un maintien de linfiltration des neutrophiles au site inflammatoire en labsence danaphylatoxines. Dautre part, linduction de dficits en composants C3 et C4 conduit une altration de la fonction dpuration par linhibition de la synthse de C3b. Nous pourrions ainsi nous attendre un dpt accentu des complexes au sein des tissus et lobservation dune raction dArthus cutane plus intense. En cela le fait de ne pas observer dvolution lors de linduction de tels dficits peut tout autant prouver laction dltre locale de lactivation du complment dont lactivation est aussi favorable lpuration des complexes quelle nest dfavorable pour les tissus suite au dpt des complexes immuns. ce stade de notre tude, lintervention du complment au cours du processus inflammatoire reste incertaine.

160

2. Le rle des mastocytes dans linitiation de linflammation

Pour aller plus loin, les types cellulaires rsidant au sein de la peau, exprimant leur surface des FcR et susceptibles de dclencher la raction dArthus sont les cellules dendritiques et les mastocytes, revtus de FcRII et FcRIII, ou bien les macrophages rsidants, revtus de FcRI, FcRII et FcRIII (224). Le rle central jou par les mastocytes via leur FcRIII au cours de la raction dArthus cutane a pu tre mis en vidence par lutilisation de lignes de souris dficientes en mastocytes (303). Ces dernires nexpriment quune raction dArthus attnue, dont lintensit est restaure aprs administration de mastocytes prlevs chez des souris de ligne sauvage. Les mastocytes semblent donc jouer un rle majeur dans la raction dArthus cutane, du moins dans son initiation. Limplication formelle du rcepteur FcRIII a t fournie par lutilisation, l encore, de souris gntiquement dficientes en mastocytes (266). Au cours de cette tude, ont t injects aux souris dficientes, dune part des mastocytes prlevs chez des souris exprimant des FcRI et FcRIII non fonctionnels, par altration de synthse de la sous-unit ncessaire la gense du signal dactivation cellulaire, et dautre part, des mastocytes prlevs chez des souris tmoins. Il est apparu tout dabord que la raction inflammatoire observe chez les souris dficientes en mastocytes a t dune intensit suprieure celle manifeste par les souris nexprimant pas de FcR fonctionnels, mais infrieure celle observe chez les souris tmoins. Ces lments nous indiquent que, si les mastocytes jouent un rle prpondrant dans linitiation du processus inflammatoire, ils nagissent pas seuls. Dautres types cellulaires jouent donc un rle dans la gense des lsions tissulaires via leur FcR de surface. Le rle des neutrophiles a ainsi t dmontr trs rcemment (281). De plus, si linjection de mastocytes prlevs chez des souris exprimant des FcR non fonctionnels nentrane aucune intensification de la raction, linjection de mastocytes prlevs chez des souris de ligne sauvage, en revanche, possdant leur surface des FcR fonctionnels, a conduit une rapparition franche des signes locaux (266). A ce stade, limplication majeure du FcRIII est dmontre, bien que de manire indirecte. La dmonstration directe de son implication a t rendue possible par la cration dune ligne de souris gntiquement dficientes spcifiquement en FcRIII (118). Chez ces souris, les FcRIII ne peuvent plus interagir avec leur ligand et sont incapables de stimuler la cytotoxicit dpendante des anticorps et la phagocytose des complexes opsoniss. La raction dArthus a t ainsi fortement attnue chez ces animaux.

161

3. Le rle des neutrophiles dans lentretien de linflammation

La place des FcR dans lentretien du processus inflammatoire a t mise en vidence par ladministration de rcepteurs FcRIIa humains au niveau de la zone dinduction dune raction dArthus cutane passive inverse chez des rats (127). Les rcepteurs libres suppriment de manire dose-dpendante la raction inflammatoire localise induite par les complexes immuns. Paralllement, il a t observ une infiltration de polynuclaires neutrophiles caractristique du phnomne dArthus et non abolie par ladministration de rcepteurs solubles. Cette infiltration, qui nous amne accorder aux polynuclaires neutrophiles un rle majeur dans lentretien et lamplification du processus inflammatoire, a t ainsi attribue lactivation du complment et/ou aux effets que celle-ci induit. En effet, cette observation renforce lide quune activation du systme du complment constitue une tape majeure dans le recrutement des neutrophiles au site inflammatoire. En revanche, les lsions tissulaires induites dpendent de leur activation locale par les FcR. Ces donnes soulignent donc le rle majeur des signaux initis par les fragments Fc dans lactivation locale des cellules effectrices plutt que dans leur recrutement et, par consquent, dans les lsions tissulaires induites au cours du processus dhypersensibilit de type III.

4. Initiation de la cascade dinflammation

Bien que la cascade inflammatoire induite par les complexes immuns implique in fine les actions croises de cellules et de mdiateurs solubles de linflammation, linitiation de la cascade semble dpendre de lactivation des motifs ITAM des FcR dans des tissus tels que les poumons, les reins et la peau (42). Les lsions tissulaires semblent rsulter de lactivation de cellules inflammatoires rsidant dans les tissus et du recrutement de monocytes et de neutrophiles circulants aux sites de dpt des complexes. Dans la peau, les mastocytes rsidants, porteurs de FcR, sont ncessaires linitiation de la raction dArthus (266). Dans les poumons, les cellules responsables de linitiation de la rponse inflammatoire sont probablement les macrophages alvolaires. Ces cellules laborent plusieurs mdiateurs inflammatoires parmi lesquels lIL-1, lIL6, le TNF- et la MIP-1. La production de ces mdiateurs inflammatoires est exacerbe chez les souris dficientes en FcRIIb (42). Lquilibre entre les signaux activateurs principalement mdis par les FcRI et FcRIII et inhibiteurs mdis par les FcRIIb dtermine probablement le seuil dactivation cellulaire de ces cellules rsidantes.

162

5. Rle rgulateur des FcRIIb

La mise en vidence du rle rgulateur du rcepteur FcRIIb, portant une squence inhibitrice ITIM, lors de processus pathologiques mdis par les complexes immuns, a t un aboutissement majeur (42, 269). Tous les autres rcepteurs de Fc contiennent des squences activatrices ITAM comme nous lavons dj spcifi prcdemment. Limportance des rcepteurs FcRIIb a t dmontre par ltude dun modle dalvolite extrinsque chez des souris rendues dficientes en ce rcepteur (42). Chez ces souris, ladministration de doses de complexes immuns ne provoquant pas, par ailleurs, le dclenchement dun syndrome pathologique chez les souris tmoins (de type sauvage), a t accompagn dune inflammation marque. Les macrophages alvolaires prlevs chez ces souris dficientes rpondaient une stimulation par des signaux calciques plus puissants et exprimaient une activit phagocytaire augmente. De plus, les chantillons de liquide bronchoalvolaire prlevs ont permis la mise en vidence dun taux de TNF et dune activit chimiotactique augmente. Ces observations suggrent quune dficience en FcRIIb abaisse le seuil dactivation des cellules inflammatoires rsidantes par les complexes immuns (42). Dautres tudes menes sur des lignes de souris dficientes en FcRIIb ont montr que, lors de LED, lactivation des lymphocytes B autoractifs responsables dun processus auto-immun est amplifie, pouvant conduire jusqu la mort rapide des sujets (23). Cependant, le dficit en FcRIIb ne conduit pas en lui-mme linstallation dun processus auto-immun, elle ne fait quamplifier un processus auto-immun dclench par divers facteurs comme par exemple un dficit en composants du complment (voir paragraphe P2-II.A.1.b). Quoi quil en soit, le rcepteur FcRIIb semble constituer un acteur central dans le maintien de la tolrance au soi (6).

6. Pistes thrapeutiques
Deux stratgies thrapeutiques potentielles sont suggres par ces conclusions : dune part, la stimulation de la voie inhibitrice mdie par les FcRIIb et dautre part, linhibition de la voie mdie par les FcRI ou FcRIII. Toutes deux conduiraient une rduction du dclenchement des rponses inflammatoires locales. Le blocage ou la saturation des FcR par des complexes solubles ont t proposs pour expliquer au moins en partie lefficacit des thrapies bases sur ladministration intraveineuse dIgG, lors de maladies auto-immunes comme le purpura thrombocytopnique, la myasthnie grave ou encore le LED (43). Les IgG injectes sont obtenues par la mise en commun de prlvements effectus chez des milliers de donneurs humains.

163

Une autre approche a t dadministrer des FcR solubles dans lespoir de fixer les complexes immuns avant quils ne se dposent au sein de tissus et ninteragissent avec des cellules qui conduiraient au dveloppement dun processus inflammatoire (79, 127). A titre dexemple, ladministration dune forme soluble du rcepteur de haute affinit FcRI a permis de traiter avec succs la raction dArthus cutane passive chez des animaux exprimentaux (79). Ces rcepteurs solubles, nomms rh-FcRI (pour recombinant human FcRI), expriment un pouvoir antiinflammatoire puissant in vitro : en effet, en plus dinhiber la prcipitation du rseau antigneanticorps en formation, ils bloquent lactivation du systme du complment par les anticorps et rduisent la production de cytokines pro-inflammatoires par les mastocytes en culture. Des capacits analogues ont t observes in vivo : lors de linduction dune raction cutane dArthus passive inverse chez des souris, ladministration locale ou systmique de rh-FcRI rduit la permabilit vasculaire, linfiltration cellulaire locale (neutrophiles surtout), la production de cytokines par les mastocytes activs et la formation de ldme. De la mme manire, des rh-FcRII et rh-FcRIII ont t utiliss (79). En revanche, ils nont pas t dune grande efficacit. En effet, les rh-FcR constituent tous une forme soluble de la rgion extracellulaire des FcR membranaire. En cela, si le rh-FcRI exprime une forte affinit pour les complexes immuns, les rh-FcRII et rh-FcRIII sont de faible affinit. Il se pourrait que cette faible affinit limite leur capacit entrer en comptition avec les FcR membranaires dans la fixation des fragments Fc. Leur capacit 100 fois plus faible de blocage de la synthse locale de cytokines par les mastocytes activs appuie cette hypothse. Cependant, une variabilit peut tre observe entre les diffrents tissus : dans la peau, les FcRIII prsents la surface des mastocytes semblent de premire importance alors que dans le pritoine, ce sont les FcRI prsents sur les macrophages. Dans les poumons, tant les FcRI que les FcRIII contribuent aux lsions tissulaires (158). Quoi quil en soit, le blocage de lactivation des FcR, comme le ciblage des anticorps ou des antignes constitutifs des complexes constituent une piste thrapeutique davenir dans le traitement des maladies mdies par le dpt de complexes immuns comme la polyarthrite rhumatode ou le lupus rythmateux dissmin. Ainsi, quelle place reste-t-il au systme du complment dans linduction des lsions tissulaires ?

164

B.

Action du systme du complment

1. Le rle des anaphylatoxines

Bien que de nombreuses tudes aient pu mettre en vidence le rle majeur jou par les FcR dans lhypersensibilit de type III, dautres soulignent limportance des rcepteurs du C5a dans cette affection (104, 124). Des souris rendues dficientes en C5aR ont manifest une raction dArthus presque totalement bloque dans les poumons et fortement attnue dans les formes pritonales et cutanes (124). De plus, il a t observ un niveau fortement diminu dinfiltrations de neutrophiles et de permabilit vasculaire dans la zone inflammatoire. Des tudes rcentes ont fourni des preuves solides en faveur dune interaction entre les signaux initis par le C5a et par le fragment Fc des IgG constitutives des complexes immuns. En effet, C5aR et FcRIII sont tous deux prsents la surface des macrophages ; il a t montr que durant la fixation massive de complexes dans les alvoles pulmonaires, C5a augmente significativement lactivation des macrophages alvolaires par le FcRIII (258). Il a t aussi dmontr leffet de linteraction C5a-C5aR sur lexpression des ARNm de FcRIII et FcRIIb. C5a augmente la quantit dARNm codant pour les rcepteurs Fc activateurs et diminue la quantit dARNm codant pour les rcepteurs de Fc inhibiteurs (258). Chez des animaux rendus dficients en C5aR, ces effets nont pas t observs. Des tudes ultrieures ont aussi dmontr que les effets de C5a se rpercutent dans le nombre de rcepteurs de Fc prsents la surface cellulaire : sur la membrane du macrophage, la densit de FcRIII augmente alors que celle en FcRIIb diminue (Figure 42) (104). De plus, des tudes visant identifier linfluence de facteurs divers sur linfiltration locale en neutrophiles ont permis didentifier un rle majeur jou par C5a et C5aR (104). Le blocage des C5aR par des fragments Fab danticorps spcifiquement dirigs contre le C5aR, lemploi dun antagoniste spcifique de ce rcepteur et finalement lutilisation de souches de souris dficientes en C5aR, ont montr un blocage quasi-total de la migration des leucocytes aux sites inflammatoires. En effet, comme nous lavons pralablement soulign, les anaphylatoxines expriment un pouvoir chimioattractant, se traduisant par une augmentation significative de ladhsion des granulocytes aux cellules endothliales.

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Figure 42 : Influence de lactivation du C5aR sur lexpression des FcRIII et FcRIIb la surface des macrophages, daprs (257)

Par ailleurs, le systme du complment peut aussi montrer une action anti-inflammatoire. Il a t dmontr que linteraction de macrophages humains avec des complexes peu recouverts de composants actifs du complment tait accompagne du relargage dacide arachidonique, reprsentant la source principale pour la synthse de mdiateur pro-inflammatoire comprenant le PAF. La prsence diC3b sur le complexe bloque cette raction et diminue la production de cytokines inflammatoires telles que lIL-1 et la MIP-1 (279). Remarque : Compte tenu du fait que, chez les non primates, les plaquettes sanguines expriment leur surface des rcepteurs pour le complment (CR1) et non pour les immunoglobulines, leur activation est ainsi mdie par la fixation du complment. De plus, le rle majeur jou par lactivation locale plaquettaire sur laugmentation de la permabilit vasculaire a t prcdemment mis en vidence (voir paragraphe P3-II.A.2 ci-dessus). Ainsi, compte tenu du rle majeur jou par cette augmentation de la permabilit vasculaire locale sur le dpt tissulaire des complexes circulants, nous pouvons nous demander si le complment ne joue pas un rle significativement plus important chez les non-primates que chez les primates. 166

2. Le rle du complexe dattaque des membranes

En dpit du rle secondaire accord aux composants solubles librs par lactivation du systme du complment au cours de la raction dArthus, la formation de complexes dattaque des membranes a t identifie, notamment, dans la peau et les glomrules rnaux de patients atteints de LED (17, 18). Dans ce dernier organe, la formation des CAM semble jouer un rle central dans la gense des lsions tissulaires, et cela en fonction de la localisation intra-glomrulaire des dpts de complexes immuns (1). Ce point sera discut en dtails par la suite (voir paragraphe P3-III.C).

3. Pistes thrapeutiques
Le pouvoir pathogne du systme complment en fait naturellement une cible thrapeutique dans le cadre des maladies complexes immuns. A ce jour, de nombreux agents qui inhibent ou modulent lactivation du complment diffrentes tapes de la cascade dactivation ont t dvelopps (161). Ces agents sont, dune part, des inhibiteurs des tapes initiales de lactivation et dautre part, des inhibiteurs de la voie effectrice qui ninterfrent pas avec les voies initiales (191, 227). Au sein du premier groupe peuvent tre rencontrs (161) : les CR1 solubles (sCR1), capables de rduire la quantit de C3/C4 disponibles pour la formation des C3-convertases (61) ; lhparine, une glucosamine polyanionique capable de fixer le C1 et dinhiber la fixation de C1q aux complexes immuns, bloquant ainsi la formation de la C3 convertase classique (295) ; la compstatine, un peptide synthtique capable de fixer le C3 et dinhiber son clivage protolytique (228) ; des inhibiteurs des protases.

Les principaux reprsentants du second groupe sont les anticorps monoclonaux anti-C5 (Eculizumab par exemple, commercialis sous le nom de Soliris), qui peuvent fixer le C5, bloquer son clivage et la formation de C5a et abroger lassemblage du CAM (146, 291). Des antagonistes de synthse du C5aR rentrent galement dans le second groupe et sont utiliss pour bloquer les pouvoirs chimiotactique et anaphylactique du C5a (263). Si lon considre que lopsonisation des pathognes et des complexes immuns par le C3b est cruciale pour la dfense de lhte et dans la prvention des lsions mdies par le dpt des complexes immuns, il est souhaitable que les agents inhibiteurs interviennent en aval de la formation des C3-

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convertases afin de permettre la formation de C3b. Par ailleurs, au regard du rle jou par le C5a dans lamplification de lactivation des cellules effectrices inflammatoires par stimulation de lexpression membranaire des FcR, il est souhaitable cette fois dintervenir en amont de la production de C5a. Ceci explique lintrt des agents thrapeutiques ciblant le C5, le C5a ou le C5aR. Toutefois, au-del des effets bnfiques produits chez des patients souffrant dun processus inflammatoire dltre, les effets secondaires de tels agents pourraient tout de mme concerner une augmentation du risque infectieux pour ces patients. En effet, le C5a, en tant quanaphylatoxine, et le CAM restent des acteurs importants de la dfense anti-infectieuse. Une phase dessai clinique a t mene en 2004 sur lEculizumab chez des patients atteints de LED. Cet essai aurait mis en vidence linnocuit de la molcule (236).

C.

Influence de la localisation tissulaire des dpts

Les lments exposs prcdemment nous poussent considrer laction du systme du complment de manire subordonne lactivation locale de nombreuses cellules inflammatoires rsidantes et circulantes qui migrent par chimiotactisme jusquau site du dpt. En cela, les cellules actives localement semblent jouer un rle majeur dans la cration des lsions tissulaires locale. Cependant, lintervention des cellules inflammatoires dans la gense de lsions tissulaires reste conditionne par leur accs au site du dpt. En cela, au sein mme dun organe, ce dernier conditionne la part relative des diffrents mcanismes effecteurs mis en jeu dans ltablissement des lsions initiales. Ltude du rein constitue, l encore, un support adapt la dmonstration de ce phnomne. Dans le cadre de lhypersensibilit de type III, les complexes immuns peuvent se fixer et entraner la formation de dpts (1) : sur le versant pithlial de la paroi capillaire, comme lors de glomrulonphrite poststreptococcique, extra-membraneuse ou encore de nphrite lupique ; sur le versant endothlial de la paroi capillaire, comme lors de glomrulonphrite membranoprolifrative de type 1 ou de nphrite lupique ; en zone msangiale, comme lors de nphropathie IgA ou de nphrite lupique. Pour rappel, les dpts en ces diffrents sites peuvent se former par la capture de complexes prforms dans le compartiment circulant ou par la formation in situ de complexes.

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La localisation intra-glomrulaire des complexes dtermine les mcanismes lsionnels qui pourront tre activs localement et par voie de consquence les rpercussions cliniques chez le patient (1). Au cours des dveloppements venir nous discuterons de lintervention des composants terminaux de lactivation du systme du complment et de lactivation locale des cellules inflammatoires circulantes dans la gense des lsions glomrulaires (58).

1. Formation de dpts en zone subpithliale

Dans toutes les formes de glomrulonphrite extra-membraneuse (GEM) exprimentales, la gense des lsions tissulaires semble reposer sur lactivation du systme du complment et non sur limplication des cellules effectrices inflammatoires (131, 238). Ainsi, la GEM se traduit par la prsence dun syndrome nphrotique associ des modifications histologiques discrtes du glomrule et une fonction rnale bien prserve par ailleurs. Cet effet direct semble impliquer les composants terminaux du complment et notamment la formation du CAM en zone subpithliale conduisant une perte de la fonction de barrire glomrulaire. Labsence de signe en faveur dune inflammation aigu lors de GEM peut sans doute tre explique par la formation de dpts en un site spar de la circulation sanguine par la MBG. Par sa prsence, celle-ci empche non seulement lattraction des cellules inflammatoires par les facteurs chimiotactiques produits dans la zone du dpt mais galement leur activation secondaire par le biais de leurs FcR et CR1 membranaires (238). Plusieurs indices en faveur de ce mcanisme immunopathognique sont fournis par ltude du modle de la nphrite de Heymann chez le rat, pour lequel les lsions glomrulaires prsentent de fortes similitudes avec celles observes chez lhomme lors de GEM. Pour rappel, au cours de la nphrite de Heymann, les dpts subpithliaux rsultent de la fixation au sein du glomrule danticorps dirigs contre des antignes prsents la surface des cellules pithliales glomrulaires, dont le principal est la mgaline localise au niveau des puits recouverts de clathrine (83). La fixation des anticorps la membrane des cellules pithliales glomrulaires conduit lactivation locale du systme du complment. Parce que les dpts se forment seulement sur le versant externe de la MBG, i.e. en zone subpithliale de la paroi vasculaire glomrulaire, les facteurs chimiotactiques drivs du complment ne conduisent pas au processus dadhrence immunitaire, par dfaut dinteraction avec les cellules circulantes. En effet, les forces de filtration qui sexercent localement sopposent la diffusion vers la lumire des capillaires des anaphylatoxines produites. Ceci est sans

169

doute lorigine de la nature non inflammatoire des lsions. La protinurie, cependant, est fortement dpendante de lactivation du complment et semble mdie principalement par laction du CAM (complexe C5b-9) (59, 60). Ainsi, titre exprimental, lorsque des manipulations sont mises en uvre chez les sujets afin de prvenir la formation du CAM (comme la dltion en composant C6 du complment), linjection de grandes quantits danticorps nphritogniques naboutit pas une protinurie (7). En revanche, le mcanisme par lequel le CAM cause lapparition dune protinurie reste encore imparfaitement compris. Les effets causs par la prsence du CAM surviennent sans que la lyse cellulaire ne soit ncessaire. Des tudes menes in vitro supportent lide que la formation locale de quantits sub-lytiques de CAM stimule la production de plusieurs mtabolites cytotoxiques par les cellules glomrulaires elles-mmes comprenant des radicaux oxygns, des protases, des prostaglandines, des cytokines et des facteurs de croissance divers (115). Les lments disponibles suggrent que la production de radicaux oxygns par les cellules pithliales glomrulaires en rponse lattaque de quantits sub-lytiques de CAM peut tre responsable de laltration de la permabilit de la MBG qui mne au syndrome nphrotique lors de GEM (58). Une stimulation marque de la production de la protase MMP9 (pour matrix metallopeptidase 9) par les cellules pithliales glomrulaires a cependant t mise en vidence exprimentalement lors de GEM (178). Ainsi, limportance relative des radicaux oxygns et des protases dans linduction des lsions vasculaires lors de GEM reste non entirement lucide. De plus, il a t montr une augmentation de la production de TGF- (pour transforming growth factor) ainsi que de son rcepteur par les cellules pithliales glomrulaires qui est sans doute responsable de la production massive de composants constitutifs de la matrice extracellulaire (256). Ceci entrane la formation de prolongements spiculs et subpithliaux de la MBG ainsi que son paississement, qui caractrisent cette atteinte glomrulaire.

2. Formation de dpts en zone subendothliale

A linverse, les dpts de complexes en zone subendothliale, cest--dire entre la couche constitue par les cellules endothliales et la MBG, sont le plus souvent invariablement accompagns par des modifications histologiques rvlatrices dune rponse inflammatoire svre et dune prolifration cellulaire au sein du glomrule, une forte protinurie et une fonction rnale dtriore. Ils sont en cela les plus pathognes des dpts glomrulaires et sont souvent associs une maladie svre et un pronostic sombre.

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Parce que les dpts subendothliaux sont bien plus accessibles aux cellules circulantes, les lsions tissulaires occasionnes procdent sans doute pour une bonne part de lactivation locale de nombreux types cellulaires, tant par lactivation du complment avec production locale danaphylatoxines chimio-attractantes et de C3b, que par ladhrence immunitaire mdie par leurs FcR et CR1 membranaires (1). Cependant, malgr la forte implication des cellules inflammatoires, le rle du CAM a quand mme pu tre tabli dans les lsions tissulaires occasionnes lors de dpts subendothliaux. Nangaku et al. ont constat une rduction marque des dpts de fibrine, de la formation de thrombi intracapillaires, de la prolifration des cellules endothliales et linfiltration des macrophages chez des animaux dficients en composant C6 (197, 198). Par ailleurs, la formation de CAM la surface des cellules endothliales conduit une augmentation de lexpression membranaire de P-slectines (GMP-140) qui constituent des molcules dadhrence pour les leucocytes et favorisent linfiltration cellulaire au cours du processus inflammatoire (112, 117). Ainsi laction dltre du CAM semble intervenir dans la pathogense des lsions. En revanche, bien quil soit fort probable que ces deux mcanismes lsionnels coexistent, les modifications histologiques observes tmoignent de la mise en place dun processus inflammatoire marqu et semblent confrer la rponse cellulaire un rle majeur (1, 257).

3. Formation de dpts en zone msangiale

Bien que limplication du CAM soit bien tablie lors de dpts subpithliaux et subendothliaux, quoique mineure dans ce dernier cas, son implication lors de dpts msangiaux, comme lors de nphropathie IgA, est nettement moins vidente. Notons, cependant, que les IgA peuvent activer le complment par la voie alterne et conduire la gense locale de nombreux CAM (223, 232). Par opposition aux lsions de la paroi vasculaire qui sont causes par des acteurs immunitaires non glomrulaires, les cellules msangiales peuvent participer elles-mmes la cration des lsions glomrulaires (252, 262). En effet, les cellules msangiales sont capables de produire divers mdiateurs inflammatoires incluant des enzymes protolytiques, des radicaux oxygns et des produits issus du mtabolisme de lacide arachidonique (1, 13, 165, 166, 239). Lactivation des cellules msangiales peut donc conduire la libration locale de mdiateurs qui peuvent dclencher ou amplifier les lsions tissulaires.

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Quelles sont les voies dactivation des cellules msangiales ? In vitro, le CAM stimule la production par les cellules msangiales de radicaux oxygns, de protases et de composants constitutifs de la matrice msangiale (115). In vivo, des modles exprimentaux de glomrulonphrites msangioprolifratives ont t tudis chez des rats rendus dficients en composant C6 (26). Au cours de ces tudes, il a t constat chez les animaux dficients une rduction marque la fois de la lyse et de la prolifration des cellules msangiales glomrulaires, de linfiltration des plaquettes et des macrophages, et de lexpansion de la matrice msangiale par rapport aux sujets tmoins. Toutefois, si la production locale de mdiateurs pro-inflammatoires comme lexpansion de la matrice msangiale peuvent tre attribues, au moins pour partie, aux effets sub-lytiques du CAM sur les cellules msangiales (58), limage des effets observs sur les cellules pithliales glomrulaires, limplication du CAM dans linduction de la prolifration des cellules msangiales ainsi que dans linfiltration des cellules inflammatoires reste encore imparfaitement connue (62). Il semblerait, cependant, que ces effets puissent tre attribus la libration locale dinterleukine-1 par les cellules msangiales (250, 296). De plus, les cellules msangiales en prolifration expriment un taux fortement augment dARNm codant le PDGF (pour platelet derived growth factor) et son rcepteur membranaire. La prolifration cellulaire a pu tre fortement rduite par blocage du PDGF suggrant un mcanisme daction autocrine (138). Laction sub-lytique des CAM assembls localement ne constitue pas la seule voie activatrice des cellules msangiales. En effet, les cellules msangiales sont dotes de la capacit de phagocytose (147). Ainsi, lendocytose de complexes forms ou simplement capts au sein du msangium peut dclencher lactivation cellulaire. La prsence de PAF dans lenvironnement cellulaire semble galement dclencher leur activation (58). Cependant il na pas encore t tabli que ces diffrentes proprits des cellules msangiales sont impliques dans la pathognie des affections glomrulaires (58). Quoi quil en soit, ces rsultats indiquent que le CAM constitue trs probablement un acteur important dans la cration des lsions tissulaires au cours de maladies dpts msangiaux comme la nphropathie IgA. Leur action sublytique sur les cellules msangiales pourrait en tre la raison.

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Enfin, la matrice msangiale reste facilement accessible aux cellules inflammatoires, dautant plus que nous avons vu que des dpts msangiaux et subendothliaux sont souvent associs. Ainsi, laugmentation de la permabilit vasculaire, inhrente au dclenchement dun processus inflammatoire en zone subendothliale, conduit une rtractation des cellules endothliales. Laccs des cellules circulantes la zone msangiale sen trouve ainsi facilit. Si le processus dactivation cellulaire directe via les FcR semble jouer un rle majeur au cours de la raction dArthus cutane, le systme du complment, quant lui, joue un rle essentiel dans la pathognie des glomrulonphrites et le dveloppement de la glomrulosclrose lors dHS systmique. La rponse du tissu rnal aux nombreux mdiateurs librs localement se caractrise tout dabord par lhypertrophie des cellules endothliales et msangiales, la prolifration des cellules msangiales, lexpansion de la matrice msangiale et lpaississement de la membrane basale. Ces modifications conduisent une oblitration progressive des fenestrations cytoplasmiques endothliales et ainsi une rduction de la filtration glomrulaire. Paralllement, la destruction tissulaire opre par les protases et radicaux oxygns librs tant par des cellules infiltres que des cellules rsidantes glomrulaires conduit la hyalinisation et la sclrose du glomrule. Les dgts irrversibles occasionns au glomrule le rendent non fonctionnel et un tissu fibreux cicatriciel le remplace progressivement. De manire schmatique, plus le nombre de glomrules altrs par un tel mcanisme augmente, plus les glomrules encore fonctionnels voient leur dbit de filtration individuel augmenter en compensation, de manire maintenir un dbit global adquat. Cette hyperfiltration secondaire favorise lextension du processus de glomrulosclrose. En effet, une augmentation excessive de la pression au sein des capillaires glomrulaires et du flux de filtration endommage les cellules glomrulaires qui rpondent cette agression par la libration de cytokines et de facteurs de croissance contribuant lexpansion de la matrice msangiale. Par ailleurs, cette hyperfiltration favorise la capture de complexes immuns au sein des glomrules et lextension du processus inflammatoire au sein des glomrules encore fonctionnels. Ainsi, une spirale auto-aggravante se met en place chez le patient.

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Les mcanismes lsionnels mis en uvre au cours de lHSIII prsentent une grande variabilit quant aux rcepteurs et aux cellules effectrices principalement impliqus en fonction de la localisation des dpts de complexes immuns. De manire schmatique, lactivation des cellules effectrices par le biais de leurs FcR membranaires semble jouer un rle majeur dans la pathogense de lHSIII. Pour autant, le systme du complment agit de manire discrte mais synergique. En effet, laction du systme du complment semble subordonne lactivation des FcR prsents la surface des cellules effectrices. Toutefois, le complment peut directement contribuer au dclenchement dune HSIII par lassemblage du CAM dont le rle est particulirement bien mis en vidence en des zones o les cellules inflammatoires nont pas daccs comme en zone subpithliale glomrulaire. (cf. Bilan en Annexe 1.F p. 211) Ainsi, lintervention relative de lune ou lautre de ces voies effectrices doit tre analyse au regard de la localisation tissulaire prcise du dpt. Il apparat que le processus dactivation cellulaire directe via les FcR semble jouer un rle majeur au cours de la raction dArthus cutane. Le systme du complment, quant lui, joue un rle essentiel dans la pathognie des glomrulonphrites et le dveloppement de la glomrulosclrose lors dhypersensibilit systmique.

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CONCLUSION
. Lassociation antigne-anticorps permet lactivation de mcanismes biologiques varis concourant llimination des complexes forms. Ces mcanismes peuvent agir en parallle, au sein des tissus, par exemple, mais aussi, et surtout, de manire successive. En effet, leur intgration au sein dun unique processus dpuration rend ce dernier particulirement efficace dans llimination des complexes immuns forms dans le compartiment circulatoire. Compte tenu du danger que reprsentent les complexes immuns pour lorganisme, on comprend ainsi que le bon fonctionnement de ce processus dpuration constitue un pr-requis pour une prvention efficace des maladies mdies par le dpt des complexes immuns. Les mcanismes mis en jeu dans lpuration des complexes immuns et les principaux organes impliqus dans ce processus ont t dcrits dans la deuxime partie de ce mmoire. Ainsi, les complexes immuns activent le systme du complment, et les composants C3b librs limitent la prcipitation des complexes solubles et favorisent la solubilisation des agrgats insolubles dores et dj forms. Les complexes, alors recouverts de C3b, peuvent se fixer aux rcepteurs pour le C3b, les CR1, exprims la surface des rythrocytes chez les primates, et des thrombocytes chez les autres espces de mammifres. Les complexes immuns sont ainsi transports dans le compartiment circulatoire jusqu ce quils traversent des organes au sein desquels des macrophages rsidants seront capables dtablir des interactions de plus forte avidit leur gard. Il sensuit un transfert des complexes de la surface des rythrocytes vers la surface des macrophages qui sactivent et accomplissent la phagocytose des complexes immuns. Si le foie et la rate sont classiquement reconnus comme les organes majeurs exerant cette action, notamment chez lhomme et le chien, nous avons vu que les poumons jouent un rle prpondrant chez certaines espces comme le porc et dans une moindre mesure le chat. Au cours de cette partie, nous avons galement mis en vidence quun grand nombre de paramtres peuvent concourir au dpt des complexes immuns en de nombreuses localisations de lorganisme. Ainsi, une altration dans lune des voies mises en jeu dans lpuration des complexes immuns augmente significativement le risque de dveloppement dune hypersensibilit de type III. Cependant, le dpt des complexes dans les tissus procde rarement de la mise en uvre dune seule cause favorisante. Bien souvent, le pouvoir pathogne des complexes est dtermin par laction conjointe de plusieurs paramtres. Ainsi, des agrgats de grande taille, non fixs aux rythrocytes, montrent des proprits pro-inflammatoires marques. Paralllement, des complexes de faibles poids molculaires forms en excs dantignes pntrent dans les tissus au sein desquels ils peuvent 175

fixer des anticorps libres nouvellement synthtiss en provenance de la circulation. Dans ce cas, la taille des agrgats va progressivement augmenter et ces derniers vont finalement acqurir la capacit fixer le complment. Ceci amnera frquemment la formation de dpts pathognes. Au-del des proprits intrinsques des anticorps et des antignes qui constituent les complexes (isotype et affinit de lanticorps, taille et charges du complexe), une production entretenue de complexes immuns, observe particulirement lors dune stimulation antignique prolonge, peut conduire un dpassement des capacits dpuration. Ce dernier peut se traduire par un puisement en certains composants ncessaires au bon droulement de lpuration, comme cest le cas pour les composants du complment et les rcepteurs pour le C3b (CR1). Le dpassement des capacits dpuration sera atteint dautant plus rapidement quun dficit primaire est prsent en lun des composants essentiels du processus. Enfin, des facteurs physiologiques semblent jouer un rle majeur et nous pourrons retenir limpact dune augmentation locale, dune part, de la permabilit vasculaire et, dautre part, de la pression sanguine. Cest ainsi que certains organes de filtration, tels le glomrule rnal, la synoviale articulaire, le plexus chorode et le corps ciliaire de lil constituent des sites particulirement exposs au dpt de complexes immuns. Tout au long de ce travail, nous avons mis en lumire laction synergique de systmes biologiques tant dans lpuration des complexes immuns que dans la gense des lsions tissulaires induites par le dpt de ces complexes. Tout dabord, nous avons montr que le processus dpuration des complexes immuns est particulirement efficace du fait de lintgration, dune part, du mcanisme dactivation du systme du complment par les voies classique et alterne et dautre part, de linteraction directe des complexes avec les FcR prsents la surface des cellules effectrices phagocytaires. Le processus lsionnel, objet de la troisime partie, est galement de plus grande ampleur lorsque les complexes immuns dposs dans les tissus possdent la capacit, dune part, dactiver le systme du complment, conduisant notamment une production importante danaphylatoxines et dautre part, dinduire lactivation cellulaire par leur interaction directe avec les FcR exprims la surface des cellules effectrices prsentes localement et responsables de linstallation de linflammation. En effet, le systme du complment exerce une action chimiotactique marque vis-vis des leucocytes circulants (thrombocytes, polynuclaires neutrophiles et monocytes/macrophages) qui se trouvent ainsi recruts au site du dpt, o leur activation semble soprer principalement par ltablissement de liaisons avec les fragments Fc des complexes dposs. Ainsi, bien que lactivation initiale du complment par les complexes immuns favorise leur limination de lorganisme, une activation prolonge et localise conduit linitiation de voies effectrices dont les effets sont dltres pour les tissus.

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Les maladies mdies par le dpt de complexes immuns comprennent donc un grand groupe de syndromes de causes diverses qui, cependant, partagent un mcanisme pathologique commun. Ces maladies peuvent se manifester de manire systmique (maladie auto-immune, maladie srique, infection chronique) ou locale (raction vaccinale, inflammation locale lors de srothrapie). Il semble que le point de rupture majeur responsable de la dviation des mcanismes physiologiques de dfense vers le processus pathologique que constitue lhypersensibilit de type III soit une inadquation entre la charge antignique et les mcanismes dpuration mis en uvre. A cet gard, la lumire de notre tude, il pourrait tre intressant de discuter de limplication prcise de lhypersensibilit de type III dans le dveloppement des affections prcites en mdecine vtrinaire. Enfin, au regard des mcanismes immunopathologiques qui dterminent le dclenchement dune hypersensibilit de type III, il apparat que de nombreux engrenages le constituant se prtent un ciblage thrapeutique. Nous pouvons ainsi distinguer les stratgies qui agissent en amont du dpt tissulaire des complexes immuns de celles qui agissent en aval de ce dpt. Les agents appartenant la premire catgorie auront, par exemple, pour vocation de limiter la persistance des complexes pathognes dans le compartiment circulant. Dans ce cadre, lutilisation dhtropolymres capables de fixer de manire spcifique un antigne donn et le CR1 port la surface des rythrocytes a t value par Nardin et al. (200). Ces polymres constituent ainsi une piste prometteuse pour des patients exprimant des dficits en composants initiaux de la voie classique dactivation du complment, et ainsi une capacit altre dopsonisation des complexes. Dautres stratgies pourront prvenir laccumulation de complexes pathognes en restaurant une rponse humorale en excs danticorps par immunisation passive avec formation de complexes dont la pathognicit sera plus faible que celles observes pour des complexes forms en excs dantignes chez des patients exprimant une rponse humorale de faible intensit. Les agents appartenant la seconde catgorie pourront, quant eux, limiter les consquences lsionnelles induites par les complexes dposs. Ainsi, les stratgies mises en place pourront tre non spcifiques de lhypersensibilit de type III et cibleront par exemple des intermdiaires dont le rle central dans le dclenchement de linflammation locale a t identifi. Ils agiraient ainsi de manire diminuer le recrutement et lactivation de cellules effectrices au site du dpt dans le but de limiter son entretien et son amplification locale. En tout tat de cause, une approche complmentaire permettrait un approfondissement des options thrapeutiques dont lusage serait possible au regard de limplication croissante des molcules immunomodulatrices dans la thrapeutique en mdecine vtrinaire.

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Annexe 1 : Synthse du document

Annexe 1.A - Bilan : Structure et fonctions des complexes immuns

Les Ac, produits terminaux de la rponse immunitaire humorale, prsentent une structure

qui reflte leur dualit fonctionnelle. En effet, les rgions amino-terminales prsentent une diversit structurale considrable, adapte lhtrognit des Ag rencontrs, et sont ainsi destines la fixation de l'Ag. Les rgions carboxy-terminales prsentent en revanche une structure plutt conserve et sont responsables de l'activation de fonctions effectrices dont l'objectif est d'liminer l'Ag de l'organisme. Le squenage des rgions constantes des chanes lourdes a toutefois rvl lexistence de cinq profils de squence de bases bien distincts qui dterminent la classe de l'Ac. On distingue ainsi les IgM, IgG, IgA, IgE et IgD dont les proprits biologiques sont diverses. Les principales Ig impliques au cours du processus d'hypersensibilit de type III sont les IgG et dans une moindre mesure les IgM et IgA. L'association d'un antigne avec l'anticorps qui lui est spcifique conduit la formation d'un

complexe antigne-anticorps encore appel complexe immun (CI). Les bases molculaires de la raction reposent sur la complmentarit, la spcificit et la rversibilit de la liaison entre un Ac et un Ag. Cette interaction physique rsulte de la reconnaissance d'un pitope (dterminant spcifique de l'Ag) par le paratope (site porteur de la spcificit de l'Ac) et de la mise en place de forces attractives et rpulsives dont la rsultante conduit ltablissement dune liaison non covalente entre lAg et lAc. De nombreuses liaisons non covalentes conduisent la formation du complexe Ag-Ac. En cela, si les notions d'affinit et d'avidit caractrisent toutes deux la force et la stabilit de la liaison entre l'Ag et l'Ac, elles n'en restent pas moins bien distinctes : l'affinit concerne une unique relation pitope-paratope alors que l'avidit tient compte des nombreuses relations pitope-paratope qui s'tablissent dans un contexte physiopathologique.

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Lorsque plusieurs Ag et Ac sont impliqus dans la formation du CI, ils forment alors un rseau dont la taille sera dterminante dans l'tablissement des lsions tissulaires. La taille dun CI varie notamment en fonction de la valence de l'Ag, de la valence de l'Ac (dtermine par l'isotype de l'Ig), et des ractions secondaires entre le CI et dautres constituants plasmatiques (principalement la capacit des Ig activer et fixer le complment). Enfin, les concentrations respectives en Ag et Ac sont particulirement dterminantes dans la taille des CI forms. En effet, les complexes forms en excs d'Ac et surtout en excs d'Ag sont de petites tailles. En revanche, les complexes forms au voisinage de la zone d'quivalence sont de plus grande taille. Notons que la solubilit des complexes ainsi forms diminue lorsque leur taille augmente. Les CI peuvent se former directement dans le milieu extravasculaire et dclencher

localement la mise en uvre de nombreux mcanismes effecteurs responsables des lsions tissulaires observes. Les CI peuvent galement se former dans le compartiment circulatoire et se fixer secondairement dans les tissus, former des dpts persistants et induire des lsions tissulaires. La formation de complexes dans le milieu extra ou intravasculaire dpend ainsi de laccs de lAg lun et lautre de ces deux compartiments. En cela, la voie de pntration de lAg est importante, tout comme l'intensit de la rponse humorale qui tend limiter sa diffusion dans l'organisme. Les concentrations respectives en Ag et Ac sont donc dterminantes dans l'orientation locale ou systmique du processus d'HSIII. Ainsi, la mise en place d'une rponse humorale en excs d'Ac tend contenir lAg en son lieu de pntration. Un processus inflammatoire, plus connu sous le nom de phnomne d'Arthus, se dveloppe localement. La raction d'Arthus cutane, d'un point de vue exprimental, et les alvolites allergiques extrinsques, d'un point de vue clinique, en constituent des exemples. Inversement, lorsquun organisme fait face une exposition antignique massive, et/ou rpond par des titres sriques modrs ou faibles dAc spcifiques, une rponse humorale en excs d'Ag est mise en place. Le passage de lAg dans le compartiment circulatoire est favoris ainsi que la formation secondaire de CI circulants. Ces complexes sont en gnral de petite taille et solubles. Ils peuvent en cela chapper au processus dpuration mis en place et se fixer au sein de la paroi de vaisseaux capillaires en des sites de prdilection tels que les glomrules rnaux, le corps ciliaire de lil, la jonction dermo-pidermique, ou encore la synoviale articulaire. Les CI peuvent alors dclencher lactivation de voies effectrices dltres pour les tissus au sein desquels ils se sont dposs.

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Notons quune hypersensibilit de type III intervient souvent comme complication dun syndrome auto-immun (lupus rythmateux dissmin par exemple) ou dun processus infectieux persistant, particulirement chez des sujets produisant de faibles quantits danticorps en rponse la stimulation antignique. En effet, de telles circonstances favorisent une production entretenue de CI dans le compartiment circulatoire et par voie de consquence leur dpt dans les tissus. Pour tre efficaces, les Ac doivent donc reconnatre lAg mais aussi susciter des fonctions

effectrices qui conduiront son limination de lorganisme. Leur intgration au sein dun unique processus dpuration rend ce dernier particulirement efficace dans llimination des CI forms dans le compartiment circulatoire. Compte tenu du danger que reprsentent les CI pour lorganisme, on comprend que le bon fonctionnement de ce processus dpuration constitue un pr-requis pour une prvention efficace des maladies mdies par le dpt des complexes immuns.

Ainsi, dans la deuxime partie, nous raliserons une tude approfondie des mcanismes mis en jeu dans lpuration des complexes circulants. Nous prciserons tout dabord quels sont les organes au sein desquels ce processus est mis en uvre puis les voies dacheminement des complexes en ces lieux. Nous insisterons alors sur le rle central du systme du complment. Pour chacun de ces dveloppements, des diffrences majeures existent entre espces et seront voques. Cependant, les proprits intrinsques des complexes, telles que leur taille, la charge et la classe des anticorps qui les constituent, dont nous venons de rappeler les lments essentiels au cours de cette premire partie, ainsi que de nombreux facteurs tissulaires locaux, favorisent leur persistance dans le compartiment circulatoire et leur dpt secondaire dans certains tissus. Ces aspects seront discuts dans un second temps (voir paragraphe P2-II).

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Annexe 1.B - Bilan : Epuration des complexes immuns

Les CI activent le systme du complment. Les composants C3b librs inhibent la

prcipitation des complexes solubles et favorisent la solubilisation des agrgats insolubles dores-etdj forms. En effet, tant par sa fixation la surface de l'Ag, de manire occuper des sites potentiels dinteractions avec les Ac, que par sa fixation la surface de l'Ac, de manire limiter linteraction des fragments Fc entre eux, le C3b prvient lextension du rseau. Par ailleurs, la rupture de la liaison primaire Ag-Ac semble requise pour la solubilisation des agrgats prforms. Au cours du processus dinhibition de la prcipitation, les composants initiaux de la voie classique dactivation du complment sont absolument ncessaires. La voie alterne ne joue alors quun rle secondaire. En consquence, la taille des CI ainsi que la classe de l'Ac qui le constitue sont dterminantes dans lefficacit de linhibition de la prcipitation. A l'inverse, la solubilisation requiert lintgrit de la voie alterne, mais reste plus rapidement et massivement mise en place en prsence dune voie classique fonctionnelle. Le dclenchement rapide de la voie classique amne la formation prcoce de C3b et contraste avec lhydrolyse spontane du C3 qui initie avec une certaine inertie la cascade dactivation de la voie alterne. Cependant, la capacit dauto-amplification propre la voie alterne devient rapidement ncessaire pour produire la quantit importante de C3b requise pour la solubilisation des agrgats. En effet, la capacit qua le complment inhiber la prcipitation des CI est bien suprieure sa capacit de solubilisation. Cette dernire ncessite un niveau lev dactivation du systme du complment qui va, d'une part, puiser progressivement le systme et, d'autre part, gnrer une rponse inflammatoire plus importante, notamment par la production accrue d'anaphylatoxines, avec des consquences dltres pour les tissus avoisinants. De plus, chez les primates, le complment ragit avec les CI afin de promouvoir leur fixation

aux CR1 exprims la surface des rythrocytes. Chaque rythrocyte possde seulement quelques centaines de CR1 sa surface compars aux plusieurs milliers ports par les neutrophiles, les lymphocytes et les monocytes circulants. Toutefois, dans le compartiment circulatoire, les rythrocytes sont en large supriorit numrique et les CR1, bien que peu nombreux, sont regroups leur surface de manire faciliter ltablissement de liaisons de forte avidit avec les CI opsoniss. Notons que lavidit de complexes pour les rythrocytes augmente avec la taille du rseau Ag-Ac. Un polymorphisme gntique dans le nombre de CR1 exprims la surface des rythrocytes existe au sein d'une population normale. De plus, au sein dun mme individu, une htrognit dans le

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nombre de CR1 ports semble cause par lactivit protolytique des cellules phagocytaires avec lesquelles les rythrocytes entrent en contact lors de leur passage au sein des organes d'puration. La formation de CI de manire excessive ou entretenue pourrait ainsi favoriser la diminution progressive de la capacit de transport des rythrocytes. La fixation des CI la surface des rythrocytes permet, dune part, de prvenir leur interaction avec dautres types cellulaires (thrombocytes, polynuclaires neutrophiles), dont lactivation pourrait se rvler dltre pour les tissus environnants et, dautre part, dassurer leur acheminement jusquaux organes qui seront en charge de leur puration. Chez les non primates, les rythrocytes expriment peu ou pas de CR1 et nont ainsi quune trs faible capacit fixer les CI et les thrombocytes assurent ce rle de transport. Toutefois, il semble que la fixation des CI aux plaquettes sanguines via le complment puisse conduire leur activation et la libration de molcules pro-inflammatoires. Ce mcanisme semble donc constituer un dsavantage biologique et contraste avec celui voqu chez les primates puisque, dans ce dernier cas, lrythrocyte agit en tant que support inerte pour le transport des CI. Les complexes sont ainsi transports dans le compartiment circulatoire jusqu ce quils

traversent des organes au sein desquels des macrophages rsidants seront capables dtablir des interactions de plus forte avidit leur gard. Il sensuit un transfert des complexes de la surface des rythrocytes vers la surface des macrophages qui sactivent et accomplissent la phagocytose des CI. Les FcR sont ncessaires la fixation initiale des CI la surface des macrophages hpatiques. Cependant les FcR nagissent pas seuls. Lintervention de CR est ncessaire la mise en uvre dun transfert durable des CI prsents la surface des rythrocytes ou des thrombocytes vers la surface des cellules phagocytaires. Ainsi, chez les patients hypocomplmentmiques, lors de LED par exemple, seul un arrimage transitoire des complexes aux macrophages est observ et les complexes fixs sont nouveau librs dans la circulation. Ils peuvent alors se dposer dans des tissus comme la peau, les reins et les poumons, o ils peuvent induire des ractions inflammatoires. Plusieurs rcepteurs pour le complment sont prsents la surface des macrophages rsidants. Un rle central semble attribu au CR1. La faible capacit individuelle de liaison des rythrocytes fait de ces cellules de trs bonnes receveuses de CI lorsquelles sont prsentes en excs relativement aux autres types cellulaires, et, linverse, de trs bonnes donneuses de CI lorsquelles sont prsentes en dfaut relativement aux autres types cellulaires. Ainsi, lorsque les rythrocytes traversent les organes dpuration, la prsence dun trs grand nombre de macrophages conduirait ltablissement de 201

liaisons de plus forte avidit entre les complexes et les macrophages ce qui pourrait expliquer le transfert rapide qui sopre depuis la surface des rythrocytes. La rupture des liaisons qui unissent les rythrocytes aux CI semble favorise par la pression hydrostatique leve qui rgne au sein des sinusodes hpatiques. Enfin, bien que non ncessaire au bon droulement du transfert, l'intervention du facteur I, assurant le clivage du C3b en iC3b, pourrait favoriser le transfert des complexes aux CR3 et CR4 ports par les macrophages rsidants. Si le foie et la rate sont classiquement reconnus comme les organes majeurs exerant cette

action dpuration, notamment chez lhomme et le chien, nous avons vu que les poumons jouent un rle prpondrant chez certaines espces comme le porc et dans une moindre mesure le chat.

A ce stade, nous comprenons bien quun dsquilibre entre la formation des complexes immuns et leur puration selon ce mcanisme, lors dune insuffisance en composants du complment ou dune surcharge de la fonction de phagocytose, favorisera leur persistance dans le compartiment circulant et leur dpt dans les tissus. Cependant, de nombreux facteurs locaux vont galement favoriser le dpt des complexes au sein de localisations particulirement vulnrables. Ces nombreux facteurs font lobjet du paragraphe II de cette seconde partie.

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Annexe 1.C - Bilan : Dpt des complexes immuns au sein des tissus

Au cours de cette partie, nous avons vu que de nombreux paramtres concourent au dpt des CI en de nombreuses localisations de lorganisme. Ainsi une inadquation entre la quantit de complexes forms et la capacit de lorganisme en assurer llimination constitue le facteur de risque majeur de dveloppement dune HSIII. Dans ce cadre, l'altration d'un seul des engrenages impliqus dans lpuration des CI, lors d'une dficience du systme du complment, d'un dficit en CR1 la surface des cellules de transport ou d'une altration de la fonction de phagocytose, favorise la persistance des CI dans le compartiment circulatoire. Un dficit en complment peut tre dorigine gntique ou suivre une activation prolonge du systme du complment lors dune maladie CI. Au regard du rle central jou par le C3b, un dficit en composants initiaux de la voie classique d'activation est particulirement dltre. Un dficit en complment ne permet plus l'organisme de maintenir la solubilit des complexes forms. Ces derniers, de taille augmente et peu solubles, sont de plus inefficacement achemins jusquaux organes o sopre normalement leur puration, par dfaut de fixation aux rythrocytes ou aux thrombocytes selon l'espce considre. De plus, les complexes, non opsoniss par le C3b, sont inefficacement prlevs par les cellules phagocytaires rsidantes. Un dficit en complment conduit donc des complexes avec un fort pouvoir pathogne potentiel persister sous forme libre dans le compartiment circulatoire. Ils pourront se dposer secondairement dans les tissus, mais aussi interagir avec dautres types cellulaires, notamment les neutrophiles, par lintermdiaire des nombreux fragments Fc qui les composent. Par ailleurs, au regard de son rle dans la dfense anti-infectieuse, un dficit en complment favorise le dveloppement d'infections rptition qui ont pour consquence une production excessive et entretenue de CI. De plus, un dficit en composants initiaux du complment pourrait dclencher ou amplifier un LED. En effet, un tel dficit conduit, dune part, une puration altre des cellules apoptotiques, considres comme la source principale dautoantignes lors de LED, et favoriserait, dautre part, la persistance de lymphocytes B autoractifs avec pour consquence la production dautoanticorps et la formation de complexes auto-immuns supplmentaires. Ces derniers aggraveront d'autant l'puisement d'un systme d'ores et dj dfaillant. Il sinstalle ainsi une boucle auto-aggravante chez les patients hypocomplmentmiques qui amne au dpt tissulaire des CI.

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 Un niveau diminu de CR1 la surface des rythrocytes conduit, au mme titre qu'un dficit en C3b, une fixation altre et un acheminement insuffisant des CI circulants aux cellules phagocytaires rsidantes. Des facteurs gntiques et acquis semblent impliqus ; toutefois, l'hypothse la plus commune est en faveur d'un clivage protolytique des CR1 par les cellules phagocytaires lors du transfert des CI de la surface des rythrocytes celle des macrophages rsidants. Bien que non strictement ncessaire, le clivage du CR1 membranaire facilite le transfert et permettrait surtout de prvenir la phagocytose des rythrocytes. En cas de production entretenue de CI circulants, un tel mcanisme conduit un puisement progressif des capacits de transport des rythrocytes et la persistance de CI sous forme libre dans le compartiment circulatoire. Un mcanisme identique semble survenir chez les non-primates et conduit une altration de la fonction d'adhrence immunitaire assure par les thrombocytes. Une altration de la phagocytose peut survenir la suite dune surcharge du systme rticulo-endothlial ou dune diminution de lexpression des rcepteurs de surface impliqus du fait dinteractions rptes avec les complexes. Cependant, le dpt des complexes dans les tissus procde rarement de la mise en uvre dune seule cause favorisante. Bien souvent, le pouvoir pathogne des complexes est dtermin par laction conjointe de plusieurs paramtres. En effet, la persistance des complexes n'est pas pathogne en elle-mme et les proprits intrinsques des CI sont dterminantes. Lisotype de lIg constitutive du complexe, par sa capacit activer le complment, influe sur lefficacit de la fonction dpuration. La taille des complexes est un paramtre majeur prendre en compte et dpend principalement du rapport des concentrations en Ag et Ac. Les complexes de grande taille, forms au voisinage de l'quivalence ou en lger excs d'anticorps, sont en gnral purs rapidement du sang. En effet, ils sont constitus de nombreux fragments Fc et sont en mesure d'activer plus fortement le systme complment. Ils prsentent en cela un pouvoir pathogne potentiel marqu mais ne sont normalement pas en mesure de l'exprimer. Toutefois, la faveur dune altration de la fonction dpuration, la persistance sous forme libre de ces CI dans le compartiment circulatoire sera fortement prjudiciable. Ils peuvent en effet se dposer au sein de nombreux organes. Au sein des glomrules rnaux, leur taille ne leur permet pas de traverser la MBG, ainsi, ils s'accumulent en position subendothliale et au sein de la matrice msangiale.

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Les complexes de petite taille, forms en excs dantignes, ont tendance chapper au processus d'puration, persistent dans la circulation plus longtemps et pntrent plus facilement dans les tissus. Cependant, ils activent peu efficacement le systme du complment et interagissent faiblement avec les FcR des cellules effectrices. En cela, ils ne possdent quun faible pouvoir pathogne potentiel. Toutefois, le dpt progressif de complexes de petite taille au sein des tissus conduit une augmentation progressive de la taille du dpt, qui acquerra in fine la capacit dactiver efficacement le complment et dinduire des lsions tissulaires. Les complexes de petite taille peuvent notamment traverser la MBG et se localiser en position subpithliale glomrulaire. Il est important de retenir que chez un individu sain, les CI sont dautant plus pathognes que leur taille sera petite. Chez un individu hypocomplmentmique, linverse, les complexes seront dautant plus pathognes que leur taille sera grande. En cela, la persistance des complexes dans le compartiment circulatoire constitue un point clef du dveloppement dune HSIII. L'affinit de lanticorps pour lantigne dtermine galement la taille des complexes forms. Une faible affinit conduit la formation de complexes de plus petite taille. Des Ac de forte affinit, quant eux, conduiront la formation de complexes de plus grande taille, qui en dpit dune solubilisation moins aise, seront plus facilement capts et limins de lorganisme. Le phnomne de maturation daffinit favorise la synthse dAc de forte affinit. Ce processus repose sur la prsentation de lantigne, sous forme complexe ou non, au sein des centres germinatifs. Sensuit une slection positive des lymphocytes B qui tablissent des liaisons de forte affinit avec lantigne via leur BCR. Un dficit en composants initiaux du complment conduit un apport insuffisant des complexes dans les centres germinatifs et un processus de maturation altr. En cela, le complment stimule la production danticorps prsentant une forte affinit pour lantigne et la formation de rseaux Ag-Ac relativement stables et de taille augmente, qui sont facilement limins de la circulation sanguine. Enfin, des facteurs tissulaires locaux, comme la prsence dun endothlium fenestr, dune augmentation de la permabilit vasculaire, ou dune pression sanguine leve, favorisent le dpt des CI circulants. Ainsi, la plupart des organes de filtration, tels les glomrules rnaux, la synoviale articulaire, le plexus chorode et le corps ciliaire de lil, constituent des sites particulirement exposs au dpt de CI. Ailleurs, les lsions les plus graves se dveloppent dans les zones de turbulences, notamment aux niveaux des bifurcations artrielles et embranchements vasculaires. Dans ces zones, les cellules sanguines et les plaquettes ne sont pas maintenues distance de la paroi vasculaire par un courant laminaire et un contact plus troit peut stablir entre les CI et la paroi vasculaire. 205

Laction conjointe de ces nombreux facteurs conduit au dpt tissulaire des complexes. Cependant, deux mcanismes principaux peuvent tre impliqus. Les dpts peuvent tre causs, dune part, par la capture de complexes prforms dans le compartiment circulant, et, dautre part, par la formation in situ de complexes. Dans ce dernier cas, la fixation pralable d'un antigne au sein du tissu est ncessaire et semble reposer sur ltablissement de forces lectrostatiques. En effet, celles-ci vont promouvoir ltablissement dinteractions initiales et par la suite le dpt de CI. Bien que distincts, ces deux mcanismes ne s'excluent pas mutuellement et agissent probablement en parallle au sein des tissus.

Cependant, en eux-mmes, les complexes immuns sont inoffensifs. Les lsions tissulaires sont la consquence de l'activation de systmes biologiques destins liminer ces complexes. Une tude dtaille des mcanismes mis en jeu dans lapparition des lsions tissulaires est ainsi ralise dans la troisime et dernire partie : les effets pathognes mdis par les complexes immuns dposs au sein des tissus s'exercent, d'une part, par l'activation du systme du complment, et, dautre part, par linteraction des fragments Fc qui composent le complexe avec les rcepteurs pour ce fragment (FcR) prsents la surface de nombreux types cellulaires. Aprs avoir prsent les mcanismes constituant lune et lautre de ces deux voies, nous tenterons de dgager limplication relative de ces mcanismes dans la formation de lsions tissulaires.

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Annexe 1.D - Bilan : Activation du complment par les dpts de complexes immuns

Les CI dposs au sein des tissus dclenchent lactivation du complment par les voies classique et alterne. Bien que ces deux voies reposent sur des cascades dactivation distinctes, elles convergent vers une phase effectrice caractrise par la formation du CAM. Son intgration au sein dune membrane sapparente la cration dun canal travers lequel les ions et petites molcules peuvent diffuser librement. Les cellules cibles ne sont plus en mesure de maintenir leur quilibre osmotique et sont dtruites. Mais au-del de son action lytique, le CAM stimule la production dIL-1 par les monocytes/macrophages et les cellules msangiales glomrulaires. Cette cytokine exprime un pouvoir pro-inflammatoire puissant et conduit notamment la libration de mtabolites de lacide arachidonique et laugmentation de lexpression des molcules dadhrence par les cellules endothliales. En cela, le CAM favorise ladhrence et la migration des leucocytes circulants au site inflammatoire. Paralllement, le CAM stimule la production de radicaux oxygns par de nombreux types cellulaires (cellules endothliales, monocytes/macrophages, polynuclaires neutrophiles, cellules msangiales) qui participent ltablissement des lsions tissulaires locales. Lactivation du complment conduit galement la libration de C3b, C3a et C5a. Les molcules de C3b libres peuvent participer lamplification de la voie alterne dactivation, ainsi qu la formation des C5 convertases classique et alterne. Le C3b peut galement se comporter comme une opsonine en se fixant pralablement la surface de lAg et de lAc, et en interagissant secondairement avec son rcepteur membranaire (CR1) prsent la surface des cellules phagocytaires. De plus, rappelons que le C3b permet de limiter lextension locale du CI, dont la solubilit est maintenue par ltablissement de liaisons covalentes avec le complexe Ag-Ac. Les anaphylatoxines C3a et C5a constituent, quant elles, des mdiateurs solubles puissants de l'inflammation. Elles vont, dune part, exercer un pouvoir chimiotactique vis--vis de nombreux types cellulaires dont la migration jusquau site du dpt est grandement facilite, et, dautre part, activer ces cellules qui librent dans le milieu extracellulaire le contenu de leurs granules intracytoplasmiques. Les divers radicaux oxygns, mdiateurs vasoactifs et cytokines pro-inflammatoires librs stimulent lentretien et lamplification du processus inflammatoire local.

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Afin de prvenir ltablissement de lsions tissulaires, lorganisme a recours de nombreux mcanismes rgulateurs de lactivation du complment. Des protines rgulatrices inactivent les composants diffrents niveaux de la cascade dactivation. De manire schmatique, certaines dentre elles vont agir en amont de la production de C3b et prviennent la formation des convertases classique et alterne (C1-inh, C4bBP, facteur I, facteur H, CR1). Dautres agissent en aval de la production de C3b et favorisent la dissociation des convertases dores et dj formes (C4bBP, CR1, facteur H, DAF) ou prviennent lassemblage du CAM (vitronectine, HRF, MIRL). Certaines protines de rgulation sont naturellement exprimes la surface de nombreux types cellulaires et linduction de leur surexpression semble constituer une stratgie thrapeutique. Par ailleurs, de nombreuses cellules nucles sont capables dendocyter le CAM insr au sein de leur membrane et de restaurer secondairement leur quilibre osmotique. De fait, linsertion de nombreux CAM est requise pour induire la lyse osmotique de la cellule. Enfin, des enzymes protolytiques, les carboxypeptidases N, inactivent par clivage les anaphylatoxines dont la trs forte ractivit est par l limite. Ainsi, les mcanismes de rgulation mis en uvre par lorganisme afin de contrler lactivation du complment sont nombreux et permettent le plus souvent de limiter les dommages collatraux subis par les tissus sains avoisinants. Toutefois, dans certaines circonstances, une activation locale excessive du complment peut conduire une surcharge des mcanismes de rgulation et la cration de lsions tissulaires.

Lactivation du complment par les CI au sein des tissus conduit donc la mise en uvre de voies effectrices diverses qui, dfaut de permettre leur limination, favorisent la cration de lsions tissulaires locales. Au cours de ce processus, de nombreux types cellulaires sont activs par liaison aux anaphylatoxines. Ainsi, les CI activent indirectement les granulocytes neutrophiles et basophiles, les macrophages, les mastocytes et les thrombocytes, principalement responsables des lsions observes. Cependant, lactivation cellulaire peut survenir de manire directe. Elle repose alors sur linteraction des fragments Fc des Ig constitutives des CI dposs avec leurs rcepteurs spcifiques prsents la surface des cellules effectrices.

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Annexe 1.E - Bilan : Interactions directes avec de nombreuses cellules effectrices

Les CI dposs au sein des tissus peuvent interagir avec de nombreux types cellulaires par ltablissement dinteractions Fc-FcR. Il sensuit lactivation locale des cellules effectrices qui conduit linstallation dun processus inflammatoire. Dans des conditions normales, ces mcanismes permettent de prvenir la dispersion de lagent pathogne (virus, bactrie, ) et den assurer llimination. Mais lactivation de tels mcanismes par les CI dposs au sein des tissus entrane la destruction du tissu sain. En effet, une production entretenue et excessive de CI conduit la formation entretenue de dpts tissulaires. Il sensuit une activation prolonge de mcanismes effecteurs puissants qui occasionnent des dommages tissulaires dpassant les dommages collatraux habituellement tolrs par lorganisme. A terme, un tel processus peut nuire lintgrit fonctionnelle de lorgane. Il est donc important dobserver que, de manire gnrale, les mcanismes lsionnels mis en jeu au cours du processus dHSIII sont analogues ceux mis en place lors dune raction inflammatoire classique mais dont la prennisation est dltre. Les principaux types cellulaires impliqus sont les thrombocytes, les neutrophiles, les

monocytes/macrophages et les mastocytes. Lactivation des thrombocytes entrane lagrgation plaquettaire, responsable de la formation de microthrombi, et la libration de nombreuses molcules, incluant des mdiateurs vasoactifs, des substances chimio-attractantes pour les leucocytes et des enzymes protolytiques directement responsables de lsions endothliales puis de la membrane basale sous-jacente. Il en rsulte une augmentation de la permabilit vasculaire qui favorise le dpt tissulaire de CI supplmentaires et la migration jusquau site inflammatoire de cellules effectrices, particulirement de neutrophiles et de monocytes. Le processus inflammatoire se trouve ainsi amplifi. Paralllement, lactivation de la cascade de la coagulation entrane la formation de dpts intravasculaires de fibrine pouvant conduire lischmie du tissu. Les polynuclaires neutrophiles et les monocytes/macrophages, en tant que cellules

phagocytaires, sont dots dune machinerie intracellulaire leur permettant dinternaliser et de dgrader au sein de vsicules spcialises les particules cibles. Ainsi, les pathognes ingrs sont soumis une srie de systmes bactricides comprenant la mise en place dune attaque oxydative, reposant sur la synthse de puissants radicaux oxygns et azots, et dune attaque non oxydative, reposant sur la synthse denzymes lytiques. Si la cible ne peut tre phagocyte, ce qui survient lors du dpt de CI au sein dun tissu, le contenu de leurs granules intra-cytoplasmiques est libr par exocytose proximit immdiate de la cible et dgrade le tissu sous-jacent. De plus, les cellules

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phagocytaires actives librent de nombreux mdiateurs solubles aux proprits pro-inflammatoires et chimiotactiques. Les macrophages reprsentent la majorit des cellules phagocytaires retrouves au sein des tissus. Certains sont issus de monocytes ayant quitt les vaisseaux par chimiotactisme, et qui se diffrencient localement en macrophages. Dautres proviennent de la maturation de monocytes dj tablis dans les tissus. Contrairement aux macrophages, les neutrophiles ne rsident pas dans les tissus mais y sont attirs par la synthse de facteurs chimiotactiques produits par lactivation locale dautres types cellulaires. Les neutrophiles demeurent les acteurs principaux des premires tapes de la raction inflammatoire et semblent jouer un rle majeur dans ltablissement des lsions tissulaires. Ce rle privilgi par rapport aux monocytes/macrophages est li leur capacit plus importante de migration, dadhrence, de locomotion, de phagocytose et de bactricidie. Enfin, il semble que les neutrophiles soient capables de constituer un rseau extracellulaire permettant de cibler plus efficacement le pathogne mais dont la persistance pourrait conduire au dveloppement dun processus auto-immun. Les neutrophiles sont des cellules courte dure de vie dont la phagocytose par les macrophages tissulaires constitue un lment important dans la rsolution du processus inflammatoire. Enfin, la migration de mastocytes et de basophiles, suivie de leur activation locale, conduit

leur dgranulation et la libration damines vasoactives, principalement dhistamine. Chez les non-primates, les thrombocytes activs librent galement de lhistamine.

Ainsi, les lsions tissulaires qui suivent le dclenchement dun processus dHSIII sont causes par laction combine de diffrentes lignes de cellules, dont lactivation peut survenir par le biais, dune part, de leurs rcepteurs pour les composants biologiquement actifs du complment (principalement les rcepteurs pour les anaphylatoxines C3aR et C5aR) et dautre part, de leurs rcepteurs pour le fragment Fc (FcR) des Ig constitutives des CI dposs au sein des tissus. In vivo, ces diffrents rcepteurs cooprent de manire favoriser le rapprochement de la particule cible et de la cellule effectrice et ainsi permettre une meilleure efficacit de la phagocytose. Cependant, quelle est limportance relative de chacun de ces deux mcanismes ? Tentons maintenant de rpondre cette question.

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Annexe 1.F - Bilan : Implication des mcanismes effecteurs dans les lsions tissulaires

Les mcanismes lsionnels mis en uvre au cours de lHSIII sont nombreux et complexes. Par ailleurs, en fonction des organes cibls, une grande variabilit peut tre observe dans les rcepteurs et les cellules effectrices principalement impliques. ce stade, nous comprenons quun schma de lhypersensibilit de type III ne peut tre dfini de manire gnrale. Pour autant, un certain nombre dlments a t mis en lumire et permet de dessiner les premiers traits ncessaires la mise en place de nombreux essais thrapeutiques. Lactivation des cellules effectrices par le biais de leurs FcR membranaires semble jouer un

rle majeur dans la pathogense de lHSIII. Pour autant, le systme du complment agit de manire discrte mais synergique. En effet, si les mastocytes et les macrophages alvolaires semblent respectivement ncessaires la mise en place des ractions dArthus cutane et pulmonaire, via lactivation de leurs FcR membranaires, lentretien et lamplification du processus inflammatoire repose sur linfiltration locale de neutrophiles dont le recrutement est, quant lui, plutt mdi par lactivation du complment. Le rle central de lanaphylatoxine C5a, a notamment t soulign. Par la suite, les lsions tissulaires induites dpendront de lactivation locale des neutrophiles recruts par le biais de leurs FcR membranaires. Paralllement, des mcanismes de rtrocontrle existent. Cest ainsi que nous avons montr

le rle du rcepteur FcRIIb. Lquilibre entre les signaux activateurs principalement mdis par les FcRI et FcRIII et inhibiteurs mdis par les FcRIIb dtermine le seuil dactivation des cellules effectrices. De plus, la fixation du C5a sur son rcepteur spcifique (C5aR) conduit laugmentation de la densit en FcRIII et la diminution de la densit en FcRIIb la surface du macrophage. Ainsi, le rle du complment ne se limite pas au pouvoir chimiotactique des anaphylatoxines et il est intressant de constater que les FcR et les CR agissent de manire synergique tant dans lactivation que dans linhibition de lHSIII. Par ailleurs, il est accord au FcRIIb un rle central dans le maintien de la tolrance au soi et une expression altre favorise lauto-immunit. Enfin, le complment peut contribuer au dclenchement dune HSIII par lassemblage du

CAM dont le rle est particulirement bien mis en vidence en des zones o les cellules inflammatoires nont pas daccs. La zone subpithliale glomrulaire en est un exemple. En ce lieu, les facteurs solubles drivs du complment ne conduisent pas au processus dadhrence immunitaire par dfaut dinteraction avec les cellules circulantes. En effet, les forces de filtration

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sopposent la diffusion vers la lumire des capillaires des anaphylatoxines produites. En revanche, le CAM est en mesure dexercer localement son action sub-lytique et conduit notamment la synthse de radicaux oxygns par les cellules pithliales glomrulaires. A linverse, parce que les dpts subendothliaux sont bien plus accessibles aux cellules circulantes, les lsions tissulaires procdent pour une bonne part de lactivation locale de nombreux types cellulaires, tant par lactivation du complment avec production locale danaphylatoxines chimio-attractantes, que par ladhrence immunitaire mdie par leurs FcR et CR1 membranaires.

Ainsi, lintervention relative de lune ou lautre de ces voies effectrices doit tre analyse au regard de la localisation tissulaire prcise du dpt. Il apparat que le processus dactivation cellulaire directe via les FcR semble jouer un rle majeur au cours de la raction dArthus cutane. Le systme du complment, quant lui, joue un rle essentiel dans la pathognie des glomrulonphrites et le dveloppement de la glomrulosclrose lors dhypersensibilit systmique.

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PHYSIOPATHOLOGIE DE LHYPERSENSIBILIT DE TYPE III

NOM et Prnom : MOULIN-TRAFFORT Hrald

Rsum : Une formation excessive et entretenue de complexes immuns favorise leur fixation au sein des tissus et la formation de dpts pathognes. De nombreux facteurs concourent la formation de tels dpts. Ainsi une inadquation entre la quantit de complexes immuns forms et la capacit de lorganisme en assurer llimination constitue la cause majeure du dveloppement dune hypersensibilit de type III. Cependant, le dpt des complexes immuns au sein des tissus procde rarement de la mise en uvre dune seule cause favorisante et un rle important est accord aux proprits intrinsques des complexes immuns ainsi qu des facteurs tissulaires locaux comme une augmentation de la permabilit vasculaire ou une pression sanguine leve. Les lsions tissulaires qui suivent le dclenchement dune hypersensibilit de type III sont causes par l'activation locale du systme du complment et par linteraction des fragments Fc qui composent les complexes immuns avec les rcepteurs pour ce fragment (FcR) prsents la surface de nombreux types cellulaires. Lactivation des FcR est responsable du dclenchement dun processus inflammatoire local dont la prennisation cause des dommages tissulaires irrversibles. Notre tude se concentre ainsi sur les mcanismes physiopathologiques de lhypersensibilit de type III. Mots cls : HYPERSENSIBILIT DE TYPE III / HSIII / COMPLEXES IMMUNS / MALADIE SRIQUE / RACTION DARTHUS / SYSTME DU COMPLMENT / ANTICORPS / IMMUNIT HUMORALE / CR1 / FcR / GLOMERULONPHRITE / LUPUS RYTHMATEUX DISSMIN / LED / INFLAMMATION.

Jury : Prsident : Pr. Directeur : Dr. Freyburger Assesseur : Dr. Pilot-Storck

PATHOPHYSIOLOGY OF IMMUNE COMPLEX DISEASES

SURNAME : MOULIN-TRAFFORT
Given name : Hrald Summary : An excessive and sustained formation of immune complexes enhances their fixation in tissues and the constitution of pathogenic deposits. Many factors contribute to the formation of such deposits. A mismatch between the amount of formed immune complexes and the capability of the organism to ensure their elimination represents the main risk leading to the setting up of an immune complex disease. However, immune complex deposits in tissues rarely arise from a single cause. A major implication is due to immune complex characteristics as well as local tissues factors such as increased vascular permeability or high blood pressure. Tissue damages following the setting up of an immune complex disease are caused by a local activation of the complement system and by the interaction of Fc fragments of immune complexes with their receptors (FcR), which are present on various cells. Activation of FcR triggers local inflammation of which perpetuation causes irreversible tissue damages. So, our study focuses on the pathophysiology of immune complex diseases. Keywords : TYPE 3 HYPERSENSITIVITY / IMMUNE COMPLEX DISEASE / SERUM SICKNESS SYNDROME / ARTHUS REACTION / COMPLEMENT SYSTEM / ANTIBODY / HUMORAL RESPONSE / CR1 / FcR / GLOMERULONEPHRITIS / SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS / SLE / INFLAMMATORY PROCESS.

Jury : President : Pr. Director : Dr. Freyburger Assessor : Dr. Pilot-Storck