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SYNTHSE
mdecine/sciences 1997 ; 13 : 192-200

Linduction neurale
chez les vertbrs :
le cerveau par dfaut
ric Honor
Ali Hemmati-Brivanlou

Classiquement, le systme nerveux de lembryon damphibien nait, au cours de la gastrulation, dinteractions inductrices entre le msoderme dorsal et lectoderme qui le
recouvre ; elles mettent en jeu trois facteurs diffusibles, Noggin, Follistatin et Chordin, scrts par lorganisateur de Spemann. Les tudes actuelles montrent que linduction neurale
semble, en outre, lie la leve dune inhibition des cellules
devenir neurales : cest le modle dit du cerveau par
dfaut. On a montr que la protine BMP4 (bone morphogenetic protein), un autre membre de la superfamille TGF,
induit la diffrenciation pidermique et inhibe la spcification neurale ; linverse, toute interfrence avec la voie de
transmission du signal BPM4, en particulier par Noggin, Follistatin et Chordin, provoque linduction neurale. Ces mcanismes molculaires sont conservs au cours de lvolution et
leur tude pourrait conduire des dveloppements thrapeutiques intressants dans les maladies neurodgnratives.

eux phases distinctes interviennent dans la formation

dun neurone : (1) linduction de lectoderme en
neuroectoderme durant la
gastrulation ; (2) la spcification des
prcurseurs neuronaux durant la
neurulation et les stades plus tardifs
du dveloppement embryonnaire.
Nous allons dcrire la phase initiale
dinduction qui a pour consquence
dengager les cellules de lectoderme
du ct dorsal vers la diffrenciation
neuronale. En particulier, nous
allons prsenter un modle suggrant lexistence dun inducteur de
lpiderme qui jouerait le rle dinhibiteur neural et un mcanisme mol-

D
ADRESSES

192

E. Honor : charg de recherche au Cnrs.

UPR411, Sophia Antipolis, 660, route des
lucioles, 06560 Valbonne, France. A. Hemmati-Brivanlou : assistant professor. The Rockefeller University, 1230 York Avenue, Box
32, New York, NY 10021-6399, tats-Unis.

culaire dpendant de linactivation

de cet inhibiteur. Ce modle par
dfaut propose que linhibition de
linducteur de lpiderme dvoilerait
la destine neurale. Nous allons discuter, du point de vue volutif, la
signification de ce modle.

Les leons
de lembryologie
classique
Le systme nerveux des vertbrs est
induit lors de la gastrulation. Chez les
amphibiens et en particulier chez le
xnope (Xenopus laevis), la gastrulation
intervient environ neuf heures aprs la
fcondation. Durant cette tape

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RFRENCES
1. Keller R. Early embryonic development
of Xenopus laevis. In : Kay BK, Peng HB, eds.
Methods in cell biology, vol. 36. San Diego :
Academic Press Inc, 1991.
2. Slack JMW. From egg to embryo : regional specification in early development. Cambridge :
Cambridge University Press,1991.
3. Kessler DS, Melton DA. Vertebrate
embryonic induction : mesodermal and neural patterning. Science 1994 ; 266 : 596-604.

majeure de lembryogense, lectoderme situ sur le ct dorsal de

lembryon se transforme en neuroectoderme (figure 1A) [1-3]. La partie ventrale de lectoderme se diffrencie en
tissu pidermique. Le neuroectoderme
piderme

va, en quelques heures, devenir la

plaque neurale. A ce stade primaire de
la diffrenciation, la plaque neurale
possde dj un axe antro-postrieur
et un axe mdio-latral (figure 1B). La
partie antrieure de la plaque neurale
Neuroectoderme
Somite

4. Eagleson G, Ferreiro B, Harris WA. Fate

of the anterior neural ridge and the morphogenesis of the Xenopus forebrain. J Neurobiol 1995 ; 28 : 146-58.

Chorde
Ve

5. Spemann H, Mangold H. Uber Induktion

von Embryonanlagen durch Implantation
artfremder Organisatoren. Arch Mikr Anat
Entwmech 1924 ; 100 : 599-638.
6. Spemann H. Embryonic development and
induction. New York : Yale University Press,
1938.
7. Smith JC, Slack JMW. Dorsalization and
neural induction : properties of the organizer in Xenopus laevis. J Embryol Exp Morphol
1983 ; 78 : 299-317.
8. Harland RM. Neural induction in Xenopus. Curr Op Genet Dev 1994 ; 4 : 543-9.
9. Servetnick M, Grainger RM. Changes in
neural and lens competence in Xenopus
ectoderm : evidence for an autonomous
developmental timer. Development 1991 ;
112 : 177-88.
10. Godsave SF, Slack JMW. Clonal analysis
of mesoderm induction in Xenopus laevis.
Dev Biol 1989 ; 134 : 486-90.

Msoderme
ventral

Organisateur
de Spemann

Endoderme

Figure 1. (A) Topographie tissulaire de la gastrula du xnope. Lpiderme situ

sur la partie ventrale du ple animal de la gastrula (11 heures aprs-fcondation)
est indiqu en gris clair et le tissu neural, sur la partie dorsale du ple animal, en
gris fonc. Le msoderme est indiqu en rose clair et rose fonc. Lorganisateur
de Spemann (msoderme axial) sur le ct dorsal de lembryon est reprsent
en rouge. Lorganisateur de Spemann va donner naissance la chorde. Lendoderme (ple vgtatif) est indiqu en bistre. Les axes dorsal (D), ventral (Ve)
ainsi que les axes animal (A) et vgtatif (V) sont reprsents par une croix.

Figure 1. (B).
Topographie tissulaire de la neurula du xnope.
Vue dorsale de
la plaque neurale dune neurula (15 heures
aprs-fcondation). Laxe antropostrieur est
vertical. Le systme nerveux du
ttard (30 heures
aprs fcondation) est illustr
sur la partie droite
du schma.

Cerveau
antrieur

11. Grunz H, Tacke L. Neural differentation

of Xenopus laevis ectoderm takes place
after disaggregation and delayed reaggregation without inducer. Cell Diff Dev 1989 ; 28 :
211-8.
12. Sato SM, Sargent TD. Development of
neural inducing capacity in dissociated xenopus embryos. Dev Biol 1989 ; 134 : 263-6.

Cerveau
moyen

13. Kintner CR, Melton DA. Expression of

Xenopus N-CAM RNA in ectoderm is an
early response to neural induction. Development 1987 ; 99 : 311-25.

Cerveau
postrieur

14. Jamrich M, Sargent TD, Dawid I. Celltype-specific expression of epidermal cytokeratin genes during gastrulation of Xenopus laevis. Genes Dev 1987 ; 1 : 124-32.
15. Hemmati-Brivanlou A, Melton DA. A
truncated activin receptor inhibits mesoderm induction and formation of axial
structures in Xenopus embryos. Nature
1992 ; 359 : 609-14.

Moelle
pinire

16. Sasai Y, Lu B, Steinbeisser H, De Robertis EM. Regulation of neural induction by

the Chd and Bmp-4 antagonistic patterning
signals in Xenopus. Nature 1995 ; 376 : 333-6.
17. Smith WB, Harland RM. Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor
localized to the spemann organizer in xenopus embryos. Cell 1992 ; 70 : 829-40.

Neurula

Ttard

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donne naissance au cerveau et la partie

postrieure forme la moelle pinire
(figure 1B) [4]. Les bordures latrales
de la plaque neurale fusionnent
ensuite au cours du dveloppement
embryonnaire pour former le tube
neural. La fusion de la plaque neurale
cre alors un axe dorso-ventral. Les
bordures latrales forment la partie
dorsale et laxe mdian forme la partie
ventrale du tube neural.
Au dbut du sicle, Spemann et
Mangold [5] ont montr, chez la
salamandre, que la transplantation
de la zone marginale dorsale (lorganisateur de Spemann) dune jeune
gastrula donneuse dans la zone marginale ventrale dune jeune gastrula
receveuse, aboutit la formation
dun axe embryonnaire surnumraire et complet (figure 2). En particulier, un second systme nerveux est
form dans lembryon receveur.
Lorsque lorganisateur de Spemann
est isol puis cultiv in vitro, du msoderme caractre axial (chorde et
somites) est produit et cela sans formation de tissu neural. En outre, les
expriences de marquage cellulaire
montrent que laxe nerveux surnumraire drive de lembryon receveur [6]. Ces expriences suggrent
que lectoderme ventral, prdestin
devenir de lpiderme, deviendrait
de type neural sous leffet dun signal
inducteur provenant de limplant
(lorganisateur de Spemann).
Lexistence de ce signal a t confirme par des expriences de recombinaisons dexplants [7]. Lorsque la
calotte animale dune jeune blastula
est isole puis cultive en conditions
salines, seul de lpiderme est form
(figure 3). En revanche, lorsque la
zone marginale dorsale dune jeune
gastrula est combine avec la calotte
animale (ectoderme) dune blastula,
du neuroectoderme est alors induit
(figure 3). Cette exprience montre
que la zone marginale dorsale est la
source des molcules responsables de
linduction neurale. Finalement, il a
t propos que lpiderme correspondrait une destine par dfaut
de lectoderme, ne ncessitant pas de
signal inducteur, alors que la formation du tissu neural serait sous le
contrle dun signal inducteur provenant du msoderme dorsal (pour
une revue, voir [8]).
Linduction neurale dpend, dune
part, de la prsence dun inducteur

A
Ve

rve

se
R

rve

se
R

Organisateur de Spemann

Figure 2. Lexprience de Spemann et Mangold (1924). Lorganisateur de

Spemann (msoderme dorsal) est prlev partir dune jeune gastrula donneuse (11 heures aprs-fcondation) et implant dans la partie ventrale
dune gastrula receveuse. Un axe surnumraire complet comportant un
second systme nerveux est form dans lembryon receveur.

et, dautre part, de la comptence de

lectoderme vis--vis de cet inducteur.
La comptence de lectoderme
linduction neurale se termine la
fin de la gastrulation [9].
La notion dinduction neurale est
difficile rconcilier avec les don-

nes obtenues plus rcemment par

plusieurs groupes, montrant que la
dissociation cellulaire dun explant
ectodermique dclenche la formation de tissu neural [10-12]. En effet,
au stade blastula, lorsquune calotte
animale, qui est prdestine deve-

Calotte animale
piderme

Tissu neural
piderme
Msoderme axial

Msoderme axial
Organisateur de Spemann
Figure 3. Leffet neuralisant de lorganisateur de Spemann. Lorsque la
zone marginale dorsale dune jeune gastrula (11 heures aprs-fcondation)
est prleve puis cultive jusquau stade neurula (18 heures aprs-fcondation), seul du tissu msodermique est form. La calotte animale (explant
ectodermique) dune blastula (8 heures aprs-fcondation) se diffrencie in
vitro uniquement en tissu pidermique. Lorsque la zone marginale dorsale
est combine avec la calotte animale, du tissu neural est alors induit montrant le pouvoir inducteur de lorganisateur de Spemann.

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RFRENCES
18. Hemmati-Brivanlou A, Kelly OG, Melton
DA. Follistatin, an antagonist of activin, is
expressed in the Spemann organizer and
displays direct neuralizing activity. Cell 1994 ;
77 : 283-95.
19. Smith WC, Knecht AK, Wu M, Harland
RM. Secreted noggin protein mimics the
Spemann organizer in dorsalizing Xenopus
mesoderm. Nature 1993 ; 361 : 547-9.
20. Hemmati-Brivanlou A, Melton DA. Inhibition of activin receptor signaling promotes neuralization in Xenopus. Cell 1994 ;
77 : 273-81.
21. Kessler DS, Melton DA. Induction of
dorsal mesoderm by soluble, mature Vg1
protein. Development 1995 ; 121 : 2155-64.
22. Schulte-Merker S, Smith JC, Dale L.
Effects of truncated activin and FGF receptors and of follistatin on the inducing activity of BVg1 and activin : does activin play a
role on mesoderm induction. EMBO J 1994 ;
13 : 3533-41.
23. Wilson PA, Hemmati-Brivanlou A.
Induction of epidermis and inhibition of
neural fate by Bmp-4. Nature 1995 ; 376 :
331-3.

nir de lpiderme, est dissocie pendant plusieurs heures en absence de

calcium et de magnsium, du tissu
neural se forme (figure 4). Ces rsultats sont en apparente contradiction
avec les donnes de lembryologie
classique puisque, lors de la dissociation cellulaire, linduction neurale
intervient en dpit de labsence de
msoderme dorsal. De plus, ces donnes suggrent lexistence dun
signal(s) inhibiteur au sein de lectoderme, rprimant linduction neurale et imposant la destine pidermique (tat neural par dfaut).

Caractrisation
molculaire
des inducteurs
du tissu neural
Depuis les expriences originelles de
Spemann et Mangold [5], de nom-

breux groupes ont tent en vain

didentifier les molcules impliques
dans linduction neurale. Ces checs
ont t lis au choix du modle biologique ainsi quaux techniques utilises. Des explants ectodermiques
(calotte animale) de salamandre
taient cultivs in vitro en prsence
de diffrents facteurs et le tissu neural tait ensuite identifi histologiquement. Ces approches se sont avres infructueuses car lectoderme de
ces embryons est neuralis par un
grand nombre de molcules, mais
cela de faon non spcifique [8].
Depuis les vingt dernires annes, le
xnope est devenu le modle de
choix pour lidentification des molcules impliques au niveau embryonnaire dans les mcanismes inducteurs. La calotte animale (ectoderme)
du xnope est plus robuste linduction neurale que ses homologues

piderme

24. Xu RH, Kim J, Taira M, Zhan S, Sredni

D, Kung HF. A dominant negative bone
morphogenetic protein 4 receptor causes
neuralization in Xenopus ectoderm. Biochem Biophys Res Commun 1995 ; 212 : 212-9.
25. Hawley SH, Wunnenberg-Stapleton K,
Hashimoto C, Laurent MN, Watabe T, et al.
Disruption of BMP signals in embryonic
Xenopus ectoderm leads to direct neural
induction. Genes Dev 1995 ; 9 : 2923-35.
26. Winnier G, Blessing M, Labosky PA,
Hogan BL. Bone morphogenetic protein-4
is required for mesoderm formation and
patterning in the mouse. Genes Dev 1995 ; 9 :
2105-16.

Dissociation

Ragrgation

Calotte animale
Tissu neural

27. Hemmati-Brivanlou A, Thomsen GH.

Ventral mesodermal patterning in Xenopus
embryos : expression patterns and activities
of BMP-2 and BMP-4. Dev Genet 1995 ; 17 :
78-89.
28. Nieuwkoop PD, Boterenbrood EC, Kremer A, Bloesma FFSN, Hoessels ELMJ,
Meyer G, Verheyen FJ. Activation and organization of the central nervous system in
amphibians. J Exp Zool 1952 ; 120 : 1-108.
29. Cox WG, Hemmati-Brivanlou A. Caudalization of neural fate by tissue recombination and bFGF. Development 1995 ; 121 :
4349-58.
30. Kengaku M, Okamoto H. bFGF as a possible morphogen for the anteroposterior
axis of the central nervous system in Xenopus. Development 1995 ; 121 : 3121-30.
31. Lamb TM, Harland RM. Fibroblast
growth factor is a direct neural inducer,
which combined with noggin generates
anterior-posterior neural pattern. Development 1995 ; 121 : 3627-36.

Blastula

Figure 4. Leffet neuralisant de la dissociation cellulaire de la calotte animale. La calotte animale (cellules ectodermiques) dune blastula (8 heures
aprs-fcondation) est prleve puis dissocie pendant quatre heures en
absence de calcium et de magnsium. Les cellules sont ensuite agrges
nouveau en prsence de calcium et de magnsium, puis cultives in vitro
jusquau stage neurula (20 heures aprs-fcondation). La calotte animale
intacte cultive en prsence de calcium et de magnsium donne naissance
uniquement du tissu pidermique. Lorsque les cellules sont dissocies puis
agrges nouveau, du tissu neural est form en absence de msoderme.

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chez les autres amphibiens. Une fois

explante, en absence de stimulation,
la calotte animale se diffrencie invariablement en piderme.
Les travaux les plus rcents utilisent
des marqueurs molculaires, se substituant lexamen morphologique.
Ainsi, linduction dun type cellulaire
est dsormais dcele par la prsence
dun marqueur molculaire spcifique. En particulier, lARN messager
(ARNm) codant pour la molcule
dadhrence neurale (NCAM) qui est
synthtise par toutes les cellules nerveuses de lembryon de xnope, est
un marqueur spcifique du tissu neural [13]. De mme, lARNm codant
pour la cytokratine est spcifique de
lpiderme [14]. Lintroduction des
techniques de biologie molculaire
(RT-PCR, protection la RNase, etc.)
permet dsormais lidentification trs
rapide et prcise de ces ARNm dans
des explants tissulaires et rvle de
faon fiable la prsence des diffrents types cellulaires.
Quels sont les critres permettant de
dfinir un inducteur neural ? Linduction du tissu neural doit tre
directe. En effet, de nombreux facteurs, comme par exemple lactivine
(un membre de la famille des facteurs TGF), induisent du tissu neural dans des explants ectodermiques
de xnope mais cela de faon indirecte [8, 15]. Lactivine induit du
msoderme dorsal dans les explants
ectodermiques qui induit ensuite, de
faon secondaire, du tissu neural.
Ces facteurs sont des inducteurs du
msoderme et non pas du tissu neural [3]. Une molcule sera donc
considre comme un inducteur
neural uniquement lorsque sa synthse dans un explant ectodermique
permet dinduire du tissu neural en
absence de formation de msoderme. De plus, la molcule candidate doit tre capable dinduire
directement du tissu nerveux partir
dun explant ectodermique durant la
priode de la gastrulation (critre
temporel). Enfin, le facteur identifi
doit tre synthtis dans lorganisateur de Spemann (msoderme axial)
durant la gastrulation (critre spatial). Lorsque lensemble de ces critres sont remplis, la molcule identifie est alors considre comme un
inducteur neural direct [8]. Il faut
cependant toujours garder lesprit
que lidentification des facteurs can-

didats, sur la base des critres dcrits

ci-dessus, montre uniquement ce
quun facteur peut faire dans le
contexte cellulaire de la calotte animale et non ce quun facteur fait
rellement dans lembryon. Ainsi, les
facteurs candidats doivent tre
ensuite tests dans lembryon avec
des approches qui incluent le gain
de fonction aussi bien que la perte
de fonction .
Noggin, Follistatin et Chordin sont
des protines scrtes qui sont synthtises dans lorganisateur de Spemann [16-18]. Lorsque lARNm
codant pour Noggin, Follistatin ou
Chordin est exprim dans une
calotte animale, NCAM est induit en
absence de formation de msoderme
[16-19]. Cela remplit lensemble des
conditions requises pour classifier
Noggin, Chordin et Follistatin
comme inducteurs du tissu neural
(voir ci-dessus). Cependant, jusqu
trs rcemment le mcanisme
daction de ces protines demeurait
obscur.

tomre, quil soit dorigine ectodermique, msodermique ou endodermique, conduit la formation de

tissu nerveux [20]. En particulier, les
blastomres de lhmisphre vgtatif, qui normalement donnent exclusivement naissance de lendoderme, changent de destine en
devenant du tissu neural. Encore
plus inattendu, lorsque 1XAR1 est
inject dans un blastomre dun
embryon ventralis par le traitement
aux rayons UV (absence daxe dorsal
et de systme nerveux), le blastomre
inject ainsi que ses descendants cellulaires forment du tissu nerveux qui
sorganise en tube neural [20].

XAR1

1XAR1

(rcepteur endogne)

(dominant ngatif)

Linduction neurale :
suppression
de linduction pidermique
En 1994, Hemmati-Brivanlou et Melton [20] ont fait une dcouverte inattendue qui a rvolutionn les
concepts de linduction neurale dfinis originellement par lembryologie
classique. Afin dtudier le rle de
lactivine dans le processus de
linduction du msoderme in vivo,
ces auteurs ont fabriqu un rcepteur de lactivine de type II (XAR1)
dont le domaine intracellulaire correspondant lactivit srine/thronine kinase est tronqu (1XAR1,
figure 5A). Le rcepteur 1XAR1 se
comporte alors comme un dominant
ngatif [15] car les rcepteurs appartenant la famille des TGF fonctionnent par dimrisation. Ainsi, en
produisant de faon htrologue
dans lembryon de xnope le rcepteur 1XAR1, il est possible de bloquer totalement lactivit du rcepteur endogne. La synthse du
rcepteur 1XAR1 supprime la formation du msoderme axial, montrant donc que les signaux dclenchs par lactivation de ce rcepteur
sont requis pour linduction du
msoderme. De faon surprenante,
la synthse de 1XAR1 dans un blas-

Kinase
srine/thronine

Figure 5. (A) Linduction du tissu

neural par un dominant ngatif du
rcepteur de lactivine. Les molcules dactivine (le ligand) sont dimrises dans lembryon, puis clives,
librant ainsi la partie active. Lorsque
lactivine (dimrise) se fixe son
rcepteur, une autophosphorylation
de la partie cytoplasmique du rcepteur (dimris) intervient, formant
alors un complexe ligand-rcepteur
actif. Le rcepteur de lactivine dont
la partie cytoplasmique correspondant la kinase srine/thronine est
tronque, se comporte comme un
dominant ngatif en se dimrisant
avec les rcepteurs endognes de
lactivine. Lorsque le rcepteur tronqu de lactivine est exprim dans
une calotte animale, les rcepteurs
endognes de lactivine et de BMP-4
sont inhibs, et du tissu neural est
alors form.

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RFRENCES
32. Doniach T. Basic FGF as an inducer of
anteroposterior neural pattern. Cell 1995 ;
83 : 1067-70.
33. Launay C, Fromentoux V, De-Li S, Boucaut JC. A truncated FGF recepror blocks
neural induction by endogenous Xenopus
inducers. Development 1996 ; 122 : 869-80.
34. Ferguson EL, Anderson KV. Dorsal-ventral pattern formation in the Drosophila
embryo : the role of zygotically active genes.
Curr Top Dev Biol 1991 ; 25 : 17-43.
35. Francois V, Bier E. Xenopus chordin
and Drosophila short gastrulation genes
encode homologous proteins functioning
in dorsal-ventral axis formation. Cell 1995 ;
80 : 19-20.
36. Francois V, Solloway M, ONeill JW,
Emery J, Bier E. Dorsal-ventral patterning of
the Drosophila embryo depends on a putative negative growth factor encoded by the
short gastrulation gene. Genes Dev 1994 ; 8 :
2602-16.
37. Holley SA, Jackson PD, Sasai Y, Lu B, De
Robertis EM, et al. A conserved system for
dorsal-ventral patterning in insects and vertebrates involving sog and chordin. Nature
1995 ; 376 : 249-53.
38. Waddington CH, Schmidt CA. Induction by heteroplastic grafts of the primitive
streak in birds. Wilhelm Roux Arch Entwicklungsmech 1933 ; 128 : 522-63.
39. Connolly DJ, Patel K, Seleiro EA, Wilkinson DG, Cooke J. Cloning, sequencing,
and expressional analysis of the chick
homologue of follistatin. Dev Genet 1995 ;
17 : 65-77.
40. Kintner CR, Dodd J. Hensens node
induces neural tissue in Xenopus ectoderm.
Implications for the action of the organizer
in neural induction. Development 1991 ; 113 :
1495-506.
41. Jones-Villeneuve EM, McBurney MW,
Rogers KA, Kalnins VI. Retinoic acid
induces embryonal carcinoma cells to differentiate into neurons and glial cells. J Cell
Biol 1982 ; 94 : 253-62.
42. McBurney MW, Reuhl KR, Ally AI, Nasipuri S, Bell JC, Craig J. Differentiation and
maturation of embryonal carcinoma-derived neurons in cell culture. J Neurosci 1988 ;
8 : 1063-73.
43. Sekelsky JJ, Newfeld SJ, Raftery LA,
Chartoff EH, Gelbart WM. Genetic characterization and cloning of mothers against
dpp, a gene required for decapentaplegic
function in Drosophila melanogaster. Genetics
1995 ; 139 : 1347-58.
44. Graff JM, Bansal A, Melton DA. Xenopus Mad proteins transduce distinct subsets
of signals for the TGF superfamily. Cell
1996 ; 85 : 479-87.
45. Massagu. TGF signaling : receptors,
transducers and Mad proteins. Cell 1996 ;
85 : 947-50.

Sur la base de ces rsultats, HemmatiBrivanlou et Melton [20] ont propos pour la premire fois un
modle molculaire qui postule que
la spcification neurale de lectoderme des vertbrs intervient par
dfaut. Selon cette hypothse, les
signaux extracellulaires, convertis par
les rcepteurs de lactivine prsents
dans lectoderme (calotte animale),
sont responsables de linduction de
la destine pidermique et de linhibition de la destine neurale. Le blocage de ces signaux aurait pour
consquence de dvoiler la destine
neurale et dinhiber la formation de
lpiderme. En labsence de cette
activation tonique (effet du rcepteur 1XAR1), les cellules ectodermiques deviendraient alors par
dfaut des cellules nerveuses. Le
modle de ltat neural par dfaut
est provocateur non seulement parce
quil contredit les conclusions de
lembryologie classique, mais aussi
parce quil prdit lexistence dun
inducteur de lpiderme chez les vertbrs.
Ce modle a lavantage dexpliquer
les donnes plus anciennes de dissociation cellulaire de la calotte animale [10-12]. La dissociation cellulaire aurait pour effet de diluer le
facteur scrt qui joue le rle
dinhibiteur neural et dinducteur de
lpiderme (lactivine ou un homologue) et permettrait aux cellules
ectodermiques de se transformer par
dfaut en neurones.

Le BMP-4
est un inducteur
de lpiderme
Des tudes rcentes ont montr que
le rcepteur 1XAR1 inhibe lactivit
dautres ligands de la famille des
TGF, tels que les protines BMP
(bone morphogenetic proteins) et Vg1
[21, 22]. Le ligand responsable de
linduction de lpiderme a t identifi par un test de complmentation
de cellules disperses de la calotte
animale. Le modle de ltat neural
par dfaut prvoit que linduction
neurale produite par la dissociation
cellulaire peut tre inhibe par
lajout de linducteur de lpiderme.
Lorsque la dissociation cellulaire est
effectue en prsence dactivine, seul
le marqueur msodermique Brachyury est dtect. Lactivine inhibe

donc ltat neural mais cela en transformant les cellules ectodermiques

en msoderme et non pas en piderme. Lactivine ne semble donc
pas tre le facteur impliqu dans
linduction de lpiderme (ou linhibition neurale) [23].
Trs rcemment, Wilson et HemmatiBrivanlou [23] ont montr que BMP4 inhibe linduction neurale par la
dissociation cellulaire de la calotte
animale (voir les leons de lembryologie
classique ci-dessus). Lorsquune dissociation cellulaire de la calotte animale
dune jeune blastula est effectue en
prsence de BMP-4, les marqueurs
pidermiques Epi-1 et Cytokratine
sont dtects, alors que les marqueurs
NCAM (neural) et Brachyury (msodermique) sont absents. Ce rsultat
important, en accord avec le modle
de ltat neural par dfaut, montre
que le BMP-4 est un inducteur de
lpiderme et par consquent un
inhibiteur neural.
Le rle de BMP-4 comme inducteur
de lpiderme ou comme inhibiteur
neural a t rcemment confirm
par trois approches diffrentes, ayant
toutes en commun llimination de
lactivit biologique du ligand BMP4 : (1) mutation du rcepteur de
BMP-4 ; (2) mutation du ligand BMP4 ; (3) oligonuclotides antisens dirigs contre lARNm de BMP-4.
Le rcepteur BMP-4R (dltion de
la kinase srine-thronine) se comporte comme un dominant ngatif et
inhibe lactivit du rcepteur endogne de BMP-4 (voir les expriences avec
le rcepteur de lactivine dcrites ci-dessus)
[24]. Lexpression du rcepteur
BMP-4R dans une calotte animale
induit la synthse du marqueur neural NCAM. Lexpression du dominant ngatif du ligand BMP-4
conduit aussi la neuralisation de
lectoderme en labsence de formation de msoderme [25]. Ces effets
sont spcifiques car une mutation
identique dans le gne de lactivine
ne permet pas de mimer leffet du
mutant BMP-4. Enfin, ces donnes
ont t confirmes par des expriences dinjection doligonuclotides antisens dirigs contre le ligand
BMP-4 [16]. Ces rsultats montrent
que le BMP-4 est linducteur de lpiderme responsable de linhibition
neurale. Chez les mammifres, la
mutation homozygote du locus BMP4 conduit la mort embryonnaire au

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stade gastrula montrant le rle prpondrant de ce facteur durant le

dveloppement prcoce [26].
Le modle de ltat neural par dfaut
prvoit que lactivit de BMP-4 doit
tre inhibe spcifiquement dans le
ct dorsal de lectoderme pour donner naissance au tissu neural

(figure 5B). Les facteurs dorsaux possdant une activit neuralisante

pourraient donc agir : soit au niveau
transcriptionel en rprimant le promoteur du gne BMP-4, soit au niveau
de la stabilit ou de la traduction de
lARNm de BMP-4, soit au niveau de
linhibition de lactivit de la protine

Dissociation
cellulaire

Ltat neural par dfaut :

le prosencphale

Inhibition par
1XAR1

Conditions
in vivo

piderme

BMP-4

Neurone

1XAR1

Signaux inhibiteurs drivant de

l'organisateur de Spemann

Figure 5. (B) Linduction neurale par dfaut. La protine BMP-4 ainsi que son
rcepteur sont synthtiss dans les cellules ectodermiques de la calotte animale. BMP-4 est linducteur de lpiderme (ou linhibiteur neural). Lorsque
une calotte animale est prleve partir dune blastula (8 heures aprsfcondation), puis cultive in vitro jusquau stade neurula (20 heures aprsfcondation), il y a uniquement formation dpiderme. Lorsque les cellules
de la calotte animale sont dissocies en absence de calcium et de magnsium pendant une dure de quatre heures, puis agrges nouveau et cultives jusquau stade neurula, il y a uniquement formation de tissu nerveux.
La dilution de BMP-4 (inhibiteur neural) permet linduction neurale par
dfaut. Lorsque lARN codant pour le dominant ngatif 1XAR1 est inject au
stade deux cellules (90 minutes aprs-fcondation) dans le ple animal des
blastomres, le rcepteur 1XAR1 est synthtis dans les cellules ectodermiques de la calotte animale de la blastula. La calotte animale de ces
embryons exprimant le gne 1XAR1 est prleve puis cultive in vitro
jusquau stade neurula. Les cellules ectodermiques deviennent par dfaut
des neurones car le dominant ngatif 1XAR1 inhibe le rcepteur de BMP-4.
In vivo, lorganisateur de Spemann de la gastrula produit des signaux tels
que Noggin et Chordin qui inhibent (directement ou indirectement) linducteur de lpiderme, le BMP-4. Suite linhibition de BMP-4, les cellules ectodermiques sur le ct dorsal du ple animal forment du tissu neural par
dfaut. Laxe dorso-ventral est indiqu par une double flche.

198

BMP-4, soit encore par lensemble de

ces mcanismes. Ltude de la distribution tissulaire de lARNm de BMP-4
par hybridation in situ montre que
lARNm disparat graduellement de
lectoderme dorsal au dbut de la gastrulation [27]. Le gne BMP-4 semble
donc tre rprim au niveau transcriptionel. Aucun candidat molculaire rglant la synthse ou la stabilit
de lARNm de BMP-4 na ce jour t
identifi. Linhibition de lactivit de
la protine BMP-4 a t rcemment
montre. En effet, Noggin et Chordin
interagissent directement avec celle-ci
et inhibent son activit (R. Harland,
communication personnelle, [16]).
Le mcanisme daction de la protine
Follistatin (inhibiteur de lactivine
[18]), na pas encore t lucid.

Comme indiqu ci-dessus, ds sa formation initiale, la plaque neurale

possde une polarit antro-postrieure et mdio-latrale. Sur la base
des observations classiques effectues
par les embryologistes du dbut du
sicle, Nieuwkoop et al. [28] ont formul une hypothse selon laquelle la
gense du systme nerveux central
des vertbrs serait sous le contrle
de deux types de signaux inducteurs.
Le premier signal induit la destine
neurale dans le ct dorsal de lectoderme de la gastrula et lui impose un
caractre antrieur (prosencphale).
Le second signal ne possde pas la
capacit dinduire du neuroectoderme mais, en revanche, caudalise
le caractre antrieur du tissu neural
et donne naissance aux structures
plus caudales (msencphale, rhombencphale et moelle pinire). Le
tissu nerveux induit par la dissociation cellulaire de la calotte animale
[10-12] ainsi que par lensemble des
traitements inhibant lactivit BMP-4
(1XAR1, Follistatin, Noggin, Chordin, mutant de BMP-4, BMP-4R) est
de caractre antrieur (prosencphale). Linhibition de BMP-4 correspond donc au premier signal du
modle de Nieuwkoop [28]. La partie antrieure de la plaque neurale
(prosencphale) peut tre caudalise
lorsque elle est recombine avec du
tissu neural de type postrieur pour
donner naissance aux structures
intermdiaires [29]. Rcemment, le

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bFGF (basic fibroblast growth factor) a

t impliqu dans les phnomnes
dinduction et de caudalisation du
tissu neural antrieur [29-33]. Il reste
cependant montrer la signification
fonctionnelle in vivo du processus de
caudalisation dpendant du bFGF.
Ainsi, ces expriences, en accord
avec le modle de Nieuwkoop [28],
suggrent que lors de la formation
du systme nerveux central, un premier signal (inhibition de BMP-4 par
Chordin, Noggin ou Follistatin)
induirait du tissu neural de caractre
antrieur (prosencphale) et un
second signal (bFGF ou un homologue) caudaliserait le cerveau antrieur pour le transformer en structures plus caudales.

Conservation
des mcanismes
molculaires
de linduction neurale
durant lvolution
Le modle de ltat neural par dfaut
chez les vertbrs est galement en
accord avec les donnes gntiques
obtenues chez les insectes [34]. En
effet, chez la drosophile, Sog,
lhomologue de Chordin [35],
inhibe lactivit du facteur decapentaplegic (Dpp), lhomologue de
BMP-4 chez les insectes [36]. Les
gnes sog et dpp peuvent se substituer
aux fonctions de chordin et de BMP-4
chez le xnope [37]. De plus, en
dehors du fait que le systme nerveux de la drosophile est form du
ct ventral de lembryon (ct dorsal chez le xnope), la localisation tissulaire de ces facteurs est conserve.
En effet Sog/Chordin sont prsents
dans la rgion donnant naissance au
systme nerveux et Dpp/BMP-4 sont
prsents dans la rgion oppose donnant naissance lpiderme.
Lexistence dun tissu organisateur
similaire celui des amphibiens a
aussi t montre chez les vertbrs
suprieurs. En particulier, chez le
poulet, une rgion correspondant
la zone marginale dorsale des amphibiens a t identifie (le nud de
Hensen) et possde aussi les proprits dinducteur neural in vivo et in
vitro [38]. De mme, chez les mammifres tels que la souris et le lapin
(pour revue, voir [8]), un tissu organisateur, source des molcules responsables de linduction neurale a

t mis en vidence. En particulier,

la protine Follistatin a t identifie
chez le poulet et lARNm est prsent
dans le nud de Hensen (quivalent
de lorganisateur de Spemann) [39].
Lorsque le nud de Hensen des
embryons de poulet est combin avec
la calotte animale dune blastula de
xnope, lectoderme est converti en
tissu neural [40].
Les donnes molculaires concernant linduction neurale ont t
obtenues pour la plupart partir des
tudes effectues chez les amphibiens tels que le xnope. Nanmoins,
des travaux rcents effectus sur des
cultures cellulaires de souris confirment le modle de ltat neural par
dfaut chez les mammifres. Les cellules P19 de carcinome de souris se
diffrencient en cellules neuronales
en prsence dacide rtinoque [41,
42]. Comme chez le xnope, les cellules P19 sont neuralises par
lexpression de 1XAR1 (Hoodless et
Hemmati-Brivanlou, sous presse). De
plus, linduction du tissu neural par
lacide rtinoque est aussi inhibe
par BMP-4 (Hoodless et HemmatiBrivanlou, sous presse). Enfin, le traitement des cellules P19 par BMP4
induit la synthse de plusieurs marqueurs pithliaux. Ces observations
suggrent que linduction neurale
chez les mammifres pourrait,
comme chez les amphibiens, tre
sous le contrle inhibiteur de BMP-4
(inhibiteur neural ou inducteur de
lpiderme).
Trs rcemment, les analogues du
gne mad (mothers against dpp) de la
drosophile [43] ont t identifis chez
le xnope (Xmad ou DOTs pour downstream of TGF) [44]. En particulier,
DOT1 est impliqu dans la rponse
BMP4. Lexpression de DOT1 supprime linduction du tissu neural dans
la calotte animale par le rcepteur
tronqu de BMP-4 ([44, 45] et Thomsen, soumis pour publication). Il
semble donc que DOT1 permet la
transduction du signal BMP-4 vers le
noyau cellulaire. La protine DOT1
pourrait activer la transcription des
gnes impliqus dans linduction de
lpiderme. Selon le modle de ltat
neural par dfaut, ces gnes seraient
considrs comme des rpresseurs
neuraux et pourraient tre de faon
tonique induits par lactivation des
rcepteurs de BMP-4 dans les cellules
ectodermiques, rprimant ainsi la

transcription des gnes neuraux tels

que NCAM. En labsence de BMP-4,
ou lorsque ce complexe est inhib par
Noggin ou Chordin, les rpresseurs
neuraux ne seraient plus synthtiss
et, ainsi, la transcription des gnes
neuraux interviendrait. Lidentification des gnes activs par le BMP-4
permettra, dans le futur, une
meilleure comprhension de ces
mcanismes.
Ces rsultats suggrent donc que les
mcanismes inducteurs impliqus
dans la formation du neuroectoderme seraient conservs durant
lvolution, des arthropodes jusquaux mammifres.

Conclusions
et perspectives
Aprs plus de soixante-dix annes
defforts intensifs, il a t possible
didentifier chez le xnope trois molcules scrtes (Noggin, Chordin et
Follistatin) qui sont synthtises dans
lorganisateur de Spemann (msoderme dorsal) durant la gastrulation
et qui possdent une activit dinducteur neural. La dissection molculaire
in vitro des processus impliqus
durant linduction neurale a permis
de proposer un modle par dfaut
suggrant lexistence dun inhibiteur
neural (ou inducteur de lpiderme),
le BMP-4 (figure 5B). Les travaux
rcents dcrits dans cet article montrent que ces mcanismes sont conservs durant lvolution. Au niveau cellulaire et molculaire, de nombreuses
questions demeurent sans rponse.
En particulier, lidentification des
signaux impliqus dans la transduction de BMP-4, lidentification des
gnes prcoces induits par BMP-4, la
dtermination de ltablissement des
frontires entre lpiderme et le tissu
neural, la rgulation de la comptence de lectoderme durant linduction neurale seront sans aucun doute
le sujet de recherches intenses dans le
futur. Cette recherche au niveau cellulaire et molculaire aura de multiples applications : dune part, au
niveau fondamental pour lucider la
cascade molculaire implique dans
ltablissement de la destine neurale
et pidermique et, dautre part, pour
permettre plus long terme de concevoir des traitements rationnels dans le
cadre des maladies humaines du systme nerveux central et de la peau

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Remerciements

Summary

Nous remercions Richard Harland, Jon Graff,

Gerry Thomsen et Pamela Hoodless pour la
communication de rsultats non publis ainsi
que Georges Romey pour ses conseils lors de
la rdaction de ce manuscrit. ric Honor
remercie la Fondation Philippe et la Fondation del Duca. Ali Hemmati-Brivanlou remercie The Rockefeller University et la Fondation
Searle.

The default model of vertebrate neural specification

TIRS PART
A. Hemmati-Brivanlou.

CERLIB
3es Confrences
de Recherche Hivernales
9-14 mars 1997

Les Arcs 1800

Latitudes/lHtel du Golf
Les Arcs 1800
73700 Bourg-St-Maurice France
Tl. : (33) 04 79 41 43 34
Fax : (33) 04 79 07 34 28

9-10 mars
Proteins and free radicals, from radical
enzymes to damages
Marc Fontecave Jean-Louis Pierre

11-12 mars
Oxidative effects of radiations on
biomolecules and cells
Jean Cadet Jean-Claude Beani

13-14 mars
Oxidative Stress and apoptosis
Alain Favier Jacques Mathieu

Pour tout renseignement

sur le CERLIB, contacter :
Arlette Alcaraz
Laboratoire de Biochimie C
CHU Grenoble BP 217
38043 Grenoble Cedex 9
Tl. : (33) 04 76 76 57 54
Fax : (33) 04 76 76 56 64
CERLIB@ujf-grenoble.fr

200

Classical experiments performed in

the amphibian embryo established
that the vertebrate nervous system
arises, during gastrulation, from
inductive interactions between the
dorsal mesoderm and the overlaying
ectoderm. Transplantation of the
gastrula dorsal lip in the ventral side
of a host embryo results in a twin
embryo with a complete ectopic dorsal axis in the ventral side [5].
Lineage tracing experiments have
shown that while the axial mesoderm
in the ectopic axis is derived from
the explant itself, the nervous system
is derived from the ventral ectoderm
of the host embryo which otherwise
would have formed epidermis [6].
While these experiments demonstrated that gastrula dorsal mesoderm,
termed the organizer, can change
the fate of ectodermal cells from epidermal to neural, only recently has
the molecular nature of these organizer signals begun to be elucidated.
Experiments performed in amphibians have led to the characterization
of three diffusible factors, noggin,
follistatin and chordin, all localized
in the organizer, the embryonic
source of neural inducing signals
[16, 18, 19]. These factors can
change the fate of ectodermal cells
from epidermal to neural directly
without concomitant mesoderm
induction. Based on studies with
TGF- antagonists, such as the truncated activin receptor (1XAR1) and
follistatin, we proposed that the formation of the nervous system in vertebrates is under negative control
and requires the inhibition of an
inhibitor, activin or a related factor,
which can be antagonized with
1XAR1 and follistatin [18, 20]. We
called this the default model of
vertebrate neural specification. This
model provides the molecular link
between the observation made by
classical experimental embryologits
and more recent experiments involving dissociated animal caps. Several
groups have shown that animal caps,
which give rise to epidermis if kept
intact, will form neural tissue if
the cells of the explants are disso-

ciated for several hours [10-12].

These results suggest that dilution
of a diffusible neural inhibitor
from the explants provides another
way to eliminate a neural inhibitor.
Later experiments demonstrated
that BMP4, another member of
TGF- superfamily, can inhibit neural specification and induce epidermis in dissociated Xenopus
embryonic ectodermal cells, pointing to the involvement of BMP4 in
cell fate decisions in the context of
the ectoderm [23]. Recent experiments with chordin, noggin and
dominant negative forms of BMP4
ligands and receptors support this
hypothesis [16, 24, 25], thus providing additional evidence for the
default model and for neuralization
being under inhibitory control.
Interference with TGF- signaling
in a mammalian embryonic cell
line also leads to the specification
of neural cells, and BMP4 inhibits
the retinoic acid induced neural
differentiation suggesting that the
molecular strategy behind neural
determination has been conserved
throughout vertebrate evolution.
Thus, the model emerging from
these results proposes that the
default state of Xenopus ectoderm
is neural, that BMP4, and possibly
other members of the TGF- family
inhibit neuralization, and that
BMP4 induces cells to become epidermal. The isolation and characterization of proteins involved in neural and epidermal induction has
immediate health related consequences. Factors which induce neural differentiation in ectodermal
and mesodermal cells may provide
insights into regeneration of neural
tissue in adults and, in the long
term, may provide therapy for
diseases involving loss of neuronal
cells, including stroke and neurodegenerative diseases. In addition,
the characterization of an epidermal inducer may lead to treatments
for skin injuries and diseases. The
collection of this type of knowledge
will provide the basis for development of rational treatments.