GEPMO

Groupe d'Etude sur la Pollution des Eaux par les M atires Organiques
NNoottee TTeecchhnniiqquuee NN44 M
Maarrss 22000088

Utilisation de la spectrophotomtrie UV-Visible pour

la mesure en routine des teneurs en MO et en Nitrate
des eaux de surface
Note rdige par Patrice Petitjean (Ingnieur d'tude au CNRS) en collaboration avec
Grard Gruau (Directeur de Recherche au CNRS,
Responsable scientifique du GEPMO) et Brangre Hnnache
(Animatrice du Bassin Versant du Frmur)
1. Introduction
Les teneurs en matires organiques (MO) et en nitrate font partie du panel rglementaire de
paramtres dfinissant le bon tat cologique d'une ressource en eau, ou son caractre conforme si
celle -ci est utilise pour la production d'eau potable. A ce titre, ces deux paramtres sont intgrs aux
suivis rguliers effectus pour contrler la qualit de l'eau, tant au niveau des prises d'eau qu'
l'intrieur de leurs bassins versants (BV) d'alimentation. Ils sont aussi utiliss pour valuer l'impact des
mesures de protection/restauration de la qualit de l'eau prises sur les BV (limitation des apports de MO
et de nitrate d'origine agricole, par exemple).
Ces utilisations souffrent toutefois d'un handicap important li au cot des analyses, lequel conduit
souvent les responsables des suivis limiter la frquence des analyses en un point donn et/ou
limiter le nombre de points de suivi au sein d'un BV. Il s'ensuit des diagnostics imprcis (maillage
insuffisant du territoire ne permettant pas de localiser efficacement les zones contributrices dans les BV;
frquence de mesure inadapte conduisant au calcul de concentrations moyennes annuelles
imprcises) et un manque de ractivit dans les suivis, notamment en cas de pollution ponctuelle
(indtectable par l'approche des suivis "calendaires" date fixe) et/ou de modifications rapides des
caractristiques d'un BV (mise en place d'amnagements, restauration du rseau bocager,).
La prsente note a pour objet de palier ce handicap en testant la possibilit de raliser des
dosages justes et prcis des teneurs en MO et en nitrate l'aide d'un spectrophotomtre UV-visible de
"terrain*", sans prparation autre qu'une filtration. A travers ce test, nous valuons la possibilit que les
structures oprationnelles en charge de la qualit de l'eau puissent s'quiper d'un tel instrument, leur
permettant de raliser par elles-mmes, et moindre cot, tous les complments d'analyse ncessaires
l'tablissement de diagnostics prcis de la qualit de l'eau et au suivi dans le temps de l'volution de
cette mme qualit.
*Le qualificatif "terrain" est utilis ici pour dsigner un spectrophotomtre compact et peu coteux, et ne ncessitant pas de
comptences et/ou de moyens particuliers pour tre mis en uvre. Il ne s'agit pas d'un quipement de "terrain" au sens
propre du terme, les mesures se faisant en intrieur.

2. Appareillage
Le prix dun spectophotomtre UV-Visible de "terrain" au sens dfini dans cette note est de lordre
de 4000 . A ce prix sajoute un cot de maintenance de lordre de 1000 pour changer la lampe tous
les 4 5 ans. Ce dlai peut tre plus ou moins long suivant la frquence d'utilisation de lappareil.
Nous donnons ci-dessous la description de trois quipements du commerce vendus par les
socits Grosseron, Bioblock et Serlabo Technologies. Cette description nest pas exhaustive. Il existe
dautres modles d'un niveau quivalent de cots et de performances. Notons aussi que les prix
communiqus sont des prix catalogue s 2007 et 2008, et sont donc susceptibles dvoluer.
Spectrophotomtre UV-Visible modle IC 6305 (Prix 2007 HT : 3708 )
Rf : S050002
Fournisseur : Grosseron
37 Bd Franois Mitterand BP 395
44819 St Herblain
Tel 02 40 92 07 09
Fax 02 40 92 07 10
www.grosseron.com
Caractristiques techniques
Longueur donde 198 1000 nm
Spectrophotomtre UV visible 6305
Bande passante +/-3 nm pour 6305
Rsolution optique 7 nm
Affichage cristaux liquide simultan
Longueur d'onde et mesure
Livr avec un portoir de cuve 10 mm et lot de 100 cuves plastique s
Unit de mesure : absorbance, transmission et concentration
Gamme de mesure :
Transmission 0 200% +/-0,1 %
Absorbance -3,000 1,999 +/-0,001 A
Concentration 0 999,9 et 1000 9999
RS232 et sortie analogique
Matriel supplmentaire ncessaire
Cuves en quartz suprasil (pour UV)
Ref 0613050
Prix 2007 HT (par 2) : 147.25
Cot maintenance prvoir
Changement de lampes (1 fois tous les 107 heures dutilisation)
Lampe Xnon
Ref M050001
Prix 2007 HT: 1002
Spectrophotomtre UV-Visible modle 1240 Shimadzu (Prix HT 4190 )
Ref W17881
Fournisseur : Fisher Scientific Bioblock

Parc dInnovation BP 50111

67403 Illkirch cedex
Tel 03 88 67 14 14
Fax 03 88 67 11 68
www.bioblock.com
Caractristiques techniques
Gamme spectrale 190 1100 nm, bande passante 5 nm
Ecran graphique, 5 vitesses balayage de spectre, dtection 20 pics et valles
Mesure en absorbance, % transmission et concentration
Calcul de concentration avec facteur ou courbe d'talonnage (1 10 standards)
Lecteur carte pour programmation et archivage de mthodes et mesures
Interfaces RS232 pour transfert des donnes vers PC ou imprimante
Matriel supplmentaire ncessaire
Cuves en quartz suprasil (pour UV)
Ref W12036 - Prix 2007 HT (par 2) : 149.00 (ou commande chez Grosseron )
Cot maintenance prvoir
Changement de lampes (1 fois tous les 107 heures dutilisation)
Lampe Xnon (commande chez Grosseron )
Ref M050001
Prix 2007 HT: 1002

Spectrophotomtre UV-Visible Libra S12 (Prix 2008 HT 3652 )

Ref BC80211510
Fournisseur : Serlabo Technologies
ZAC Aigues Fraches II Bat C
1914 Route d'Avignon
Entraigues sur la Sorgue
Tel 04 20 23 77 20
Tel 03 88 67 14 14
Fax 03 88 67 11 68
www.serlabo.com
Caractristiques techniques
Gamme spectrale 190 999 nm, bande passante 5 nm
Vitesse de balayage de 500 nm
Exactitude: 2nm
Prcision: 2nm
Bruit: 1mAbs
Drive: <0.002Abs/h
Dtecteur: Diode Silicone
Sources lumineuses: Lampes deutrium et tungstne-halogne
Dimension: L300mm/P400mm/H190mm
Mode de mesure Abs, T%, Concentration, Multi longueur d'onde, Cintique, Balayage Spectrale
Sortie analogique: 100 mV/1 Abs
Sortie informatique: RS232 Srie

Matriel supplmentaire ncessaire

Cuves en quartz trajet optique 10 mm
Ref HE100QS10- Prix 2008 HT: 96
Cot maintenance prvoir
Changement de lampes (1 fois tous les 107 heures dutilisation)
Prix 2008 HT: 634 (UV) et 37 (Visible)

3. Dosage de la MO et du nitrate par spectrophotomtrie UV

3.a. Dosage de la MO
La teneur en MO d'une eau peut tre approche en mesurant son absorbance UV ou densit
optique (DO) 254 nm et en utilisant le rapport de proportionnalit existant entre cette grandeur et les
diffrents indicateurs utiliss pour estimes la teneur en MO des eaux (Carbone Organique Dissous ou
COD; Carbone organique total ou COT; oxydabilit au KMnO4).
La figure 1 prsente des exemples de corrlations linaires obtenues entre ces diffrents
paramtres dans le cas d'eaux de surface bretonnes. La figure montre que des corrlations linaires
sont obtenues entre l'absorbance UV et chacun des trois indicateurs prcits. Ainsi, la teneur en MO
d'une eau peut tre estime partir de la simple mesure de l'absorbance UV 254 nm, moyennant la
dtermination pralable du rapport de proportionnalit existant entre cette mesure et l'indicateur retenu
(phase dite de calibration).
On notera que la plus grande dispersion observe dans le cas de l'oxydabilit au KMnO4 est lie
l'erreur relativement plus importante commise sur la mesure de ce paramtre. On notera galement que
les pentes des corrlations peuvent varier d'une masse d'eau l'autre (voir cas du rapport DO/COD),
d'o la ncessit de procder une calibration pour chaque nouvelle masse d'eau suivie .
Remarque concernant le choix de l'indicateur, la prparation des chantillons et la ralisation
des calibrations
L'indicateur rglementaire actuellement en vigueur en France pour estimer la teneur en MO des
eaux brutes est le COT. Ceci tant et comme l'ont dmontr les tudes ralises en Bretagne par le
GEPMO, cet indicateur ne dose en fait que les MO dissoutes. En outre, la rglementation europenne
prconise le COD comme indicateur pour dfinir le bon tat cologique des eaux. Nous prconisons
donc d'utiliser le COD comme indicateur "MO" de calibration, tant entendu que cet indicateur dose le
mme compartiment que l'indicateur COT et qu'il est appel devenir galement l'indicateur de
rfrence pour la France. Ce choix impose de filtrer les chantillons avant analyse, soit 0.45 microns,
soit 0.22 microns.
Concernant l'talonnage du rapport de proportionnalit existant entre absorbance UV 254 nm et
teneur en COD, plusieurs prcautions doivent tre prises. Tout d'abord, l'talonnage doit intgrer des
priodes de crue et d'inter-crue, de manire recouper la gamme de variation des teneurs en MO de la
ressource considre. Une faon de garantir cette reprsentativit est d'taler la priode d'talonnage
sur une anne hydrologique complte.
Deuximement, les mesures de l'absorbances UV et des indicateurs que l'on cherche atteindre
via cette mesure doivent tre faites rigoureusement sur les mmes chantillons.

Troisimement, le nombre de mesures doit tre suffisant pour minimiser l'erreur sur le rapport
absorbance/concentration. Ce nombre est relativement faible: une quinzaine d'chantillons peuvent
suffire moyennant l'intgration dans la srie d'pisodes pluvieux et de priodes d'inter-crue (voir note
technique N3).
Quatrimement, il faut prendre en compte le fait que la pente des droites de corrlation peut varier
entre les priodes d'tiage et le reste de l'anne hydrologique, du fait d'un changement de composition
des matires organiques. Une double calibration (en tiage et hors tiage) peut ainsi tre parfois
ncessaire.
Enfin, et dans le cas d'un basculement la seule mesure de l'absorbance UV comme indicateur de
la teneur en MO d'une eau, il faudra prvoir d'inclure priodiquement des mesures de la concentration
en COT, COD ou en oxydabilit au KMnO4, et ce afin vrifier que la pente de(s) corrlation(s)
utilis(s) pour estimer la valeur de ces indicateurs partir de la mesure de l'absorbance UV n'a pas
chang depuis la phase initiale d'talonnage (stabilit dans le temps de la calibration).
0,7

Lguer

0,6

Absorbance (254 nm)

Absorbance (254 nm)

0,7

0,5
0,4
0,3
0,2

y = 0,0374 x
2

0,1

R = 0,93

Lguer

0,6
0,5
0,4
0,3
0,2

y = 0,0242 x
2

0,1

R = 0,69

0,0

0,0
0

10

15

20

10

20

30

Oxydabilit (mg/L)

COT (mg/L)

Absorbance (254 nm)

0,8

Lguer

0,7

Rivire

0,6

Elorn (29)
Lguer (22)

0,5

Min Ran (22)

Scorff (56)

0,4
0,3

Frmur (35)

0,2

y = 0,0298 x

0,1

R = 0,93

Yar (22)
Rance (35)

Couesnon (35)

0,0
0

10

15

20

Nombre de
mesures

Pente
(UV/COD)

200
80

0.0338
0.0325

0.93
0.92

83

0.0304

0.94

198
71

0.0349
0.0416

0.84
0.93

72

0.0385

0.96

156
312

0.0266
0.0298

0.82
0.93

25

COD (mg/L)

Figure 1. Rsultats illustrant l'existence de corrlations linaires entre la teneur en MO d'une eau exprime par les
indicateurs COD, COT et oxydabilit et l'absorbance UV 254 nm. Une fois ralise, de telles calibrations permettent
ensuite d'estimer la teneur en matires organiques des eaux par simple mesure de l'absorbance UV 254 nm.

Des informations complmentaires peuvent tre obtenues en consultant les fiches techniques
tlchargeables sur le site internet du GEPMO (http://www.bretagne-environnement.org/site/matiereorganique/).

3.b. Dosage du nitrate

Comme pour la MO, il est possible d'estimer la teneur en nitrate d'une eau par mesure de
l'absorbance UV 220 nm. Comme pour la MO, galement, la mthode demande une calibration
pralable du rapport de proportionnalit existant entre absorbance UV 220 nm et teneur en nitrate.
Cette calibration s'effectue en procdant l'analyse conjointe de l'absorbance UV 220 nm et de la
teneur en nitrate (par chromatographie ionique, par exemple) sur quelques chantillons tmoins,
reprsentatifs de la masse d'eau suivie. La linarit de la gamme est assure jusqu des teneurs en
nitrates de 45 mg/L. Au-del, des dilutions par de l'eau pure, sans nitrate, doivent tre effectues.
On notera qu'il est possible damliorer la linarit des talonnages en corrigeant dune mesure UV
(254 nm) correspondant la contribution de la MO sur le pic d'absorbance 220 nm.

4. Rsultats d'une tude test ralise sur le bassin versant du Frmur

Afin d'valuer les potentialits de la spectrophotomtrie UV en tant qu'outil apte dterminer de
manire fiable et peu coteuse les teneurs en MO et en nitrate des eaux, une tude a t ralise sur le
bassin versant (BV) du Frmur. Les objectifs de cette tude taient les suivants:
1) Comparer les valeurs d'absorbance obtenues par un spectrophotomtre de "terrain" et par un
spectrophotomtre de laboratoire;
2) Vrifier l'existence d'une corrlation linaire entre la mesure d'absorbance fournie par un
spectrophotomtre de "terrain" et les teneurs en COD et en nitrate des chantillons;
dterminer la qualit statistique des corrlations;
3) Evaluer les erreurs commises sur le calcul des teneurs en MO et en nitrate par utilisation des
droites de calibrations obtenues, dans le cas d'une analyse ponctuelle et dans celui d'une
valeur moyenne;
4) Vrifier que la mise en uvre d'un spectrophotomtre de "terrain" ne ncessite ni
comptences ni matriels spcifiques.
Le spectrophotomtre de terrain test est le modle Libra S12, commercialis par la socit
Serlabo Technologies. Ce spectrophotomtre a t mis en uvre par B. Hennache, animatrice du BV
du Frmur.
Concernant les chantillons, plusieurs campagnes ont t effectues aux points de suivis habituels
de la qualit des eaux du BV, certaines en priodes de crue, d'autres en priodes d'inter-crue. Tous les
chantillons ont t filtrs directement sur le terrain l'aide de filtre en actate de cellulose d'une taille
nominale de pores de 0.2 microns. Les chantillons ont t ensuite diviss en 4 fractions:
1)

Une fraction dont l'absorbance UV a t mesure l'aide du spectrophotomtre de "terrain"

test, avec B. Hennache, animatrice du BV du Frmur, comme opratrice;

2)

Une fraction dont l'absorbance UV a t mesure au laboratoire de Gochimie de l'UMR

CNRS 6118 Gosciences Rennes l'aide d'un spectrophotomtre UVIKON XS par P.
Petitjean, ingnieur chimiste CNRS;

3)

Une fraction dont la teneur en COD a t mesure l'aide d'un COT-mtre Shimadzu TOC
5050A au laboratoire de Gochimie de l'UMR CNRS 6118 Gosciences Rennes;

4)

Une fraction dont la teneur en NO3 a t mesure laboratoire de Gochimie de l'UMR CNRS
6118 Gosciences Rennes l'aide d'une chromatographie Ionique Dionex X120.

4.1. Rsultats: cas de la MO

4.1.a. Calibration du spectrophotomtre de "terrain"
La figure 2 compare les mesures d'absorbance UV 254 ralises par B. Hennache l'aide du
spectrophotomtre de "terrain" Libra S12 et celle faites au laboratoire par P. Petitjean. Une corrlation
linaire de trs bonne qualit est obtenue dmontrant le caractre juste et prcis du spectrophotomtre
de "terrain" test. La figure 3, quant elle, compare les valeurs d'absorbance UV254 obtenus par B.
Hennache aux teneurs en COD des chantillons. Une corrlation linaire de trs bonne qualit est
galement obtenue, confirmant l'existence d'un rapport de proportionnalit relativement constant dans
les eaux du Frmur entre teneur en COD et absorbance UV254.

Absorbance (Spectro Terrain)

0,8
0,7

Y = 0.95X
R 2 = 0.996

0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

Absorbance (Spectro Labo)

Figure 2. Comparaison des valeurs d'absorbance UV254 mesures l'aide du spectrophotomtre de " terrain"
Libra S12 avec celles obtenues au laboratoire
25

COD (mg/L)

20

Y = 31.8X
R 2 = 0.95

15

10

0
0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

Absorbance (Spectro Terrain)

Figure 3. Diagramme montrant l'existence d'une corrlation linaire entre teneur en COD et absorbance UV254
pour les chantillons du Frmur analyss

4.1.b. Erreur estime sur la concentration en COD

Afin d'estimer l'erreur engendre sur l'estimation de la teneur en COD par la variation du rapport
[absorbance UV]/[COD] nous avons compar les teneurs en COD mesures pour la srie d'chantillons
analyss avec les teneurs en COD estimes en multipliant l'absorbance UV par la pente de la
corrlation prsente dans la figure 3. Cette comparaison montre que pour 75% des chantillons,
l'erreur est gale ou infrieure 10%. L'erreur est considrablement rduite si l'on considre la
concentration moyenne en COD. En effet, la concentration moyenne calcule partir des
concentrations mesures est de 8.8 mg/L, contre 8.6 mg/L partir des concentrations calcules, soit
une erreur rduite 2.5%. Ceci confirme un rsultat dj mis en avant dans une note antrieure
(GEPMO, Note technique N3, 2007), savoir que l'estimation de la teneur en COD partir de la
mesure de l'absorbance UV est une mthode trs comptitive en termes de justesse et de prcision
lorsqu'il s'agit de dterminer des concentrations moyennes, types "concentrations moyennes
annuelles".

4.2. Rsultats: cas des nitrates

4.2.a. Calibration du spectrophotomtre de "terrain"
La figure 3 compare les mesures d'absorbance UV220 ralises par B. Hennache l'aide du
spectrophotomtre de "terrain" Libra S12 et celle faites au laboratoire par P. Petitjean. Une corrlation
linaire de relativement bonne qualit est obtenue dmontrant le caractre galement juste et prcis du
spectrophotomtre de "terrain" test cette longueur d'onde. Les valeurs d'absorbance UV220-254
obtenus par B. Hennache sont compares aux teneurs en nitrate des chantillons mesures par
chromatographie ionique dans la figure 5. Une corrlation linaire de relativement bonne qualit est laussi obtenue, dmontrant qu'il est possible d'estimer les concentrations en nitrate des eaux analyses
partir de la mesure de l'absorbance UV 220-254.

1,9

Y = 0,81X
R 2 = 0.91

Spectro Terrain

1,7
1,4
1,2
0,9
0,7
0,4
0,4

0,7

0,9

1,2

1,4

1,7

1,9

2,2

2,4

Absorbance UV 220 (Spectro Labo)

Figure 4. Comparaison des valeurs d'absorbance UV220 mesures l'aide du spectrophotomtre de " terrain" Libra S12
avec celles obtenues au laboratoire

45
40

Y = 28.7X - 10.4
R 2 = 0.95

NO3 (mg/L)

35
30
25
20
15
10
5
0
0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

1,8

Absorbance (220-254; Spectro Terrain)

Figure 5. Diagramme montrant l'existence d'une corrlation linaire entre teneur en NO3 et absorbance UV220-254 pour
les chantillons du Frmur analyss.

4.1.b. Erreur estime sur la concentration en Nitrate

Afin d'estimer l'erreur engendre sur l'estimation de la teneur en nitrate par la variation du rapport
[absorbance UV]/[NO3] nous avons compar les teneurs en nitrate mesures pour la srie d'chantillons
analyss avec les teneurs en nitrate estimes en multipliant l'absorbance UV par la pente de la
corrlation prsente dans la figure 5. Cette comparaison montre que pour 50% des chantillons,
l'erreur est gale ou infrieure 10%. Comme dans le cas du COD, l'erreur est considrablement
rduite si l'on considre la concentration moyenne en nitrate. En effet, la concentration moyenne
calcule partir des concentrations mesures est identique celle obtenue partir des concentrations
calcules (19.5 mg/L dans les deux cas). La conclusion que l'on peut mettre ici est donc la mme que
pour le COD, savoir que l'absorbance UV est une mthode trs comptitive en termes de justesse et
de prcision lorsqu'il s'agit de dterminer des concentrations moyennes en nitrate, types
"concentrations moyennes annuelles".

5. Conclusions
Les tests prsents dans cette note montrent qu'il est possible de dterminer de manire juste et
prcise la teneur en MO et en nitrate des eaux de surface par mesure de l'absorbance UV 254 nm et
220 nm l'aide d'un spectrophotomtre de "terrain", et par un oprateur non aguerri aux techniques
d'analyse chimique.
Les mesures ne ncessitent pas d'autres prparations qu'une filtration pralable des chantillons
(pas d'ajout de ractifs), et sont donc d'une mise en uvre trs simple . La seule contrainte est la
ncessit de disposer d'une calibration pralable des facteurs de proportionnalit existant entre
absorbance UV et teneurs en MO et en nitrate, et donc de disposer d'analyses conjointes sur une srie
d'chantillons des absorbances UV 220 nm et 254 nm et des teneurs en nitrate et en COD (ou COT).

Vue la justesse et la prcision des rsultats prsents plus haut (notamment sur des paramtres
de type "moyenne annuelle", et vue galement les cots modrs en investissement * et la facilit de
mise en uvre d'un spectrophotomtre, la technique de dosage des MO et du nitrate par
spectrophotomtrie UV nous parait tre de nature permettre des structures de "terrain" de type
"animation de bassin versant" de s'quiper en un matriel leur permettant de gagner une grande
autonomie en matire de suivis qualit de l'eau, et par exemple de procder, si besoin, des
densifications possible s des suivis dans le temps et dans l'espace et ce pour des cots rduits.
Le GEPMO est prt assurer une assistance technique toute structure qui dcidera de
s'quiper.

6. Bibliographie
Note Technique N 3 du GEPMO. Analyse de l'erreur engendre par la frquence d'chantillonnage
sur la concentration moyenne annuelle en matire organique des masses d'eau: application aux points
de suivi qualit d'eau 11F (station DIREN de mesure des dbits) et 5F (aval de la retenue de Bois-Joli)
du bassin versant du Frmur, Dcembre 2007, 7p.
*Pour information, le cot en analyses factur par un laboratoire pour une BV quip de 10 points de mesure et procdant
des analyses une fois par mois en chaque point des teneurs en MO et en nitrate est de l'ordre de 4000. Ce chiffre est
comparer aux 5000 d'investissement que reprsente l'achat d'un spectrophotomtre de "terrain" du type de celui test dans
cette tude.