Spectrophotomtrie

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Un spectrophotomtre

La spectrophotomtrie est une mthode analytique quantitative qui consiste mesurer l'absorbance ou la
densit optique d'une substance chimique donne, gnralement en solution. Plus l'chantillon est concentr,
plus il absorbe la lumire dans les limites de proportionnalit nonces par la loi de Beer-Lambert.

La densit optique des chantillons est dtermine par un spectrophotomtre pralablement talonn sur
la longueur d'onde d'absorption de la substance tudier.

Sommaire
[masquer]

1 Principe
2 Domaine UV-visible de la spectrophotomtrie

3 Spectrophotomtre

4 Limites

o 4.1 Importance du phnomne de diffusion

5 Applications

6 Rfrences

7 Voir aussi

o 7.1 Articles connexes

o 7.2 Liens externes

Principe[modifier | modifier le code]

Pour plus de dtails, voir l'article Loi de Beer-Lambert.

Lorsquune lumire dintensit passe travers une solution, une partie de celle-ci est absorbe par le(s)
solut(s). Lintensit de la lumire transmise est donc infrieure . On dfinit labsorbance de la solution
comme :
 .

On parle aussi de transmittance dfinie par la relation :

c'est--dire que .

Labsorbance est une valeur positive, sans unit. Elle est dautant plus grande que lintensit transmise
est faible.

La relation de Beer-Lambert dcrit que, une longueur donde donne, labsorbance dune solution
est proportionnelle sa concentration, et la longueur du trajet optique(distance sur laquelle la lumire
traverse la solution).

Alors, pour une solution limpide contenant une seule substance absorbante :

est labsorbance ou la densit optique (sans unit) de la solution pour une longueur
d'onde ;
(en mol.m-3) est la concentration de la substance absorbante ;

(en cm) est la longueur du trajet optique ;

(en m3.mol-1.cm-1) est le coefficient dextinction molaire de la substance absorbante en

solution. Il rend compte de la capacit de cette substance absorber la lumire, la longueur
donde .

Selon la loi de Beer-Lambert, l'absorbance est additive (mais non la transmittance). Ainsi, pour une
solution contenant plusieurs substances absorbantes, labsorbance de la solution est la somme de
leurs absorbances. Pour n substances absorbantes :

Domaine UV-visible de la
spectrophotomtrie[modifier | modifier le code]
Pour plus de dtails, voir l'article Spectroscopie

Un solut color ou chromophore absorbe la lumire visible (longueurs d'onde comprises

entre 400 et 800 nm). On parle de spectrophotocolorimtrie ou plus simplement
decolorimtrie. Certaines solutions absorbent dans l'ultraviolet (longueurs d'onde infrieures
380 nm), on parle alors de spectrophotomtrie UV. Les infrarouges ne sont pas utiliss en
spectrophotomtrie car ils dpendent surtout de la temprature de la solution et non de
sa concentration, ils sont plutt couverts par la spectroscopie en infrarouge. La
spectrophotomtrie est plus spcifique que la spectroscopie qui couvre d'autres longueurs
d'ondes du spectre lectromagntique.

Spectrophotomtre[modifier | modifier le code]

Pour plus de dtails, voir l'article Spectrophotomtre

Schma de principe du spectrophotomtre UV-visible monofaisceau

Un spectrophotomtre mesure labsorbance dune solution une longueur donde donne.

Un dispositif monochromateur permet de gnrer, partir dune source de lumire
visible ou ultraviolette, une lumire monochromatique, dont la longueur donde est choisie par
lutilisateur. La lumire monochromatique incidente dintensit traverse alors une cuve
contenant la solution tudie, et lappareil mesure lintensit de la lumire transmise. La
valeur affiche par le spectrophotomtre est labsorbance la longueur donde tudie. Le
spectrophotomtre peut tre utilis pour mesurer de manire instantane une absorbance
une longueur donde donne, ou pour produire un spectre dabsorbance (spectrophotomtre
balayage). Dans ce dernier cas, le dispositif monochromateur dcrit en un temps court
lensemble des longueurs donde comprises entre deux valeurs choisies par loprateur.

Limites[modifier | modifier le code]

Plusieurs facteurs peuvent dgrader la loi de Beer-Lambert et limiter la validit de la
spectrophotomtrie :

le domaine de mesure idal est pour les valeurs de T situes entre 20 et 60 % ;

plusieurs aberrations optiques lis la diffusion, la rflexion et la diffraction de la lumire
peuvent fausser la mesure ;

les phnomnes de fluorescence ainsi que d'autres particularits chimiques lies aux
substances absorbantes peuvent interfrer ;

plus la densit du solut est importante, plus le faisceau de lumire incident

sera rfract avec une valeur donne. Cette tendance est normalement infime mais
devient plus prononce avec les hautes concentrations. Ainsi, la rfraction rduit
l'intensit de la lumire transmise et l'instrument indique faussement une absorbance
plus leve. Gnralement, ce phnomne peut tre vit en travaillant avec des
concentrations infrieures 0,01 mol.L-1.

Importance du phnomne de diffusion[modifier | modifier le

code]
Voir 1.
Comme la loi de Beer-Lambert le stipule, le pouvoir d'un milieu bloquer le passage de la
lumire est quantifi par un coefficient d'extinction donn par l'quation :

Cette impdance est gnre par deux phnomnes distincts : l'absorbance et la

diffusion.

La diffusion intervient lorsque la lumire est dflchie par les particules du milieu de
manire ne pas atteindre l'autre ct de l'chantillon.
L'absorbance est le processus par lequel l'nergie lumineuse est absorbe par les
molcules de l'chantillon avant d'tre libre sous forme de chaleur ou
emmagasine sous forme de liaisons chimiques.

Donc que le coefficient de l'quation prcdente est compos par le coefficient de

diffusion ( ) ainsi que celui de l'absorption ( ), c'est--dire :

Le coefficient de diffusion peut tre exprim par le produit de la concentration des

particules, , et la section efficace de celles-ci, ( supposer que ces particules
sont homognes et rgulirement rparties dans le milieu), on a :

La section efficace, qui est une mesure de la proportion de lumire diffus par
particule, est fonction de leur taille. En effet, pour les particules de petite taille
(p. ex. leur diamtre reprsente 10 % de la longueur d'onde incidente)
la diffusion de Rayleigh prdomine. La diffusion de Rayleigh dpend de la
longueur du parcours, de la concentration des particules diffusantes, de la
longueur d'onde et de la polarisation de cette dernire. Pour une particule
idalement sphrique, la section efficace de Rayleigh s'crit :

est le diamtre des particules,

est la longueur d'onde,

est l'indice de rfraction.

Cette quation prdit que les courtes longueur d'ondes seront les plus
diffuses.
Pour des particules plus grosses que la longueur d'onde, elles font l'objet
d'un phnomne plus complexe appel diffusion de Mie. Puisque la
lumire sera diffuse selon diffrents angles, dans ce cas la forme des
particules doit tre prise en compte dans la section efficace. La section
efficace maximale est obtenue quand la taille de la particule est proche de
la longueur d'onde incidente. La diffusion diminue de plus en plus que la
diffrence entre la taille de la particule et la longueur d'onde augmente
(c'est le cas de la spectrophotomtrie molculaire).
Applications[modifier | modifier le code]
Dtermination d'une concentration inconnue

Connaissant le spectre d'absorption d'une substance chimique, on peut

mesurer, l'une de ses longueurs d'onde (l o l'absorption est
maximale) les variations de l'intensit d'un faisceau lumineux traversant
une mme paisseur de solutions de concentrations diverses.

Courbe d'talonnage

Ceci permet d'tablir exprimentalement la courbe reliant

l'absorbance et la concentration de la substance tudie
(avec ), en effectuant les mesures de pour diverses
concentrations. Cette courbe est une courbe d'talonnage.

La courbe exprimentale d'talonnage permet ensuite de dterminer la

concentration inconnue d'une solution de cette substance par simple

mesure de son absorbance et report sur le graphe .

La loi de Lambert-Beer a des limites. Elle n'est linaire que dans un

intervalle de concentrations rduit regroupant des valeurs infrieures 10-
2
mol.l-1.

Suivi cintique

Suivi de la cintique d'une raction chimique

Lorsqu'au cours d'une raction chimique dont on veut tudier

la cintique de l'une des substances chimiques en solution, on peut par
spectrophotomtrie d'absorption suivre la concentration de cette substance
(gnralement colore). Si cette substance est un ractif, l'absorbance de
la solution diminue au cours du temps. Si au contraire, c'est un produit de
la raction, l'absorbance de la solution augmente au cours du temps.

Exemples

On peut suivre la cintique de la raction d'oxydo-rduction en

milieu acide, entre l'acide oxalique C2H2O4 par
l'ion permanganateMnO4- (couleur violette) par la mesure de la
 diminution d'absorbance de ce dernier pour la longueur d'onde
= 540 nm.

Rfrences[modifier | modifier le code]