.

Méthodes:
Polymorphisme morphologiques des feuilles et
des fleurs :
Activité phytochimique et activité antioxydant de deux espèces d’Hibiscus :
les feuilles et les fleurs ont été utilisées pour
Hibiscus rosa-sinensis L. et Hibiscus malvaviscus Cav. (Malvaceae) du nord
l’observation macroscopique .
ouest algerien.
Analyses phytochimiques :
Pr.Djabeur Abderrezak 1, Mme Zemmouri Zahra 1;Moussa Hadjer 2 ;
. Criblage phytochimique :
Département de science et technologie, Faculté des sciences nature et vie, Université des
Sciences et Technologie d'OranDes - Mohamed-Boudiaf
tests en tube sont réalisés sur les poudres
Résumé : végétales afin de déterminer de manière
préliminaire les classes phytochimiques contenues
l’étude morphologique montre qu’il y’a une différence au niveau des feuilles et au niveau des fleurs aussi .
L’étude qualitative, réalisée par un criblage phytochimique dans les organes
des extraits ( feuilles
de fleurs , fleursdétermine
et feuilles ) analysésla . Il
présence des quelques métabolites secondaire . s’agit d’une analyse qualitative basée sur des
réactions
La teneur en polyphénols et en flavonoides ; tanins ; anthocyanes de présente
totaux colorationleset/ou de les
valeurs précipitation
plus élevésainsi
dans les deux extraits méthanolique et éthanolique de l’Hibiscusqu’à
rosades
sinensis
examenset de Malvaviscus
en lumière arboreus
ultraviolette.
Les résultats obtenus d’après l’étude de l’activité antioxydant avec la technique de réduction du radical libre
DPPH montrent que les extraits des fleurs peuvent agir en tantEpuisement
que piégeursdu matériel Nous
de radicaux. végétal avec
avons de l’eau
constaté
que le composé phénolique responsable de cette corrélation est chaude :
l’anthocyane avec un coefficient : R²=0.5885.

 Introduction: -LesDans un ballon

feuilles : , surmonté
possèdent desd’un réfrigérant,
propriétés 10 g de
diurétiques,
matériel
contre végétal est inflammation
les ophtalmie( mis en présentd’œil)
de 60 ml d’eau.
, comme
La richesse de la flore algérienne en plantes
L’ensemble
émollient sur les est porté à l’eczéma.
furoncles , reflux pendant une heure.
médicinales et aromatiques est incontestable. Leur
Ensuite, le mélange est filtré et l’extrait aqueux est
utilisation dans la médecine traditionnelle sollicite - Les feuilles broyées avec les fleurs sont les principaux
soumis aux tests suivants :
l’intérêt récent des études scientifiques (Basli et al., constituants d’un shampoing revitalisant les cheveux.
2012). Bien qu’il soit difficile de faire une sélection Un test positif est révélé par l’apparition d’une
végétale vaste on a choisi deux espèces qui Et pour Hibiscus
coloration malvaviscus
bleue violacée Cav.(Malvaviscus
(Bruneton, 1999).arboreus)
appartiennent de la famille des Malvacées dont le On peut utilisé les felurs comme décoction pour la bronchite,
genre Hibiscus L. qui a été crée sous la plume de Amidon :
la diarrhée, le muguet et l'amygdalite .
Suédois Car von Linné en 1753 et qui se trouvent
Le test effectué consiste :
dans la région d’Oran (Algérie). -Décoction des feuilles : pour la cystite, la diarrhée et la
gastrite , comme un5 gargarisme
Chauffer pour le
ml de l’extrait mal deavec
aqueux gorge,
10 aux
ml
Ce genre est très rependu avec plus de 200 à 300 poux, à la séborrhée et aux plaies.
d’une solution de NaCl saturée dans un bain-marie
espèces végétales, principalement dans les régions
tropicales et subtropicales, dont un grand nombre sont -Lesjusqu’à
huiles ébullition
essentiels :; des fleurs est utilisée pour traiter
cultivées comme ornementales : l’Hibiscus mutabilis l’inflammation du tube digestif et une aide menstruel.
Ajouter quelques gouttes du lugol .
– l’Hibiscus rosa sinensis et l’Hibiscus sabdariffa -
L’Hibiscus taiwanensis et L’Hibiscus tiliaceus – il est resté toutefois oublié ou limité à l’application
Saponines :
L’Hibiscus schizopelatus et L’Hibiscus syriacus et ornementales. Ce n’est qu’au cours de ces dernières
Malvaviscus arboreus ou Hibiscus malvaviscus…. années
La détection
avec les desprogrès
saponines
scientifiques
est réalisée
et techniques,
en ajoutant
Malgré que ce genre à un effet thérapeutique que unlespeuchercheurs
d’eau à 2 commencent
ml de l’extrait à aqueux,
découvrirpuislesla
intéressant par exemple on peut utilisé Hibiscus rosa-
sinensis L comme :
propriétés
solutionpharmacologiques
est fortement agitée.de Ensuite,
ces espèces.Nous
le mélange
. Matériel végétal : allons
est établir une comparaison
laissé pendant 20 minutes morphologique
et la teneur eten
- Décoction desméthodes:
 Matériel et fleurs : favorise le flux menstruel, phytochimique
saponines est deévaluée
deux espèces
: d’Hibiscus : Hibiscus
l’inflammation des voix ontrespiratoires
Deux plantes d’Hibiscus été sélectionnées pour
et maux rosa sinensis L. (La rose de chine) et Hibiscus
l’étude morphologiques
d’estomac, la diabète, et l’épilepsie,
l’analyse phytochimiques
le catarrhe Pas de mousse
malvaviscus ou =Malvaviscus
test négatif arboreus Cav .
et leurs activités
bronchique et la lèpre. antioxydants. Les informations (Hibiscus dormant ou1 piment).
Mousse moins de cm = test pour valoriser
faiblement leurs
positif
géographiques et taxonomiques, les organes utilisés aspect pharmacologique
-Infusion des fleurs :
pour l’analyse pour les dans
sont présentés troubles de type
les tableaux Mousse de 1-2 cm = test positif
gastro 
suivants. Les fleurs ont été recueillis à la station
d'Oran (Arzew, USTO-MB, Sidi Maarouf) en Mousse plus de 2 cm = test très positif (Trease et
septembre 2016 jusqu'au 1er février 2017. Evans, 1987).
 Epuisement du matériel végétal avec l’éthanol :
Anthocyanes :
Dans un ballon , surmonté d’un réfrigérant, 10 g de
 2 ml d’infusé aqueux sont ajoutés à 2 ml de H Cl 2N.
matériel végétal est mis en présence de 60 ml
L’apparition d’une coloration rose- rouge qui vire au
d’éthanol. L’ensemble est porté à reflux pendant bleu violacé par addition d’ammoniac indique la
une heure. Ensuite, le mélange est filtré et l’extrait présence d’anthocyanes (Debray et al., 1971 ; Paris
éthanolique est soumis aux tests suivant : et al., 1969).

Flavonoïdes :  Mise en évidence des vitamines :
 La réaction de détection des flavonoïdes Vitamine C :
consiste à traiter 500µL de l’extrait éthanolique
Pour mettre en évidence la vitamine C, nous avons utilisé
et ajouter à 1500 µL H2O puis 150 µL NaNO2
Usto Arzew Sidi Maaroufune solution de permanganate de potassium (solution
après une agitation pendant 5min ajouter 150 µL violette) qui est un oxydant qui réagit avec la vitamine C.
Latitude 35’72’00N 35’86’7N 35’68’97N
ALCL3 -0’54’50E
Longitude et 500 µL NaOH-04354E
(1 N). Un test révélé
-0’55’65E
Altitudepar l’apparition d’une coloration rose- Lorsqu’il réagit avec la vitamine C, il perdre sa couleur
Climat pourpre(Debray
Semi et al.,Méditerranéen
1971). .La concentration massique de la solution de
Semi aride/ sec
aride/sec et Semi et froid permanganate de potassium est de 1.2 g/L .5 mL de
Tanins : froid aride/chaud sec solution de permanganate de potassium a été versé dans 3
 etLaespéce
présence des tanins est mise en évidence tubes à essai, dont un qui nous a servi de témoin, nous
Genre Familles Partie utiliséen avons mis quelques gouttes du jus d’H.rosa sinensis dans
Hibiscusajoutant, à 1 mlLdeMalvacée
rosa-sinensis l’extrait éthanolique,
Feuilles et2Fleurs
ml
le premier tube et dans le deuxième tube nous avons mis
d’eau et 2 à 3 gouttes de solution de FeCl 3 diluée le jus de M.arboreus ( Othilie et Lisa, 2011) .
Hibiscuset malvaviscus Malvacée
2 à 3 gouttes de solution Feuilles
de FeCl 3 diluée.et Fleurs
Cav.(Malvaviscus
 Un test révélé par l’apparition d’une coloration Extraction des composés phénoliques :
arboreus)
bleu- noire (tanins galliques), bleu-verte(tanins
cathéchiques),(Trease et Evans, 1987). . Par macération :

 Autres métabolites secondaires : Pour extraire les polyphénols de les fleurs du l’H.rosa
sinensis et M.arboreus par macération, nous avons opté
 Coumarines :
pour le protocole décrit par (Taquet , 1985) en y
 1 g d’échantillon de la poudre végétal est placé apportant quelques modifications :
dans un tube à essai en présence de
 quelques gouttes d’eau distillée. Le tube est 5g de la poudre l’H.rosa sinensis et M.arboreus sont
recouvert avec un papier imbibé d’une solution macérés sous agitation mécanique à température ambiante
de de laboratoire pendant 24h avec 100 ml de solutions
 NaOH et porté dans un bain marie pendant aqueuses de solvant : Méthanol à 70 % v/v et eau. Après
quelques minutes. Puis on ajoute 0,5 ml de filtration sur papier filtre, les filtrats sont centrifugés
 NH4OH dilué (10%) et on va mettre deux taches pendant 10 min à 3000 rpm, les filtrats sont évaporés à
sur un papier filtre qui sont examinées sous l’aide d’un rotavapeur rotatif à 60°C jusqu’à l’obtention
 la lumière ultraviolette. La fluorescence des d’un résidu sec méthanolique (pendant 30min maximum).
taches confirme la présence des coumarines Une fois le résidu sec reprit le volume perdu est
 (Rizk, 1982). remplacé à moitié par le méthanol à 70 % v/v et eau puis
 conserver au frigo à 4°C jusqu’à utilisation .
 Alcaloïdes :
Par décoction :
 Nous avons procédé à une macération sous
agitation pendant 24 h de 10 g de la poudre
 végétale dans 50 ml de H2SO4 dilué au 1/10 à la
température ambiante du laboratoire. Après
L’extraction des polyphénols par décoction a été effectuée
 filtration sur un papier lavé à l’eau distillée et de
selon le protocole décrit par
manière à obtenir environ 50 ml de filtrat, 1
 ml du macéré est introduit dans un tube à essai
(Chavan et al., 1990) : 1 à 2 g de la poudre de l’H.rosa
puis quelques gouttes de réactif de Dragendroff
sinensis et M.arboreus sont ajoutés à 40 ml de solvant
ont été ajouté dans le tube et La présence d’une
d’extraction : éthanol à 70 % v/v et eau. Chaque mélange
Une fois le résidu sec reprit le volume perdu est
remplacé à moitié par l’éthanol à 70 % v/v et eau puis
conserver au frigo à 4°C jusqu’à utilisation 
Dosage des composés phénoliques :
. Dosage des phénols totaux :
Dosage des polyphénols totaux par Folin - dans 1 ml
d'extrait, ajoutez 9 ml d'eau distillé et 1 ml de Na2Co3
(20%), mélanger la solution au vortex après l'avoir
laissé réagir pendant 3 min. ajouter 1 ml de réactif de
Folin-Ciocalteu dilué 10 fois puis incuber dans un
bain marie pendant 30 min à 60 ° C. L’absorbance
mesurant à 760 nm contrairement au blanc au
spectrophotomètre (Catalano et al., 1999).
Les résultats sont exprimés en milligrammes (mg)
équivalent d'acide gallique par la grammaire de
matière sèche végétale. (Mg GAE / g).
. Dosage des flavonoïdes totaux :
La quantification des flavonoïdes est effectuée par
Zhishen et al., (1999) avec de l’aluminium
trichlorurétique et de la soude.
Prendre 500 μl d’extraits, ajouter 1500 μl d’eau
distillé et 150 μl de NaNO2 à 5%, laisser réagir
pendant 5 min, 150 μl de solution d’AlCL3 à 10%
laisser réagir à température ambiante de laboratoire
pendant 6 min. puis ajouter 500 μl de NaoH dans 4%
à la solution de mélange, l’absorbance mesurant à
510 nm (Zhishen et al., 1999).
Les résultats sont exprimés en milligrammes (mg)
équivalents catéchisés par la grammaire de matière
sèche végétale. (Mg GAE / g).
. Dosage des tanins totaux :
Ce dosage est basé sur la propriété des
proanthocyanidines de devenir un absorbant
transformé en anthocyanidines colorées (jaune-vert)
principalement à 550 nm. (Bate-Smith et Swing,
1962)
Le protocole consistait à prendre 2 ml d'extraits et 1
ml d'eau distillé et 3 ml de HCL (12N ou 37%) dans le
tube 1 (échantillon) Incuber au bain marie à 100 ° C
pendant 30 min après refroidissement, ajouter 0,5 ml
d'éthanol. et dans le tube 2 (témoin), laissez-le à la
température ambiante. après 1 heure, mesurez la
densité optique des solutions à l'aide d'un
spectrophotomètre UV à 550nm.
Concentration en tanins totaux = 19,33 X (Do tube
hydrolysé - Do tube témoin).
Dosage des anthocyanes :
Les anthocyanines sont déterminantes par la méthode
de décoloration de l’acide sulfurique (Jur, 1967).
Le protocole consistait à prendre 1 ml d'extrait,
ajouter 1 ml d'éthanol dans 0,1% d'HCl
et 20 ml de concentré d'HCl à 2% dans le tube 1
(échantillon), 10 ml de solution et 4 ml de bisulfite de
sodium à 15% et dans le tube 2 (témoin) 10 ml de
solution et 4 ml d’eau de distillation. Au bout d'une
heure, mesurer les solutions densité optique à l'aide
d'un spectrophotomètre UV à 520 nm.
Les concentrations en anthocynes totales, en mg/ml,
sont établies à l’aide de la formule :
Concentration en anthocyanes totales = 875 X
(Do tube témoin - Do tube bisulfite)
La teneur des composés phénoliques est calculée en
fonction de la concentration par la formule suivante :
T= (C× f ×V)/PS
Avec « C » la concentration des polyphénols ;
« V » le volume initial ;
« PS » le poids de matière sèche ;
« f » : le facteur de dilution.
Etude de l’activité antioxydant :
Piégeage du radical libre DPPH (2,2-diphényl-1-
picrylhydrazyl) :
Cette méthode est basée sur la mesure de la capacité
des antioxydants à piéger le
radical DPPH. L’effet de chaque extrait sur le DPPH
est mesuré par la procédure décrite par (Brand-
Williams et al., 1995)
Pour effectuer ce test, une solution méthanolique de
DPPH à 6 × 10-5 M (préparation fraîche :
0.0023g de DPPH dans 100ml méthanol absolu) a été
préparée ainsi des dilutions des extraits
méthanoliques.
À 0.1ml de chaque dilution sont ajoutés 3.9 ml de la
solution de DPPH. Un témoin négatif est
préparé en même temps mais en remplaçant la
solution de l’extrait végétal par le méthanol et
ceci dans les mêmes proportions L’acide ascorbique a
été choisi comme contrôle positif. Les
tubes sont ensuite incubés à température ambiante et
à l’abri de la lumière pendant 30mn.
L’absorbance est lue à 517 nm.
Le pourcentage de l’activité anti-radicalaire est calculé
selon l’équation suivante :
Activité antiradicalaire (%) = [(Ac - At)/ Ac] x100

Détermination d’IC50 et du pouvoir antioxydant :

Ce paramètre est défini comme la concentration
d’antioxydant requise pour diminuer la concentration
initiale de 50%, il est inversement proportionnel à la
capacité antioxydant.
(Motamed et Naghibi , 2010).

Cette activité est déterminée en calculant l’inverse des

valeurs des IC50(Maisuthisakul et al., 2007)

P=1/IC50

Résultats et discussion :

l’étude morphologique montre qu’il y’a une différence

au niveau des feuilles et au niveau des fleurs aussi (la
couleur , l’aspect externe , le poids , la taille).

L’étude qualitative, réalisée par un criblage

phytochimique des extraits de fleurs et feuilles
détermine la présence des quelques métabolites
secondaire (tanins; alcaloïdes; flavonoïdes; coumarines;
saponines ; anthocyanes), substances organiques
(amidon; vitamine C) ,( Tableau n°1).
 La teneur en polyphénols totaux présente les valeurs
les plus élevés dans les deux extraits méthanolique
et éthanolique de l’Hibiscus rosa sinensis
(0.06±0.04 mg EAG/g et 0.09±0.028 mg EAG/g) ,
pour la Malvaviscus arboreus elle est de
(0.011±0.02 mg EAG/g et 0.025±0.012 mg
EAG/g ) de matière végétal sèche.
Les flavonoïdes ont été obtenus avec des teneurs de
(0.15±0.09 mg EC/g et 0.010±0.05mg Ec/g ,
0.048±0.032 mg EC/g et 0.012±0.0025 mg EC/g )
respectivement pour l’Hibiscus rosa sinensis et
Malvaviscus arboreus .

La teneur la plus élevé des tanins est observé dans

les extraits méthanolique et éthanolique de
Malvaviscus arboreus avec des valeur allant de
0.048±0.02 mg/g et 0.05±0.046 mg/g et chez
l’Hibiscus rosa sinensis sont de 0.03±0.02 mg/g et
0.11±0.007mg/g.

La teneur en anthocyanes totaux présente les valeur

les plus élevés pour les deux extraits de deux
espèces avec des valeurs allant de 2152.33 ±482.53
mg/g ,233.32 ±80.85 mg/g , 304.36±205.75 mg/g ,
162.12±165.69 mg/g (Figure 1)

Tableau n°2 : Résultats des réactions de caractérisation des différents groupes chimiques recherchés dans la
poudre de les fleurs et les feuilles d’Hibiscus rosa-sinensis et Malvaviscus arboreus

Recherche de  Résultats trouvé

Hibiscus ros- sinensis Malvaviscus arboreus

Fleurs Feuilles Fleurs Feuilles

Amidons +++ --- +++ ---
Extrait Aqueux Tanins +++ +++ +++ +++
Saponines +++ --- + ---
Flavonoïdes ++ +++ + - -- -
Extrait Tanin : +++ +++ +++
éthanolique -Catéchiques
-Gallique +++
Anthocyanes +++ --- +++ ---
Les résultats obtenus d’après Coumarines
l’étude de l’activité++ + ++ +
antioxydant avec la technique Alcaloïdes
de réduction du+++ +++ +++ +++
radical libre DPPH montrent que lesCextraits des+++
Vitamine --- + ---
fleurs peuvent agir en tant que piégeurs de
radicaux. Afin de déterminer l’effet des métabolites
secondaires sur l’activité antiradicalaire, une
corrélation a été réalisée entre ces derniers (Tableau
n°3). Cette corrélation dont le coefficient de
corrélation (R²) varie en fonction du composé
étudié. Nous avons constaté que le composé
phénolique responsable de cette corrélation est
l’anthocyane avec un coefficient : R²=0.5885.
(Figure 2 et 3)
 Conclusion :

La détermination des métabolites secondaires et des

composés antioxydants naturels des extraits des plantes
aidera à développer des nouveaux médicaments . Ces
résultats aideraient à déterminer la puissance de l'extrait
brut de Hibiscus rosa sinensis et de Malvaviscus
arboreus comme source potentielle d'antioxydants
naturels. Il peut être utilisé pour minimiser ou prévenir
l'oxydation des lipides dans les produits
pharmaceutiques et retardant la formation de produits
d'oxydation toxique, maintenir la qualité nutritionnelle
et prolonger la durée de conservation des aliments et les
produits pharmaceutiques.

Figure n°1 : Teneurs des composés phénoliques des deux extraits étudiés au niveau d’Oran

Figure n°2 : Le pourcentage d’inhibition de Figure n°3 :corrélation entre les composés phénoliques
Tableau n°3 : Valeurs de IC50
radial DPPH en fonction des concentrationset la puissance antiradicalaire
et l’activitédeantioxydant
l’extrait du l’Hibiscus rosa
sinensis et du Malvaviscus arboreus comparent à celle d’acide ascorbique
mg/g (corrélation entre l’acide ascorbique et les
deux extraits)