BAX System PCR Assay E. Coli O157H7 MP

accréditation Cofrac
n°1-0144
portée disponible
sur www.cofrac.fr
DuPont Nutrition & Health

Experimental Station
200 Powder Mill Road
Wilmington, DE 19803
NF VALIDATION
Validation des méthodes alternatives d’analyse
Application à la microbiologie alimentaire
Rapport de synthèse
Validation EN ISO 16140 de la méthode

méthod
BAX® System E. coli O157:H7 MP
Méthode qualitative
Ce document comprend 55 pages dont 8 annexes.

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L’accréditation du COFRAC atteste de la compétence

compétence du laboratoire pour les seuls
essais couverts par l’accréditation qui sont identifiés par le symbole .
Version 0
27 avril 2016
ADRIA DEVELOPPEMENT
Creac’h Gwen - F. 29196 QUIMPER Cedex - Tél. (33) 02.98.10.18.18 - Fax (33) 02.98.10.18.08
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ASSOCIATION LOI DE 1901 - N° SIRET 306 964 271 00036 - N° EXISTENCE 532900006329 - N°TVA FR4530696427100036
1 INTRODUCTION _______________________________________________ 4
1.1 Date de la première validation et dates de reconduction _______________ 4
1.2 Méthode alternative ______________________________________________ 4
1.3 Méthode de référence à laquelle la méthode alternative a été comparée __ 5
2 HISTORIQUE DE LA VALIDATION ET PRINCIPAUX

RESULTATS OBTENUS _________________________________________ 6
2.1 Etude comparative des méthodes __________________________________ 6

2.1.1 Exactitude relative, spécificité relative et sensibilité relative ________________ 6
2.1.2 Niveau de détection relatif _________________________________________ 14
2.1.3 Inclusivité / exclusivité ____________________________________________ 15
2.2 Praticabilité ___________________________________________________ 16
2.3 Etude inter-laboratoires _________________________________________ 19

2.3.1 Mise en oeuvre __________________________________________________ 19
2.3.2 Contrôle des paramètres expérimentaux ______________________________ 20
2.3.3 Résultats des analyses ___________________________________________ 21
2.3.4 Calculs ________________________________________________________ 23
2.3.5 Interprétation ___________________________________________________ 25
2.3.6 Conclusion _____________________________________________________ 26
2.4 Conclusion ____________________________________________________ 27
Annexe 1 - Protocole de la méthode alternative : BAX® E. coli O157:H7 MP _____________________ 28

Annexe 2 - Protocole de confirmation Qualicon ____________________________________________ 29
Annexe 3 - Méthode de référence EN ISO 16654 : Microbiologie des aliments -
Méthode horizontale pour la recherche des Escherichia coli O157 ____________________________ 30
Annexe 4 - Contamination artificielle des échantillons _______________________________________ 31
Annexe 5 - Résultats bruts de l’exactitude relative__________________________________________ 37
Annexe 6 - Résultats bruts de l’inclusivité et de l’exclusivité __________________________________ 52
Annexe 7 - Calcul du degré d’accord ____________________________________________________ 54
Annexe 8 - Calcul de la concordance____________________________________________________ 55
ADRIA Développement 2/55 27 avril 2016

Rapport de synthèse (Version 0)
BAX E. coli O157:H7 MP
Avant Propos
L’ensemble des renseignements permettant de valider la garantie des analyses

est tenu à la disposition de la Société DuPont Nutrition & Health.
Les résultats sont synthétisés au sein de tableaux et interprétés selon la norme

NF EN ISO 16140.
Fabricant : DuPont Nutrition & Health

Experimental Station
200 Powder Mill Road
Wilmington, DE 19803 (USA)
Laboratoire expert : ADRIA Développement

ZA Creac’h Gwen
F-29196 QUIMPER Cedex (France)
Méthode à valider : BAX® System E. coli O157:H7 MP
Référentiel de validation : EN ISO 16140 (octobre 2003) : microbiologie des

aliments - Protocole pour la validation des
méthodes alternatives
Méthode de référence♦ : EN ISO 16654 : microbiologie des aliments –

Méthode horizontale pour la recherche de
Escherichia coli O157
Etendue de la validation : Viandes crues de bœuf

Lait cru
Fruits et végétaux
Plats cuisinés, viandes crues de porcin, de
poulet et d’ovin
Organisme de validation : AFNOR Certification
♦
Essai effectué sous le couvert de l’accréditation
1 INTRODUCTION
1.1 Date de la première validation et dates de reconduction
La méthode BAX® System E. coli O157:H7 MP a été validée pour les

viandes crues de bœuf, les laits crus, les fruits et végétaux et plats cuisinés,
les viandes crues de porcin, d’ovin et de poulet le 28 mars 2008
(n° attestation QUA 18/04 - 03/08). La méthode a été reconduite en 2012.
Une extension a été obtenue en janvier 2016 pour l’utilisation de la plate-
forme PCR X5.
La méthode a été reconduite en mars 2016 selon l’ISO 16140 (2003).
1.2 Méthode alternative
Le test comprend un enrichissement en :
- bouillon mTSB supplémenté en novobiocine pour toute matrice,

- bouillon spécial base Escherichia coli O157:H7 MP pour la catégorie
viande de bœuf crue.
L’étape d’enrichissement est suivie de l’extraction des acides nucléiques et

de l’amplification par PCR en temps réel d’une séquence cible de
Escherichia coli O157:H7 en présence de Sybr Green. La spécificité des
amplifiats est vérifiée par l’analyse de la courbe de fusion.
Protocole
Deux protocoles sont définis selon les produits à analyser :
- protocole spécifique pour la viande de bœuf crue : enrichissement en

bouillon BAX® E. coli pendant 8 - 24 heures à 42°C et transfert de 20 µl
pour la lyse,
- protocole pour toutes les autres matrices (lait cru, fruits et végétaux, plats
cuisinés, viandes crues de porc, ovin et poulet) : enrichissement en
bouillon mTSB + novobiocine pendant 18 - 24 heures à 41,5°C et transfert
de 5 µl pour la lyse.
Les protocoles sont donnés en Annexe 1.

Les confirmations sont réalisées :
- par isolement du bouillon d’enrichissement sur gélose sélective

(CT SMAC), avec confirmation des colonies suspectes par le test Latex
Wellcolex E. coli O157:H7.
- par le protocole de confirmation Qualicon (Cf. Annexe 2), dans le cas de

non-confirmation par le protocole précédent ou dans le cas d’obtention de
résultats discordants avec la méthode de référence.
Lors de l’étude inter-laboratoire, le protocole relatif à l’analyse de végétaux

avec un enrichissement en bouillon mTSB à 41,5°C a été réalisé par
l’ensemble des laboratoires.
Dans le cadre de la validation, les deux cycles de PCR ont été évalués :
E. coli MP (3h30) et E. coli MP Express (2h30).
1.3 Méthode de référence♦ à laquelle la méthode alternative a été

comparée
La méthode de référence utilisée est la norme EN ISO 16654: Microbiologie

des aliments – Méthode horizontale pour la recherche de Escherichia coli
O157. Le protocole est présenté en Annexe 3.
♦
Essai effectué sous le couvert de l’accréditation
2 HISTORIQUE DE LA VALIDATION ET PRINCIPAUX

RESULTATS OBTENUS
2.1 Etude comparative des méthodes
2.1.1 Exactitude relative, spécificité relative et sensibilité relative
L’exactitude est l’étroitesse de l’accord entre le résultat d’essai et la valeur de référence acceptée.
La spécificité relative est définie comme le degré auquel la méthode est affectée (ou non) par les
autres composants dans un échantillon en contenant plusieurs. C’est la capacité de la méthode à
mesurer avec exactitude un analyte donné, ou sa quantité, dans l’échantillon sans qu’il y ait
d’interférence avec les composants non ciblés, tels un effet de la matrice ou un bruit de fond.
La sensibilité relative est définie comme la capacité de la méthode alternative à détecter deux
quantités différentes d’analyte qui ont été mesurées avec la méthode de référence en utilisant une
matrice donnée sur toute l’étendue de mesure. C’est la variation de quantité minimale (accroissement
de la concentration d’analyte x) qui donne une variation significative du signal mesuré (réponse y).
2.1.1.1 Nombre et nature des échantillons
266 échantillons ont été analysés au total. La répartition par catégorie est
donnée dans le tableau ci-après :
Tableau 1
Positifs Négatifs
Catégorie Type mTSB BAX 8 h BAX 24 h mTSB BAX 8 h BAX 24 h
MP MPE MP MPE MP MPE MP MPE MP MPE MP MPE
Viandes crues de Bœuf cru, congelé,
45 36 39 41 34 43 30 38
bœuf assaisonné
Lait cru Lait cru 31 31 30 30
Fruits et végétaux Crus, jus et
concentrés, 31 31 33 33
fermentés
Plats cuisinés, Traiteurs, plats
viandes crues de cuisinés, produits
32 32 30 30
porcin, de poulet et carnés, divers
d’ovin*
TOTAL 94 94 45 36 39 41 93 93 34 43 30 38
* Echantillons représentatifs de contamination croisée ou de produits carnés autres que bœuf pouvant être naturellement
contaminés.

2.1.1.2 Contamination artificielle des échantillons
186 échantillons ont été contaminés artificiellement par des inoculations (cf
Annexe 4); 150 ont donné un résultat positif par l’une ou l’autre des
méthodes. Seuls 3 échantillons naturellement contaminés ont été obtenus
dans la catégorie « Viandes crues de bœuf » (éch. n° 2892, 2893, 2997).
2.1.1.3 Complément d’étude pour être en accord avec les règles techniques de
l’AFNOR version 4
10 échantillons ont été inoculés à un taux > 15 UFC/échantillon. Les

échantillons concernés sont listés dans le tableau ci-dessous :
Catégorie N° échantillon Taux d’inoculation

2726 20,0
2727 20,0
2728 20,0
Viandes crues de boeuf
2732 54,4
2733 54,4
2734 54,4
2937 23,6
2938 23,6
Lait cru
2939 23,6
2940 23,6
Un minimum de 36 échantillons positifs ayant été obtenu pour les viandes

crues de bœuf (protocole MPE, 8 h d’incubation), aucun essai
complémentaire n’est requis pour cette catégorie.
Par contre, pour le lait cru, seuls 31 échantillons positifs ont été obtenus.
Compte-tenu du nombre d’échantillons concernés par les taux de

contamination plus élevés, le Bureau Technique de l’AFNOR a jugé qu’il
n’était pas nécessaire de réaliser des compléments d’essais pour cette
catégorie dans le cadre de l’étude de reconduction.
2.1.1.4 Protocoles de confirmation
La confirmation des échantillons positifs a été réalisée par isolement direct

de 50 µl d’enrichissement sur gélose CT SMAC.
Le protocole de confirmation Qualicon a été appliqué dans 52 cas pour

l’étude d’exactitude.

2.1.1.5 Résultats des essais
Les résultats sont donnés en Annexe 5.
Tableau 2 - Viandes crues de bœuf
BAX 8 heures
MP MPE
Réponses Méthode de référence Méthode de référence Méthode de référence Méthode de référence
positive (R+) négative (R-) positive (R+) négative (R-)
Méthode alternative Accord positif (A+/R+) Déviation positive (R-/A+) Accord positif (A+/R+) Déviation positive (R-/A+)
positive (A+) PA = 18 PD = 21 PA = 13 PD = 13
Méthode alternative Déviation négative (A-/R+) Accord négatif (A-/R-) Déviation négative (A-/R+) Accord négatif (A-/R-)
négative (A-) ND = 6* (PPND = 1) NA = 34 (PPNA = 1) ND = 10 NA = 43
* dont un positif PCR non confirmé (éch. n° 2582)
BAX 24 heures
MP MPE
négative (A-) ND = 2 NA = 30 ND = 3 NA = 38 (PPNA = 1)
* dont un positif PCR non confirmé (éch. n° 2579)
Tableau 3 - Lait cru
mTSB
MP MPE
négative (A-) ND = 0 NA = 30 (PPNA = 1) ND = 2 NA = 30
Tableau 4 - Fruits et végétaux
mTSB
MP MPE
négative (A-) ND = 1 NA = 33 ND = 1 NA = 33

Tableau 5 - Plats cuisinés, viandes crues de porcin, de poulet et d’ovin
mTSB
MP MPE
négative (A-) ND = 0 NA = 30 ND = 0 NA = 30
Tableau 6 - Toutes matrices testées
mTSB / BAX 8 heures

MP MPE
négative (A-) ND = 7 (PPND = 1) NA = 127 (PPNA = 2) ND = 13 NA = 136
mTSB / BAX 24 heures

MP MPE
négative (A-) ND = 3 NA = 123 (PPNA = 1) ND = 6 NA = 131 (PPNA = 1)

Tableau 7 - Calcul de l’exactitude relative (AC), de la sensibilité relative (SE)

et de la spécificité relative (SP)
mTSB / BAX 8 heures / MP

Exactitude relative Sensibilité relative Spécificité relative
N+ N-
Matrices PA NA ND PD N AC (%) SE (%) SP (%)
PA + ND NA + PD
[100x(PA+NA])/N] [100xPA]/N+] [100xNA]/N-]
Produits crues de bœuf 18 34 6 21 79 65,8 24 75,0 55 61,8
Lait cru 30 30 0 1 61 98,4 30 100,0 31 96,8
Fruits et végétaux 30 33 1 0 64 98,4 31 96,8 33 100,0
Plats cuisinés, viandes crues
32 30 0 0 62 100,0 32 100,0 30 100,0
de porcin, de poulet et d’ovin
TOTAL 110 127 7 22 266 89,1 117 94,0 149 85,2
mTSB / BAX 8 heures / MPE

N+ N-
PA + ND NA + PD
[100x(PA+NA])/N] [100xPA]/N+] [100xNA]/N-]
Produits crues de bœuf 13 43 10 13 79 70,9 23 56,5 56 76,8
Lait cru 28 30 2 1 61 95,1 30 93,3 31 96,8
32 30 0 0 62 100,0 32 100,0 30 100,0
TOTAL 103 136 13 14 266 89,8 116 88,8 150 90,7
mTSB / BAX 24 heures / MP

N+ N-
PA + ND NA + PD
[100x(PA+NA])/N] [100xPA]/N+] [100xNA]/N-]
Produits carnés 21 30 2 26 79 64,6 23 91,3 56 53,6
Lait cru 30 30 0 1 61 98,4 30 100,0 31 96,8
32 30 0 0 62 100,0 32 100,0 30 100,0
TOTAL 113 123 3 27 266 88,7 116 97,4 150 82,0
mTSB / BAX 24 heures / MPE

N+ N-
PA + ND NA + PD
[100x(PA+NA])/N] [100xPA]/N+] [100xNA]/N-]
Produits carnés 20 38 3 18 79 73,4 23 87,0 56 67,9
Lait cru 28 30 2 1 61 95,1 30 93,3 31 96,8
32 30 0 0 62 100,0 32 100,0 30 100,0
TOTAL 110 131 6 19 266 90,6 116 94,8 150 87,3

2.1.1.6 Calcul de l’exactitude relative (AC), de la sensibilité relative (SE) et de la

spécificité relative (SP)
Les valeurs en pourcentages calculées pour la méthode alternative sont les

suivantes :
mTSB / BAX 8 h mTSB / BAX 24 h

MP MPE MP MPE
Exactitude relative (AC) 89,1 89,8 88,7 90,6
Spécificité relative (SP) 85,2 90,7 82,0 87,3
Sensibilité relative (SE) 94,0 88,8 97,4 94,8
En tenant compte des positifs supplémentaires obtenus par la méthode

alternative, la sensibilité des deux méthodes est la suivante :
mTSB / BAX 8 h mTSB / BAX 24 h

MP MPE MP MPE
Méthode alternative (SE) 95,0 90,0 97,9 95,6
Méthode de référence (SE) 84,2 89,2 81,1 85,9
2.1.1.7 Analyse des discordants
Le nombre de discordants entre la méthode de référence et la méthode

alternative est :
Y = PD + ND d x² = d²/y Conclusion
PD - ND
MP Y = 22 + 7 = 30 15 7,5 7,5 > 3,841
y > 22, Test de Mc Nemar Les 2 méthodes sont
différentes à α < 0,05 en
faveur de la méthode
mTSB / BAX 8 h
alternative
MPE Y = 14 + 13 = 27 1 0,04 0,04 < 3,841
y > 22, Test de Mc Nemar Les 2 méthodes ne sont pas
différentes à α < 0,05
MP Y = 27 + 3 = 30 24 19,2 19,2 > 3,841
différentes à α < 0,05, en
alternative
mTSB / BAX 24 h
MPE Y = 19 + 6 = 25 13 6,76 6,76 > 3,841
différentes à α < 0,05, en
alternative

Déviations négatives
Protocole Catégorie N° échantillon

2573
2576
Viandes crues de bœuf 2577
Protocole mTSB / BAX 8 h / MP
2582*
2585
Fruits et végétaux 2840
2569
2573
2576
2577
2582
Viandes crues de bœuf
2584
Protocole mTSB / BAX 8 h / MPE : 2585
2586
2587
2997
2943
Lait cru
2948
2576
Viandes crues de bœuf
Protocole mTSB / BAX 24 h / MP 2997
2576
Viandes crues de bœuf 2585
2997
Protocole mTSB / BAX 24 h / MPE
2943
Lait cru
2948
* Résultat PCR positif, mais test de confirmation négatif
Dans la catégorie « Viandes crues de bœuf », certains échantillons ont

donné un résultat positif après une incubation de 24 h, le seuil de détection
n’aurait peut-être pas été atteint après une incubation de 8 h à 42°C.
Toutefois, pour certaines matrices de viande crue de bœuf, les déviations
observées sont probablement imputables à l’échantillonnage, les
enrichissements étant différents pour la méthode alternative et la méthode de
référence.
L’échantillon n° 2840 de la catégorie « Fruits et végétaux » était

probablement très faiblement contaminé ; il n’a été détecté par la méthode
de référence qu’après une incubation de 24 h.

Déviations positives
Les déviations positives sont réparties comme suit :
Protocole mTSB / BAX 8 h Protocole mTSB / BAX 24 h

MP MPE MP MPE
Viandes crues de bœuf 21 13 26 18
Lait cru (échantillon 2900) 1 1 1 1
La majorité des déviations positives a été observée dans la catégorie

« Viandes crues de bœuf ». Les bouillons d’enrichissement étant différents
entre la méthode de référence et la méthode alternative, ces déviations
pourraient être imputables à l’échantillonnage. Toutefois, il est également
probable que le bouillon spécifique BAX® E. coli permette un meilleur
recouvrement des cellules d’E. coli O157:H7 que le bouillon mTSB dans la
catégorie « Viandes crues de bœuf ».
Discordances de résultats entre les protocoles d’amplification

MP et MPE
Les différences observées entre les résultats obtenus par les protocoles PCR
MP et MPE pourraient être imputables à l’échantillonnage dans la prise
d’essai de l’extrait d’ADN. Le protocole MP pourrait également permettre une
meilleure efficacité d’amplification que le protocole MPE.
Quatre protocoles incluant toutes les catégories ont été testés :
- enrichissement en mTSB et BAX 24 heures,

suivi d’une amplification MP,
suivi d’une amplification MPE,
suivi d’une amplification MP,
suivi d’une amplification MPE.
Pour ce dernier, la méthode de référence et la méthode alternative ne

sont pas différentes à α 0,05. Les deux méthodes diffèrent pour les
trois autres cas avec α inférieur à 0,05. Toutefois, les résultats sont
largement en faveur de la méthode alternative.

2.1.2 Niveau de détection relatif
Le niveau de détection relatif correspond au nombre le plus petit de micro-organismes cultivables qu’il
est possible de détecter dans l’échantillon, avec une probabilité de 50 %, à l’aide des méthodes
alternative et de référence.
2.1.2.1 Matrices utilisées
Cette étude a pour objectif de déterminer les quantités minimales de

E. coli O157:H7 détectables dans la matrice alimentaire et de les comparer à
celles obtenues par la méthode de référence.
Les limites de détection sont définies par l’analyse du couple (matrice /

souche) à quatre niveaux. Six réplicats de chaque condition ont été réalisés.
Les matrices testées sont les suivantes : steak haché, cidre fermier, salade
composée, lait cru.
2.1.2.2 Protocole de contamination
Les contaminations et les dénombrements ont été réalisés selon le protocole

décrit, pour les faibles taux d’inoculation, dans les exigences relatives aux
études préliminaires et collaboratives.
2.1.2.3 Résultats
Tableau 8 - Résultats des niveaux de détection relatifs
Niveau de détection relatif (UFC / 25 g ou 25 ml)

Couples (souche, matrice) selon le test de Spearman-Kärber 1
Méthode de référence Méthode alternative (MP) Méthode alternative (MPE)
Steak haché / E.coli O157:H7 BAX 8H 0,3 [0,1;0,8] 1,1 [0,7;1,5] 1,1 [0,7;1,5]
Steak haché / E.coli O157:H7 BAX 24H 0,3 [0,1;0,8] 0,9 [0,7;1,3] 1,2 [0,9;1,7]
Lait cru / E.coli O157:H7 0,4[0,1;1,3] 0,4[0,1;1,3] 0,4[0,1;1,3]
Piémontaise au jambon / E.coli O157:H7 0,4 [0,1;1,6] 0,4 [0,1;1,6] 0,4 [0,1;1,6]
Cidre / E.coli O157:H7 0,3 [0,1;1,1] 0,3 [0,1;1,1] 0,3 [0,1;1,1]
Les niveaux de détection relatifs de la méthode de référence sont

compris entre 0,1 et 1,6 UFC/25 g, ceux de la méthode alternative entre
0,1 et 1,7 UFC/25 g.
1
"Hitchins A. Proposed Use of a 50 % Limit of Detection Value in Defining Uncertainty Limits in the Validation of
Presence-Absence Microbial Detection Methods, Draft 10th December, 2003".
2.1.3 Inclusivité / exclusivité
L’inclusivité est la capacité de la méthode alternative à détecter l’analyte cible à partir d’un large
éventail de souches. L’exclusivité est l’absence d’interférences par un éventail approprié de souches
non cibles de la méthode alternative.
2.1.3.1 Protocoles d’essai
- Inclusivité : Cinquante souches E. coli O157:H7 ont été cultivées en

bouillon BHI, puis diluées et inoculées à un taux de 10 à 100 cellules pour
225 ml de bouillon spécifique BAX, incubé 8 heures à 42°C ; le protocole
complet de la méthode alternative a ensuite été appliqué. Deux souches
Escherichia coli O157:H- ont également été testées par ce protocole.
- Exclusivité : Trente-cinq souches négatives ont été cultivées en bouillon

BHI et inoculées, à un taux de 105 UFC, en bouillon EPT, incubé à 41,5°C
pendant 24 heures. Les souches ont ensuite été testées par la méthode
alternative.
2.1.3.2 Résultats
Les résultats sont présentés en Annexe 6.
- Inclusivité : Toutes les souches testées ont donné un test PCR positif,
ainsi qu’un aspect caractéristique sur gélose CT SMAC.
- Exclusivité : La souche E. coli O55:H7 donne un test PCR positif (culture

réalisée en bouillon EPT, mTSB + novobiocine), mais elle présente des
colonies roses non caractéristiques (sorbitol +) sur les géloses de
confirmation.
Les deux souches E. coli O157:H- ont été testées avec le protocole de
l’inclusivité ; ces deux souches montrent un résultat négatif avec le test
BAX et donnent des colonies non caractéristiques sur gélose CT SMAC.
Toutes les autres souches non cibles ont donné une réaction PCR
négative.
2.1.3.3 Conclusion
La méthode alternative montre une exclusivité et une inclusivité

satisfaisantes.
2.2 Praticabilité
La praticabilité a été évaluée d’après les treize critères définis dans les
exigences relatives aux études de validation :
Mode de conditionnement Les réactifs nécessaires à la réalisation de 96 tests

des éléments de la méthode comprennent :
- 2 x 12 ml de tampon de lyse
Volume de réactifs
- 400 µl de Protéase
- 12 x 8 barrettes pour PCR
- 12 x 8 barrettes de bouchons
Condition de stockage des La température de stockage du kit est de 2-8°C. Elle

éléments et péremption est indiquée sur le coffret et sur les différents
réactifs. La date de péremption est indiquée sur le
des produits non ouverts
coffret et sur les différents réactifs.
Modalités d’utilisation après Les différents réactifs sont stockés à 2-8°C.

première utilisation
Equipements en locaux Le laboratoire doit répondre aux exigences

spécifiques nécessaires spécifiques décrites dans la norme NF EN ISO
22174 (§ 6).
Réactifs prêts à l’emploi Le tampon de lyse est à reconstituer de la façon

ou à reconstituer suivante : 150 µl de protéase + 12 ml de tampon.
Ces réactifs se conservent deux semaines à 2-8°C
après reconstitution.
Durée de formation de Pour un opérateur uniquement formé aux

l’opérateur non initié à la techniques classiques de microbiologie, la formation
à la technique est de 2 jours. Pour un opérateur
méthode
formé à l'analyse PCR, la formation à la technique
est de moins d'une journée

Temps réel de manipulation Temps en minutes pour des échantillons négatifs

et flexibilité de la méthode
Etapes ISO 16654 BAX E. coli O157:H7
12 éch. 32 éch. 12 éch. 32 éch.
Prélèvement, broyage 54 105 54 105
IMS 6 h 48 85
IMS 24 h, si nécessaire 48 85
Prélèvement pour PCR, 3 9
extraction
PCR 5 16
Lecture géloses 5 10
Total échantillons négatifs 155 285 62 130
Total / échantillon négatif 13 9 5 4
Temps en minutes pour des échantillons positifs ou

présentant des colonies suspectes
Etapes ISO 16654 BAX E. coli O157:H7
12 éch. 32 éch. 12 éch. 32 éch.
Isolement sur gélose CT 5 10
SMAC
Lecture des géloses CT SMAC 2 5
Isolement sur gélose nutritive 10 25 10 25
Indole 24 72
Test latex 18 48 6 15
Total échantillons positifs 207 430 85 185
Total / échantillon positif 17 13 7 6

Délai d’obtention des Dans le cas où aucune colonie suspecte n’est

résultats visible sur les milieux, les délais d’obtention des
résultats sont les suivants :
Etape ISO 16654 BAX E. coli O157:H7
mTSB BAX 8 h BAX 24 h
Prélèvement, broyage J0 J0 J0 J0
IMS 6 h J0 / / /
IMS 24 h J1 / / /
PCR / J1 J0 J1
Obtention résultat J1 J1 J0 J1
négatif
Dans le cas où des colonies sont présentes sur les

géloses sélectives ou si le test PCR est positif, les
délais d’obtention des résultats sont les suivants :
Etape ISO 16654 BAX E. coli O157:H7
mTSB BAX 8 h BAX 24 h
Prélèvement, broyage J0 J0 J0 J0
IMS 6 h J0 / / /
IMS 24 h J1 / / /
PCR / J1 J0 J1
Isolement sur gélose / J1 J0 J1
CT SMAC
Isolement sur gélose J1-J2 J2 J1 J2
nutritive
Test Indole J2-J3 J3 J2 J3
Test latex J3-J4 J4 J3 J4
Type de qualification de Elle est identique à celle nécessaire à la mise en

l’opérateur œuvre de la méthode de référence.
Etapes communes avec la L’étape d’enrichissement est commune avec la

méthode de référence méthode de référence dans le cas de l’utilisation du
bouillon mTSB + novobiocine.
Traçabilité des résultats La traçabilité est celle habituellement appliquée

dans un laboratoire de microbiologie
Maintenance par le Sans objet

laboratoire
La méthode BAX® E. coli O157:H7 MP permet un gain de manipulation

important par rapport à la méthode de référence, qu’il s’agisse d’échantillons
positifs ou négatifs. Le temps de manipulation est ainsi divisé par 2 à 3 fois.

2.3 Etude inter-laboratoires
2.3.1 Mise en oeuvre
Quinze laboratoires ont participé à l’étude qui a porté sur une matrice
végétale, épinards hachés crus surgelés à la crème, inoculée par la souche
non pathogène E. coli O157 :H7 ATCC 43888.
Les échantillons ont été inoculés individuellement à raison de 8 sachets par

taux et par laboratoire. Ainsi, chaque laboratoire a reçu 24 sachets.
Tous les échantillons ont été répartis par le laboratoire expert en sachets
stériles, à raison de 25 g par sachet, avant d’être contaminés.
Deux suspensions (125 cellules/ml et 25 cellules/ml) ont été préparées à

partir d’une culture d’une nuit en bouillon BHI à 37°C selon le protocole décrit
dans les exigences relatives aux études préliminaires et collaboratives des
règles techniques de l’AFNOR.
L’inoculation au taux faible a été réalisée à l’aide de 600 µl de la suspension

à 25 cellules/ml et l’inoculation à taux fort a été effectuée par 600 µl de la
suspension à 125 cellules/ml.
Après inoculation, les échantillons ont été homogénéisés et fermés

hermétiquement par un parafilm, puis stockés au froid avant expédition.
Les taux d’inoculation visés étaient les suivants :
- 0 UFC/25 ml,
- 1 – 10 UFC/25 ml,
- 5 – 50 UFC/25 ml.
Des instructions détaillées ont été transmises aux laboratoires par le

laboratoire expert.

2.3.2 Contrôle des paramètres expérimentaux
2.3.2.1 Taux de contamination avant ensemencement, taux obtenus après

contamination artificielle et stabilité des échantillons
Avant ensemencement
La recherche de bactéries cibles dans la matrice a été réalisée sur cinq

prélèvements afin de s’assurer de l’absence de ces bactéries.
Taux obtenus après contamination artificielle
Les taux de contamination obtenus dans la matrice sont donnés dans le

tableau suivant :
Taux théorique
Taux inoculé à J0 Taux réel à J1
Niveau Echantillons ciblé
(bactéries / 25g) (bactéries / 25 g)
(bactéries / 25g)
1 3, 8, 9, 12, 15, 18, 20, 21 0 0 0
2 1, 4, 7, 10, 11, 13, 17, 24 1 à 10 19 9
3 2, 5, 6, 14, 16, 19, 22, 23 5 à 50 89 43
Stabilité des échantillons
Le dénombrement a été réalisé sur trois échantillons pour le taux

d’inoculation fort. Une recherche a été réalisée pour le taux d’inoculation
faible sur trois échantillons. Les résultats sont reportés dans le tableau
suivant :
UFC/25 g (CT-SMAC) Recherche / 25 g

Jour
Flacon 1 Flacon 2 Flacon 3 Flacon 1 Flacon 2 Flacon 3
J0 100 80 130 + + +
J1 40 40 50 + + +
Une perte d’environ 50% du taux de recouvrement de la souche inoculée est

observée après 24 h de conservation des échantillons à 4°C.

2.3.2.2 Température relevée au cours du transport, température à réception et

délais de réception
Les températures au cours du transport et mesurées à réception, ainsi que le

délai de réception des échantillons sont donnés dans le Tableau 9.
Tableau 9 - Température des échantillons à réception
Température relevée par Température mesurée Date de réception

Laboratoires
le thermobouton (°C) à réception (°C) des échantillons
A 1,0 2,6 J1
B 1,0 1,9 J1
C 2,5 3,6 J1
D 1,5 4,1 J1
E 2,5 3,3 J1
F 1,0 2,0 J1
G 2,0 2,1 J1
H / / J2
I 2,5 5,4 J1
J 2,0 4,4 J1
K 1,0 3,5 J1
L 1,0 3,3 J1
M 1,0 2,9 J1
N 1,0 3,0 J1
0 0,5 / J2
ADRIA (P) 2,5 2,9 J1
2.3.2.3 Conclusion
Aucune anomalie n’a été observée pendant le transport à l’exception de deux

colis qui ont été livrés à J2 (laboratoires H et O) ; la température mesurée
pendant le transport était comprise entre 0 et 2,5°C.
2.3.3 Résultats des analyses
2.3.3.1 Dénombrement de la flore aérobie mésophile
Le dénombrement de la flore aérobie mésophile de la matrice a été effectué

sur un échantillon selon la méthode ISO 4833. Le résultat varie entre 220 et
3 300 UFC/g.

2.3.3.2 Résultats obtenus par le laboratoire expert
Tous les échantillons inoculés ont donné un résultat positif ; tous les résultats
sont concordants entre la méthode de référence et la méthode alternative.
Niveau Méthode de référence Méthode alternative

L0 0/8 0/8
L1 8/8 8/8
L2 8/8 8/8
2.3.3.3 Résultats obtenus par les laboratoires collaborateurs
Les résultats obtenus par les laboratoires collaborateurs sont les suivants :
Méthode de référence Méthode alternative

Laboratoire L0 L1 L2 Laboratoire L0 L1 L2
A 0/8 8/8 8/8 A 0/8 8/8 8/8
B 0/8 5/8 8/8 B 0/8 5/8 8/8
C 0/8 8/8 8/8 C 0/8 8/8 8/8
D 0/8 8/8 8/8 D 0/8 8/8 8/8
E 0/8 8/8 8/8 E 0/8 8/8 8/8
F 0/8 8/8 8/8 F 0/8 8/8 8/8
G 8/8 8/8 8/8 G 0/8 8/8 8/8
I 1/8 8/8 8/8 I 0/8 8/8 8/8
J 0/8 8/8 8/8 J 0/8 8/8 8/8
K 1/8 7/8 8/8 K 1/8 7/8 8/8
L 0/8 8/8 8/8 L 0/8 8/8 8/8
M 0/8 8/8 8/8 M 0/8 8/8 8/8
N 0/8 8/8 8/8 N 0/8 8/8 8/8
Deux laboratoires (H et O) ont reçu les échantillons à J2, et n’ont pas

effectué les analyses.
Le laboratoire G a obtenu des résultats positifs par la méthode de référence

pour l’ensemble des échantillons non inoculés, ses résultats ont donc été
exclus.
Il est à noter une probable inversion d’échantillons par le laboratoire K :
l’échantillon non inoculé K8 est positif par les deux méthodes, l’échantillon
inoculé K10 est négatif par les deux méthodes.
Les résultats de 12 laboratoires ont été interprétés : laboratoires A, B,

C, D, E, F, I, J, K, L, M, N.

2.3.4 Calculs
2.3.4.1 Calcul des pourcentages de spécificité (%SP) et de sensibilité (% SE)

pour les deux méthodes
Le pourcentage de spécificité, pour le niveau L0 et pour chaque méthode, est

calculé à l’aide de l’équation suivante :
  FP  
SP = 1 −   x 100%
 N − 
avec : N- = nombre total de tous les essais L0

FP = nombre de faux positifs
Le pourcentage de sensibilité, pour chaque niveau de contamination positif et

pour chaque méthode, est calculé à l’aide de l’équation suivante :
TP
SE = x 100%
N+
avec : N+ = nombre total de tous les essais L1 ou L2

TP = nombre de vrais positifs
Les résultats sont reportés dans le tableau suivant :

Niveau
SP/SE % LCL% SP/SE % LCL%
L0(SP) 97,9 93,0 99,0 98,0
L1(SE) 95,8 89,0 95,8 89,0
L2(SE) 100,0 98,0 100,0 98,0
L1+L2(SE) 97,9 93,0 97,9 93,0

2.3.4.2 Calcul de l’exactitude relative (AC)
Les résultats pour tous niveaux confondus sont donnés ci-après :
Tableau 10 - Couples de résultats de la méthode alternative et de la méthode

de référence dans le cadre de l’étude inter-laboratoire
Méthode de référence
Méthode alternative Total
+ -
+ PA = 189 PD = 0 189
- ND = 1 NA = 98 99
Total N+ = 190 N- = 98 N = 288
L’exactitude relative (AC), exprimée en pourcentage, est calculée à l’aide de

(PA + NA)
l’équation suivante : AC = x 100%
N
avec : N = nombre d’échantillons soumis à essai

PA = nombre d’accords positifs
NA = nombre d’accords négatifs
Les valeurs d’exactitude de la méthode alternative par rapport à la méthode

de référence ont été calculées pour chacun des niveaux et figurent dans les
tableaux ci-après :
Niveau AC % LCL %
L0 99,0 98,0
L1 100,0 98,0
L2 100,0 98,0
L1 + L2 100,0 98,0
Total 99,7 98,0
2.3.4.3 Etude des résultats discordants
Un seul résultat discordant a été observé au niveau 0 pour le laboratoire I,

avec un échantillon positif par la méthode de référence et négatif par la
méthode alternative.

2.3.5 Interprétation
2.3.5.1 Comparaison des valeurs d’exactitude relative, de spécificité et de

sensibilité
Les valeurs obtenues dans les deux parties de l’étude de validation (étude
comparative des méthodes et étude inter-laboratoire) sont reportées dans le
tableau 11 :
Tableau 11 - Comparaison des valeurs obtenues lors

de l’étude inter-laboratoire avec celles obtenues dans le cadre
de l’étude comparative des méthodes, pour la méthode alternative
Etude inter-laboratoire Etude comparative des méthodes

Exactitude relative (AC) 99,7 88,7
Sensibilité (SE) 97,9 97,9
Spécificité (SP) 99,0 82,0
2.3.5.2 Degré d’accord (DA)
Le degré d’accord est le pourcentage de chances de trouver le même résultat (c’est-à-dire tous les
deux positifs ou tous les deux négatifs) pour deux prises d’essai identiques analysées dans le même
laboratoire, dans des conditions de répétabilité (c’est-à-dire un seul opérateur utilisant le même
appareillage et les mêmes réactifs dans l’intervalle de temps le plus court possible).
Le degré d’accord est ainsi l’équivalent de la répétabilité pour les méthodes quantitatives.
Les différents tableaux permettant de déduire le degré d’accord sont donnés

en Annexe 7. Les degrés d’accord pour la méthode de référence et la
méthode alternative et pour chaque niveau sont reportés ci-après :

L0 96,0 98,0
L1 94,0 94,0
L2 100,0 100,0

2.3.5.3 Concordance
La concordance est le pourcentage de chances de trouver le même résultat pour deux échantillons
identiques analysés dans deux laboratoires différents. La concordance est donc l’équivalent de la
reproductibilité pour les méthodes quantitatives.
Les calculs de la concordance sont donnés en Annexe 8. Les pourcentages

de concordance pour la méthode de référence et la méthode alternative, à
chaque niveau, sont repris dans le tableau ci-après :

L0 96,0 97,0
L1 92,0 92,0
L2 100,0 100,0
2.3.5.4 Odds Ratio (COR)
Il est calculé selon la formule suivante :
deg ré d ' accord x (100 − concordanc e )

COR =
concordanc e x (100 − deg ré d ' accord )
Les Odds ratio pour la méthode de référence et la méthode alternative sont

donnés ci-après :

L0 1,0 1,0
L1 1,0 1,0
L2 1,0 1,0
2.3.6 Conclusion
La variabilité de la méthode alternative (degré d’accord, concordance, odds

ratio) est identique à celle de la méthode de référence.

2.4 Conclusion
Les conclusions de l’étude comparative des méthodes sont les

suivantes :
La méthode BAX® E. coli O157:H7 MP est spécifique et sélective, quels

que soient le temps d’enrichissement et le protocole d’amplification. Elle
montre des performances d’exactitude, de spécificité et de sensibilité
relatives, et de niveau de détection relatif satisfaisantes pour l’analyse :
- de viandes de bœuf crues, avec un enrichissement en milieu
BAX,
- de laits crus, avec un enrichissement en mTSB,
- de fruits et végétaux, avec un enrichissement en mTSB,
- de plats cuisinés, ainsi que de viandes crues de porc, ovin et
poulet, avec un enrichissement en mTSB.
Les performances de la méthode BAX® E. coli O157:H7 MP pour la

détection de souches E. coli O157:H7 dans la viande de bœuf crue
apparaissent nettement meilleures que celles de la méthode de
référence.
Le protocole usuel de confirmation retenu est un isolement direct sur

gélose CT SMAC avec un test d’agglutination sur colonies
caractéristiques. Le protocole alternatif proposé par Qualicon a toutefois
permis de confirmer 52 échantillons trouvés positifs par PCR et négatifs
par le protocole de confirmation usuel.
La méthode BAX® E. coli O157:H7 MP permet un gain de manipulation

important par rapport à la méthode de référence, qu’il s’agisse
d’échantillons positifs ou négatifs.
Les conclusions de l’étude interlaboratoires sont les suivantes :
La variabilité de la méthode alternative (degré d’accord, concordance,

odds ratio) est identique à celle de la méthode de référence.

Annexe 1 - Protocole de la méthode alternative :

BAX® E. coli O157:H7 MP
Protocole Protocole général

Viande de bœuf cru Autres matrices
25 g + 225 ml 25 g + 225 ml
bouillon spécial BAX E. coli O157:H7 bouillon mTSB + novobiocine
préchauffé à 42°C en sac préchauffé à 41,5°C en sac
Stomacher bag filter Stomacher bag filter
↓ ↓
8 - 24 h à 42°C ± 1°C 18 - 24 h à 41,5°C ± 1°C
↓ ↓
20 µl d’enrichissement 5 µl d’enrichissement
+ 200 µl tampon + 200 µl tampon

Lyse : 20 min à 37°C
10 min à 95°C
Refroidissement : 5 min
↓
50 µl lysat dans tube PCR
↓
PCR (MP : 3h30 ; MPE : 2h30)
Confirmation :
- isolement direct de 50 µl sur CT-SMAC ;
subculture et test latex O157 et H7
- protocole Qualicon

Annexe 2 - Protocole de confirmation Qualicon
400 µl enrichissement
+ 400 µl PBS Tween (PBST)
+ 20 µl immunobilles
Ims
Lavage avec 400 µl de PBST
Ims
Ajouter 400 µl de PBST

Vortexer
350 µl + 10 ml EPT
Isoler 50 µl sur CT SMAC = IMS1
8 - 16 h à 42°C
400 µl d’enrichissement
5 µl ou 20 µl + 400 µl de PBST
+ tampon de lyse + 20 µl immunobilles
PCR BAX Ims
Ajouter 400 µl de PBST
Ims
Ajouter 400 µl de PBST = IMS2
Isoler 50 µl sur :
- CT SMAC
- 2 géloses chromogènes
(milieux utilisés au cours de l’étude :
ID O157:H7, RAPID’E. coli O157:H7)

Annexe 3 - Méthode de référence EN ISO 16654 :

Microbiologie des aliments - Méthode horizontale
pour la recherche des Escherichia coli O157
x g d’échantillon + 9x g de mTSB + novobiocine préchauffé à 41,5°C

en sacs Stomacher bag filter
41,5°C pendant 6 h et 24h
Séparation immunomagnétique
IMS
Isolement 50 µl Isolement 50 µl
CT-SMAC Chromagar O157
37°C
18-24 h
Au moins 1 colonie caractéristique

(pour chaque milieu) et 4 colonies si la
première est négative
Gélose nutritive
Incubation 24 h ± 3 h à 37°C ± 1°C
Test indole Test latex
Interprétation des résultats

Annexe 4 - Contamination artificielle des échantillons
Contaminations artificielles
N°
Produit Mesure Taux Résultats
éch. Souche Origine Stress appliqué
du stress d'inoculation/25g
2465 Emincé de museau de porc à la Lyonnaise E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin pH3-4°c 0,55 3,8 +
2467 Betteraves rouges E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin pH3-4°c 0,55 3,8 +
2468 Taboulé à la volaille E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin pH3-4°c 0,55 3,8 +
2471 Salade de chou rouge E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration pH3-4°c 0,61 2,4 +
2473 Jus de pomme E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin pH3-4°c 0,55 3,8 +
2475 Jus d'orange E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration pH3-4°c 0,61 2,4 +
2476 Jus de fruit et lait orange, banane, fraise E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration pH3-4°c 0,61 2,4 +
2478 Soupe fraîche tomate, carotte, céleri E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin pH3-4°c 0,55 3,8 +
2479 Soupe fraîche poivron rouge, concombre, oignon E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration pH3-4°c 0,61 2,4 +
Soupe fraîche pomme de terre, carotte, poireau,
2480 E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration pH3-4°c 0,61 2,4 +
navet
2564 Boulettes de bœuf provençale E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 20 jours-20°c 0,37 2,8 +
2565 Boulettes au bœuf E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 20 jours-20°c 0,37 2,8 +
2566 Boulettes de bœuf provençale E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 20 jours-20°c 0,37 2,8 +
2567 Haché bolognaise E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 20 jours-20°c 0,37 2,8 +
2568 Brochettes abats de bœuf E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 20 jours-20°c 0,37 2,8 -
2569 Bavette E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 20 jours-20°c 0,37 2,8 +
2570 Aiguillette de bœuf E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin -20°c >1,11 <1 -
2571 Boulettes au bœuf E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin -20°c >1,11 <1 -
2572 Haché E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin -20°c >1,11 <1 +
2573 Carpaccio de bœuf au basilic E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin 20 jours-20°c >1,11 <1 +
2574 Carpaccio de bœuf aux olives E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin 20 jours-20°c >1,11 <1 +
2575 Steak haché E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin 20 jours-20°c >1,11 <1 -
2576 Steak haché tomate E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 20 jours-20°c 0,6 2 +
2577 Haché bolognaise E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 20 jours-20°c 0,6 2 +
2578 Steak haché oignon E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 20 jours-20°c 0,6 2 +
2579 Brochettes de bœuf E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 20 jours-20°c 0,6 2 +
2580 Steak haché tomate E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 20 jours-20°c 0,6 2 -
2581 Steak haché frais pur bœuf E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 20 jours-20°c 0,6 2 +
2582 Steak haché façon boucherie E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 20 jours-20°c 0,43 1,5 +
2583 Steak haché oignon E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 20 jours-20°c 0,43 1,5 +

N°
2584 Steak haché frais pur bœuf E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 20 jours-20°c 0,43 1,5 +
2585 Brochettes abats de bœuf E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 20 jours-20°c 0,43 1,5 +
2618 Haché bolognaise E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours-20°c 0,89 3,8 +
2619 Boulettes de bœuf provençale E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours-20°c 0,89 3,8 +
2620 Brochettes d'abats de bœuf E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours-20°c 0,89 3,8 -
2621 Steak hache E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours-20°c 0,89 3,8 -
2622 Carpaccio aux olives E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours-20°c 0,89 3,8 +
2623 Steak haché E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 5 jours-20°c 1,03 2,2 +
2625 Boulettes de bœuf E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 5 jours-20°c 1,03 2,2 +
2626 Bavette E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 5 jours-20°c 1,03 2,2 +
2627 Haché bolognaise E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 5 jours-20°c 1,03 2,2 -
2628 Steak haché 15%MG E.coli O157:H7 A3612 Steak haché 5 jours-20°c 1,22 1 -
2629 Boulettes de bœuf provençale E.coli O157:H7 A3612 Steak haché 5 jours-20°c 1,22 1 +
2630 Brochettes de bœuf E.coli O157:H7 A3612 Steak haché 5 jours-20°c 1,22 1 +
2631 Steak haché frais E.coli O157:H7 A3612 Steak haché 5 jours-20°c 1,22 1 +
2632 Steak haché à l'oignon E.coli O157:H7 A3612 Steak haché 5 jours-20°c 1,22 1 +
2633 Boulettes au bœuf E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours 4°c 0,97 5 +
2634 Baronne E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours 4°c 0,97 5 +
2635 Carpaccio au basilic E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours 4°c 0,97 5 +
2636 Steak haché à la tomate E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours 4°c 0,97 5 +
2637 Steak haché frais pur bœuf E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 5 jours 4°c 0,97 5 +
2638 Steak haché à l'oignon E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 5 jours 4°c 1,23 9,2 +
2639 Boulettes au bœuf E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 5 jours 4°c 1,23 9,2 +
2640 Steak haché frais pur bœuf 20%MG E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 5 jours 4°c 1,23 9,2 +
2641 Carpaccio aux olives2642 E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 5 jours 4°c 1,23 9,2 +
2653 Lait cru E.coli O157:H7 A206-RP Feces 13 jours pH3-4°c 0,49 3,8 +
2663 Lait cru E.coli O157:H7 R33-9 Environnement bovin 28 jours 4°c 0,47 3,4 +
2665 Lait cru E.coli O157:H7 A206RP Feces 13 jours 10% NaCl-4°c 0,55 6,2 +
2670 Lait cru E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 28 jours 10% NaCl-4°c 1,11 2,6 +
2723 Viande hachée surgelée E.coli O157:H7 A19891D Steak haché 40 jours -20°c 1,4 0-0-0-0-1 (0,2) +
2724 Viande hachée surgelée E.coli O157:H7 A19891D Steak haché 40 jours -20°c 1,4 0-0-0-0-1 (0,2) -
2725 Steak haché de bœuf surgelé E.coli O157:H7 A19891D Steak haché 40 jours -20°c 1,4 0-0-0-0-1 (0,2) -
N°
2726 Steak haché de bœuf surgelé E.coli O157:H7 AMTV6 Clinique (feces) 40 jours -20°c 1,45 19-22-22-19-18 (20,0) +
2729 Steak haché de bœuf surgelé E.coli O157:H7 AQ29-4 Feces bovin 40 jours -20°c 1,41 0-0-0-1-1 (0,4) -
2730 Steak haché de bœuf surgelé E.coli O157:H7 AQ29-4 Feces bovin 40 jours -20°c 1,41 0-0-0-1-1 (0,4) -
2731 Steak haché surgelé E.coli O157:H7 AQ29-4 Feces bovin 40 jours -20°c 1,41 0-0-0-1-1 (0,4) +
2732 Steak haché surgelé E.coli O157:H7 435 Sreak haché 48H 4°c/24H -18°c/17j 4°c 0,83 67-45-56-44-60 (54,4) +
2733 Steak haché surgelé E.coli O157:H7 435 Steak haché 48H 4°c/24H -18°c/17j 4°c 0,83 67-45-56-44-60 (54,4) +
2734 Steak haché surgelé E.coli O157:H7 435 Steak haché 48H 4°c/24H -18°c/17j 4°c 0,83 67-45-56-44-60 (54,4) +
2748 Lait cru E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 40 jours 4°c 1,64 2-4-0-0-2 (1,6) +
2749 Lait cru E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 40 jours pH3- 4°c 0,73 2-2-5-3-4 (3,6) +
2750 Cervelas vinaigrette à l'Alsacienne E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 57 jours pH3-4°c 0,86 4-8-4-2-2 (4,0) -
2751 Museau de porc à la lyonnaise E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 57 jours pH3-4°c 0,86 4-8-4-2-2 (4,0) -
2752 Taboulé au poulet E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 57 jours pH3-4°c 0,86 4-8-4-2-2 (4,0) +
2753 Taboulé à la volaille E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 42 jours pH3- 4°c 1,11 9-3-7-6-5 (6,0) +
2754 Salade camarguaise E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 42 jours pH3- 4°c 1,11 9-3-7-6-5 (6,0) +
2755 Salade de chou rouge E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 42 jours pH3- 4°c 1,11 9-3-7-6-5 (6,0) +
2756 Salade camarguaise E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 42 jours pH3- 4°c 1,25 3-10-4-7-3 (5,4) +
2757 Betteraves rouges E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 42 jours pH3- 4°c 1,25 3-10-4-7-3 (5,4) +
2758 Macédoine de légumes E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 42 jours pH3- 4°c 1,25 3-10-4-7-3 (5,4) +
2759 Entremêlés de pâtes et écrevisses E.coli O157:H7 LS56 Clinique 57 jours pH3-4°c 1,42 0-0-4-3-1 (1,6) -
2760 Salade piémontaise aux champignons E.coli O157:H7 LS56 Clinique 57 jours pH3-4°c 1,42 0-0-4-3-1 (1,6) +
2761 Salade strasbourgeoise E.coli O157:H7 LS56 Clinique 57 jours pH3-4°c 1,42 0-0-4-3-1 (1,6) -
2762 Julienne de légumes surgelés E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 57 jours -20°c >1,15 1-4-4-2-5 (3,2) +
2763 Brocolis en fleurettes surgelés E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 57 jours -20°c >1,15 1-4-4-2-5 (3,2) +
2764 Courgettes en rondelles surgelés E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 57 jours -20°c >1,15 1-4-4-2-5 (3,2) +
2765 Poêlée champêtre surgelée E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 41 jours -20°c 1,00 10-5-5-6-2 (5,6) +
2766 Carottes en rondelles surgelées E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 41 jours -20°c 1,00 10-5-5-6-2 (5,6) +
2767 Choux de Bruxelles surgelés E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 41 jours -20°c 1,00 10-5-5-6-2 (5,6) +
2768 Poivrons verts en dés surgelés E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 57 jours -20°c pH10 >1,27 4-2-1-0-1 (1,6) +
2769 Brocolis surgelés E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 57 jours -20°c pH10 >1,27 4-2-1-0-1 (1,6) +
2770 Epinards hachés à la crème fraîche surgelés E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 57 jours -20°c pH10 >1,27 4-2-1-0-1 (1,6) +
2771 Epinards hachés e portions surgelés E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 57 jours -20°c pH10 >1,27 4-2-1-0-1 (1,6) +
2772 Poêlée à la Méridionale surgelée E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 57 jours -20°c >1,15 1-4-4-2-5 (3,2) +
N°
2773 Julienne de légumes surgelés E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 41 jours -20°c 1,00 10-5-5-6-2 (5,6) +
2782 Boulettes de bœuf surgelées E.coli O157:H7 A1814ID Steak haché 48H 4°c/24H -18°c/26j 4°c 0,54 9-6-6-6-5 (6,4) +
2783 Boulettes de bœuf surgelées E.coli O157:H7 A1814ID Steak haché 48H 4°c/24H -18°c/26j 4°c 0,54 9-6-6-6-5 (6,4) +
2784 Viande hachée 5% MG E.coli O157:H7 A1814ID Steak haché 48H 4°c/24H -18°c/26j 4°c 0,54 9-6-6-6-5 (6,4) +
2785 Viande hachée 5% MG E.coli O157:H7 A1814ID Steak haché 48H 4°c/24H -18°c/26j 4°c 0,54 9-6-6-6-5 (6,4) -
2786 Viande hachée 20% MG E.coli O157:H7 AMVT6 Clinique 48 jours 4°c 1,95 1-6-5-9-4 (5,0) +
2787 Viande hachée 20% MG E.coli O157:H7 AMVT6 Clinique 48 jours 4°c 1,95 1-6-5-9-4 (5,0) +
2788 Boulettes de bœuf surgelées E.coli O157:H7 AMVT6 Clinique 48 jours 4°c 1,95 1-6-5-9-4 (5,0) +
2789 Boulettes de bœuf surgelées E.coli O157:H7 AMVT6 Clinique 48 jours 4°c 1,95 1-6-5-9-4 (5,0) -
2790 Boulettes de bœuf surgelées E.coli O157:H7 670T Steak haché 48 jours -20°c >2,41 5-4-4-4-3 (4,0) +
2791 Mini boulettes de bœuf surgelées E.coli O157:H7 670T Steak haché 48 jours -20°c >2,41 5-4-4-4-3 (4,0) +
2794 Côte de porc E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 48 jours -20°c/ 2 jours 4°c 0,8 9-8-1-3-5 (5,2) +
2795 Côte de porc E.coli O157:H7 670T Steak haché 48 Jours 4°c 0,62 7-5-9-12-6 (7,8) +
2796 Cuisse de poulet E.coli O157:H7 AQ29-4 Feces bovin 48 jours -20°c/ 2 jours 4°c 0,52 7-11-8-4-9 (7,8) +
2797 Cuisse de poulet E.coli O157:H7 LS56 Clinique 63 jours 4°c 1,23 0-2-2-3-2 (1,8) -
2802 Filet de poulet E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 48 jours -20°c/ 2 jours 4°c 0,8 9-8-1-3-5 (5,2) +
2803 Filet de poulet E.coli O157:H7 AQ29-4 Feces bovin 48 jours -20°c/ 2 jours 4°c 0,52 7-11-8-4-9 (7,8) +
2804 Poulet sauce aigre douce E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 63 jours -20°c 1,15 6-9-5-5-8 (6,6) +
2805 Poulet sauce aigre douce E.coli O157:H7 LS56 Clinique 63 jours 4°c 1,23 0-2-2-3-2 (1,8) +
2806 Emincé de porc cuisiné E.coli O157:H7 670T Steak haché 48 Jours 4°c 0,62 7-5-9-12-6 (7,8) +
2807 Emincé de porc cuisiné E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 63 jours 4°c 0,59 2-4-6-7-8 (5,4) +
2808 Tomates farcies E.coli O157:H7 AV36 Surface abattoir 48 jours -20°c/ 2 jours 4°c 0,8 9-8-1-3-5 (5,2) +
2809 Tomates farcies E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 63 jours -20°c 1,15 6-9-5-5-8 (6,6) +
2810 Lasagnes E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 63 jours -20°c 1,15 6-9-5-5-8 (6,6) +
2811 Lasagnes E.coli O157:H7 670T Steak haché 48 Jours 4°c 0,62 7-5-9-12-6 (7,8) +
2812 Aubergines farcies E.coli O157:H7 670T Steak haché 48 Jours 4°c 0,62 7-5-9-12-6 (7,8) +
2813 Aubergines farcies E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 63 jours 4°c 0,59 2-4-6-7-8 (5,4) -
2814 Cidre traditionnel E.coli O157:H7 B68 Surface abattoir 63 jours 4°c 0,59 2-4-6-7-8 (5,4) -
2815 Cidre traditionnel E.coli O157:H7 LS56 Clinique 63 jours 4°c 1,23 0-2-2-3-2 (1,8) -
2816 Cidre traditionnel E.coli O157:H7 Ad485 Steak haché 63 jours -20°c 1,15 6-9-5-5-8 (6,6) +
2817 Cidre traditionnel E.coli O157:H7 AQ29-4 Feces bovin 48 jours -20°c/ 2 jours 4°c 0,52 7-11-8-4-9 (7,8) -
2820 Chou fleur E.coli O157:H7 A19891D Steak haché 49 jours 4°c 0,78 6-1-0-7-4 (3,6) +
N°
2821 Chou fleur E.coli O157:H7 A19891D Steak haché 49 jours 4°c 0,78 6-1-0-7-4 (3,6) +
2822 Chou blanc E.coli O157:H7 A19891D Steak haché 49 jours 4°c 0,78 6-1-0-7-4 (3,6) +
2823 Chou blanc E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 49 jours -20°c 1,96 2-5-3-6-5 (4,2) +
2824 Mélange chou blanc carotte céleri E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 49 jours -20°c 1,96 2-5-3-6-5 (4,2) +
2825 Chou rouge E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 49 jours -20°c 1,96 2-5-3-6-5 (4,2) +
2826 Choucroute crue E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 64 jours pH3 -20°c >4,02 4-2-1-1-5 (2,6) -
2827 Olives vertes E.coli O157:H7 ENV177 Station d'épuration 64 jours pH3 -20°c >4,02 4-2-1-1-5 (2,6) -
2837 Soupe moulinée de légumes et herbes du jardin E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 49 jours10%NaCl -20°c >4,43 9-8-7-12-6 (8,4) +
2838 Soupe froide carotte melon E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 49 jours10%NaCl -20°c >4,43 9-8-7-12-6 (8,4) +
2839 Soupe froide gaspacho andalouse E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 49 jours10%NaCl -20°c >4,43 9-8-7-12-6 (8,4) +
2840 Jus de fruit pêche abricot E.coli O157:H7 LS56 Clinique 64 jours pH3 -20°c >2,58 0-3-0-1-2 (1,2) +
2841 Cidre bouché brut E.coli O157:H7 LS56 Clinique 64 jours pH3 -20°c >2,58 0-3-0-1-2 (1,2) -
2842 Cidre traditionnel E.coli O157:H7 LS56 Clinique 64 jours pH3 -20°c >2,58 0-3-0-1-2 (1,2) -
2843 Cidre fermier E.coli O157:H7 LS56 Clinique 64 jours pH3 -20°c >2,58 0-3-0-1-2 (1,2) -
2855 Côte de porc échine E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 54 jours 4°c 0,58 6-4-7-5-3 (5,0) +
2856 Côte de mouton E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 54 jours 4°c 0,58 6-4-7-5-3 (5,0) +
2857 Porc au caramel E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 54 jours 4°c 0,58 6-4-7-5-3 (5,0) -
2858 Rognons de porc cuisinés E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 54 jours 4°c 0,58 6-4-7-5-3 (5,0) +
2859 Quiche Lorraine E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 54 jours 4°c 0,58 6-4-7-5-3 (5,0) -
2860 Bouchées à la reine E.coli O157:H7 Ad487 Steak haché 54 jours 4°c 0,58 6-4-7-5-3 (5,0) +
2900 Lait cru E.coli O157:H7 LS56 Clinique 72 jours pH3- 4°c 1,00 5-1-5-3-2 (3,2) +
2901 Lait cru E.coli O157:H7 LS56 Clinique 72 jours pH3- 4°c 1,00 5-1-5-3-2 (3,2) +
2902 Lait cru E.coli O157:H7 AMVT6 Clinique 56 jours pH3- 4°c 0,5 11-6-7-7-5 (7,2) +
2903 Lait cru E.coli O157:H7 AMVT6 Clinique 56 jours pH3- 4°c 0,5 11-6-7-7-5 (7,2) +
2904 Lait cru E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 56 jours pH3- 4°c 1,38 2-4-8-3-2 (3,8) +
2905 Lait cru E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 56 jours pH3- 4°c 1,38 2-4-8-3-2 (3,8) +
2906 Choucroute crue E.coli O157:H7 LS56 Clinique 72 jours pH3- 4°c 1,00 5-1-5-3-2 (3,2) -
2907 Olives vertes E.coli O157:H7 LS56 Clinique 72 jours pH3- 4°c 1,00 5-1-5-3-2 (3,2) -
2908 Cidre traditionnel E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 56 jours pH3- 4°c 1,38 2-4-8-3-2 (3,8) -
2937 Lait cru E.coli O157:H7 AMVT6 Clinique (feces) 77 jours 4°c 0,62 21-25-30-24-18 (23,6) +
2941 Lait cru E.coli O157:H7 LS56 Clinique 77 jours 4°c 0,57 6-8-10-14-11 (9,8) +
N°
2946 Lait cru E.coli O157:H7 A206RP Clinique (feces) 62 jours 4°c 0,98 0-0-0-1-1 (0,4) -
2949 Lait cru E.coli O157:H7 ET8 Station d'épuration 62 jours 4°c 0,79 7-9-10-5-8 (7,8) +
2992 Lait cru E.coli O157:H7 B177 Surface abattoir 65 jours -20°c 0,26 11-8-13-17-2 (10,2) +
2995 Lait cru E.coli O157:H7 A3612 Steak haché 65 jours 4°c 0,63 10-19-16-15-16 (15,2) +
2998 Choucroute crue E.coli O157:H7 A3612 Steak haché 65 jours 4°c 0,63 10-19-16-15-16 (15,2) +
102 Tranche de gigot d'agneau E.coli O157:H7 A1518ID Steak haché 48H 4°c-33jours -18°c-48H 4°c 0,90 10-9-14-9-10 (10,4) +
103 Côte de mouton E.coli O157:H7 A1518ID Steak haché 48H 4°c-33jours -18°c-48H 4°c 0,90 10-9-14-9-10 (10,4) +
104 Côte de porc E.coli O157:H7 MK41242 Steak haché 48H 4°c-33jours -18°c-48H 4°c 0,90 48-33-16-43-33 (34,6) -

Annexe 5 - Résultats bruts de l’exactitude relative
NC : colonies non caractéristiques ims1 : confirmation par le protocole Qualicon (étape ims 1)
A : souche auto-agglutinante ims2: confirmation par le protocole Qualicon (étape ims 2 +/- : colonies douteuses
VIANDES CRUES DE BŒUF (Protocole BAX 8 h - 42°C)

Méthode de référence ISO 16654 ♦ Méthode BAX E.coli H7 MP Méthode BAX E.coli H7 MPExpress
Colonies suspectes Confirmations Confirmations
N°Ech. Produit IMS 6H IMS 24H CT SMAC CT SMAC
Résultat
Chromagar Chromagar Colonies Colonies
CT SMAC O157 CT SMAC O157 PCR suspectes Latex O157 Latex H7 Résultat final Concordance PCR suspectes Latex O157 Latex H7 Résultat final Concordance
2564 Boulettes de bœuf provençale + - +/- +/- - + + A+ / -/+ ims1 PD - / / / - =
2565 Boulettes au bœuf + + +/- +/- - + + + + + PD - / / / - =
2566 Boulettes de bœuf provençale + + +/- + - - / / / - = - / / / - =
2567 Haché bolognaise - - - - - + + + + + PD - / / / - =
2568 Brochettes abats de bœuf +/- - - - - - / / / - = - / / / - =
2569 Bavette + + / / + + + - / -/+ims1 = - / / / - ND
2570 Aiguillette de bœuf +/- + - +/- - - / / / - = - / / / - =
2571 Boulettes au bœuf + - +/- - - + + A+ / - = - / / / - =
2572 Haché - - +/- - - - / / / - = - / / / - =
2573 Carpaccio de bœuf au basilic - - + + + - / / / - ND - / / / - ND
2574 Carpaccio de bœuf aux olives - - - - - - / / / - = - / / / - =
2575 Steak haché - - - - - - / / / - = - / / / - =
2576 Steak haché tomate - - + + + - / / / - ND - / / / - ND
2577 Haché bolognaise + + / / + - / / / - ND - / / / - ND
2578 Steak haché oignon - - - - - - / / / - = - / / / - =
2579 Brochettes de bœuf - +/- - +/- - + - / / -/+ims2 PD - / / / - =
2580 Steak haché tomate - - - - - - / / / - = - / / / - =
2581 Steak haché frais pur bœuf + + +/- +/- - + + + + + PD - / / / - =
2582 Steak haché façon boucherie + - +/- - + + + A+ / - ND - / / / - ND
2583 Steak haché oignon - - - - - + + + + + PD - / / / - =
2584 Steak haché frais pur bœuf + + / / + + + + + + = - / / / - ND
2585 Brochettes abats de bœuf + + / / + - / / / - ND - / / / - ND
♦ Essai effectué sous le couvert de l’accréditation


Résultat
2586 Steak haché frais pur bœuf + + / / + + + + + + = - / / / - ND
2587 Steak haché frais pur bœuf + + / / + + +/- + + + = - / / / - ND
2618 Haché bolognaise - - + +/- + + + + + + = + + + + + =
2619 Boulettes de bœuf provençale + + +/- +/- - + + + + + PD + + + + + PD
2620 Brochettes d'abats de bœuf - - - - - - +/- - / - = - +/- - / - =
2621 Steak haché - + - +/- - - - / / - = - - / / - =
2622 Carpaccio aux olives - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2623 Steak haché - - - - - - + + + - = - + + + - =
2625 Boulettes de bœuf + +/- + - - + + A+ / -/+ims2 PD + + A+ / -/+ims2 PD
2626 Bavette + - - + - + + + + + PD - + + + - =
2627 Haché bolognaise - - - + - - - / / - = - - / / - =
2628 Steak haché 15%MG + + +/- + - - - / / - = - - / / - =
2629 Boulettes de bœuf provençale + + + + - + + A+ / -/+ims1 PD - + A+ / - =
2630 Brochettes de bœuf - +/- +/- +/- + + +/- NC / -/+ims1 = + +/- NC / -/+ims1 =
2631 Steak haché frais - - - - - + +/- + + + PD - +/- + + - =
2632 Steak haché à l'oignon - - + - - + + + + + PD + + + + + PD
2633 Boulettes au bœuf + + +/- - - + + A+ A+ -/+ims1 PD + + A+ A+ -/+ims1 PD
2634 Baronne + - + - - + + + + + PD + + + + + PD
2635 Carpaccio au basilic - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2636 Steak haché à la tomate + + / / + + + + + + = + + + + + =
2637 Steak haché frais pur bœuf + + / / + + - / / -/+ims1 = + - / / -/+ims1 =
2638 Steak haché à l'oignon + + / / + + + + + + = + + + + + =
2639 Boulettes au bœuf + + / / + + + + + + = + + + + + =
Steak haché frais pur bœuf
2640 20%MG + + / / + + + + + + = + + + + + =
2641 Carpaccio aux olives2642 - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2723 Viande hachée surgelée - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2724 Viande hachée surgelée - - - - - - - / / - = - - / / - =
2725 Steak haché de bœuf surgelé - +/- - - - - / / / - = - / / / - =

Résultat
2726 Steak haché de bœuf surgelé + + + + + + + + + + = + + + + + =
2727 Steak haché de bœuf surgelé + + + - + + + + + + = + + + + + =
2729 Steak haché de bœuf surgelé - +/- - - - + - / / -/+ims1 PD + - / / -/+ims1 PD
2730 Steak haché de bœuf surgelé - + - +/- - - - / / - = - - / / - =
2731 Steak haché surgelé - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2732 Steak haché surgelé + + + + + + + + + + = + + + + + =
2888 Mini boulettes de bœuf surgelées - - - - - - / / / - = - / / / - =
2889 Boulettes de boeuf surgelées - - - - - - / / / - = - / / / - =
2890 Viande hachée de bœuf 20% MG - - - - - - / / / - = - / / / - =
2892 Boulettes de bœuf surgelées - - + - - + + + + + PD + + + + + PD
2893 Boulettes de bœuf surgelées - - - - - -/+ +1col + + - = + +1col + + + PD
2894 Steak haché (surgelé) - - - - - - / / / - = - / / / - =
2898 Viande hachée de bœuf 5% MG - - - - - +/+ +/-1col - / - = -/+ +/-1col - / - =
2996 Haché bolognaise - - - - - - / / / - = - / / / - =
2997 Carpaccio de bœuf - - +/- + + - / / / - ND - / / / - ND
3057 Steak haché - - - - - - / / / - = - / / / - =
3058 Boulettes au bœuf - - - - - - / / / - = - / / / - =
3059 Steak haché à la tomate - - - - - - / / / - = - / / / - =
3061 Steak haché pur bœuf - - - - - - / / / - = - / / / - =
3062 Brochettes de bœuf - - - - - - / / / - = - / / / - =

VIANDES CRUES DE BŒUF (Protocole BAX 24 heures - 42°C)

Résultat PCR PCR
CT SMAC CT SMAC Latex O157 Latex H7 Résultat final Concordance Latex O157 Latex H7 Résultat final Concordance
O157 O157 suspectes suspectes
2564 Boulettes de bœuf provençale + - +/- +/- - + +/- A+ / -/+ims2 PD + +/- A+ / -/+ims2 PD
2565 Boulettes au bœuf + + +/- +/- - + +/- A+ / -/+ims2 PD - / / / - =
2566 Boulettes de bœuf provençale + + +/- + - + + + + + PD - / / / - =
2567 Haché bolognaise - - - - - + + + + + PD - / / / - =
2568 Brochettes abats de bœuf +/- - - - - - / / / - = - / / / - =
2569 Bavette + + / / + + + - / -/+ims2 = + + - / -/+ims2 =
2570 Aiguillette de bœuf +/- + - +/- - - / / / - = - / / / - =
2571 Boulettes au bœuf + - +/- - - - + A+ / - = - / / / - =
2572 Haché - - +/- - - + +/- + + + PD - / / / - =
2573 Carpaccio de bœuf au basilic - - + + + + + + + + = + + + + + =
2574 Carpaccio de bœuf au olives - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2575 Steak haché - - - - - - / / / - = - / / / - =
2576 Steak haché tomate - - + + + - / / / - ND - / / / - ND
2577 Haché bolognaise + + / / + + + A+ / -/+ims2 = + + A+ / -/+ims2 =
2578 Steak haché oignon - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2579 Brochettes de bœuf - +/- - +/- - - / / / - = + +/- NC / - =
2580 Steak haché tomate - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2581 Steak haché frais pur bœuf + + +/- +/- - + + A+ / -/+ims1 PD + + A+ / -/+ims1 PD
2582 Steak haché façon boucherie + - +/- - + + + + + + = + + + + + =
2583 Steak haché oignon - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2584 Steak haché frais pur bœuf + + / / + + + + + + = + + + + + =
2585 Brochettes abats de bœuf + + / / + + - / / -/+ims1 = - / / / - ND
2586 Steak haché frais pur bœuf + + / / + + + A+ / -/+ims1 = + + A+ / -/+ims1 =
2587 Steak haché frais pur bœuf + + / / + + + + + + = + + + + + =
2618 Haché bolognaise - - + +/- + + + + + + = + + + + + =
2619 Boulettes de bœuf provençale + + +/- +/- - + + A+ / -/+ims1 PD + + A+ / -/+ims1 PD


Résultat PCR PCR
2620 Brochettes d'abats de bœuf - - - - - - + - / - = - + - / - =
2621 Steak hache - + - +/- - - - / / - = - - / / - =
2622 Carpaccio aux olives - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2623 Steak haché - - - - - + + + + + PD - + + + - =
2625 Boulettes de bœuf + +/- + - - + + A+ / -/+ims2 PD - + A+ / - =
2626 Bavette + - - + - + + + + + PD - + + + - =
2627 Haché bolognaise - - - + - - - / / - = - - / / - =
2628 Steak haché 15%MG + + +/- + - - +/- NC / - = - +/- NC / - =
2629 Boulettes de bœuf provençale + + + + - + + A+ / -/+ims2 PD - + A+ / - =
2630 Brochettes de bœuf - +/- +/- +/- + + +/- - / -/+ims2 = + +/- - / -/+ims2 =
2631 Steak haché frais - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2632 Steak haché à l'oignon - - + - - + + + + + PD + + + + + PD
2633 Boulettes au bœuf + + +/- - - + + A+ / -/+ims2 PD + + A+ / -/+ims2 PD
2634 Baronne + - + - - + + + + + PD + + + + + PD
2635 Carpaccio au basilic - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2636 Steak haché à la tomate + + / / + + + + + + = + + + + + =
2637 Steak haché frais pur bœuf + + / / + + + A+ A+ -/+ims1 = + + A+ A+ -/+ims1 =
2638 Steak haché à l'oignon + + / / + + + + + + = + + + + + =
2639 Boulettes au bœuf + + / / + + + A+ / -/+ims1 = + + A+ / -/+ims1 =
2640 Steak haché frais pur bœuf 20%MG + + / / + + + + + + = + + + + + =
2641 Carpaccio aux olives2642 - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2723 Viande hachée surgelée - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2724 Viande hachée surgelée - - - - - - / / / - = - / / / - =
2725 Steak haché de bœuf surgelé - +/- - - - - / / / - = - / / / - =
2727 Steak haché de bœuf surgelé + + + - + + + + + + = + + + + + =
2729 Steak haché de bœuf surgelé - +/- - - - -/- / / / - = - / / / - =
2730 Steak haché de bœuf surgelé - + - +/- - - / / / - = - / / / - =

Résultat PCR PCR
2731 Steak haché surgelé - - - - - + + + + + PD + + + + + PD
2889 Boulettes de boeuf surgelées - - - - - - / / / - = - / / / - =
2892 Boulettes de bœuf surgelées - - + - - + + 2col - / -/+ ims2 PD + + 2col - / -/+ ims2 PD
2893 Boulettes de bœuf surgelées - - - - - + - / / -/+ ims2 PD + - / / -/+ ims2 PD
2997 Carpaccio de bœuf - - +/- + + - / / / - ND - / / / - ND
3057 Steak haché - - - - - - / / / - = - / / / - =
3058 Boulettes au bœuf - - - - - - / / / - = - / / / - =
3059 Steak haché à la tomate - - - - - - / / / - = - / / / - =
3061 Steak haché pur bœuf - - - - - - / / / - = - / / / - =
3062 Brochettes de bœuf - - - - - - / / / - = - / / / - =

LAIT CRU (protocole mTSB)

N°
Produit IMS 6H IMS 24H CT SMAC CT SMAC
Ech. Résultat PCR PCR
CT SMAC CT SMAC LatexO157 Latex H7 Résultat final Concordance Latex O157 Latex H7 Résultat final Concordance
2653 Lait cru + +/- + + + + + + + + = + + + + + =
2663 Lait cru + +/- + + + + + + + + = + + + + + =
2665 Lait cru + +/- + + + + + + + + = + + + + + =
2670 Lait cru + + + + + + + + + + = + + + + + =
2748 Lait cru + + + + + + + + + + = + + + + + =
2749 Lait cru + + + + + + + + + + = + + + + + =
2900 Lait cru - + - - - + - / / -/+ims2 PD + - / / -/+ims2 PD
2901 Lait cru + + / / + + - / / -/+ ims1 = + - / / -/+ ims1 =
2902 Lait cru + + / / + + +/- + + + = + +/- + + + =
2903 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2904 Lait cru + + / / + + +/- - / -/+ims2 = + +/- - / -/+ims2 =
2905 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2937 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2938 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2939 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2940 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2941 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2942 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2943 Lait cru + - + + + + - / / -/+ ims1 = -/- - / / - ND
2944 Lait cru + + / / + + - / / -/+ ims1 = + - / / -/+ ims1 =
2945 Lait cru + + / / + + + 2col + + + = + + 2col + + + =
2946 Lait cru + - + - - - - / / - = - - / / - =
2947 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2948 Lait cru + + / / + + - / / -/+ ims1 = -/- - / / - ND
2949 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =


N°
2950 Lait cru + + / / + + + 2col + + + = + + 2col + + + =
2951 Lait cru + + + + + + + 2col + + + = + + 2col + + + =
2952 Lait cru + + + + + + + + + + = + + + + + =
2953 Lait cru - + - +/- - - / / / - = - / / / - =
2954 Lait cru - - +/- - - - / / / - = - / / / - =
2955 Lait cru + - + - - - / / / - = - / / / - =
2956 Lait cru + - +/- - - - / / / - = - / / / - =
2957 Lait cru + - - - - - / / / - = - / / / - =
2958 Lait cru - + - - - - / / / - = - / / / - =
2959 Lait cru + - + - - - / / / - = - / / / - =
2960 Lait cru - +/- - +/- - - / / / - = - / / / - =
2961 Lait cru - - + - - - / / / - = - / / / - =
2962 Lait cru + - + - - - / / / - = - / / / - =
2963 Lait cru - - + - - - / / / - = - / / / - =
2964 Lait cru - - + - - - / / / - = - / / / - =
2965 Lait cru + - + - - - / / / - = - / / / - =
2966 Lait cru - - + - - - / / / - = - / / / - =
2967 Lait cru - - + +/- - - / / / - = - / / / - =
2968 Lait cru - - + - - - / / / - = - / / / - =
2979 Lait cru - - - - - - / / / - = - / / / - =
2980 Lait cru + - - - - - / / / - = - / / / - =
2981 Lait cru + - + - - - / / / - = - / / / - =
2982 Lait cru + - +/- - - - / / / - = - / / / - =
2983 Lait cru - - - - - - / / / - = - / / / - =
2984 Lait cru + - +/- - - - / / / - = - / / / - =
2985 Lait cru + - +/- - - - / / / - = - / / / - =
2986 Lait cru + - + - - - / / / - = - / / / - =
2987 Lait cru + - + - - - / / / - = - / / / - =


N°
2988 Lait cru + +/- + - - - / / / - = - / / / - =
2989 Lait cru + - + - - - / / / - = - / / / - =
2990 Lait cru - - + - - +/- - / / - = - - / / - =
2991 Lait cru - - - +/- - - / / / - = - / / / - =
2992 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =
2993 Lait cru + +/- / / + + + + + + = + + + + + =
2994 Lait cru + +/- / / + + + + + + = + + + + + =
2995 Lait cru + + / / + + + + + + = + + + + + =

FRUITS ET VEGETAUX (protocole mTSB)

N°
2467 Betteraves rouges + + / / + + + + + + = + + + + + =
2473 Jus de pomme + + / / + + + + + + = + + + + + =
2474 Jus de fruit et lait pêche abricot - - - - - - / / / - = - / / / - =
2475 Jus d'orange - - + + + + + + + + = + + + + + =
Jus de fruit et lait orange,
2476 + + / / + + + + + + = + + + + + =
banane,fraise
2477 Jus multivitaminé - - - - - - / / / - = - / / / - =
Soupe fraîche tomate, carotte,
2478 + + / / + + + + + + = + + + + + =
céleri
Soupe fraîche poivron rouge,
2479 + + / / + + + + + + = + + + + + =
concombre, oignon
Soupe fraîche pomme de terre,
2480 + + / / + + + + + + = + + + + + =
carotte, poireau, navet
2762 Julienne de légumes surgelés + + / / + + + + + + = + + + + + =
2763 Brocolis en fleurettes surgelés + + / / + + + + + + = + + + + + =
2764 Courgettes en rondelles surgelés + + / / + + + + + + = + + + + + =
2765 Poêlée champêtre surgelée + + / / + + + + + + = + + + + + =
2766 Carottes en rondelles surgelées + + / / + + + + + + = + + + + + =
2767 Choux de Bruxelles surgelés + + / / + + + + + + = + + + + + =
2768 Poivrons verts en dés surgelés + + / / + + + + + + = + + + + + =
2769 Brocolis surgelés + + / / + + + + + + = + + + + + =
Epinards hachés à la crème
2770 - + / / + + + + + + = + + + + + =
fraiche surgelés
Epinards hachés et portions
2771 + + / / + + + + + + = + + + + + =
surgelés


N°
2772 Poêlée à la Méridionale surgelée + + / / + + + + + + = + + + + + =
2773 Julienne de légumes surgelés + - / / + + + + + + = + + + + + =
2814 Cidre traditionnel - - - - - - / / / - = - / / / - =
2816 Cidre traditionnel + + / / + + + + + + = + + + + + =
2820 Chou fleur + + / / + + + + + + = + + + + + =
2821 Chou fleur + + / / + + + + + + = + + + + + =
2822 Chou blanc + + / / + + + + + + = + + + + + =
2823 Chou blanc - - + + + + + + + + = + + + + + =
Mélange chou blanc carotte
2824 - + + + + + + + + + = + + + + + =
céleri
2825 Chou rouge + + / / + + + + + + = + + + + + =
2826 Choucroute crue - - - - - - - / / - = - - / / - =
2827 Olives vertes - - - - - - / / / - = - / / / - =
Soupe fraîche légumes et
2837 + + / / + + + + + + = + + + + + =
herbes du jardin
2838 Soupe fraîche carotte melon + + + + + + + + + + = + + + + + =
Soupe fraîche gaspacho
2839 + + + + + + + + + + = + + + + + =
andalouse
2840 Jus de fruit pêche abricot - - + + + - / / / - ND - / / / - ND
2841 Cidre bouché brut - - - - - - / / / - = - / / / - =
2843 Cidre fermier - - - - - - - / / - = - - / / - =
2906 Choucroute crue - - - - - - / / / - = - / / / - =
2907 Olives vertes - - - - - - / / / - = - / / / - =
2909 Choucroute crue - - - - - - / / / - = - / / / - =


N°
2910 Olives vertes - - - - - - / / / - = - / / / - =
2915 Jus de fruit et lait pêche abricot - - - - - - / / / - = - / / / - =
2916 Soupe fraîche à l'Andalouse - - - - - - / / / - = - / / / - =
2917 Jus d'orange, fraise, banane - - - - - - / / / - = - / / / - =
2918 Pur jus vitaminé - - - - - - / / / - = - / / / - =
2919 Carottes en rondelles surgelées - - +/- - - - / / / - = - / / / - =
2920 Raisins secs - - - - - - / / / - = - / / / - =
2921 Tomates en dés - - - - - - / / / - = - / / / - =
2922 Navets en cubes - - - - - - / / / - = - / / / - =
2923 Choux de Bruxelles surgelés - - - - - - / / / - = - / / / - =
2924 Poivrons verts - - - - - - / / / - = - / / / - =
2925 Julienne de légumes surgelés - - - - - - / / / - = - / / / - =
2926 Poêlée champêtre - - - - - - / / / - = - / / / - =
2927 Epinards hachés - - - - - - / / / - = - / / / - =
2928 Brocolis - - - - - - / / / - = - / / / - =
2929 Préparation à base de fruits jaunes - - - - - - / / / - = - / / / - =
2930 Préparation à base de fruits rouges - - - - - - / / / - = - / / / - =
2931 Préparation à base de fruits rouges - - - - - - / / / - = - / / / - =
2998 Choucroute crue + + + + + + + + + + = + + + + + =

PLATS TRAITEURS, VIANDES CRUES DE PORCIN, DE POULET ET D’OVIN (protocole mTSB)

N°
Emincé de museau de porc
2465 - - + + + + + + + + = + + + + + =
à la Lyonnaise
2466 Salade camarguaise - - - - - - / / / - = - / / / - =
2468 Taboulé à la volaille + + / / + + + + + + = + + + + + =
2469 Taboulé au poulet - - - - - - / / / - = - / / / - =
2470 Salade camarguaise - - - - - - / / / - = - / / / - =
2471 Salade de chou rouge + + / / + + + + + + = + + + + + =
2472 Cervelas vinaigrette à l'Alsacienne - - - - - - / / / - = - / / / - =
Cervelas vinaigrette à
2750 - - - - - - / / / - = - / / / - =
l'Alsacienne
2751 Museau de porc à la lyonnaise - - - - - - / / / - = - / / / - =
2752 Taboulé au poulet + + / / + + + + + + = + + + + + =
2753 Taboulé à la volaille + + / / + + + + + + = + + + + + =
2754 Salade camarguaise + + / / + + + + + + = + + + + + =
2755 Salade de chou rouge + + / / + + + + + + = + + + + + =
2756 Salade camarguaise + + / / + + + + + + = + + + + + =
2757 Betteraves rouges + + / / + + + + + + = + + + + + =
2758 Macédoine de légumes + + / / + + + + + + = + + + + + =
Entremêlés de pâtes et
2759 - - - - - - / / / - = - / / / - =
écrevisses
Salade piémontaise aux
2760 + + / / + + + + + + = + + + + + =
champignons
2761 Salade strasbourgeoise - - - - - - / / / - = - / / / - =
2794 Côte de porc - - + + + + + + + + = + + + + + =
2795 Côte de porc + + / / + + + + + + = + + + + + =


N°
2796 Cuisse de poulet + + / / + + + + + + = + + + + + =
2797 Cuisse de poulet - + - - - - - / / - = - - / / - =
2802 Filet de poulet - + + + + + + + + + = + + + + + =
2803 Filet de poulet + + / / + + + + + + = + + + + + =
2804 Poulet sauce aigre douce + + + + + + + + + + = + + + + + =
2805 Poulet sauce aigre douce + + / / + + + + + + = + + + + + =
2806 Emincé de porc cuisiné + + / / + + + + + + = + + + + + =
2807 Emincé de porc cuisiné + + / / + + + + + + = + + + + + =
2808 Tomates farcies + + / / + + + + + + = + + + + + =
2809 Tomates farcies + + / / + + + + + + = + + + + + =
2810 Lasagnes + + / / + + + + + + = + + + + + =
2811 Lasagnes + + / / + + + + + + = + + + + + =
2812 Aubergines farcies + + / / + + + + + + = + + + + + =
2813 Aubergines farcies - - - - - - / / / - = - / / / - =
2855 Côte de porc échine + + / / + + + + + + = + + + + + =
2856 Côte de mouton + + / / + + + + + + = + + + + + =
2857 Porc au caramel - + +/- - - - / / / - = - / / / - =
2858 Rognons de porc cuisinés + + / / + + + + + + = + + + + + =
2859 Quiche Lorraine - - - - - - / / / - = - / / / - =
2860 Bouchées à la reine + + / / + + + + + + = + + + + + =
2861 Côte de porc échine - - - +/- - - / / / - = - / / / - =
2862 Côte de mouton - - - - - - / / / - = - / / / - =
2863 Porc au caramel - + - - - - / / / - = - / / / - =
2864 Rognons de porc cuisinés - - - - - - / / / - = - / / / - =
2865 Quiche Lorraine - - - - - - / / / - = - / / / - =
2866 Bouchées à la reine - - - - - - / / / - = - / / / - =
2867 Friand à la chair - - - - - - / / / - = - / / / - =
2868 Cake aux lardons et olives - - - - - - / / / - = - / / / - =


N°
2869 Fricadelles - - - - - - / / / - = - / / / - =
2872 Tranche de gigot d'agneau - - - - - - / / / - = - / / / - =
2932 Nems au poulet - - - - - - / / / - = - / / / - =
2933 Emincé de porc Shanganaise - - - - - - / / / - = - / / / - =
2934 Cake jambon olives - - - - - - / / / - = - / / / - =
2935 Quiche Lorraine - - - - - - / / / - = - / / / - =
2936 Bouchée à la reine - - - - - - / / / - = - / / / - =
101 Tranche de gigot d'agneau + + - - + + + + + + = + + + + + =
102 Côte de mouton + + + - + + + + + + = + + + + + =
103 Côte de porc + + + + + + + + + + = + + + + + =
104 Côte de porc - + - - - - / / / - = - / / / - =
105 Côte de porc - + - - - - / / / - = - / / / - =

Annexe 6 - Résultats bruts de l’inclusivité et de l’exclusivité
SOUCHES POSITIVES
Taux Résultat PCR Confirmation
Genre/espèce Sérotype Identifiant souche Origine d'inoculation CT SMAC
ufc/225ml MP MPE
Aspect colonies Latex O157:H7
Escherichia coli O157:H7 B177 Environnement abattoir 39 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 BV2 Environnement abattoir 58 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 BR3 Environnement abattoir 26 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 BD4 Environnement abattoir 41 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 ENV177 STEP 31 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 ET8 STEP 39 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 EK9 STEP 35 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 435 Steak haché 36 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 670T Steak haché 35 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 42197-1 Steak haché 96 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 A3612 Steak haché 36 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 B68 Environnement abattoir 50 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AT40 Environnement abattoir 41 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AV36 Environnement abattoir 43 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AR15 Environnement abattoir 28 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 LS3 Selles 43 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AMVT6 Selles 85 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 ATKP8 Selles 97 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AZRS15 Selles 86 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 R33-9 Fèces bovin 102 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AZ15-6 Fèces bovin 56 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AQ29-4 Fèces bovin 82 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AA18-3 Fèces bovin 80 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 LS56 Selles 92 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 A425TK Selles 119 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 A206RP Selles 125 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 A778EF Selles 97 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 MK41242 Steak haché 95 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 AMK2608 Steak haché 51 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 37006ID Steak haché 91 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 A1518ID Steak haché 104 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 EF190 Fèces 83 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 Ad686 Abattoir bovin 5 + + incolore +
CIP103571
Escherichia coli O157:H7 Clinique
(ATCC 35150) 74 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 ATCC 43888 68 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 Ad485 Steak haché 78 + + incolore +
Escherichia coli O157:H7 ATCC 700728 109 + + incolore +

SOUCHES NEGATIVES
Taux Résultat PCR Confirmations
Identifiant
Genre/espèce Sérotype Origine d'inoculation CT SMAC
souche MP MPE
ufc/225ml Aspect colonies LatexO157:H7
Escherichia coli O92:H33 JM221 Humaine Mexique 5,7.105 - - pousse - /
Escherichia coli O3:H2 38765 Humaine Chili 5,0.105 - - pousse - /
Escherichia coli O78:H11 H10407 ATCC 35401 4,9.105 - - rose /
Escherichia coli O6:H6 EDL1493 3,6.105 - - rose /
Escherichia coli O6:H10 ECOR10 Humaine Suède 7,6.105 - - pousse faible rose /
Escherichia coli O111:H21 DEC6a Humaine USA 2,5.105 - - pousse - /
Escherichia coli O86:H43 ECOR23 Animale (elephant USa) 3,7.105 - - pousse faible rose /
Escherichia coli O111:H8 DEC8b Humaine USA 4,9.105 - - rose /
Escherichia coli O128:H2 DEC11a Humaine USA 8,0.105 - - rose /
Escherichia coli O111:H2 DEC12a Humaine UK 5,7.105 - - pousse - /
Escherichia coli O78:K80:H12 TX-1 ATCC 43896 4,1.105 - - pousse faible rose /
Escherichia coli O104:H21 ECOR26 Humaine USA 7,0.105 - - pousse faible rose /
Escherichia coli O157:H43 DEC7a Animale (porc USA) 4,0.105 - - pousse faible rose /
4,2.105 +(Bouillon BAX) +(Bouillon BAX) rose /
Escherichia coli O55:H7 DEC5d Humaine Sri Lanka
63 +(mTSB +novo) +(mTSB +novo) rose /
Escherichia coli O44:H18 42 Humaine Pérou 7,6.105 - - rose /
Escherichia coli O127:H6 E2348/69 Humaine UK 8,5.105 - - incolore O157-
Escherichia coli O55:H6 DEC1a Humaine USA 4,5.105 - - incolore O157-
Escherichia coli O18:K1:H7 RS218 Humaine 4,7.105 - - rose /
Salmonella Landau Ad499 2,9.105 - - pousse - /
Salmonella Sternhauze Ad500 3,8.105 - - rose pâle /
Salmonella Urbana Ad501 3,7.105 - - pousse faible rose /
Salmonella Wayne Ad502 3,0.105 - - pousse - /
Hafnia alvei 88 viennoiserie 4,2.105 - - pousse - /
Hafnia alvei 167 saucisse 3,2.105 - - pousse - /
Citrobacter freundii 25 Epinards hachés surgelés 3,9.105 - - pousse - /
Citrobacter freundii 104 Steak haché 3,6.105 - - pousse - /
Escherichia vulneris 127 Lait cru 5,5.105 - - pousse - /
Pantoea spp. 134 Foie de porc 8,5.104 - - pousse - /
Escherichia coli O157 Ad524 Environnement laitier 4,2.105 - - rose /
Escherichia coli O157 Ad525 Fèces bovin 5,7.105 - - rose /
Escherichia coli O157 Ad526 Fèces bovin 6,4.105 - - rose /
Escherichia coli O157 Ad527 Clinique 4,3.105 - - rose /
Escherichia coli O157:H- O1.12.903 109 - - pousse faible rose /
Escherichia coli O157:H- O1.12.905 42 - - pousse faible rose /
Souches testées avec le protocole relatif aux souches positives (bouillon BAX 42,0°C)

Annexe 7 - Calcul du degré d’accord
Niveau L0 Niveau L0
Probabilité Probabilité
Nombre Probabilité Nombre Probabilité Nombre Probabilité Nombre Probabilité
Probabilité Probabilité de paires Probabilité Probabilité de paires
Laboratoire de positifs de paires de négatifs de paires Laboratoire de positifs de paires de négatifs de paires
de positifs de négatifs de résultats de positifs de négatifs de résultats
obtenus de positifs obtenus de négatifs obtenus de positifs obtenus de négatifs
identiques identiques
A 0 0 0 8 1 1 1 A 0 0 0 8 1 1 1
B 0 0 0 8 1 1 1 B 0 0 0 8 1 1 1
C 0 0 0 8 1 1 1 C 0 0 0 8 1 1 1
D 0 0 0 8 1 1 1 D 0 0 0 8 1 1 1
E 0 0 0 8 1 1 1 E 0 0 0 8 1 1 1
F 0 0 0 8 1 1 1 F 0 0 0 8 1 1 1
I 1 0,125 0,015625 7 0,875 0,765625 0,78125 I 0 0 0 8 1 1 1
J 0 0 0 8 1 1 1 J 0 0 0 8 1 1 1
K 1 0,125 0,015625 7 0,875 0,765625 0,78125 K 1 0,125 0,015625 7 0,875 0,765625 0,78125
L 0 0 0 8 1 1 1 L 0 0 0 8 1 1 1
M 0 0 0 8 1 1 1 M 0 0 0 8 1 1 1
N 0 0 0 8 1 1 1 N 0 0 0 8 1 1 1
Moyenne 0,963541667 Moyenne 0,981770833
Degré d’accord 96% Degré d’accord 98%
Niveau L1 Niveau L1
A 8 1 1 0 0 0 1 A 8 1 1 0 0 0 1
B 5 0,625 0,390625 3 0,375 0,140625 0,53125 B 5 0,625 0,390625 3 0,375 0,140625 0,53125
C 8 1 1 0 0 0 1 C 8 1 1 0 0 0 1
D 8 1 1 0 0 0 1 D 8 1 1 0 0 0 1
E 8 1 1 0 0 0 1 E 8 1 1 0 0 0 1
F 8 1 1 0 0 0 1 F 8 1 1 0 0 0 1
I 8 1 1 0 0 0 1 I 8 1 1 0 0 0 1
J 8 1 1 0 0 0 1 J 8 1 1 0 0 0 1
K 7 0,875 0,765625 1 0,125 0,015625 0,78125 K 7 0,875 0,765625 1 0,125 0,015625 0,78125
L 8 1 1 0 0 0 1 L 8 1 1 0 0 0 1
M 8 1 1 0 0 0 1 M 8 1 1 0 0 0 1
N 8 1 1 0 0 0 1 N 8 1 1 0 0 0 1
Moyenne 0,942708333 Moyenne 0,942708333
Niveau L2 Niveau L2
A 8 1 1 0 0 0 1 A 8 1 1 0 0 0 1
B 8 1 1 0 0 0 1 B 8 1 1 0 0 0 1
C 8 1 1 0 0 0 1 C 8 1 1 0 0 0 1
D 8 1 1 0 0 0 1 D 8 1 1 0 0 0 1
E 8 1 1 0 0 0 1 E 8 1 1 0 0 0 1
F 8 1 1 0 0 0 1 F 8 1 1 0 0 0 1
I 8 1 1 0 0 0 1 I 8 1 1 0 0 0 1
J 8 1 1 0 0 0 1 J 8 1 1 0 0 0 1
K 8 1 1 0 0 0 1 K 8 1 1 0 0 0 1
L 8 1 1 0 0 0 1 L 8 1 1 0 0 0 1
M 8 1 1 0 0 0 1 M 8 1 1 0 0 0 1
N 8 1 1 0 0 0 1 N 8 1 1 0 0 0 1
Moyenne 1 Moyenne 1

Annexe 8 - Calcul de la concordance

Niveau LO Niveau LO
Nombre de laboratoires 12 Nombre de laboratoires 12
Nombre de résultats négatifs par laboratoire: 8 Nombre de résultats négatifs par laboratoire :8
Laboratoire Nombre Paires Nombre total Laboratoire Nombre Paires Nombre total
de négatifs Interlaboratoires de paires de négatifs Interlaboratoires de paires
avec le même résultat interlaboratoires avec le même résultat interlaboratoires
A 8 688 704 A 8 688 704
B 8 688 704 B 8 688 704
C 8 688 704 C 8 688 704
D 8 688 704 D 8 688 704
E 8 688 704 E 8 688 704
F 8 688 704 F 8 688 704
I 7 610 704 I 8 688 704
J 8 688 704 J 8 688 704
K 7 610 704 K 7 610 704
L 8 688 704 L 8 688 704
M 8 688 704 M 8 688 704
N 8 688 704 N 8 688 704
Total 8 100 8 448 Total 8 178 8 448
Concordance 95,9% Concordance 96,8%
Total + 2 Total + 1
Total - 94 Total - 95
Niveau L1 Niveau L1
Nombre de résultats positifs par laboratoire: 8 Nombre de résultats positifs par laboratoire: 8
de positifs Interlaboratoires de paires de positifs Interlaboratoires de paires
A 8 672 704 A 8 672 704
B 5 438 704 B 5 438 704
C 8 672 704 C 8 672 704
D 8 672 704 D 8 672 704
E 8 672 704 E 8 672 704
F 8 672 704 F 8 672 704
I 8 672 704 I 8 672 704
J 8 672 704 J 8 672 704
K 7 598 704 K 7 598 704
L 8 672 704 L 8 672 704
M 8 672 704 M 8 672 704
N 8 672 704 N 8 672 704
Total 7 756 8 448 Total 7 756 8 448
Total + 92 Total + 92
Total - 4 Total - 4
Niveau L2 Niveau L2
Nombre de résultats positifs par laboratoire: 8 Nombre de résultats positifs par laboratoire: 8
de positifs Interlaboratoires de paires de positifs Interlaboratoires de paires
A 8 704 704 A 8 704 704
B 8 704 704 B 8 704 704
C 8 704 704 C 8 704 704
D 8 704 704 D 8 704 704
E 8 704 704 E 8 704 704
F 8 704 704 F 8 704 704
I 8 704 704 I 8 704 704
J 8 704 704 J 8 704 704
K 8 704 704 K 8 704 704
L 8 704 704 L 8 704 704
M 8 704 704 M 8 704 704
N 8 704 704 N 8 704 704
Total 8 448 8 448 Total 8 448 8 448
Total + 96 Total + 96
Total - 0 Total - 0


BAX System PCR Assay E. Coli O157H7 MP

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accréditation Cofrac

DuPont Nutrition & Health

Validation EN ISO 16140 de la méthode

Ce document comprend 55 pages dont 8 annexes.

L’accréditation du COFRAC atteste de la compétence

1.1 Date de la première validation et dates de reconduction _______________ 4

1.2 Méthode alternative ______________________________________________ 4

1.3 Méthode de référence à laquelle la méthode alternative a été comparée __ 5

2 HISTORIQUE DE LA VALIDATION ET PRINCIPAUX

2.1 Etude comparative des méthodes __________________________________ 6

2.2 Praticabilité ___________________________________________________ 16

2.3 Etude inter-laboratoires _________________________________________ 19

2.4 Conclusion ____________________________________________________ 27

Annexe 1 - Protocole de la méthode alternative : BAX® E. coli O157:H7 MP _____________________ 28

ADRIA Développement 2/55 27 avril 2016

L’ensemble des renseignements permettant de valider la garantie des analyses

Les résultats sont synthétisés au sein de tableaux et interprétés selon la norme

Fabricant : DuPont Nutrition & Health

Laboratoire expert : ADRIA Développement

Méthode à valider : BAX® System E. coli O157:H7 MP

Référentiel de validation : EN ISO 16140 (octobre 2003) : microbiologie des

Méthode de référence♦ : EN ISO 16654 : microbiologie des aliments –

Etendue de la validation : Viandes crues de bœuf

Organisme de validation : AFNOR Certification

1.1 Date de la première validation et dates de reconduction

La méthode BAX® System E. coli O157:H7 MP a été validée pour les

La méthode a été reconduite en mars 2016 selon l’ISO 16140 (2003).

1.2 Méthode alternative

Le test comprend un enrichissement en :

- bouillon mTSB supplémenté en novobiocine pour toute matrice,

L’étape d’enrichissement est suivie de l’extraction des acides nucléiques et

Deux protocoles sont définis selon les produits à analyser :

- protocole spécifique pour la viande de bœuf crue : enrichissement en

Les protocoles sont donnés en Annexe 1.

ADRIA Développement 4/55 27 avril 2016

Les confirmations sont réalisées :

- par isolement du bouillon d’enrichissement sur gélose sélective

- par le protocole de confirmation Qualicon (Cf. Annexe 2), dans le cas de

Lors de l’étude inter-laboratoire, le protocole relatif à l’analyse de végétaux

1.3 Méthode de référence♦ à laquelle la méthode alternative a été

La méthode de référence utilisée est la norme EN ISO 16654: Microbiologie

2 HISTORIQUE DE LA VALIDATION ET PRINCIPAUX

2.1 Etude comparative des méthodes

2.1.1 Exactitude relative, spécificité relative et sensibilité relative

2.1.1.1 Nombre et nature des échantillons

ADRIA Développement 6/55 27 avril 2016

2.1.1.2 Contamination artificielle des échantillons

10 échantillons ont été inoculés à un taux > 15 UFC/échantillon. Les

Catégorie N° échantillon Taux d’inoculation

Un minimum de 36 échantillons positifs ayant été obtenu pour les viandes

Compte-tenu du nombre d’échantillons concernés par les taux de

2.1.1.4 Protocoles de confirmation

La confirmation des échantillons positifs a été réalisée par isolement direct

Le protocole de confirmation Qualicon a été appliqué dans 52 cas pour

ADRIA Développement 7/55 27 avril 2016

2.1.1.5 Résultats des essais

Les résultats sont donnés en Annexe 5.

Tableau 2 - Viandes crues de bœuf

* dont un positif PCR non confirmé (éch. n° 2582)

* dont un positif PCR non confirmé (éch. n° 2579)

Tableau 3 - Lait cru

Tableau 4 - Fruits et végétaux

ADRIA Développement 8/55 27 avril 2016

Tableau 5 - Plats cuisinés, viandes crues de porcin, de poulet et d’ovin