Part.

1.4. Techniques de traitements

La séparation des microfossiles de la matrice implique une combinaison de techniques de
désagrégation mécanique et chimique. Le type de technique dépend de la composition chimique de la
paroi de la coque et de la nature du sédiment hébergeant les microfossiles. La quantité minimale de
broyage, d'ébullition et de tamisage doit être utilisée afin de garantir une cassure minimale des
échantillons. Certaines techniques générales applicables aux grands groupes de microfossiles sont les
suivantes :

A. Microfossiles calcaires.
A.1. Foraminifères et ostracodes
Pour l'extraction des foraminifères et des ostracodes, les échantillons sont généralement fragmentés
en morceaux d'environ 1 cm3. Il est courant de diviser les échantillons en deux parties, dont l'une est
conservée à des fins de référence ou d'utilisation au cas où des résultats insatisfaisants seraient obtenus
à partir de l'autre partie de l’échantillon.
Les échantillons meubles, tels que les marnes et les sables, peuvent être désagrégés en les faisant
simplement tremper dans l'eau pendant quelques heures. Le matériau désagrégé est ensuite lavé à
travers un tamis avec des ouvertures de 63 µm. Cette taille de tamis retient la majorité des
microfossiles. Le résidu lavé peut ensuite être séché dans une étuve. Le résidu séché est placé sur un
plateau de prélèvement pour observation sous une loupe binoculaire. Les échantillons moyennement
durs peuvent ne pas céder par un simple trempage. Ces échantillons peuvent être désintégrés en faisant
bouillir le mélange d'échantillon et d'eau avec du bicarbonate de sodium, de l'hexamétaphosphate de
sodium ou de l'hydroxyde de sodium, qui sont tous des agents de défloculation. L'ébullition doit se
poursuivre pendant environ une heure jusqu'à ce que le matériau soit désagrégé. L'échantillon est
ensuite décanté, lavé et séché. Une autre méthode de traitement des argiles durs consiste à faire
tremper l'échantillon pendant une nuit dans 50% de H2O2 et à faire bouillir la solution le lendemain à
feu doux pendant une demi-heure environ. Un peu d'eau est ensuite ajoutée et le mélange est à
nouveau bouilli. L'échantillon est ensuite lavé et séché. Un produit chimique de nom commercial
Quat-O désagrège également de manière satisfaisante les échantillons moyennement durs.
Pour les roches plus dures, telles que certains schistes argileux et marnes de grès, d'autres méthodes
de traitement doivent être suivies. D'excellents résultats ont été obtenus avec la cristallisation à l'hypo
photographique (thiosulfate de sodium). L'échantillon sec est brisé en plus petits morceaux et
recouvert d'une solution concentrée de thiosulfate de sodium ou mélangé avec une quantité égale de
cristaux, puis chauffé. Une fois imbibé de la solution, l'échantillon est conservé dans un endroit froid,
où il reste jusqu'à ce que le sel cristallise et forme une masse solide avec les fragments de roche.
L'échantillon est ensuite fondu. Ce processus est répété plusieurs fois jusqu'à ce que la majeure partie
de la roche soit brisée par la croissance de cristaux dans les pores et les fissures. L'échantillon de roche
désintégrée est ensuite lavé soigneusement jusqu'à ce que le sel soit complètement éliminé.
L'élimination des microfossiles du chert et d'autres sédiments siliceux est difficile. Beaucoup de ces
échantillons sont mieux étudiés en sections minces ou en immergeant de minces copeaux du matériau
dans de l'alcool ou de l'huile d'immersion.
La précaution est nécessaire à toutes les étapes de la préparation des échantillons. L'équipement
doit être maintenu parfaitement propre pour éviter la contamination d'un échantillon par d'autres, et il
est recommandé d'enregistrer chaque échantillon dans un registre au fur et à mesure qu'il est lavé, afin
que la contamination, le cas échéant, puisse ensuite être retracée. Lorsque des tamis sont utilisés, un
simple contrôle de la contamination peut être effectué en les plongeant dans une solution de bleu de
méthylène après le lavage de chaque échantillon. Les échantillons bleus dans les concentrés lavés sont
ensuite rejetés.
Au stade final, les microfossiles des résidus séchés (composés de grains minéraux, de fragments de
roche fine et de microfossiles) sont séparés. La séparation des restes fossiles du résidu peut être
effectuée en utilisant des liquides lourds de densités variables. Le tétrachlorure de carbone ou le
bromoforme est utilisé pour flotter et concentrer les foraminifères du résidu. Ces produits chimiques
sont toxiques et doivent donc être manipulés avec précaution sous une hotte. Le polytungstate de
sodium est un agent plus sûr pour la flottation, car il n'est pas toxique. La méthode la plus courante
pour séparer les microfossiles consiste à les prélever individuellement des différentes fractions
retenues du résidu avec un pinceau fin sous une binoculaire stéréozoom et de les monter dans une
cellule micropaléontologique. La cueillette des microfossiles comprend un plateau de cueillette (dont
les surfaces intérieures sont peintes en noir et ses grilles marquées), un pinceau fin de taille 00 ou 000,
des aiguilles à dissection, des pinces, un adhésif soluble dans l'eau (comme la gomme adragante) et
des cellules micropaléontologique (Fig.1.4).

Fig.5. Matériel de prélèvement et de stockage des microfossiles : (a) loupe binoculaire, (b)
plateau de prélèvement, (c) pinceau, (d) aiguille et (e) cellules microfauniques.

De nombreux foraminifères, en particulier les plus gros, ne peuvent être identifiés que par leurs
structures internes. Cela nécessite de préparer des sections minces orientées pour examiner les loges,
les structures murales, les canaux marginaux, les plaques dentaires et d'autres caractéristiques. Des
coupes équatoriales et axiales sont nécessaires pour l'observation des caractéristiques internes. La
procédure de création de sections est la suivante:
Un support de montage, baume du Canada ou Araldite (noms commerciaux de colles), placé sur
une lame de verre, est doucement chauffé sur une plaque chauffante jusqu'à ce qu'il fonde.
L’échantillon sec est immergé dans la masse fondue, la lame est transférée à un microscope alors
qu'elle est encore chaude, et l'échantillon est positionné avec une aiguille de montage chauffée. Le
spécimen est maintenu en place sur le support pendant qu'il refroidit. L’échantillon monté sur la lame
de verre est ensuite frotté sur une plaque de verre en utilisant successivement de la poudre de
carborundum (poudre abrasive) plus fine et de l’eau propre est constamment ajoutée pour la lubrification.
Le frottement est surveillé en continu au microscope jusqu'à ce que l’épaisseur souhaitée soit atteint.
La section est ensuite soigneusement lavée pour éliminer la poudre de frottement. La lame est chauffée
à nouveau pour faire fondre l'agent de montage et l'échantillon est retourné avec une aiguille de
montage à chaud de sorte que le côté base soit contre le verre. Après refroidissement, le frottement est
repris de l'autre côté de l'échantillon jusqu'à ce que la section soit suffisamment fine. Il n'est pas
nécessaire de réaliser des sections ultra-minces. La section est nettoyée de la poudre de frottement puis
montée d’une lamelle.

A.2. Nannoplancton calcaire

Le nannoplancton calcaire peut être extrait des sédiments en centrifugeant environ 5 g d'échantillon
de roche concassée. De l'eau distillée est ajoutée et le mélange est soigneusement agité. L'échantillon
est brièvement centrifugé à 300 tr / min pendant 15 s. Le décantant est mis de côté et le processus est
répété 3 à 8 fois jusqu'à ce que le décantant soit presque clair. Le décantant est à nouveau brièvement
centrifugé à 850 tr / min pendant 30 s, puis mis de côté pour un examen ultérieur. Le résidu contient
des particules de taille comprise entre 3 et 25 μm, riches en nannofossiles. Pour préparer les lames, la
suspension contenant du nanoplancton est dispersée sur une lamelle en verre et séchée. La lamelle est
montée sur une lame de verre à l’aide d’une colle résistante (baume du Canada, Araldite). Pour
l'observation au microscope électronique à balayage, la solution doit être dispersée sur une lamelle et
séchée. Les lames seront examinées sous un microscope pétrologique de haute puissance avec un
grossissement de 1000–1500 ×.

B. Microfossiles siliceux
Les techniques de traitement pour l'extraction de microfossiles siliceux, tels que les radiolaires, les
diatomées et les silicoflagellés, impliquent essentiellement un traitement avec du peroxyde
d'hydrogène pour éliminer la matière organique et de l'acide chlorhydrique pour éliminer les fractions
de carbonate. Après traitement de l'échantillon avec HCl, la suspension est décantée et le résidu est
traité avec 25% de HNO 3 (acide nitrique) pour éliminer les dernières traces de matière organique et
de sels inorganiques. De l'eau distillée est ajoutée au résidu et laissée au repos pendant un certain
temps. La solution est décantée et le résidu est prêt pour la préparation de la lame. Pour préparer la
lame, le résidu est dilué avec de l'eau distillée et bien agité pour que les microfossiles soient mis en
suspension. Une petite quantité de cette suspension est étalée sur une lame de verre et séchée sur une
plaque chauffante. Il peut être fixé dans la glycérine pour un montage temporaire ou au baume de pour
un montage permanent.

C. Microfossiles phosphatés
Pour l'extraction des conodontes, 1 à 2 kg d'échantillons de roche sont nécessaires pour le
traitement acide. Les échantillons concassés sont immergés dans de l'acide acétique glacial à 10% (CH
3 COOH) mélangés avec de l'acétate de sodium ou de l'acétate de calcium à un pH de 3,5. Également,
l'acide formique à 10% (HCOOH) est mélangée avec du carbonate de calcium et du carbonate
tricalcique à un pH inférieur à 3,6. La décomposition peut prendre un jour à plusieurs jours et
nécessiter un changement régulier de l'acide.

D. Plantes microfossiles
Les procédures de préparation des microfossiles végétaux consistent en la dissolution des roches
par une succession de réactifs chimiques. Les fragments de roche concassés, placés dans un bécher en
polypropylène, sont d'abord mis à réagir avec HCl puis avec HF (acide fluorhydrique) pour éliminer les
fractions carbonates et silicates de la roche. Le résidu est lavé, centrifugé puis mis à réagir avec une
solution de Schulze, qui est préparée en mélangeant une partie aqueuse saturée d’une solution de
KClO3 (chlorate de potassium) avec deux parties de HNO3 (acide nitrique) concentré. Le résidu est lavé et
traité avec une solution à 10% de KOH (L'hydroxyde de potassium) ou NaOH (L'hydroxyde de sodium) pour
éliminer les matières humiques. Le résidu final est constitué de spores, de pollens, de microplancton,
de cuticules (membranes très fines protégeant les feuilles) de feuilles et d'écorces et d'autres fragments
végétaux. Il est centrifugé, séché et monté sur des lames avec des lamelles pour examen au microscope
optique. Un soin extrême doit être apporté au traitement des échantillons palynologiques. Tous les
traitements acides doivent être effectués dans des chambres désinfectées, avec des gants et des
lunettes. La contamination par d'autres échantillons ou par l'atmosphère doit être évitée.

I.5. Méthodes d’analyse

1.5.1. Préparation des échantillons pour la microscopie électronique à balayage
Le microscope électronique à balayage (MEB=SEM) : est une technique d’observation de
topographie de surface. Il possède :

 un vaste domaine d’utilisation ;

 une grande résolution spatiale ( 1nm);
 possibilités de grandissements continus de 10 à 100 000 et plus ;
 grande richesse d’informations en imagerie

1mm 1µm 1nm 1Å

Oeil
M. optique
MEB

Fig.6. Microscope Electronique à Balayage (MEB)

 Le microscope électronique à balayage (MEB=SEM) est d'une immense valeur dans l'étude des
microfossiles. En raison de la haute résolution, les ultrastructures de surface des microfossiles, y
compris de nombreux types extrêmement petits, sont clairement visibles sous un MEB. Les
échantillons destinés à l'observation au microscope électronique doivent être exempts de saleté. Avant
de les monter sur un talon, ils doivent être placés sur une lame de verre et nettoyés avec une brosse
mouillée ou centrifugés. Les échantillons nettoyés sont montés sur des talons avec du ruban adhésif
double face. Une autre méthode consiste à coller une lamelle de verre sur un talon avec un adhésif
résistant à la chaleur et de monter l'échantillon sur la lamelle avec de la colle soluble dans l'eau, telle
que la gomme adragante. Le montage des échantillons sur un film négatif exposé collé sur un talon
permet d'obtenir un bon fond. Un avantage de cette procédure est que les échantillons peuvent être
fixés au substrat avec un peu d'humidité et peuvent être remontés facilement pour photographier dans
différentes orientations. Un film mince de Au, Au – Pd, C ou un autre matériau électriquement
conducteur approprié recouvre les échantillons sous une couche par pulvérisation. Il est également
recommandé d'utiliser une peinture conductrice à l'argent ou au carbone pour maintenir la conductivité
électrique entre l'échantillon et le talon. Le MEB environnemental ne nécessite pas de revêtement
d'échantillons; les échantillons propres sont directement examinés au microscope.

1.5.2. Préparation des échantillons pour la géochimie des coquilles

La composition en oligo-éléments et les rapports isotopiques d'oxygène et de carbone dans les
coquilles calcaires des microfossiles, principalement des foraminifères, fournissent des indices
importants pour les interprétations paléocéanographiques et paléoclimatiques. Les faibles valeurs
d'oligo-éléments obligent les coques à être exemptes de toute contamination étrangère. De même, les
rapports isotopiques originaux d'oxygène et de carbone (δ18 O, δ13 C) des coquilles peuvent changer en
raison de la diagenèse. Compte tenu de cela, des procédures rigoureuses sont suivies pour nettoyer les
coquilles microfossiles et pour obtenir des coquilles intactes pour l'analyse géochimique.
Toutes les procédures de nettoyage pour l'analyse des oligo-éléments des foraminifères
commencent par écraser environ 2 mg de coquilles entre des plaques de verre et les ultrasons plusieurs
fois sous des rinçages à l'eau distillée et au méthanol. L'échantillon est ensuite dissous pendant une
nuit dans un mélange d’acétate d'ammonium / acide acétique (pH = 5,5), centrifugé et le surnageant est
éliminé pour analyse. De meilleurs résultats d'élimination des contaminants sont obtenus en nettoyant
avec une solution de chlorhydrate d'hydroxylamine basique ou un réactif complexant de dithionite de
sodium basique à 80 °C pendant 30 min. Les protocoles détaillés de nettoyage et de dissolution pour
améliorer les données sur les éléments traces sont continuellement expérimentés et les utilisateurs
devraient se référer aux dernières données dans ce domaine (Barker et al., 2003). Les instruments
d'analyse des éléments traces comprennent le spectrophotomètre d'absorption atomique (AAS), le
spectrophotomètre d'émission atomique à plasma à couplage inductif (ICP-AES) et le spectromètre de
masse à plasma à couplage inductif (ICP-MS). Pour une analyse isotopique stable des coquilles de
microfossiles, la principale exigence est que les coquilles soient intactes et que la composition
isotopique originale soit préservée. Les échantillons affectés par la diagenèse doivent être éliminés. La
première étape devrait être d'examiner au microscope optique pour voir qu'elles ne sont pas tachées de
fer, qu'elles ne contiennent pas de fils de minéraux secondaires et qu'elles présentent une minéralogie
de la paroi primaire claire. Les spécimens optiquement intacts sont ensuite examinés sous un MEB
pour s'assurer que les microstructures sont clairement préservées et qu'il n'y a pas de prolifération de
minéraux secondaires. Les échantillons peuvent également être examinés sous un microscope à
cathodoluminescence pour vérifier les signes d'altération.