Université Ferhat Abbas Sétif

Faculté de Technologie
Département de Génies des Procédés
Option matériaux polymères

Expose de :
Méthodes de Caractérisation Spécifiques des Matériaux Polymères
Thème :
Ultracentrifugation
Fait par: Encadre par :
 Boumissa bilel Dr: A.Merzouki
 Fenni seifeddine
 Hammache yassine
 Kolli oussama
Annee 2011/2012
 PLAN De l’EXPOSé
1.Introduction
2.But
3.Principe théorique
3.1 Principe de l’ultracentrifugation 
4. Techniques d’ultracentrifugation
A. L‘ultracentrifugation analytique
B. L’ultrcentrifugation préparative
5.Appareillage et mode opératoire
6.Résultats
7.Exploitations
8.Conclusion
 1.introduction
L’ultracentrifugation est une technique essentielle
dans de nombreux domaines de la recherche
scientifique. Elle préconisée et développée par T.
Svedberg (Prix Nobel de chimie 1926) au début des
années 1920, et son école a trouvé de larges
applications dans le domaine de la chimie-physique
des macromolécules, qu’elles soient biologiques ou de
synthèse. Outil précieux pour les biologistes et les
biochimistes, elle est aussi appliquée à l'étude des
polymères et des pétroles par exemple.
 2.But 
On appelle ultracentrifugation la centrifugation
effectuée au moyen d’appareils tournant à vitesse très
élevée, par exemple supérieure à 20000 tours par minute.
Cette technique s’est progressivement répandue dans la
plupart des laboratoires de biologie moléculaire. C’est une
des principales méthodes de séparation des
macromolécules biologiques (protéines, acides
nucléiques) et de mesure des masses molaires ou
moléculaires et détermination de constante et la vitesse de
sédimentation.
 3.Principe théorie :
Dans un champ de gravité des particules se séparent
dans une colonne liquide en fonction de leur masse:
Les particules les plus lourdes sédimentent au fond du
tube, Autres facteurs importants:
 la force du champ de gravité
 la forme des particules (les sphères se déplacent plus
rapidement que les bâtonnets (e.g:l’ADN dénaturé
sédimente plus rapidement que l’ADN hélicoïdal)
 les particules sont soumises à deux forces opposées. A
l’équilibre, les particules sont distribuées dans le liquide en
fonction de leur masse.
 Dans l’ultracentrifugation la force centrifuge remplace la
force de gravité
 En effet, dans un champ centrifuge suffisamment
intense pour rendre les phénomènes de diffusion
négligeables, les macromolécules, généralement plus
denses que le solvant dans lequel elles sont dispersées,
tendent à s’éloigner de l’axe de rotation pour aller se
déposer insensiblement sur le fond du tube qui renferme
la solution ; on donne à ce déplacement de toute
molécule dans le sens de la direction de la force
centrifuge le nom de sédimentation même si aucun
dépôt n’est visible au fond du tube. Par contre, lorsque
les particules dispersées dans le milieu au cours de
l’ultracentrifugation remontent vers la surface, on dit que
l’on a flottation.
Principe de l’ultracentrifugation :

Séparation par la force centrifuge (105 g)

Fc = m.w²x
m : masse ; w : vitesse angulaire du rotor ;
x : distance de la protéine à l’axe de
rotation
 4.Techniques d’ultracentrifugation :
On distinguer 2 techniques
d’ultracentrifugation :Préparative et Analytique
A .l’ultracentrifugation analytique :
si on se limite à observer le déplacement des
molécules, il devient possible d’obtenir des informations
sur leur constante de sédimentation, leur forme et leur
masse ; on dit alors que l’on a réalisé une
ultracentrifugation analytique.
On peut déterminer :
A.1) Détermination d'une constante de sédimentation :

Les molécules comme les acides nucléiques (surtout

ARN) sont caractérisés par leur constante de sédimentation.
Dans l'étude théorique sur la vitesse de sédimentation sur
l'ultracentrifugation, on a vu :

S est la constante de sédimentation d'une substance ;

elle représente la vitesse de sédimentation de la particule par
unité de champ gravitationnel, tel que ω²x = 1,
 A.2) Détermination de la masse molaire ou
moléculaire :
Cela sert à la détermination de la masse molaire. En étudiant
l'évolution de la frontière en fonction du temps, on démontre
que :

R : Constante des gaz parfaits, constante de Boltzmann ;

T : Température en degré Calvin.
:représente l'augmentation de l'accroissement du volume de la
molécule quand on la met en solution.
: représente la densité du milieu
:vitesse angulaire du rotor S=
D : Coefficient de diffusion
B.L’ultracentrifugation préparative :

Qu’il y ait sédimentation ou flottation, on peut

exploiter le phénomène d’enrichissement des zones
inférieure ou supérieure du tube pour séparer
différents constituants ; on dit alors que l’on a
réalisé une ultracentrifugation préparative.
   B.1. L’ultracentrifugation en zones :
Cette technique permet la séparation des particules selon leurs coefficients
de sédimentation
 Dans ce type de centrifugation, la solution de macromolécules est déposée
sous forme de couche en haut d’un gradient de densité préparé auparavant.
 Ce type de gradient minimise l’agitation par échauffement de la solution, ce
qui peut nuire à la résolution ;On utilise le saccharose, qui est visqueux et
biochimiquement inerte pour former le gradient
 Puisque la vitesse de sédimentation est une fonction plus sensible à la forme
d’une macromolécule qu’a sa densité, l’ultracentrifugation en zones sépare
les macromolécules de forme similaire selon leur masse
 Pendant la centrifugation, chaque espèce se déplace à travers le gradient à
une vitesse largement déterminée par leur coefficient de sédimentation et
donc migre comme une zone
 À la fin de l’expérience, la récolte des fractions se fait par l’insertion d’une
aiguille au fond du tube de centrifugation et on collectionne le contenu du
tube par un collecteur de fraction
B. 2. L’ultracentrifugation par densité
d’équilibre.

Cette méthode de centrifugation, aussi connue sous le nom de

centrifugation isopycnique, sépare les macromolécules selon leur
densité.

L’échantillon est dissout dans une solution concentrée d’une

substance dense qui diffuse relativement vite.

la technique préférée pour séparer des macromolécules qui

possèdent une gamme de densités.
 5.Appareillage et mode opératoire:
A. Appareillage
1.L’ultracentrifugueuse :
Actuellement , sur le marché, on trouve des
ultracentrifugeuses soit préparatives, soit analytiques, enfin,
depuis quelques années, des ultracentrifugeuses pouvant être
utilisées comme préparatives et comme analytiques. D’une
façon générale, avec une ultracentrifugeuse, il est possible en
cours d’opération d’observer directement et au moyen de
différentes optiques, puis de visualiser sur des clichés
photographiques ou sur une table traçante (X,Y) le
déplacement sous l’effet d’un champ centrifuge des
constituants d’une solution macromoléculaire.
Svedberg, années 30 Années 80

Ultracentrifugeuse de paillasse,
2009
 2.Rotors :
Pour obtenir une force centrifuge
élevée, il est avantageux d’avoir
des centrifugeuses dont le rotor
puisse atteindre des vitesses de
rotation élevées jusqu’à 80 000
tr/min. Il existe différents systèmes Figure : Centrifugation dans un
rotor angulaire
d’entraînement du rotor :
entraînement par turbine à air ou
par turbine à huile, entraînement
par moteur électrique.
3.Les tubes : pour mètre les
échantillons dans le rotor
 b.Mode opératoire :
les ultracentrifugeuses crées un vacuum dans la chambre
du rotor pour permettre d’obtenir de très hautes vitesses de
centrifugation sans avoir la friction de l’air, ce qui peut
amener un échauffement des échantillons .
les vitesses obtenues sont très élevées (de l’ordre de 80 000
à 100 000 rpm) de plus, la chambre du rotor est réfrigérée
pour éviter le réchauffement des échantillons à ces vitesses, il
est essentiel de:
 bien balancer le rotor pour éviter tout débalancement
lors de la centrifugation .
 utilisez le bon rotor .
 6.resultats
Expérience :
1.on met le mélange dans les tubes et Figure 1 :le melange dans les tubes
puis les placer à l’emplacement avant le debut de l’experience
dans le rotors et après allumer
l’ultracentrifugeuse ,dans cette
expérience la force centrifuge
remplace la force de gravité Figure 2 :le début du séparation des
(figure1). constituants du melanges
2. le début du séparation des
constituants du mélanges au cour
de rotation(figure2) .
3. séparation complète des
constituants du mélange Figure 3 :séparation complète des
centrifuge(figure3) . constituants du mélange centrifuge
Une particule de masse m est
soumise à :
 la force centrifuge.
à des forces de friction
opposées qui retardent la
particule .

Observations : Dans chaque

tube, on observe au fond les
substances les plus denses
et au-dessus les moins
Figure :vue de l’échantillon soumis à
denses la force centrifuge .
 7.Exploitation :
L’ultracentrifugation est actuellement considérée comme la
méthode de choix pour déterminer les propriétés des
macromolécules biologiques et autres, en solutions
relativement diluées (concentration < 10 mg · mL –1), et pour
étudier les interactions en solutions concentrées voire en
solutions de concentrations très élevées, tels les gels en vue de
déterminer leurs propriétés thermodynamiques et élastiques.
Plusieurs revues récentes, monographies et ouvrages ont fait
état du large champ d’applications de cette méthode ; nous
nous citons QQ des applications de l’ultracentrifugation :
1.Mesure de la constante de sédimentation .
2 .Mesure des coefficients de diffusion de
translation .
3. Mesure des masses moléculaires .
4 .Étude des interactions
5 .Détermination de la forme et des dimensions
6 .Détermination de la densité des particules
7 .Étude des gels
 8.conclusion
Un tel exemple démontre le rôle important que
l’ultracentrifugation Analytique ou préparative est
appelée à jouer désormais dans la caractérisation des
gels dans les domaines suivants : caractérisation
simultanée structurale, thermodynamique et
élastique d’un grand nombre de gels, cette méthode
de caractérisation nous permet de séparation des
macromolécules et de mesure des masses molaires ou
moléculaires
 Références
Dr. Lucette BARDET. Ultracentrifugation ;
P1405;technique de l’ingénieur.
http://www.ims.dz/
http://www.lebs.cnrs-gif.fr/fr/plateau-
Technique/biophysique/122.html
https://www.thermo.com/eThermo/CMA/PDFs/Pr
oduct/productPDF_59611.PDF
http://bio-usto.oldiblog.com/?
page=lastarticle&id=1588860
Merci a votre
attenssion