Facteurs favorisant la

toxicité
• Pénétration cutanée
• Atmosphère chaude et humide
• Rôle de l’alcool ?
• Co-expositions ?
• Radiations ionisantes ?
• Impuretés 
 Études épidémiologiques dans les
populations exposées
L’exposition professionnelle aux pesticides, et en
particulier chez les agriculteurs, est souvent corrélée à
un risque accru de pathologies graves comme :
- certains cancers (hématopoïétique, cerveau, prostate)
- certaines maladies neuro-dégénératives comme la
maladie de Parkinson.
-certaines déficiences au niveau du développement
cérébral.
- Des troubles de l’immunité.
-Des troubles de la reproduction.
-Des perturbations endocriniennes.
Pesticides et maladie de Parkinson

Pour la première fois, en octobre 2006, un

tribunal a reconnu la maladie de Parkinson
comme maladie professionnelle des agriculteurs.

Selon une méta analyse sur 19 études et

l’enquête épidémiologique  sur risque = 1,9
chez les professionnels exposés.
Une autre étude faite sur 143 000 personnes 
sur risque = 1,6
 Effets du Roundup sur des
cellules embryonnaires humaines
Le Roundup est toxique sur ces cellules, même à
doses très faibles (produit vendu en magasin
dilué au 1/10 000).
Cela expliquerait les fausses couches, naissances
prématurées ou malformations sexuelles chez les
bébés de couples d’agriculteurs.
Archives of Environmental Contamination and
Toxicology, juillet 2007
 Pesticides et fonction
hormonale chez la femme

Perturbations du cycle
menstruel Fertilité réduite.
Reproductive Biology and
endocrinology, 2006
 Effet de l’ exposition professionnelle
des parents sur la santé des enfants

Exposition professionnelle des parents

seraient associées à diverses pathologies chez les enfants

• Les cancers hématopoïétiques sont avec les tumeurs du

cerveau, les cancers les plus fréquemment retrouvés chez les
enfants dans les populations exposées .

• La survenue d’autres types de cancers (tumeurs cérébrales,

tumeurs germinales) ou des troubles au niveau du système
nerveux central (développement cérébral, neuro-
comportement) ou de l’immunité ont été rapportés.
 Les jeunes enfants trop exposés
aux pesticides

Selon une étude récente,

Le crédit journalier (seuil maximal)
serait dépassé chez les jeunes enfants
pour 43 substances actives parmi 99
pesticides étudiés.
 Pesticides et fertilité masculine

De très nombreuses études récentes (études cas témoins)

- l’exposition aux pesticides affecte la spermatogenèse
- sperme de mauvaise qualité
- fertilité masculine réduite
 Pesticides et cancers
- Une récente revue de la littérature montre une association
positive entre exposition aux pesticides et l’apparition de
leucémies .
- De nombreuses publications relatent des associations avec la
survenue de tumeurs solides, surtout cerveau et prostate.
Ces observations étaient surtout vraies pour des expositions
importantes et prolongées.
Can Fam Physician 2007
- Une autre étude cas-témoins (1321 cas et 1057 témoins) s’est
intéressée à l’exposition aux insecticides à la maison ou dans le
jardin, entre 1970 et 2000.  Il existe un risque
significativement augmenté de lymphomes avec certains
pesticides.
Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2006
 Les pesticides : des facteurs de risques

Certains pesticides, sont capables d’induire in vitro dans des

cellules humaines des perturbations du fonctionnement cellulaire
 Cibles cellulaires des pesticides
Elimination du conjugué

Statut oxydo-réducteur Transduction du signal

la génotoxicité
les systèmes

xé
no
de détoxification

b
io
ti
qu
es
La régulation de la prolifération
de la survie
Mort cellulaire programmée
 Cibles cellulaires des pesticides
la génotoxicité Elimination du conjugué

• Dans les lymphocytes d’agriculteurs on observe une augmentation

des cassures simples et doubles brins de l’ADN (MN) (Tope A. et
al., 2006)
pesticides
• Augmentation des adduits à l’ADN dans le sang périphériques des
les systèmes
agriculteurs (J. Le Goff, 2005) de détoxification
Dommages à l’ADN
•Les différents
• Dans dommages à l’ADNfibroblastiques
les cellules sont: les bases oxydées (8oxodG),
de rat le mancozeb (fongicide,
• les coupures simples et doubles brins,
dithiocarbamate) induit des cassures simples brins après une heure
• les adduits à l’ADN
d’exposition à de faibles doses (Calviello G., et al., 2005).
REPARATION ADN
• Oxydation de la l’ADN dans le foie de rat (8 oxoDg) après traitement
Ralentissement du cycle cellulaire
des animaux avec un mélange de 15 pesticides (0.75 à 10 mg/kg)
(M. Lodovici
Système d’excision et al.,des
et réparation 1994)
dommages

Système enzymatique de réparations des 30 000 lésions spontanées / jour/ cellule

cassures
 Cibles cellulaires des pesticides
Ils peuvent affecter la structure du DNA et Elimination du conjugué
donc la transcription de gènes importants

ils peuvent conduire à des mutations qui RNA, Protéines

Réparation
affecteront de ou
la survie l ’ADN
la capacité de
prolifération des cellules.
xénobiotiques
les systèmes
de détoxification
mutation

Accumulation
d’anomalies génétiques
définitives dans des
gènes contrôlant la survie
et la prolifération Conséquence
Initiation de la génotoxicité des pesticides ?
Cellule transformée Stimulation de
la prolifération
de la cellule transformée
tumeur
Promotion
 Cibles cellulaires des pesticides
conséquence de la génotoxicité : apoptose

Elimination du conjugué
Réparation de l ’ADN Protéines
ARN

xénobiotiques
les systèmes
mutation de détoxification

initiation

Mort cellulaire programmée

Ex Mancozeb induit une génotoxicité Cellules transformées

dans les cellules fibroblastiques de rat
en culture qui conduit à l’induction de la mort
cellulaire programmée (Calviello et al., 2005) promotion

tumeur
 Cibles cellulaires des pesticides
conséquence de la génotoxicité : apoptose

mort cellulaire programmée apoptose

Processus physiologique de régulation du nombre de cellules

■ Au cours du développement embryonnaire,

■ Dans la défense immunitaire

■ Pour le renouvellement des cellules du tractus digestif

 Le phénomène d'apoptose
« mort cellulaire programmée » 
modifications structurales
• Plusieurs étapes en
cascade, dont les effets
sont visualisables dans les
cellules :
– flip-flop de la
phosphatidyl-sérine du
feuillet cytosolique au
feuillet extracellulaire
de la membrane
plasmique

– fragmentation de l'ADN
nucléaire

– fragmentation du
cytoplasme , formation
des corps apoptotiques
 Cibles cellulaires des pesticides

la génotoxicité d’un xénobiotique

peut être due à son pouvoir pro-
oxydant qui conduit à une variation
du statut oxydo-réducteur de la
cellule
 Cibles cellulaires des pesticides
Exemple d’effet pro-oxydant des pesticides

• La vinclozoline ou l’iprodione (fongicide) diminue le taux de

glutathion intracellulaire, et augmente le taux de radicaux libres
dans les cellules après une heure de traitement à 25 ou
100µg/ml. Radice S et al, 1998.

• Dans les follicules ovariens isolés, le methoxychlore entraine une

diminution des activités enzymatiques régulant le statut oxydo-
réducteur (SOD, catalase, super-oxyde dismutase) et modifie
l’activité respiratoire des mitochondries. Gupta et al., 2006

• Le malathion (OP) inhibe l’activité des enzymes de régulation du

stress oxydant , diminue la production d’ATP et altère la matrice
mitochondriale. Delgado et al., 2006.
• Le traitement des rats avec du chlorpyrifos (insecticide, OP)
conduit à une diminution des activité des enzymes du type SOD,
catalase, à une déplétion en glutathion intracellulaire dans le
foie , le rein et le cerveau des animaux traités avec 100mg/kg;
(forte dose). Verma et al., 2007.

• L’alachlore et le chlorpyrifos (insecticides), induisent in vitro

(cellules neuronales) un stress oxydant conduisant à une
peroxydation lipidique, des cassures simples et double brins de
l’ADN, ainsi qu’à une induction de protéine heat shock. Bagchi D.,
et al., 1996.

• Le traitement des rats avec du chlorpyrifos (insecticide, OP)

conduit à une peroxydation lipidique, une diminution des activité
enzymatique du SOD, à une déplétion en glutathion
intracellulaire dans le foie , le rein et le cerveau des animaux
traités avec 20mg/kg. ZAMA et al., 2007
 Cibles cellulaires des pesticides
Elimination du conjugué

Statut oxydo-réducteur Transduction du signal

la génotoxicité
les systèmes

xé
no
de détoxification

b
io
ti
qu
es
La régulation de la survie
de la prolifération
Mort cellulaire programmée

La transduction du signal
 Cibles cellulaires des pesticides
La transduction du signal
Tout processus qui convertit un type de signal ou un stimulus vers une réponse cellulaire
via une succession d’évènements biochimiques (de phosphorylation et
de déphosphorylation) dans lesquels interviennent de nombreuses enzymes
(kinase/phosphatase)
La transduction du signal peut se faire soit via
- La liaison de molécules sur des récepteurs
membranaires ou intracellulaires
-Un stimulus « physique » (lumière/cellules de
la rétine)
- L ’interaction directe d’une molécule
(xénobiotiques) avec les intermédiaires de la
Cascade de phosphorylation signalisation
déphosphorylation
La phosphorylation et la déphosphorylation
modulent l'activité de certains facteurs
de transcription :en les activant directement
(exemple : facteur AP-1)
en modifiant leur localisation cellulaire
(exemple : facteurs NFkB et NFAT)

Réponse cellulaire,
survie, prolifération,
mort cellulaire,
différenciation
 Cibles cellulaires des pesticides

Ex : Le glyphosate, un herbicide,
retarde l’activation du complexe CDK1/cycline B (Marc J, et val, 2001)
Ex : L’endosulfan, la dieldrine active la voie des MAP kinases (ERK1 et 2). Bulayeva NN et al,
EX les pesticides organochlorés (endosulfan, lindane) active la voie des MAP kinases
(raf MEK et ERK) ainsi que la transcription de c-Jun. Ledirac N et al, 2005.

Les intermédiaires
Approches en toxicologie cellulaire
et moléculaire
Elimination du conjugué

Statut oxydo-réducteur Transduction du signal

la génotoxicité
les systèmes

xé
no
de détoxification

b
io
ti
qu
es
La régulation de la prolifération
de la survie
Mort cellulaire programmée

Toxicologie cellulaire et moléculaire

Les approches
 Approches en toxicologie cellulaire
et moléculaire
Estimation de la viabilité
• MTT sels de tetrazolium converti par les deshydrogenases
mitochondriales actives en formazan (absorbance 570nm)

• Comptage cellulaire comptage des cellules flottant dans le

milieu de culture et comptage des cellules adhérentes
 Approches en toxicologie cellulaire et
moléculaire
Génotoxicité

I Comet assay

mesure des cassures induites

-directement par un agent génotoxique,
- indirectement lors des processus enzymatiques de
réparation des dommages
- lors de processus secondaires de fragmentation de
l’ADN tel que l’apoptose.

- Principe
: électrophorèse en gel d’agarose de noyaux
marqués avec un agent fluorescent.
Génotoxicité

les noyaux dont l’ADN a subi des cassures prennent une forme de comète et
les noyaux dont l’ADN n’est pas endommagé restent ronds
 Génotoxicité

Taux de mutation du gène HPRT (hypoxanthine

phosphoribosyltransferase)

Voie de recyclage des nucléotides puriques à partir

d’hypoxanthine et guanine (ou de ses analogues)
La perte de ces fonctions (mutation inactivante du gène)
permet aux cellules de proliférer en présence de 6-
Thioguanine

HPRT normal + 6-thioguanine → cytotoxicité

HPRT muté + 6-thioguanine → croissance normale
Génotoxicité
 Approches en toxicologie cellulaire et
moléculaire
Stress oxydant
• Taux de ROS nombreuses sondes fluorescentes réactives
avec les radicaux libres
• Mesure de l’activité des enzymes régulant le stress oxydant
- SuperOxyde Dismutase (SOD): 2 O2° + 2 H→2 H2O2 + O2
- Catalase: 2H2O2→ 2 H2O + O2
- Glutathion peroxydase: H2O2 + 2 GSH→ 2 H2O + GS-SG

• Dosage des taux de glutathion

• Dosage des marqueurs périphérique d’oxydation (8oxodg
dans le plasma; détection des bases ou nucléotides modifiés
par chromatographie liquide haute perf. (HPLC) +
Spectrométrie de masse (MS)
• marqueurs cellulaires de peroxidation lipidique (HNE (4-
hydroxy -2-nonenal; MDA malonyldialdehyde) utilisation
d’anticorps
 Approches en toxicologie cellulaire et
moléculaire
Signalisation cellulaire

• Western blot :
• migration de protéines dans un gel
dénaturant en fonction de leur poids
moléculaires :
• identifier une protéine spécifique dans
un extrait cellulaire
Approches en toxicologie cellulaire et
moléculaire : signalisation cellulaire

• Arrays
• (Protein) antibody-array : visualiser
et quantifier l’expression de
plusieurs protéines d’un même
extrait cellulaire
 Approches en toxicologie cellulaire et
moléculaire : apoptose
Cytométrie en flux
Incorporation de iodure de propidium dans les noyaux et analyse de
la quantité de fluorescence qui est le reflet de la quantité d’ADN

Sub G0/G1Cellules apoptotiques

G1

G2/M
Double marquage iodure de propidium/ l’anexine-fluorescéine
Dans les cellules apoptotiques les phosphatidyl serine membranaires sont à
l’extérieur et peuvent fixer l’anexine. Les membranes ne sont pas perforées et
l’iodure de propidium ne pénètre pas .
 Approches en toxicologie cellulaire et
moléculaire : apoptose
TUNEL
Terminal deoxynucleotidyl
transferase
dUTP nick end labeling
Détection des fragments
d’ADN en marquant l’extrémité
terminal des acides
nucléiques avec un
dUTP qui sera ensuite
identifié par un marquage
fluorescent

Cells containing DNA strand nicks characteristic of apoptosis are

detected by TUNEL and fluoresce green,
while necrotic cells are stained with red-fluorescent propidium iodide
• DNA Ladder
• migration de l’ADN
sur gel d’agarose.
• Il apparaitra sous
forme de petit
fragments (échelle)
le long du gel dans
le cas de cellules
apoptotiques sinon
on ne voit qu’une
seule bande.
Approches en toxicologie cellulaire et
moléculaire : apoptose

Mesure de l’activité des

caspases effectrices (3)
 Génotoxicité
• Test des micronoyaux
cytokinesis-block micronucleus(CBMN ) dans les
lymphocytes humains
Examens les noyaux interphasiques de lymphocytes
exposés à des substances génotoxiques, après une
culture cellulaire et l'obtention de lymphocytes
binucléés
- estimation des cassures
- perte de chromosomes

• FISH : fluorescent in situ hybridization:

réarrangements chromosomiques