Récepteurs et signalisation cellulaire

Exercice 1

1-Interpréter les résultats obtenus et conclure (fig1)

Le BHBA inhibe la sécrétion de GH et PRL, cette inhibition est temps et dose dépendante
Le temps optimal d’inhibition : 12h (GH) 24h (PRL), la concentration optimale : 1mM

Les DCAPC sont par la suite traités avec 1mM de BHBA pendant 24 h en absence ou en
présence de 100 ng/L de PTX (fig. 2).

2-Définir la PTX et donner son mode d’action

Toxine pertussique (pertussis),
En la bloquant sous forme Gαi -GDP-ADP - ribose, le PTX maintient la Gαi inactive

3-Interpréter les résultats obtenus et conclure

Le BHBA inhibe la sécrétion de GH et de PRL de 50 à 60% respectivement, Le traitement par
la PTX restaure la sécrétion de GH et PRL.
Le BHBA stimule donc une Gαi pour exercer son effet inhibiteur sur la sécrétion de GH et
PRL

4-Quelle est l’enzyme responsable de la production d’AMPc ?

Adénylate cyclase
5-Quelle est la cible moléculaire de l’AMPc ?
PKA
6-Interpréter l’effet du BHBA observé sur la concentration d’AMPc et conclure
Le BHBA inhibe la production d’AMPc en fonction du temps, cet effet est levé par la PTX
Le BHBA stimule donc une Gαi qui inhibe l’adénylate cyclase ce qui aboutit à la baisse de
production d’AMPc observée

7-Quelle est la structure de la PKA et comment se fait son activation ?

2 SU régulatrices+2 SU catalytiques, après fixation de 2 AMPc sur chaque SU régulatrice il y
a libération des SU catalytiques qui deviennent ainsi activées

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8-Interpréter l’effet du BHBA observé sur l’activité de la PKA et conclure
Le BHBA inhibe l’activité de la PKA de plus 60%, cet effet est levé par la PTX
Le BHBA en inhibant la production d’AMPc, inhibe l’activation de la PKA

9-A quoi correspond l’élément CREB ?

CREB : cAMP response element binding protein (élément de réponse à l’AMPc) est un
facteur de transcription

10-Interpréter les résultats obtenus et conclure

Le taux de p-CREB diminue en présence de BHBA qui inhibe son activation plus 80%, cet
effet est levé par la PTX
Le BHBA en inhibant l’activation de la PKA inhibe l’activation du CREB

11-Sur la base de ses résultats et de vos connaissances, établir la voie de signalisation à

l’origine des effets du BHBA sur la sécrétion de GH et PRL par les cellules DCAPC

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Exercice 4

1/-A quelle famille appartient les protéines ERK1/2 ? Citez les autres membres de cette
famille ?
MAPK, p38, JNK et ERK5

2/-Est-ce que la forme recherchée dans cette expérience représente l’état actif ou inactif de ces
protéines ?
Forme phosphorylée, état actif

3/-Analysez la figure 1.

+Glc : induit une augmentation de la phosphorylation de ERK1/2 à 5min puis une baisse
(état basal)
+glucagon : induit une augmentation de la phosphorylation de ERK1/2 à 5min puis une
baisse (état basal)
+Glc+glucagon : augmentation très importante et prolongée (jusqu’à 20min) de la
phosphorylation de ERK1/2

4/-Les conditions de la figure 1B sont-elles physiologiques ou pas ?

Expérience 2 :

5/-Analyser la figure 2 et préciser les molécules impliquées dans la phosphorylation des

ERK1/2 par le glucagon.

+Nifedipine : le blocage des canaux calciques n’affecte pas la phosphorylation de

ERK1/2 induite par le glucagon, donc cette phosphorylation n’implique pas une kinase
calcium dépendante

+H89 : l’inhibition de la PKA bloque complètement la phosphorylation de ERK1/2

induite par le glucagon  PKA est impliquée dans la phosphorylation de ERK1/2
induite par le glucagon

+PD : l’inhibition de MEK bloque complètement la phosphorylation de ERK1/2 induite

par le glucagon  MEK (MAPKK) phosphoryle ERK1/2 (MAPK)

L’inhibition de la PKA ou de MEK bloque complètement la phosphorylation de

ERK1/2 induite par le glucagon  elles sont probablement impliquées dans la même
voie.

6/-Quel est le type de récepteur au glucagon et citer ses caractéristiques ?

RCPG récepteur couplé aux Prot G trimériques, une protéine transmembranaire qui
traverse la bicouche 7fois (7TMS ou serpentins)
Nt extracellulaire-Ct cytosolique, Les boucles extracellulaires (site de fixation du ligand)
Présence de sites de phosphorylation pour la désensibilisation par GRK/PKA/PKC au
niveau de la boucle 3 cytosolique et l’extrémité Ct
La boucle 3 cytosolique site d’Interaction avec la protéine G

3
Expérience 3 :
Des cellules sont prétraitées ou pas avec la toxine Cholérique (CTX) ou la toxine pertusique
(PTX) selon indication pendant une nuit (Fig.3) puis stimulées avec du glucagon.

Figure 3

7/-Quel est l’effet de la CTX et de la PTX sur la phosphorylation des ERK1/2 par le
glucagon et conclure ?
La CTX maintient la Gαs activée, et le taux de phosphorylation d’ERK1/2 induit par le
glucagon augmente comparé au glucagon seul (CTX seul n’a aucun effet, histogramme
2).
PTX : l’inhibition de la Gαi n’affecte pas la phosphorylation de ERK1/2 induite par le
glucagon,
Donc  le glucagon induit la phosphorylation de ERK1/2 via un récepteur couplé à la
protéine Gαs et non à la Gαi

Expérience 4 :
8/-Que représente le CREB et pourquoi nous sommes nous intéressés à lui ?
- CREB : cAMP response element binding protein est un facteur de transcription,
- Car c’est l’élément de réponse de l’AMPc qui active PKA, et la PKA est impliquée
dans la phosphorylation de ERK1/2 induite par le glucagon (expérience 2)

9/-Expliquez l’effet de la PD sur le CREB (Fig.4A) ? Conclure

L’inhibition de MEK (MAPKK) bloque complètement la phosphorylation de CREB
induite par le glucagon, et d’après l’expérience 2 MEX active ERK1/2 Donc 
ERK1/2p phosphoryle CREB.

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10/- Analysez la figure 4B ?
La somatostatine bloque la synthèse de l’insuline induite par le glucagon, en inhibant la
phosphorylation de ERK 1/2.

11/- Qu’elle est la réponse cellulaire induite par le glucagon

Stimule la glycogénolyse hépatique (cours) et la sécrétion d’insuline (exercice)

12/- A partir de l’ensemble des résultats, schématisez le mécanisme d’action du glucagon en

précisant toutes les données et les modulateurs utilisés ?