Spectroscopie et spectromtrie

D
L
es mthodes spectromtriques se
dcomposent globalement en deux
grandes catgories, la spectromtrie des
rayonnements qui elle-mme regroupe
la spectromtrie d'absorption, la spectro-
mtrie d'mission, la spectromtrie de
diffusion Raman et la spectromtrie de
rsonance magntique nuclaire et la
spectromtrie de masse.
La spectroscopie et la spectromtrie
(1)
des rayonnements regroupent un ensem-
ble de mthodes d'analyse permettant d'ac-
cder la composition et la structure de
la matire fondes sur l'tude des spec-
tres fournis par l'interaction des atomes
et des molcules avec divers rayonne-
ments lectromagntiques qu'ils met-
tent, absorbent ou diffusent.
Selon leur nergie, les photons inter-
agissent slectivement avec les diffrents
niveaux lectroniques qui composent la
structure lectronique atomique ou mol-
culaire. Ce sont les lectrons de cur
(proches du noyau atomique) pour les
rayons X
(2)
, les lectrons priphriques
(loigns des noyaux et impliqus dans les
liaisons chimiques) pour la lumire absor-
be ou mise dans le proche ultraviolet
et dans le visible. Dans le domaine des
rayonnements infrarouge, c'est le saut
entre niveaux de vibration molculaire qui
intervient, le saut entre niveau de rotation
des molcules pour les micro-ondes et le
spin du noyau atomique pour la RMN.
Spectromtrie dabsorption
Celles des mthodes de spectroscopie qui
sont fondes sur labsorptionutilisent la loi
de Beer-Lambert, indiquant la proportion-
nalit entre lintensit lumineuse absorbe
et la quantit de matire absorbante :
A = log (I
0
/ I) = l C
o A est l'absorbance du milieu travers
par le rayonnement, I
0
l'intensit lumineuse
incidente, I l'intensit lumineuse transmise,
le coefficient d'extinction molairecarac-
tristique de la substance tudie une
longueur d'onde donne en L mol
-1
cm
-1
,
l l'paisseur traverse en cm et C la concen-
tration en mole par litre.
En mesurant labsorbance du milieu une
longueur donde donne, il est donc pos-
sible de dterminer la concentration dune
substance dans un chantillon.
Dans un spectre dabsorption enregistr
au moyen dun spectromtre, les pics
d'absorptioncorrespondent aux longueurs
donde que le milieu peut absorber. De
mme que le spectre de la lumire solaire
est obtenu en la faisant passer par un
prisme qui la dcompose, les spectro-
mtres analysent la rpartition spectrale
de l'ensemble des rayonnements lectro-
magntiques en les sparant par longueur
d'onde au moyen d'un rseau de diffrac-
tion par rflexion. Les spectres font appa-
ratre des pics correspondant chacun une
longueur d'onde particulire.
Selon le type dchantillon analyser et
le niveau de performances recherch, on
utilise en laboratoire la spectromtrie
dabsorption soit sur molcules en phase
liquide ou gazeuse, soit sur vapeur atomique
obtenue en dcomposant thermiquement
les chantillons liquides ou solides.
La spectroscopie dabsorption molculaire
dans le domaine UV-visible est simple
demploi mais ne sapplique qu des
chantillons peu complexes car, du fait de
la largeur des bandes dabsorption mol-
culaires, les spectres dabsorption ne per-
mettent gnralement pas de distinguer
spcifiquement tous les composants dun
mlange complexe.
En spectromtrie infrarouge(IR), l'absorp-
tion rsulte des phnomnes de vibration
et rotation des molcules. Les spectres
dabsorption infrarouge permettent donc
de dterminer la nature des liaisons chi-
miques composant une molcule en
accdant la constante de rappel
(comme un ressort remonte un poids) de
la liaison et donc de confirmer des hypo-
thses structurales.
Lorsque le nombre d'atomes crot, le spec-
tre devient rapidement complexe et l'inter-
prtation devient trs dlicate, en particu-
lier, pour les composs organiques.
La spectromtrie dabsorption atomique
est de ce point de vue plus performante
car les atomes absorbent avec des raies
dabsorptiontrs fines. Des mesures pr-
cises sont donc ralisables mme lorsque
lchantillon est constitu dun assem-
blage complexe dlments chimiques.
Labsorption atomique est une technique de
rfrence pour lanalyse des lments
ltat de traces dans une trs grande varit
dchantillons, notamment biologiques.
Spectromtrie dmission
Les atomes ou molcules ports dans un
tat excit peuvent se dsexciter en met-
tant un rayonnement appel rayonnement
dmission. Lorsque lexcitation rsulte de
labsorption slective, par les atomes ou
les molcules analyser, dun rayonne-
ment lectromagntique, il s'agit dmis-
sion de fluorescence (ou de phosphores-
cence selon ltat dexcitation lectronique
mis en jeu).
Comme pour labsorption, la fluorescence
peut tre applique dans le domaine des
rayonnements UV-visible aux molcules
ou aux atomes. La spectromtrie de fluo-
rescence X dsigne quant elle le rayon-
nement Xmis par les atomes, excits par
absorption dun rayonnement X. Les tech-
niques de fluorescence sont plus complexes
mettre en uvre que les techniques
dabsorption car elles ncessitent que la
particule analyser soit excite slective-
ment par un rayonnement monochroma-
tique. En revanche, comme le rayonnement
mis est galement spcifique de la par-
ticule, la spectromtrie de fluorescence
prsente une double slectivit qui lui
confre un trs faible bruit de fond et la rend
ainsi particulirement bien adapte la
mesure des trs faibles concentrations.
Lmission de rayonnement peut gale-
ment apparatre lorsque des atomes sont
excits thermiquement dans un milieu
port haute temprature. La spectro-
scopie dmission est fonde sur le fait
que les atomes ou les molcules excits
de hauts niveaux dnergie se dsexcitent
vers des niveaux plus bas en mettant des
radiations (mission ou luminescence). Elle
se distingue de la spectromtrie de fluo-
rescence par le fait que lexcitation nest
pas apporte de manire slective, mais
au contraire concerne indistinctement tou-
tes les particules qui composent le milieu.
Les raies d'mission correspondent donc
des rayonnements mis directement par
un corps port haute temprature et le
spectre d'mission permet de dceler et
de quantifier tous les atomes ou les mol-
cules prsents dans la source dmission.
Spectromtrie de diffusion Raman
Les interactions entre la matire et les
radiations lectromagntiques conduisent
galement des phnomnes de diffusion
comme la diffusion lastique et la diffu-
sion inlastique. La diffusion peut avoir
lieu la rencontre d'une interface entre
deux milieux ou la traverse d'un milieu.
(1) Le terme de spectromtrie, initialement
rserv l'enregistrement et la mesure,
tend devenir synonyme de spectroscopie,
l'il tant remplac dans l'observation
par d'autres rcepteurs et instruments,
et le domaine visible ne constituant qu'un
domaine particulier d'analyse.
(2) noter par ailleurs que la cristallographie
rayons X n'est pas considre comme une
mthode spectroscopique proprement parler.
(suite)
D
Ce processus est le plus souvent lastique,
c'est--dire qu'il a lieu sans changement
de frquence des rayonnements composant
le faisceau. La diffusion lastique du rayon-
nement solaire par latmosphre est, par
exemple, responsable de la couleur bleue
du ciel qui apparat lorsque le regard nest
pas dirig vers le soleil (effet Tyndall).
Lintensit diffuse est, en effet, dautant
plus forte que la longueur donde du rayon-
nement est courte ce qui, dans le spectre
solaire, correspond au bleu.
En spectromtrie, la principale utilisation
de la diffusion concerne la spectromtrie
Raman. Il sagit de la diffusion inlastique
dun rayonnement incident par les molcu-
les qui composent lchantillon. Lcart entre
la frquence du rayonnement diffus et la
frquence du rayonnement incident permet
didentifier les liaisons chimiques mises en
jeu. La spectromtrie Raman est une tech-
nique trs utilise pour lanalyse structurale
en complment de la spectromtrie infra-
rouge et de la spectromtrie de masse.
Spectromtrie de rsonance
magntique nuclaire
Le principe de la rsonance magntique
nuclaire (RMN) est bas sur le fait quun
atome possde un moment magntique,
comme une charge qui tourne et agit comme
un petit aimant, gouvern par la mcanique
quantique, qui s'aligne dans un champ
magntique comme une boussole dans le
champ terrestre. Le principe de la RMN
consiste induire et dtecter la transition
entre le moment magntique nuclaire du
niveau de plus basse nergie celui de plus
grande nergie par absorption d'un rayon-
nement lectromagntique dont la longueur
donde se situe dans le domaine des radio-
frquences : lorsque l'nergie du photon
correspond exactement la diffrence
dnergie entre les deux niveaux, il y a
absorption. Les noyaux dont le nombre de
neutrons et de protons sont tous les deux
pairs possdent un spin nul. Les atomes de
carbone 12 et d'oxygne 16 qui sont trs
rpandus dans la nature ont ainsi un spin
nuclaire nul. Par contre, l'hydrogne ne
possde quun seul proton et son moment
magntique nuclaire est gal 1/2 : il a
donc deux tats nergtiques possibles cor-
respondant aux deux orientations possibles
du spin par rapport au champ magntique.
La mesure de la frquence de rsonance du
champ lectromagntique qui permet le pas-
sage de lun l'autre des tats dnergie
permet de faire l'analyse des molcules.
Cette frquence est fixe mais les diffrents
noyaux dune molcule ne rsonnent pas
tous la mme frquence car leur envi-
ronnement magntique est modifi par leur
environnement chimique (lectronique).
De nombreux spectres contiennent plus
de pics que la molcule ne contient de
protons en raison des interactions de ceux-
ci avec leurs voisins. Deux noyaux peuvent
interagir au travers de la molcule, loi-
gns de plusieurs liaisons chimiques, cest
ce quon appelle le couplage entre atomes.
Cette interaction donne une structure fine
au spectre RMN.
Spectromtrie de masse
La spectromtrie de masse est une tech-
nique de dtection et d'identification extr-
mement sensible qui permet de dterminer
les structures molculaires et donc la com-
position de lchantillon. Il ne sagit pas dune
spectroscopie stricto sensu, car elle ne fait
pas appel des niveaux d'nergie discrets.
Son principe ? Un compos introduit dans
l'appareil est vaporis puis ionis par
une source de bombardement lectronique
( 70 eV). L'ion ainsi obtenu, appel ion
molculaire, permet la dtermination de la
masse molaire du compos. Des ruptures
des liaisons chimiques peuvent y former
des ions fragments caractristiques. Ceux-
ci sont ensuite tris en fonction de leur rap-
port masse/charge dans un analyseur par
l'application d'un champ magntique et/ou
lectrique, puis collects par un dtecteur
qui amplifie le signal associ aux ions qui
arrivent en des temps diffrents. Un sys-
tme de traitement des donnes transforme
les informations du dtecteur en un spec-
trede massedont la lecture, par comparai-
son avec des spectres rfrences, permet
dtablir la carte didentit de la molcule.
En utilisant un spectromtre de masse haute
rsolution, il est possible de dterminer la
masse exacte du compos et les pourcen-
tages isotopiques de chaque atome.
Le choix de la mthode dionisation est
directement li la nature de lchantillon
et au type danalyse. Si la spectromtrie de
masse s'est progressivement adapte aux
exigences croissantes des chimistes et des
biologistes (sparation de mlanges de plus
en plus complexes et de forte polarit et
dtermination de masses molculaires de
plus en plus leves sur des chantillons de
plus en plus limits), c'est essentiellement
grce aux progrs des techniques d'ionisa-
tion dont l'mission ionique secondaire sur
surface (SIMS), l'ionisation chimique, le
thermospray et la source bombardement
d'atomes rapides (FAB), jusqu', dans les
annes 80, la dsorption laser assiste par
matrice (MALDI, pour Matrix Assisted Laser
Desorption Ionisation) et l'lectrospray (ESI,
pour ElectroSpray Ionisation), ainsi qu' ceux
des techniques de dtection, de la mesure du
temps de vol (TOF) la trappe ionique (IT)
en passant par les quadruples (MS ou Q).
En protomique, par exemple, seules la
MALDI, lESI et la SELDI (Surface Enhanced
Laser Desorption/Ionisation) sont utilises.
La spectromtrie de mobilit ionique IMS
(ion mobility spectrometry) est une technique
d'analyse chimique en phase gazeuse qui
consiste soumettre un gaz un champ
lectrique. Les molcules ionises acqui-
rent une vitesse caractristique de l'ion car
dpendant de la masse et de la charge.
L'arrive des ions sur une des plaques pro-
duisant le champ provoque un courant qui
est enregistr. Il est possible de relier le
temps au bout duquel un pic se produit avec
la nature de l'ion layant provoqu.
Les scientifiques font souvent appel au cou-
plage d'appareils appartenant aux deux
grandes familles de techniques d'analyse
(encadr E, Qu'est-ce que la chromatogra-
phie ?), par exemple, dun chromatographe
et dun spectromtre de masse (ou dun
dtecteur capture d'lectrons ECD), notam-
ment pour tudier des mlanges complexes
l'tat de traces.
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o
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C
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Spectromtre de masse d'ions secondaires
utilis au CEA pour raliser des mesures
isotopiques rapides sur un chantillon
par exemple prlev sur une installation
aux activits nuclaires suspectes.