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Nanotechnologie PDF
Nanotechnologie PDF
Les nanomatriaux
valuation des risques lis aux nanomatriaux
pour la population gnrale et pour lenvironnement
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G Avis de lAfsset
G Rapport dexpertise collective
Le Directeur gnral
Maisons-Alfort, le 17 mars 2010
AVIS
de lAgence franaise de scurit sanitaire de
lenvironnement et du travail
Relatif valuation des risques lis aux nanomatriaux pour la population
gnrale et dans l'environnement
LAfsset a pour mission de contribuer assurer la scurit sanitaire dans les domaines de
lenvironnement et du travail et dvaluer les risques sanitaires quils peuvent comporter.
Elle fournit aux autorits comptentes toutes les informations sur ces risques ainsi que
lexpertise et lappui technique ncessaires llaboration des dispositions lgislatives et
rglementaires et la mise en uvre des mesures de gestion du risque (article L.1336-1 du
Code de la sant publique).
Contexte
Les nanomatriaux sont constitus de structures lmentaires dont au moins une des
dimensions est comprise typiquement, mais non exclusivement, entre 1 et 100 nanomtres
(nm). Cette caractristique dimensionnelle confre ces matriaux des proprits ou des
comportements particuliers, utiliss notamment pour de nouvelles applications technologiques.
Les proprits des nanomatriaux varient notamment selon leur composition chimique, leur
taille, leur surface spcifique, ltat de surface, ou encore la forme du nano-objet considr. De
plus, chaque nanomatriau peut tre dot dune ractivit ou dun comportement diffrent selon
la formulation et la matrice du produit fini qui le contient.
En raison des nombreuses applications innovantes que laissent entrevoir ces proprits
physiques, chimiques ou biologiques, les nanomatriaux reprsentent un domaine de la
recherche scientifique et technique en pleine expansion.
Agence franaise de scurit sanitaire de lenvironnement et du travail
253 av. du Gnral Leclerc 94701 Maisons-Alfort Cedex
Tl. 01.56.29.19.30 Fax 01.43.96.37.67 Ml afsset@afsset.fr
www.afsset.fr
Les nanomatriaux ne sont plus seulement confins dans les laboratoires de recherche, mais
sont dsormais intgrs dans de nombreux procds industriels et participent la composition
dune grande varit de produits ou systmes utiliss dans la vie courante (crmes solaires,
textiles, aliments, domaine des transports, etc.). Ces nanomatriaux sont prsents dans des
secteurs aussi varis que le btiment, lautomobile, lemballage, la chimie, lenvironnement,
lnergie ou la sant.
Ces nanomatriaux sont dits manufacturs, car ils sont produits intentionnellement, et sont
introduits dans lenvironnement par lhomme. Ils doivent tre distingus de lensemble des
particules dchelle nanomtrique prsentes par exemple dans le milieu ambiant naturel ou
issues involontairement de divers processus industriels ou domestiques. Les particules
ultrafines issues de combustion font par exemple quant elles lobjet dtudes relatives leurs
dangers spcifiques. Ltude des dangers et lvaluation des risques associs aux
nanomatriaux manufacturs savrent ncessaires dans la mesure o ces objets sont produits
en raison de leurs proprits nouvelles et spcifiques.
Plusieurs publications rcentes - dont la validit des modles animaux ou in vitro utiliss, et leur
extrapolation ventuelle lhomme doit encore tre analyse - ont ainsi mis en vidence la
dangerosit potentielle de certains nanomatriaux, notamment les nanotubes de carbone ou
encore les nanoparticules de chrome-cobalt.
Leur essor rapide entrane une augmentation de lexposition de la population aux nanomatriaux
manufacturs, concernant en premier lieu les employs de lindustrie et des laboratoires ou les
populations riveraines des installations industrielles, pour lesquels la possibilit de contact
chronique avec les nanomatriaux est leve. Cet aspect de lexposition professionnelle a fait lobjet
dun rapport publi par lAFSSET en 20081.
Comme toute substance chimique, le devenir des nanoparticules dans lorganisme humain et la
toxicit potentielle associe dpendent notamment de leurs proprits physico-chimiques (taille,
forme, caractre soluble, etc.). Les phnomnes dabsorption, de distribution, de mtabolisation
et dexcrtion semblent tre diffrents pour les nanomatriaux, par rapport une entit
chimique classique, en raison notamment de leurs caractristiques spcifiques. La prise en
compte de lensemble de ces caractristiques est indispensable pour interprter leurs effets
potentiels. De faon gnrale, les connaissances scientifiques sur les substances classiques ne
sont pas directement transposables aux nanomatriaux.
Aujourdhui, la large diffusion des nanomatriaux manufacturs travers une multitude de
produits de consommation courante conduit sinterroger sur lexposition des consommateurs
et de la population gnrale ces nanomatriaux.
En labsence doutils dvaluation disponibles et spcifiques aux nanomatriaux manufacturs,
lAfsset a propos dutiliser une approche qualitative simplifie dvaluation des risques pour la
sant et pour lenvironnement.
Organisation de lexpertise
Lexpertise a t ralise dans le respect de la norme NF X 50-110 Qualit en expertise
Prescriptions gnrales de comptence pour une expertise (Mai 2003) avec pour objectif de
respecter les points suivants : comptence, indpendance, transparence, traabilit.
LAfsset a, dans un premier temps, confi lexpertise quatre experts rapporteurs rattachs au
comit dexperts spcialises (CES) valuation des risques lis aux agents physiques, aux
nouvelles technologies et aux grands amnagements . Dans un second temps, au vu de la
complexit et de la sensibilit de la thmatique traite, lAfsset a dcid, sur proposition du CES
en sance du 9 mars 2009, de constituer un groupe de travail formel nanomatriaux et
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Avis et recommandations
Recensement des produits de consommation courante contenant des nanomatriaux
manufacturs
Le recensement effectu a permis de mettre en vidence 246 produits contenant des
nanomatriaux manufacturs distribus sur le march franais. Ces produits (nano-produits)
sont rpartis dans 10 catgories. Parmi celles-ci, on peut citer par exemple : le domaine de la
cosmtique et de lhygine, le textile ou encore le btiment.
Ce recensement na pas eu pour rsultat de produire un liste exhaustive de produits contenant
des nanomatriaux : la consultation et le recoupement dune grande varit de sources de
donnes a t privilgie par rapport la quantit de produits recenss ; sites internet, bases
de donnes, inventaires, organismes, associations, rapports franais et internationaux ont t
consults. Une attention particulire a t porte la nature de la revendication produit
contenant des nanomatriaux du fabricant, et sa vrification, pour chacun des produits
rpertoris. Les difficults de recensement rencontres sexpliquent notamment par labsence
frquente de dclaration de la part des industriels de lincorporation de nanomatriaux dans les
procds de fabrication de leurs produits.
Evaluation des risques pour la population et lenvironnement lis la prsence de
nanomatriaux dans des produits de consommation
Slection des produits tudis
Le groupe de travail a tudi quelques produits finis contenant des nanomatriaux
manufacturs afin dlaborer des scnarios dexposition, en considrant les dangers nanospcifiques associs ces nanomatriaux, et daboutir une valuation qualitative des risques.
Les proprits des nanomatriaux varient notamment selon leur composition chimique, leur
taille, leur surface spcifique, ltat de surface ou encore la forme de la nanoparticule
considre. De plus, chaque nanomatriau peut tre dot dune ractivit ou dun
comportement diffrent selon la formulation et la matrice du produit fini considr qui le
contient. Ainsi, il est apparu peu raliste de travailler sur une famille de produits (i.e. : les
crmes solaires). Une slection de rfrences commerciales (produits) a donc t ralise,
chacune ayant une formulation ou une matrice diffrente et unique.
Lensemble des choix effectus sest aussi bas sur la disponibilit des donnes et donc la
possibilit de construire un scnario dexposition pertinent.
Quatre produits finis ont donc t slectionns sur la base des critres suivants :
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les produits slectionns ont permis au groupe de travail de considrer les diffrentes
voies dexposition (ingestion, inhalation et cutane, avec seule considration de
lexposition directe et non accidentelle) ;
les produits considrs ont fait intervenir des matrices diffrentes (liquide, solide,
poudreuse) ;
De grandes difficults ont t rencontres pour identifier des produits contenant des
nanomatriaux manufacturs. Parmi celles-ci, le manque de traabilit des nanomatriaux
intgrs dans ces produits finis a t clairement mis en vidence au cours de ces travaux. Par
ailleurs, laccs aux donnes permettant de caractriser convenablement les produits identifis
sest avr trs limit. De plus, les outils mtrologiques et mthodologiques disponibles
aujourdhui ne permettent pas toujours dobtenir une caractrisation des nanomatriaux aussi
prcise que celle ncessaire pour en valuer les risques.
Pour lvaluation des risques, deux difficults apparaissent encore. Dune part, lintgration de
nanomatriaux au sein dun produit nimplique pas ncessairement leur mission au cours de la
vie du produit. Dautre part, un produit contenant des nanomatriaux nen met pas forcment
sous la mme forme que le nanomatriau initialement intgr dans le produit. Par ailleurs, les
caractristiques des nanomatriaux ventuellement mis sont susceptibles dvoluer au cours
du cycle de vie du produit.
Ainsi, pour raliser lvaluation de risque sur le produit fini, les donnes toxicologiques et
cotoxicologiques du nanomatriau entrant sont ncessaires, mais les donnes sur le
nanomatriau sortant savrent galement indispensables sur lensemble du cycle de vie.
Ces diffrents degrs de complexit ont rendu difficile la caractrisation des nanomatriaux
pour chacune des tapes du cycle de vie des produits tudis et, par consquent, la ralisation
de scnarii dexposition pertinents et complets. Cette forte spcificit de la caractrisation
implique donc que ltude dun cas concret ne permet en aucun cas de gnraliser les
conclusions ou dextrapoler un autre produit de la mme catgorie.
Lexposition des consommateurs aux nanomatriaux manufacturs, ainsi que la dispersion
environnementale conscutive leur consommation, se rvlent donc extrmement complexes
valuer, aussi bien qualitativement que quantitativement. Entre autres raisons, on peut citer :
la faible traabilit des nanomatriaux dans les produits disponibles la consommation ;
la grande varit des produits concerns ;
les scnarios de consommation et dexposition des consommateurs qui restent dfinir ;
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Certaines informations rvles par le producteur du produit impliquant ncessairement des proprits de structure
nanomtrique (par exemple importantes surfaces massiques mesures pour des poudres) sont considres comme
des revendications dduites du nanomatriau.
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Toxicologie et cotoxicologie
A cette complexit pour estimer des niveaux dexposition aux nanomatriaux manufacturs pour la
population gnrale sajoute le manque de connaissances des effets de ces objets sur la sant et
sur lenvironnement. En effet, les tudes toxicologiques et cotoxicologiques pour lesquelles la
caractrisation des nanomatriaux est absente ou incomplte sont nombreuses. Cependant, les
articles les plus rcents tendent prendre en compte cet aspect de faon plus rigoureuse. Par
ailleurs, la plupart des tudes sur la toxicit et lcotoxicit des nanoparticules a t conduite
avec des nanoparticules de synthse et donc non issues du produit fini.
La majorit des tudes sur lcotoxicit des nanoparticules a t conduite des concentrations
trs leves, elles ne refltent donc pas la ralit de lexposition environnementale ces
contaminants. Il faut souligner, dans ce domaine, lhtrognit des travaux et des effets
observs selon les espces, la diversit des protocoles utiliss ainsi que celle des
nanoparticules et des doses considres. La caractrisation de lexposition aux nanoparticules
dans le milieu exprimental est, l aussi, indispensable pour lanalyse et linterprtation des
rsultats obtenus.
Concernant les effets toxicologiques, mme si une action directe et/ou indirecte sur lADN a pu
tre mise en vidence dans certaines exprimentations in vitro, lextrapolation lhomme est
incertaine. Beaucoup dinterrogations subsistent autour des risques pour la sant des
personnes et de lenvironnement. En effet, le manque de donnes pidmiologiques,
toxicologiques et cotoxicologiques ne permet pas de mener actuellement une valuation
complte des risques potentiels lis aux nanomatriaux manufacturs contenus dans tous les
produits de consommation courante.
Les quatre tudes de produits finis dcrites dans le rapport du groupe de travail sont fondes
sur des donnes toxicologiques et cotoxicologiques non spcifiques au produit de
consommation considr.
Les conclusions de lvaluation des risques pour les quatre produits finis slectionns
sont les suivantes :
Unit : grammes par mtre carr par jour, la valeur donne est une estimation issue de nombreuses hypothses
dcrites dans le rapport de lAfsset.
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particulier pour les compartiments aquatiques, mme sil nest pas mesurable aujourdhui,
devrait faire lobjet dune attention particulire. Lvaluation de ces risques requiert des
informations sur le comportement des nanoparticules dargent dans lenvironnement
(biodisponibilit) ainsi que de nombreuses tudes cotoxicologiques ralises pour des temps
dexposition longs et des doses ralistes.
Pour le produit B (ciment) contenant des nanoparticules de dioxyde de titane (TiO2)
Pour lhomme (voie dexposition respiratoire) et pour lenvironnement, pour les effets et le
produit considrs dans les tudes disponibles, les risques ne peuvent pas tre valus, ils ne
peuvent donc pas tre exclus. Des tudes de dgradation des constructions labores avec ce
produit, de quantification de la dispersion des nano-objets dans les divers compartiments
environnementaux permettraient de combler les fortes incertitudes concernant lexposition qui
limitent actuellement lexercice dvaluation. Les personnes souffrant dune pathologie
respiratoire, plus vulnrables aux ractions dinflammation du systme respiratoire que pourrait
engendrer linhalation de ces nanoparticules, constituent des populations sensibles.
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toxicologiques, etc.) ne permet pas destimer le risque associ. Ce risque ne peut donc pas tre
exclu.
Recommandations
Compte tenu du manque de donnes sur la dangerosit potentielle des nanoparticules pour
lhomme et lenvironnement, et face la croissance rapide du nombre de produits intgrant des
nanomatriaux manufacturs, lAfsset recommande donc de prendre des mesures concernant :
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Martin GUESPEREAU
10/14
Rglement associ
RGLEMENT (CE) No
1223/2009 DU PARLEMENT
EUROPEN ET DU CONSEIL
Produits cosmtiques
du 30 novembre 2009
relatif aux produits
cosmtiques
Produits alimentaires
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Produits concerns
Rglement associ
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Produits concerns
Rglement associ
Produits chimiques
RECTIFICATIF AU
REGLEMENT (CE) No
Les nanomatriaux sont implicitement
1907/2006 DU PARLEMENT
mentionns dans REACH sans quune
EUROPEEN ET DU CONSEIL
dfinition ait t propose dans le
du 18 dcembre 2006
rglement. Il est fait tat notamment que
concernant
les diffrentes dispositions du rglement
l'enregistrement, l'valuation et
sappliquent si des mthodologies sont
l'autorisation des substances
adaptes aux nanomatriaux afin de
chimiques, ainsi que les
rpondre aux obligations dinformation.
restrictions applicables
ces substances (REACH)
REGLEMENT (CE) No
La classification et ltiquetage des
1272/2008 DU PARLEMENT
produits
EUROPEEN ET DU CONSEIL
chimiques sappliquent sur la base des
du 16 dcembre 2008 relatif
proprits intrinsques de toute substance
la classification, l'tiquetage
ou prparation dangereuse, ce qui peut
et l'emballage des
impliquer une classification lie la
substances et des mlanges,
spcificit de certains nanomatriaux.
modifiant et abrogeant les
Mais il nexiste pas dobligation explicite de
directives 67/548/CEE et
mention de ltat nanomtrique de la
1999/45/CE et modifiant le
substance concerne.
rglement (CE) no 1907/2006
DIRECTIVE 2001/95/CE DU
PARLEMENT EUROPEN ET
DU CONSEIL
Aucune spcificit nest donne aux
du 3 dcembre 2001 modifiant
nanomatriaux
la DIRECTIVE 92/59/CE
relative la scurit gnrale
des produits
DIRECTIVE 67/548/CE du 27
juin 1967 concernant le
rapprochement des
dispositions lgislatives,
rglementaires et
administratives relatives la
classification, l'emballage et
l'tiquetage des substances
dangereuses
DIRECTIVE 98/8/CE du 16
fvrier 1998
Produits biocides
concernant la mise sur le
march des produits biocides
13/14
Produits concerns
Rglement associ
RGLEMENT (CE) N
1107/2009 DU PARLEMENT
EUROPEN ET DU CONSEIL
du 21 octobre 2009
Produits
concernant la mise sur le
march des produits
phytopharmaceutiques
phytopharmaceutiques et
abrogeant les directives
79/117/CEE et 91/414/CEE du
Conseil
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Saisine n2008/005
RAPPORT
dexpertise collective
Mars 2010
Saisine n2008/005
Mots cls
Mars 2010
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Saisine n2008/005
RAPPORTEURS
Pour la premire partie du traitement de la saisine :
M. Emmanuel FLAHAUT Charg de recherche au Centre National de la Recherche Scientifique
CNRS Nanomatriaux.
M. Eric GAFFET Directeur de recherche au Centre National de la Recherche Scientifique
(CNRS) Nanomaterials Research Group / UMR 5060 Nanomatriaux.
M. Franois TARDIF Chef de laboratoire au Commissariat l'Energie Atomique (CEA) Scurit
au travail et nanomatriaux.
M. Olivier LE BIHAN Ingnieur tudes et recherche lInstitut National de l'Environnement
Industriel et des Risques (Ineris) Hygine industrielle et nanomatriaux.
Experts rapporteurs1 auprs du groupe de travail :
M. Mostafa OULDELHKIM Chef de projet lagence franaise de scurit sanitaire des produits
de sant (Afssaps) Toxicologue.
LAfssaps, travers deux de ses experts a particip laudition dun industriel et a apport quelques
contributions ponctuelles au rapport.
Mars 2010
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Saisine n2008/005
Prsident
M. Jean-Franois DOR Directeur de Recherche mrite lInstitut National de la Sant Et de la
Recherche Mdicale (Inserm) - Champs lectromagntiques non ionisants Ultra-violets.
Membres
Fabienne ANFOSSO-LDE Ingnieur de recherche au Laboratoire Central des Ponts et
Chausses (LCPC) Bruit.
Michel BRENGIER Adjoint au Chef de la division Entretien, Scurit et Acoustique des Routes
au Laboratoire Central des Ponts et Chausses (LCPC) Bruit.
Jean-Pierre CSARINI Retrait (Directeur du laboratoire de recherche sur les tumeurs de la
peau humaine, fondation A. de Rothschild et Inserm) Ultra-violets.
Jean-Claude COHEN Coordinateur en biomtorologie Mto France Mtorologie et sant.
Daniel COURANT Chercheur, chef de projet au Commissariat l'Energie Atomique (CEA)
Rayonnements non ionisants (lasers, ultra-violets).
Frdric COUTURIER Responsable du dpartement "tudes" lAgence Nationale des
Frquences (ANFR) Rayonnements non ionisants.
Jean-Claude DEBOUZY Directeur du dpartement effets biologiques des rayonnementsbiophysique de linstitut de recherches biomdicales du service de sant des armes (IRBACRSSA) Champs lectromagntiques non ionisants.
Acha EL KHATIB Charge de mission lAssistance Publique des Hpitaux de Paris - Hpital
Avicenne Exposition et pathologies professionnelles.
Emmanuel FLAHAUT Charg de recherche au Centre National de Recherche Scientifique
(CNRS) Nanomatriaux.
Eric GAFFET Directeur de recherche Nanomaterials research Group au Centre National de la
Recherche Scientifique (CNRS) Nanomatriaux.
Martine HOURS Charge de recherche lInstitut National de Recherche sur les Transports et
leur Scurit (Inrets) Rayonnements non ionisants.
Agns JOB Chercheur au Centre de Recherche du Service de Sant des Armes (CRSSA)
Bruit.
Antoine LABEYRIE Professeur au Collge de France Environnement et sant.
Jacques LAMBERT Directeur de recherche lInstitut National de Recherche sur les Transports
et leur Scurit (Inrets) Bruit.
Dominique LAURIER Adjoint au chef de laboratoire d'pidmiologie lInstitut de
Radioprotection et de Suret Nuclaire (IRSN) Epidmiologie.
Olivier LE BIHAN Ingnieur tudes et recherche lInstitut National de l'Environnement Industriel
et des Risques (Ineris) Hygine industrielle et nanomatriaux.
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Saisine n2008/005
PARTICIPATION AFSSET
Coordination scientifique
Mlle Aurlie NIAUDET Charge de projets scientifiques - Unit sources et procds Afsset
M. Anthony CADENE Charg de projets scientifiques - Unit agents physiques, nouvelles
technologies et grands amnagements Afsset
M. Olivier MERCKEL Chef de lunit agents physiques, nouvelles technologies et grands
amnagements Afsset
Contribution scientifique
M. Guillaume BOURDEL Chef de projets scientifiques dans lunit agents physiques, nouvelles
technologies et grands amnagements Afsset
Mlle Nathalie THIERIET - Chef de projets scientifiques dans lunit agents physiques, nouvelles
technologies et grands amnagements Afsset
Secrtariat administratif
Mme Sophia SADDOKI Afsset
Mars 2010
Version finale
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Saisine n2008/005
SOMMAIRE
1.1
Contexte............................................................................................................................... 20
1.2
Objet ..................................................................................................................................... 21
1.3
2.1
2.2
3.1
3.2
3.2.1
3.2.2
3.2.3
3.2.4
3.3
4.1
Mars 2010
Version finale
page 6
Saisine n2008/005
4.2
4.3
5.1
5.2
6.1
Introduction ......................................................................................................................... 58
6.2
6.3
Textile et argent................................................................................................................... 63
6.4
6.5
Mars 2010
Version finale
page 7
Saisine n2008/005
6.6
6.7
Mars 2010
Version finale
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Saisine n2008/005
EXPERTISE COLLECTIVE :
SYNTHSE ET CONCLUSIONS
valuation des risques lis aux nanomatriaux pour la population gnrale et dans
l'environnement
Saisine Afsset n 2008/005
Ce document synthtise les travaux du groupe de travail et prsente les ventuels complments
du Comit dExperts Spcialiss.
Contexte scientifique
Les nanomatriaux sont constitus de structures lmentaires dont au moins une des dimensions
est comprise entre 1 et 100 nanomtres. Cette caractristique dimensionnelle confre ces
matriaux des proprits ou des comportements particuliers. En raison des nombreuses
applications innovantes que laissent entrevoir ces proprits physiques, chimiques ou biologiques,
les nanomatriaux reprsentent un domaine de la recherche scientifique et technique en pleine
expansion.
Les nanomatriaux ne sont plus seulement confins dans les laboratoires de recherche, mais sont
dsormais intgrs dans de nombreux procds industriels et participent la composition dune
grande varit de produits ou systmes utiliss dans la vie courante (crmes solaires, textiles,
aliments, domaine des transports, etc.). Ces nanomatriaux sont prsents dans des secteurs aussi
varis que le btiment, lautomobile, lemballage, la chimie, lenvironnement, lnergie ou la sant.
Ces nanomatriaux sont dits manufacturs, car ils sont fabriqus intentionnellement. Ils doivent
tre distingus de lensemble des particules galement de tailles infrieures 100 nm prsentes
dans le milieu ambiant naturel ou issues involontairement de divers processus industriels ou
domestiques non destins la fabrication ou lutilisation de nanomatriaux (appeles particules
ultrafines).
Cet essor rapide entrane une augmentation de lexposition de la population aux nanomatriaux
manufacturs, concernant en premier lieu les employs de lindustrie et des laboratoires ou les
populations riveraines des installations industrielles pour lesquels la possibilit de contact chronique
avec les nanomatriaux est en effet la plus leve : les quantits rencontres sont les plus importantes
et leur manipulation est pour certains employs quotidienne. Cet aspect de lexposition professionnelle
a fait lobjet dun rapport publi par lAFSSET en 2008.
Comme toute substance chimique, le devenir des nanoparticules dans lorganisme humain et la
toxicit potentielle associe vont dpendre notamment de leurs proprits physico-chimiques
(taille, forme, caractre soluble, etc.). Les phnomnes dabsorption, distribution, mtabolisme et
excrtion semblent tre diffrents par rapport une entit chimique classique, de par leurs
caractristiques spcifiques. Il est aujourdhui vident que la prise en compte dun nombre restreint
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Saisine n2008/005
de caractristiques nest pas suffisante pour interprter leurs effets potentiels. De faon gnrale,
ltude de la transposition des connaissances micro lchelle nano reste faire.
Aujourdhui, la large diffusion de ces nanomatriaux travers une multitude de produits de
consommation courante amne sinterroger sur lexposition aux nanomatriaux manufacturs
des consommateurs et de la population gnrale.
Organisation de lexpertise
Conformment la dmarche qualit suivie lAfsset sappuyant sur lutilisation de la norme NF X
50-110 relative la qualit en expertise, la demande des ministres en charge de la sant, du
travail et de lenvironnement a t confie au CES agents physiques, nouvelles technologies et
grands amnagements . Ce dernier a, dans un premier temps, mandat des experts rapporteurs
pour raliser les premiers travaux dexpertise concernant le recensement des produits contenant
des nanomatriaux manufacturs et le choix des produits tudier plus prcisment.
Dans un second temps, au vu de la complexit et de la sensibilit de la thmatique traite, lAfsset
a dcid, sur proposition du CES valuation des risques lis aux agents physiques, aux
nouvelles technologies et aux grands amnagements en sance du 9 mars 2009, de constituer
un groupe de travail formel rattach ce CES et compos dexperts slectionns suite un appel
candidature public. La prsidence du groupe de travail a t confie M. Fabrice Nesslany
(toxicologue Institut Pasteur de Lille).
Le groupe de travail nanomatriaux et exposition du consommateur coordonn par lAfsset a
t constitu au printemps 2009, suite un appel candidatures public. Ce groupe de travail
multidisciplinaire est constitu dexperts dans les domaines de la mesure de lexposition, de la
mtrologie, de la toxicologie, de la biologie et de la physique.
Afin dinstruire cette saisine sur les scnarios dexposition aux nanomatriaux manufacturs, le
groupe de travail sest runi 8 fois entre avril et novembre 2009. Lors de sances supplmentaires,
3 auditions dindustriels ont galement t ralises.
Ltat davancement de ces travaux a t prsent rgulirement au CES agents physiques,
nouvelles technologies et grands amnagements , et discut au cours de ses sances de travail.
Le rapport produit par le groupe de travail tient ainsi compte des observations et lments
complmentaires transmis par les membres du CES ayant pris part aux dlibrations.
Ces travaux dexpertise sont ainsi issus dun collectif dexperts aux comptences
complmentaires. Ils ont t raliss dans le respect des rgles de comptence, indpendance,
transparence, traabilit des travaux.
Description de la mthode
En labsence doutils dvaluation des risques disponibles adapts la question pose, lAfsset a
propos dutiliser une approche qualitative simplifie des risques pour la sant et pour
lenvironnement. La majeure partie du travail prliminaire du groupe de travail a consist
recenser des produits finis disponibles sur le march franais et contenant les nanomatriaux
manufacturs les plus utiliss. Si le recensement des produits nest pas exhaustif, lAfsset sest en
revanche attache consulter toutes les sources dinformations disponibles. Le rsultat de ce
travail dinventaire a permis de fournir un document de support pour la phase de slection de
quelques produits pour lesquels des scnarios dexposition de la population gnrale et de
lenvironnement ont t dvelopps. Les risques spcifiques de ces produits contenant des
nanomatriaux manufacturs ont t ensuite valus, de manire qualitative.
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Saisine n2008/005
Les scnarios associs chacun des produits ont t raliss principalement partir des donnes
bibliographiques suivantes, par ordre dcroissant dintrt :
-
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Saisine n2008/005
A cette complexit pour estimer des niveaux dexposition aux nanomatriaux manufacturs pour la
population gnrale sajoute le manque de connaissances des effets de ces objets sur la sant et sur
lenvironnement.
Les tudes toxicologiques et cotoxicologiques pour lesquelles la caractrisation des
nanomatriaux est absente ou incomplte sont nombreuses. Cependant, les articles les plus
rcents tendent prendre en compte cet aspect de faon plus rigoureuse.
La plupart des tudes sur la toxicit et lcotoxicit des nanoparticules a t conduite avec des
nanoparticules de synthse et donc non issues du produit fini.
La majorit des tudes sur lcotoxicit des nanoparticules a t conduite des concentrations si
leves quelles ne refltent pas la ralit de lexposition environnementale ces contaminants. Il
faut souligner, dans ce domaine, lhtrognit des travaux et des effets observs selon les
espces, la diversit des protocoles utiliss ainsi que celle des nanoparticules et des doses
considres. La caractrisation de lexposition aux nanoparticules dans le milieu exprimental est,
l aussi, indispensable pour lanalyse et linterprtation des rsultats obtenus.
Les avances scientifiques et technologiques, ainsi que les proprits biologiques et physicochimiques dans ce domaine sont largement dcrites par des publications scientifiques
particulirement nombreuses. Par exemple, dans certains cas, une action directe et indirecte sur
lADN a pu tre mise en vidence dans des exprimentations in vitro. Nanmoins lextrapolation
lHomme est incertaine. Beaucoup dinterrogations subsistent autour des risques pour la sant des
personnes et de lenvironnement.
En effet, le manque de donnes pidmiologiques, toxicologiques et cotoxicologiques ne permet
pas de mener actuellement une valuation complte des risques potentiels lis aux nanomatriaux
manufacturs contenus dans tous les produits de consommation courante.
Les quatre tudes de produits finis dcrites dans le rapport sont fondes sur des donnes
toxicologiques et cotoxicologiques non spcifiques au produit de consommation considr.
Ces produits ont t slectionns sur la base des critres suivants :
-
les produits permettent au groupe de travail de considrer les diffrentes voies dexposition
(ingestion, inhalation et cutane, avec seule considration de lexposition directe et non
accidentelle) ;
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Saisine n2008/005
Recommandations
Compte tenu du manque de donnes sur la dangerosit potentielle des nanoparticules pour
lhomme et lenvironnement, il serait souhaitable de prendre des mesures concernant :
Les recommandations suivantes s'appliquent la fois aux nano-produits dj sur le march et aux
futurs nano-produits. Par ailleurs, on ne considre ici que les nanoparticules manufactures
volontairement introduites dans les nano-produits, et non pas celles mises par la matrice des
nano-produits.
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Saisine n2008/005
aux industriels de produire ds prsent une fiche descriptive des donnes concernant les
nanoparticules utilises dans leurs nano-produits (concentration, taille, nature, informations
disponibles sur la toxicit, etc.). Les informations ncessaires devraient tre fournies pour
les diffrentes tapes du cycle de vie, notamment par des fiches de donnes de scurit
correctement renseignes. Lensemble des fiches descriptives pourrait tre disponible sur
un seul site internet gr par un organisme public franais.
ceux dont lutilit dmontre serait faible pour les consommateurs, par exemple sur
la base dune analyse socio-conomique de type bnfice/risque ;
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Saisine n2008/005
dorienter les efforts de recherche sur les points cls identifis en toxicologie pour
les nanoparticules, savoir la toxicocintique, la dtermination des mcanismes
dactions (permettant notamment la comprhension des interactions entre des
nanoparticules parfaitement caractrises et les biomolcules, nutriments,
xnobiotiques) et ltude des effets in vivo lis des expositions aigus et multiples
incluant les marqueurs de linflammation, le stress oxydant et la prolifration
cellulaire, avec pour objectif terme la mise en uvre de modles prdictifs de
substitution lexprimentation ;
Au nom des experts du CES valuation des risques lis aux agents physiques, aux nouvelles
technologies et aux grands amnagements ,
le prsident du CES
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Saisine n2008/005
Abrviations
ACV : Analyse du cycle de Vie
ACGIH : American Conference of Governmental Industrial Hygienists - confrence amricaine des
hyginistes industriels gouvernementaux
ADN : acide dsoxyribonuclique
Afssa : Agence Franaise de Scurit Sanitaire des Aliments
Afssaps : Agence Franaise de Scurit Sanitaire des Produits de Sant
Ademe : Agence de l'Environnement et de la Matrise de l'Energie
ATP : Adnosine triphosphate
BET : Mesure de la surface spcifique (Brunauer, Emmett et Teller)
BEUC : Bureau europen des unions de consommateurs.
BLM : Biotic Ligand Model -modle du ligand biotique
BPCO : Broncho-pneumopathie chronique obstructive
BPL : Bonnes pratiques de laboratoire
CEx : concentrations effectives induisant x % de leffet observ
CEA : Commissariat lEnergie Atomique
Cerege : Centre Europen de Recherche et dEnseignement des Gosciences de lEnvironnement
CIRC : Centre International de Recherche sur le Cancer
CNRS : Centre National de la Recherche Scientifique
CPP : Comit de la Prvention et de la Prcaution
DiGITIP : Direction gnrale de l'industrie, des technologies de l'information et des postes
DLx : Dose ltale x, dose qui cause la mort de x % d'un groupe d'animaux d'essai
ECETOC : European Centre for Ecotoxicology and Toxycology of Chemicals
ERA : Espces ractives de lazote
ERO : Espces ractives de loxygne
FDS : Fiche de donnes de scurit
FSAI : Food Safety Authority of Ireland
HONEC : Highest Observed No-Effect Concentration - concentrations maximales sans effet
IARC : International Agency for Research on Cancer - Centre International de Recherche sur le
Cancer (CIRC)
ICV : Inventaire du cycle de Vie
ICP-MS : Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry - torche plasma couple la
spectromtrie de masse
INRS : Institut National de Recherche et de Scurit
Ineris : Institut National de l'Environnement industriel et des Risques
Inserm : Institut National de la Sant et de la Recherche Mdicale
IRSST : Institut de recherche Robert-Sauv en sant et en scurit du travail
ISO : International Standardization Organization - organisation internationale de normalisation
LDH : lactate dshydrognase
LOEC : Lowest Observed Effect Concentration - plus faible concentration pour laquelle un effet
significatif est observ
MET : microscopie lectronique en transmission
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NIOSH : National Institute for Occupational Safety and Health Institut national pour la scurit et
la sant au travail (tats-Unis)
NOEC : No Observed Effect Concentration - plus forte concentration sans effet significatif observ
NP : Nanoparticules
NTC : nanotube de carbone
OCDE : Organisation de Coopration et de Dveloppement Economiques
OMNT : Observatoire des Micros et Nano Technologies
OMVPE : OrganoMetallic Vapor Phase Epitaxy - pitaxie en phase vapeur dorganomtalliques
ONG : Organisation non gouvernementale
PCN : Point de charge nulle
PM 2.5 : Particulate Matter - particules de taille arodynamique infrieure 2,5 micromtres
PNEC : Predicted No Effect Concentrations - concentration sans effet prvisible pour
lenvironnement
PEC : Predicted Environmental Concentration - concentration environnementale prdictive
pH : potentiel Hydrogne
RIVM : Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieu Institut national pour la sant publique et
lenvironnement
RNMP : Rseau Nouveaux Matriaux et Procds
RNS : Reactive Nitrogen Species - espces ractives de lazote
ROS : Reactive Oxygen Species - espces ractives de loxygne
SAS : Synthetic Amorphous Silica - silice amorphe synthtique
SNC : Systme nerveux central
TGD : Technical Guidance Document (manuel technique dvaluation du risque chimique commun
lUnion Europenne)
UCO : Universit Catholique de lOuest
UIOM : Usine dincinration dordures mnagres
UMR : Unit Mixte de Recherche
US EPA : United States Environmental Protection Agency Agence de protection de
lenvironnement des Etats-Unis
UV-A, UV-B : rayonnements ultraviolets A - rayonnements ultraviolets B
WWI : Woodrow Wilson Institute
Dfinitions
Produit fini : produit de consommation courante, bien de consommation.
Particule dexposition : la particule laquelle lhomme ou lenvironnement est expos.
Matrice du produit fini : phase du produit fini qui contient les nanomatriaux.
Nano-produit : produit contenant des nanomatriaux manufacturs.
Entrant : lment de base - ici poudre nanostructure - utilis pour fabriquer un produit fini.
Sortant : rsidu mis lors de l'usage, du vieillissement ou de la fin de vie d'un produit fini ; peut tre
en partie nanostructur, notamment s'il est issu d'un produit fini nanomanufactur.
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Mars 2010
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Bien que les tudes de nano-toxicologie progressent de faon remarquable dans le monde,
lavance des connaissances sur la dangerosit des nanoparticules est retarde par le caractre
multiparamtrique des tudes. Celles-ci doivent en effet prendre en compte, pour chaque
matriaux constitutif des nanoparticules, leur taille, leur forme, leurs charges de surface, etc.
Par ailleurs, lcotoxicologie des nanoparticules est encore un domaine scientifique peu explor. Il
nest donc aujourdhui pas possible dvaluer globalement, et de faon exhaustive, les risques lis
lintroduction des nanomatriaux dans les biens de consommation courante actuels et futurs.
Cette tude de cas sest donc limite, titre dexemple, quelques nano-produits de grande
consommation pour lesquels un niveau de connaissance suffisant tait accessible.
1.2 Objet
En rponse une premire saisine de ses ministres de tutelle en 2005, lAgence franaise de
scurit sanitaire de lenvironnement et du travail a ralis un recueil dinformations scientifiques
intitul Les Nanomatriaux - Effets sur la sant de lhomme et sur lenvironnement . Ce rapport
dexpertise a t remis aux ministres de tutelle et rendu public par lAfsset en juin 2006.
Dans la continuit de ces travaux, lAfsset a t saisie le 29 juin 2006 par la Direction gnrale de
la sant, la Direction de la prvention de la pollution et des risques, ainsi que par la Direction
gnrale du travail afin de raliser une synthse des valuations des risques existantes et des
moyens mis en uvre pour garantir la protection des travailleurs, et de faire des recommandations
de mesures appropries pour garantir la protection des travailleurs et des populations riveraines
susceptibles dtre exposs des nanomatriaux manufacturs. En labsence dautres outils
dvaluation disponibles et spcifiques aux nanomatriaux manufacturs, lAfsset a alors propos
dutiliser une approche qualitative simplifie des risques pour la sant et pour lenvironnement.
Dans ce cadre, lAfsset a t saisie le 05 juin 2008 par la Direction gnrale de la sant, la
Direction gnrale de la prvention des risques et la Direction gnrale du travail pour laborer et
tudier des scnarios dexposition de la population gnrale quelques nanomatriaux
manufacturs contenus dans un chantillon de produits mis sur le march, en prenant en compte
les diffrentes voies dexposition afin dvaluer les risques potentiels pour la population gnrale.
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Saisine n2008/005
Chaque expert a rdig une contribution dans son champ de comptences. Certaines parties ont
cependant fait lobjet dune concertation entre plusieurs experts. Les textes ont t ensuite soumis
lapprciation de lensemble du groupe. Les conclusions et les propositions ont t rdiges
collectivement par le groupe de travail.
Dans le cas o un expert a jug ncessaire de consulter une personne extrieure reconnue pour
ses comptences, la prise en compte ventuelle des informations fournies est la seule
apprciation de lexpert. Ces informations ne font pas lobjet de mentions spcifiques dans ce
rapport.
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Saisine n2008/005
1 015
803
580
356
54
Ces nano-produits sont rpartis dans les catgories3 suivantes (cf. Figure 2) :
http://www.nanotechproject.org/inventories/consumer/analysis_draft
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automobile : 68 produits ;
lectromnager : 37 produits ;
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25 aot 2009
605
152
98
57
55
68
37
19
Figure 2 : Rpartition des nano-produits par catgories (25 aot 2009, extrait du Woodrow Wilson
Institute)
Pour la catgorie la plus importante (c..d. sant et fitness), des sous catgories ont t introduites
afin dobtenir une vue plus prcise des applications vises (cf. Figure 3) :
Il est utile de prciser que, dans cet inventaire, certains produits peuvent appartenir plusieurs catgories.
Par exemple les crmes solaires destines aux enfants sont catgoriss sant et fitness et produits
pour enfants la fois.
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193
25 aot 2009
155
137
93
33
43
Une analyse par pays dorigine des nano-produits est rsume sur la figure suivante (cf. Figure 4).
Linventaire a permis didentifier 24 pays distincts comme sources commerciales de ces nanoproduits. Les tats-Unis sont la source la plus importante avec un total de 540 nano-produits,
suivis par les pays asiatiques (Chine, Tawan, Core du Sud et Japon) avec un total de 240 nanoproduits. LEurope (Royaume-Uni, France, Allemagne, Finlande, Suisse, Italie, Sude, Danemark
et Pays Bas) est lorigine de 154 des 1 015 nano-produits rpertoris ce jour, alors que pour le
reste du monde (incluant Australie, Canada, Mexique, Isral, Nouvelle Zlande, Malaisie,
Thalande, Singapour, Philippines), 66 nano-produits sont rpertoris.
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25 aot 2009
540
240
154
66
Figure 4 : Rpartition des nano-produits par secteur gographique dorigine : Etats Unis, Asie
(Chine, Taiwan, Core du Sud et Japon), Europe (Royaume Uni, France, Allemagne, Finlande, Suisse,
Italie, Sude, Danemark et Pays Bas), Reste du monde (incluant Australie, Canada, Mexique, Isral,
Nouvelle Zlande, Malaisie, Thalande, Singapour, Philippines), extrait du Woodrow Wilson Institute.
Enfin, la base de donnes du Woodrow Wilson Institute sest attache classer loccurrence des
nano-produits en fonction de la nature chimique du nano-composant et/ou nano-ingrdient (cf.
Figure 5) :
i) largent est le plus rpertori avec prs de 259 produits (53,6 %) ;
ii) le carbone (nanotubes et fullernes) est le second dans ce classement par nature
chimique avec un total de 82 produits (17 %) ;
iii) le titane (dioxyde de titane inclus) est prsent dans 50 produits (10,4 %) ;
iv) la silice est prsente dans 35 produits (7,2 %) ;
v) le zinc (oxyde de zinc inclus) est prsent dans 30 produits (6,2 %) ;
vi) lor est prsent dans 27 produits (5,6 %).
Il convient de noter que les nano-produits rfrencs contenant un nano-composant parmi ces 6
familles de natures chimiques les plus utilises ne reprsentent que 483 nano-produits sur un total
de 1 015. Ce constat souligne lextrme diversit de la nature chimique des composants lchelle
nanomtrique contenus dans des produits mis sur le march.
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Une telle diversit de la nature chimique des composants nanomtriques est soutenue par
lanalyse du site maintenu par NanoWerk4, qui rpertorie pour sa part plus de 2 263 types de
produits contenant des nanoparticules commercialises .
25 aot 2009
259
82
50
30
35
27
Figure 6 : Production nationale franaise de nanoparticules (en fonction de leur nature chimique). En
encadr la production mondiale (selon rapport Afsset, Juillet 2008)
http://www.nanowerk.com/phpscripts/n_dbsearch.php
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Il convient de citer galement un inventaire japonais5 pour complter le panorama des sites et
structures ralisant un inventaire des nano-produits (toutes applications confondues) mis sur le
march. Ltat de cet inventaire en fonction des catgories prises en compte est le suivant :
lectromnager : 43 produits ;
alimentation : 36 produits ;
culture : 28 produits.
Toujours dans le cadre de linventaire des nano-produits mis sur le march, il existe galement un
autre site internet, Nanoshop6 qui identifie les secteurs suivants :
btiments : 40 produits ;
automobile : 25 produits ;
textiles : 17 produits ;
lectromnager : 12 produits ;
alimentation : 16 produits ;
En 2009, lONG Environmental Working Group (tats-Unis) identifie pour le seul secteur des
produits de soin personnel, prs de 9 509 produits contenant des ingrdients de dimension
nanomtrique7.
Une autre source8 fait tat dune liste de prs de 526 produits pour plus de 264 socits, pour les
nano-produits revendiquant contenir des nanoparticules dargent.
Si lon sintresse maintenant de faon plus dtaille au volume de nanoparticules mis en jeu par
champ dapplications concernes et par nature chimique des nanoparticules impliques, le
Tableau 1 ci-aprs sappuyant sur le rapport publi en 2009 par linstitut national pour la sant
publique et lenvironnement hollandais (Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieu RIVM)
permettra de fournir un certain nombre dlments (RIVM,2009).
Il conviendra cependant dapprcier avec prudence les lments ainsi condenss, puisque la
catgorie correspondant des quantits suprieures 10 000 tonnes nest pas suffisamment
http://staff.aist.go.jp/kishimoto-atsuo/nano
http://www.nanoshop.com
http://ewg.org/node/26565 et http://ewg.org/node/26564
http://www.ec21.com/ec-market/nano_silver.html
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Saisine n2008/005
prcise pour valuer exactement les quantits rellement mises en jeu. Cela consolide le fait que,
pour une application donne, il existe diffrents composants avec des quantits trs variables.
Dautre part, cet inventaire nest pas exhaustif puisquil nintgre pas par exemple lutilisation de
noir de carbone dans les pneumatiques.
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Saisine n2008/005
Tableau 1 : Quantit de nanoparticules mises en uvre en fonction des applications dtailles. Document tabli partir des diffrents tableaux
issus du rapport 2009 du RIVM. Sont fournis les lments non exhaustifs pour ltat actuel et ltat projet dans un futur proche (2010-2015). Est
galement fourni le cot de la matire premire par kilogramme de nanoparticules considres.
Nature chimique
Alumine
Alumine
(couche mince)
Nanotubes de
carbone (NTC)
Nanotubes de
carbone (NTC)
coniques
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Part de
march
actuelle de la
catgorie de
produit (%)
Prospective de
quantit
produite (t/an)
Prospective
de la part de
march de la
catgorie de
produit (%)
Prix / Catgorie
$ / kg
> 10 000
10 20
> 10 000
1 10
5 - 500
10 100
<1
10 100
<1
5 - 500
Produits/application
Sous-catgorie de
produits
Filtres catalyseurs
Filtres catalyseurs
Systme dclairage
au xnon
Systme
dclairage
Systme de filtration
Systme de
filtration et
purification de leau
Filtration et
purification
10 100
<1
100 1000
<1
5 - 500
Support
d'enregistrement
optique
Support
d'enregistrement
Informatique et
lectronique
10 100
<1
10 100
<1
5 - 500
Encres et pigments
Encres et papiers
Informatique et
lectronique
NR
NR
NR
NR
NR
Ecrans
Informatique et
lectronique
1 000 10 000
1 10
50 - 500
Autres textiles
Textiles et
chaussures
100 1000
<1
50 - 500
100 1 000
<1
50 - 500
100 1 000
<1
50 - 500
10 100
<1
50 - 500
Nouveaux
dveloppements de
nanotubes de
carbone
Nouveaux
dveloppements de
nanotubes de
carbone
lectrodes
transparentes
lectrodes
transparentes
Nouveaux
dveloppements de
nanotubes de
carbone
Ecrans
Energie
Energie
Version finale
Catgorie de
produits
Quantit
actuellement
produite (t/an)
Vhicules
moteur
Vhicules
moteur
Informatique et
lectronique
Informatique et
lectronique
Informatique et
lectronique
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Saisine n2008/005
Part de
march
actuelle de la
catgorie de
produit (%)
Prospective de
quantit
produite (t/an)
Prospective
de la part de
march de la
catgorie de
produit (%)
Prix / Catgorie
$ / kg
Nature chimique
Produits/application
Sous-catgorie de
produits
Catgorie de
produits
Quantit
actuellement
produite (t/an)
Matriaux
composites
(inc. NTC)
Equipements sportifs
Equipements
sportifs
Equipements
sportifs
10 - 100
<1
100 - 1000
<1
50 500
Emballages
alimentaires
Emballages
Produits
mnagers
> 10 000
10 20
> 10 000
20 - 30
5 50
1 000 10 000
<1
1 000 10 000
1 10
5 50
100 1 000
<1
5 50
1 000 10 000
1 10
1 000 10 000
1 10
5 50
Divers
1 000 10 000
1 10
>10 000
1 10
5 50
Informatique et
lectronique
1 000 10 000
1 10
1 000 10 000
<1
5 50
Nano argiles
Nano argiles
(coton)
Nano argiles,
polymre, carbone
Cblage et gaine de
cble
nanocomposites
R&D
Composants
automobiles
Arogel de silice
Isolants
Enrobage de fibre
optique
Matriaux
disolation
Composants
lectroniques
Nanoparticules
dargent
revtements anti
microbiens
Assimil aux
produits de sant
Cosmtiques et
produits
dhygine
0,1 - 1
<1
1 10
<1
5 000 50 000
TiO2
Systmes de filtration
/ purification de lair
Systmes de
filtration /
purification de lair
Filtration et
purification
< 0,1
<1
0,01 0,1
<1
5 50
Couches minces
de TiO2
Revtements
photocatalytiques
Produits de
nettoyage
Produits
mnagers
1 000 10 000
1 10
1 000 10 000
1 10
5 50
TiO2, ZnO
Absorbants UV
Produits
cosmtiques
solaires
Cosmtiques et
produits
dhygine
1 000 10 000
1 10
1 000 10 000
1 10
5 50
NR
NR
NR
NR
NR
1 000 10 000
1 10
1 000 10 000
1 10
50 - 500
0 (en 2008)
NR
NR
5 000 50 000
Oxydes de crium
Chrome, cobalt et
carbone
HAP
(hydroxyapatite)
Mars 2010
Composants
lectroniques
Equipement
professionnel
intrieur
Composants
informatiques
Dentifrices
Hygine orale
Carburants
Version finale
Informatique et
lectronique
Textiles et
chaussures
Vhicules
moteur
Vhicules
moteur
Informatique et
lectronique
Cosmtiques et
produits
dhygine
page 31
Saisine n2008/005
Part de
march
actuelle de la
catgorie de
produit (%)
Prospective de
quantit
produite (t/an)
Prospective
de la part de
march de la
catgorie de
produit (%)
Prix / Catgorie
$ / kg
Nature chimique
Produits/application
Sous-catgorie de
produits
Catgorie de
produits
Quantit
actuellement
produite (t/an)
Support
d'enregistrement
magntique
Support
d'enregistrement
Informatique et
lectronique
1 000 10 000
1 10
100 - 1000
<1
50 - 500
Composants
lectroniques
Composants
informatiques
Informatique et
lectronique
Informatique et
lectronique
1 10
<1
1 10
<1
50 - 500
1 10
<1
1 10
<1
50 - 500
Nanoparticules
doxydes de fer
Ferrofluides
Ferrofluides
Nanoparticules de
lanthane
Anti-algues
Filtration et
purification de leau
Filtration et
purification
NR
NR
NR
NR
NR
Nanoparticules de
lithium
Energie
Informatique et
lectronique
1 000 10 000
1 10
50 - 500
Film nanomtrique
de polymre
Revtement optiques
Produits de
nettoyage
Produits
mnagers
100 - 1000
<1
100 - 1000
<1
5 50
nanophosphore
(quantum dots)
diodes
lectroluminescentes
Systme
dclairage
Informatique et
lectronique
0,1 - 1
<1
>50 000
Palladium
Filtres catalyseurs
Filtres catalyseurs
10 - 100
<1
10 - 100
<1
5 000 50 000
Platine
Filtres catalyseurs
Filtres catalyseurs
10 - 100
<1
10 - 100
<1
5 000 50 00
Adhsifs et
traitements de
surface
Revtements et
adhsifs
> 10 000
40 - 50
> 10 000
30 - 40
50 - 500
Ecrans plats
Ecrans
100 1 000
<1
1 000 10 000
1 10
50 - 500
Traitement de textile
Traitement de
textile
Informatique et
lectronique
Textiles et
chaussures
1 10
<1
1 10
<1
50 - 500
Produits de
nettoyage
Produits
mnagers
100 1 000
<1
100 1 000
<1
50 - 500
Systme
dclairage
Informatique et
lectronique
Vhicules
moteur
0,1 - 1
<1
>50 000
1 10
<1
1 10
<1
>50 000
Polymres
Nanocomposites
de polyurthane /
aluminium
Quantum dots
Rhodium
Mars 2010
Filtres catalyseurs
Version finale
Vhicules
moteur
Vhicules
moteur
Divers
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Nature chimique
Divers matriaux
incluant aluminium,
silice, titane,
zirconium et
carbure de silicium
Mars 2010
Saisine n2008/005
Part de
march
actuelle de la
catgorie de
produit (%)
Prospective de
quantit
produite (t/an)
Prospective
de la part de
march de la
catgorie de
produit (%)
Prix / Catgorie
$ / kg
Produits/application
Sous-catgorie de
produits
Catgorie de
produits
Quantit
actuellement
produite (t/an)
Produits de
nettoyage
Produits
mnagers
100 1 000
<1
100 1 000
<1
50 - 500
Revtements
Vhicules
moteur
100 1 000
<1
50 - 500
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Ces cas seront discuts et permettront de mieux dfinir notre champ danalyse.
matriaux de dimension 2 : matriaux sous forme de couche mince, comme dans les
dpts dagrgats ou de revtements pais obtenus par projection plasma ou voie
lectrochimique ;
matriaux de dimension 3 : matriaux sous forme compacte comme dans les cramiques
et les mtaux nanostructurs.
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Figure 7 : Classification des nanomatriaux selon leur localisation au sein du composant / objet /
produit considr (Hansen S.F., 2007).
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environnementale proposant une analyse des impacts potentiels sur lenvironnement et/ou la
sant dun systme, dun service ou dun produit sur lensemble de son cycle de vie, de lextraction
des matires premires la production de dchets. Les impacts considrs sont notamment le
changement climatique, la dpltion de lozone stratosphrique, lpuisement des ressources, la
sant humaine, etc.
En pratique, la norme ISO 14044 dfinit quatre tapes :
(1) le champ de ltude est dfini en prcisant le systme tudi et lunit fonctionnelle
associe (unit de rfrence qui permet dexprimer les impacts sur un lment
reprsentatif et bien caractris) ;
(2) les flux de matires et dnergies entrants (nergie, matriaux, substances, eau,
consommables) et sortants (missions dans les diffrents milieux, dchets, nergie)
chaque tape du cycle de vie sont inventoris (inventaire du cycle de vie : ICV) ;
(3) puis on procde une valuation des impacts potentiels environnementaux partir de ces
donnes grce des coefficients prtablis permettant de calculer la contribution de
chaque flux aux divers impacts environnementaux tudis (effet de serre, acidification,
sant humaine, etc.). Les rsultats sont exprims par rapport lunit fonctionnelle
choisie ;
(4) enfin, les rsultats sont interprts par lanalyse des informations obtenues lors des tapes
prcdentes, notamment par des analyses de sensibilit afin dprouver la robustesse des
rsultats et de prciser ltude.
La ralisation des tudes ACV ncessite un grand nombre de donnes dont la majorit est
manquante pour les nanotechnologies (relation dose-rponse, donnes d'mission, fraction
absorbe, etc.). De plus, la complexit des phnomnes en jeu et de leurs interactions est source
dincertitude sur la valeur relle des impacts sur lenvironnement (ex : caractre fig de certaines
donnes utilises, non prise en compte des effets de synergie ou dantagonisme entre polluants,
des caractristiques particulires du milieu local, des effets de cintique, etc.) : cest ce titre que
le qualificatif potentiel est utilis et on parle donc dimpacts potentiels. Enfin, il est trs
difficile dinterprter les units utilises dans les mthodes ACV disponibles et dvaluer leur
pertinence.
Lanalyse de cycle de vie dfinie selon la norme ISO ne peut se substituer une analyse de
risques chaque tape du cycle de vie.
contenant
des
nanomatriaux :
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Des efforts trs importants sont mens en termes de recherche en toxicologie et en cotoxologie.
La quasi-totalit de ces travaux porte sur la forme primaire du produit : sur les entrants , c'est-dire la plupart du temps sur les poudres lorigine du caractre nanostructur du futur produit fini.
Cette dmarche de recherche est complexe, et des efforts notables et stratgiques sont faits
notamment par lOCDE pour normaliser le descriptif de lentrant ainsi que les procdures
exprimentales. Un enjeu majeur est dassurer la comparabilit des rsultats.
Cependant, une question importante se pose dores et dj : quelle est la reprsentativit de cet
entrant au regard des particules potentiellement relargues partir dun produit fini (cf. Figure 9) ?
En effet, le cycle de vie du produit met en vidence des transformations majeures : la fabrication
du produit fini est mme de transformer profondment lentrant. Il en est de mme de lutilisation
et du vieillissement du produit, et plus encore de sa fin de vie - on pense par exemple
lincinration des ordures mnagres.
Cette complexit fait partie intgrante de la dfinition mme de lACV. Le chapitre suivant propose
une illustration de cette question.
Figure 9 : Peut-on tablir un lien direct entre lentrant et les produits mis lors de lusage et de la fin
de vie du produit ?
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Schierholz K.,2008; Le Bihan O., Schierholz K.,2009), du TiO2 (Hsu L.Y., Chein H.M.,2007), de
loxyde de zinc (Vorbau M., 2009) .
Une tude a t mene pour valuer spcifiquement limpact dune nanocharge dans un produit
fini soumis un vieillissement (Le Bihan O. et Schierholz K., 2008; Le Bihan O. et Schierholz K.,
2009). La structure du produit considr comprend une couche externe ( vernis ), puis une
strate assez fine constitue de fibre de verre mlange avec une rsine contenant des nanotubes
de carbone (NTC), et enfin un polystyrne de plusieurs centimtres dpaisseur.
le premier rsultat marquant est que le ponage et le perage dun chantillon sans NTC
induisent une mission de particules et notamment de nanoparticules, de manire
significative. La couche externe, savoir le vernis, est la principale source de particules.
Cet exemple illustre parfaitement le fait quune mission de particules ou nanoparticules ne
ncessite en aucun cas la prsence dun entrant nano ;
la comparaison des deux produits lun avec, lautre sans NTC - a fait apparatre des
niveaux dmission comparables : la nanocharge (minoritaire en masse) de ce produit na
donc eu aucune influence quantitative sur les missions ;
seule une tude plus pousse en termes de prlvement et danalyse serait mme de
donner des informations quantitatives et qualitatives sur le rle des NTC.
Compte-tenu du mode de fabrication, et tout particulirement du mlange des NTC avec une
rsine, il est trs probable que les particules mises soient htrognes. En dautres termes, on ne
retrouvera trace des NTC que probablement travers des dbris prsents au sein dun mlange
NTC + rsine + fibre de verre. Il y a peu de chance de retrouver dans le rejet une nanocharge sous
sa forme initiale.
En conclusion, ces rsultats suggrent que :
1. un relargage nano peut se faire sans la prsence de nanomatriaux manufacturs et
ajouts intentionnellement ;
2. la problmatique de lmission de nanoparticules nest pas spcifique aux entrants
nano mais concerne potentiellement toute partie dun produit ;
3. lidentification dans le rejet des drivs issus des entrants nano peut tre trs
complexe ;
4. ces drivs ont toute chance dtre loigns voire extrmement diffrents de lentrant
nano ; et par ailleurs de ntre quune composante dune particule htrogne.
Cette tude de cas illustre donc parfaitement la complexit de la question pose.
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3.2.4 Discussion
Ces deux exemples montrent quel point la formulation du problme doit tre dtaille avec soin.
Si des appellations telles que particules intentionnelles / non-intentionnelles permettent de
faciliter la discussion, elles savrent insuffisantes pour classer / diffrencier les diffrentes
situations.
1. Si lon prend le cas simple dun produit pour lequel il existe une revendication nano , tout
ou partie du produit est susceptible de contenir des produits non nano pouvant mener
un relargage nano ;
2. lhistorique du produit met en uvre diffrentes transformations qui attnuent fortement le
lien entre les entrants nanostructurs et les caractristiques du rejet du produit fini. La
labellisation a priori ne garantit pas une labellisation a posteriori ;
3. linverse, labsence dune revendication nano ne signifie en aucun cas labsence
dmission de nanomatriaux. Un fabricant peut laborer des produits sans raliser que
ceux-ci entrent dans le champ de dfinition des produits intgrants des nanomatriaux.
Cest le cas de certaines poudres utilises depuis de nombreuses annes. De la mme
manire quil existe des produits anciens non-conscients , il existe probablement des
dveloppements actuels non-conscients .
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le domaine dapplication ;
lapplication ;
le pays producteur ;
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Internet :
Sites internet des producteurs de produits finis et de nanomatriaux, fiches et dossiers techniques
des produits, fiches de donnes de scurit des produits ;
Sites spcifiques aux nano , parmi lesquels nous pouvons citer nanopedia9, the web course of
nanotechology (tats-Unis) ;
17.
Rapports :
Out of the laboratory and on to our plates, nanotechnology in Food & Agriculture, Friends of the
earth edition, mars 2008 ;
Small wonder? Nanotechnology and cosmetics, Which (ONG, UK), novembre 2008 ;
Nanowerk consumer product ;
Nanotechnology in Consumer Products, Nanoforum, octobre 2006 ;
9
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Associations de consommateurs
19
http://www.silver-colloids.com/Reports/reports.html
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Les nanomatriaux pour lesquels le groupe de travail a pu identifier des produits finis ou
intermdiaires sont les suivants :
Argent ;
Argile ;
Biopolymres ;
Carbonate de calcium ;
Carbonate de potassium ;
Cramique ;
Dioxyde de titane ;
Fluoro-carbone ;
Fluoropolymres ;
Fullerne ;
Latex ;
Or ;
Oxyde daluminium ;
Oxyde de crium ;
Oxyde de zinc ;
Oxyde de zirconium ;
Platine ;
Rsine acrylique ;
Silicate daluminium ;
Silice.
La rpartition des usages de ces 246 produits disponibles sur le march franais en 2008 est
rsume dans les Figure 10 et Figure 11. II convient de considrer avec prudence cette
hirarchisation, compte-tenu du caractre non exhaustif de linventaire.
La catgorie applications multiples regroupe les produits intermdiaires destins la
production de biens de consommation dont seules les multiples catgories dapplications (par
opposition aux produits finis) sont identifies. De fait le poids de cette catgorie vient encore
relativiser ce recensement.
La rpartition des mmes produits en fonction cette fois-ci du type de matrice conditionnant le
nanomatriau dans le produit fini (Figure 11) rvle lampleur de limprcision des indications
accompagnant la description de ces articles commerciaux. En effet, pour environ le quart des
produits identifis (24 %), ce critre est indtermin.
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29
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17
16
17
1
Figure 10 : Nombre de produits finis par domaine application (march franais, 2008)
104
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29
5
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Les proprits des nanomatriaux varient selon leur composition chimique, leur taille, leur surface
spcifique, ltat de surface, ou encore la forme de la nanoparticule considre, etc. De plus,
chaque nanomatriau peut tre dot dune ractivit ou dun comportement diffrent selon la
formulation et la matrice du produit fini considr qui le contient. Ainsi, pour ces raisons, il est
apparu peu raliste de travailler sur une famille de produits (i.e. : les crmes solaires) et le groupe
de travail a donc choisi de considrer une slection de rfrences commerciales (un type et une
marque de produit bien prcis), chacune ayant une formulation ou une matrice diffrente et unique.
La mthodologie associe la slection de ces rfrences commerciales est la suivante : sept
nanomatriaux dintrt, parmi les plus utiliss (en termes de nombre dapplications
commerciales), ont dabord t slectionns dans le recensement :
Oxyde de titane ;
Argent ;
Silice ;
Oxyde de crium ;
NTC ;
Oxyde de zinc ;
Fullernes.
Figure 12 : Distribution de la nature chimique du nanomatriau parmi les 7 types retenus en fonction
des domaines dapplication (march franais, 2008).
Trois catgories de produits, juges dintrt par le groupe de travail dans le cadre de
lexposition/dispersion des nanomatriaux, ont alors t slectionnes pour chaque nanomatriau
cit ci-dessus. Un ensemble suffisamment large a en effet permis aux experts de raliser une
slection des produits finis les plus pertinents tudier pour raliser une analyse du risque.
Llaboration de cette prslection na pas donn lieu un cadrage mthodologique rigide de
hirarchisation ou de slection. En effet, lensemble des choix effectus sest principalement bas
sur la disponibilit des donnes et donc la possibilit de construire un scnario dexposition pour le
produit fini considr.
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Par la suite, une prslection de produits finis contenant un ou plusieurs des sept nanomatriaux
dintrt cits ci-dessus a t ralise. Afin de raliser ensuite une valuation des risques, quatre
produits finis ont ensuite t slectionns sur la base des critres suivants :
les donnes relatives au produit fini sont accessibles, sa prsence est valide dans le
recensement ;
La slection des produits finis aurait pu tre ralise en considrant les tonnages associs la
fabrication de ces produits, de manire cibler les utilisations a priori majeures et donc les plus
proccupantes. Le RIVM, qui a publi un rapport en 2009 intitul Exposure to nanomaterials in
consumer products (RIVM, 2009), a tudi quatre rapports danalyse de march publis entre
2006 et 2008. Le but principal tait didentifier les produits pertinents usage grand public
contenant des nanomatriaux manufacturs. Les donnes issues de ce travail de synthse, non
chiffres, sont des estimations. Ainsi, les donnes de consommation et de production ont t
estimes par catgories de produits. Cependant, aucune information sur des produits spcifiques
ou encore sur des rfrences commerciales prcises nest disponible dans ce rapport. Par
consquent, le mode de classification des catgories de produits en fonction des masses globales
de nanomatriaux produites annuellement associes ne prend pas en compte les spcificits des
produits finis telles que les concentrations du ou des nanomatriaux intgrs. Une telle
hirarchisation ne peut donc pas rendre compte elle seule de la pertinence de lexposition un
article.
La faible accessibilit aux donnes propres des rfrences commerciales prcises rend la
priorisation des produits par rapport aux critres principaux pour lvaluation de lexposition
difficile, voire impossible. Le choix des produits finis faisant lobjet dtudes dtailles a t alors
arrt aprs une rflexion collective du groupe de travail. Enfin, il faut noter que, dans le cadre de
cette tude, les donnes de march viennent conforter la slection qui sest faite sur les critres
prcdemment voqus en dbut de chapitre.
20
Certaines informations rvles par le producteur du produit impliquant ncessairement des proprits de
structure nanomtrique (par exemple importantes surfaces massique mesures pour des poudres mesures
par BET) sont considres comme des revendications dduites du nanomatriau
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produit D : produit amont et non fini, il sagit dun ingrdient silice, de marque D1, dans la
catgorie alimentation . La voie dexposition considre est la voie orale. Cette gamme
de nano-silice constitue un produit intermdiaire destin tre incorpor, par un client
transformateur, un sucre de table. La proprit attendue est celle dantimottant 21.
On remarquera que le choix des nanomatriaux effectu se montre cohrent avec ceux faisant
lobjet dune attention particulire de la France dans le cadre des travaux actuels de lOCDE sur
les tests de scurit sanitaire et environnementale pour des chantillons de nanomatriaux
manufacturs22.
Afin de complter les informations disponibles dans la littrature, des auditions ont t organises
avec les industriels concerns. La nature des informations demandes est spcifie dans le
document support (Annexe 2) remis aux industriels sollicits.
Ainsi, le producteur C1 a t auditionn le 21 septembre 2009 et le producteur D1 le 25 septembre
2009.
21
22
La France parraine les essais de scurit pour le dioxyde de titane (en partenariat avec lAllemagne) et la
silice (en partenariat avec lunion europenne) et contribue ces tests pour largent.
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A prudent approach to Nanotech Environmental, Health, and Safety Risks (Lux Research)
Le cabinet de consultants Lux Research a labor un outil cl en main simple et rapide
permettant lvaluation qualitative du risque nano-spcifique dun produit fini sur lensemble de son
cycle de vie. Reprenant le cadre standard des valuations de risques sanitaires, le niveau de
risque dun produit est dfini partir du niveau de danger intrinsque du nanomatriau et du
niveau dexposition/dispersion durant le cycle de vie du produit fini.
Dans le dtail, le niveau de danger, caractris par une chelle trois degrs (faible, moyen et
lev) se rapporte directement au type de nanomatriau employ. La classification de ce niveau
est prdtermine suivant plusieurs critres dclars par les auteurs.
De manire identique, la cotation du niveau dexposition, toujours dans un rfrentiel trois
chelons (faible, moyen et lev), est prdfinie en fonction de la catgorie de produit, pour
chacune des tapes du cycle de vie de ce produit (production / utilisation / fin de vie). Un certain
nombre de critres est prcis pour estimer ces niveaux dexposition.
Le niveau de risque nano-spcifique du produit, toujours dfini en trois niveaux (faible, moyen et
lev), provient de la combinaison des niveaux de danger et des niveaux dexposition estims
dans les tapes prcdentes. Le rsultat, sous forme de tableau croisant le type de nanomatriau
avec le type dapplication et intgrant un code couleur intuitif, aboutit une prsentation
schmatique des risques. Cet aspect synthtique rend la prsentation particulirement adapte
la lecture comparative des risques en fonction des produits.
Cependant, bien que la simplicit dutilisation soit vidente, les experts regrettent labsence de la
considration du devenir du produit chaque tape de son cycle de vie. En effet, comme indiqu
ci dessus (cf. chapitre 3), les nanomatriaux injects dans la matrice dun produit peuvent voluer
durant la vie de ce produit. Les nanomatriaux mis (disperss dans lenvironnement et auxquels
est expose la population), et donc leur toxicit, peuvent alors diffrer des nanomatriaux initiaux.
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Par consquent, une valuation de la toxicit devrait tre idalement ralise pour chacune des
tapes du cycle de vie. Sajoute cela que la toxicit dun nanomatriau peut dpendre de
nombreux facteurs dpendants ou non du type mme de nanomatriau (cf. 59 paramtres OCDE,
Annexe 8).
Dautres questions mthodologiques se posent, notamment la non-diffrentiation entre risques
pour lHomme et risques pour lEnvironnement, ou encore, comment traiter les produits contenant
plusieurs types de nanomatriaux ?
Enfin, plusieurs interrogations subsistent quant aux cotations prdfinies par les auteurs. Dune
part, les critres lists pour ces valuations sont trs gnraux et ne semblent pas exhaustifs (leur
pertinence et leurs poids ne sont pas expliqus dans le document fourni). Dautre part, les
mthodes permettant daboutir ces cotations (danger et exposition) partir des critres voqus
ne sont pas explicites. De mme, le procd dvaluation du risque global en fonction des
cotations proposes nest pas dcrit. Ces diffrents points interdisent lactualisation des
paramtres de cotation avec lavance des connaissances scientifiques (ce document a t publi
en 2005) et lextension des catgories employes (nanomatriaux et types dapplications) pour
adapter loutil en tant que tel notre problmatique.
Grille de prcaution pour les nanomatriaux synthtiques (FOPH-FOEN)
Cette grille construite par les offices fdraux suisses de la sant publique (FOPH) et de
lenvironnement (FOEN) permet destimer et de distinguer les risques nano-spcifiques dun
produit contenant des nanomatriaux manufacturs pour les travailleurs (risques professionnels),
les consommateurs et lenvironnement.
Le principe propos par la grille consiste combiner les scores associs chacun des critres
considrs laide dune formule afin daboutir un score de risque. Les diffrents risques
(employ / travailleur / environnement) sont ensuite caractriss en fonction des scores obtenus :
soit le risque nano-spcifique peut tre considr comme faible et la situation ne requiert pas
dtudes de risques complmentaires, soit le score de risque nano-spcifique dpasse le seuil
daction et des dmarches supplmentaires sont ds lors engager (tudes de risques
complmentaires, actions de rduction des risques, etc.).
Une des particularits de ce modle rside dans lintervention dun score relatif ltat des
connaissances pour valuer le niveau de risque encouru. Le calcul de scores partir de scnarios
dit normaux mais aussi partir de scnarios pire cas en constitue une autre particularit
intressante.
Cet outil repose sur des bases mthodologiques solides, cela pour plusieurs raisons. Tout dabord,
la grille sapparente un questionnaire rponses fermes, c'est--dire que la rponse apporte
chaque critre dvaluation nest pas subjective mais guide par un jeu de scores dpendant de
seuils quantitatifs se rfrant des lments dinformation rcents (publication en 2008). Ces
scores sintgrent ensuite dans un modle dont la cohrence (pondration de ces scores,
cohrence des units, etc.) a t vrifie par un expert extrieur statisticien. Enfin, la grille est
accompagne dun document explicatif complet pour son utilisation.
Cependant, des limites cet outil sont aussi constates, notamment concernant lestimation des
effets potentiels des nanomatriaux. En effet, le score figurant le niveau de ces effets potentiels
est calcul uniquement en fonction de deux critres pour lensemble du cycle de vie :
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Figure 13) et inclut pour cela des lments daide la gestion (valuation de lefficacit de la
gestion des risques, cots et dures prvisibles, cadre mthodologique des actions mener en
fonction de lanalyse de la situation).
La partie du document affecte lvaluation des risques sanitaires et environnementaux dtaille
lensemble des paramtres considrer pour chacune des phases de lvaluation des risques
pour une tape du cycle de vie :
valuation de lexposition.
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Ces donnes sont classes dans des sous-groupes en 2 catgories : celles appartenant
lensemble des donnes indispensables renseigner et les donnes supplmentaires permettant
daffiner lvaluation. Ce modle dvaluation des risques suppose que, chaque tape du cycle
de vie soit associ un jeu de donnes. Il est par consquent ncessaire de runir ces donnes
pour chaque tape du cycle de vie du produit afin daboutir une valuation correcte des risques
pour le cycle de vie entier.
Pour plus de flexibilit du document face aux multiples situations et usages possibles, ce
rfrentiel fournit un canevas de lvaluation des risques et non un algorithme prt lemploi .
Le type de donnes attendues nest pas prcis, les aspects quantitatifs et la manire de traiter les
donnes sont laisss lapprciation de lutilisateur. Il sagit donc dun outil destin des
spcialistes de lvaluation des risques appliqus aux nanomatriaux.
Il faut prciser ici que cet outil est utilis pour des produits contenant une substance dont peine
10 % (en masse) peut tre considre de taille nanomtrique 23.
23
http://www.edf.org/documents/6552_TiO2_Summary.pdf
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simplifie (petit nombre de niveaux). Cette classification peut seffectuer sur la base dun score de
risque calcul de manire explicite partir dun nombre de paramtres suffisant caractrisant
distinctement le niveau de danger et le niveau dexposition associs chacune des tapes
tudies du cycle de vie du produit.
Ainsi, lidal serait de concevoir un outil capable de considrer lensemble des paramtres lists
par le document Nano Risk Framework dans un cadre mthodologique apparent celui propos
par la grille de cotation des offices fdraux suisses (questionnaire dont les rponses sont
associes un score) et dont le rsultat final, prsent sous forme synthtique et intuitive proche
de celle du document Lux Research, se rapporte lintgralit de la partie du cycle de vie tudi.
Les documents tudis ne correspondant pas individuellement ces attentes, le groupe dexperts
a dcid dexaminer la faisabilit dune mthodologie conciliant les avantages identifis de chacun
dentre eux.
Avantages
Inconvnients
Communication, restitution
Plus destin aux experts
Lux Research
(2005)
A prudent approach
to Nanotech
Environmental,
Health, and Safety
Risks
FOPH-FOEN (2008)
Grille de prcaution
pour les
nanomatriaux
synthtiques
Dupont (2007)
NanoRisk
Framework
Dans cette vise, deux travaux complmentaires ont t simultanment accomplis. Le premier a
consist tablir la liste des paramtres indispensables prendre en compte dans le modle de
cotation, le second concevoir les bases dun algorithme permettant de calculer correctement le
score de risque partir des rponses apportes pour chacun des paramtres du modle.
Rfrentiel des paramtres considrer
Plus quune simple numration des paramtres indispensables lvaluation des risques, le but
de ce rfrentiel revient aussi dfinir la nature des rponses attendues, notamment en mettant
ces paramtres en correspondance avec les tests standardiss de lOCDE (lignes directrices)
permettant de les obtenir, ceci afin de pouvoir alimenter correctement la grille de cotation.
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LAfsset participe aux groupes internationaux chargs de dfinir les fondements de lvaluation des
risques sanitaires et environnementaux spcifiques aux nanomatriaux. Parmi ceux-ci, un groupe
de travail scurit des nanomatriaux manufacturs a t mis en place en 2006 dans le cadre
de lOCDE. La construction dune base de donnes comportant 59 tests incluant la caractrisation,
la toxicit, lcotoxicit de 14 nanomatriaux manufacturs constitue lun des travaux la charge
de ce groupe. A ce titre, un document de travail dfinissant les paramtres concerns a t publi
rcemment 24, ladaptation des tests habituellement pratiqus sur des substances chimiques aux
nanomatriaux tant encore discute (voir Annexe 8).
Ainsi, lensemble des paramtres, issus du croisement des donnes de ce document de travail de
lOCDE avec celles listes dans le document Nano Risk Framework et compltes par les experts
du groupe de travail Afsset, sont rpartis en plusieurs items :
caractrisation du nanomatriau ;
24
http://appli1.oecd.org/olis/2008doc.nsf/linkto/env-jm-mono(2008)13-rev
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Enfin, les prochains rsultats issus des travaux de lOCDE sur plus de 14 nanomatriaux
apporteront certainement des lments dinformation cruciaux ces rflexions. Il apparaitrait au
final judicieux de reprendre ces travaux la lumire de donnes futures pour concevoir terme un
outil abouti.
Lorsquaucune donne nest disponible, un scnario appel pire-cas est dfini partir
dhypothses conduisant une maximisation de lexposition, en restant dans le cadre dutilisation
du produit pour lequel il est destin.
Le contexte de lvaluation des risques lis aux nanomatriaux est caractris par un niveau
particulirement lev des incertitudes. Afin de rduire le niveau dincertitude associ aux rsultats
de cette expertise, il a t dcid de restreindre le champ des valuations des risques la seule
exposition majoritaire consquente lutilisation du produit concern et de ne traiter que la voie
dentre la plus expose. Ainsi, lexposition indirecte25 humaine aux nanomatriaux manufacturs
disperss dans lenvironnement conscutive lutilisation des produits ne sera pas traite dans le
cadre de lvaluation des risques pour lHomme. Seule lidentification des milieux rcepteurs
contamins sera aborde.
25
L'exposition directe est dfinie comme dcoulant du contact direct avec, ou proximit immdiate, avec le
produit chaque tape de son cycle de vie, sciemment ou non. L'exposition humaine directe se distingue de
l'exposition humaine indirecte en ce qu'aucune voie importante dans l'environnement n'intervient entre le
point dmission et le point d'exposition humaine.
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valuation du risque.
Enfin, un bilan gnral ralis sur la base des quatre cas examins est prsent la fin de ce
chapitre.
Malgr le manque de connaissances vident lheure actuelle en matire de toxicologie et
dcotoxicologie des nanoparticules, il est communment admis que ces objets se distinguent des
substances particulaires habituelles (non nanomtriques) en ce qui concerne leurs interactions
avec le vivant. Ainsi, pralablement aux valuations de risques entreprises dans ce rapport, trs
spcifiques aux produits cibls, sont rappeles des gnralits en termes deffets biologiques
potentiels des nanoparticules (considres comme essentielles la comprhension des
problmatiques didentification des dangers en toxicologie et cotoxicologie).
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que les voies de distribution et d'limination peuvent tre schmatises telles que le montre la
Figure 14 ci-dessous :
Figure 14 : Bio cintiques de particules de taille nanomtrique (daprs Oberdorster G., 2005).
Ces tudes de toxico cintique devraient permettre galement de mieux comprendre les
mcanismes de dposition et de clairance, les effets pulmonaires, les phnomnes de
translocation vers des organes secondaires etc.
Comme le prcise le rapport de lIRSST (IRSST,2008) sur les nanoparticules : Elles peuvent
donc se retrouver dans le sang en ayant franchi les membranes pulmonaires ou gastrointestinales, se distribuer dans les diffrents organes et saccumuler dans certains sites
spcifiques. .
Parmi les mcanismes de toxicit des nanoparticules, on retrouve des phnomnes impliquant la
perturbation de la chane respiratoire mitochondriale conduisant la production despces
ractives de loxygne (ERO) et linterruption de la synthse dATP. Ces effets peuvent entraner
leur tour des lsions de lADN et larrt du cycle cellulaire, pouvant conduire potentiellement
une cancrognicit. La production despces ractives de loxygne a t clairement identifie
comme un mcanisme daction toxique des nanoparticules sur des cellules eucaryotes, mais
dautres mcanismes peuvent galement tre impliqus. Les principaux mcanismes cytotoxiques
et gnotoxiques identifis ou probables des nanoparticules sont rsums dans la Figure 15 cidessous :
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Exposition aux
particules
Gnotoxicit
Prolifration
Effets primaires
Apoptose
Arrt du cycle cellulaire
Formation de
tumeurs
Rparation ADN
Ainsi, des effets gnotoxiques primaires directs et indirects mais galement des effets
gnotoxiques secondaires peuvent survenir :
1. Effets primaires directs
les nanoparticules pntrent dans le noyau et interagissent directement avec lADN ;
Les nanoparticules produisent des radicaux libres induisant des lsions de lADN ou perturbent la
sgrgation des chromosomes pendant la mitose. En effet, du fait de leur gamme de taille
nanomtrique, il est communment admis que les nanoparticules sont capables dinteragir et
ventuellement dinterfrer avec des constituants cellulaires de dimension comparable tels que les
nuclosomes, les microtubules, les filaments dactine et les centrosomes. Ainsi, linterfrence avec
ces structures peut mener un dysfonctionnement de la division cellulaire et perturber le trafic
cellulaire (Gonzalez L., 2008). Chen et al. ont montr que l'incorporation de nanoparticules de
silice dans le noyau cellulaire a induit la formation d'agrgats de protines intranuclaires qui a
entran linhibition de la rplication, de la transcription, et de la prolifration cellulaire (Chen M.,
von Mikecz A.,2005).
2. Effets primaires indirects
Les particules entranent :
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Trs rcemment, un autre mcanisme daction gnotoxique impliquant des cascades de ractions
a t identifi in vitro. Des nanoparticules de CoCr ont t mises en contact avec une barrire de
cellules confluentes (cellules BEWO) et de fibroblastes humains en dessous, les fibroblastes tant
les cellules cibles. Les nanoparticules induisent des lsions mitochondriales dans la couche
suprieure de la barrire BEWO, les ions Co2+ mimant les conditions hypoxiques. Ces deux
conditions entranent une libration d'ATP qui peut passer soit via des canaux (rcepteurs P2X
activit intrinsque de canal ionique, canaux pannexine) ou jonctions, (jonctions communicantes
connexine) pour aller agir sur des rcepteurs P2Y (coupl des protines G) des cellules de la
deuxime couche, soit passer directement travers les jonctions communicantes connexine
dans la deuxime couche de cellules. Dans la deuxime couche de la barrire, lATP (directement
ou via lactivation des rcepteurs P2Y) entrane une augmentation du calcium intracellulaire et une
scrtion subsquente dATP. Cet ATP provoque alors des lsions de l'ADN des fibroblastes
humains via leurs rcepteurs P2 (Bhabra G., 2009).
3. Effets secondaires
Ces effets sont lis linflammation, via des composs oxydants provenant notamment de
lendocytose et/ou de la phagocytose des nanoparticules. En effet, les nanoparticules peuvent
entraner du stress oxydant et des rponses inflammatoires qui peuvent galement induire
potentiellement des lsions de l'ADN (Singh N., 2009). Ces mcanismes indirects sont rsums
dans la figure ci-dessous :
Figure 16 : Mcanismes indirects qui peuvent conduire la gnotoxicit (daprs Singh N., 2009).
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Des modles inappropris peuvent gnrer des rsultats non pertinents, non extrapolables au
vivant. En revanche, un modle cellulaire bien choisi (co-cultures, cellules primaires fonctionnelles
etc.) avec des conditions exprimentales dfinies et matrises, permettrait de mettre en vidence
des mcanismes d'action toxique spcifiques. Si lapparition de lsions oxydantes de l'ADN, de
facteurs d'inflammation, etc. tait relie aux effets observs, il conviendrait de dterminer sils sont
exclusifs ou non.
6.2.2 cotoxicologie
Les nanoparticules manufactures sont susceptibles de se retrouver dans tous les compartiments
physiques (air, eau, sols et terme sdiments) et/ou biologiques de lenvironnement.
Les voies dexposition des organismes aux nanoparticules diffrent selon les espces
considres. Les procaryotes comme les bactries pourraient se voir protgs contre lentre de
nanoparticules lintrieur de la cellule, puisque leur paroi cellulaire ne possde pas les
mcanismes de transport de particules collodales. Cependant, ladsorption des nanoparticules
la surface de la paroi de ces organismes nexclut pas des effets toxiques de ces particules. En
revanche, chez les eucaryotes, la situation est diffrente puisquils sont dots de mcanismes
dinternalisation (endocytose, phagocytose) de nano et micro particules (Moore M.N.,2006). Les
organismes aquatiques peuvent tre exposs aux nanoparticules par ingestion directe ou par leur
entre travers les cellules pithliales (ex. : la peau ou les branchies pour les poissons). Les
organismes du sol, comme les vers, sont galement exposs aux nanoparticules par contact direct
et/ou ingestion de particules du sol.
La destine environnementale et lcotoxicit des nanoparticules est influence par un grand
nombre de facteurs comme la taille des particules et leur distribution, la solubilit, ltat
dagrgation, la nature chimique ou minralogique, la cristallinit, la surface spcifique, la charge
de surface, la concentration (masse et nombre), la structure ou encore la prsence dimpurets
(Tiede K., 2009). Ainsi, certains travaux ont test linfluence de ces facteurs sur lcotoxicit des
nanoparticules. Depuis ces cinq dernires annes, lcotoxicologie des nanoparticules a reu une
attention croissante mais ces travaux ont t conduits presque exclusivement avec des
nanoparticules synthtises en laboratoire. De plus, les tudes concernant des expositions des
concentrations ralistes dun point de vue environnemental sont rares. Lune des raisons majeures
pour expliquer ce manque de donnes est la forte demande de tests sur des cellules, la difficult
de dtection et de quantification des nanoparticules manufactures dans des matrices complexes
comme les milieux aquatiques (eaux douces, marines, estuariennes), les sdiments et les sols.
Dans ces environnements, une multitude de substances complexantes sont prsentes, qui, non
seulement rendent la dtection et la quantification difficiles, mais affectent galement la mobilit et
les proprits de surface des nanoparticules, qui par voie de consquence conditionnent leur
transport et leur toxicit vis--vis des organismes. Il est donc indispensable dans les tudes de
toxicit de caractriser prcisment lexposition. Des revues rcentes de la littrature discutent des
techniques, actuellement disponibles, de dtection et quantification des nanoparticules dans
lenvironnement (Burleson D.J., 2004; Lead J.R., Wilkinson K.J.,2006; Oughton D.H., 2008).
Les effets directs de la toxicit des nanoparticules sur les organismes sont principalement dus
leur composition chimique et leur ractivit de surface. Cette ractivit de surface est due
limportance des atomes de la surface par rapport aux atomes du cur et des proprits
nano particulires (Auffan M.A., 2009). Les effets associs la taille nanomtrique sont les
suivants : augmentation du produit de solubilit par rapport au mme matriau lchelle supra
nanomtrique, libration dions toxiques (par exemple des mtaux) ou encore production
despces ractives de loxygne (ERO) associes des transferts dlectrons (paire lectrontrou) extrmement rapides. De plus, les nanoparticules peuvent galement servir de vecteurs
dautres polluants, augmentant ou diminuant la biodisponibilit dautres substances toxiques ou
encore interagir avec des protines telles que des enzymes.
Les travaux de la littrature rapportent des effets cotoxicologiques varis des nanoparticules chez
diffrentes espces bactriennes, vgtales, animales, terrestres et/ou aquatiques. Par
lintermdiaire dexpositions dorganismes des nanoparticules en laboratoire, de tests (par
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exemple des bioessais OCDE) dcotoxicit aigu, chronique et/ou sub-chronique, diffrents effets
critiques ont t mesurs : mortalit, inhibition de la croissance, impact sur le dveloppement et la
respiration, stress oxydant (augmentation des concentrations des biomarqueurs de stress
oxydants : catalase, Super Oxyde Dismutase, GST), etc.
Des effets positifs de lexposition des organismes des nanoparticules ont galement t
rapports dans la littrature. Par exemple, le dioxyde de titane (TiO 2) sous sa forme nanomtrique
induit la germination et la croissance de certaines plantes (Zheng L., 2005). Ces effets positifs
pourraient tre dus aux proprits antimicrobiennes qui augmenteraient la rsistance des plantes
au stress. Certaines nanoparticules pourraient galement tre susceptibles de squestrer les
nutriments leur surface et servir ainsi de rservoir nourriture pour les organismes. Les
algues vivant dans des environnements extrmes prsentent la capacit daccumuler la surface
de leur paroi des lments minraux indispensables leur survie dans des milieux de faible
disponibilit alimentaire (Luetz-Meindl U., Luetz C.,2006). Ainsi, les nanoparticules contenant des
lments essentiels comme le cuivre ou le zinc semblent particulirement appropries pour
suppler un manque de nutriments.
27
28
Planches dcouper,
29
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Figure 17 : Vue par MEB de nanoparticules dargent intgres des chaussettes (Benn T.M.,
Westerhoff P.,2008).
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25 et 250 nm. Les rsultats danalyse de largent intgr au produit, obtenus laide de 2
mthodes standards de lASTM30 (D1348 et D3516), mentionns sur le site internet de vente de
larticle, indiquent une puret du nano-argent de lordre de 99,9 % ainsi que lexistence de
concentrations rsiduelles en mtaux lourds31.
Tableau 3 : Analyse des masses et concentrations massiques en nano-argent dans diffrents
chantillons de produits (daprs T.M Benn. et P.Westerhoff, 2008)
Masse d'argent
par masse de
produit
Masse
moyenne de la
chaussette
Masse cumule
d'argent mis aprs
4 lavages de 24 h
(g / g)
(g)
(g)
(g)
1a
25,8
29,3
756
836
1b
57,8
27,3
1 578
1 845
2,1
28,6
60
NR*
1 358,3
23,0
31 241
165
35,9
58,6
2 104
NR*
NR*
24,2
NR*
NR*
0,9
21,9
20
19
Echantillon
Les travaux raliss par Benn et al. (Benn T.M. et Westerhoff P., 2008) sur 6 paires de
chaussettes comportant la mention commerciale nano-argent rapportent des masses de nanoargent contenues dans ces articles comprises entre 20 et environ 30 000 g. Les concentrations
massiques sont donc comprises entre 1 et 1 400 g/g de chaussette (cf. Tableau 3). Une tude
plus rcente (Geranio L., 2009) portant plus largement sur des textiles incorporant des
nanoparticules dargent (dont des chaussettes anti-odeurs), a mis en parallle la teneur dargent
intgr au produit avec la technologie dincorporation de cette substance, sous forme
nanoparticulaire ou non, au sein du textile. La teneur maximale en argent a t constate pour des
chaussettes commercialises (21,6 mg/g), produit pour lequel largent nest en ralit pas sous
forme nanoparticulaire (couches dargent de plusieurs micromtres dpaisseur sur la fibre
obtenue par dposition lectrochimique). Pour des chaussettes, la concentration maximale
observe pour largent apparemment sous forme nanoparticulaire (nanoparticules intgres au
coton) est de 2,66 mg/g. Lexamen des 7 autres textiles modifis tudis a rvl des
concentrations sensiblement infrieures (de 3 390 g/g).
La proportion massique calcule partir des dclarations du producteur du produit slectionn,
dans le cadre de ce scnario, (0,3 % massique de nanoparticules dargent intgr aux fibres de
coton composant 80 % du produit) est la suivante :
80 % x 0,3 % = 0,24 % soit une concentration massique de 2,4 mg/g.
30
31
Arsenic (< 0,06 ppm), cadmium (< 0,05 ppm), mercure (< 0,05 ppm) et plomb (0,3 ppm)
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Cette concentration se situe donc au-del de la limite suprieure des teneurs nominales observes
dans les travaux de Benn et al., mais se montre tout fait cohrente avec la concentration
maximale en argent nanoparticulaire constate pour un produit commercial quivalent. Ce produit
savre donc tout fait adapt un scnario maximisant lexposition, tout en restant dans le cadre
de lusage pour lequel il est destin.
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utilisation quotidienne et continue (24 h sur 24, 7 jours sur 7, toute lanne, pendant la vie entire)
de ce produit.
En labsence de donnes sur les quantits totales dargent intgr au produit tudi, nous
estimerons ce paramtre partir de la concentration massique dargent dans le produit (2,4 mg/g).
La masse totale du produit ntant pas connue, nous nous reportons ltude cite ci-dessus
(Benn T.M. et Westerhoff P., 2008). Nous considrerons la masse la plus leve rfrence dans
le Tableau 3, soit 60 g. Suivant cette hypothse, la masse totale de nano-argent contenue par
chaussette est environ :
2,4 x 60 = 144.10-3 g
Lagence de protection de lenvironnement des tats-Unis (US EPA) fournit des surfaces
moyennes de pieds adultes32 : 0,122 m pour la femme adulte et 0,137 m pour lhomme adulte,
par pied. Pour indication, nous considrons lexposition une paire de chaussette par individu
consommateur (2 pieds). Toujours dans un souci de maximaliser lexposition, nous tiendrons
compte des donnes de plus faibles surfaces (et donc de concentrations surfaciques plus
leves). En considrant que lensemble des nanoparticules dargent disponibles dans le produit
est rparti uniformment en contact avec la peau, alors la concentration surfacique moyenne en
particules dargent est de :
(2 x 144.10-3) / (2 x 0,122) = 1,18 g.m-2 pour une femme ;
(2 x 144.10-3) / (2 x 0,137) = 1,05 g.m-2 pour un homme.
Malgr les nombreuses incertitudes lies ce scnario, nous pouvons considrer que lexposition
ou la probabilit dexposition du consommateur aux nanoparticules dargent ne peut pas tre
nglige.
32
The relevance for Food Safety of Applications of Nanotechnology in the Food and Feed Industries - 2008
http://www.lenus.ie/hse/handle/10147/69382
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Les quelques travaux mens sur ce sujet (Benn T.M. et Westerhoff P., 2008; Geranio L., 2009) et
les nombreuses dclarations commerciales suggrent de plus une large htrognit de
comportement des articles disponibles pour cette gamme de produits durant leur usage. Ainsi,
certains fabricants garantissent une prservation des proprits anti-odeurs pour des conditions
particulires dentretien (proprits garanties jusqu 20 lavages, sils sont effectus la main
des tempratures infrieures 30C) tandis que dautres affirment une persistance plus longue de
ces proprits pour des conditions dusage plus standards (proprits garanties jusqu 50 lavages
effectus en machine jusqu des tempratures de 60C). Il convient de souligner que ce dernier
produit ne contient pas de largent sous forme nanoparticulaire mais intgre des sels dargent. Cet
exemple vient complter la difficult rpondre de faon gnrique la question de lexposition
dun consommateur utilisant un produit revendiquant intgrer du nano-argent.
Des chercheurs ont test 9 textiles et ont trouv que le pourcentage total dargent perdu aprs
lavage variait de 1 % 45 %. Certaines particules ne sont en effet que faiblement attaches la
fibre, quand d'autres y sont intgres34.
Dans la pratique, les travaux de Benn et al. (Benn T.M. et Westerhoff P., 2008) confirment ces
carts de comportement (voir Tableau 3) et, ainsi, les incertitudes quils impliquent dans
lvaluation des impacts environnementaux. Il convient de souligner, comme les auteurs de ces
travaux, que la quantit dargent perdue par lavage nest pas corrle la quantit initialement
prsente. Dautres travaux35 indiquent quaprs seulement 2 4 lavages, lensemble de largent
prsent avait t lessiv et tait prsent dans les eaux de lavage (produit contenant initialement un
maximum de 1 360 g dargent par gramme et rejetant prs de 650 g dargent dans 500 ml deau
distille). Enfin, point important, largent ainsi mis dans les eaux de lavage se prsente aussi bien
sous forme solide particulaire (Ag0) que sous forme ionique.
Les autres travaux ayant cherch caractriser laltration de ces textiles modifis soulignent
galement cette forte diversit de comportement observe entre les multiples produits tudis.
Parmi ces tudes, Geranio et al. soulignent le rle dominant de la contrainte mcanique dans le
phnomne daltration de ces produits (perte des nanoparticules dargent initialement intgres
aux fibres). Ainsi, pour un lavage reprsentatif dun cycle en machine laver (et non par simple
trempage comme dans les travaux de Benn et al.), la plupart de largent initialement intgr au
produit est retrouv en solution (Geranio L., 2009).
Pour construire un scnario dexposition de type pire cas , et maximiser les missions dargent
de telles chaussettes, nous considrerons que lensemble de largent initialement intgr au
produit (144 mg par chaussette) est au final libr dans leau de lavage. Comme soulign
prcdemment, largent libr par ces textiles dans les compartiments aqueux se prsente comme
un mlange dargent sous forme nanoparticulaire (Ag0 mtallique) et dargent ionique, ceci
certainement en raison de la forte solubilit de largent nanoparticulaire.
Ne disposant pas de statistiques prcises concernant la consommation et lutilisation de ces
produits (frquence de lavage), nous poserons lhypothse raliste de lachat (et donc de la
consommation) de 10 paires de chaussettes nano-argent par consommateur et par an. La quantit
annuelle dargent disperse dans les eaux de lavage par consommateur est estime laide du
calcul simple suivant :
34
http://pubs.acs.org/cen/news/87/i40/8740notw6.html
35
http://www.up3project.org/documents/Silver%20washing%20out%20of%20nano-silver%20products.pdf
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Reprotoxicit :
Aucune donne sur le potentiel reprotoxique ou sur une ventuelle bioaccumulation dans le (ou
les) organe(s) cible(s) par exposition cutane nest disponible dans la littrature.
Gnotoxicit
Concernant lactivit gnotoxique, une seule tude est disponible dans la littrature; il sagit du test
du micronoyau in vivo sur moelle osseuse chez le rat ralis par voie orale. Ce test, qui a t
conduit selon la ligne directrice OCDE 471 et a suivi les recommandations de bonnes pratiques de
laboratoire, sest rvl ngatif avec une exposition systmique dmontre (Larese F.F., 2009;
Kim Y.S., 2008). En revanche, la forme chimique sous laquelle se prsente largent (Ag 0
nanoparticulaire ou argent ionique) na pas t dtermine.
36
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Si la gnotoxicit des nanoparticules dargent a t tudie in vitro par le test des comtes et dans
le test du micronoyau (Larese F.F., 2009; Asharani P.V., 2009), ces essais ont t effectus sur
des types cellulaires de diverses origines non reprsentatifs dune exposition cutane. Au cours de
ces essais, les nanoparticules dargent ont induit des lsions de lADN dpendantes de la dose
aussi bien dans le test des comtes (augmentation de la fragmentation de lADN) que dans le test
du micronoyau. Laugmentation significative de la fragmentation de lADN aprs traitement par des
nanoparticules dargent est rapporte galement par des mthodes non standard telles que la
mesure de la phosphorylation de la protine H2AX et le niveau de rgulation de la protine Rad5
qui indiquent directement ou indirectement la prsence de cassures double-brin de lADN.
Gnration dERO
Concernant la dtermination du potentiel de gnration despces ractives de loxygne ou de
lazote (ERO/ERA), linduction de stress oxydant et/ou de phnomnes inflammatoires, il apparat
clairement que les nanoparticules dargent induisent un stress oxydant in vitro qui contribue aux
modifications morphologiques cellulaires, au dysfonctionnement mitochondrial et laugmentation
de la gnration despces ractives de loxygne dune faon dose-dpendante, quelle que soit
leur taille (Larese F.F., 2009; Hussain S.M., 2005; Hsin Y.H., 2008; Carlson C., 2008; Arora S.,
2008; Arora S., 2009).
Les effets entrains par largent sous sa forme ionique (apoptose et/ou ncrose par arrt du cycle
cellulaire) sont galement constats avec largent sous sa forme nanoparticulaire. La prsence
clairement dmontre dagrgats lintrieur des mitochondries est implique dans la toxicit
mitochondriale et les lsions de lADN via la production despces ractives de loxygne (Arora
S., 2008 ; AshaRani P.V., 2009). Les nanoparticules dargent induisent donc des lsions
oxydatives dans la cellule par des mcanismes directs et peuvent galement induire des lsions
indirectes de lADN par formation despces ractives de loxygne lies des ractions
inflammatoires (Carlson C., 2008).
Il faut prciser que ces tudes ont utilis des cellules de diverses origines qui sont souvent loin
dtre reprsentatives dune exposition humaine, cutane de surcrot. Ces effets nont pas t
confirms in vivo sur le (ou les) organe(s) cible(s).
Discussion / Conclusion
Daprs les donnes publies, les nanoparticules dargent induisent une cytotoxicit par un
mcanisme qui semble identifi et principalement li au stress oxydant avec induction dapoptose
des doses faibles et de ncrose des concentrations leves, et qui pourrait tre attribu la
production despces ractives de loxygne.
Les rares tudes de gnotoxicit in vitro (tests des comtes et du micronoyau) dmontrent un
potentiel gnotoxique via des cassures double-brin de lADN des faibles concentrations au moins
dans le test des comtes (25 g/ml). A ce niveau de concentrations, la production despces
ractives de loxygne a t dmontre (Asharani P.V., 2009). Le rle des ERO dans la
gnotoxicit des nanoparticules dargent, provenant la fois des ions Ag2+ et de ltat
nanoparticulaire, apparat comme tant probable.
En effet, daprs Asharani et al. (Asharani P.V., 2009), il est possible que loxydation de surface
des nanoparticules dargent, au moment du contact avec le milieu de culture ou des protines du
cytoplasme, libre des ions Ag+ qui pourraient amplifier la rponse. Les ractions entre H 2O2 et les
nanoparticules dargent sont prsumes tre un des facteurs permettant la libration dAg+ in vivo
(les ions H+ tant prsents en abondance lintrieur des mitochondries dans lesquelles lefflux de
protons est lvnement principal dans la synthse dATP) :
2 Ag + H2O2 + 2H+ 2 Ag+ + 2H2O
Asharani et al. proposent un mcanisme possible de toxicit qui implique la perturbation de la
chane respiratoire mitochondriale par les nanoparticules dargent, conduisant la production
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dERO et linterruption de la synthse dATP, entranant son tour des lsions de lADN et larrt
du cycle cellulaire (voir figure ci-dessous). Les auteurs prcisent que si de nombreux travaux ont
port sur largent, trs peu encore ont port sur son volet nano . De plus, les auteurs constatent
que ltude des voies et efficacits de pntration dans le corps reste faire pour le nano-argent,
et que, de faon plus gnrale, ltude de la transposition des connaissances micro lchelle
nano reste produire.
In vivo, le test du micronoyau sur moelle osseuse par voie orale chez le rat est clairement ngatif.
Plusieurs hypothses peuvent tre formules sur la diffrence des rsultats obtenus dans des
essais in vitro et in vivo :
Concernant lexposition, mme si les rsultats de labsorption cutane sont plutt en faveur dun
accs trs faible la circulation systmique, un passage transcutan ne peut pas tre totalement
exclu. En termes dvaluation des dangers, il apparat donc prmatur de conclure, en raison du
caractre discutable et en nombre limit des donnes de gnotoxicit et dexposition. Mme si les
premires tudes sont en faveur dun risque systmique faible aprs exposition cutane pour une
peau saine, le manque de donnes empche de raliser une valuation du danger correcte
prenant galement en compte le risque local.
Comme le concluent galement Wijnhoven et al., ltude des voies et lefficacit de pntration
dans le corps restent documenter pour le nano-argent, ainsi que, de faon plus gnrale, ltude
de la transposition des connaissances micro lchelle nano (Wijnhoven S.W.P., 2009).
Afin dvaluer correctement lexposition, il faudrait
complmentaires, en particulier sur labsorption cutane :
donc
pouvoir
disposer
dtudes
in vitro sur des fragments de peau non congels en valuant galement le rsiduel dans
les cellules vivantes de peau, et/ou
in vivo avec caractrisation de largent (forme soluble ou nanoparticulaire).
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Ces tudes dabsorption par voie cutane devraient mesurer, dans la circulation sanguine et dans
les ventuels organes cibles, le niveau dabsorption de nanoparticules dargent inchanges ainsi
que le taux dions Ag+ librs partir des nanoparticules dargent. Si ces tudes de caractrisation
dmontraient que seules les nanoparticules dargent pntrent dans lorganisme, celles-ci
devraient tre considres comme une nouvelle entit. Concernant les organes cibles, une tude
de toxicit de 28 jours par voie orale a permis de mettre en vidence une augmentation
significative et dpendante de la dose de la concentration en argent dans tous les tissus analyss,
mais sans en connatre la forme (Kim Y.S., 2008). Aprs lestomac (exposition directe), les reins,
le foie et les poumons se sont rvls tre les organes les plus exposs. Le systme immunitaire
pourrait galement tre une autre cible des nanoparticules dargent (Wijnhoven S.W.P., 2009).
Dans tous les cas, si ces rsultats montraient une absorption importante, i.e. une dose interne
significative dans la circulation systmique, des tudes de toxicit (toxicit chronique, gnotoxicit,
etc.) seraient ncessaires pour tayer des conclusions. Paralllement, afin de dterminer un
mcanisme daction, des essais spcifiques pourraient tre raliss, comme par exemple le test
des comtes (qui sest rvl le plus sensible) sur le(s) organe(s) cible(s), avec et sans FpG
(dtection des lsions oxydatives de lADN) mais aussi le test du micronoyau, la dtermination de
la plodie, la dtermination du contenu en glutathion, lanalyse de la fonction mitochondriale, la
recherche des effets pro-inflammatoires (exemple : NF- b), des facteurs dinflammation (ex. :
dosage des cytokines tels que TNF-, IL6, MIP-1, , etc.), des enzymes anti-oxydantes
(ex. :catalase, SOD, GPX, etc.), etc.
Si labsorption se rvlait limite, il serait toutefois ncessaire dvaluer la gnotoxicit au niveau
de la peau en utilisant un systme dessai qui reprsente les cellules types de lorgane considr,
comme par exemple les modles dpidermes humains reconstitus.
37
http://ecb.jrc.ec.europa.eu/tgd/
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prvisibles dans lenvironnement), au moyen de ces modles, dans les compartiments aquatique
et sdimentaire seraient comprises entre 0,01 et 0,32 g / l ; 2 et 14 mg / kg, respectivement
(Blaser S.A., 2008 ; Tiede K., 2009). Les travaux de Yoon et al., (Yoon K.Y., 2007) ont montr
chez lespce Escherichia coli une plus faible concentration d'effets observs (LOEC) leve
(40 mg/l) en comparaison avec un certain nombre d'tudes plus rcentes. Mueller et Nowack
(Mueller N.C. et Nowack B., 2008) proposent un facteur de scurit de 1 000, ramenant la valeur
de la PNEC 40 g/l. L'tude de Luoma (Luoma, 2008) est en accord avec cette proposition
puisquelle a suggr que les concentrations de nanoparticules d'argent sont peu susceptibles
datteindre des valeurs suprieures 1 g/l quel que soit le compartiment de lenvironnement.
Toutefois, l'tude de Luoma citait des valeurs pour l'argent dissous, avec une LOEC 10 ng/l,
donc de plusieurs ordres de grandeur plus faible que dans ltude de Mueller et Nowack. Si l'on
considre (i) que toutes les nanoparticules d'argent modlises dans ltude de Mueller et Nowack
se retrouveront sous formes dargent dissous dans l'environnement, (ii) des valeurs de PEC
d'environ 80 ng/l, pouvant atteindre environ 1 g/l tel que dcrit par Mueller et Nowack et Luoma;
(iii) que 10 ng/l reprsente la valeur de la LOEC pour largent dissous, il est possible d'en conclure
des valeurs de PEC / PNEC > 1. Il existe bien sr des incertitudes dans ces calculs, en raison du
manque actuel de connaissances. Dans ce scnario, les nanoparticules d'argent elles-mmes
reprsentent un danger limit car elles se dissolvent rapidement, mais l'argent dissous engendre
des risques spcifiques qui peuvent tre estims en utilisant la procdure standard d'valuation
des risques. Un deuxime scnario pourrait tre le suivant : les nanoparticules d'argent ne se
dissolvent pas rapidement et dans ce cas, lvaluation des risques se trouve limite par les
incertitudes lies la forme nanoparticulaire de largent.
Il est bien connu que largent, sous la forme de cation soluble Ag+, est extrmement toxique vis-vis des bactries notamment, do son utilisation en tant quagent bactricide. Il fait partie
galement des mtaux les plus toxiques vis--vis des plantes, des invertbrs ou encore des
poissons (Luoma, 2008).
Les nanoparticules dargent qui sont incorpores dans de nombreux produits industriels
(vtements, nourriture, plastiques, etc.) possdent aussi des proprits bactricides recherches.
Elles peuvent agir selon deux mcanismes principaux qui sont i) la formation dions super-oxydes
O2- forms aprs adsorption de loxygne dissout sur les faces (100) et (111) (Akdim B., 2008), ii)
la drgulation des fonctions de transferts des ions Na +, H+, Ca2+, Cl- via la forme soluble Ag+.
Les tudes sur la toxicit de largent nanoparticulaire sont nombreuses. Elles concernent aussi
bien les souches bactriennes des milieux aqueux continentaux et marins, que des organismes
comme les nmatodes (Caenorhabditis elegans) ou les poissons (Zebrafish, Medaka, etc.). Des
travaux apparaissent sur des colonies bactriennes prsentes dans les milieux marins. Les
approches gnomiques se dveloppent, en particulier la gnomique fonctionnelle, afin de mieux
cerner les mcanismes mis en jeu. Certaines tudes tentent de discerner les effets de
nanoparticules dargent de celles de la forme cationique Ag + en quilibre, ainsi que les effets de la
complexation de largent en surface des nanoparticules ou de ladsorption sur les composs
biotiques comme les algues sur la biodisponibilit. Cet aspect est encore trs peu tudi malgr
lintrt vident quil prsente lorsque lon veut modliser la biodisponibilit dun contaminant dans
un milieu complexe (ex : modle BLM).
Compte tenu des spcificits des diffrentes cibles biologiques tudies en cotoxicologie,
lanalyse de la littrature est prsente, suivant cette logique, par organisme cible.
Plantes
Rcemment, Barrena et al. ont tudi les effets toxiques de quelques nanoparticules, en particulier
largent (2 nm), vis--vis des plantes (Cucumis sativus, Lactuca sativa) et des microorganismes.
Les tests de toxicit employs (test de germination, bioluminescence : Microtox system, test de
toxicit anarobie) ont rvl une toxicit faible nulle aux doses employes, jusqu 116 g/m1
selon le test. Des effets gnotoxiques de nanoparticules dargent (< 100 nm) des concentrations
pouvant atteindre 100 mg/l (25 100 mg/l), ont t observs chez loignon Allium cepa. Vis--vis
des champignons, Kim et al. ont tudi lactivit anti-fongique et le mode daction des
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nanoparticules dargent (3 nm) chez Candida albicans. Les rsultats suggrent que ces
nanoparticules dargent exerceraient leur activit anti-fongique en dsorganisant la membrane
cellulaire et en inhibant le processus de bourgeonnement normal, en raison de la destruction de
lintgrit membranaire (Barrena R., 2009; Kim Y.S., 2008; Kumari M., 2009).
Micro-organismes bactriens
Le stress oxydant comme mcanisme responsable de la toxicit des nanoparticules dargent a t
rapport chez des microorganismes (Choi O., 2008). Lanion super-oxyde gnr la surface des
nanoparticules d'argent ou lion Ag+ issu de la dissolution partielle de nanoparticules dargent
pourraient tre responsables des activits bactricides (Pal S., 2007; Kim J.S., 2007). Hwang et al.
ont tudi le mode d'action toxique de ces nanoparticules en utilisant un groupe de bactries
recombinantes bioluminescentes (Hwang E.T., 2008). Outre le fait que la prsence de ces
nanoparticules conduit la production d'un radical super-oxyde, lorigine des dommages des
membranes cellulaires, une perturbation de la rgulation de lexcrtion des ions Na, Cl, etc. est
aussi observe, car les cations Ag+ sont, au sein des corps cellulaires, fortement complexs aux
protines via des liaisons avec le soufre ou le phosphore. Vis--vis des souches sauvages
Escherichia coli, la toxicit est mesurable trs faible concentration. La survie est affecte dun
facteur 107 en 15 heures en prsence de 900 ppb38 dargent. Une tude rcente (Blaser S.A.,
2008) value entre 2 et 20 ppb les concentrations maximales sans effet (HONEC) selon les formes
chimiques de largent. Les mcanismes sont associs lapparition de ruptures de la membrane
cytoplasmique et linteraction avec des fonctions S et P au sein des protines membranaires ou
de lADN (Su H.L., 2009). Ces altrations membranaires pourraient faciliter lentre de
nanoparticules lintrieur de la cellule. Chez E. coli et P. aeruginosa, une internalisation de
nanoparticules infrieures 10 nm a t montre (Morones J.R., 2005), laccumulation de ces
dernires conduisant des malformations cellulaires (Choi O., 2008). Nanmoins, aucune analyse
physique na montr que ces nanoparticules taient bien de largent mtallique Ag et non une
autre forme issue de la prcipitation des ions Ag+ dans le corps cellulaire. Linhibition de la
nitrification de lion ammonium par des bactries nitrifiantes est plus importante en prsence de
nanoparticules dargent de tailles infrieures 10 nm quen prsence dions Ag+. Une corrlation a
t montre entre la production interne despces radicalaires de loxygne et linhibition de la
nitrification (Choi O., 2008).
Une tude unique, ralise partir dun polyamide imprgn de nanoparticules dargent, a montr
un important relargage dions Ag+ dpendant de la taille des particules dargent et du temps. Des
effets anti-microbiens importants sur E. coli et Staphylococcus aureus ont t mesurs au bout de
28 jours (Kumar R., Mnstedt H.,2005).
Par ailleurs, le dveloppement de la rsistance bactrienne largent, au mme titre que leur
rsistance aux antibiotiques, doit tre pris en considration. A lheure actuelle, mme si les
mcanismes gntiques de la rsistance bactrienne largent ne sont pas encore compltement
lucids, en raison des nombreux mcanismes par lesquels largent affecte les bactries (Chopra
I.,2007), il est fort probable quune rsistance largent puisse se produire, long terme et des
doses sub-ltales de ce mtal (Brett D.W.,2006).
Algues
Navarro a ralis une tude comparative de la toxicit de largent sous forme nanoparticulaire
(10 200 nm, moyenne : 40 nm) ou sous forme dissoute (AgNO 3) pour lalgue deau douce
Chlamydomonas reinhardtii (Navarro E., 2008). En prenant en compte la concentration totale
dargent, les rsultats ont montr que la toxicit (EC 50) tait 18 fois plus importante pour AgNO3
que pour les nanoparticules dargent. Dans le milieu exprimental, aucune agrgation des
nanoparticules na t observe par microscopie lectronique transmission. Toutefois, lion Ag+
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mesur dans les suspensions de nanoparticules dargent ne pouvait pas lui seul expliquer la
toxicit observe. Seulement 1 % de largent (Ag0) constituant les nanoparticules a t oxyd en
ion Ag+, libr dans le milieu. Estime en fonction de la concentration en ions Ag+ dans le milieu
exprimental, la toxicit observe avec la suspension de nanoparticules dargent tait bien plus
leve en comparaison de celle obtenue avec AgNO3. Ces rsultats suggrent limportance des
interactions entre ces nanoparticules dargent et les cellules algales. Inversement, pour lalgue
marine (Thalassiosira weisflogii), la toxicit des nanoparticules dargent (60 - 70 nm) serait due la
forme ionique de largent (Miao A.J., 2009).
Poissons
Pour le poisson japonais Mdaka (Oryzias latipes), Chae et al. (Chae Y.J., 2009) ont montr une
expression diffrentielle des gnes, induite en rponse une exposition en laboratoire des
poissons des nanoparticules dargent (49,6 nm, surface : 50,71 nm2, de forme polydrique) ou
largent sous forme ionique. Les rsultats ont clairement mis en vidence que les nanoparticules
dargent (1 et 25 g/l) conduisent des dommages des cellules et de lADN ainsi qu un stress
oxydant, les gnes impliqus dans les processus de dtoxification mtallique et de rgulation du
mtabolisme tant galement induits. En ce qui concerne les ions argent, ils sont responsables
dune induction de la rponse inflammatoire et des processus de dtoxification mtallique
hpatique chez les poissons exposs. Cependant, dune manire gnrale, ces rponses au
stress sont plus faibles que celles induites par les nanoparticules dargent.
Avec des embryons dun autre poisson modle, le poisson-zbre (Danio rerio), Asharani et al.
(Asharani P.V., 2009) ont montr une relation dpendante de la dose (5 100 g/ml) de la toxicit
(par exemple : taux de mortalit, retard dclosion) de nanoparticules dargent (5 20 nm). La
concentration ltale moyenne vis--vis des organismes dpendant du stade de croissance des
embryons exposs aux nanoparticules variait de 25 50 g/ml, les derniers stades de
dveloppement tant plus rsistants lexposition aux nanoparticules. Cette toxicit serait
spcifique aux nanoparticules dAg et non lion Ag+, puisque lexposition des embryons
diffrentes concentrations dAg+ (2,5 20 nM) na engendr aucune anomalie dans leur
dveloppement. Les images en microscopie lectronique transmission ont montr que les
nanoparticules dargent taient distribues dans le cerveau, le cur, le vitellus et le sang des
embryons. Les vitesses de diffusion passive et daccumulation des nanoparticules dans les
embryons seraient probablement responsables des anomalies dtectes dpendantes des doses
dexposition. Bar-Ilan et Lee (Bar-Ilan O., 2009; Lee S.W., 2009) ont compar la toxicit de
nanoparticules dargent ou dor de diffrentes tailles (3, 10, 50 et 100 nm) vis--vis dembryons de
ce poisson modle (Danio rerio). La toxicit de largent estime en taux de mortalit est plus
importante que pour lor. De plus, alors que les nanoparticules dor induisent des effets toxiques
subltaux minimes, lexposition aux nanoparticules dargent gnre une varit de malformations
morphologiques embryonnaires. La toxicit des nanoparticules dargent serait dpendante de la
taille, certaines concentrations, et ce pour certains temps dexposition.
En revanche, des corrlations ont aussi t montres entre la concentration des ions Ag+ dissous
en quilibre avec des nanoparticules dargent recouvertes de PVP39 vis--vis du poisson Fundulus
Heteroclitus dont la mortalit embryonnaire suit la courbe de solubilit de largent particulaire en
fonction de la salinit.
Par contre, cette corrlation est moins vidente dans le cas de particules nanomtriques dargent
recouvertes de gomme arabique (Auffan M. ., 2009 ; Matson C.W. et Auffan M., 2009).
Nmatodes
Des travaux trs rcents et en cours de lUniversit de Duke (Auffan M. ., 2009) semblent
corrler la concentration en ions Ag+ en quilibre avec les nanoparticules dargent recouvertes de
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en sattachant analyser aussi bien les aspects gnomiques que la diversit des populations ou
assemblages, la croissance et la fcondit.
6.3.2.2.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
Aucune donne spcifique nest disponible pour le produit A.
le groupe de travail na pu raliser une valuation des risques proprement parler pour le produit
A. Ainsi, en labsence dvaluation, le risque ne peut pas tre exclu.
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6.3.3.3 Conclusion
Pour le produit A considr
Pour lhomme et lenvironnement, si le risque li lutilisation du produit A ne peut pas tre estim,
il ne peut pas tre exclu.
Pour le cas gnral des nano-argent
Compte tenu :
du nombre en constante augmentation de produits de consommation intgrant des
nanoparticules dargent ;
de la diversit de lexposition ;
largent utilis sous ses diffrentes formes chimiques constituera certainement un risque pour
lenvironnement, mme sil nest pas mesurable actuellement.
En surface, les lectrons et les trous disponibles peuvent ragir avec des espces accepteuses et
donneuses pour former des radicaux. Deux ractions auront lieu : une raction doxydation lie au
trou photognr et une raction de rduction lie llectron photo-gnr. Diffrentes espces
oxydantes appeles ERO peuvent donc apparatre, comme le montrent les quations ci-aprs en
milieu aqueux.
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La paire lectron/trou peut ragir avec i) soit des oxygnes terminaux faisant partie du solide, ii)
soit avec des composs externes adsorbs (molcules deau ou composs organiques).
Effet de la taille
Les premires tudes menes dans les annes 1960 ont montr que lactivit photocatalytique
dpendait de la nature minralogique du solide. Kato et Mashio ont indiqu que lactivit
photocatalytique de lanatase pour oxyder des hydrocarbures et des alcools tait suprieure celle
du rutile (Kato S. et Mashio F., 1964).
Or, la stabilit des trois formes du TiO2 (anatase, brookite, rutile) dpend de la taille (Ranade M.R.,
2002; Zhang H., Banfield J.F.,2000). Il a t rcemment montr que le rutile est la phase la plus
stable thermodynamiquement pour des particules suprieures 35 nm, lanatase pour des tailles
infrieures 11 nm, alors que la brookite se trouve tre la plus stable dans la gamme de taille
intermdiaire. La raison exacte de cette diffrence nest pas totalement lucide mais doit
certainement tre relie la nature des faces cristallographiques exposes. Outre cet effet indirect
de la taille, plusieurs auteurs (Almquist C.B., Biswas P.,2002; Wang C.B., Zhang W.x.,1997) ont
montr quil existait un optimum de taille pour la photo-oxydation de substrats organiques pour un
mme polymorphe. Almquist et Biwas (2002) ont dfini cet optimum entre 25 et 40 nm alors que
Wang et al. (1997) situent cet optimum aux alentours de 11 nm. Les auteurs considrent quil
existe des effets sopposant entre une surface spcifique importante lorsque la taille diminue et
donc une plus grande quantit de molcules adsorbes, et une plus grande proximit des paires
lectrons - trous aboutissant un taux de recombinaison lev avant toute raction de surface.
Lnergie de transition de bande dfinie ci-dessus (Ec Ev = Eb) peut aussi tre affecte par la
modification de taille des photo-catalyseurs (Almquist C.B. et Biswas P., 2002; Linsebigler L.,
1995; Nozik J.A., 1993). Ceci a t montr exprimentalement plusieurs reprises dans le cas de
diffrents matriaux, comme par exemple lanatase, o la valeur de Ec varie de 3,2 3,5 eV pour
des particules infrieures 12-16 nm. Une augmentation de lnergie Ec a pour consquence
daugmenter la ractivit photo-catalytique en augmentant le potentiel doxydo-rduction qui est le
paramtre cl du transfert dlectron.
Les ciments contenant du dioxyde de titane TiO2 lchelle nanomtrique (nano-ciments) sont
proposs pour des applications dans les btons, mortiers et coulis lorsqu'un utilisateur souhaite
profiter d'un effet autonettoyant en surface ou encore dassainissement atmosphrique.
Lincorporation de ces adjuvants nanomtriques sous la forme cristalline anatase apporte en effet
des proprits photocatalytiques permettant la formation de substances trs oxydantes capables
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de dcomposer une large varit de matires organiques et inorganiques. Le ciment acquiert ainsi
des capacits autonettoyantes dintrt pour la maintenance et la durabilit des btiments ainsi
que des capacits de dpollution de lair en contact. La nature photocatalytique de ces effets,
acclrant le lent processus doxydation des polluants, implique un contact direct de la couche
contenant le nano-ciment avec lextrieur (exposition la lumire UV) pour pleinement profiter de
l'effet nano-photo-catalytique dsir.
Cette application particulire aux matriaux de construction est directement issue du projet
europen PICADA40 dont lobjectif tait prcisment la mise au point dun revtement de faade
pour les btiments prsentant des proprits dauto nettoyage et de dpollution de lair. Initi au
dbut des annes 1990 dans le cadre du cinquime PCRD, ce projet a rassembl quatre
partenaires industriels, deux centres techniques (en charge de lvaluation des performances
techniques des produits raliss) et deux laboratoires universitaires (en charge de la modlisation
des approches exprimentales). On notera que ces travaux ont essentiellement t ports sur
lvaluation des performances techniques et environnementales (relatives aux cahiers des charges
et normes en vigueur pour ce secteur) de ces nouveaux matriaux, la question des risques
sanitaires ou environnementaux spcifiques au caractre dimensionnel nano du dioxyde de
titane intgr au produit ntant pas alors encore aborde de manire explicite.
http://www.picada-project.com/domino/SitePicada/Picada.nsf?OpenDataBase
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particules doit absolument tre considre pour lvaluation de lexposition. La vitesse laquelle
les particules diffusent dans lair est dtermine par leur coefficient de diffusion qui est
inversement proportionnel leur taille. Les nanoparticules diffuseront beaucoup plus rapidement
que celles dont lchelle est de lordre du micromtre. Ainsi, des nanoparticules ne resteront pas
localises dans la zone dmission ; elles diffuseront rapidement et pourront se retrouver une
grande distance dune source et potentiellement exposer plusieurs individus localiss distance
de la zone dmission. De plus, les particules dun arosol subiront une multitude de collisions qui
conduiront leur agglomration ou coagulation et une augmentation de leur diamtre modifiant
en consquence les paramtres de diffusion de larosol. La vitesse laquelle les particules
sagglomrent dpend de leur concentration en nombre et de leur mobilit. La coagulation de
nanoparticules conduira rapidement la formation de plus grandes particules en concentration
plus faible et qui persisteront plus longtemps parce que leur mobilit sera rduite. Par ailleurs, la
plupart des nanoparticules une fois agrges ou agglomres sous la forme de poudre ne seront
pas faciles dissocier ou re-suspendre dans lair.
Cest pourquoi lextrapolation partir des donnes sur des particules plus grosses pour valuer le
devenir des nanoparticules de TiO 2 pourrait manquer de pertinence. Ne disposant pas des
caractristiques des nanoparticules de TiO2 dans le produit B considr (taille, surface spcifique,
fonctionnalisation, tat des nanoparticules de TiO 2 dans le ciment, surface nanostructure
conserve si formation dagglomrats, etc.), il est trs difficile de prvoir leur comportement.
De plus, les co-expositions et interactions potentielles avec dautres particules prsentes dans lair
(pollution atmosphrique, autres particules gnres lors des travaux de voirie ou de btiment) ne
seront pas prises en compte, bien quelles puissent influencer le devenir des nanoparticules de
TiO2. La gnration dautres composs par photocatalyse ne sera pas non plus considre dans
lanalyse.
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http://www.infociments.fr/publications/industrie-cimentiere/rapports-activite/ra-g03-2008
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exposition lie lusure des routes construites partir de ciments TiO 2 (produit B) ;
exposition lie la ralisation de travaux dans des btiments construits base de TiO2
(produit B) ;
exposition du bricoleur suite des travaux sur des produits contenant le produit B.
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Tableau 4 Concentrations de titane (Ti lmentaire) dans des poussires fines (PM 2.5) prleves
lintrieur des voitures, ct des routes et dans un site urbain loin des routes. Les chiffres sont
3
indiqu en nano-grammes par mtre-cube (ng/m , 1 g = 1000 ng) (Riediker M., 2003).
ct des routes
moyenne
carttype
min
max
moyenne
carttype
min
max
moyenne
carttype
min
Max
10,4
9,2
0,0
40,4
7,0
5,7
0,0
18,5
10,3
6,5
2,1
29,4
Exposition du bricoleur suite des travaux sur des produits contenant le produit B
Concernant la frquence et la dure dexposition, nous considrerons que, pour la majorit des
bricoleurs, lactivit de bricolage justifiant lexposition nest que ponctuelle donc aigu. De la mme
faon, tant donn la proximit du sujet expos la source dmission et donc le faible laps de
temps entre ltape de libration des nanoparticules entranes par la manipulation du produit et
lexposition possible, on considrera par hypothse que le sujet est effectivement expos des
nanoparticules de dioxyde de titane, les phnomnes classiques de dispersion/dagglomration
des particules pouvant tre moindres. Pour estimer le niveau dexposition dans le cas du bricoleur,
nous pouvons employer des valeurs d'exposition professionnelles aux poussires de bton
connues pour les lieux de travail (Chisholm J.,1999; Linch K.D.,2002) en considrant galement
lhypothse raliste selon laquelle, le plus souvent, les bricoleurs ne disposent que de peu de
connaissances sur les mesures de protection. Ces valeurs restent nanmoins trs incertaines et
ne doivent pas tre considres comme une estimation fiable de lexposition.
Tableau 5 Approximation dune concentration en nanoparticules de TiO2 partir des missions de
poussires de travaux.
Scnarios pour
Bricoleurs
Niveau d'exposition
Rfrence
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un travail sur la rsistance labrasion des btons contenant des nanoparticules de TiO 2
(Li H., 2006). Les btons sont fabriqus partir de ciment Portland et de sable de 5 25 mm puis sont mlangs des nanoparticules de TiO 2 denviron 15 nm des
pourcentages en poids par rapport au liant de 1, 3 et 5 %. Des essais normaliss de
rsistance la compression et la flexion ont t associs des essais dabrasion. Les
rsultats montrent, aprs 28 jours de cure, une diminution de la rsistance la
compression et la flexion avec laugmentation de TiO2 dans les btons corrlativement
une diminution de la rsistance labrasion (indice de surface et indice de bordure).
Linterprtation donne par les auteurs est une diminution de la formation des particules de
CSH42 et une microstructure diffrente en prsence de TiO 2 ;
un travail sur lmission de nanoparticules de TiO2 dans les eaux de ruissellement et issues
des faades extrieurs (Kaegi R., 2008). Les auteurs ont extrait des particules prsentes
dans les eaux de ruissellement de la ville de Dubendorff (Suisse) provenant de deux
immeubles rcents, traits avec des peintures contenant des nanoparticules de TiO2. Les
rsultats obtenus et analyss par microscopie lectronique transmission et ICP-MS
montrent la prsence de particules de TiO2 de taille autour de 150 nm, formes dagrgats
de particules plus petites. La source des particules de TiO 2 des eaux de ruissellement
semblent tre les faades des immeubles. Les concentrations en Ti atteignent 600 g/l,
associes des concentrations en Ca (20 - 40 mg/l), Al (1 - 5 mg/l), et Si (1 10 mg/l)
importantes.
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leffet tumorigne de lexposition au TiO2 ne semble pas tre li au produit ou une action
directe, mais serait plutt fonction de la dimension des particules et de leur surface qui
agirait comme un mcanisme gnotoxique secondaire (non spcifique) associ une
inflammation chronique et une prolifration cellulaire ;
les indices indiquent que lexposition professionnelle des faibles concentrations de TiO 2
produit un risque ngligeable de cancer du poumon chez les travailleurs, il nest pas
possible de dterminer si lexposition des fortes concentrations est cancrogne chez
lhumain ;
les limites dexpositions recommandes peuvent permettre de rduire les risques qui
peuvent tre associs au dveloppement de linflammation pulmonaire et du cancer
(1,5 mg/m pour les particules fines et 0,1 mg/m pour les particules ultrafines; 10 h
pendant une semaine de travail de 40 h).
Selon le NIOSH, il y a peu deffets relis au TiO2 dans les tudes de cas et les tudes
pidmiologiques ne fournissent pas dindice vident dune augmentation de la mortalit par
cancer ou de la mortalit chez les travailleurs exposs aux poussires de TiO 2. Le NIOSH
considre que les indices sont insuffisants pour classer le TiO 2 comme cancrogne
professionnel potentiel .
De son ct, le Centre International de Recherche sur le Cancer (CIRC) considre que les preuves
de la cancrognicit du TiO2 chez lhomme sont insuffisantes, mais quelles sont suffisantes chez
lanimal (IARC, 2006). Le TiO2 est donc considr comme cancrogne possible pour lhomme
(groupe 2B) par le CIRC.
En fvrier 2006, un groupe consultatif du CIRC pour la rvision des monographies a rvalu la
classification du dioxyde de titane qui tait considr comme inclassable quant sa
cancrognicit pour l'homme (groupe 3). Lorganisme la re-classifi comme agent cancrogne
possible pour l'homme (groupe 2B) .
Le CIRC a analys les donnes pidmiologiques disponibles, soit trois tudes de cohorte (Europe
et tats-Unis) et une tude cas-tmoins dune population (Montral). Ces tudes nont pas permis
de mettre en vidence une association entre lexposition au TiO 2, telle quelle tait susceptible de
se produire au cours des dernires dcennies en Europe et en Amrique du Nord, et le risque de
cancer. Cependant, le CIRC mentionne que les tudes souffraient de limitations mthodologiques
(par exemple concernant la classification des expositions, la dimension des particules, lenrobage).
Le TiO2, sous forme pigmentaire et ultrafine, a t test pour sa cancrognicit par diverses voies
dexposition (inhalation, orale, intra-trachale, injections) chez plusieurs espces animales (rat,
souris). Une augmentation des tumeurs bnignes et malignes a t constate chez le rat femelle
(inhalation) ainsi quune augmentation des adnomes pulmonaires forte dose chez les rats
femelle et mle. Deux autres tudes par inhalation chez le rat et une chez la souris se sont
avres ngatives. Aucune augmentation de la frquence de tumeur cancreuse na t observe
par les autres voies chez le rat et la souris.
Lvaluation du CIRC a tenu compte de considrations mcanistes et dautres donnes pertinentes
(Baan R., 2006) :
les donnes humaines disponibles par inhalation concernent des rapports de cas qui ont
montr un dpt dans le tissu pulmonaire et les ganglions lymphatiques ;
une tude clinique par ingestion de fines particules de TiO 2 a montr une absorption
gastro-intestinale dpendante de la dose avec une grande variation inter-individuelle des
concentrations sanguines ;
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les tudes chez les rongeurs ont montr une atteinte dpendante de la dose de la
clairance43 par les macrophages alvolaires ;
la clairance des particules ultrafines de TiO 2 tait plus lente que celle des particules fines ;
chez les rongeurs, la toxicit pulmonaire est plus forte aprs une exposition aux particules
ultrafines quaprs une exposition aux particules fines (sur une base de masse). Ces
diffrences seraient relies la charge pulmonaire en termes de surface de particules, et
sont considres comme rsultant de latteinte de la phagocytose et la squestration des
particules dans le tissu interstitiel ;
LACGIH (ACGIH, 2005) classifie le dioxyde de titane comme substance non classifiable comme
cancrogne pour l'homme (groupe A4).
L'ACGIH a valu le dioxyde de titane (TiO2) comme une substance non classifiable comme
cancrogne pour l'homme en se basant sur labsence dindice concluant entre lexposition au
dioxyde de titane et le cancer, ainsi que sur des rsultats ngatifs ou non concluants concernant
lactivit cancrogne chez les animaux.
Coefficient qui reprsente l'aptitude d'un organe ou d'un tissu liminer d'un fluide de l'organisme une
substance dtermine.
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(mdiateurs de linflammation) taient significativement plus levs. Ces rsultats dmontrent que
des particules inertes peuvent devenir biologiquement actives lorsque la dimension est rduite
une taille nanomtrique.
Warheit et al. ont tudi la toxicit aigu de particules et de tiges de TiO 2 chez des rats. Des tiges
danatase (200 nm x 35 nm ; surface de 26 m 2/g) et des particules danatase (~ 10 nm ; surface de
169 m2/g) ont t administres par instillation intratrachale des doses de 1 ou 5 mg/kg. Des
particules de rutile (~ 300 nm ; surface de 6 m2/g) ont servi de contrle ngatif alors que le quartz a
t utilis comme contrle positif. Les auteurs ont observ une inflammation transitoire et des
dommages aux cellules 24 h aprs lexposition aux tiges danatase et aux particules danatase.
Les effets observs ntaient pas diffrents des effets pulmonaires observs suite lexposition
aux particules de TiO2 de 300 nm, malgr des diffrences importantes de surface. Lexposition aux
particules de quartz a provoqu une rponse inflammatoire dpendante de la dose caractrise
par une accumulation de neutrophiles et de macrophages de mme quun paississement du tissu
pulmonaire indiquant le dveloppement dune fibrose pulmonaire. Les auteurs concluent que ces
rsultats sont en dsaccord avec lhypothse voulant que la surface spcifique soit un facteur
majeur associ la toxicit des particules de dimensions nanomtriques, mais ils soulignent que
les causes la base de cette divergence ne sont pas claires (Warheit D.B., 2006).
Chen et al. ont expos des souris adultes mles ICR une dose unique (0,1 ou 0,5 mg) de TiO2
(19 - 21 nm) par voie intratrachale. Le TiO2 induit de lemphysme pulmonaire, laccumulation de
macrophages, de lhyperplasie pneumocyte de type II et lapoptose de cellules pithliales. De
plus, les auteurs ont not une expression diffrencie de centaines de gnes qui ont, entre autres,
perturb le cycle cellulaire, caus de lapoptose, modifi le facteur de croissance du placenta et
conduit lexpression de certaines chimiokines pouvant causer de lemphysme pulmonaire et
lapoptose de cellules pithliales alvolaires (Chen H.W., 2006).
Dans une autre tude, Warheit et al. concluent que les proprits de surface sont critiques pour
dterminer les effets des particules ultrafines de TiO2. Par instillation intratrachale des doses de
1 5 mg/kg dun chantillon de particules de rutile fin, dun autre ultrafin, et dun lot contenant
80 % danatase et 20 % de rutile avec un contrle positif de quartz, ils ont expos des rats (5 rats
par groupe, par dose et par temps) et les ont valus 24 heures, une semaine et trois mois aprs
instillation. Lexposition au quartz, et un moindre niveau au mlange anatase/rutile (uniquement
pour les essais aux fortes concentrations pour le mlange) a produit de linflammation pulmonaire,
de la cytotoxicit et des effets histopathologiques clairement distincts sur les tissus pulmonaires.
En revanche, les particules fines et ultrafines de TiO2 nont eu quun effet inflammatoire passager
et ne reprsentent quun faible risque pulmonaire. Les auteurs concluent que les diffrences
deffets seraient dues la structure cristalline, au pH des particules et la ractivit chimique de
surface, les particules danatase/rutile produisant plus de radicaux libres que celles de rutile, ce qui
reprsenterait une des sources dinflammation et de cytotoxicit. Les effets ntaient pas
totalement explicables uniquement par la surface des particules (Warheit D.B., 2007).
Grassian et al. ont expos des souris en chambre dinhalation de faon aigu (4 h) et sub-aigu
(4 h / jour pendant 10 jours) de lanatase cristallin (TiO2) agrg (particules lmentaires de 2
5 nm; agrgats moyens de 123 nm) des concentrations de 0,77 et 7,22 mg/m 3. Lexposition
aigu a produit une toxicit pulmonaire ou de linflammation minimale alors que lexposition subaigu a conduit une plus forte teneur en cellules totales et en macrophages dans le liquide
broncho-alvolaire. La rponse inflammatoire tait modre, significative mais rversible trois
semaines aprs lexposition (Grassian V.H., 2007).
Warheit et al. ont expos des rats (5 rats par groupe, par dose et par temps) par instillation
intratrachale des particules de quartz de 12, 50, 300 et 500 nm qui possdaient des surfaces
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spcifiques de 4,2 90 m2/g et ont mesur le potentiel hmolytique et lactivit de surface des
particules. Aprs 24 h, une semaine, un mois et trois mois, ils ont valu la prolifration cellulaire
et ont fait une valuation histopathologique du tissu pulmonaire. Lexposition aux diffrentes
particules de quartz a produit une rponse inflammatoire soutenue et dpendante de la dose,
laccumulation de macrophages alvolaires avec le dveloppement prcoce de fibrose pulmonaire
et des effets cytotoxiques. Les effets observs ne sont pas toujours relis la surface de la
particule mais sont bien corrls lactivit de surface hmolytique des diffrentes particules. Les
rsultats obtenus suggrent que lintensit des effets mesurs est mieux corrle avec lactivit de
surface hmolytique de test in vitro quavec laire de surface, la taille, la cristallinit, la teneur en
mtaux (fer) ou les radicaux de surface (Warheit D.B., 2007).
Reprotoxicit
Aucune donne nest actuellement disponible dans la littrature.
Cancrogense
Borm et al., dans une revue sur le cancer pulmonaire, soulignent que les particules peu solubles,
tels que le noir de carbone et le dioxyde de titane, sont reconnues pour causer des fibroses, des
lsions noplasiques et des tumeurs pulmonaires chez le rat. La quantit requise de ces produits
pour gnrer les mmes effets est beaucoup plus faible avec des nanoparticules (Borm P.J.,
2004).
Gnotoxicit et photognotoxicit
Theogaraj et al. ont valu la photo clastognicit (test daberrations chromosomiques) de 8 types
de particules de TiO2 (14 nm 60 nm ; concentration de 800 5 000 g/ml) dans les cellules CHO
en prsence ou non dUV (750 mJ/cm) (Theogaraj E., 2007).
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Tableau 6 : Description des 8 types de nanoparticules de TiO2 testes par Theogaraj et al. (Theogaraj
E., 2007) pour lvaluation de la photo clastognicit.
Lessai t ralis en prsence ou non dactivation mtabolique S9. Aucune gnotoxicit (en
absence dUV) ou photognotoxicit (prsence dUV) des nanoparticules de TiO 2 na t montre
dans les conditions tudies.
Linnainmaa et al. (Linnainmaa K., 1997) ont valu la photo clastognicit (test du micronoyau,
cellules pithliales hpatiques de rat) de 3 types de particules ultrafines de TiO 2 (UF1 : 20 nm,
anatase, non enrobe, Degussa, P25 ; UF2 : 20 nm, rutile, enrobage dhydroxyde daluminium et
dacide starique, UV-Titan M160 ; TiO2 Pigmentaire : 170 nm, anatase, non enrob, Kemira
AFDC) aux doses de 5, 10 et 20 g/cm pendant 21 heures, en prsence ou non dUV. Aucune
clastognicit ou photognotoxicit des particules ultrafines de TiO 2 na t montre dans les
conditions tudies.
Nakagawa et al. (Nakagawa Y., 1997) ont valu la photognotoxicit de 4 types de particules de
TiO2 non enrobes 1) ultrafine, anatase, 21 nm ; 2) anatase, 255 nm ; 3) rutile, 255 nm; 4) rutile,
420 nm en utilisant les 4 tests de gnotoxicit suivants :
a. Salmonella typhimurium / test dAmes44 avec microsomes;
b. Cellules de lymphomes de souris L5178Y / essais de mutation sur des cellules de
mammifre ;
44
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Source: Opinion of the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for
Consumers Concerning Titanium Dioxide (2000), Table 1)
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http://ec.europa.eu/health/ph_risk/committees/sccp/documents/out135_en.pdf
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Source: Opinion of the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for
Consumers Concerning Titanium Dioxide (2000), Table 2C).
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(10 g / ml) ont provoqu des dommages oxydatifs lADN, une peroxydation des lipides, la
formation de micronoyaux et une augmentation de la production de H2O2 et de NO dans les
cellules. Des particules de 200 nm (ou plus) danatase nont pas induit de stress oxydatif en
absence de lumire. Par contre, des particules de 200 nm de rutile ont induit une production de
H2O2 et des dommages oxydatifs lADN en labsence de lumire. Enfin, le niveau de dommages
oxydatifs lADN des cellules a t lgrement plus lev aprs une exposition un mlange
danatase et de rutile (200 nm ; 10 g / ml pendant 1 h dans lobscurit totale) comparativement
une exposition aux deux formes de TiO2 sparment. Les auteurs concluent que plus la taille des
particules est petite, plus leur potentiel pour induire un stress oxydatif est lev (en absence de
photactivation). Les particules ultrafines de TiO2 sont habituellement considres comme
biocompatibles en absence de photoactivation (Gurr J.R., 2005).
Dans une autre tude, Barlow et al. ont expos des cellules pithliales alvolaires de type II de
rat (ligne L-2) des nanoparticules de noir de carbone (14,3 nm ; 6 h). Les cellules pithliales
de type II joueraient un rle important dans le processus inflammatoire dans les poumons par la
production de cytokines proinflammatoires. Ces dernires sont responsables de la migration des
leucocytes aux sites dinflammation (par chimiotaxie). Les auteurs ont observ une production
significative de chimioattractants par les cellules de type II, mesure par la migration des
macrophages. Des nanoparticules de TiO2 (29 nm) et des particules fines de carbone et de TiO2
(260,2 et 250 nm respectivement) nont pas eu cet effet. Une augmentation dpendante de la dose
de la production de LDH suite lexposition aux quatre types de particules a galement t
observe. Les auteurs concluent que les nanoparticules de carbone sont fort probablement
responsables de la production de chimioattractants par les cellules de type II (Barlow P.G., 2005).
Sayes et al. ont expos des fibroblastes cutans et des cellules pithliales pulmonaires humaines
des nanoparticules sphriques danatase de 10 nm (une forme cristalline du TiO2), des particules
sphriques de rutile de 5,2 nm (une autre forme cristalline du TiO2) et des particules sphriques
mixtes danatase/rutile de 3,2 nm avec des surfaces spcifiques de 112 (rutile) 153 m 2 / g
(anatase). De la cytotoxicit et de linflammation ont t observs partir de concentrations de
100 g / ml selon un comportement dose-rponse classique et les effets ont augment en fonction
du temps et de la concentration. Les effets observs ntaient pas corrls la surface des
particules, lanatase (surface spcifique 153 m2 / g) tant 100 fois plus toxique que le rutile (surface
spcifique 123 m2 / g) concentration gale. Les particules les plus cytotoxiques taient les plus
efficaces gnrer des espces ractives de loxygne et la toxicit augmentait rapidement avec
une illumination dans lultraviolet, facteur favorisant la gnration de radicaux libres (Sayes C.M.,
2006).
Des cellules pithliales pulmonaires humaines ont t exposes in vitro des nanoparticules de
silice contenant du fer, du cobalt, du manganse et du titane de mme quaux oxydes
nanomtriques de ces mtaux. Les auteurs (Limbach L.K., 2007) ont utilis des particules trs bien
caractrises ayant les mmes morphologies, de mme que des dimensions, des formes et des
degrs dagglomration comparables. Ils ont dmontr que ces particules pntrent efficacement
dans les cellules et provoquent jusqu huit fois plus de stress oxydatif dans le cas du cobalt et du
manganse que les solutions aqueuses des mmes mtaux. Ils concluent que lvaluation du
risque devrait galement tenir compte des compositions chimiques et des proprits catalytiques
des nanoparticules.
Des chercheurs se sont intresss l'tude de phnomnes cellulaires se manifestant par
linduction de divers mcanismes ou par la production de mdiateurs de l'inflammation.
Dans une exprience visant valuer la compatibilit sanguine de diverses formes du dioxyde de
titane (TiO2), Maitz et al. n'ont pas observ d'effet de la forme nanocristalline sur plusieurs
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La comparaison entre des oxydes de titane nanomtriques et micromtriques montre des effets
trs faibles ou inexistants sur des souches bactriennes varies comme des levures, E Coli ou des
bacilles. Les raisons invoques sont essentiellement le faible nombre de contacts avec la
membrane cellulaire. Par contre, Sunada et al. ont notamment observ la destruction de la
membrane externe puis interne chez E. coli en prsence de nanoparticules de TiO2 (Sunada K.,
2003).
Algues
La toxicit de TiO2 nanomtrique et micromtrique vis--vis de diffrents types dalgues comme
Pseudokirchneriella subcapitata a t tudie suivant les tests de croissance normaliss par
lOCDE (OCDE 201) en prsence et en labsence de lumire. Les rsultats obtenus sont peu
diffrents. Le TiO2 nanomtrique est plus toxique que le micromtrique. La valeur de EC50 est de
35,9 mg / l pour le TiO2 micromtrique et de 5,83 mg / l pour le nanomtrique. En dessous de
0,98 mg / l le TiO2 nanomtrique ne montrait aucun effet alors que pour le TiO2 micromtrique la
dose est de 10,1 mg/l. Le TiO2 nanomtrique forme des agrgats en contact direct avec la surface
des micro-algues. De mme, des travaux sur des algues unicellulaires Chlamydomonas reinhardtii
ont montr des rponses des niveaux physiologiques, biochimiques et gnomiques. La
croissance tait inhibe durant les deux ou trois premiers jours. Un stress oxydant apparaissait
partir de 6 heures de contact via des analyses de peroxydation des lipides. Lexpression de quatre
gnes marqueurs du stress (sod1, gpx, cat, and ptox2) apparaissait pour des concentrations en
TiO2 de 1 mg / l et des temps de 1, 3, 5 et 6 h de contact et proportionnelles aux doses de TiO2.
La concentration finale de cellules tait dpendante de la dose.
Poissons
Une tude trs complte traite de lexposition de la truite arc en ciel (Oncorhynchus mykiss) des
nanoparticules de TiO2 (Federici G., 2007). Des effets toxicologiques sont observs au niveau des
branchies et se traduisent par la prolifration des cellules pithliales et le dveloppement
ddmes des filaments branchiaux. En revanche, les paramtres sanguins des poissons sont
peu altrs. Une augmentation de lactivit de lATP-ase au Na+, K+ et une baisse de concentration
des substances ractives de lacide thiobarbiturique (TBARS) tmoignent deffets possibles sur
losmorgulation et dun stress oxydatif dans les branchies des poissons. Ces effets sont
galement observs dans lintestin, et dans une moindre mesure dans le cerveau, mais pas dans
le foie. Daprs ces rsultats, les deux voies dexposition semblent donc entraner une
accumulation de nanoparticules, la voie directe tant cependant prpondrante par rapport la
voie trophique. Ces tudes ne donnent pas dinformation sur la provenance des nanoparticules
observes dans les organes internes des animaux. Ces dernires pourraient y tre amenes par
voie sanguine suite un transfert travers les cellules branchiales exposes par voie directe, ou
suite un passage travers lpithlium du tractus gastro-intestinal aprs exposition par voie
trophique.
Invertbrs aquatiques
Trois tudes dveloppes sur des espces de crustacs : Daphnia magna, Thamnocephalus
platurus) utilisant des nanoparticules et des microparticules de TiO 2 :
ne montrent pas deffets toxiques jusqu 20 g / l pour lune (Heinlaan M., 2008) ;
ne montrent pas deffets cyto ou gnotoxiques pour lautre (Lee S.W., 2009) ;
montrent des effets sur la reproduction sur 6 tests sur 25 (contact de 48 h) avec EC
compris entre 0,5 mg / l et 91,2 mg / l. La mesure de la reproduction est plus sensible que
la mortalit.
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Conclusion
Les travaux sur les effets du TiO2 sur les cosystmes sont peu nombreux par rapport dautres
nanoparticules manufactures. A ce jour, trois tudes sur des plantes (1) et sur des vers (2) ont
t ralises, conduisant des effets positifs avec les plantes et nuls sur les vers. Les tudes sur
des bactries procaryotes montrent des effets contradictoires dus des proptocipes diffrents.
Rares sont les travaux complets intgrant la gnotoxicit et la cytotoxicit. Un seul a t
apparemment ralis sur des poissons et montre une gnotoxicit.
La dispersabilit de TiO2 peut tre aussi mise en cause. Les diffrentes formes de TiO 2 prsentent
toutes un point de charge nulle (PCN)46 autour de pH 6 concourant une forte agrgation. Cette
agrgation peut limiter le contact avec les organismes comme les bactries ou les micro-algues.
Par contre cela naffecte pas lingestion par les poissons, sauf si une sdimentation importante
existe.
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lessivage de produits solides par un solvant appropri, de faon en extraire les parties solubles
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et du ciment, nous avons pris en considration exclusivement la voie pulmonaire : voie directe
dexposition. Nanmoins, une exposition gastro-intestinale existe un niveau significatif. En effet,
les particules inhales se dposent en partie dans la rgion tracho-bronchique, mais la clairance
mucociliaire et la dglutition conduisent l'ingestion de ces particules. Concernant la toxicit du
dioxyde de titane par voie orale, plusieurs tudes montrent des rsultats contradictoires : Jani et al.
nobservent pas de toxicit aprs une administration quotidienne pendant 10 jours de particules de
TiO2 de 500 nm (Jani P.U., 1994). Warheit et al. (Warheit D.B., 2007 a) montrent des rsultats
similaires avec une seule administration de nanoparticules de TiO2 de 140 nm des doses variant
de 175 5 000 mg / kg pc. Au contraire, Wang et al. (Wang J.J., 2007) observent une toxicit
hpatique, rnale et cardiaque avec des nanoparticules de TiO 2 mais les anomalies biologiques et
histologiques varient avec la taille des nanoparticules (25, 80 et 155 nm).
Il est indispensable de fournir des tudes standards de toxicologie adaptes au TiO 2 sous forme
anatase spcifique au produit B : entre autre des tudes de toxicologie chronique de gnotoxicit,
et reprotoxicit.
Des catgories de population, notamment celles souffrant de pathologies respiratoires (BPCO),
pourraient tre plus risque et devraient faire lobjet dune attention toute particulire lors dune
valuation de risque sanitaire.
Scnario environnement
De manire identique lvaluation des risques pour lhomme, les tudes decotoxicologie
adaptes au TiO2 sous forme anatase spcifique au produit B considr, indispensables
lvaluation des risques pour lenvironnement, sont manquantes.
6.4.3.3 Conclusion
Chez lhomme et pour lenvironnement, pour les effets et le produit considrs dans les tudes et
hors populations sensibles (cf. chapitre incertitudes), le risque, sil ne peut pas tre valu, ne
peut pas tre exclu.
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Tableau 9 : Caractristiques des nanoparticules industrielles prsentes dans la crme solaire tudie
(daprs www.tayca.co.jp)
Type de nanoparticules
Masse
du
produit
industriel dans la crme
solaire
10%
Phase cristalline
100% rutile
Taille des
primaires
18 nm (distribution 50% :
9 - 24 nm)
cristallites
Agrgats
Btonnets de 70 150 nm
daprs photo TEM
Enrobage
Hydroxyde daluminium
(Al(OH)3)
Fonctionnalisation
Acide starique
(CH3-[CH2]16-COOH)
Composition massique
du produit industriel :
TiO2
83%
Al(OH)3
9%
CH3-[CH2]16-COOH
8%
Porosit
Inconnue
Potentiel Zeta
Inconnu
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t : 2 3 enductions par jour sur tout le corps sur une priode cumule de 2 semaines ;
hiver : 2 3 enductions par jour sur le visage uniquement sur une priode cumule dune
semaine.
Population expose :
La population susceptible dtre expose est la population gnrale (dont les populations
sensibles).
Surface dexposition :
La surface du corps humain daprs louvrage Body Surface Area (Bender A.E. et Bender D.A.,
1995) est en moyenne (homme / femme) de 17 000 cm 2 et celle du visage de 112,5 cm2 daprs
lagence de protection environnementale amricaine (US EPA,2000).
Quantit utilise :
Daprs le fabricant de la crme solaire tudie, la concentration moyenne surfacique de crme
enduite doit tre comprise entre 1 et 2 mg par cm2 de peau pour assurer les performances
annonces. Le calcul conduirait donc une utilisation denviron 100 g de crme solaire par jour.
Ce chiffre nest videment pas raliste, car dans la pratique on ne senduit pas de crme sur tout le
corps et surtout on utilise des concentrations surfaciques beaucoup plus faibles que celles
correspondant lindice de protection annonc.
Pour la quantit journalire, on se rfrera finalement lestimation donne par le Scientific
Committee on Consumer Products (SCCP)48 rvision 6 p.89 : une valeur dutilisation raliste de
crme solaire serait de lordre de 18 g / jour .
Calcul de dose :
La prise en compte de la concentration de TiO2 dans la crme solaire choisie pour cette valuation
permet de calculer lexposition quotidienne maximale en nanoparticules de TiO 2 enrobes et
fonctionnalises qui est donc de 18 g x 10 % = 1,8 g / jour ou environ 38 g / an pour une utilisation
de 3 semaines.
http://ec.europa.eu/health/ph_risk/committees/04_sccp/04_sccp_en.htm
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Il est trs difficile de connatre la part des produits solaires contenant du nano TiO2 et la
concentration moyenne en TiO2 de ces produits. On ne peut donc questimer un majorant pour la
quantit de TiO2 dissmine annuellement en France dans lenvironnement, en considrant que
toutes les crmes solaires contiennent 10 % de TiO 2 : soit 230 tonnes / an.
Les dispersions de nanoparticules sont stables dans la crme. La dilution dans le milieu naturel
peut favoriser lagglomration des nanoparticules entre elles ou avec dautres matires en
suspension du milieu. La fonctionnalisation des nanoparticules peut se dgrader au cours du
temps dans les milieux naturels. Par contre, le TiO2 est trs stable chimiquement long terme,
compte tenu de sa faible solubilit.
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exposition subchronique par voie cutane, les nano particules de TiO 2 saccumulent
principalement dans la rate, le cur et le foie, mais, lexception de lune dentre elles (P25
Degussa : environ 21 nm, surface spcifique de 50 m2 / g, 25 % rutile / 75 % anatase), elles ne
peuvent pas passer la barrire hmato-encphalique.
Enfin, comme le souligne le rapport Nanoderm 49 (2007), il subsiste galement encore quelques
questions ouvertes concernant par exemple la peau brle par le soleil ou la peau atopique. En
outre, le rle des microlsions n'est pas clair. La plus grande incertitude est lie au fait que des
publications ont dmontr que la flexion mcanique de la peau peut largement augmenter la
pntration (Rouse J.G., 2007; Tinkle S.S., 2003). D'une faon gnrale, l'exposition cutane aux
nanoparticules peut se produire lors de l'utilisation de cosmtiques et dans l'application
intentionnelle de crmes topiques (et autres traitements mdicamenteux).
Les premires tudes de l'absorption de nanoparticules travers la peau ne sont pas concluantes,
d'autres montrent la pntration dans l'piderme, tandis que d'autres en utilisant des protocoles
plus complexes montrent une absorption plus profonde dans l'piderme (Vega-Villa K.R., 2008).
Gnotoxicit et photognotoxicit
Theogaraj et al. (Theogaraj E., 2007) ont valu la photo-clastognicit (test daberrations
chromosomiques) de 8 types de particules de TiO 2 (14 nm 60 nm ; concentration de 800
5 000 g / ml) dans les cellules CHO en prsence ou non dUV (750 mJ / cm).
Lessai a t ralis en prsence ou non dactivation mtabolique S9. Aucune gnotoxicit (en
absence dUV) ou photognotoxicit (prsence dUV) des nanoparticules de TiO 2 na t montre
dans les conditions tudies.
Cette tude aussi intressante soit-elle ne rsout pas dfinitivement la polmique concernant la
gnotoxicit et la photognotoxicit des nanoparticules de TiO 2.
Linnainmaa et al. ont valu la photo clastognicit (test du micronoyau, cellules pithliales
hpatiques de rat) de 3 types de particules ultrafines de TiO2 (UF1 : 20 nm, anatase, sans
enrobage, Degussa, P25 ; UF2 : 20 nm, rutile, enrob avec hydroxyde daluminium et acide
starique, UV-Titan M160 ; TiO2 pigmentaire : 170 nm, anatase, sans enrobage, Kemira AFDC)
aux doses de 5, 10 et 20 g / cm pendant 21 heures, en prsence ou non dUV. Aucune
clastognicit ou photognotoxicit des particules ultrafines de TiO 2 na t montre dans les
conditions tudies (Linnainmaa K., 1997).
Les rsultats des tudes de gnotoxicit du TiO2 rutile/anatase et rutile, du rapport Opinion of the
Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for Consumers
Concerning Titanium Dioxide (2000) sont prsents dans les tableaux ci dessous.
49
http://www.uni-leipzig.de/~nanoderm/index.html
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Tableau 10 : Description des 8 types de nanoparticules de TiO2 testes par Theogaraj et al. (2007)
pour lvaluation de la photo-clastognicit.
Source : Opinion of the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for
Consumers Concerning Titanium Dioxide (2000), Table 1.
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Source: Opinion of the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for Consumers Concerning Titanium Dioxide (2000),
Table 2A and Table 2B.
Tableau 12 : Rsultats des essais in vitro de gnotoxicit de PSMA2, PSMA 4, PSMA 5 et PSMA 6 : nanoparticules TiO2 (rutile enrobes ou non).
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Source: Opinion of the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for Consumers Concerning Titanium Dioxide (2000),
Table 2A and Table 2B.
Tableau 13 : Rsultats des essais in vitro de gnotoxicit de PSMA2, PSMA 4, PSMA 5 et PSMA 6 : nanoparticules TiO2 (rutile enrobes ou non)
(suite)
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Sayes et al. ont expos des fibroblastes cutans et des cellules pithliales pulmonaires
humaines des nanoparticules sphriques danatase de 10 nm (une forme cristalline du
TiO2), des particules sphriques de rutile de 5,2 nm et des particules sphriques mixtes
danatase/rutile de 3,2 nm avec des surfaces spcifiques de 112 (rutile) 153 m 2 / g
(anatase). De la cytotoxicit et de linflammation ont t observs partir de concentrations
de 100 g / ml selon un comportement dose-rponse classique et les effets ont augment en
fonction du temps et de la concentration. Les effets observs ntaient pas corrls la
surface des particules, lanatase (surface spcifique 153 m2 / g) tant plus toxique que le
rutile (surface spcifique 123 m2 / g) concentration gale. Les particules les plus
cytotoxiques taient les plus efficaces gnrer des espces ractives de loxygne et la
toxicit augmentait rapidement avec une illumination dans lultraviolet, facteur favorisant la
gnration de radicaux libres (Sayes C.M., 2006).
50
Autrement dit, les tests de granulomtrie indiquent que 90 % des particules prsentes ont des
diamtres apparents suprieurs 300 m
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reproduction montrent une toxicit chronique des concentrations 1 10 fois moindre que
pour les tests de toxicit aigu (Wiench K., 2009).
Aucune analyse de laltration des particules de T-Lite na t faite, ni de production dERO.
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6.5.3.3 Conclusion
Concernant le produit C tudi :
Chez lhomme, pour les effets et le produit considrs dans les tudes, tant donn les
incertitudes sur le potentiel de pntration cutane et sur lactivit phototoxique, les risques
ne peuvent pas tre exclus.
Pour lenvironnement, le risque ne peut tre estim, il ne peut donc pas tre exclu.
Concernant les crmes solaires contenant du TiO2 nanoparticulaire en gnral :
Il faut galement prciser que, vis--vis de lenvironnement, la quantit de nanoparticules
issues des crmes solaires ne reprsente que 0,1 % de la totalit de la production nationale
de TiO2 (AFSSET, 2008).
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a
b
c
d
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toutes les formes de SAS peuvent tre traites en surface soit physiquement, soit chimiquement.
sous-produit de four lectrique
transformation partielle en cristobalite
synonyme de pyrogne dans certains pays
Les SAS hydrophiles peuvent tre rendues hydrophobes aprs un traitement de surface.
Figure 21 : Diffrentes formes de silice avec le numro CAS (daprs JACC 51)
Les SAS (CAS 7631-86-9), toutes confondues, ont fait lobjet de trs nombreuses tudes.
Les donnes de synthse prsentes ci-aprs sont principalement extraites des documents
suivants :
SAS SI EPA Nano Submission, dossier de soumission volontaire lUS EPA dans le
cadre du NMSP (programme d'intendance pour les matriaux nanomtriques,
2008)52.
51
http://staging.idweaver.com/ECETOC/Documents/JACC%20051.pdf
52
http://www.epa.gov/oppt/nano/sassia.pdf?bcsi_scan_16B740F25AA79220=0&bcsi_scan_filename=sa
ssia.pdf
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53
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Dun point de vue qualitatif, ltat des donnes disponibles ne permet pas de caractriser
correctement ce quoi est rellement expos le consommateur. En effet, la dnomination
commerciale du produit fini considr (sucre) nayant pas t identifie, aucune
caractristique des nanomatriaux intgrs ce produit nest disponible (concentration
prcise massique de la silice dans le produit fini, enrobage des particules, fonctionnalisation
ventuelle etc.). Le mode dutilisation du produit (cuisson par exemple) pourrait galement
fortement modifier ces paramtres physico-chimiques initiaux. De plus, nous ne disposons
daucune donne concernant le comportement de ce type dagglomrat dans un milieu acide
(pH de lestomac) ou ses interactions avec le bol alimentaire. La caractrisation de ltape
dabsorption se rvle complexe.
Sur le plan quantitatif, pour des raisons identiques, nous ne connaissons ni la quantit par
prise ni la quantit journalire absorbe. Il savre donc impossible destimer une dose
partir des informations obtenues. Nous pouvons nanmoins mentionner que lexposition par
voie orale risque dtre leve, puisque ce sont des produits de consommation courante. Si
nous ne considrons que le sucre de table, lexposition est sans doute plus rduite. En effet,
il faut tenir compte des autres produits alimentaires susceptibles de contenir le produit D.
A ce point de llaboration du scnario, trop dlments manquent pour construire un
scnario dexposition raliste.
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LELC (Federation of European Food Additives, Food Enzymes and Food Cultures
Industries55 ; section Food additives and nanotechnologies) donne pour exemple la silice (E
551) qui a t approuve depuis longtemps comme agent anti-agglomrant pour certaines
applications dans les ingrdients alimentaires en poudre. Au cours de sa production, des
particules primaires de taille nanomtrique formes temporairement s'agglomrent ensuite
pour donner des structures de plus grandes tailles. La silice sous cette forme a t value
et approuve comme additif alimentaire sans danger depuis de nombreuses annes.
Daprs lELC : Un additif alimentaire n'est jamais consomm en tant que tel mais toujours
intgr un faible pourcentage dans les denres et boissons alimentaires complexes. Le
seul cas potentiel o la taille serait un critre dterminant pour le statut nano est celui o
la taille de l'additif est dlibrment conue pour obtenir un effet physiologique spcifique,
c'est dire des substances potentielles qui sont la fois des additifs alimentaires et des
substances nutritives.
En ligne avec les dveloppements scientifiques les plus rcents en la matire, lELC
considre que le critre de taille est insuffisant et inadquat pour qualifier le statut nano
dun additif alimentaire : de nombreux autres aspects doivent tre considrs, en particulier :
LELC conclut que, selon la dfinition propose par le Parlement europen la suite de leur
premire lecture de la proposition de la Commission relative au rglement sur les nouveaux
aliments (Novel Foods, 2009), il n'y a pas d'additifs alimentaires produits par la
nanotechnologie.
Il faut nanmoins souligner que les agrgats et agglomrats de SAS doivent tre considrs
comme des entits nano-structures.
SAS SI EPA Nano Submission, dossier de soumission volontaire lUS EPA dans le
cadre du NMSP (programme d'intendance pour les matriaux nanomtriques, 2008).
55
http://www.elc-eu.org/PDF/Food_additives_and_nanotechnologies_-_ELC_position.pdf
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Enfin, le test host-mediated nest pas un test rglementaire. Il a t utilis pour tudier la
mutagnse de produits aprs activation par les systmes mtaboliques in vivo. Les microorganismes permettant de montrer une ventuelle activit mutagne sont en contact avec
le(s) mtabolite(s) mutagne(s) trs peu de temps, ce qui rend ce systme dessai peu
sensible. De plus, ce test utilise des bactries qui, comme cela a t soulign
prcdemment, ne semblent pas adaptes la mise en vidence du potentiel gnotoxique.
Enfin, aucune preuve formelle dexposition des animaux nest fournie.
Il apparat ncessaire dobtenir des indications claires quant au potentiel gnotoxique en
mettant en uvre une batterie de tests standardiss qui permettraient de quantifier les
diffrents types d'aberrations gntiques couvrant toutes les formes possibles de lsions de
l'ADN pouvant tre induites aprs exposition aux nanoparticules (Singh N., 2009). Par
exemple, tant donn les rsultats obtenus lors des tudes de bio distribution, la gnotoxicit
devrait tre value au niveau du foie ainsi quau niveau dun organe directement expos tel
quun organe du tractus digestif (estomac, duodnum, etc.).
Pourtant, comme le souligne le rapport du CPP (Comit de la Prvention et de la
Prcaution), les interactions dpendent fortement de la nature et de la dimension des
particules, ce qui ncessite un approfondissement des connaissances dans le cas des
nanoparticules (CPP, 2006). De plus, il semble qu masse gale et composition chimique
et forme identiques, la rponse biologique (stress oxydant, rponses pro-inflammatoires ou
cytotoxiques, transformation cellulaire) augmente avec la surface spcifique des particules
aussi bien in vitro quin vivo (Park M.V.D.Z., 2009; Singh N., 2009; Waters K.M., 2009; Park
E.J., Park K.,2009). Ainsi, les agrgats et agglomrats de SAS doivent tre considrs
comme des entits nano-structures et, dautre part, la quantit de nanoparticules
lmentaires et/ou dagrgats de taille nanomtrique qu'ils peuvent contenir devrait tre
connue.
Cancrogense / Reprotoxicit :
Des tudes de cancrogense et de toxicit pour le dveloppement de SAS (gel et
prcipite) ont t ralises par voie orale chez diffrentes espces.
Chez la souris B6C3F1 et le rat Fischer, la SAS gel (Sylod 244) administre dans
l'alimentation pendant 21 mois 0, 1,25, 2,5 ou 5 % na induit aucune augmentation
significative des lsions noplasiques ou non noplasiques dans les tissus examins.
Aucune tumeur maligne n'a t observe au cours dune tude ralise sur la SAS
hydrophobe (Arosil R972) chez le rat Wistar expos 100 mg / kg / j via l'alimentation
pendant 24 mois. Aucune diffrence dans le type et/ou dans le nombre de tumeurs bnignes
na t observe par rapport aux contrles. Aucune lsion sur d'autres organes na t
signale (ECETOC, 2006).
Dans toutes les tudes effectues sur la SAS gel, aucune mortalit ou variation significative
de gain de poids chez les mres traites na t retrouve. Aucune diffrence significative
entre le nombre de corps jaunes (mesure chez le lapin seulement), le pourcentage
d'implantation et / ou de rsorption et le poids des petits vivants na t note par rapport aux
contrles. Le nombre danomalies externes, viscrales ou squelettiques des groupes traits
ne diffre pas des contrles (ECETOC, 2006).
Ltude sur SAS prcipite (Arosil R972) a t effectue sur rats Wistar femelles ayant reu
des doses quotidiennes de 500 mg / kg de SiO 2 dans l'alimentation pendant 8 ou
17 semaines avant l'accouplement avec des mles ayant eux-mmes t soumis une
exposition semblable pendant 4,5 mois. Le traitement a t poursuivi au cours de l'levage.
Les animaux de la gnration F0 n'ont pas t affects par le traitement quel que soit le
paramtre considr. Aucun effet reli au traitement au niveau de la taille de la porte ou du
poids la naissance na t rapport. Aucune anomalie clinique, comportementale
significative na t observe chez les petits la naissance. Le dveloppement de la
descendance sest rvl normal et aucune modification lie au traitement na t observe
chez les petits de 4 semaines, pour les deux gnrations (ECETOC, 2006).
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La paroi des bactries Gram- montre une structure diffrente de la paroi de celles Gram+. Elles
possdent une membrane externe en plus du peptidoglycane (structure commune aux Gram+ et
Gram-).
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dhumidit relative. Il n'y avait pas de groupe tmoins au cours de cette tude. Les valeurs
de la DL50 taient comprises entre 23 et 786 mg / cm 2 de SAS, selon les chantillons de
silice. Les SAS n'taient pas toxiques lorsque l'humidit atteignait 95 % ou lorsque de l'eau
tait fournie aux organismes. De plus, aucune toxicit par ingestion de SAS vis--vis de B.
germanica na t montre. Il a t suggr que les SAS sadsorberaient la cuticule des
organismes, les rendant plus vulnrables la dshydratation (Le Patourel G.N.J. et Zhou
J.J., 1990). Cette hypothse de la dshydratation de l'insecte a galement t dveloppe
dans une autre tude, o les auteurs (Gowers S.L. et Le Patourel G.N.J., 1984) ont tudi
l'accumulation de SAS (Sipernat 22S) sur le corps du charanon (Sitophilus oryzae) se
dplaant dans des parcelles de bl traites par la silice (150 mg / kg de bl). La masse de
la silice porte par les coloptres aprs 48 heures d'exposition tait de 3,83 mg / insecte et
aucune mortalit na t observe parmi les insectes, en raison de la forte humidit du bl.
Dans certains cas, la silice accumule sur les insectes semblait davantage translucide
quopaque, et les auteurs ont interprt cette caractristique comme tant due la saturation
de la silice avec des lipides de la cuticule. Sur la base de cette observation, les SAS
agiraient en sadsorbant la cire cuticulaire des insectes, les rendant ainsi plus vulnrables
la dessiccation (Le Patourel G.N.J., 1989).
Toutefois, ces tudes ont t classes CoR 3a (documentation insuffisante pour lvaluation)
et CoR 3b (dficiences quant aux mthodologies employes) (ECETOC, 2006).
Stabilit :
Dans les milieux aquatiques (environnementaux ou biologiques), la silice, comme tous les
minraux, est soumise des interactions avec les soluts simples ou complexes.
En prsence de cations simples (Na+, Ca, K, etc.) la silice, du fait de sa charge ngative, va
s'agrger en formant des agrgats fractals 3D, les particules de SiO2 pouvant se rapprocher
du fait de l'crantage des charges ngatives par l'adsorption de cations sur les sites Si-OH et
Si-O- (Iler R.K., 1979).
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il est probable quune partie non ngligeable de la population soit expose au produit
D dans une quantit potentiellement significative, tant donn que le produit D est
destin tre intgr dans des produits alimentaires de diffrents types, dont
certains sont de consommation courante.
Scnario environnement :
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La dispersion environnementale des SAS intgres aux produits alimentaires est suppose
relativement faible, notamment en raison de lexistence des infrastructures de gestion de la
fin de vie de ces produits (UIOM, stations dpuration des eaux uses).
Cependant, certaines applications de ces mmes silices alimentaires visent des effets
insecticides, pesticides et fongicides et contribueraient ainsi augmenter la dispersion
environnementale de ces nanomatriaux.
6.6.3.3 Conclusion
Chez lhomme et pour lenvironnement, pour les effets et le produit considrs dans ltude,
le risque, sil ne peut pas tre valu, ne peut pas tre exclu.
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les produits dont lutilit dmontre serait faible pour les consommateurs, sur
la base dune analyse socio-conomique de type bnfice / risque ;
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dorienter les efforts de recherche sur les points cls identifis en toxicologie
pour les nanoparticules, savoir la toxicocintique, la dtermination des
mcanismes dactions (permettant notamment la comprhension des
interactions entre des nanoparticules parfaitement caractrises et les
biomolcules, nutriments, xnobiotiques) et ltude des effets in vivo lis des
expositions aigus et multiples incluant les marqueurs de linflammation, le
stress oxydant et la prolifration cellulaire, avec pour objectif terme la mise
en uvre de modles prdictifs de substitution lexprimentation ;
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de
bioamplification
et
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Wiench K., Wohlleben W., Hisgen V. et al. (2009). Acute and chronic effects of nano- and
non-nano-scale TiO(2) and ZnO particles on mobility and reproduction of the freshwater
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Wijnhoven S.W.P., Peijnenburg W.J.G.M., Herberts C.A. et al. (2009). Nano-silver a review
of available data and knowledge gaps in human and environmental risk assessment.
Nanotoxicology; 3(2):109.
Wright M.S., Peltier G.L., Stepanauskas R. et al. (2006). Bacterial tolerances to metals and
antibiotics in metal-contaminated and reference streams. FEMS Microbiol. Ecol.; 58(2):293302.
Wu J., Liu W., Xue C. et al. (2009). Toxicity and penetration of TiO(2) nanoparticles in
hairless mice and porcine skin after subchronic dermal exposure. Toxicol. Lett.; 191(1):1-8.
Yoon K.Y., Hoon Byeon J., Park J.H. et al. (2007). Susceptibility constants of Escherichia coli
and Bacillus subtilis to silver and copper nanoparticles. Sci. Total Environ.; 373(2-3):572-5.
Zhang H., Banfield J.F. (2000). Understanding Polymorphic Phase Transformation Behavior
during Growth of Nanocrystalline Aggregates: Insights from TiO2. J. Phys. Chem. B;
104(15):3481-7.
Zheng L., Hong F., Lu S. et al. (2005). Effect of nano-TiO(2) on strength of naturally aged
seeds and growth of spinach. Biol. Trace Elem. Res.; 104(1):83-92.
Mars 2010
Version finale
page 135
Saisine n2008/005
ANNEXES
Mars 2010
Version finale
page 136
Saisine n2008/005
Mars 2010
Version finale
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Mars 2010
Version finale
Saisine n2008/005
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Mars 2010
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Saisine n2008/005
page 139
Mars 2010
Version finale
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Mars 2010
Version finale
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Saisine n2008/005
Document de prparation
aux auditions
Nom du produit :
Mars 2010
Version finale
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Saisine n2008/005
1. Prsentation et contexte
1.1. Mission de lAfsset
LAfsset a t saisie le 05 juin 2008 par la Direction gnrale de la sant, la Direction
gnrale de la prvention des risques et la Direction gnrale du travail pour laborer et
tudier des scnarios dexposition de la population gnrale quelques nanomatriaux
manufacturs contenus dans un chantillon de produits mis sur le march, en prenant en
compte les diffrentes voies dexposition et les risques potentiels pour la population
gnrale.
Concernant le traitement de cette saisine, lAfsset, dans un premier temps et, conformment
la demande de ses tutelles, a slectionn un panel de produits mis sur le march et
comportant des nanomatriaux manufacturs les plus utiliss. Dans un second temps, il
appartient lAgence dlaborer pour ces produits des scnarios dexposition qui tiennent
compte des voies dexposition ainsi que des risques potentiels pour la population gnrale.
La partie production de nano-objets et protection des travailleurs est un volet qui a t tudi
dans la saisine prcdemment confie lAfsset : Nanomatriaux et scurit au travail .
Aujourdhui les efforts se tournent vers la population gnrale et lenvironnement.
Dans ce cadre lAfsset souhaite se rapprocher la fois :
58 L'agence accde, sa demande et dans des conditions prservant la confidentialit des donnes l'gard des tiers, aux
informations ncessaires l'exercice de ses missions et dtenues par toute personne physique ou morale sans que puisse lui
tre oppos le secret mdical ou le secret en matire commerciale et industrielle .
Mars 2010
Version finale
page 143
Saisine n2008/005
Ces attentes vis--vis des multiples parties prenantes tant diffrentes en fonction de leurs
implications au sein de la chane de production de produits contenant des nanomatriaux, le
document compartimente les interrogations de lAfsset suivant la catgorisation suivante :
Lauditionn doit ainsi en premier lieu se positionner et dfinir son rle (producteur /
importateur / client / transformateur) afin de se rfrer aux parties concernant son activit.
Dans un souci dhomognit entre les diffrentes instances travaillant sur ces aspects, un
certain nombre de dfinitions pralables sont rappeles dans le paragraphe suivant ( 1.3).
1.3. Dfinitions
Reprenons le chapitre 2 du rglement (CE) n1907/2006 du Parlement europen et du
Conseil du 18 dcembre 2006 concernant l'enregistrement, l'valuation et l'autorisation des
substances chimiques, ainsi que les restrictions applicables ces substances (REACH),
Article 3, Dfinitions :
chelle nano : structures lmentaires dont au moins une des dimensions varie
entre 1 et 100 nanomtres (nm) ;
nano-objet : matriau avec une, deux ou trois dimensions externes
lchelle nanomtrique.
Mars 2010
Version finale
page 144
Saisine n2008/005
2. Informations recherches
A. Les producteurs/importateurs
A.1
Les entrants
A.1.1 Caractrisation
-
Quel est (sont) le(s) type(s) de nanomatriau(x) que vous utilisez : mtalliques,
cramiques, semi conducteurs, et organiques ?
Quelle est la composition ? (composition chimique et structure) ?
Sous quelle forme se prsentent ces nano-objets dans la formulation de vos produits:
particules isoles, agrgats, agglomrats, nano fibres, nano fils, films, massif (nano
composite, organique, poudre nanostructure, poudre micronique) ? Quel est ltat
dagglomration, dagrgation ?
Quelles sont les degrs de puret et les impurets identifies?
Quelles sont les caractristiques de tailles pour la partie nanostructure et les
agglomrats/agrgats? (tailles moyennes et distribution)
Quelles sont les caractristiques de solubilit ? (milieu aqueux et organiques)
Quelles sont les caractristiques de densit ?
Quelles sont les caractristiques de porosit ?
Quelles sont les proprits de stabilit ?
Quelle est la surface spcifique ?
Quelle est la physico - chimie de surface ? (prsence dun revtement de surface ?)
Quelle est la charge de surface ?
Des donnes toxicologiques et cotoxicologiques pertinentes (Koc, tudes propres
au produit, relatives des produits similaires, ) sont-elles disponibles ?
Y a-t-il dautres indicateurs de ractivit connus ? (ractivit acido basique,
photocatalytique, redox, formation radicalaire, )
Quelles sont les autres informations qui vous paraissent pertinentes ?
A.1.2 Production
A.2
-
Les sortants
Mars 2010
Version finale
page 145
Saisine n2008/005
Quel est (sont) le(s) type(s) nanomatriau(x) que vous utilisez pour lapplication
vise : mtalliques, cramiques, semi conducteurs, et organiques ?
Quelle est la composition ? (composition chimique et structure) ?
Quelles caractrisations sont fournies par le producteur (Une Fiche de donnes de
scurit est-elle disponible) ? Mentionnent-elles laspect nano ? Sont-elles
suffisantes et adaptes la spcificit nano ? Une batterie de tests est-elle effectue
sur les entrants avant utilisation ?
Quelles sont les principales proprits attendues des nanomatriaux incorpors dans
vos articles ?
Utilisez-vous dautres nanomatriaux pour dautres applications ? si oui, prcisez.
B.2
-
Les entrants
Les sortants
Quelles sont les caractrisations des produits finis (articles)? Tiennent-elles compte
des nanomatriaux incorpors ?
Quelle est la composition de larticle ?
Quelle est la teneur en nano ?
Mars 2010
Version finale
page 146
Saisine n2008/005
IP-AC
IP-CC
IP-RE
IP-SC
LD
PF
SR
Autres liens sans rmunration ponctuelle (Parents salaris dans des entreprises
vises prcdemment)
SR-A
VB
SYNTHESE DES DECLARATIONS PUBLIQUES DINTERETS DES MEMBRES DU CES PAR RAPPORT AU
CHAMP DE LA SAISINE
NOM
Analyse Afsset :
ANFOSSO-LDE
Analyse Afsset :
BRENGIER
Analyse Afsset :
CSARINI
Prnom
Rubrique de la DPI
Description de lintrt
en cas de lien dclar
Date de
dclaration des
intrts
13 mai 2008
Fabienne
Michel
Jean-Pierre
IP-SC
Investigateur principal pour Oenobiol (Rmunration
Mars 2010
Version finale
page 147
Saisine n2008/005
personnelle) (2006-2007)
SR-A
Analyse Afsset :
COHEN
Analyse Afsset :
COURANT
Analyse Afsset :
COUTURIER
Analyse Afsset :
DEBOUZY
Analyse Afsset :
DOR
06 mai 2008
26 octobre 2009
Daniel
Frdric
Jean-Claude
Aucun lien dclar
/
Jean-Franois
29 avril 2008
11 mai 2009
IP-CC
Confrence de presse sur La protection solaire : le
bon usage du soleil pour NIVEA (Rmunration
personnelle) (31/01/2005)
Confrences sur les ingrdients solaires et le
vieillissement. Soleil UV et peau pour la Socit
franaise des antioxydants (Aucune rmunration)
(25/05/2005 et 10/12/2007)
SR-A
Analyse Afsset :
EL KHATIB
Analyse Afsset :
FLAHAUT
Mars 2010
30 avril 2008
20 novembre 2009
29 avril 2008
17 juillet 2008
Version finale
page 148
Saisine n2008/005
23 octobre 2009
IP-RE
Expert du groupe Effets des nanoparticules et
nanomatriaux sur la sant et lenvironnement de
lOMNT (Observatoire des micro et nanotechnologies)
(Aucune rmunration) (depuis 2007)
VB
Analyse Afsset :
GAFFET
23 juin 2008
11 aot 2008
06 novembre 2008
04 novembre 2009
IP-RE
Expertises de programme de recherche (Nano) pour
diffrents tablissements: PCRD-Programme NMP
pour la DGXII (Europe) (2003, 2004 et 2005),
lInternational Copper Association (ICA) and the
University of Chile, through the Center for Advanced
Interdisciplinary Research in Materials (CIMAT), le
Belgian Federal Public Planning Service /Science
Policy, lAustralian Research Council, lANR et lANRT
(2000-2008)
DG XII : Expertises 7me PCRD - NMP-2008-SMALL1.3-2 (NMP-2008-1.3-2 : Impact of engineered
nanoparticles on health and the environment") et
NMP-2008-1.3-1 "Validation, adaptation and/or
development of risk assessment methodology for
engineered
nano-particles
(Rmunration
personnelle)
Expert Programme Blanc - Programme Matriaux
Fonctionnels et Procds Innovants - Programme
Contaminants - Ecosystmes et Sant pour lANR
(Agence nationale de la recherche) (Aucune
rmunration) (2008)
Expert franais auprs de la Commission europenne
: RIP - oN 1 : Reach Implementation program on
Nanomaterials (Aucune rmunration) (2009-2012)
Expertise du Programme national Belge NanoToxico
(Rmunration personnelle)
Expertise
OSEO
du
(Rmunration personnelle)
IP-AC
Programme
Genesis
Version finale
page 149
Saisine n2008/005
travail sur les nanomatriaux pour lAFNOR (20052007), ECRIN (2005-2007), la Fdration Franaise
de la Chimie (2006-2007)
Expertise ponctuelle pour lAgence de lInnovation
Industrielle (A2i) (2007)
Veille technologique Nanomatriaux pour CEISInnovation 128 (2006)
Membre du Comit scientifique sectoriel de
lANR/PNano Nanosciences et Nanotechnologies
(Aucune rmunration) (2009-2011) et membre du
Comit de Pilotage) (Aucune rmunration) (2007 et
2008)
Membre du Club Amlioration des performances
humaines pour des applications de dfense et de
scurit, quelles opportunits et quelles limites vis
vis des nouvelles technologies? pour la DGA /
CHEAR (Centre des Hautes Etudes de l'Armement)
(Aucune rmunration) (2008-2010)
Membre du Comit de Pilotage NanoForum (CNAMDGS) (Aucune rmunration)
Reprsentant franais au sein de 2 GT
NanoMatriaux de lOCDE WPMN: Dveloppement
d'une base de donnes de l'OCDE sur la recherche
en Nanotechnologie et Stratgies de recherche
sur la sret sanitaire et environnementale des
nanotechnologies (Aucune rmunration)
Membre du Comit Scientifique NanoRisks 2008
(Aucune rmunration)
Membre du Groupe d'Appui direct de la Commission
Particulire Dbat Public/CPDP Nanotechnologies
(Rmunration personnelle) (2009-2010)
Expert/Collge Professionnel au CNC (Conseil
National de la Consommation) (Aucune rmunration)
(2008-2009)
Membre du Groupe de Veille sur les Impacts
Sanitaires des Nanomatriaux Nano du HCSP
(Haut Conseil Sant Publique)/DGS (Aucune
rmunration) (depuis 2007)
Expert Nanoparticules, nanomatriaux : effets sur la
sant et l'environnement de lOMNT (Observatoire
des Micro et Nano Technologies) (Aucune
rmunration)
IP-CC
3
confrences
sur
les
nanomatriaux
et
nanoparticules chez Saint-Gobain (1 jour en 2005),
EDF (1 jour en 2005) et le Syndicat des Industries
Minrales (2 jours en 2006)
Membre du Comit de Pilotage du Congrs Matriaux
2010 de la Fdration franaise des matriaux
(Aucune rmunration)
IP-A
Prsident de sance au 3rd Nano Safety for Success
Dialogue: Building Trust in Nanotechnologies
Mars 2010
Version finale
page 150
Saisine n2008/005
Recherche
- Rgion
Analyse Afsset :
JOB
Analyse Afsset :
LABEYRIE
Mars 2010
30 avril 2008
26 octobre 2009
29 avril 2008
23 novembre 2009
28 avril 2008
Version finale
page 151
Saisine n2008/005
20 novembre 2009
PF
Actions de la SARL Irilab
LD
Administrateur de la socit Irilab depuis 2000
IP-SC
Analyse Afsset :
LAMBERT
Analyse Afsset :
LAURIER
Analyse Afsset :
LE BIHAN
06 mai 2008
13 mai 2008
23 juin 2008
15 octobre 2009
LD
Ingnieur tudes et recherche lINERIS (Institut
National de l'environnement industriel et des risques)
IP-SC et VB
Projet de recherche partenariale / Usure des
matriaux pour Nanoledge donnant lieu versement
lorganisme dappartenance (< 3 % du budget du
laboratoire) (2007)
tude prliminaire de mesures granulomtriques de
fines particules de silice dans l'air pour Rhodia
donnant
lieu
versement
lorganisme
dappartenance (< 3 % du budget du laboratoire)
(2005)
Analyse Afsset :
versement
lorganisme
dappartenance (< 3 % du budget du laboratoire)
(2009)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine
LEPOUTRE
Analyse Afsset :
Mars 2010
Philippe
25 avril 2008
27 octobre 2009
Version finale
page 152
MARCHAL
Saisine n2008/005
29 avril 2008
07 janvier 2009
24 octobre 2009
Didier
LD
Manager europen chez Johnson Controls Inc. depuis
1997
IP-SC
tudes de risques et de danger pour EHS Consultants
(Rmunration personnelle) (2005-2007)
Analyse Afsset :
MOCH
Analyse Afsset :
PIRARD
Analyse Afsset :
PLANTON
Analyse Afsset :
RUMEAU
Analyse Afsset :
de SZE
Analyse Afsset :
TARDIF
Annie
Aucun lien dclar
/
Philippe
15 mai 2008
24 novembre 2009
Serge
Aucun lien dclar
/
Michel
02 mai 2008
20 novembre 2009
Ren
Aucun lien dclar
/
Franois
15 avril 2008
26 novembre 2008
20 novembre 2009
IP-CC
Moyens de mesure des nanoparticules pour
ECRIN (Paris, 2005)
Utilisation des
(Grenoble, 2006)
Nanotraceurs
pour
GFHN
Principaux
Mars 2010
contrats
de
collaboration
Version finale
scientifique
page 153
Analyse Afsset :
Saisine n2008/005
VALLET
Analyse Afsset :
VECCHIA
Analyse Afsset :
Mars 2010
Michel
24 avril 2008
29 avril 2008
06 mai 2009
26 octobre 2009
Version finale
page 154
Saisine n2008/005
NOM
Prnom
Date de
dclaration des
intrts
Rubrique de la DPI
Description de lintrt
Analyse Afsset :
BOIZE
Analyse Afsset :
BOTTERO
Magali
25 novembre 2008
26 fvrier 2009
04 novembre 2009
IP-AC
Participation au groupe de travail CSIC du Ministre de
lcologie, de lnergie, du dveloppement durable et de la
mer (Aucune rmunration)
Aucun lien dclar
/
Jean-Yves
12 dcembre 2008
26 novembre 2009
IP-RE
Expert Programme Blanc Programme PNano pour lANR
(agence nationale de la recherche) (Aucune rmunration)
(2008).
Expertise
ponctuelle
pour
(Rmunration personnelle).
lUniversit
de
Vienne.
IP-CC
Congrs de lOCDE (confrence invite) : Nano: the hot
new thing... that has been around for a while (Paris,
Mars 2010
Version finale
page 155
Saisine n2008/005
septembre 2009)
Confrence Plnire de lEPFL (cole polytechnique fdrale
de Lausanne) : Le futur des nanoparticules et leurs dangers
potentiels. Nanotechnologies, potentialits et risques pour
lhomme et lenvironnement (30/11/2009)
Minralogie environnementale, colloque de l'Acadmie des
Sciences/Institut
de
France :
Nanomatriaux
et
nanoparticules manufactures : Perturbation de lactivit
biologique en milieu environnemental (14-15/09/ 2009)
UNSW Center for Water and Waste Technology Seminars:
Speciation
of
nanoparticles:
Environmental
and
ecotoxicological implications (Sydney-Australie, 20/11/2008)
4th SOLEIL Users Meeting : Formation Mechanism of
Nanosized Alumino-Silicate: A Multi Method Study
(Palaiseau-France, 21-22/01/2009)
237th ACS National Meeting : Physical-chemical
characterization of residues from alteration of engineered
nanomaterials : Commercialized sunscreens containing
titanium dioxide nanoparticles (Salt Lake City-USA, 2226/03/2009)
SOWACOR First Annual Assembly (confrence invitee) :
Natural and engineered nanoparticles in soils and surface
waters: occurence, benefits and risks (Utrecht-Netherlands,
18-19/05/2009)
Journes Scientifiques C'Nano PACA (confrence plnire) :
Environmental nanotechnologies (Porquerolles, 2527/05/2009)
19th Annual V.M. Goldschmidt Conference (confrence
invite) : Formation and growth mechanisms of natural
nanotubes
:
imogolites
et
Physical-chemical
characterization and ecotoxicity of residues from alteration of
engineered nanomaterials (Davos-suisse, 21-26/06/2009)
4th International Conference on the Environmental Effects of
Nanoparticles and Nanomaterials.: Aging of commercial
nanomaterials: a new environmental challenge? et
Mobility vs. Attachment of TiO2 nanoparticles in a natural
sandy porous media (Vienne-Autriche, 6-9/09/2009)
Nanoparticle and particle separation 2009 : Environmental
impact of nano-Residues from the Degradation of
commercialized Sunscreens : physico-chemical evolution
during aging and toxicity towards living organisms from
aquatic media (Duke University, Durham-NC-USA, 35/06/2009)
UKY Dpt. Plant & Soil Sciences Seminar Series : Natural
and engineered nanomaterials : reactivity and ecotoxicological
aspects (Lexington KY-USA,14/09/2009)
IP-SC
Towards a definition of inorganic nanoparticles from an
environmental, health and safety perspective . Nature,
Nanotechnology, Vol 4 Issue 10 (2009)
Mars 2010
Version finale
page 156
Saisine n2008/005
Analyse Afsset :
CHEVALIER
Analyse Afsset :
GAFFET
05 novembre 2008
21 novembre 2008
29 janvier 2009
25 octobre 2009
23 juin 2008
11 aot 2008
06 novembre 2008
04 novembre 2009
IP-RE
Expertises de programme de recherche (Nano) pour diffrents
tablissements: PCRD-Programme NMP pour la DGXII
Mars 2010
Version finale
page 157
Saisine n2008/005
Mars 2010
Version finale
page 158
Saisine n2008/005
Version finale
page 159
Saisine n2008/005
LE BIHAN
23 juin 2008
15 octobre 2009
LD
Ingnieur tudes et recherche lINERIS (Institut National de
l'environnement industriel et des risques)
IP-SC et VB
Projet de recherche partenariale / Usure des matriaux pour
Nanoledge donnant lieu versement lorganisme
dappartenance (< 3 % du budget du laboratoire) (2007)
tude prliminaire de mesures granulomtriques de fines
particules de silice dans l'air pour Rhodia donnant lieu
versement lorganisme dappartenance (< 3 % du budget du
laboratoire) (2005)
Caractrisation des particules fines et ultrafines lors
d'oprations de maintenance pour Saint-Gobain donnant lieu
versement lorganisme dappartenance (< 3 % du budget
du laboratoire) (2009)
Analyse Afsset :
MOUNEYRAC
26 novembre 2008
13 fvrier 2009
12 novembre 2009
IP-SC
me
Analyse Afsset :
NESSLANY
14 aot 2009
16 octobre 2009
27 novembre 2009
VB
tudes
de
mutagense
pour
diverses
socits
pharmaceutiques, cosmtiques, agro-chimiques donnant lieu
versement lorganisme dappartenance (Institut Pasteur de
Lille) (> 90 % du budget du laboratoire)
Travaux auprs de lAction Conjointe : exprimentations en
gnotoxicit sur des produits fournis par Rhodia dans le cadre
dun programme europen donnant lieu versement
Mars 2010
Version finale
page 160
Saisine n2008/005
Analyse Afsset :
TARDIF
28 novembre 2008
08 juillet 2009
15 avril 2008
26 novembre 2008
20 novembre 2009
IP-CC
Moyens de mesure des nanoparticules pour ECRIN
(Paris, 2005)
Utilisation des Nanotraceurs pour GFHN (Grenoble, 2006)
Commission AFNOR
rmunration)
Nanotechnologies
(Aucune
Mars 2010
Version finale
page 161
Saisine n2008/005
NOM
Prnom
Rubrique de la DPI
Description de lintrt
Date de dclaration
des intrts
Analyse Afsset :
26 mai 2008
15 octobre 2009
OULDEHLKIM
Mostafa
Analyse Afsset :
VERDIER Ccile
IP-CC
COSMED
[Intervenant
aux
"Rencontres
rglementaires"
pour
COSMED
(Aucune
rmunration) les 30/03/2007 et 26/06/2007.
Intervenant sur les conservateurs dans les produits
cosmtiques : contraintes et nouvelles opportunits
pour lUFR de Pharmacie de Paris 5 en mai 2007
(Aucune rmunration)
Analyse Afsset :
Mars 2010
Version finale
page 162
Saisine n2008/005
Mars 2010
Version finale
page 163
Saisine n2008/005
Version finale
page 164
Saisine n2008/005
Mars 2010
Version finale
page 165
Saisine n2008/005
B- Donnes toxicologiques
Comme nous lavons mentionn, aucun essai de toxicit aigu et/ou chronique par la voie
cutane, nest disponible. En revanche, des tudes de toxicit par voie orale et par inhalation
sont disponibles (Ji J.H., 2007; Ji J.H., 2007; Sung J.H., 2008; Sung J.H., 2009). La voie
dexposition principale est la voie cutane. Par dfaut, ltude de toxicit in vivo par voie
orale chez le rat mle et femelle traits pendant 28 jours est mentionne.
Version finale
page 166
Saisine n2008/005
dpendante de la concentration en Ag. Les reins ont montr une accumulation dargent
sexe-dpendante avec un taux 2 fois plus lev chez les femelles par rapport aux mles ce
qui nest pas le cas aprs des traitements avec lAg non nanomtrique.
Il est prciser que les dosages ont t effectus par spectromtrie dabsorption atomique,
ce qui ne permet pas de connatre la forme (argent soluble ou nanoparticulaire).
La toxicit hpatique value par lanalyse histo-pathologique sest traduite par une dilatation
de la veine centrale, des hyperplasies des canaux biliaires et un nombre de foci augment.
Labsorption par voie orale dargent a montr un effet first-pass hpatique menant une
excrtion biliaire rduisant la distribution systmique. Cette tude tend montrer une
absorption similaire entre nanoAg et Ag. Laugmentation du temps de coagulation relie
une concentration sanguine croissante dAg indique que les nanoparticules dAg absorbes
oralement entrent dans la circulation sanguine et sont capables daffecter la coagulation.
toxicit aigu : aucune toxicit na t observe pour des doses infrieures 5g/kg,
allergnicit : la conclusion a t que la poudre de nanoparticules dAg na induit
aucune sensibilisation cutane chez le cobaye (Allergen test - ISO 1099310:1995(E).
Bien quindiques comme tant disponibles auprs du producteur A1 sur simple demande,
nous navons eu aucun retour de ce producteur aprs en avoir effectu la demande.
Aucune autre donne nest actuellement disponible dans la littrature.
C- Reprotoxicit
Aucune donne nest actuellement disponible dans la littrature.
D- Gnotoxicit
Concernant le potentiel gnotoxique, trs peu de donnes sont actuellement disponibles
dans la littrature. A lexception dune publication mentionnant la recherche daberrations
chromosomiques par le test du micronoyau in vivo au niveau de la moelle osseuse (TG 487
In Vitro Micronoyau Test) et de lsions primaires de lADN par mesure de la fragmentation
dans le test des comtes, on ne retrouve aucun rsultat issu des tests rglementaires
standards de gnotoxicit in vitro tels que le test de mutation sur cellules eucaryotes (TG
476 Essai in vitro de mutation gnique sur des cellules de mammifres) ou encore le test
daberrations chromosomiques (TG 473 Essai d'aberration chromosomique in vitro chez les
mammifres).
En revanche, le potentiel gnotoxique in vivo des nanoparticules dargent a t tudi selon
la ligne directrice OCDE 474 (Test de micronoyaux sur les rythrocytes de mammifre) et les
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Les nanoparticules dargent enrobes d'amidon utilises au cours de cette tude ont t
synthtises selon une mthode publie (Raveendran P., 2003). Le choix de lagent
denrobage a t justifi par une stabilit des nanoAg dans le milieu de culture avec un
degr dagglomration plus bas par rapport aux nanoAg coates avec des protines ou
dalcool polyvinylique. La distribution analyse par MET et absorption UV montre que les
nanoAg utilises ont un diamtre compris entre 6-20 nm. Aucune autre indication nest
donne quant la caractrisation de ces nanoAg.
Les nanoAg ainsi obtenues ont t solubilises dans leau distille. Aucun contrle
(dispersion dans le milieu utilis) des prparations des nanoparticules dargent na t
effectu.
Les cellules IMR-90 et U251 ont t traites pendant 48 heures dans un milieu complet,
des concentrations allant de 25 400 g/ml pour le test des comtes et de 100 200 g/ml
pour le test du micronoyau.
Les lsions de lADN mesures dans le test des comtes et dans le test du micronoyau avec
blocage la cytokinse se sont rvles dose-dpendantes et en nombre plus important
dans les cellules U251 dans lesquelles une augmentation statistiquement significative a t
observe partir de 25 g/ml dans le test des comtes et la concentration minimale
tudie de 100 g/ml dans le test du micronoyau.
Lanalyse par TEM indique la prsence de nanoAg lintrieur des mitochondries et du
noyau, ce qui tend confirmer leur implication directe dans la toxicit mitochondriale et les
lsions de lADN. Un mcanisme possible de toxicit est propos qui implique la perturbation
de la chane respiratoire mitochondriale par les nanoAg conduisant la production dERO et
linterruption de la synthse dATP, entranant son tour des lsions de lADN. Le niveau
de lsions de lADN est probablement augment par dposition, suivie par des interactions
des nanoparticules dAg avec lADN entranant larrt du cycle cellulaire en phase G 2/M60.
AshaRani et al. proposent un mcanisme possible de toxicit qui implique la perturbation de
la chane respiratoire mitochondriale par les nanoAg (dans cette tude, 6-20 nm) conduisant
la production dERO et linterruption de la synthse dATP, entranant son tour des
lsions de lADN. Le niveau de lsions de lADN est probablement augment par dposition,
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Il faut prciser que larrt du cycle cellulaire seffectue normalement en phase G1/S.
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suivie par des interactions des nanoparticules dAg avec lADN entranant larrt du cycle
cellulaire en phase G2/M (Asharani P.V., 2009).
Le potentiel gnotoxique des nanoparticules dAg a galement t recherch par des
mthodes non standard :
Le potentiel gnotoxique in vitro des nanoparticules dargent (diamtre compris entre 5-10
nm) a t tudi sur la ligne cellulaire HepG2 par la mesure de la protine H2AX
indiquant la prsence de cassures double-brin de lADN (Kim S., 2009).
La mesure de H2AX a t effectue aprs 24 heures de traitement aux concentrations de
1 et 2 g/ml de nanoAg en utilisant une mthode par immunofluorescence en microscopie
confocale. Les nanoparticules dargent (5-10 nm) utilises au cours de cette tude ont induit
une augmentation significative et dose-relie de H2AX. De la mme faon, AgNO3
augmente significativement le niveau de H2AX. Cependant, la prsence de N-AC inhibe
linduction de cet effet aussi bien pour les nanoAg que pour les ions Ag 2+.
Les nanoparticules dargent de diamtre < 10 nm utilises au cours de cette tude ont
montr une activit gnotoxique in vitro sur les cellules HepG2 qui est inhibe par la
prsence dun anti-oxydant. Aucune diffrence significative entre lactivit gnotoxique des
nanoAg (<10 nm) et celle des ions Ag 2+ na t observe.
Cette tude a vis examiner linduction de lsions de lADN par des nanoparticules dAg
(fonctionnaliss en surface ou non par des polysaccharides) dans 2 types de cellules de
mammifre, des cellules souche embryogniques et des fibroblastes embryogniques de
souris (Ahamed M., 2008).
Les 2 types de nanoAg utilises dans cette tude diffrent essentiellement dans leur
composition chimique de surface. Les nanoAg de 25 nm non coates ont t traites par des
hydrocarbures. Les nanoAg de 25 nm coates ont t obtenues par rduction des ions Ag 2+
en solution polysaccharidique.
Les solutions de traitement ont t prpares dans le milieu de culture SANS srum avant
chaque essai.
Lincorporation et la localisation de ces nanoAg dans les 2 types cellulaires ont t vrifies
aprs traitement avec une sonde fluorescente sonde CTG qui colore compltement la cellule
avec confirmation par microscopie confocale. Les rsultats ont montr que les nanoAg non
coates sagglomrent et peuvent tre exclus de certains organites tels que le noyau et les
mitochondries alors que les nanoparticules dargent coates ne forment pas dagglomrats
et sont distribues dans toute la cellule.
Aprs des traitements de 4 et 24 heures, les 2 types de nanoAg ont entran une surrgulation des gnes codant pour la protine p53 (contrle du cycle cellulaire) et pour Rad51
(protine cl dans la rparation des cassures double-brin de lADN) et une augmentation de
lexpression de H2AX phosphoryle (les cassures double-brin de lADN induisent galement
la phosphorylation de lhistone H2AX). Les nanoparticules dAg coates ou non induisent
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Les auteurs indiquent que les nanoparticules dargent utilises au cours de cette
tude ont une taille de 15 et 100 nm. Aucune autre indication nest donne quant la
caractrisation de ces nanoAg.
Les cellules BRL 3A ont t traites pendant 24 heures dans un milieu sans srum, des
concentrations allant de 10 50 g/ml. Aucun contrle (dispersion dans le milieu utilis) des
prparations des nanoparticules dargent na t effectu.
A la fin de la priode de 24 heures de traitement, les changements morphologiques ont t
valus. A des concentrations < 10 g/ml, les cellules BRL 3A ne montrent pas de diffrence
morphologique par rapport aux cellules non traites. En revanche, des doses plus leves,
les cellules BRL 3A apparaissent plus petites et deviennent irrgulires
La cytotoxicit a t value en utilisant 3 marqueurs : le test MTT (mesure de la fonction
mitochondriale), le test au bleu Alamar et le test LDH (marqueur dintgrit membranaire).
Une augmentation significative et dose-relie de LDH a t note des concentrations de
nanoparticules dAg 10 g/ml. Une diffrence significative a t note entre les types de
nanoAg avec une cytotoxicit plus importante pour les nanoparticules de 100 nm par rapport
celles de 15 nm avec des CI50 calcules respectives de 24 et 50 g/ml.
Les rsultats du test au MTT montrent une diminution statistiquement significative partir de
5 g/ml mais aucune diffrence significative na t observe entre les 2 types de nanoAg
(CI50 calcules respectives de 19 et 24 g/ml respectivement pour les nanoAg de 100 et 15
nm).
La gnration dERO a t mesure par cytomtrie en flux en prsence de diactate de 2,7dichlorodihydrofluorcine aprs incubation des cellules traites aprs 6 heures aux
nanoparticules dargent de 15 et 100 nm en utilisant une gamme de concentrations allant de
5 50 g/ml. Le glutathion rduit (GSH) a galement t dos. Le potentiel membranaire
mitochondrial a t mesur par la technique de lincorporation de la rhodamine 123.
Les rsultats montrent que le traitement avec les nanoAg (15 et 100 nm) entrane une
augmentation significative et dose-relie des niveaux dERO intracellulaires jusqu environ
10 fois le niveau du tmoin ngatif pour les concentrations de 25 et 50 g/ml. Une dpltion
significative du GSH par rapport au tmoin (denviron 70 %) a t retrouve 25 g/ml de
nanoAg 15 et 100 nm. A linverse, le potentiel membranaire mitochondrial diminue
significativement 25 et 50 g/ml.
En conclusion, selon les auteurs, les nanoparticules dAg utilises dans cette tude (15 et
100 nm) induisent des modifications cellulaires morphologiques, une fuite de LDH et un
dysfonctionnement mitochondrial dans les cellules BRL 3A. Ces nanoAg entranent une
augmentation de la gnration dERO, une dpltion en GSH et une diminution du potentiel
membranaire mitochondrial. Le stress oxydant contribue la cytotoxicit de ces
nanoparticules.
Braydich-Stolle et al. ont galement tudi la cytotoxicit in vitro de nanoparticules dargent
(15 nm) sur une autre ligne de spermatogonies de type A, les cellules C18-4 immortalises
et isoles partir de testicules de souriceau (Braydich-Stolle L., 2005).
Les auteurs indiquent que les nanoparticules dargent utilises au cours de cette tude ont
une taille de 15 nm. Aucune autre indication nest donne quant la caractrisation de ces
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nanoAg. Les nanoAg ont t disperses dans un tampon phosphate. Aucun contrle
(dispersion dans le milieu utilis) des prparations des nanoparticules dargent na t
effectu.
Les cellules C18-4 ont t traites pendant 48 heures des concentrations allant de 5 100
g/ml. A la fin de la priode de traitement, les changements morphologiques ont t valus.
A partir de la concentration de 10 g/ml, les cellules C18-4 montrent des changements
morphologiques de type ncrotique et apoptotique par rapport aux cellules non traites.
La cytotoxicit a galement t value aprs le traitement en utilisant 2 marqueurs : le test
MTS et le test LDH.
La fonction mitochondriale a t value par la technique utilisant un sel de ttrazolium
(similaire au MTT mentionn plus haut, le MTS[a]). Les rsultats du test MTS[a] montrent un
effet cytotoxique des nanoAg (15 nm) vis--vis des cellules C18-4 avec une CI50 aprs 48
heures de traitement estime 8,75 g/ml. Il est intressant de prciser que, en
comparaison, le carbonate dargent sest rvl nettement moins cytotoxique avec une CI50
estime de 408 g/ml (soit une cytotoxicit environ 50 fois moins importante).
Le dosage de la LDH (marqueur dintgrit membranaire), a permis de calculer une CI50 de
2,5 g/ml pour les nanoAg (en comparaison, le carbonate dAg na induit aucune cytotoxicit
la concentration maximale teste de 100 g/ml ce qui indique une cytotoxicit au moins
environ 40 fois moins importante).
Linduction dapoptose/ncrose dtermine par la technique la coloration au YO-PRO-1
sest montre significative ds la concentration faible de 5 g/ml.
En conclusion, selon les auteurs, les nanoparticules dAg utilises dans cette tude (15 nm)
induisent des modifications morphologiques des cellules, une fuite de LDH et un
dysfonctionnement mitochondrial dans les cellules C18-4, qui se sont rvles plus
sensibles que les cellules BRL 3A (Braydich-Stolle L., 2005).
La cytotoxicit in vitro des nanoparticules dargent (7-20 nm) a galement t tudie sur 2
modles cellulaires secondaires, les lignes A431 (cellules issues dun carcinome cutan
humain) et HT-1080, cellules issues dun fibrosarcome humain (Arora S., 2008) et sur 2
types de cellules primaires de souris, i.e. des fibroblastes et des hpatocytes (Arora S.,
2009).
Les nanoparticules dargent utilises au cours de cette tude ont t synthtises selon une
mthode brevete. Elles ont t utilises sous forme de suspension aqueuse collodale et se
sont montres stables dans le milieu de culture. Les nanoAg sont sphriques et plus de 90
% ont un diamtre compris entre 7-20 nm (analyse par MET haute rsolution). Aucune autre
indication nest donne quant la caractrisation de ces nanoAg.
La premire partie de ces tudes a vis mettre en vidence des changements
morphologiques. Des cellules A431 ou HT-1080 ont t traites pendant 24 heures des
concentrations allant de 0,76 50 g/ml. Les fibroblastes ont t traits pendant 24 heures
des concentrations allant de 6,25 100 g/ml et les hpatocytes de 12,5 200 g/ml. Les
concentrations en argent ont t dtermines dans toutes les prparations par spectromtrie
dabsorption.
A la fin de la priode de 24 heures dincubation, les changements morphologiques ont t
observs. Les rsultats montrent que les cellules HT-1080 et les fibroblastes non traits
apparaissent polydriques ou en toile et prsentent des expansions lamellaires fines qui
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En conclusion, Hsin et al. (Hsin Y.H., 2008) ont montr un mcanisme reliant la gnration
dERO et lapoptose (activation de JNK) la cytotoxicit induite par les nanoAg via un
mcanisme apoptotique mitochondrial pour les nanoparticules dAg (1-100 nm).
Carlson et al. ont compar la cytotoxicit et la gnration dERO induites in vitro des
nanoparticules dargent en fonction de leur taille (15, 30 et 55 nm) sur macrophages
alvolaires de rat (Carlson C., 2008).
La caractrisation (taille et morphologie) des nanoparticules dAg, vrifie par SEM
(Scanning Electron Microscopy), a montr des nanoAg sphriques de taille croissante
denviron 15, 30 et 55 nm.
Une fois en suspension, ces nanoparticules tendent sagglomrer et sdimentent
rapidement dans la solution. Des tests pralables de dispersion ont donc t raliss dans
du tampon phosphate physiologique (PBS, pH 7,4), dans de leau dsionise, dans du
dimthylsulfoxyde (DMSO) et dans de lthanol afin dexaminer leur comportement. Sur la
base de ces essais de dispersion, leau dsionise a t retenue pour prparer les
diffrentes solutions stock des nanoAg 15, 30 et 55 nm, les solutions finales tant prpares
dans le milieu de culture Ham F-12K supplment de 10 % de srum de veau ftal.
Des macrophages alvolaires de rat ont t traits pendant 24 heures des concentrations
allant jusqu la concentration maximale de 100 g/ml. A la fin de la priode de 24 heures
dincubation, les changements morphologiques ont t observs sous microscope invers
contraste de phase.
Les macrophages alvolaires de rat tmoin apparaissent symtriques alors que les cellules
traites avec 25 et 75 g/ml de nanoAg 15 nm ont perdu leur membrane plasmique,
apparaissent tasses et de nombreux dbris cellulaires sont observs. Les macrophages
alvolaires de rat traits avec 25 et 75 g/ml de nanoAg 30 nm sont plus larges et des
agglomrats de nanoparticules sont visibles dans et autour des cellules. Concernant les
nanoAg 55 nm, les cellules traits avec 25 et 75 g/ml sagglutinent entre-elles avec la
prsence de larges agglomrats de nanoparticules leur surface.
Les macrophages alvolaires traits avec les nanoparticules dAg de 15 nm semblent avoir
subi les changements morphologiques cellulaires les plus importants. Des images haute
rsolution (TEM) des cellules traites avec 25 g/ml de nanoAg 55 nm pendant 24 heures
montrent une internalisation par les cellules dans des vacuoles. Le mcanisme
dincorporation na pas t tudi notamment, la question de la forme sous laquelle
pntrent les nanoparticules dans la cellule (individualises ou agglomres) na pas t
dtermine.
La cytotoxicit a t value aprs traitement de 24 heures en utilisant 2 marqueurs : le test
MTT et le test LDH.
Les rsultats du test MTT montrent une diminution significative de la fonction mitochondriale
observe pour les macrophages alvolaires exposs aux nanoAg 15, 30 et 55 nm des
concentrations allant de 10 75 g/ml. Les CI50 24 heures calcules sont denviron 28 et
33 g/ml respectivement pour les nanoAg 15 et 30 nm alors que pour les nanoparticules
dAg de 55 nm, la CI50 est > 75 g/ml.
Une diminution significative et dose-relie de la viabilit cellulaire a t note daprs les
rsultats obtenus dans le test de relargage de LDH. Dune faon trs similaire au test MTT,
cette diminution a t observe partir denviron 10 g/ml pour les macrophages alvolaires
exposs aux nanoAg de 15 et 30 nm (CI50 respectives denviron 15 et 14 g/ml) alors que
pour les nanoparticules dAg de 55 nm, la CI50 est > 75 g/ml.
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Lensemble de ces rsultats dmontre que le niveau de cytotoxicit tel que dtermin par les
mthodes MTT et LDH est dpendant de la taille des nanoAg.
Afin dvaluer le rle du stress oxydant, les dosages des ERO et du GSH ont t effectus.
La gnration dERO a t mesure par cytomtrie en flux en prsence de diactate de 2,7dichlorodihydrofluorcine selon Hussain et al. Le potentiel membranaire mitochondrial a
galement t mesur par la technique de lincorporation de la rhodamine 123 (Hussain
S.M., 2005).
Les rsultats montrent que le traitement avec des nanoparticules dAg de 15 nm entrane
une augmentation significative et dose-relie des niveaux dERO intracellulaires jusqu
environ 7 et 15 fois le niveau du tmoin ngatif respectivement pour les concentrations de 25
et 50 g/ml. Les niveaux dERO ne sont pas significativement augments en prsence de
nanoAg de 30 et 55 nm. Paralllement, le potentiel membranaire mitochondrial diminue
significativement de 60 30 % respectivement avec des nanoparticules dAg de 15 et 30 nm.
Enfin, une dpltion totale du GSH a t retrouve pour les nanoAg 15 et 30 nm 50 g/ml
alors que pour les nanoAg de 55 nm, concentration quivalente, la dpltion nest que
denviron 25% par rapport au tmoin.
Le choix dutiliser des macrophages alvolaires, cellules du tractus respiratoire, apparat
pertinent au regard de la recherche dinduction dERO. Ils sont en effet capables de secrter
des mdiateurs inflammatoires tels que chimiokines et cytokines. Afin de dterminer si les
macrophages alvolaires de rat rpondent un traitement avec des nanoAg de 15, 30 et 100
nm ont t traits pendant 24 heures des concentrations allant de 5 25 g/ml et les
marqueurs caractristiques, TNF-, MIP-2, IL-1 et IL-6 ont t mesurs dans les
surnageants par mthode ELISA. Les rsultats montrent une augmentation significative des
niveaux de TNF-, MIP-2 et IL-1 sur lensemble de la gamme de concentrations et quelle
que soit la taille des nanoparticules dAg. En revanche, il ny a eu aucune dtection dIL-6.
En conclusion, Carlson et al. (Carlson C., 2008) estiment que le niveau de cytotoxicit tel
que dtermin par les mthodes MTT et LDH apparat galement dpendant de la taille des
nanoAg avec une augmentation de la gnration dERO et de la dpltion en GSH en
prsence de nanoAg de 15 nm. Ces donnes suggrent que le stress oxydant contribue la
cytotoxicit de ces nanoparticules.
En revanche, des nanoparticules de tailles suprieures 30 et 55 nm induisent une
cytotoxicit alors que les niveaux dERO ne sont pas significativement augments.
En parallle, une augmentation significative de la scrtion des mdiateurs de processus
inflammatoires tels TNF-, MIP-2 et IL-1b a t note semble indpendante de la taille des
nanoparticules dAg.
Comme dcrit dans le paragraphe ddi la gnotoxicit in vitro, la cytotoxicit des
nanoparticules dAg (6-20 nm et enrobes d'amidon) a t tudie in vitro sur des
fibroblastes de poumon humain, les cellules IMR-90, ainsi que sur les cellules U251 issues
de glioblastomes humains (Asharani P.V., 2009).
La toxicit a t value en estimant les changements morphologiques des cellules, leur
viabilit, leur activit mtabolique et le stress oxydant.
Les cellules IMR-90 et U251 ont t traites pendant 48 heures dans un milieu complet,
des concentrations allant de 25 400 g/ml. A la fin de la priode de traitement, les
changements morphologiques des cellules ont t valus sous microscope. A des
concentrations < 10 g/ml, les cellules IMR-90 et U251 forment principalement des amas.
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Aprs un traitement pendant 24 heures, les cellules HepG2 ont subi une pr- fixation 2%
de glutaraldhyde suivie dune post-fixation au ttroxyde dosmium (1 %). Puis, les cellules
ont t dshydrates dans diffrents bains dthanol avant dtre incluses dans la rsine de
Spurr. Les sections de 1 m et de 80 nm ont t analyses laide dun microscope fond
noir et par microscope transmission lectronique (MET). Lanalyse a montr la prsence
de dpts de larges amas dans le cytoplasme et dans le noyau des cellules HepG2 traites
avec ces nanoparticules dargent. Dans le cytoplasme, les agglomrats de nanoAg ont t
observs dans des compartiments ressemblant des endosomes et des lysosomes.
Le niveau dions Ag+ dans la solution de particules dargent nanostructures a t dtermin
aprs dsionisation laide dune rsine changeuse dions et comparaison aux solutions
initiales. Les rsultats dmontrent une trs faible teneur en ions Ag+ libres dans les solutions
initiales de nanoAg.
La cytotoxicit a t value aprs traitement de 24 heures en utilisant 3 marqueurs : le test
MTT (mesure de la fonction mitochondriale), le test au bleu Alamar et le test LDH (marqueur
dintgrit membranaire).
Une diminution significative de la rduction du MTT a t note des concentrations 3
g/ml de particules de nanoAg (CI50 calcule 3,38 g/ml) alors que la CI50 de AgNO3 a t
value 1,37 g/ml soit environ 2,5 fois plus faible que celle des nanoAg, ce qui indique
une cytotoxicit moins importante des nanoparticules dAg. En revanche, les CI50 estimes
de AgNO3 et des nanoAg daprs les tests au bleu Alamar et LDH ne montrent pas de
diffrence significative. Toutefois, la CI50 estime par la mthode LDH (0,53 g/ml) est
infrieure celle calcule par MTT ce qui suggre que lintgrit membranaire de la cellule
est plus facilement affecte que les activits mtaboliques mesures.
En parallle, laddition dun anti-oxydant, la N-actyl cystine (prcurseur de la synthse du
glutathion) inhibe lactivit cytotoxique de AgNO3 et des nanoAg ce qui tend dmontrer que
le stress oxydant est fortement impliqu dans leur cytotoxicit.
Lexpression de gnes impliqus dans la rponse au stress oxydant, i.e. glutathion
proxydase 1 (GPx1), catalase et superoxyde dismutase (SOD), a t tudie par la mesure
des ARNm en RT-PCR aprs des traitements de 8 et 24 heures la concentration de 0,2
g/ml de nanoAg ou de AgNO3 ( 10 % de la CI50). Si aucune diminution des niveaux
dexpression des ARNm GPx1 na t note pour les NanoAg, en revanche, ceux-ci se sont
rvls 8 et 19 fois plus importants respectivement aprs 8 et 24 heures de traitement au
AgNO3. Le niveau dexpression des ARNm catalase des cellules HepG2 traites au nanoAg
augmente de 11 fois par rapport au tmoin aprs 24 heures de traitement alors quil sont de
26 et 44 fois respectivement aprs 8 et 24 heures de traitement au AgNO3 plus importants
respectivement aprs 8 et 24 heures de traitement lAgNO3. Enfin, les changements de
niveaux dexpression des ARNm de SOD ne montrent pas de diffrence significative aprs
traitement au nanoAg (4,5 fois /contrle aprs 24 heures de traitement) ou lAgNO3 (3,1
fois /contrle aprs 8 heures de traitement).
En conclusion, les nanoparticules dargent de diamtre < 10 nm utilises au cours de cette
tude ont montr une cytotoxicit in vitro sur les cellules HepG2, principalement lie au
stress oxydant. Aucune diffrence significative entre lactivit cytotoxique des nanoAg (<10
nm) et celle des ions Ag na t observe lexception dune toxicit moins importante des
nanoAg / aux ions Ag dans le test MTT. Lexpression des ARNm des gnes relis au stress
oxydant dans les cellules HepG2 aprs traitement avec des nanoAg ou AgNO3 est rgule
diffremment ce qui suggre que la cytotoxicit des nanoAg est due un effet intrinsque,
indpendant des ions Ag libres et, en consquence, le mcanisme daction des nanoAg peut
tre diffrent de celui des Ag.
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Des rsultats proches ont t obtenus par Cha et al. (Cha K., 2008) au cours dessais in vitro
sur une ligne cellulaire d'hpatome humain (Huh-7) traite avec des nanoparticules d'argent
de 13 nm ou des microparticules d'argent de 2 3,5 m. L'activit mitochondriale et la
production de glutathion ont t clairement modifies.
Paralllement, lanalyse histopathologique des foies des souris traites pendant 3 jours avec
ces mmes particules d'argent a rvl une infiltration lymphocytaire aussi bien dans les
foies provenant des animaux traits avec des nanoparticules que dans ceux des animaux
traits avec des microparticules, ce qui suggre une induction d'inflammation. Ceci a t
confirm par lanalyse par biopuces de l'ARN qui a montr que l'expression de gnes lis
l'apoptose et l'inflammation est modife. Ces changements de l'expression des gnes dans
les foies des animaux traits avec des nanoparticules conduisent des changements
phnotypiques qui refltent laugmentation de l'apoptose et l'inflammation (Cha K., 2008).
E2- Conclusion sur le potentiel de gnration de ROS/RNS, induction de stress
oxydant et/ou de mcanismes inflammatoires
Globalement, les nanoparticules dAg induisent des modifications morphologiques
cellulaires, un dysfonctionnement mitochondrial et une augmentation de la gnration
despces ractives de loxygne dune faon dose-dpendante et ce quelle que soit leur
taille : 15 et 100 nm (Hussain S.M., 2005), 7-20 nm (Arora S., 2009; Hsin Y.H., 2008), 15 nm
(Braydich-Stolle L., 2005; Carlson C., 2008), 6-20 nm (Asharani P.V., 2009) et < 10 nm (Kim
S., 2009). Le stress oxydant contribue la cytotoxicit de ces nanoparticules. Les nanoAg
entranent galement un arrt du cycle cellulaire et une apoptose et/ou ncrose. Lapoptose
survient des concentrations faibles puis la ncrose apparat. Il semble nanmoins que
linduction despces ractives de loxygne diminue avec laugmentation de la taille des
nanoparticules (Carlson C., 2008). Il semble galement que cellules primaires offrent une
plus forte rsistance au traitement par des nanoAg par rapport aux lignes secondaires
(Arora S., 2009).
Par ailleurs, la prsence dagrgats lintrieur des mitochondries qui a clairement t
dmontre est impliqu dans la toxicit mitochondriale et les lsions de lADN via la
production dERO (Arora S., 2008 ; Asharani P.V., 2009).
En parallle, une augmentation significative de la scrtion des mdiateurs de linflammation
a t note en prsence de nanoAg. Cet effet semble indpendant de la taille des
nanoparticules dAg (Carlson C., 2008).
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Caractristiques
des NanoAg
Conclusion/
Plus faible dose
(Taille/distribution
avec effet
Agglomration/
Modles
agrgation
Forme
Test de
Dispersion
/Caractrisation
Composition
Test de
gnotoxicit
in vitro/
in vivo
toxicit/
cytotoxicit/
Doses/
Schma de
traitement
Localisation
autres
Surface spcifique
Rfrences
Remarques
Conclusion
Plus faible
dose
avec effet
Chimie de surface
Charge de surface
Solubilit/Dispersibilit)
25 7,1 nm
Distribution
analyse par MET
Absorption trs
faible :
Absorption cutane :
mthode in vitro
Filon FL et
al, 2007
0,0006 %
Larese FF et
al.
peau intacte
coates au
Aucune
caractrisation
polyvinylpirrolidone aprs dispersion
0,003 %
(2009)
peau lse
CMC 0,5 %
52,7 70,9 nm
6 - 20 nm
enrobes d'amidon
Aucune
caractrisation
aprs dispersion
Trs bonne
30, 300 et
1000
mg/kg/jour
pendant 28
jours
exposition
systmique
des animaux
48 heures de Prsence
de Traitement
25 400 g/ml nanoAg
en milieu
(test des
lintrieur
des
complet
mitochondries
comtes)
(analyse
par
100 et 200 MET)
g/ml
Test
micronucleus
avec Cyto B
(test du
micronucleus)
Mars 2010
Version finale
page 182
Aucune
augmentation
significative
des MPCE
Kim YS et
al.
(2008)
Augmentation
significative
des comtes et
de la frquence
des
micronoyaux
25 g/ml
(test des
comtes)
100 g/ml
(test du
nucleus)
AshaRani,
PV.
(2009)
Saisine n2008/005
diminution
dosedpendante
pour
les
2
cellules partir
de 48 h de
traitement
Contenu en ATP
lsions
mitochondriales
production dERO
Apoptose entre
25-100 g/ml
Apoptose
Aucune
caractrisation
aprs dispersion
(annexine V)
Cellules HepG2
Structure
analyse par MET
5-10 nm
sous forme de
solution
Mesure
de
la
protine gH2AX
Augmentation
significative et
dose-relie
inhibe par la
prsence dun
anti-oxydant
24 heures de Prsence de
traitement
dpts dans le
En solution initiale
sphriques, bien
disperses
cytoplasme
(endosomes et
dans le noyau
Caractristiques
des NanoAg
(Taille/distribution
Conclusion/
Plus faible dose
avec effet
Agglomration/
agrgation
Forme
Composition
Kim S et al.
(2009)
lysosomes) et
Prsence
d
agglomrats
de
100-300 nm aprs
incubation dans le
milieu de culture
Test de
Modles
Dispersion
/Caractrisation
Test de
gnotoxicit
in vitro/
in vivo
toxicit/
cytotoxicit/
Doses/
Schma de
traitement
Localisation
Remarques
autres
Surface spcifique
Rfrences
Conclusion
Plus faible
dose
avec effet
Chimie de surface
Charge de surface
Solubilit/Dispersibilit)
Cellules HepG2
Structure
analyse par MET
En solution initiale
sphriques, bien
disperses
5-10 nm
Mars 2010
MTT,
bleu Alamar
test LDH
Formation dERO
Prsence
d
agglomrats
de
100-300 nm aprs
incubation dans le
milieu de culture
24 heures de Prsence de
traitement
dpts dans le
cytoplasme
(endosomes et
CI50
solutions initiales
nanoAg
= 0,53 g/ml
lysosomes) et
dans le noyau
Version finale
page 183
Comparaison
avec
cytotoxicit de
AgNO3
LDH
(AgNO3 =
1,37 g/ml)
Kim S et al.
(2009)
MTT
suite
= 3,38 g/ml
Gnration
dERO
5g/ml
25 nm
Saisine n2008/005
4
et
heures
24 NanoAg
de
de
Rgulation de
protine p53
NanoAg coates
pas
dagglomrats
distribues dans
la
Sur-rgulation
de p53
Ahamed M
et al.
toute la cellule
(contrle du cycle
cellulaire)
non coates ou
coates
polysaccharidique
coates
sagglomrent
(2008)
Cytotoxicit
augmente en
fonction du
Apoptose
(annexine V)
24, 48 et 72
heures
dexposition
50 g/ml
temps
(tox plus
importante
pour nanoAg
coates)
MTT
Aucune donne Cellules
de distribution
3A
BRL
(spermatogonie
de type A de
souriceau)
15 nm
Traitement en
Modif morpho
bleu Alamar
milieu de
Fuite deLDH
LDH
test LDH
culture SANS
Augment ERO
= 24g/ml
srum
DpltionGSH
Diminution
MTT
MTT,
24 heures
Formation dERO
Aucune
caractrisation
aprs dispersion
potentiel
membranaire
mitochondrial
100 nm
gnration
dERO
Conclusion/
avec effet
agrgation
Test de
Modles
Dispersion
/Caractrisation
in vitro/
Test de
gnotoxicit
in vivo
toxicit/
cytotoxicit/
Doses/
Schma de
traitement
Localisation
Remarques
Conclusion
autres
Surface spcifique
Plus faible
dose
avec effet
Chimie de surface
Charge de surface
Solubilit/Dispersibilit)
Mars 2010
(2005)
= 19 g/ml
Agglomration/
Composition
Hussain S
et al.
5g/ml
Caractristiques
des NanoAg
(Taille/distribution
Forme
CI50
Version finale
page 184
Rfrences
Saisine n2008/005
- Modif
15 nm
Aucune
caractrisation
aprs
dispersion
MTS[a] ( MTT)
48 heures
cellulaires
morpho,
test LDH
- fuite de
LDH
CI50
LDH
= 2,5 g/ml
MTS[a]
=8,75
g/ml
Apoptose /
- diminution
ncrose
potentiel
membranaire
mitochondrial Apoptose /
Formation dERO
BraydichStolle et al.
(2005)
ncrose
5g/ml
7-20 nm
(sous forme de
suspension
aqueuse
collodale)
Aucune
caractrisation
aprs dispersion
Cellules A431
(carcinome
cutan humain)
et cellules HT1080
(fibrosarcome
humain)
XTT ( MTT)
test LDH
24 heures
dpltion GSH
Apoptose (ladder)
A431
dans
CI50 = 10,6
g/ml (XTT)
mitochondries
des vacuoles
Fibroblastes et
hpatocytes de
souris
(hpatocytes)
et cellules
HT-
1080
ERO
Dpltion
CI50 = 11,6
g/ml (XTT)
HT-1080
Fibroblastes
CI50 = 61
g/ml (XTT)
potentiel
membranaire
Hpatocytes
mitochondrial
CI50 = 449
g/ml (XTT)
Analyse
MET
1-100 nm
+ comparaison
Ag (< 250 m)
par
Cellules IH3T3
(fibroblastes de
souris),
A10 (muscle
lisse de rat)
HCT116
(humaines,
tumeur
cancreuse de
colon)
MTT
Apoptose
(annexine V)
Augmentation trs
Apoptose
rapide de
[Ag]
A431
50
intracell
g/ml
et
jusqu
72 Pour NIH3T3 50 HCT116 > 100
heures
pour g/ml aprs 8
Associe
au
Ag (< 250 m) heures.
relargage
de
Pour HCT116 cytochrome c
100 g/ml
Ag : pas
dinduction
ERO
Mars 2010
Version finale
NIH3T3
A10
24 heures
Arora S et
al. (2009)
et
CI50 50
g/ml (MTT)
HCT116
CI50 >
g/ml
50
Ag < 250 m
aucune
ERO
intracell dans toxicit 50
cellules HT- g/ml aprs
72 h
1080 et
HCT116
page 185
Arora S et
al. (2008)
Hsin Y-H et
al (2008)
Saisine n2008/005
SAS SI EPA Nano Submission, dossier de soumission volontaire lUS EPA dans le cadre
du NMSP (programme d'intendance pour les matriaux nanomtriques, 2008).
Les tudes de toxicit prsentes dans ces documents pour certaines trs anciennes portent sur
diverses SAS prcipites et/ou pyrognes. En revanche, aucune de ces tudes ne portent
spcifiquement sur le produit D.
Par ailleurs, il est important de prciser que pour lensemble de ces tudes, aucune caractrisation
spcifique lie au caractre nanomtrique des particules utilises na t effectue. Cela est
discut dans la partie conclusion. Par ailleurs, la littrature portant sur la silice cristalline et/ou sur
des modles exclusivement pulmonaires na pas t examine.
A- Donnes de toxicologie gnrale
De nombreuses tudes de toxicit des SAS par diffrentes voies dadministration, aprs
traitements aigus ou ritrs, sont fournies dans le JACC N 51 (ECETOC,2006; US EPA, 2008).
Un rsum est prsent dans le tableau suivant :
Tableau 14 : Rsum des essais de toxicologie des SAS aprs traitements aigus ou ritrs (daprs
ECETOC, 2006)
SAS
NAS
CS
[7631-86-9]
[1344-00-9]
[1344-95-2]
TOXICOLOGIE
Toxicit orale aigu
Pas de
analogie
Pas de
analogie
donnes :
Pas de
analogie
donnes :
Non irritant
Non irritant
Pas de donnes :
analogie
Sensibilisation
Pas de donnes
Pas de donnes
Pas de donnes
Toxicit doses
rptes
Raction inflammatoire
pulmonaire :
Pas de
analogie
Pas de
analogie
Toxicit aigu
inhalation
Toxicit
aigu
cutane
Irritations locales
(cutane, oculaire)
Mars 2010
par
(test limite)
CL50 > 0,14- > 2 mg/l
(concentration maximale
techniquement faisable)
DL50 > 5000 mg/kg
(test limite)
Version finale
donnes :
donnes :
donnes :
page 186
Saisine n2008/005
(par inhalation)
Toxicit doses
rptes
Raction inflammatoire
pulmonaire (rat) :
(par inhalation)
Toxicit doses
rptes
Chronique : pas de
donnes : analogie
Pas de
analogie
donnes :
Pas de
analogie
donnes :
Mars 2010
Version finale
page 187
Saisine n2008/005
Il est galement important de souligner quaucune diffrence na t note entre les valeurs de
DL50 des diffrents types de SAS tudis.
A3- Toxicit doses ritres
Une tude de toxicit sub-chronique par voie orale ralise sur une SAS pyrognique (Cab-O-Sil)
chez le rat trait pendant 13 semaines na montr aucun effet jusqu la dose maximale de 5 000
mg/kg/j (US EPA, 2008). Lors dune tude similaire galement chez le rat trait par voie orale
pendant 13 semaines, la SAS prcipite teste (Sipernat 22) a induit une augmentation de la prise
de nourriture associe une augmentation du poids moyen absolu et relatif du ccum la dose
maximale de 4 000 mg/kg/j. En revanche, les examens macroscopiques et microscopiques n'ont
rvl aucune anomalie lie au traitement. La NOEL a t estime 4 000 mg/kg/j (US EPA,
2008). La conclusion de cette tude indique que labsorption des silices amorphes par voie
digestive semble limite et la part non assimile est limine directement dans les fces et
lactivit pro-inflammatoire observe avec des particules de silice de 100 et 200 nm reste
transitoire.
L'effet toxique de particules de silice micromtrique (environ 30 m) et nanomtrique (30-90 nm,
prpares par sonication et stabilisation des particules micromtriques) a galement t tudi
chez la souris. Des souris Balb/C et C57BL/6J ont t traites pendant 10 semaines avec 1% de
nanosilice ou 1 % de microsilice soit 10 g/kg/j dans lalimentation. A la fin de cette priode de
traitement, les analyses sanguines biochimiques et hmatologiques ont t effectues. Aucune
diffrence entre les groupes traits/non traits na t note vis--vis des paramtres analyss
lexception du taux dalanine aminotransfrase (ALAT) plus lev pour le groupe trait avec les
nanoparticules de silice par rapport aux groupes non trait ou trait avec la silice micromtrique.
Paralllement, la coloration hmatoxyline/osine a permis de confirmer latteinte hpatique avec
une statose pour le groupe trait aux nanoparticules de silice alors que le contenu en Si dans le
foie est quasiment identique quel que soit le groupe. Ces rsultats suggrent que les
nanoparticules de silice ont un effet toxique sur le foie, mme si aucune diffrence significative na
t observe sur la sant pour une quantit totale ingre sur 10 semaines de 140 g de silice / kg
(So S.J., 2008).
A4- Toxicocintique
Afin didentifier les organes cible, la distribution tissulaire a t tudie aprs administration(s)
intraveineuse(s) sur diffrentes tailles de silice dans plusieurs publications :
Nishimori et al. (Nishimori H., 2009a) ont tudi la relation entre la taille des particules et leur
toxicit en utilisant des particules de silice de diffrents diamtres, i.e. 70, 300 et 1000 nm (SP70,
SP300, et SP1000). Pour valuer la toxicit aigu, une analyse histologique du foie, la rate, des
reins et des poumons aprs administration unique par voie intraveineuse de ces particules de
silice a t effectue. Les nanoparticules SP70 ont induit des lsions du foie 30 mg / kg de pc,
tandis que SP300 ou 1000 n'ont eu aucun effet jusqu 100 mg/kg pc. Ladministration de SP70 a
entran une augmentation des marqueurs sriques d'atteinte hpatique, i.e. les
aminotransfrases sriques et des cytokines inflammatoires. Cet effet a t accompagn dune
relation dose-dpendante.
Ces observations confirment les rsultats de ltude de Cho et al. (Cho M., 2009) qui ont cherch
identifier la toxicit, la distribution tissulaire et les voies dexcrtion des nanoparticules de silice in
vivo. Pour cette tude, des suspensions de nanoparticules de silice de 50, 100 et 200 nm
marques un colorant fluorescent ont t utilises. Ces nanoparticules ont montr une
distribution de taille homogne et de forme sphrique et les images au microscope lectronique
transmission ont montr que les diamtres des nanoparticules taient bien d'environ 50, 100 et
200 nm.
Mars 2010
Version finale
page 188
Saisine n2008/005
Dans cette tude, les suspensions de nanoparticules ont galement t injectes par voie
intraveineuse des souris. Les animaux ont t sacrifis 12h, 24h, 48h, 72h et 7 jours aprs
ladministration, le sang et les organes ont t prlevs et les urines et les fces ont t collects.
Des foyers de cellules inflammatoires ont t observs dans le foie des animaux traits avec les
nanoparticules, exclusivement au temps 12 heures aprs linjection avec une incidence et une
gravit de la raction inflammatoire significativement augmente pour les particules de 200 et 100
nm. En revanche, aucune rponse significative lie l'injection de particules de 50 nm na t
observe. Les particules de silice de 50, 100 et 200 nm sont limines par les voies urinaire et
biliaire avec une concentration rnale maximale au temps 24 heures. Les nanoparticules de silice
50 nm sont excrtes plus rapidement (maximum au temps 12 heures aprs administration) et
des concentrations plus importantes que les nanoparticules de 100 nm (maximum au temps 12
heures aprs administration) et 200 nm. Les particules de 200 nm sont excrtes dans les urines
et les fces des concentrations infrieures celles retrouves pour les nanoparticules de 50 et
100 nm. Quelle que soit leur taille, les nanoparticules de silice sont retrouves sous forme
dagrgats dans le foie et la rate 4 semaines aprs une injection unique. Les macrophages jouent
un rle prpondrant et sont associs avec la distribution des nanoparticules de silice. Lactivit
pro-inflammatoire des particules de silice amorphes semble plutt lie leur surface spcifique
comme lont galement dmontr Waters et al. (Waters K.M., 2009) sur des macrophages.
Effectivement, ces auteurs ont dmontr que la scrtion de protines inflammatoires induite par
les particules de silice amorphe (non opsonises) provoquant une activit cytotoxique, est
prcisment en corrlation directe avec la surface spcifique des particules, ceci sur une large
gamme de diamtres (7-500 nm). Lanalyse par microarray de la modification prcoce de
lexpression gnique montre effectivement que, pour la majorit des gnes affects, lamplitude
des changements est troitement corrle avec la surface spcifique des particules plutt qu la
masse ou au nombre de particules. En revanche, les processus biologiques mis en jeu par
lensemble de ces changements d'expression gnique sont quasiment identiques quel que soit le
diamtre des particules. Toutefois, les mcanismes cls impliqus dans la rgulation des gnes
mdis par les nanoparticules de silice et leur cytotoxicit n'ont pas encore t tablis.
Globalement, ces rsultats suggrent que sur la base dune surface spcifique quivalente, des
modes d'action biologiques communs sont attendus pour les particules de silice de taille nano et
supramtrique (Waters K.M., 2009).
Afin de consolider ces rsultats de toxicocintique, des souris BALB/c mles ont t traites par
voie intraveineuse 2 fois/semaine pendant 4 semaines avec des nanoparticules de silice
sphriques et non poreuses (Nishimori H., 2009b). Les mesures faites par zetasizer ont montr
que le diamtre moyen des nanoparticules utilises au cours de cette tude est de 55,7 nm. Elles
ont t mises en suspension dans en milieu aqueux et leur dispersion a t confirme par
microscopie lectronique. Aucune autre indication nest donne sur leur caractrisation.
Lanalyse histologique des principaux organes (foie, rate, poumons, reins, cerveau et le cur) a
rvl une microgranulation hpatique et une accumulation splnique des mgacaryocytes chez
les souris traites alors que les reins, les poumons, le cerveau et le cur sont rests inchangs.
Le foie et la rate semblent tre les principaux organes cibles de la toxicit par l'administration
chronique de nanoparticules de silice (Nishimori H., 2009b).
B- Gnotoxicit
Concernant le potentiel gnotoxique, trs peu de donnes sont actuellement disponibles. Le
tableau ci-dessous rsume les conclusions sur les tudes existantes (OCDE, 2004) :
Mars 2010
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Saisine n2008/005
Tableau 15 : Conclusion des essais de gnotoxicit des SAS (daprs OCDE-SIDS, 2004)
SAS
NAS
CS
[7631-86-9]
[1344-00-9]
[1344-95-2]
GENOTOXICITE IN VITRO
A
Non mutagne
Non mutagne
GENOTOXICITE
Non mutagne
Non mutagne
IN VIVO
Pas de donnes :
analogie
Non mutagne
Pas de donnes :
analogie
Pas de
analogie
Pas de donnes :
analogie
Non mutagne
Pas de donnes :
analogie
Non mutagne
donnes :
Mars 2010
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page 190
Saisine n2008/005
Des essais sur lADN gnomique isol directement expos aux nanoparticules ont galement t
raliss. Lensemble des rsultats montre labsence d'effets toxiques importants lis aux
nanoparticules de silice au niveau molculaire et cellulaire des concentrations < 0,1 mg / ml (Jin
Y., 2007).
La gnotoxicit de diffrentes silices nanoparticulaires commerciales a t value en utilisant le
test des comtes (fragmentation de lADN). La caractrisation approfondie des dispersions de
nanoparticules, Les suspensions des nanoparticules de silice testes (2 nanoparticules Glantreo
de diamtre 30 et 80 nm et 2 silices collodales Ludox de Sigma) ont t values en termes de
stabilit (dispersion/agrgation). La taille des nanoparticules a t value par TEM
(nanoparticules Glantreo de diamtre 30 et 80 nm = 33,21 nm et 34,89 nm ; 2 silices collodales
Ludox = 21,32 et 30,51 nm).
Le test des comtes a t ralis sur des fibroblastes de souris 3T3-L1 aprs 3, 6, et 24 heures de
traitement avec les diffrentes nanoparticules de silice aux 2 concentrations de 4 et 40 g/ml.
Aucune gnotoxicit significative n'a t observe pour les nanoparticules testes dans ces
conditions dans deux laboratoires distincts (Barnes C.A., 2008).
L'incorporation de nanoparticules de silice dans le noyau cellulaire a induit une accumulation
aberrante de topoisomrase I dans le nucloplasme (qui contient des protines spcifiques du
domaine nuclaire), et une agrgation de protines telles que l'ubiquitine, le protasome,... La
formation d'agrgats de protines intranuclaires (1) entrane linhibition de la rplication, de la
transcription, et de la prolifration cellulaire, (2) ne modifie pas significativement l'activit du
protasome ou la viabilit cellulaire, et (3) est rversible Chen M. et von Mikecz A., 2005).
B2- Gnotoxicit in vivo
Les tudes in vivo disponibles prsentes dans le document JACC51 (ECETOC, 2006) ont t
effectues exclusivement sur une SAS collodale, Syloid 244.
Les tests rglementaires de gnotoxicit in vivo sur cette SAS gel sont :
le test du micronucleus in vivo au niveau de la moelle osseuse de rat selon la ligne
directrice OCDE 474 (Test de micronoyaux sur rythrocytes de mammifre) et
le test du dominant ltal chez le rat selon la ligne directrice OCDE 478 (Essai de mutation
ltale dominante chez le rongeur).
De plus, un test non standardis, le Host Mediated Assay , a galement t ralis. Dans ce
test, les micro-organismes (dans ce cas levures et Salmonella typhimurium) sont injects dans la
cavit pritonale des animaux pralablement traits et sont, par consquent, exposs aux
mtabolites potentiellement mutagnes du produit test.
B3- Conclusions sur la gnotoxicit
Les tests effectus utilisant le plus souvent des mthodes standard nont mis en vidence aucune
gnotoxicit des SAS tudies aussi bien in vitro quin vivo.
Cependant, des remarques/critiques concernant ces tudes effectues peuvent tre formules :
Mars 2010
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Saisine n2008/005
Mars 2010
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Saisine n2008/005
Ces tudes soulignent l'importance de la taille des nanoparticules puisque des particules> 200 nm
ne parviennent pas pntrer dans le noyau, ne modifient pas la structure et les fonctions
nuclaires et ninterfrent pas avec l'expression gnique (Chen M. et von Mikecz A.,2005).
C- Cancrogense - Reprotoxicit
Les conclusions des tudes de cancrogense et de toxicit pour le dveloppement de SAS gel
(Syloid 244) et prcipite, ralises par voie orale chez diffrentes espces, sont rsumes dans
le tableau ci-dessous :
Tableau 16 : Rsum des essais de cancrogense et de reprotoxicit des SAS (daprs ECETOC,
2006)
SAS
NAS
CS
[7631-86-9]
[1344-00-9]
[1344-95-2]
Cancrogense
Cancrogense
(inhalation)
Rsultats
Cancrogense
(voie orale)
Pas
de
analogie
Cancrogense
(intrapleurale)
Pas de
analogie
Non cancrogne
non concluants
donnes :
Pas de donnes
Pas de donnes
chez le rat
Pas
de
analogie
donnes :
Reprotoxicit
Toxicit pour la
fertilit
Toxicit pour le
dveloppement /
Tratogense
Pas de donnes :
analogie
Pas de donnes :
analogie
Pas
deffets
indsirables chez le rat,
la souris, le lapin et le
hamster
Pas
deffets
indsirables chez le rat,
la souris, le lapin et le
hamster
Pas
deffets
indsirables chez le rat,
la souris et le hamster
Chez la souris B6C3F1, la SAS gel (Sylod 244) administre dans l'alimentation pendant 21 mois
0 - 1,25 - 2,5 ou 5% (40/sexe/groupe), aucune augmentation significative des lsions noplasiques
ou non noplasiques na t observe dans les tissus examins (systme lymphatique, les
poumons, le foie et les reins). Dans les mmes conditions exprimentales, aucune augmentation
significative des lsions noplasiques ou non noplasiques na t note dans les tissus examins
des rats Fischer (systme lymphatique, les poumons, le foie, les glandes surrnales, les testicules,
la glande mammaire et prpuce).
Aucune tumeur maligne n'a t observe au cours dune tude ralise sur la SAS hydrophobe
(Arosil R972) chez le rat Wistar (20/sexe/groupe) exposs 100 mg/kg/j via l'alimentation
pendant 24 mois. Aucune diffrence dans le type et/ou dans le nombre de tumeurs bnignes par
rapport aux contrles. Aucune lsion sur d'autres organes na t signale (ECETOC, 2006).
Dans toutes les tudes effectues sur la SAS gel, aucune mortalit ou variation significative de
gain de poids chez les mres traites nont t retrouves. Aucune diffrence significative entre le
nombre de corps jaunes (mesur chez le lapin seulement), le pourcentage d'implantation et / ou de
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Saisine n2008/005
rsorption et le poids des petits vivants na t note par rapport aux contrles. Le nombre
danomalies externes, viscrales ou squelettiques des groupes traits ne diffre pas des contrles
(ECETOC, 2006).
Ltude sur SAS prcipite (Arosil R972) a t effectue sur rats Wistar femelles ayant reu des
doses quotidiennes de 500 mg SiO2/kg pc dans l'alimentation pendant 8 ou 17 semaines avant
l'accouplement avec des mles (5 F / 1 M) ayant eux-mmes t soumis une exposition
semblable pendant 4,5 mois. Le traitement a t poursuivi au cours de l'levage. Les animaux de
la gnration F0 n'ont pas t affects par le traitement quel que soit le paramtre considr.
Aucun effet reli au traitement au niveau de la taille de la porte ou du poids la naissance.
Aucune anomalie clinique, comportementale significative na t observe chez les petits la
naissance. Le dveloppement de la descendance sest rvl normal et aucune modification lie
au traitement na t observe chez les petits de 4 semaines, pour les deux gnrations
(ECETOC, 2006).
Aucune tude spcifique sur la toxicit pour la fertilit nest disponible. On peut nanmoins
souligner quaucun effet indsirable na t not sur les organes reproducteurs des rats Wistar
exposs oralement cette mme SAS (Arosil R972) pendant 6 mois avec des doses contenues
dans la nourriture de 0 ou 500 mg SiO2/kg pc. En effet, lexamen pathologique, aucun signe
clinique ou observation macroscopique nont t observs et la comparaison du poids des organes
(testicules et ovaires) entre les groupes tmoin et trait na rvl aucune diffrence significative
(JACC51).
Les SAS ont t considres comme non toxiques pour la reproduction et non toxiques pour le
dveloppement (NOEL >> 1000 mg/kg/j).
En conclusion, les effets de certaines SAS sur la sant humaine, y compris la cancrogense, ont
t examins pour un certain nombre dorganismes et elles n'ont pas t classes comme
cancrognes ou dangereuses pour lhomme par le Centre International pour la Recherche sur le
Cancer (CIRC). Les SAS ne sont pas toxiques pour le dveloppement ftal. La fertilit n'a pas t
spcifiquement tudie, mais les organes reproducteurs des tudes long terme (tudes de
toxicit chronique et de cancrogense) n'ont pas t affects.
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Saisine n2008/005
Espce,
souche,
nombre
Priode
dexposition
Dose
(mg/kg pc/j)
(Jour de gestation)
toxicit
maternelle et
ftale
Rsultat
(mg/kg pc/j)
Hydrophile
Gel
Gavage
Syloid 244
Rat, Wistar
6 - 15
Aucun effet
> 1 350
Syloid 244
Souris, CD 1
6 - 15
Aucun effet
> 1 340
Syloid 244
Lapin
6 - 18
Aucun effet
> 1 600
Syloid 244
Hamster dor
6 - 10
Aucun effet
> 1 600
Aucun effet
> 500
Hydrophobe
Pyrogne
Arosil R972 Rat, Wistar
Nourriture
8 ou 17 semaines,
puis accouples
avec des mles
exposs pendant
4,5 mois
0, 500
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Saisine n2008/005
Au cours de cette tude, les nanoparticules de silice ont t disperses dans leau distille par
sonication. Une caractrisation de ces nanosilices dans lexcipient utilis a t effectue en termes
de taille, de morphologie et dtat chimique. La taille moyenne des nanoparticules de silice
analyse par SEM a t denviron 22 nm (silicate) et de 80 nm (TEOS).
La CI20 (concentration inhibitrice 20%) de la silice telle que dtermine par la technique au MTT
peut tre classe dans lordre croissant suivant :
MRC-5 (138 to 155 g/ml), WS1 (171 to 221 g/ml), CCD (224 to 310 g/ml), A549 (386 g/ml),
HT-29 (508 to 510 g/ml) et MKN-28 (443 to 572 g/ml).
Les lignes cellules cancreuses (A549, HT-29 et MKN-28) ont donc une viabilit plus importante
que les fibroblastes pulmonaires et cutans (MRC-5, WS1 et CCD-966sk) lorsquelles sont
incubes en prsence de nanoparticules de silice.
Les nanoparticules de silice ont galement induit des lsions membranaires (avec une libration
de LDH de 5,6 11,3%) dans lordre croissant suivant :
WS1 (9,8 11,3%), CCD-966sk (8,7 9,1 %), MRC-5 (8,7 8,8 %), HT-29 (6,6 7,7 %), A549
(5,6 7,1 %) et MKN-28 (5,6 5,7 %).
La perte de lintgrit membranaire tant lune des caractristiques physiologiques de la ncrose,
le test LDH rvle quune exposition croissante la silice induit une augmentation du nombre de
cellules qui vont mourir via un processus ncrotique.
Par ailleurs, la cytotoxicit sest rvle ngligeable pour les cellules traites avec des composites
nanoparticulaires [silice chitosan] (viabilit cellulaire >85% / tmoin 667 g/ml) qui nont induit
aucun effet toxique membranaire jusqu' 667 g/ml aprs 48 heures de traitement quel que soit le
type cellulaire (libration de LDH >3,7 %).
En conclusion, lessai de prolifration cellulaire indique que les nanoparticules de silice ne sont pas
toxiques des niveaux faibles de doses, mais que la viabilit cellulaire diminue fortes doses. Un
essai de dtermination de lactivit de la lactate dshydrognase (LDH) dans les surnageants de
culture indique que de fortes doses de silice induisent des lsions de la membrane cellulaire
caractristiques de la ncrose. Les deux tests rvlent que les fibroblastes ayant des temps de
doublement longs sont plus sensibles aux dommages induits par une exposition la silice que les
cellules tumorales qui ont des temps de doublement plus courts. En revanche, les composites
nanoparticulaires [silice chitosan] induisent moins d'inhibition de la prolifration cellulaire et
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Saisine n2008/005
moins de lsions membranaires. Cette tude suggre que la cytotoxicit de la silice pour les
cellules humaines dpend fortement de leur activit mtabolique (Cha et Myung, 2007).
Des nanoparticules de silice amorphe de diffrentes tailles ont t utilises pour dterminer si les
nanomatriaux sont capables d'inhiber la diffrenciation de cellules souches embryonnaires en
cardiomyocytes spontanment excitables. Les distributions en termes de taille et les
caractristiques de dispersion des nanoparticules utilises ont t dtermines avant et pendant
l'incubation des cellules souches dans le milieu de culture par microscopie lectronique
transmission (TEM) et par diffusion de la lumire en mode dynamique (qui permet de mesurer
indirectement des tailles de particules en suspension). Les nanoparticules de silice ont t
suspendues dans leau distille. Les cellules souches embryonnaires de souris ont t exposes
des concentrations nanoparticules de silice allant de 1 100 g/ml pendant une priode de 10
jours (priode de diffrenciation). Lactivit cytotoxique a t dtermine aprs 24 heures et 10
jours dexposition aux SiO2 en utilisant le test standardis WST-1 (proche du test MTT).
Concernant la caractrisation, toutes les nanoparticules de silice examines par TEM se sont
rvles sphriques et non agrges, l'exception des particules de 10 nm. Les diamtres
mesurs pour les particules de 10 et 30 nm ont t respectivement de 11 et 34 nm. En revanche,
les diamtres mesurs ont t de 34 et 248 nm pour les nanoparticules de diamtres thoriques
80 nm et 400 nm.
Le test a permis de dmontrer une inhibition dose-dpendante de la diffrenciation des cellules
souches en cardiomyocytes se contractant spontanment pour les 2 nanoparticules de silice
testes de taille 10 (TEM 11) et 30 (TEM 34) nm avec des concentrations inhibitrices 50% (CI50)
de 59 et 29
g/ml alors que les deux autres particules de taille 80 (TEM 34) et 400 (TEM 248) nm
n'ont eu aucun effet jusqu' la concentration maximale teste de 100 g/ml (CI50 > 100 g/ml).
L'inhibition de la diffrenciation s'est produite des concentrations non cytotoxiques ce qui indique
un effet spcifique des particules sur la diffrenciation des cellules souches embryonnaires. Les
auteurs concluent que latteinte de la diffrenciation de cellules souches par des nanoparticules
largement utilises ncessite des tudes approfondies sur le potentiel de ces nanoparticules
migrer dans l'utrus, le placenta et l'embryon afin de dterminer leurs effets possibles sur
l'embryogense (Park M.V.D.Z., 2009). Le potentiel d'inhibition de la diffrenciation de cellules
souches embryonnaires induite par ces nanoparticules de silice nest pertinent que si leur
translocation de la mre au ftus travers le placenta est effective.
Les effets cytotoxiques des nanoparticules de silice de 20 et 50 nm ont t tudis sur des cellules
HEK293 (cellules de reins embryonnaires humains en culture). La viabilit cellulaire, la fonction
mitochondriale, la morphologie, les espces ractives de l'oxygne (ERO), le contenu en
glutathion (GSH), lestimation de la peroxidation lipidique (quantification des substances ragissant
avec l'acide thiobarbiturique), le cycle cellulaire et l'apoptose ont t valus sur des cellules non
traites et des cellules exposes aux nanosilices. Les nanoparticules de silice ont t suspendues
dans leau distille. Aucune caractrisation na t effectue.
Lexposition SiO2 nanoparticulaire de 20 et 50 nm des doses comprises entre 20 et 100 g/ml
a entran une diminution de la viabilit cellulaire de faon dose-dpendante. La dose ltale
mdiane aprs 24 heures d'exposition a t de 80,2 6,4 et 140,3 8,6 g/ml respectivement
pour les nanoparticules de 20 et de 50 nm SiO 2. Lexamen morphologique a rvl un
rtrcissement des cellules et de la condensation nuclaire aprs exposition aux nanoparticules de
SiO2. Une augmentation du niveau dERO intracellulaires et la rduction de la teneur en GSH ont
galement t observes dans les cellules HEK293 exposes aux nanoparticules de SiO 2.
Laugmentation de la quantit de TBARS suggre un niveau lev de la proxydation lipidique.
L'analyse par cytomtrie en flux a montr que les nanoparticules de SiO 2 peuvent provoquer un
arrt du cycle cellulaire en phase G2/M et une augmentation de la population cellulaire en sub-G1
apoptotique de faon dose-dpendante. Ces donnes suggrent que l'exposition des
nanoparticules SiO2 conduit des modifications morphologiques cellulaires, un dysfonctionnement
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Saisine n2008/005
ltude in vitro de Lucarelli et al. (Lucarelli M., 2004) qui a confirm que les nanoparticules de
SiO2 prsentaient une activit pro-inflammatoire significative sur lactivit des macrophages
humains en induisant slectivement la production de cytokines inflammatoires IL-1 and TNF,
ltude de Peters et al. (Peters K., 2004) qui a tudi le comportement et la viabilit de
cellules endothliales humaines in vivo. Ces auteurs ont observ que les NP de PVC, de
TiO2, de SiO2 et de Co taient vacuolises dans les cellules. Les nanoparticules de Co ont
dmontr un potentiel pro-inflammatoire et cytotoxique important, alors que celles de SiO2
avaient un potentiel pro-inflammatoire faible et celles de TiO2 un potentiel encore moindre,
mais observable, en dpit du fait que cette substance est souvent considre comme
biologiquement amorphe. La conclusion de ces auteurs est que si une stimulation proinflammatoire des cellules endothliales se produit in vivo, une inflammation chronique
pourrait en tre une des consquences possibles.
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NPs
TiO2
Caractristique
25-70nm
C: 640 mg/l
Expo et
Caractrisation
Expo : 6,24 et 48
mg/l
Origine
de la NP
Sigma
Aldrich
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Espce(s)
Test utilis
Resultat
Rfrence
Modle utilis
Microalgue
(Pseudokirchnerell
ia subcapitata)
Bulk TiO2 :
TiO2
25-70nm
Sigma
Aldrich
Bacteria assay
V. fisheri
Toxicity
and
growth inhibition
EC50>20000
Crustacean
assay
magna,
platyrus)
*Ag
20-30nm
TiO2
30nm
Tableau 1
Quantum
sphere
D. pulex
Zebra fish
Algues
LC50 =20000
(D.
T.
Mortality endpoint
Toxicit des NP
vs
mtaux
solubles
Bioassays
LC50
Griffitt et al 2008
Ag 40 g/l
Cu
60 gL
NovaCentri
x
Degussa
TiO2
<25nm
anatase
Mars 2010
Taille
des
agrgats 20-100
nm,
moyenne :
100 nm
Sigma
Aldrich
D. pulex
Version finale
Toxicit aige
Stress
oxydant
biomarqueurs
protiques
nano
moins
que la forme
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Klaper et al 2009
Environ Pollut
Saisine n2008/005
Catalase augmentation
100ppm
Diminution des protines
100 ppm TiO2
TiO2
SiO2
Dans
suspension:
la
Sigma
Aldrich
E. Coli
B. subtilis
Inhibition de
croissance
la
Tableau 2
Adams et al 2006
Water Research
950nm : 240-460
nm, moy : 320 nm
Test 50-5000
ppm
SiO2 : 14nm ; 135510 nm, moy :
205nm
930 nm ; 380-605
nm, moy : 480 nm
*TiO2
Tableau 1
Anatase
*TiO2
Taille: 21nm
Aire:5015m2G
Concentration
0.1,
1.0mgL;
-1
Hongchen
Material
(China)
Tableau 1
Bulk form
Acros
Fisher
scientific
Trs
bonne
dispersion
De Gussa
AG,
Lawrence
Industries
Vrification
lexpo
de
Nematode
Ltalit
Caenorhadibitis
elegans
Longueur
vers
Effets toxique
des
Nombre dufs et
progniture
par
ver
O. mykiss
Wang et al
Environ Pollut
stress oxydant
Federici et al 2007
Induction de dfenses
anti-oxydantes
Aquat Toxicol
2009-
pathologies branchiales
0.5,
pas de perturbations
hmatologiques
Dure: 14 days
diminution
ATPase
Na/Kdpendante
TiO2
TiO2
<100 nm
10-20 nm
Mars 2010
Sigma
Aldrich
30 nm (filtered)
Blaise et al 2008
toxicit
Test de toxicit
aigue
(USEPA
Filtr: augmentation
mortalit en augmentant
Plusieurs
espces
Bioessais
D. magna
Version finale
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Environ Toxicol
Saisine n2008/005
nm
48h expo
*TiO2
Diamtre
30 nm
moyen
TiO2
+Cd
la dose
(0.2, 1, 2, 5, 6, 8,
10 ppm)
sonication: mortalit
varie
(30 nm)
Alfa Aesar
D. magna
(2,0 ppm)
Behaviour (video:
heart
rate,
appendage
and
postabdominal
curling
rate,
feeding rate by full
rotation ofthoracic
leg)
La toxicit dpend de la
nature de la np
Produit 1: 25 nm,
forme crystalline:
anatase)
Algue
(Desmodesmus
subspicatus)
Produit 2 : 100 nm
100% anatase
Crustac
magna)
Test
immobilisation
(crustac)
21nm
De Gussa
Surface: 50m2/g
Carp
C. carpio
(D.
Test
inhibition
croissance (algue)
Adsorption du Cd
sur
les
nanoparticules de
TiO2
Acculuation du Cd
*TiO,
140nm
Particules
enveloppes
+- Si)
TiO2
Table 2
Surface: 190
290m2/G
DuPont
(Al
Taille: 15nm
Expo
par
nourriture
la
Sigma
Aldrich
Mammifres
Bioessays
Bactries
Tests OCDE
Organismes
aquatiques
Toxicit/gnotoxici
t
P. scaber
Expo
court
terme par la voie
alimentaire (3j)
Poids
(p 1908)
anatase
Alimentation
agglomrats
survie
*TiO2
<25nm
10nm (small) 145
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Exposition par la
nourriture -100
gG nourriture
and Chemistry
LOEC, NOEC
Concentrations
correspondant
aux LOEC
TiO2
2024)
Sigma
Aldrich
P. scaber
Stress
oxydant
(GST, Cat
taux
Version finale
Lovern et al 2007
Environ Sci Technol
Diminution
(pas
significative)
de
la
frquence cardiaque)
Pas dimpact sur les
mouvements
de
recherch de nourriture
Activit photocatalytique
se
maintient
aprs
irradiation
Forte
capacit
dadsorption du Cd sur
TiO2 NP
Zhang et al
Chemosphere
2007
TiO2
augmente
laccumulation du Cd
Faible
toxicit
moyenne
Warheit et al 2007
Toxicol letters
Jemec et al2008
Environ Toxicol Chem
page 203
TiO2
Saisine n2008/005
lexposition
m2/g
3 or 14 jous
40nm (large) 40
m2/g
dalimentation,
mortalit,
Table 1
modification de la
masse
5nm
Anatase
Sigma
Aldrich
Goldfish
cells
skin
Cytotoxic
and
genotoxic effects
1-100
gL(gnotox)
Reeves et al 2008
Mutation research
TiO2
seul
ou
combine
avec
UVA
TiO2
75%rutile
25%anatase
Dans
leau
:
bonne dispersion
24,4
nm
en
moyenne
deGussa
AG
Cellules
poisson :
mykiss
de
O.
Sigma
Aldrich
D. magna
Sigma
Aldrich
Concombre
laitue
Test
germination
Microtox
Bioluminescent
test
Genotoxicit/cytot
oxicit UVA
Pas de (gno)toxicit
significative
sauf
en
prsence
dirradiation
UVA
Test OCDE
Lee et al 2009-09-17
Environ
Toxicol
Pharmacol
Faible
toxicit
taille 21 nm
Conc
g/ml
TiO2
7 et 20 nm
1 mg/l
SiO2
7 et 10 nm
TiO2:
0,5-50
C. riparius
7 nm: 300.81 m /g
2
20 nm: 66,6 m /g
SiO2:
10 nm:
2
m /g
644,44
*Ag
(Table 1)
Mars 2010
Table 2
Version finale
de
(voire
Seulement
perturbations
page 204
zero)
qqes
NanoSys
GmbH
Saisine n2008/005
photosynthse
Algue
Concentration
Ag:
AgNP18 fois toxique
que AgNO3
Chlamydomona
s reinhardtii
Navarro et al 2008
Environ Sci Technol
Concentration
Ag+
toxicit AgNP>AgNO3
SiO2
Silica
LUDOX
LS,
363 et 521gSiO2/l
Surface: 236
135 m2/g
et
Algue verte
(P. subcapitata)
Importance de la surface
et non la masse
Tests OCDE de
toxicit (tox et
reprotox)
Wiench et al,
Chemosphere
LUDOX
TM40
Sigma
Aldrich
TiO2
TiO2
(non
10, 30 et 300 nm
288, 47 et 11,5
m2/g
Trois eaux de
surface
(diff
origines)
Nano :
mg/l
0,01-100
Taille : cf table 4
0,6-250 mg/l
Taille moyenne ds
milieu :
1261 nm
416 nm
492 nm
TiO2
25-70 nm
Produits
BASF :
TLite SF,
TLite SF-S
et
TLite
max
(diffrents
coatings)
Daphnia magna
10
nm :
Frederikse
n
(Danemark
)
Algues
verte
Pseudokirchneri
ella subcapitata
Inhibition
croissance
de
Levure
cerevisiae
Inhibition
croissance
de
Toxicit indpendante de
taille, coating, milieu
30 et 300
nm :
Sachtleben
Chemie
GmbH
Sigma
Aldrich
S.
Diminution
de
colonies viables
Mars 2010
2009
Version finale
page 205
Saisine n2008/005
61
http://www.olis.oecd.org/olis/2008doc.nsf/LinkTo/NT00003282/$FILE/JT03246895.pdf
Mars 2010
Version finale
page 206
Saisine n2008/005
Toxicologie environnementale
Effets sur les espces plagiques ( court terme / long terme)
Effets sur les espces sdimentaires ( court terme / long terme)
Effets sur les espces pdologiques ( court terme / long terme)
Effets sur les espces terrestres
Effets sur les microorganismes
Autres informations pertinentes (lorsquelles existent)
Toxicologie pour les mammifres
Pharmacocintique (ADME)
Toxicit aigu
Toxicit doses rptes
Dans la limite des informations disponibles :
Toxicit chronique
Toxicit pour la reproduction
Toxicit pour le dveloppement
Toxicit gntique
Exprience acquise concernant lexposition humaine
Autres donnes dessai pertinentes
Sret du matriau
Dans la limite des informations disponibles :
Inflammabilit
Explosivit
Incompatibilit
Mars 2010
Version finale
page 207
ISBN 978-2-11-098857-7
Afsset, DECID mars 2010 Cration : www.yin.fr Crdit photos : CEA, Getty Images - Imprimeur : Ateliers Demaille - dpt lgal : mars 2010