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1757

Effets des mtaux (Ag, Cd, Cu) sur la

composition biochimique et compartimentation
de ces mtaux chez deux microalgues
Skeletonema costatum et Tetraselmis suecica
H. Perrein-Ettajani, J.C. Amiard, J. Haure et C. Renaud

Rsum : Les effets des concentrations sublthales dargent, de cadmium et de cuivre sur la croissance et la
composition biochimique de deux microalgues marines Tetraselmis suecica et Skeletonema costatum rvlent que la
croissance est de loin le facteur le plus sensible, tandis que les concentrations cellulaires en polysaccharides, en
protines, en lipides et en pigments totaux ne sont pas significativement affectes. Ceci suggre que la premire cible
de ces mtaux est la division cellulaire et les processus qui lui sont lis. Les concentrations mtalliques dans les
cellules algales sont plus faibles chez S. costatum que chez T. suecica, et ltude de la rpartition des mtaux montre
que pour les deux espces dalgues, le cadmium est fortement li aux parois cellulaires ou a pntr dans la cellule,
tandis que 40% du cuivre initialement adsorb est aisment dsorbable aprs traitement avec lagent chlatant.
Toutefois, chez les deux espces algales, le cadmium et le cuivre sont prsents de faon majoritaire dans la fraction
insoluble, tandis que dans le cytosol, ce sont des polypeptides thermorsistants qui sont sollicits. Dans cette tude, la
voie principale de dtoxication chez les algues exposes des concentrations mtalliques sublthales est donc leur
liaison avec des composs insolubles. La forte stabilit de ces derniers suggre une faible biodisponibilit et
vraisemblablement un transfert limit de ces mtaux vers les niveaux trophiques suprieurs.
Abstract: Effects at sublethal silver, cadmium, and copper concentrations on growth and biochemical composition of
two marine microalgae Tetraselmis suecica and Skeletonema costatum revealed that growth is by far the most sensitive
factor, whereas cellular content of polysaccharides, proteins, lipids, and pigments are not significantly affected. This
suggests that the first target of these metals is cell division and processes related to it. Heavy metal concentrations in
algal cells were lower in S. costatum than in T. suecica, and the study of metal partitioning showed that for both algal
species, Cd was firmly bound onto the cell wall or had entered the cell, whereas 40% of the initially adsorbed Cu was
easily released after treatment by the chelating agent. However, in both algal species, Cd and Cu were predominantly
present in the insoluble fraction, and in the cytosol, thermoresistant metal-chelating polypeptids are involved. For this
study, the major metal detoxification process in algae exposed to sublethal concentrations is therefore their binding to
insoluble components. The strong stability of the later suggests less bioavailability and maybe a limited transfer of
these metals to higher trophic levels. Perrein-Ettajani et al. 1765

Introduction
Dans les milieux aquatiques, le phytoplancton constitue la
base des rseaux trophiques et, dautre part, prsente souvent une grande capacit daccumulation lgard de nombreux polluants disperss dans lenvironnement. Cette phase
particulaire est un vecteur non ngligeable de transfert des
lments mtalliques dans les chanes trophiques (Amiard et
al. 1989; Ettajani et al. 1992).
Continuellement exposes en milieu estuarien aux polluants mtalliques tels que lAg, le Cd et le Cu, les microalgues ont dvelopp diffrents mcanismes de tolrance. En
effet, les mtaux peuvent sadsorber la surface algale ou

la matire organique excrte par les algues (Brown et al.

1988; Visviki et Rachlin 1994), ou encore tre lis au niveau
du cytosol, des composs protiniques tels que les phytochlatines (Ahner et al. 1994) ou dans des organites intracellulaire (Ballan-Dufranais et al. 1991). La dtoxication
permet dviter ou du moins de rduire la toxicit de ces lments sur la croissance et les processus physiologiques tels
que la photosynthse, la respiration, labsorption dlments
nutritifs. Les effets des mtaux sur ces paramtres ont t
largement tudis (Stauber et Florence 1990). Toutefois, les
surcharges mtalliques choisies sont souvent trs leves par
rapport celles rencontres dans des milieux contamins,
alors que la rponse des algues certains polluants peut tre

Reu le 24 septembre 1998. Accept le 16 avril 1999.

J14795
H. Perrein-Ettajani. Institut dcologie applique, UCO, 3 place Andr Leroy, B. P. 808, 49008 Angers Cdex 1, et Centre
national de la recherche scientifique (CNRS), Groupement de recherche, 1117 et Universit de Nantes, Service dcotoxicologie,
ISOMer, 1, rue Gaston Veil, F-44035 Nantes Cdex, France.
J.C. Amiard et C. Renaud. Centre national de la recherche scientifique (CNRS), Groupement de recherche, 1117 et Universit de
Nantes, Service dcotoxicologie, ISOMer, 1, rue Gaston Veil, F-44035 Nantes Cdex, France.
J. Haure. Institut franais de recherche pour lexploitation de la mer, Polders des Champs, 85230 Bouin, France.
Can. J. Fish. Aquat. Sci. 56: 17571765 (1999)

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1758

adverse selon que la concentration est sublthale ou aigu.

Visviki et Rachlin (1992) lont soulign pour Dunaliella minuta : la quantit de lipides diminue quand les concentrations en Cd sont aigus, elle augmente toutefois quand
celles-ci sont sublthales.
Le rle inhibiteur de certains mtaux sur la croissance algale a t largement tudi (Metaxas et Lewis 1991; Visviki
et Rachlin 1994). De plus, compte tenu de sa grande sensibilit vis--vis de ces lments, la croissance constitue le paramtre le plus classiquement utilis pour les essais de
toxicit. Nyholm et Damgaard (1990) ont montr que pour
Selenastrum capricornutum, les bioessais bass sur la croissance rendent compte des effets chroniques des mtaux,
alors que ceux bass sur la photosynthse sont considrs
mesurer la toxicit aigu.
Le but de cette tude est de caractriser dune part, les
perturbations aussi bien au niveau de la croissance quau niveau de la composition mtabolique des deux microalgues
Skeletonema costatum et Tetraselmis suecica soumises des
concentrations sublthales dAg, de Cd ou de Cu, et de dterminer dautre part, les mcanismes de dtoxication sollicits par les deux algues. Le choix de lAg, du Cd et du Cu
pour cette tude rside dans le fait que ces lments se trouvent des concentrations leves suite aux rejets anthropogniques. Des rseaux de surveillance (RNO 1995) montrent
quils sont bioaccumuls par les organismes aquatiques. De
plus, pour lAg, peu dtudes ont abord la toxicit de cet
lment. Ces deux espces (Skeletonema costatum et Tetraselmis suecica) ont t choisies, car elles sont largement employes en conchyliculture du fait de leurs bonnes valeurs
nutritionnelles et leur facilit de culture. De plus, S. costatum est prsente presque toute lanne et en abondance dans
les claires ostricoles de la baie de Bourgneuf et constitue un
maillon important des chanes trophiques mollusques de
cette baie.
Une mthodologie a t dveloppe (Amiard-Triquet et al.
1992) permettant dtudier la rpartition des mtaux entre
les formes solubles (dont les phytochlatines et les enzymes)
et insolubles (concrtions minrales, groupements membranaires). Cette mthodologie, outre les prvisions quelle autorise en terme de spciation et de biodisponibilit des
mtaux au maillon suivant (Ettajani et Pirastru 1992), permet galement de prvoir les effets biologiques de ces derniers : parmi les composs liant les mtaux, les composs
thermorsistants incluent principalement les phytochlatines,
tandis que les enzymes qui sont les cibles molculaires des
mtaux sont prsents dans la phase thermosensible.

Matriels et mthodes
Culture et contamination des microalgues
Les souches de Skeletonema costatum et de Tetraselmis suecica
ont t fournies respectivement par la station Institut franais de
recherche pour lexploitation de la mer de Bouin (France) et par
lalgothque du laboratoire de Biologie Marine (Nantes, France).
Avant la mise en culture des algues, lespce T. suecica a ncessit une acclimatation progressive leau souterraine. Cette dernire, naturellement riche en nutriments, est largement utilise en
baie de Bourgneuf (Vende, France) pour les cultures phytoplanctoniques. Pour S. costatum (souche Bouin 1), linoculum constitu
de cellules en phase de division active est prlev dun bac de culture (50 m3) servant de nourriture en nourricerie des mollusques.

Can. J. Fish. Aquat. Sci. Vol. 56, 1999

Les deux microalgues ont t cultives en grand volume (600 L)
dans de leau souterraine sale au mois de mai sous des conditions
naturelles dclairement et de temprature. De plus, un bullage
continu dair a t utilis pour homogniser les cultures et viter
ainsi la sdimentation des cellules. Ces cultures en grands volumes
ont t ralises dans le but de disposer de biomasse algale suffisante pour des expriences ultrieures de transfert des mtaux aux
hutres.
Les diffrents contaminants Ag, Cd et Cu sont introduits dans
les diffrents milieux de cultures sous forme de solution nitrique
0,5 molL1, le 1er jour densemencement et renouvels le 5e jour
de culture. Les concentrations des solutions mres des mtaux sont
choisies afin dviter toute modification du pH du milieu.
Les cultures dalgues ont t contamines par 20 g AgL1,
20 g CdL1 et 50 g CuL1. Toutefois, du fait de la sensibilit
importante qua montre T. suecica lgard de lAg et du Cu, de
nouvelles cultures ont t contamines par des surcharges plus faibles (10 g AgL1 et 30 g CuL1). Les cultures tmoins ont t
constitues concomitamment. Donc pour T. suecica, T1 reprsente
le tmoin de la culture contamine par le Cd, et T2 le tmoin de
celles contamines par lAg ou le Cu.
La densit numrique des cellules est estime par comptage au
microscope sur lame hmatimtrique de type Malassez (six replicats, sauf pour T2 T. suecica o n = 5). Les cultures sont arrtes
prcisment lorsque les algues entament le tiers final de la phase
exponentielle cest--dire lorsque le nombre de divisions cellulaires diminue mais que la concentration en chlorophylle est toujours
suprieure celle des phopigments.

Analyses biochimiques
La matire particulaire de deux chantillons de chaque culture a
t recueillie sur filtre Whatman CF/C (porosit : 1 m), puis
conservs 30C. Les protines ont t doses suivant la mthode
de Lowry et al. (1951, dans Baud et al. 1990). Les lipides ont t
extraits dans un mlange de chloroforme et de mthanol (Bligh et
Dyer 1959, dans Baud et al. 1990) puis doss selon Marsh et
Weinstein (1966, dans Baud et al. 1990). La concentration en sucres a t dtermine par la mthode de Dubois et al. (1956, dans
Baud et al. 1990).
La chlorophylle a et phophytine a, dont la somme reprsente
les pigments totaux, ont t doses suivant la technique de Lorenzen (1967, dans Baud et al. 1990).

Compartimentation mtallique
Les cultures en grand volume ont t centrifuges. Des chantillons de 1 1,5 g de poids frais dalgues sont rincs pendant 10 min
avec 10 mL dun agent complexant 8-HQ (8-hydroxyquinoline-5sulfonate, 1 mM) qui permet la dsorption des mtaux faiblement
lis la surface des cellules (Price et Morel 1990). Les diffrents
chantillons sont ensuite centrifugs. Des aliquotes denviron 100
400 mg de poids frais, selon lespce algale, ont t homognises dans 2 3 mL de tampon Tris 0,02 M, 0,15 M NaCl (pH 8,6).
Les algues ont t ensuite soumises une sonication de 100 W
4C (Sonifer-250), quatre fois 20 s avec 10 s dintervalle. La destruction cellulaire a t vrifie au microscope optique.
La compartimentation a t ralise selon la figure 1.

Dosage des mtaux par spectromtrie dabsorption

atomique (SAA)
Des aliquotes dalgues ainsi que les diffrents culots (C1 et TS)
issus de la compartimentation ont t pralablement minraliss
dans 1 mL dHNO3 (Suprapur, Merck) pendant 1 h 90C. Pour
les surnageants (S1 et TR), la minralisation a t ralise par addition dHNO3 seulement.
Les concentrations mtalliques ont t dtermines par spectromtrie dabsorption atomique effet Zeeman (Hitachi Z-8100)
avec la mthode des ajouts doss. Les analyses ont t effectues
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Perrein-Ettajani et al.

1759

Fig. 1. Compartimentation des mtaux chez les algues.

Fig. 2. Coefficient de croissance des cultures tmoins et

contamines de S. costatum et T. suecica (correspond au rapport
entre le nombre de cellules des cultures contamines et celui des
cultures tmoins).

Analyses statistiques
Les rsultats de la composition biochimique des algues ont t
analyss laide du test-t de Student.

Rsultats

en four selon la mthode dcrite par Amiard et al. (1987). Cette

dernire a t valide par des contrles internes et externes de qualit. Pour la premire procdure, du matriel standard (tissu
dhutre, SRM 1566) certifi par lUS/NBS (<<United States national Bureau of Standards>>) a t utilis. La seconde procdure
(homognats de crevette, MA-A-3/TM) a t ralise dans le cadre
dexercices dintercalibrations organiss par lIAEA (<<International Atomic Energy Agency>>).
Dans le cas de la Diatome S. costatum, la prsence de la silice
non solubilise par lacide nitrique na pas perturb la dtermination des concentrations mtalliques (Ettajani et al. 1992).

Effets sur la croissance et la composition biochimique

des algues
Les effets de lAg, du Cd et du Cu sur la croissance des
deux microalgues S. costatum et T. suecica exprims par le
coefficient de croissance (rapport entre le nombre de cellules
des cultures contamines et celui des cultures tmoins) sont
reprsents dans la figure 2.
larrt des cultures des tmoins (T1 et T2) de T. suecica, la diffrence du nombre de cellules est non significative (T1 : x = 371 103 cellules/mL, pour n = 6 et T2 : x =
390 103 cellules/mL, pour n = 5).
En prsence de lAg, le coefficient de croissance des algues diminue considrablement aussi bien pour S. costatum
(32%) que pour T. suecica (55%). En effet, pour S. costatum
contamine par lAg, la diminution de la biomasse est significative par rapport au tmoin (p < 0,05), alors que pour le
Cd, elle est non significative (p > 0,05). Pour T. suecica
contamine par lAg ou par le Cd, la diminution de la biomasse par rapport au tmoin est hautement significative (p <
0,01). Toutefois, pour le Cu, les deux espces ragissent diffremment : T. suecica, plus sensible, a montr une croissance limite pour la surcharge de 30 g CuL1, alors que la
production de S. costatum a augment pour une concentration plus leve de 50 g CuL1.
Les rsultats des analyses biochimiques au niveau des
deux algues sont reprsentes dans la figure 3.
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Can. J. Fish. Aquat. Sci. Vol. 56, 1999

Fig. 3. Effets des mtaux sur la concentration cellulaire en glucides, protides, lipides et pigments totaux chez (A) T. suecica et
(B) S. costatum (concentration moyenne en pg/cellule (pg/cel) affecte de lcart-type et n = 2, avec T1 : tmoin relatif la culture
contamine par le Cd et T2 : tmoin relatif celles contamines par lAg ou le Cu).

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Tuesday, September 28, 1999 9:19:55 AM

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Perrein-Ettajani et al.
Fig. 4. Pourcentage de dsorption du Cd et du Cu chez
S. costatum et T. suecica induit par lagent complexant (8-HQ)
(rsultats exprims par rapport une quantit mtallique initiale
de 100% chez les algues avant le traitement par le 8-HQ, n = 2).

1761
Tableau 1. Concentrations mtalliques moyennes (affectes de
lcart-type, n = 3) et facteurs de concentration (Fc) de
S. costatum et T. suecica tmoins et contamines par lAg, le
Cd, ou le Cu.
Concentrations mtalliques (gg1 poids sec)
Algues
S. costatum
T. suecica
S. costatum
T. suecica
S. costatum
T. suecica

Chez T. suecica, lexception des cultures contamines

par lAg qui a provoqu une diminution significative (p <
0,05) des teneurs glucidiques, les autres contaminants nont
eu aucun effet. Laugmentation enregistre pour la culture
contamine par le Cu savre non significative (p = 0,403).
Pour S. costatum, le Cu a eu un effet positif significatif (p <
0,01).
Les concentrations protidiques chez T. suecica contamine
par le Cu sont significativement plus leves que celles des
tmoins (p < 0,01). Il en est de mme pour S. costatum
contamine par le Cd (p = 0,051).
Pour les lipides, toutes les cultures contamines de T. suecica prsentent des teneurs suprieures aux tmoins mais
non significatives sauf pour le Cd (p < 0,01), alors
quaucune influence significative des mtaux na t constate chez S. costatum.
Les teneurs en pigments totaux ont augment chez T. suecica contamine par le Cu (p < 0,05) et chez S. costatum
contamine par lAg (p < 0,05).
Ces rsultats montrent que les surcharges mtalliques
choisies ont provoqu une diminution non ngligeable de la
biomasse sans effet ngatif sur la composition biochimique
des deux microalgues.
Accumulation mtallique
Laction de lagent complexant (fig. 4) a entran le relargage dune part importante de Cu (40%) aussi bien pour
S. costatum que pour T. suecica, alors quaucune dsorption
na eu lieu pour celles contamines par le Cd. La dispersion
importante des rsultats relatifs au dosage de lAg nous a interdit toute interprtation. Des interactions de lAg avec la
solution de dsorption ont ventuellement pu se produire
donnant lieu des phnomnes de relargage trs alatoires.
Aprs rinage des algues lagent complexant, seule
S. costatum contamine par le Cu a prsent une lgre perte
en poids sec (12%).
Les concentrations moyennes dAg, de Cd et de Cu des
algues tmoins et contamines sont prsentes dans le
tableau 1. Les surcharges dAg et de Cu introduites dans les
milieux de culture des deux espces ntant pas les mmes,

Ag

Cd

Cu

Algues tmoins
0,010 (0,002)
0,03 (0,01)
0,031 (0,004)
1,8 (0,3)
Algues contamines
1,52 (0,05)
51,9 (2,0)
1,30 (0,22)
196,5 (7,8)
Facteur de concentration (Fc)
76
2600
130
9825

1,33 (0,06)
7,7 (0,2)
169,0 (2,6)
217,0 (3,9)
3380
7233

le facteur de concentration (Fc) a t calcul. Celui-ci

correspond au rapport entre la concentration du mtal dans
lalgue et celle dans leau contamine. Selon lespce,
laccumulation des mtaux est diffrente, T. suecica prsente
des facteurs de concentrations plus levs.
Compartimentation mtallique
La rpartition des mtaux entre les diffrents compartiments est identique chez les deux espces (fig. 5). Les mtaux sont principalement associs la fraction insoluble. Au
sein du cytosol, la fraction thermorsistante prdomine
lexception de lAg chez T. suecica.

Discussion et conclusions
Lagent complexant a eu des consquences minimes sur le
poids sec des algues, ce qui montre sa spcificit pour ne dsorber que les mtaux faiblement fixs aux cellules, et la
possibilit de lutiliser tout en conservant lintgrit de ces
dernires. En effet, laction de lagent complexant montre
quune part importante du Cu est faiblement adsorbe au niveau de la paroi algale. Ce Cu se trouve li aux protines
carboxyliques et aux rsidus amins (Stauber et Florence
1987). Ces mmes auteurs (Stauber et Florence 1990) ont
montr que le Zn est majoritairement adsorb la surface
des cellules, seuls 3 4% du Zn extracellulaire traverse la
membrane. Ceci montre la biodisponibilit potentielle de ces
lments pour les maillons suivants. Quant au Cd, il serait
soit fortement fix la surface des cellules, soit nullement
fix ces dernires. La prise du Cd par les cellules suit deux
phases : une phase rapide avec fixation du mtal la surface
des algues, et une phase lente avec le passage et le transfert
du mtal lintrieur de la cellule (Romo et GnassiaBarelli 1985; Morelli et Scarano 1995).
Dun point de vue mthodologique, lutilisation de lagent
complexant 8-HQ permettrait pour les tudes de compartimentation, dliminer la fraction mtallique faiblement lie
la membrane algale qui risque, aprs broyage des chantillons dans le tampon, de se distribuer alatoirement entre les
deux fractions (soluble et insoluble) compliquant de ce fait
linterprtation des rsultats. De plus, il permettrait galement dvaluer la part des mtaux lis aux groupements
membranaires (Morelli et Scarano 1995).
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Can. J. Fish. Aquat. Sci. Vol. 56, 1999

Fig. 5. Distribution de lAg, du Cd et du Cu dans les cellules de S. costatum (A, B et C) et T. suecica (D, E et F). Y, quantit des
mtaux sous forme soluble (Sol.) et insoluble (Insol.) en pourcentages (%) de la concentration globale dans les algues et quantit des
mtaux lis des composs thermorsistants (TR) ou thermosensibles (TS) en pourcentages (%) de la concentration globale
cytosolique (Sol.) (moyennes et intervalles de confiance, p < 0,05, n = 3).

Ladsorption des mtaux la surface algale et leur absorption dpendent du mtal dune part, et de sa forme physicochimique dautre part. En effet, Mason et Jenkins (1995)
dans leur synthse bibliographique distinguent les mtaux de
classe A (Al) de ceux de classe B (Ag) ou de transition (Cd
et Cu). Les premiers se lient principalement aux ligands de
loxygne et par consquent nont pas de porteurs protiniques spcifiques pour leur transport de la surface cellulaire
au cytoplasme. Les seconds, ayant une grande affinit pour
les sulfures, se lient plutt aux protines membranaires avant
dtre transports au niveau du cytoplasme. Par ailleurs, certains mtaux se fixent aux hydroxydes de Fe ou de Mn recouvrant la membrane, ce qui peut constituer un moyen de
protection de la cellule vis--vis de ces mtaux.

En ce qui concerne la spciation mtallique, son influence

sur labsorption des mtaux a t largement tudie, et il est
bien tabli que les complexes mtalliques liposolubles et les
formes ioniques ou faiblement complexes sont plus biodisponibles (Stauber et Florence 1987; Lage et al. 1996). Les
processus de transfert sont toutefois compltement diffrents; les premiers pntrant dans la cellule principalement
par diffusion passive, les autres donnant lieu des phnomnes de transport actif ou facilit (Morrison 1989).
Dans le cas de notre tude, les mtaux sont introduits individuellement sous forme ionique. Toutefois, au cours du
dveloppement algal, la phase aqueuse senrichit en diverses
substances organiques excrtes par les cellules. Ce phnomne peut conduire une modification non ngligeable de la
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Perrein-Ettajani et al.

capacit complexante du milieu vis--vis des mtaux comme

le cuivre, rput pour former des complexes stables avec divers ligands organiques.
De plus, dans le milieu naturel les microalgues sont rarement exposes un seul mtal. Des interactions entre les
mtaux peuvent conduire une exaltation (synergie entre Se
et Cd) (Boisson et al. 1989) ou une limitation (antagonisme entre Ag et Cu) (Ettajani et Pirastru 1992) de leurs effets toxiques individuels. Ces comptitions peuvent avoir
lieu aussi bien au niveau des ligands membranaires
quintracellulaires (Mason et Jenkins 1995).
En terme de bioaccumulation, une diffrence importante
entre les deux espces a t note. Tetraselmis suecica accumulant plus dlments, alors mme que les surcharges dAg
et de Cu introduites dans son milieu de culture sont relativement plus faibles. En effet, S. costatum est une algue connue
pour excrter dassez grandes quantits de matire organique
(Berland et al. 1977), celle-ci en complexant les mtaux du
milieu rduirait la concentration disponible et par consquent la toxicit de ces lments pour les algues (Brown et
al. 1988). De plus, cette diffrence daccumulation nest pas
sans consquence sur le transfert des mtaux des deux algues au maillon suivant (H. Ettajani, B. Berthet, J.C. Amiard
et L. Chevolot, tude soumise).
Les surcharges mtalliques choisies ont eu un rle inhibiteur non ngligeable sur la croissance des deux espces
dalgues, alors quaucune diminution significative des constituants cellulaires (glucides, protides, lipides, chlorophylle a
et pigments totaux) na t note, lexception des glucides
chez T. suecica contamine par lAg. Ballan-Dufranais et
al. (1991) ont montr que lAg peut induire des perturbations au niveau du systme enzymatique de stockage des polysaccharides. Quant aux concentrations de protides, lipides
et pigments totaux, ils ont connu dans la majorit des cas
une augmentation significative selon lespce et le mtal. En
effet le Cu, lment essentiel, a conduit une augmentation
de ces composants, surtout chez T. suecica, alors mme
quen terme de croissance, cette espce semblait plus sensible cet lment. Quant au Cd, lment nayant aucun rle
physiologique connu actuellement, un effet positif a t not
au niveau des lipides et des protides respectivement chez
T. suecica et S. costatum.
Plusieurs travaux soulignent la grande sensibilit de la
croissance vis--vis des polluants par rapport aux autres processus physiologiques : photosynthse, respiration, absorption du phosphate et de lazote (Berland et al. 1977; Stauber
et Florence 1987; Nalewajko et Olaveson 1994). Leffet
toxique du Cu chez Nitzschia closterium se manifeste au niveau du cytosol par la diminution de la concentration intracellulaire en thiols, ncessaire la multiplication cellulaire,
ce qui entrane une inhibition de celle-ci sans pour cela affecter les autres fonctions (Stauber et Florence 1987).
Laugmentation des produits de stockage tels que les lipides et les polysaccharides chez S. costatum, serait le rsultat
dun vieillissement de la population, llment toxique inhibant ou perturbant slectivement la pntration des lments
essentiels et leur assimilation par la cellule (Berland et al.
1977), comme le phosphate et lazote (Nalewajko et Olaveson 1994). Pour dautres espces telles que Selenastrum capricornutum, cette augmentation peut tre une rponse

1763

dacclimatation vis--vis des polluants comme le Cd

(Thompson et Couture 1990).
Quant laugmentation des concentrations protidiques
chez les deux algues contamines par le Cd, elle reprsenterait une synthse de novo de protines pour lier cet lment
(Thompson et Couture 1990). De plus, Price et Morel (1990)
soulignent le rle positif que peut jouer le Cd dans les milieux dficients en Zn. En effet, le Cd est susceptible de
remplacer cet lment essentiel au niveau des macromolcules favorisant de ce fait la croissance des diatomes marines.
Le faible effet des diffrents mtaux tudis sur la composition biochimique des micro-algues est relier galement
aux rsultats relatifs la compartimentation. En effet, les
mtaux se trouvant majoritairement dans la phase insoluble,
une part importante serait lie la membrane cellulaire ou
encore dtoxifie chez T. suecica au niveau des vsicules osmiophiles intracytoplasmiques (Ballan-Dufranais et al.
1991). Chez la diatome Thalassiosira weissflogii, une part
importante de lAg, du Cd et du Zn est associe la fraction
insoluble rendant ces derniers moins disponibles aux
consommateurs primaires (Price et Morel 1990; Connel et
al. 1991).
Lassociation plus marque de lAg aux composs thermosensibles (TS) du cytosol chez T. suecica suggre une
sensibilit plus grande de cette espce par comparaison
S. costatum. En effet, cette fraction contient la majorit des
enzymes qui constituent la cible molculaire des mtaux
toxiques.
La tolrance diffrentielle des deux microalgues rencontre dans cette tude corrobore les rsultats de travaux
selon lesquels S. costatum serait plus rsistante que dautres
microalgues, surtout celles nappartenant pas aux diatomes,
lAg et lAs (Sanders et Cibik 1988; Sanders et Abbe
1989), au Cu (Metaxas et Lewis 1991) et au Zn (Smith
1983). De plus, les deux espces montrent des profils chromatographiques bien distincts suggrant la prsence de composs fixant les mtaux de poids molculaire apparent
diffrent. Ni la caractrisation par HPLC, ni lanalyse des
spectres UV de ces composs nont pu affirmer lexistance
de phytochlatines dans la phase soluble de ces deux espces (H. Ettajani, B. Berthet, J.C. Amiard et L. Chevolot,
tude soumise). Ils constituent, chez les plantes et les algues,
les principaux chlateurs intracellulaires des mtaux essentiels ou non essentiels; le Cd reprsentant llment le plus
inducteur, suivi de lAg et du Cu (Grill et al. 1987). Contrairement la mtallothionine, ces peptides ((-Glu-Cys)n-Gly
avec n = 211)) ne sont pas induits directement par les gnes, mais rsultent de ractions enzymatiques impliquant la
phytochlatine-synthase (Rauser 1990). La synthse de tels
composs dpend des espces algales et des concentrations
mtalliques choisies (Rauser 1990; Rijstenbil et al. 1994).
En effet, dans la majorit des cas, la prsence de ces peptides a t tablie surtout chez les plantes, naturellement soumises de fortes concentrations des mtaux dans le sol
(Grill et al. 1987), sinon chez des algues mais sous des
conditions de contamination relativement leves, de lordre
de 1 mg CdL1 pour Chlorella ellipsoidea (Nagano et al.
1984) et Phaeodactylum tricornutum (Kawaguchi et Maita
1990), lexception de ltude de Ahner et al. (1994)
concernant la production de ces composs chez des algues
sous des conditions de faibles contaminations mtalliques.
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Dans le cas de cette tude, o les concentrations mtalliques choisies sont ralistes par rapport celles rencontres
dans des milieux naturels pollus, il apparat donc que
les composs types phytochlatines sont peu ou pas sollicits par les deux espces S. costatum et T. suecica. Par ailleurs, compte tenu des fortes concentrations des trois mtaux
dans la fraction insoluble, la formation de minraux et (ou)
la fixation des mtaux au niveau de la membrane permet
dviter ou de rduire la toxicit de ces lments. En effet,
chez Chlamydomonas bullosa contamine par le Cu, le dveloppement dorganites membranaires constitue un mcanisme majeur de dtoxication (Visviki et Rachlin 1994).
Nanmoins, en dpit de ces moyens, leffet des trois mtaux
tudis (Ag, Cd et Cu) sur la croissance algale est non ngligeable ( lexception du Cu chez S. costatum). Il est possible
que (i) par leur liaison des composs membranaires, ces
mtaux provoqueraient une comptition pour labsorption
dlments ncessaires la multiplication cellulaire comme
le fer, le zinc, etc. (Morel et Hudson 1991) ou encore (ii) les
mtaux auraient comme premire cible les paramtres lis
la division cellulaire tels que la concentration intracellulaire
en thiols qui, en diminuant, entrane une baisse de la dfense
de la cellule vis--vis du H2O2 (Stauber et Florence 1987).
La rduction de la croissance des algues, soumises mme
de faibles concentrations mtalliques, constitue une des
premires manifestations de la toxicit de ces lments. Toutefois, le faible effet sur la composition biochimique permet
de prserver la valeur nutritive de ces algues.
En terme de transfert mtallique, la liaison importante des
mtaux aux composs insolubles dune grande stabilit, suggre un faible transfert aux consommateurs. Toutefois, une
telle hypothse reste confirmer par des tudes simulant
labsorption digestive chez ces derniers (attaque enzymatique et (ou) action du pH) des mtaux bioaccumuls par les
algues.

Remerciements
Nous remercions J.P. Baud (Institut franais de recherche
pour lexploitation de la mer, Bouin), J.M. Robert (Laboratoire de Biologie Marine, Universit de Nantes) et leurs
quipes, particulirement Y. Nassiri, pour laide quils nous
ont apporte dans ce travail des titres divers.

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