Le Stress Oxydant

Alain FAVIER
Département de Biologie Intégrée CHU
Laboratoire Lésions des Acides Nucléiques CEA
Alain.Favier@ujf-grenoble.fr
 Qu’est ce que le stress ?
• Rupture dans le fonctionnement d’une
fonction biologique traduisant un
défaut d’adaptation à l’environnement
– Stress psychologique: fatigue, dépression
– Stress nerveux: adrénaline
– Stress oxydant
Stress environnement et nutrition
Pb
NO2 ULTRA VIOLETS
SO2
O3

TABAC
ALCOOL

PROTECTION
couche
supplémentation d'ozone
Vitamines
Oligoéléments micronutriments Herbicides
antioxydants:
vitamines E, C
caroténe
oligoéléments
Se Cu Zn Mn

Grenoble 10 décembre 1993

GREP
 Les radicaux et les espèces
actives de l’oxygène
1O
• L’oxygène singulet 2

• L’anion superoxyde O2°

• Le peroxyde d’hydrogène HOOH

• Le monoxyde d’azote NO°

• Le peroxynitrite HOONO

• Le radical Hydroxyle OH°

 D’où viennent les espèces
actives et radicaux de l’oxygène
• De cellules spécialisées:
– les macrophages, monocytes et polynucléaires
• De nos toutes nos cellules:
– Par la source d’énergie, la mitochondrie
• De l’oxydation de composés:
– Enzymes oxydases, Cycle redox, P450
• De comportements dangereux:
– Tabac, alcool
• De l’environnement et de la pollution:
– Rayonnement radioactif, ultraviolets, pesticides,
Cadmium, Fer, Ozone, NOx
Phagocytose de
E coli par
polynucléaire
neutrophile
 Comment nous protégeons
nous?
• En neutralisant les radicaux par des
piégeurs venant de la nutrition
• En neutralisant les radicaux par des
piégeurs fabriqués par nos cellules
• En prévenant leur formation par des
protéines qui contrôlent le Fer
• En les éliminant par des enzymes
antioxydants
 Les piégeurs
de radicaux
ou
« scavengers »

R° + PiégeH Æ RH + [P°]
Prennent l’électron célibataire du
radical en formant un nouveau
radical non dangereux qui sera
détruit et éliminé
 Les antioxydants apportés
par l’alimentation
• Les antioxydants • Autres antioxydants
majeurs • Caroténoïdes
• Vitamines: • Poly phénols
– Ascorbat • Dérivés soufrés
– Vitamine C • Essences antioxydantes
– Bêta carotène • Dérivés indoliques
– Ubiquinone
• Oligoéléments
– Zn, Cu, Se, Mn
 Les produits végétaux du sud sont
très riches en antioxydants
• La photosynthèse génère
beaucoup de radicaux libres
• Les antioxydants protégent les
plantes contre:
– Le soleil O2°
– La sécheresse 1O2
– Les bactéries et virus O2°
• Tomate: lycopéne
• Romarin: huiles essentielles H2O2
• Safran africain: curcumine
• Sauge: acide salvianolique
chloroplaste
• Ail, oignon: centaines de dérivés soufrés
• Thé: aflavines
 O2 Arginine
Les enzymes oxygè ne
antioxydants
Ils sont codés Opar des gènes
anion superoxy de
2 NO qui
monoxyde
d’azo te
supe roxyde dismutase CuZn
s’adaptent à la teneur en radicaux
supe roxyde dismutase Mn
H 2O 2 ONOOH
peroxy de d’hydrogè ne perox initrite
glutathion peroxydase Se Fe
Cu sélénopro téine P Se
catalase Fe u
H 2O HO
thioredox ine peroxydase radical hydroxy le

thioredox ine réducta se Se

ADN oxydés Lipides oxydés Proté ines oxy dées

 Le stress: rupture d’adaptation
antioxydante
Déficit d’adaptation Forte capacité d’adaptation

Stress !!

1 1

Pas d’exposition Pas d’exposition

50
50
surproduction
 stress oxydant

détivés secondaires
Les conséquences
du stress oxydant toxiques (MDA,HNE)
oxydation lipides
adduit aldehydes
peroxydes oxydation ADN

réparation
G ---> C
adduit radical
oxydation LDL protéine
mutations
oxydation protéines
protéines
modifiées
regulation redox activation de
des signaux génes
cellules spumeuses cellulaires
redox sensibles

cancer

atherome proliferation
fibrose

autoimmunité
apoptose
 Nos apports alimentaires en
antioxydants sont ils suffisants
• Pas de déficits sévères entraînant des
carences
• Des apports insuffisant en nombreuses
vitamines et oligo-éléments par rapport
aux recommandations
• Les apports diminuent chez le sujet âgé
 %
Pourcentages de femmes dont les apports sont inférieurs aux Apports Nutritionnels
2/3 ANC< <ANC
Conseillés (ANC) dans l ’étude SU.VI.MAX
60 (moyenne de 12 enregistrements alimentaires de 24 h sur 2 années)
<2/3 ANC
50

40

30

20

10

0
B2

B6

um
C
ne
1
E

r
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Fe
B9

B1
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C
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ne
ta

ta
Vi

Vi
Vi

ta
Vi

Vi

ci

Vi
la
Fo
 38
Apports
en Se en 67

Europe
65
32
1976

52 113
1986

45 129

70

42
 Maladies héréditaires par mutations
de gènes antioxydants
• A. Sclérose latérale amyotrophique
– vers 40 ans elle entraîne une atrophie musculaire progressive
puis la mort par paralysie respiratoire en 2 à 3 ans. Le gène
anormal a été identifié comme étant celui de la Cu-Zn SOD
cytosolique
– Ex Exon 2 GGA -> AGA (Gly 37 -> Arg)
• B. dégénérescence maculaire
– augmentation de la fréquence de l'allèle alanine et du génotype
alanine /alanine de la SOD
• C. Chorée de Huntington
– fraxatine régule le fer intrra mitocho,ndriale
 ALS : Sclérose latérale
amyotrophique
• Apparaissant vers 40 ans l’ALS entraine une atrophie
musculaire progressive puis la mort par paralysie
respiratoire en 2 à 3 ans. L'incidence est de 1 à 2
/100000 habitants en Europe et Amérique du Nord, et
5 à 10 % des cas sont familiaux et donc héréditaires .
• Certaines formes familiales de cette maladie
dégénérative des motoneurones sont liées à une
anomalie du chromosome 21q. Un géne anormal a été
identifié comme étant celui de la Cu-Zn SOD
cytosolique.
 Le transfert du gène muté des
malades est létal pour la souris
Le gène muté dans les formes GGA -> AGA
familiales est celui de la SOD Cu-Zn CTG -> GTG
GGC -> AGC
survival analysi of mice transgenic for G93A SOD mutation (from Gurney

120
GGC -> GAC
life span of control mic
100 CAT -> CGC
80 GGC -> CGC
60 GGT -> TGT
40 GGT -> GCT
20
GAA -> GGA
0
CTC -> GTC
age (days ATT -> ACT
La théorie radicalaire du vieillissement
Theories of aging
:Harman un visionnaire?
changes in immunologica
metabolic function
rate
Pearl 1928
O somatic
Error Harman 1956 mutation
Szilard 1959
catastrophe
Orgel 1963
senescence
molecular cross genes
linking Hayflick 1968
Bjorksten
1968 GRE
P
 Que se passe il lorsque nous
vieillissons ?
• Les sujet âgé ont des apports diminués en
antioxydants
– Folates, vitamine C
– Sélénium, zinc
• Baisse de l’absorption intestinale: zinc, bêta
carotène
• Mitochondrie relâche beaucoup plus de RLO
• Gènes antioxydants perdent leur inductibilité par
RLO et donc leur adaptation
• Fréquence de l ’inflammation activant les
phagocytes
Effet du vieillissement sur l’adaptation des
effect of age
gènes on capacity
d’un of
vers au stress
SOD induction in Darr 1995
160 Caenorhabditis
250 e.
young
140
middle
200
120 old
SOD activity % of control

SOD activity % of control

100 150

80
100
60

40
50
20

0 0
0 3H 24H 48H 0 24h 48h GRE 72h
P
stimulation, by plumbagin hyperbaric
oxygen
 Relation entre la richesse en SOD des
correlation
espèces et leur between
espérancemaximum life
de vie maximale
span potential and SOD (from Cutler 1985
SOD(U/mg prot)/
SMR (cal/gxday)
16

man

12

rhesus
chimpanzee
08
tree shrew gorilla
house
mouse baboon
green monkey
04
squirrel monkey
deer mouse LifespanYears
20 40 60 80 100
 Augmentation des peroxydes
lipidiques avec l’âge
• Résultats obtenus au 2,9
MDA
laboratoire du CHU de 2,7
Grenoble
2,5
• Méthode
2,3
fluorométrique à
l’acide 2,1
thiobarbiturique 1,9
1,7
1,5
11 ans 33 ans 50 ans 86 ans
suvimax Minvitaox
 Peut on vivre plus longtemps en
modifiant nos défenses antioxydantes?

• Par les manipulations

génétiques
• En évitant les expositions
• En augmentant nos apports en
antioxydants
 Les manipulations génétiques
lifespan curves of adult Cu-Zn SOD-transgenic and
control Drosophila ( from Fleming 1992)
100
90 control
80 P (bSOD)11

70
percent alive

60
50
40
30
20
10 age (days)
0
0 20 40 60 80 100 GR
P
 Suppression du gène p66 chez la
souris
Migliaccio M. Nature 1999, 402 ; 309

Le knock out d’un gène chez la souris

prolonge l’espérance de vie de 30% (36 mois
au lieu de 26). L’absence de la protéine
correspondante p66 protége les cellules des
radicaux libres générée par les UV ou H2O2 .
La protéine p66 exercerait un effet inhibiteur
sur les mécanismes de réparation de l’ADN
 L’enrichissement en antioxydants de
l’alimentation et la prévention des
maladies liées à l’âge
• Troubles oculaires
• Vieillissement cutané
• Cancers
• Dégénérescence neurologique
Que peut faire la nutrition:
Améliorer la durée de vie moyenne en diminuant la
fréquence de ces maladies
Peu d’effet sur l’espérance maximale de vie
 Maladies liées à l’âge
À 70 ans un sujet a 100 fois plus de risque de faire un cancer qu’à 20 ans

incidence des cancers

 Dégénérescence
maculaire

• Dégénérescence du centre visuelle de la rétine:

la macula
• Altération du champ de la vision centrale
• D’abord gène à la lecture Æ grave déficience
• 25% des personnes au delà de 80 ans
• Teneur en lutéine, zéaxanthine diminuées avec
âge et tabac
 Lutéine et MLA

Apport moyen en France

1,25 mg/J

Aliments riches luteine:

choux , broccoli, épinards
Aliments riches en zéaxanthine:
maïs , oranges, épinards

Extraites de la rose d’Inde (tagetes erecta)

 Carcinogénes générant des
radicaux libres
• HAP • CCl4
• Ultraviolets A • Tabac
• Rayons gamma • Alcool
• Cr6+, Fe2+,
• Amiante
• Particules de diesel
• nitrosamine
 Etude SUVIMAX

Etude de l ’effet d ’un apport nutritionnel d ’antioxydant

en prévention des maladies du vieillissement: cancer,
maladies cardiovasculaires, cataracte….
15000 volontaires de 40 à 60 ans
Randomisée placebo ou supplément
1994
2002
 SUVIMAX: Kaplan-Meier curves for the
cumulative incidence of total cancer in the
intervention and the placebo group
0,06

Placebo
0,05

0,04
men Intervention
Incidence rate

0,03

0,02

Log-Rank test p<0.01

0,01

0
0 365 730 1095 1460 1825 2190 2555 2920
time (days)
 Others
6 (37)
SUVIMAX
13 (82)

Haematological
12 (74)
11 (70)
Cancer incidence in men
3 (19)
Thyroid
6 (37)

6 (37)
More details the 21 of June 2003
Urinary tract
7 (44)

29 (179)
Genital
32 (203)

6 (37)
Skin
9 (57)

6 (37)
Respiratory tract
14 (89)

17 (105)
Digestive tract
23 (146)

1 (6)
Oral cavity
5 (32)

86 (531)
Total
120 (761)

0 20 40 60 80 100 120 140

 potential risk induced by
betacarotene:the Finland study
"Alpha tocopherol Beta carotene Cancer
Prevention Study"
29133 male smokers
incidence of lung cancer
Attention aux excès
5 to 8 years
p=O.O1 by the log rank test
50 mg vitE d’antioxydants 474
20 mg carot
Betacarotene 443
5OmgE+20 mg car
placebo
no beta carotene
2 4 6 years
 Comment enrichir notre
alimentation
Plus de légumes:
choux, broccoli: vitamine C, quercétine
carottes, tomates: caroténe, lycopéne
Plus de fruits: vitamine C, caroténoides, antocyanes, cuivre
Céréales complétes, Germe de blé: apigénine, sélénoium
Moins de viandes rouges Fer
Des huiles végétales (raisin, noix, colza): vitamine E
Du poisson: sélénium, zinc
De l’ail et de l’oignon: diallyle sulfide, allicine, quercétine
Des épices: curcumine, ac salvianolique…
Thé: aflavine Raisin et vin rouges : resvératrol
 conclusions
• Les radicaux libres jouent un rôle physiologique
important, reconnu maintenant par les grandes
équipes de recherche
• Le vieillissement favorise le stress oxydant
• Un stress oxydant est démontré exister dans de
nombreuses maladies humaines
• On ne peut pas espérer prolonger l’espérance de vie
maximale de façon considérable
• On peu espérer mieux vieillir et faire régresser la
fréquence de certaines de ces maladies par un apport
supplémentaire d’antioxydants
• Ces conclusions rejoignent les recommandations des
nutritionnistes et du PPNAS