BIOLABO

www.biolabo.fr BILIRUBINE DIRECTE

FABRICANT :
BIOLABO SAS, Méthode DCA
Les Hautes Rives
02160, Maizy, France Réactif pour le dosage quantitatif de la bilirubine directe
dans le plasma ou le sérum humains

REF 97553 R1 2 x 200 mL Bilirubine directe

R2 1 x 100 mL Solution Nitrite
CODE CNQ : BX

|
SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES
Tel : (33) 03 23 25 15 50
IVD USAGE IN VITRO
Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1) PREPARATION DES REACTIFS

Le réactif R1 est prêt à l’emploi.
Au moins quatre sortes de bilirubines coexistent dans le sérum : la
bilirubine directe (BD) correspond à la bilirubine dite mono et Préparation du réactif de travail : Mélanger 4 volumes de R1 avec
di-conjuguée (β et γ Bilirubine) ainsi qu’à la fraction δ qui est liée très 1 volume de R2.
fortement à l’albumine ; la bilirubine α, non conjuguée ou bilirubine
indirecte, qui est transportée par l’albumine. La bilirubine totale (BT)
STABILITE ET CONSERVATION
est la somme de ces différentes formes.
On distingue les ictères où prédomine la bilirubine indirecte (ictères Stocker à l’abri de la lumière, dans le flacon d’origine bien
hémolytiques, maladie de Biermer, Thalassémie...etc) des ictères où bouché à 2-8° C.
prédomine la bilirubine directe (obstruction des voies biliaires extra ou • En l’absence de contamination, les réactifs sont stables jusqu'à la
intra-hépatiques, hépatites virales...etc.). Enfin, les ictères où les deux date de péremption indiquée sur l’étiquette du coffret, s’ils sont
formes de bilirubine sont présentes sans prédominance (cirrhoses, utilisés et conservés dans les conditions préconisées.
maladie de Dubin-Johnson). • Après reconstitution, le réactif de travail est stable en l’absence de
contamination 5 jours à 18-25° C et 3 semaines à 2-8° C.
● Ne pas utiliser les réactifs s’ils sont troubles ou le réactif de travail si
PRINCIPE (4) (5) l’absorbance est > 0.100 à 550 nm.
Méthode basée sur le principe de Rand et Di Pasqua automatisée par ● Ne pas utiliser le réactif de travail après la date de péremption
Golub et al. indiquée sur l’étiquette du coffret.
La réaction entre la BD et la dichloroaniline diazotée conduit à la
formation d’un composé, l’azobilirubine dont l’absorbance, directement PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2) (6)
proportionnelle à la concentration en BD dans le spécimen, est
Sérum ou plasma (non hémolysés).
mesurée à 550 nm (540-560).
La bilirubine est photolabile. Stocker le spécimen à l’abri de la lumière.
• Stabilité dans le spécimen : 4 à 7 jours à 2-8° C.
REACTIFS 2 jours à température ambiante.
Spécimens pédiatriques ou ictériques : voir § MODE OPERATOIRE.
flacon R1 BILIRUBINE DIRECTE
NaCl 7,2 g/L INTERFERENCES (3) (4)
Acide sulfanilique 72 mmol/L La réaction de formation de la diazobilirubine est sensible aux
EDTA 756 µmol/L variations de température et doit être menée à température constante.
Acide ascorbique : Aucune interférence jusqu’à 250 mg/L.
Glucose : Aucune interférence jusqu’à 12 g/L.
flacon R2 SOLUTION NITRITE Triglycérides : Pas d’interférence significative jusqu’à 3,9 mmol/L.
Hémoglobine : Pas d’interférence significative jusqu’à 250 µmol/L.
2-4 Dichloroaniline 125 µmol/L
Au-delà, l’hémolyse entraine une sous évaluation des résultats.
Nitrite de Sodium 125 µmol/L Young D.S. a publié une liste des substances interférant avec le dosage.

PRECAUTIONS REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES

Les réactifs BIOLABO sont destinés à du personnel qualifié, pour un
usage in vitro.
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation.
• Utiliser des équipements de protection (blouse, gants, lunettes).
• Ne pas pipeter avec la bouche.
• En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment à
l’eau et consulter un médecin.
• La fiche de données de sécurité peut être obtenue sur simple
demande.
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
1. Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales.
2. Sérums de contrôle normaux et pathologiques
CALIBRATION (7)
• Utiliser le facteur expérimental indiqué au § CALCUL (Procédure n
°1 et n °2).
• Ou BIOLABO Multicalibrator REF 95015 (Procédure n°1
uniquement) traçable sur SRM 916a
• Ou tout calibrant raccordé sur une méthode ou un matériau de
référence (Procédure n °1 uniquement).
La fréquence de calibration dépend des performances de l’analyseur
et des conditions de conservation du réactif.
Il est recommandé de calibrer à nouveau dans les cas suivants :
1. Changement du lot de réactif.
2. Après opérations de maintenance sur l’analyseur.
3. Si les valeurs de contrôle obtenues sortent des limites de confiance,
même après utilisation d’un deuxième flacon de sérum de contrôle
fraîchement reconstitué.

Made in France Dernière version : www.biolabo.fr Version : 28/07/2011

 CONTRÔLE DE QUALITE CODE CNQ : BX MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)
• BIOLABO EXATROL-N Taux I REF 95010. Ramener les réactifs et spécimens à température ambiante.
• BIOLABO EXATROL-P Taux II REF 95011.
• BIOLABO PAEDIATRIC CONTROL REF 95403 Procédure n° 1 :
• Ou tout autre sérum de contrôle titré pour cette méthode et pour le
BILIRUBINE DIRECTE
mode opératoire sélectionné.
Mesurer dans des tubes à essais :
• Programme externe de contrôle de la qualité. Blanc Essai
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants :
• Au moins un contrôle par série. Réactif R1 1 mL
• Au moins un contrôle par 24 heures. Réactif de travail 1 mL
• Changement de flacon de réactif.
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur. Spécimen 100 µL 100 µL
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites,
appliquer les actions suivantes : Mélanger et lire les absorbances à 550 nm (540-560) contre le blanc après
1. Répéter l’opération en utilisant le même contrôle. 1 minute (2 minutes maximum) d’incubation à 37° C.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, préparer un
contrôle fraîchement reconstitué et répéter le test.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre Procédure n° 2 :
calibrant ou un calibrant fraîchement reconstitué et répéter le test.
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer à nouveau Spécimens pédiatriques ou ictériques
en utilisant un autre flacon de réactif et répéter le test. BILIRUBINE DIRECTE
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le service Mesurer dans des tubes à essais :
technique BIOLABO ou le revendeur local. Blanc Essai

Réactif R1 1 mL
INTERVALLES DE REFERENCE (2)
Réactif de travail 1 mL
Bilirubine directe mg/L [µmol/L]
Spécimen 20 µL 20 µL
Adulte (et enfant > 5 jours) <2 [< 3,4] Mélanger et lire les absorbances à 550 nm (540-560) contre le blanc après
1 minute (2 minutes maximum) d’incubation à 37° C.
Il est recommandé à chaque laboratoire de définir ses propres valeurs
de référence pour la population concernée. Remarques :
1. Après 2 minutes, la bilirubine indirecte réagit lentement avec la
dichloroaniline diazotée et donne des valeurs surestimées.
LIMITE DE LINEARITE 2. Faire un blanc réactif pour tenir compte de la coloration éventuelle
Procédure n°1 : jusqu’à 200 mg/L (342 µmol/L). du réactif de travail.
Au-delà, ne pas diluer le spécimen : appliquer le mode 3. Des procédures spécifiques sont disponibles pour les analyseurs
automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.
opératoire n° 2.
Procédure n° 2 : jusqu’à 1000 mg/L (1710 µmol/L)
CALCUL
Spécimen pédiatrique : appliquer le mode opératoire n° 2 Le résultat est déterminé d’après la formule suivante :

Avec calibrant (Procédure n° 1 uniquement) :

PERFORMANCES (PROCEDURE N° 1)
Abs (Essai - Blanc) spécimen
Résultat = x concentration du calibrant
Abs (Essai - Blanc) calibrant
Intra-série Taux moyen Taux élevé Inter-série Taux moyen Taux élevé
N = 20 N = 20
Avec facteur :
Moyenne mg/L 11,3 25,4 Moyenne mg/L 7,4 17,5
Procédure n° 1 : mg/L = [Abs. Essai – Abs. Blanc] x 148*
S.D. mg/L : 0,19 0,29 S.D.mg/L : 0,17 0,32
µmol/L = [Abs. Essai – Abs. Blanc] x 253*
C.V. % : 1,68 1,15 C.V. % : 2,3 1,84
Procédure n° 2 : mg/L = [Abs. Essai – Abs. Blanc]] x 686*
Limite de détection : environ 1,0 mg/L µmol /L =[[Abs. Essai – Abs. Blanc]] x 1173*
Sensibilité pour 10 mg/L : 70 mAbs à 550 nm
* Ces facteurs sont donnés à titre indicatif et peuvent varier
Comparaison avec réactif du commerce : légèrement suivant l'appareillage utilisé et le lot de réactif. Il est
y = 1,0084 x – 0,527 r = 0,9926 conseillé de les vérifier à l'aide d'un sérum de contrôle à taux élevé
(Procédure n° 1 : utiliser BIOLABO EXATROL-P, Procédure n° 2 :
utiliser BIOLABO PAEDIATRIC CONTROL).

REFERENCES
(1) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 1133-1137.
(2) Clinical Guide to Laboratory Test, 4th Ed., N.W. TIETZ (2006) p. 172-177
th
(3) YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4 Ed. (1995)
p.3-90 à 3-110
(4) RAND R. N. and DI PASQUA A. A new diazo method for determination of
bilirubin. Clin. Chem. (1962) 8, n°6, p. 570-578
(5) GOLUB M. : An automated method for determination of serum bilirubin.
Clin. Chem. (1964) 10, p. 399-405
(6) Henry RJ, Clin Chem : Principles and technics. Harper and Row,
p.592(1965)
(7) SRM: Standard Reference Material ®

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