Introduction

I/ Introduction
La rectocolite hémorragique est une maladie inflammatoire chronique affectant le côlon et son
incidence augmente dans le monde entier. La pathogenèse est multifactorielle et implique une
prédisposition génétique, des anomalies de la barrière épithéliale, des réponses immunitaires
dysrégulées et des facteurs environnementaux. Les patients atteints de colite ulcéreuse
présentent une inflammation de la muqueuse commençant au rectum, qui peut s'étendre de
manière continue aux segments proximaux du côlon. La colite ulcéreuse se présente
habituellement avec une diarrhée sanglante et est diagnostiquée par coloscopie et par
découverte histologique. Le but de la prise en charge est d’induire puis de maintenir la
rémission, définie comme la résolution des symptômes et la guérison endoscopique. Les
traitements pour la colite ulcéreuse comprennent les médicaments à base d'acide 5-
aminosalicylique, les stéroïdes et les immunosuppresseurs. Certains patients peuvent
nécessiter une colectomie pour une maladie médicalement réfractaire ou pour traiter un
néoplasie du côlon. L'arsenal thérapeutique de la colite ulcéreuse est en expansion et le
nombre de médicaments dotés de nouvelles cibles augmentera rapidement dans les années à
venir.

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 Bibliographie

II/ Bibliographie
La rectocolite hémorragique (RCH) est une maladie idiopathique à médiation immunitaire
caractérisée par des périodes de rémission entremêlées avec des exacerbations de la maladie et
des poussées. Celles-ci entraînent des complications entraînant une dégradation de la qualité
de vie et des coûts importants en soins de santé, en raison des hospitalisations, des
interventions chirurgicales et de l'escalade du traitement. L’objectif principal de la thérapie
en matière de la RCH est d’obtenir et de maintenir la rémission de la maladie, avec une
meilleure qualité de vie liée à la santé, moins d’hospitalisation et moins de chirurgie. Le
concept de rémission a changé au cours des dernières années avec un nouveau concept de
rémission profonde. Cela implique non seulement une rémission clinique prolongée, mais
également une cicatrisation complète de la muqueuse. La guérison de la muqueuse dans la
RCH, évaluée systématiquement par endoscopie, est devenue un objectif thérapeutique
majeur du fait que l’inflammation se limite à la couche muqueuse. La cicatrisation muqueuse
n’est pas toujours un indicateur précis de la cicatrisation histologique, car les signes
microscopiques de l’inflammation sont fréquents même chez les patients atteints de colite au
repos clinique et sigmoïdoscopique [4]. Des caractéristiques d'activité microscopiques
peuvent persister dans une maladie inactive macroscopiquement, ce qui suggère que
l'endoscopie pourrait sous-estimer l'étendue de la maladie.

La rectocolite hémorragique (RCH), l’une des deux principales formes de maladie

inflammatoire de l'intestin (MICI), est une maladie inflammatoire du côlon liée à une
inflammation récurrente et à la formation d’ulcères. Il s'agit d'une maladie inflammatoire
chronique et récurrente caractérisée par une réponse immunitaire dérégulée, un déséquilibre
des cytokines et une inflammation non résolue associée à la muqueuse intestinale. La RCH est
un problème de santé publique important qui peut conduire à une péritonite et augmenter le
risque de cancer colorectal. Des études épidémiologiques ont montré que l’incidence et la
prévalence de la RCH sont en augmentation dans le monde entier et tendent à toucher les
jeunes, ce qui indique qu’il s’agit d’une maladie mondiale. En attendant, le mécanisme
pathogène de la RCH est à peine compris, ce qui est la raison principale du choix limité de la
thérapeutique actuelle.

La rectocolite hémorragique (RCH) est une maladie inflammatoire chronique affectant le

côlon et son incidence augmente dans le monde entier. La pathogenèse est multifactorielle et
implique une prédisposition génétique, des anomalies de la barrière épithéliale, des réponses

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 Bibliographie

immunitaires dysrégulées et des facteurs environnementaux. Les patients atteints de colite

ulcéreuse présentent une inflammation de la muqueuse commençant au rectum, qui peut
s'étendre de manière continue aux segments proximaux du côlon. La rectocolite hémorragique
se présente habituellement avec une diarrhée sanglante et est diagnostiquée par coloscopie et
par découverte histologique. Le but de la prise en charge est d’induire puis de maintenir la
rémission, définie comme la résolution des symptômes et la guérison endoscopique. Les
traitements pour la colite ulcéreuse comprennent les médicaments à base d'acide 5-
aminosalicylique, les stéroïdes et les immunosuppresseurs. Certains patients peuvent
nécessiter une colectomie pour une maladie médicalement réfractaire ou pour traiter une
néoplasie du côlon. L'arsenal thérapeutique de la colite ulcéreuse est en expansion et le
nombre de médicaments dotés de nouvelles cibles augmentera rapidement dans les années à
venir.

La RCH est une maladie idiopathique chronique qui touche le côlon et affecte le plus souvent
les adultes âgés de 30 à 40 ans. Elle se caractérise par une inflammation récurrente et
rémittente de la muqueuse, débutant dans le rectum et s'étendant jusqu'aux segments
proximaux du côlon. Le but de la thérapie est d’induire et de maintenir une rémission clinique
et endoscopique.

Figure 1: Aperçu du système immunitaire intestinal à l’état sain et de la rectocolite

hémorragique en mettant l’accent sur des cibles thérapeutiques éprouvées et prometteuses.

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 Bibliographie

Dans l’état sain, la barrière est maintenue par la couche de mucus et les cellules épithéliales
liées aux jonctions serrées. De plus, des facteurs IgA et antimicrobiens tels que RegIIIγ
séquestrent la microflore liminale loin du système immunitaire muqueux. Les cellules
présentant l'antigène spécialisées, telles que les cellules dendritiques, traitent et présentent
l'antigène aux cellules T et B dans les ganglions lymphatiques drainants, par défaut à un
phénotype tolérant. Les CD intestinales impriment également les lymphocytes T et B afin
d'exprimer les molécules α4β7 et CCR9 à visée intestinale. Les lymphocytes ainsi imprimés
dans le tractus gastro-intestinal pénètrent dans la circulation systémique et atteignent les
veinules endothéliales intestinales élevées, les lymphocytes exprimant α4β7 et intestinaux
engagent des MAdCAM exprimés localement et sortent de la circulation pour pénétrer dans la
lamina propria intestinale. L'activité coordonnée des cellules immunitaires innées et
adaptatives maintient l'homéostasie dans la muqueuse intestinale à l'état d'équilibre. La colite
ulcéreuse est associée à des lésions de la barrière muqueuse (encart), permettant à la
microflore luminale de déclencher une réponse inflammatoire soutenue et non inhibée. Parmi
les cellules inflammatoires, les cellules TH9 perpétuent l'apoptose des entérocytes et inhibent
la cicatrisation de la muqueuse. L'IL-13, produite par les cellules T NK, contribue également
à la lésion épithéliale. De plus, les cellules lymphoïdes innées (incrustées), homéostatiques à
l'état d'équilibre, contribuent à la production de cytokines, perpétuant l'inflammation. Les
lésions et dommages de la muqueuse sont associés à la dysbiose, qui contribue peut-être à la
cascade inflammatoire. Une compréhension croissante du système immunitaire muqueux a
conduit à l’élargissement du nombre de cibles thérapeutiques. Parmi ceux-ci, les antagonistes
du TNF-α et les inhibiteurs de l'autoguidage sont actuellement en pratique clinique (texte en
vert), tandis que les autres sont à un stade précoce ou avancé du développement clinique
(texte en violet). Illustration de Jill Gregory. Imprimé avec la permission de © Mount Sinai
Health System. IgA = immunoglobuline A. DC = cellule dendritique. MAdCAM = molécule
associée à une cellule adressante muqueuse. IL = interleukine. Th = cellule T auxiliaire.
TREG = cellule T régulatrice. IFN = interféron, Mφ = macrophage. TGF = facteur de
croissance transformant. ER = réticulum endoplasmique. CMH = complexe majeur
d'histocompatibilité. Cellule T NK = Cellule T tueuse naturelle. MLN = ganglion
mésentérique.

Les aminosalicylates sont le traitement de choix pour le traitement de la colite ulcéreuse

légère à modérée. Les stéroïdes topiques et systémiques peuvent être utilisés pour traiter les
poussées de rectocolite hémorragique, tandis que les immunosuppresseurs et les médicaments

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 Bibliographie

biologiques sont utilisés dans les cas de maladie modérée à sévère. Une colectomie est
nécessaire chez jusqu'à 15% des patients atteints de colite ulcéreuse. Les coûts annuels directs
et indirects liés à la rectocolite hémorragique sont estimés à 12,5-29 milliards d’euros en
Europe et à 8,1-14 milliards de dollars aux ETATS-UNIS.

Aucune prédominance sexuelle n’existe dans la rectocolite hémorragique.L’âge maximal de

début de la maladie est compris entre 30 et 40 ans. L'incidence et la prévalence de la
rectocolite hémorragique ont augmenté avec le temps dans le monde entier. Les cas les plus
élevés de rectocolite hémorragique ont été signalés dans le nord de l’Europe (24,3 sur 100
000), au Canada (19,2 sur 100 000) et en Australie (17,4 sur 100 000) .6,10,11 Les taux de
prévalence sont le plus élevé d'Europe (505 sur 100 000), le Canada (248 sur 100 000) et les
États-Unis (214 sur 100 000) .7,10,12,13 En Europe, il semble y avoir des différences
d'incidence de la rectocolite hémorragique avec les pays situés dans les régions occidentale et
septentrionale ayant des incidences plus élevées que les pays orientaux. Le risque de
développer une rectocolite hémorragique chez les enfants de migrants de pays à faible
incidence vers des pays à forte incidence est similaire à celui des non-immigrants. Moins de
données sont disponibles des pays en développement; Cependant, la reconnaissance de la
rectocolite hémorragique est en augmentation en Asie, au Moyen-Orient et en Amérique du
Sud.

Figure 2 : Augmentation de l'incidence de la colite ulcéreuse dans le monde au fil du temps

* Augmentation statistiquement significative de l'incidence dans le temps (p <0,05).

Reproduit et adapté avec l'autorisation de Molodecky et ses collègues.

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 Bibliographie

Facteurs de risque

De 8 à 14% des patients atteints de rectocolite hémorragique ont des antécédents familiaux de
maladie inflammatoire de l'intestin et les parents au premier degré courent un risque quatre
fois plus élevé de développer la maladie. Les populations juives présentent des taux de
rectocolite hémorragique plus élevés que les autres groupes ethniques. Des études
d'association pangénomiques ont identifié 200 loci à risque de maladie inflammatoire de
l'intestin, la plupart des gènes contribuant à la fois à rectocolite hémorragique et au phénotype
de la maladie de Crohn. Des exemples de loci associés à une susceptibilité accrue à la
rectocolite hémorragique comprennent l'antigène des leucocytes humains et les gènes associés
à la fonction barrière, tels que HNF4A et CDH1. Cependant, la génétique n'explique que 7,5%
de la variance de la maladie, a une faible capacité prédictive de phénotype et son utilisation
clinique est actuellement limitée27,28. L'incidence croissante de la rectocolite hémorragique
dans le monde suggère l'importance des facteurs environnementaux dans son développement.
L’ancien tabagisme est l’un des facteurs de risque les plus importants associés à la rectocolite
hémorragique, alors que les fumeurs actifs sont moins susceptibles de développer une
rectocolite hémorragique que les anciens et les non-fumeurs et que l'évolution de la maladie
est moins grave. L’appendicectomie semble conférer un effet protecteur contre la rectocolite
hémorragique, en particulier lorsqu’il s’agit d’une appendicite aiguë chez de jeunes patients.
Les patients nouvellement diagnostiqués avec une rectocolite hémorragique sont plus
susceptibles que les témoins appariés d'avoir des antécédents de gastro-entérite. Les
médicaments, tels que les contraceptifs oraux, l’hormonothérapie substitutive et les anti-
inflammatoires non stéroïdiens, ont tous été associés à un risque accru de colite, tandis que
l'exposition aux antibiotiques n'a pas. L'allaitement maternel semble réduire le risque de
rectocolite hémorragique, tandis que la vie en ville peut augmenter le risque. Certains facteurs
de risque de rectocolite hémorragique importants dans les pays développés pourraient ne pas
avoir le même effet chez les populations en développement d'Asie ou du Moyen-Orient. Par
exemple, le tabagisme n'a peut-être pas un effet aussi marqué, l'appendicectomie ne semble
pas diminuer le risque et il a été démontré que les antibiotiques étaient protecteurs en
comparant les pays développés aux pays en développement d'Asie ou du Moyen-Orient. Les
données regroupées de 11 études prospectives européennes n'ont pas mis en évidence
d'association entre le stress et l'apparition récente d'une colite ulcéreuse.

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 Bibliographie

Guérison Mucosale

En 2007, l'Organisation internationale pour l'étude de la maladie intestinale inflammatoire a

défini l'Homme comme étant l'absence de friabilité, d'érosions sanguines et d'ulcères dans
tous les segments visualisés de la muqueuse intestinale, excluant l'HH de cette définition.
Dans des essais cliniques plus récents évaluant l'efficacité de produits biologiques dans la
RCH, la MH a été définie en obtenant un sous-score endoscopique de Mayo de 0 ou 1,
excluant l'HH. Récemment, une étude de cohorte longitudinale prospective (187 patients) a
montré que les patients avec un score de Mayo endoscopique de 1 avaient un risque de
rechute plus élevé que ceux avec un score de 0, ce qui suggère que le concept de MH devrait
être limité aux patients un score endoscopique de Mayo de 0.

La berbérine est l'une des substances naturelles les plus puissantes qui existent. Le plus
souvent prise sous forme de complément alimentaire, elle est traditionnellement conseillée
pour réduire les niveaux de sucre dans le sang et pour perdre du poids.
Mais la berbérine possède également de nombreux autres avantages pour votre santé, en
agissant notamment sur le système cardiovasculaire et la flore intestinale.
Mais qu'est-ce que la berbérine et d'où vient-elle ?
Alcaloïde produit par certains végétaux, la berbérine est une substance organique naturelle,
jaune et au goût amer, au même titre que la caféine ou la théine.
Elle se retrouve en grande quantité dans certaines espèces végétales dont l'hydraste du canada,
le cotis du Japon ou encore l'épine-vinette ,d'où son nom Berberis vulgaris.

Figure 3 : Structure de la berbérine

Les racines de Coptis chinensis Franch a été utilisé en médecine traditionnelle chinoise pour
éliminer la chaleur et protéger l'humidité des traitements contre la diarrhée, la dysenterie et la

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 Bibliographie

jaunisse. Le médicament à base de plantes possède des effets antibactériens et

antiprotozoaires à large spectre. Le principal ingrédient actif de la plante, la berbérine, est un
alcaloïde dérivé de l’isoquinoléine et a de nombreux effets pharmacologiques, notamment
l’activation du récepteur des hydrocarbures aryliques , une sensibilisation à l’insuline et une
action insulinotrope , l’inhibition de l’arylamine N- activité de l'acétyltransférase , inhibition
de l'expression de HIF-1alpha en tant qu'agent antiangiogénique puissant , effet anxiolytique
en agissant sur les récepteurs 5-HT ,anti-inflammatoire et anticancéreux par inhibition des
récepteurs basal et 12-otetradecanoylphorbol-13 taux de prostaglandine E2 médiée par
l'acétate de potassium et l'expression de la cyclooxygénase-2 , et abaissement du cholestérol
sanguin, et en particulier du LDL-cholestérol.

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 Matériel et méthodes

III/ Matériel et méthodes

Pour les méthodes d'extraction classiques, telles que l'extraction par solvant, il existe peu de
paramètres ajustables pour contrôler la sélectivité des processus d'extraction. Par conséquent,
le développement de techniques d'extraction alternatives avec une meilleure sélectivité et une
meilleure efficacité est hautement souhaitable. En conséquence, l'extraction par fluide
supercritique (SFE) en tant que technique d'extraction respectueuse de l'environnement et
efficace pour les matériaux solides a été introduite et étudiée de manière approfondie pour la
séparation des composés actifs des herbes et autres plantes. Aujourd'hui, le SFE est devenu
une technique d'extraction acceptable utilisée dans de nombreux domaines. Le SFE de
produits naturels actifs à base d'herbes ou plus généralement de matières végétales est devenu
l'un des domaines d'application les plus importants. Les essais cliniques ayant montré que la
berbérine est un ingrédient actif sur le plan pharmacologique, de nombreuses recherches ont
été menées pour mettre au point des méthodes d’extraction plus efficaces et plus sélectives
pour la récupération du composé à partir de plantes médicinales. Actuellement, l'extraction de
la berbérine dans différentes matières premières à l'aide de l'extraction au méthanol sous
pression et de l'eau chaude sous pression de Coptidis rhizoma, ainsi que l'extraction par fluide
supercritique à paires d'ions dans le cortex de phellodendri avec une analyse subséquente par
chromatographie en ligne sur fluide supercritique à paires d’ions.

Le rhizome de C. chinensis Franch a été obtenu auprès du deuxième hôpital de Wuhan

(Wuhan, Chine). L’étalon de chlorhydrate de berbérine a été acheté auprès de l’Institut
national de contrôle des produits pharmaceutiques et biologiques (Beijing, Chine). Le CO2
(qualité alimentaire) provenait de Fangxin Gas Ltd. (Ningbo, Chine). L'acétonitrile de qualité
HPLC a été acheté auprès de Tianjin Shield Company (Tianjin, Chine). L'acide
chlorhydrique, le méthanol, l'éthanol à 95% et le 1,2-propanediol étaient de qualité analytique
et ont été achetés auprès de Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, Chine). La
célite (qualité chimique) provenait de Fengcheng Chemical Ltd. (Shanghai, Chine).

1-Système d'extraction de fluide supercritique

Un extracteur de fluide supercritique Spe-ed SFE-2 (Applied Separation, USA) fonctionnant
avec deux pompes, une pompe maître équipée d’une chemise de refroidissement sur la tête de
pompe et une seconde pompe (pompe Knauer, modèle K-501, Berlin, Allemagne) pour
l’addition de modificateur organique. Le Sped-ed SFE est un extracteur de système de
criblage qui permet une modularité de l'extraction mais nécessite davantage de manipulation

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 Matériel et méthodes

des contrôles. Il est capable de supporter une pression allant jusqu'à 680 bar et une
température allant jusqu'à 240 ° C, une extraction statique et dynamique avec un débit allant
de 0 à 10 L / min (dioxyde de carbone gazeux) et des récipients d'extraction de 5 ml à 1 L.
Une vanne de dosage est utilisée pour varier le débit. La collection est à la température
ambiante et à la pression atmosphérique. Les analytes extraits sont recueillis dans un flacon en
verre (30 ml) avec un bouchon en caoutchouc au sommet. Une rallonge métallique à la vanne
de dosage est utilisée pour percer le bouchon en caoutchouc et permettre la collecte
directement dans le solvant de collecte (méthanol). Une aiguille hypodermique connectée à un
débitmètre perce également le bouchon pour la mensuration du débit. La collecte a eu lieu à la
température ambiante et à la pression atmosphérique.

2-Conditions de HPLC
Un système de chromatographie en phase liquide à haute performance (Knauer, Berlin,
Allemagne) équipé d'une pompe Knauer (modèle K-501) et d'un détecteur ultraviolet et
visible (Knauer, modèle K2501) a été utilisé. La colonne utilisée pour la séparation était une
colonne de séparation Diamonsil C18 (5 m, 250 × 4,6 mm i.d., Dikma Technologies, Beijing,
Chine). La phase mobile était constituée de 33 mM de dihydrogénophosphate de potassium
acétonitrile (70: 30, v / v) à un débit de 1 ml / min. La détection était à une longueur d'onde de
345 nm. Pour toutes les expériences, 20 L d'étalons et d'extrait d'échantillon ont été injectés.

3-Préparation des standards de référence

Une série d'étalons d'hydrochlorure de berbérine allant de 1,7 à 68 g / mL ont été préparés
dans du méthanol. La quantification a été effectuée en utilisant un étalonnage standard
externe. Une réponse linéaire avec un coefficient de corrélation de 0,999 (n = 6) a été obtenue
pour les standards. Après, tout le contenu a été calculé sous forme de chlorhydrate de
berbérine.

4-Préparation d'extraits de plantes médicinales

Le rhizome de C. chinensis Franch a été moulu en poudre à l'aide d'un pulvérisateur d'herbes
(FW 100, Tianjin Taisite Instrument Co. Ltd., Tianjia, Chine) et tamisé à l'aide d'un filtre de
250 µm. Pour l'extraction à l'aide de SFE, une quantité connue d'échantillon broyé (1 g) a été
placée dans un récipient d'extraction de 10 ml (60 x 15 mm, i.d.) et le volume vide a été
rempli de célite. Avant que l'extraction ne commence, le récipient d'extraction a été
préchauffé dans le four pendant 10 min. Les conditions d’extraction étaient les suivantes:
temps d’extraction, extraction statique pendant 5 min, puis extraction dynamique jusqu’à 3 h;

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 Matériel et méthodes

température, 60 ° C; pression de 200 à 500 bars; débit de dioxyde de carbone (état gazeux), 1
L / min; débit de modificateur, 0,4 ml / min. L'extrait a été recueilli dans un flacon en verre
contenant 5 ml de méthanol, puis transféré quantitativement dans une fiole jaugée de 25 ml et
ajusté jusqu'au trait avec du méthanol. Cette solution a ensuite été diluée convenablement
avant l'analyse.
Pour l'extraction Soxhlet, une quantité connue d'échantillon broyé (1,0 g) a été pesée avec
précision dans un dé à coudre et a été extraite dans un extracteur à 50 ml avec 50 ml d'acide
chlorhydrique: méthanol (1: 100) à une vitesse de siphon de 1 cycle / 5 min.

La berbérine et le co-extrait ont donné une couleur jaune au solvant d'extraction. La couleur
jaunâtre est devenue de plus en plus claire au fil de l'extraction. Après extraction avec le
solvant pendant 8 h, le solvant d'extraction était essentiellement incolore et les extraits ont été
transférés dans une fiole jaugée de 50 ml et complétés jusqu'au repère avec du méthanol.
Cette solution a ensuite été diluée convenablement avant l'analyse. La récupération de la
berbérine dans les matières végétales peut être améliorée par l’ajout d’un peu d’acide
chlorhydrique dans du méthanol et cette méthode a été adoptée par la littérature [15].
Tous les extraits ont été filtrés à travers un filtre à membrane de 0,45 mm avant d'être injectés
dans le système HPLC.

5- Animaux et groupement
Un total de 60 rats wistar mâles en santé (200 à 230 g) ont été achetés au centre des animaux
de laboratoire de l'université de yangzhou. Les animaux ont été divisés au hasard en six
groupes de dix animaux chacun, dont le modèle (le sulfate de dextran sodique; DSS), le
groupe chlorhydrate de berbérine à faible dose (10 mg / kg), le groupe chlorhydrate de
berbérine à dose interne (30 mg / kg), groupe recevant de fortes doses de chlorhydrate de
berbérine (50 mg / kg), le groupe sulfasalazine et le groupe témoin. La colite ulcéreuse a été
induite chez le rat par l'administration de 5% de DSS dans de l'eau de boisson pendant 7 jours,
à l'exception du groupe témoin n'ayant accès qu'à de l'eau distillée. De deux semaines à huit
semaines, les rats du groupe expérimental étaient gastriques avec des médicaments par jour.
Le poids corporel a été mesuré au même moment les jours expérimentaux. Les huit semaines,
les rats ont été sacrifiés par dislocation cervicale, puis les spécimens du côlon ont été
recueillis. Le chlorhydrate de berbérine a été obtenu auprès de Sigma-Aldrich (Merck
Millipore, Darmstadt, Allemagne).

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 Matériel et méthodes

6-Morphologie et évaluation histologique

Les tissus du colon fortement endommagés ont été prélevés et fixés dans du formol neutre à
10%. Ensuite, ils ont été inclus dans de la paraffine et colorés à l'hématoxyline et à l'éosine
(HE). Les critères utilisés pour évaluer la colite en utilisant un système de score histologique
standard [16]. En bref, 0 = pas de dégâts; 1 = congestion de la muqueuse; 2 = zone
d'ulcération <25% de la zone endommagée; 3 = zone d'ulcération égale à 25–50% de la zone
endommagée; 4 = zone d'ulcération> 50% de la zone endommagée.

7- Évaluation de la sévérité de la CU en fonction du score de l'indice d'activité

de la maladie (DAI)
Le score DAI a été largement utilisé pour évaluer la sévérité de la CU dans des modèles
animaux. En résumé, un enquêteur s’est conformé au protocole et a noté et noté les
changements de poids, de positivité de l’hémocytose ou de saignement abondant, et la
consistance des selles conformément au rapport précédent. Le score DAI était une
combinaison des scores de tous ces paramètres mentionnés.

8- RT-PCR quantitative en temps réel (RT-qPCR)

L’ARN total dans les tissus du côlon a été extrait à l’aide de Trizol (Invitrogen,USA) et
l’ARN a été soumis à une transcription inverse en ADNc en utilisant des kits de transcription
inverse de l’ARN. Les niveaux d'expression de l'ARNm ont été examinés sur un instrument
Bio-Rad Q5 (Bio-Rad, Californie, USA) en utilisant un mélange maître de PCR en temps réel
SYBR Premix EX Taq (TaKaRa). La méthode 2-ΔΔCt a été utilisée pour normaliser la
transcription du gène cible en fonction de l'expression de la β-actine (contrôle interne) afin de
calculer l'induction par repli de l'ARNm cible.

9- Test immuno-absorbant lié à une enzyme (ELISA)

Après avoir été traités avec du chlorhydrate de berbérine, des échantillons de sang total ont
été prélevés sur le sang après la reperfusion. Immédiatement, les échantillons de sang ont été
centrifugés à 12 000 g pendant 10 min à 4 ° C, puis le surnageant a été recueilli pour une
mesure à -20 ° C. Les niveaux de IL-1, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-12, TNF-a, TGF-β et IFN-γ ont
été mesurés à l'aide du kit Quantikine ELISA. L'absorbance a été mesurée à 450 nm.

10- Western blot

Les cellules ont été lysées avec du tampon de lyse RIPA et les protéines ont été récoltées. Les
extraits de protéines cellulaires totales ont été séparés par électrophorèse sur gel de

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 Matériel et méthodes

Polyacrylamide SDS à 10%, puis transférés sur une membrane de nitrocellulose bloquée avec
5% de lait écrémé. Ensuite, les transferts ont été incubés avec des anticorps primaires à 4 ° C
pendant une nuit.

Après trois lavages avec du TBST, les membranes ont été incubées avec un anticorps
secondaire anti-lapin de chèvre conjugué à de la peroxydase de raifort, dilué avec 5% de BSA
à température ambiante pendant 1 h. Les immunoblots ont été visualisés à l'aide du système
de détection ECL et les taux de protéines ont été quantifiés à l'aide du logiciel ImageJ.

11- Immunohistochimie
Des coupes de tissus du colon congelées ont été fixées sur des lames de verre par incubation
dans du méthanal pendant 10 min à 4 ° C. Une irradiation par micro-ondes a été effectuée sur
les sections et les lames ont été incubées avec 3% de H2O2 pendant 20 min à température
ambiante. Ceci a été suivi d'une incubation avec des anticorps primaires à la température
ambiante pendant 2 h. Ensuite, les sections ont été lavées avec du PBS et incubées avec des
anticorps secondaires à la température ambiante pendant 1 h. Après cela, les réactifs DAB ont
été utilisés pour la réaction chromogénique. La contre-coloration a été réalisée avec de
l'hématoxyline. Toutes les images représentaient au moins trois expériences distinctes.

12- Cytométrie en flux

Les PED isolés à partir de tissus entiers du colon et mesurés par cytométrie en flux. Ensuite,
les CD ont été triées positivement par classe majeure d’histocompatibilité II (MHCII) et
CD11c. Nous avons utilisé des analyses FACS et gated sur les cellules hautes CD11c et
MHCII vivants. Des cellules MHCII haut / CD11c haut double positif ont été utilisées pour
déterminer les pourcentages de CD.

13- analyses statistiques

Les résultats ont été analysés avec le logiciel SPSS 17.0 et exprimés sous forme de dérivation
moyenne ± standard pour au moins trois expériences distinctes. Une analyse de variance à un
facteur (ANOVA) a été utilisée pour déterminer les différences statistiquement significatives.
* P <0,05, ** P <0,01. P <0,05 était considéré comme une différence significative.

13
 Résultats et discussion

IV/ Résultats et discussion

1-Partie d’extraction
Cinq systèmes de modificateurs de solvants organiques, à savoir dioxyde de carbone
supercritique modifié par l’éthanol, dioxyde de carbone supercritique modifié au méthanol,
dioxyde de carbone supercritique modifié au 1,2-propanediol, 5% Tween 80 dans du dioxyde
de carbone supercritique modifié au méthanol, 5% Tween dans de l’éthanol- Le dioxyde de
carbone supercritique modifié a été utilisé pour extraire la berbérine du rhizome en poudre de
C. chinensis Franch afin d'évaluer la faisabilité de la SFE et l'effet du méthanol et de l'éthanol
avec et sans le tensioactif Tween 80 et du 1,2-propanediol utilisés tels que modifiés. sur le
rendement de la berbérine. Les chromatogrammes HPLC de l'extrait utilisant du dioxyde de
carbone supercritique modifié au 1,2-propanediol et du dioxyde de carbone supercritique
modifié à l'éthanol sont représentés sur les figures 4a et b, respectivement. Il est possible
d'identifier le pic de berbérine, qui apparaît à un temps de rétention d'environ 13,7 min.
(Remarque: tous les autres extraits présentent des chromatogrammes similaires à ceux de la
figure 4a). On voit sur les figures 4a et b que l'extrait obtenu avec du dioxyde de carbone
supercritique modifié à l'éthanol présente moins de pics que celui obtenu avec du dioxyde de
carbone supercritique modifié au 1,2-propanediol.
La berbérine est un composé polaire et il est inefficace d'extraire l'ingrédient à l'aide de CO2
supercritique uniquement. En conséquence, un modificateur polaire doit être envisagé. En
général, l'ajout d'une petite quantité d'un modificateur liquide peut améliorer
considérablement l'efficacité de l'extraction et, par conséquent, réduire le temps d'extraction
[9]. Le procédé peut également être utilisé pour améliorer le rendement en alcanoïdes, tels que
les alcanoïdes indoliques [16] et la sinoménine. [17] à partir de matières végétales. La figure 5
montre l'effet de la pression d'extraction sur le rendement en berbérine à 60 ° C en utilisant (a)
du dioxyde de carbone supercritique modifié au méthanol; (b) dioxyde de carbone
supercritique modifié à l'éthanol à 95%; et (c) du dioxyde de carbone supercritique modifié
par le 1,2-propanediol. On peut constater qu’au bout de 3 h, le rendement augmente
légèrement lorsque la pression passe de 5,53% (poids / poids, 200 bars) à 6,02% (poids /
poids, 500 bars) avec du dioxyde de carbone supercritique modifié au méthanol, 6,91% (poids
/ poids, 200 bars) à 7,53% (poids / poids, 500 bars) avec du dioxyde de carbone supercritique
modifié au 1,2-propanediol, et 0,15% (poids / poids, 300 bars) à 0,19% (poids / poids, 600
bar) avec du dioxyde de carbone supercritique modifié à l'éthanol à 95%. Cela signifie que le
rendement en berbérine peut être modifié en fonction de la variation de pression, mais que

14
 Résultats et discussion

l’influence de la pression dans la plage de 200 à 500 bars sur le rendement est faible lorsque
le méthanol, l’éthanol à 95% ou 1,2-propanedio est utilisé comme modificateur polaire du
CO2 supercritique. L’extraction par surfactant est une méthode attrayante, qui a été utilisé
pour extraire des composés organiques, tels que des dérivés de pyridine [18] et des composés
d'ammonium quaternaire.

Fig4 : Chromatogrammes
liquides à haute performance de
berbérine utilisant (a) du dioxyde
de carbone supercritique modifié
au propanediol, et (b) modifié à
l’éthanol dioxyde de carbone
supercritique.

Fig5 : Influence de la pression sur

le pourcentage de rendement
cumulatif de la berbérine extraites
par plusieurs types de
modificateurs à 60 ° C. a)
méthanol; (b) 95% d'éthanol; et
(c) le 1,2-propanediol.

15
 Résultats et discussion

MODIFICATEUR CONDITIONS D’EXTRACTION RENDEMENT

MOYEN(%)
ETHANOL 95% Température, 60 ° C; pression, 300 bar, débit, 1 L
/ mn de CO2 et Modificateur 0,4 ml/mn, temps 0.10 ± 0.02
d'extraction dynamique,1,5 h
5% DE TWEEN Température, 60 ° C; pression, 300 bars, débit, 1
DANS 95% L / min CO2 et 0,4 ml / min de modificateur; 1.29 ± 0.19
D'ETHANOL temps d'extraction dynamique, 1,5 h
Température, 60 ° C; pression, 300 bars, débit, 1
METHANOL L / mn de CO2 et 5.34 ± 0.24
Modificateur à 0,4 ml / min; temps d'extraction
dynamique, 1,5 h
5% DE TWEEN Température, 60 ° C; pression, 300 bars, débit, 1
DANS LE L / min CO2 et 0,4 ml / min de modificateur; 3.43 ± 0.35
METHANOL temps d'extraction dynamique, 1,5 h
Température, 60 ° C; pression, 30 bars; débit, 1 L
/ min CO2 et
6.95 ± 0.38
1,2- Modificateur à 0,4 ml / min; temps d'extraction
PROPANEDIOL dynamique, 1,5 h
Extracteur de Soxhlet; solvant d'extraction, acide 7.21 ± 0.34
chlorhydrique: méthanol (1: 100); extraction, 8 h

Tableau 1 : Rendement d'extraction de la berbérine de Coptis chinensis Franch

Il n'est pas clair si la récupération de la berbérine de C. chinensis Franch peut être améliorée
par l'addition de surfactant Tween 80 dans du dioxyde de carbone supercritique modifié au
méthanol ou du dioxyde de carbone supercritique modifié à l'éthanol. La récupération de la
berbérine a donc été déterminée en utilisant du Tween 80 à 5% dans du dioxyde de carbone
supercritique modifié au méthanol et du Tween 80 à 5% dans du dioxyde de carbone
supercritique modifié à l'éthanol à 95% sur des périodes d'extraction allant jusqu'à 3 h et
comparée à celle obtenue avec du méthanol uniquement. Éthanol à 95% ou propanediol-1,2
utilisé comme modificateur sur la figure 4. Aucune expérience d'extraction n'a été réalisée
avec Tween 80 dans du dioxyde de carbone supercritique modifié au 1,2-propanediol en
raison d'une viscosité trop élevée pour le mélange de Tween 80 et de 1,2-propanediol. Il est

16
 Résultats et discussion

évident que l’amélioration de la récupération de la berbérine était marginale lorsque l’addition

de Tween 80 dans de l’éthanol à 95% (0,15% pour de l’éthanol à 95% et 1,63% pour du
Tween à 5% dans de l’éthanol à 95%, tandis que l’ajout du surfactant dans du méthanol avait
un effet négatif sur les récupérations (5,76% pour le méthanol et 3,81% pour le Tween à 5%
dans le méthanol). Le cas est similaire avec l'extraction de composés nitro-aromatiques avec
un tensioactif non ionique comme modificateur, dans laquelle la récupération n'a pas été
significativement améliorée en ajoutant du tensioactif à Fluide modifié au méthanol [13] Un
léger effet synergique se produit lors de l'ajout de 5% de Tween dans du dioxyde de carbone
supercritique modifié à l'éthanol ou modifié au méthanol. La figure 4 montre également que la
récupération la plus élevée a été obtenue avec du 1,2-propanediol en tant que modificateur
polaire. le méthanol utilisé en tant que modificateur polaire était également efficace, tandis
que l'éthanol à 95% utilisé en tant que modificateur polaire était inefficace pour l'extraction de
la berbérine à partir de l'échantillon en poudre. Comme le montre la figure 4, il est possible
d'extraire plus de 90% de la berbérine en 1. 5 h sauf l'extraction avec l'éthanol ou le Tween
plus éthanol comme modificateur (le rendement étant basé sur la récupération obtenue après 3
h). Les résultats de l'extraction de la berbérine à partir du rhizome en poudre de C. chinensis
Franch avec différents modificateurs, ainsi que de l'utilisation d'acide chlorhydrique:
méthanol (1: 100, v / v) dans l'extracteur de Soxhlet sont résumés dans le Tableau 1. Il est
montré que l'extraction avec 1 Le CO2 supercritique modifié par le 2-propanediol à 300 bar
pour une extraction d'une heure et demie donne un rendement inférieur à celui obtenu avec
l'extraction au Soxhlet.

2-Effets du chlorhydrate de berbérine sur les symptômes cliniques de colite

induite par le DSS chez le rat
Les rats du groupe témoin ont présenté une activité, un régime alimentaire, une consistance
des selles normale, ainsi qu'une couleur et un gain de poids normaux. Cependant, les rats ont
montré une diminution notable du poids corporel (Fig. 6A), du taux de survie (Fig. 6B), de la
longueur du côlon et du poids du côlon (Fig. 6A – C) dans le groupe modèle par rapport au
groupe témoin, respectivement. De plus, comme prévu, les rats recevant une administration de
DSS présentaient des scores DAI considérablement augmentés (Fig. 6C). Ces rats ont
présenté une réduction de l'activité quotidienne, de l'anorexie, de la couleur des cheveux
ternes et de la perte de poids avec des selles molles.

17
 Résultats et discussion

Ces rats présentaient une DAI et une perte de poids remarquablement plus faibles que ceux du
groupe témoin. Dans les groupes prétraités au chlorhydrate de berbérine et à la sulphasalazine,
les symptômes étaient plus légers que ceux du groupe modèle.

Fig6 : Le prétraitement au chlorhydrate de berbérine (BH) atténue l'inflammation du colon

induite par le DSS. (A, B) Effet de BH sur le raccourcissement du colon induit par le DSS.
(C) Les poids du côlon ont été mesurés. (D) Effets de BH sur les scores de dommages
microscopiques. (E) Changements histopathologiques après stimulation DSS dans le côlon (×
400). * P <0,05, ** P <0,01 par rapport au groupe de modèles.

18
 Résultats et discussion

3- Observation histologique et évaluation

L'analyse histologique a été réalisée pour estimer l'étendue des dommages causés aux tissus
du côlon. Comme le montre la figure 2E, la coloration HE du groupe témoin n'a montré aucun
signe de lésion de l'épithélium de la muqueuse colique.

En revanche, dans le groupe DSS, l'infltration cellulaire inflammatoire était importante dans
la sous-muqueuse. Cependant, les groupes prétraités au chlorhydrate de berbérine et à la
sulphasalazine ont présenté une réduction des niveaux de congestion et d'œdème par rapport à
ceux du groupe modèle. Comme le montre la figure 6D, il y avait une différence significative
entre les scores d'endommagement microscopique du groupe témoin et du groupe modèle. Il
n'y avait pas de différence entre les scores de dommages microscopiques du groupe traité avec
10 mg / kg de chlorhydrate de berbérine et le groupe modèle. Par ailleurs, le traitement avec
50 mg / kg de chlorhydrate de berbérine a entraîné une réduction significative du traitement
par rapport au groupe modèle.

4- Effet du chlorhydrate de berbérine sur les taux de cytokines dans les UC

induites par le DSS
Les expressions des cytokines ont été déterminées par des tests ELISA et PCR,
respectivement. Les résultats de la PCR ont montré des taux plus élevés d'IL-1, d'IL-1β, d'IL-
6, d'IL-12, de TNF-α et d'IFN-γ dans le groupe modèle par rapport au groupe témoin, mais ils
ont été considérablement réduits par le traitement au chlorhydrate de berbérine. (Fig. 3).
Cependant, le DSS a significativement diminué l’expression de l’ARNm de IL-4, IL-10 et par
rapport au groupe de contrôle. Le prétraitement au chlorhydrate de berbérine a induit, en
fonction de la dose, l'expression de l'ARNm d'IL-4 et d'IL-10. De même, les résultats de
l’analyse ELISA suggéraient que les taux de IL-1, IL-6, IL-12, TNF-a, TGF-β et IFN-γ étaient
notablement plus élevés dans le chlorhydrate de berbérine et la sulphasalazine que dans le
groupe témoin, plus bas dans le groupe de modèles. Par ailleurs, le prétraitement au
chlorhydrate de berbérine stimule de manière significative l’expression protéique de l’IL-4 et
de l’IL-10. Ensemble, ces résultats ont démontré que le chlorhydrate de berbérine inhibait les
niveaux de cytokines pro-inflammatoires dans les RCH.

5- Effet du chlorhydrate de berbérine sur l'inflammation

Dans une tentative d'identification de l'efficacité du chlorhydrate de berbérine sur
l'inflammation du côlon stimulée par le DSS, nous avons analysé plus en détail l'activité du
iNOS, du MPO, du SIgA et du MDA. Comme le montrent les figures 6A – D, les données

19
 Résultats et discussion

indiquent que l'activité de iNOS, MPO et MDA dans le groupe de modèles a augmenté de
manière significative par rapport au groupe de contrôle. Le prétraitement à l’hydrochlorure de
berbérine a considérablement réduit les niveaux d’INOS, de MPO et de MDA. Cependant, le
niveau de SIgA a été notablement diminué dans le groupe de modèles par rapport au groupe
de contrôle. Par ailleurs, le traitement par le chlorhydrate de berbérine réduisait de façon
marquée l'activité des iNOS, des MPO et du MDA et induisait le taux de SIgA. De plus, le
nombre de cellules DC a été évalué par cytométrie en flux (figure 5E).

6- Expressions de gènes et de protéines liés à la voie du signal

Nous avons testé les gènes et les protéines liés à la voie du signal pour mieux caractériser le
mécanisme anti-inflammatoire du chlorhydrate de berbérine en activant STAT3 par PCR et
par analyse de Western Blot. Comme le montrent les figures 6A et B, le chlorhydrate de
berbérine, de manière notable, diminue les expressions de IL-6 et de p-NF-KB par rapport au
groupe modèle.

Inversement, le chlorhydrate de berbérine a induit de manière marquée l’expression de p-

STAT3. Il n'y avait pas de différence significative dans le montant total
Protéines STAT3 et NF-κB entre le groupe modèle et un autre groupe. De plus, nous avons
analysé ces protéines par analyse d'immunofluorescence, des résultats similaires ont été
obtenus (Fig. 6C).

7- Expression d'ARNm et de protéines de la jonction étroite

Les expressions de l'occludine, de la claudine-1, de ZO-1 et de VCAM-1 ont été détectées par
RT-PCR, Western blot et immunohistochimie, respectivement. Comme le montre la figure
7A, les expressions d'ARNm d'occludine, claudine-1, ZO-1 et VCAM-1 dans le chlorhydrate
de berbérine et la sulphasalazine ont nettement augmenté par rapport au groupe modèle. Dans
le même temps, les résultats ont montré que l'administration de chlorhydrate de berbérine
augmentait de manière significative les niveaux d'expression protéique d'occludine, de
claudine-1, de ZO-1 et de VCAM-1 par rapport au groupe de modèles par western blot. La
coloration immunohistochimique de l'occludine, de la claudine-1, de ZO-1 et de VCAM-1 a
montré une immunoréactivité plus forte dans le groupe chlorhydrate de berbérine et
sulphasalazine que dans le groupe modèle.

20
 Résultats et discussion

Fig7 : Effets du chlorhydrate de berbérine (BH) sur l’activité sérologique du sérum INOS,
MPO, SIgA, MDA chez le rat et les cellules DC. Les données étaient basées sur le sérum. Les
données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM. * P <0,05, ** P <0,01 par rapport au
groupe de modèles.

8. Discussion
La rectocolite hémorragique (RCH) est une maladie inflammatoire du côlon associée à une
inflammation récurrente et à la formation d'ulcères. Environ 10 individus sur 100 000
personnes sont diagnostiqués chaque année avec la CU [17]. Bien que le mécanisme
pathogène de la CU soit à peine compris, de plus en plus de preuves indiquent que plusieurs
facteurs contribuant au déclenchement de la colite humaine, tels que des facteurs génétiques
et environnementaux, une infiltration prolongée de neutrophiles et une production accrue de
médiateurs inflammatoires contribuent à la pathogenèse de la CU [18]. Des réponses
immunitaires aberrantes peuvent être observées dans le gros intestin, dans lequel des cellules
immunitaires distinctes et des cytokines [19,20]. Les immunomodulateurs, les anti-
inflammatoires non stéroïdiens, tels que la sulphasalazine et les glucocorticoïdes, ont été
largement utilisés pour le traitement de la CU [21,22]. Cependant, ces traitements peuvent
provoquer des effets secondaires, tels que vomissements, toxicité, œdème généralisé et
anémie. Par conséquent, les gens s'intéressent de plus en plus à l'utilisation de nombreux
composés naturels dans les herbes traditionnelles. Ces composés naturels ont des effets anti-
inflammatoires et peuvent être utilisés pour traiter les maladies inflammatoires chroniques

21
 Résultats et discussion

[23,24]. Le chlorhydrate de berbérine est un médicament traditionnel à base de plantes qui

possède des propriétés anti-inflammatoires [25]. Les preuves accumulées suggèrent que le
chlorhydrate de berbérine semble soulager les symptômes de plusieurs maladies
inflammatoires chroniques, telles que les maladies allergiques, l'hépatite et l'encéphalomyélite
auto-immune expérimentale. En outre, certaines études antérieures ont suggéré que le
chlorhydrate de berbérine a des effets protecteurs évidents sur l'endométrite induite par le LPS
chez la souris [26].

Les cellules dendritiques (CD) sont les seules et les plus puissantes cellules présentatrices
d'antigène, capables d'activer les cellules T naïves. Les PED jouent un rôle pathogène
important dans la survenue, la progression et la régulation immunitaire de la colite induite par
le DSS [27–31]. Au cours de la phase inductive de la colite, les PED, en produisant des
cytokines et des chimiokines inflammatoires, favorisent la

afflux de cellules immunitaires dans le côlon blessé et induire une inflammation [32]. Les
PED étaient critiques pour la génération de tolérance immunitaire aux troubles auto-immuns.
De manière détaillée, les motifs d’ADN suppressifs n’ont pas directement perturbé
l'absorption d'acide nucléique ou se lier de manière compétitive au TLR9 dans les CD, mais a
montré une grande affinité pour les protéines de la boîte de groupe de haute mobilité, qui
étaient essentielles pour l'activation des cascades de signaux immunitaires innés ultérieurs
[33,34]. Avec l'IL-6, la phosphorylation de NF-κB p65, le TNF-α et des facteurs liés à
l'inflammation affectent les signes cliniques de la CU [35–38]. De plus, NF-KB est une
molécule de signalisation critique dans le processus inflammatoire et l'activation de NF-KB
est importante dans la pathogenèse de l'UC [39,40].

Dans la présente étude, les rats ont induit une colite par DSS, qui a été largement utilisé
comme modèle expérimental dans l’étude de la pathogenèse de la CU. Les paramètres
cliniques tels que le DAI ont été remarquablement augmentés dans le groupe modèle. Les
symptômes de perte de poids et de taux de survie ont été notablement améliorés après le
traitement par le chlorhydrate de berbérine et la sulphasalazine. De plus, les modifications
histologiques de la muqueuse intestinale étaient proches du groupe témoin. Nous avons en
outre vérifié l’expression des cytokines IL-1, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, TGF-β
et IFN-γ, qui sont des médiateurs connus de l’inflammation dans UC [41]. Le résultat du test
ELISA a montré que l’expression d’IL-1, IL-6, IL-12, TNF-α, TGF-β et IFN-γ était
considérablement réduite dans le groupe chlorhydrate de berbérine, accompagnant une
augmentation niveaux d’IL-4 et d’IL-10 comparés au groupe modèle. En outre, notre étude a

22
 Résultats et discussion

démontré que le chlorhydrate de berbérine était capable de supprimer les expressions de

phosphorylation de STAT3 et de phosphorylation de NF-KB p65 induites par la DSS dans les
tissus du côlon. Ces découvertes suggèrent que le chlorhydrate de berbérine peut inhiber
efficacement l'activation de l'IL-6 / STAT3 / NF-KB dans un modèle expérimental d'UC in
vivo. Tous ces résultats indiquent que le chlorhydrate de berbérine peut être un soulagement
de la réponse inflammatoire dans les UC en bloquant la voie du signal IL-6 / STAT3 / NF-
KB. En résumé, nous avons montré pour la première fois que le chlorhydrate de berbérine
peut prévenir la colite induite par le DSS chez le rat. Pris ensemble, ces résultats indiquent
que le chlorhydrate de berbérine pourrait constituer une approche prometteuse et utile pour le
traitement de la RCH chez l'homme.

23
 Conclusion

V/ Conclusion
L'étude montre que la récupération de la berbérine à partir du rhizome en poudre de C.
chinensis Franch a été influencée par l'utilisation de divers modificateurs dans le CO2
supercritique, parmi lesquels la récupération la plus élevée a été obtenue en utilisant du 1,2-
propanediol comme modificateur, tandis que la récupération obtenue avec 95% l'éthanol en
tant que modificateur était le plus faible. L'utilisation de 1,2-propanediol en tant que
modificateur polaire dans le CO2 supercritique convient à l'extraction de la berbérine de C.
chinensis Franch. La récupération de la berbérine obtenue avec du dioxyde de carbone
supercritique modifié à l'éthanol ou au méthanol n'a pas été améliorée par l'ajout de Tween 80
dans le fluide supercritique.

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