Plan de cours MCB 1980

1) Description du cours; classification et historique

2) Structure et composition chimique des bactéries

3) Nutrition et croissance des microorganismes

4) Action des agents physiques et chimiques sur les

bactéries

5)  Génétique bactérienne

6)  Relation hôte-microorganisme

1
Échange d’information génétique
chez les bactéries

"
##
#1) Transformation#
#
#2) Conjugaison#
#
#3) Transduction #

2
 1) Transformation bactérienne:
historique"
Frederick Griffith (1928): #
#
Étudie le transfert de la virulence de la bactérie pathogène
Streptococcus pneumoniae!
#
Principe de l’expérience de Griffith"

A.  Types morphologiques de pneumocoques (S et R)#

B.  Transformation des pneumocoques de forme R en

pneumocoques de forme S#

C.  Agent transformant: l’ADN#

3
 A) Types morphologiques de pneumocoques"

1)  Pneumocoques sauvages encapsulés et

virulents (forme S)#
Les pneumocoques entourés d'une capsule de polysaccharides
(encapsulés) sont virulents (septicémie mortelle) et ils forment
sur un milieu solide des colonies dont le contour est lisse
(forme S: smooth ou forme L: lisse)"
"
2)  Pneumocoques mutants non capsulés et
non virulents (forme R)#

Les pneumocoques mutants sans capsule ne sont pas virulents

et ils forment sur un milieu solide des colonies dont le contour
est dentelé (forme R : rough, rugueuse) "
"
4
http://www.bacteriainphotos.com
 Expérience de Griffith (suite)#
B) Transformation des pneumocoques de forme R en pneumocoques
de forme S#
#
•  Des souris inoculées avec un mélange de pneumocoques S virulents
tués par la chaleur (non pathogènes) et de pneumocoques R non
virulents vivants (non pathogènes) meurent. De plus, des
pneumocoques S virulents vivants sont isolés à nouveau de ces souris
mortes"

•  Il semble que les débris (agent transformant) des pneumocoques S

chauffés (non vivants) transforment des pneumocoques R vivants en
forme S. #

• = transformation#
"

5
 Expérience de Griffith (suite)
B)

S= mort R = survie

S tuée = survie

Prescott 2002, p229

S tuée + R = mort 6
 C) Agent transformant = l’ADN"
-En 1944, Oswald Avery, C.M. Macleod et McCarthy ont démontré que l'ADN
présent dans les débris des pneumocoques S tués par la chaleur est la seule
classe de molécules qui transforme des colonies rugueuses (pneumocoques R
vivants) en colonies lisses (pneumocoques S vivants). Les protéines et les
lipides n’ont aucun pouvoir de transformation."
-La démonstration que l'ADN est l'agent transformant constituait pour la
première fois une preuve que la substance responsable de l'hérédité (gènes)
était l'ADN. On croyait jusque là que c’était les protéines car elles sont plus
complexes que l’ADN.#

7
 Transformation bactérienne#
Définition : Processus dans lequel une bactérie receveuse absorbe de
l'ADN nu libéré dans le milieu par la lyse, accidentelle ou provoquée, de
bactéries donneuses"
"
• Ces fragments d'ADN absorbés peuvent se recombiner au
chromosome de la bactérie réceptrice pour ainsi produire des
transformants (recombinants bactériens) "
" Brock 2007, p271

8
Caractéristiques de la transformation bactérienne#
A)  Compétence bactérienne: Aptitude de certaines bactéries à absorber des
fragments d’ADN libre et de les incorporer dans son génome."
"
•  Facteurs de compétence: récepteurs, nucléases, protéines liant l’ADN simple brin "
"
"
"
"
"
"
"
"* Paramètres pouvant influencer la compétence:"
" "- Espèce bactérienne "- Milieux de culture"
" "- Phase de croissance "- Changement rapide de température"
"
B) Exemples de bactéries compétentes#
#
Bactéries Gram + : Streptococcus pneumoniae, Bacillus subtilis, …"
Bactéries Gram - : Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, …"
" 9
Transformation bactérienne#

a)  Adsorption de l’ADN (récepteur)

b)  Entrée de l’ADN (simple brin)
c)  Recombinaison homologue
d)  Bactérie transformée
(transformant ou recombinant)

Recombinaison homologue

Brock 2007, p273

10
Transformation bactérienne#

Prescott 2002, p306

11
 Transformation#

https://www.youtube.com/watch?v=hSbTWaR6Lzk
12
 Importance de la transformation bactérienne#

#
•  Transfert génétique horizontal ou latéral #

•  Génie génétique#
-  Induction de la compétence chez E. coli (bactérie naturellement non
transformable) par traitement au chlorure de calcium [CaCl2] et d'un choc
thermique"
-  Entrée forcée par la déstabilisation de la paroi par un choc électrique
(électroporation)"

-  CLONAGE: De l’ADN de n’importe quelle origine peut être introduit dans des
13"
bactéries en l’insérant dans un plasmide avant transformation"
2) Conjugaison bactérienne "

14"
 2) La conjugaison bactérienne#

Découverte de J. Lederberg et E. Tatum (1946)#

#
Ils utilisèrent deux souches auxotrophes, présentant plusieurs exigences
nutritionnelles différentes (poly-auxotrophes), "
#
Souche A: Bio- Phe- Cys- Thr+ Leu+ Thi+"
Souche B: Bio+ Phe+ Cys+ Thr- Leu- Thi-"
"(+ = synthèse; - = absence de synthèse)"
"(Bio: biotine; Phe: phénylalanine ; Cys: cystéine ; Thr: thréonine; Leu: leucine;
"Thi: thiamine)"
#
Principe de l’expérience de Lederberg et Tatum#
"
Ils étalèrent soit environ 108 bactéries de la souche A ou de la souche B
(groupes témoins), soit un mélange de bactéries des deux souches
(groupe expérimental: le mélange est préalablement incubé pendant 4 à 5
heures dans un milieu riche) sur des boîtes contenant du milieu minimal
(eau, sels minéraux, glucose et agar) "
15"
 La conjugaison bactérienne#
Résultats"
"
A) Groupes témoins#
•  Aucune colonie n’apparaît sur les milieux ensemencés avec des
bactéries de la souche A ou de la souche B (milieu minimal)"
"
B) Groupe expérimental#
•  Environ 10 colonies deviennent visibles (croissance) sur le milieu
ensemencé avec le mélange de bactéries de la souche A et de la
souche B (fréquence: 101 / 108 = 10-7 = 1/10 000 000)"
"
"► Ces colonies sont nécessairement prototrophes puisqu'elles sont capables de"
" croître sur un milieu minimal sans supplément nutritionnel"
#
Conclusion#
"
Les nouvelles colonies de type prototrophe (Bio+ Phe+ Cys+ Thr+ Leu+ Thi+)"
obtenues sur le milieu minimal sans supplément nutritionnel (groupe
expérimental) sont des bactéries recombinantes résultant probablement d'un
échange de matériel génétique entre les deux souches bactériennes" 16"
La conjugaison bactérienne#

17
 Caractéristiques essentielles #
de la conjugaison bactérienne#

1)  Nécessite un contact physique entre les bactéries

(B. Davis 1950)#

2)  Présence d’un facteur de fertilité (F) dans les

bactéries donneuses (W. Hayes 1952)#

3)  Transfert linéaire de l’ADN (plasmide ou

chromosome) de la bactérie donneuse dans la
bactérie receveuse F- (E. Wollman et F. Jacob 1957)#

18"
 1) Nécessite un contact physique entre les bactéries#

B. Davis 1950#
"
- Un contact physique entre les deux souches est essentiel pour produire
des bactéries prototrophes (recombinants) (Expérience du tube en U)"

19
 Présence d’un facteur de fertilité (F) dans les
W. Hayes 1952#
bactéries donneuses"
"
Il démontra que le transfert de gènes observé par Lederberg et Tatum
s’effectuait dans un sens déterminé. Il émit donc l'hypothèse de la présence
d'un facteur de fertilité (F) dans les bactéries donatrices"
"
A)  Bactéries receveuses: F- (sans facteur de fertilité)#
B) Bactéries donneuses: F+ (avec un facteur de fertilité F)"
Lors d’un croissement F+ x F-, les descendants ne sont que rarement modifiés
dans leur auxotrophie, mais les souches F- deviennent fréquemment F+"
"⇒Le Facteur de fertilité F est sur un plasmide #
#
C) Bactéries donneuses: Hfr (haute fréquence de recombinants)#
#
* Les bactéries donneuses transferts des gènes chromosomiques avec une
grande efficacité, mais ne transforment pas les bactéries receveuses en cellule
F+. (croissement Hfr x F- : recombinants bactériens)"
"
⇒Le facteur de fertilité F est intégré dans le chromosome bactérien à
des sites spécifiques" 20
 3) Transfert linéaire de l’ADN#
Transfert linéaire de l’ADN (plasmide ou chromosome) de la bactérie
donneuse dans la bactérie receveuse F- (E. Wollman et F. Jacob 1957)#
#
Le chromosome circulaire (Hfr) ou le plasmide F de la donneuse est transféré
dans la receveuse F- de façon linéaire à partir d'un point spécifique appelé
origine de transfert [O] (transfert orienté et progressif)."

21
 La conjugaison bactérienne#
Définition de la conjugaison bactérienne#
#
•  Mécanisme qui consiste en un transfert linéaire et unidirectionnel du
chromosome bactérien (Hfr) ou du plasmide F de la cellule donneuse à la cellule
receveuse (F-) à l'aide d’un contact direct entre les cellules (contact initié par le
pilus sexuel)"

Fimbriae

pilus
sexuel

Système de sécrétion de type IV

22
La conjugaison bactérienne: F+ x F-#
Brock 2007, p282

Origine de transfert (O)

23
La conjugaison bactérienne: F+ x F-#

Origine de transfert

24
Conjugaison : Bactérie F+ vers bactérie F-#

https://www.youtube.com/watch?v=VU7brO7A36w

25
 Le plasmide F#
Structure générale du plasmide F (plasmide conjugatif)#
#
Le plasmide F est une petite molécule d'ADN bicaténaire circulaire de 95-100 kpb,
extra ou intrachomosomique (épisome), autoréplicable et autotransférable"

Épisome#
- Plasmide libre ou intégré au chromosome de l’hôte"
- Élément génétique susceptible de se répliquer dans l’un des deux
"états: "1) Intégré au chromosome de la cellule hôte (Hfr)"
" "2) Libre dans le cytoplasme : plasmide F (F+)"

Prescott, Fig. 14-18

26"
 Principaux types de plasmides#
•  Plasmide F: Facteur de fertilité (Escherichia, Pseudomonas, Staphylococcus,…)"
•  Plasmide R: Résistance aux antibiotiques et autres inhibiteurs…"
•  Plasmide Col: Production et résistance aux bactériocines (colicine)"
•  Plasmide de virulence: enterotoxines, invasion, antigènes,…"
•  Production d’antibiotique (Streptomycine)"
•  Plasmide métabolique: dégradation de substances inhabituelles,…"
"
Peuvent être conjugatifs (transférables d’une bactérie à une autre durant une"
conjugaison promue ou non par un autre plasmide)"

27"
Plasmide R"
 Intégration du plasmide F#

Brock 2007, p283 Brock 2007, p283

**Intégration du plasmide F à des sites spécifiques: Hfr Hayes, Hfr C(Cavalli), Hfr B7, …
28
 Conjugaison:
Hfr x F-
Hrf lac+pro+ x F- lac- pro-
Hrf lac+ pro+
F- lac- pro-

Temps long

Temps court

TP séance #5 "
(thr et leu)"

29
F- lac+ pro- F- lac+ pro+
 Importance la conjugaison bactérienne#
•  Transfert génétique horizontal ou latéral#
#
#
#
#
#
#
•  Cartographie du chromosome bactérien à l’aide de la conjugaison bactérienne"
Cartographie par conjugaison interrompue: unité de minute"
"
Principe de la méthode"
"
"- Croisement Hfr x F- "
"- Échantillons prélevés à intervalles de temps réguliers"
"- Agitation courte mais violente (inhibition du transfert: conjugaison interrompue)"
"- Étalement sur des milieux sélectifs différents permettant de dénombrer différents
" types de recombinants bactériens (conjugants)"
"
* La vitesse de transfert de l'ADN étant relativement constante, le temps
d'entrée des marqueurs génétiques donne une idée exacte de la distance relative (en
30"
unité de "temps) qui les sépare"
 Applications de la conjugaison bactérienne#

Cartographie par conjugaison interrompue#

31"
Cartographie du chromosome bactérien en
unité de temps (minutes)

À l'aide de différentes
souches Hfr, la carte
chromosomique d' E. Coli
fut divisée en 100 minutes,
chaque minute
correspondant à environ 20
loci. Par convention, la
position 0 (zéro) se situe au
locus thr de la souche HfrH
(Hayes) et la direction du
transfert s'effectue dans le
sens horaire

32
Prescott 2002, p313
 La conjugaison F’ (sexduction)#

Comme le plasmide F est un épisome, il peut quitter le chromosome bactérien et

reprendre son statut autonome de facteur F. Au cours de ce processus, il arrive
que le plasmide fasse une erreur d’excision et emporte une portion du
chromosome. On l’appelle alors le plasmide F’ car il est génétiquement distinct
du plasmide F."
"
" " " " ""
Excision anormale du#
Plasmide" F# facteur F, englobant#
" " " du # "
une partie " Ex: F’A emporte le gène A"
chromosome bactérien#
" " " " " situé près de son site d’insertion"
#
#
# Prescott 2002, p305!
#
#
#
Conjugaison F’ ou sexduction#
"
" "Acquisition par une bactérie receveuse (F-), lors du processus de
conjugaison, de gènes chromosomiques liés au plasmide F (F’)" 33"
Sexduction

34
 La conjugaison"

https://www.youtube.com/watch?v=AObOs8GYLDY
35
3) Transduction bactérienne "

36
 3) Transduction bactérienne#
Bactériophages: Description d’un bactériophage"
"
•  Virus de bactéries constitué d'une capside protéique contenant une molécule
mono ou bicaténaire d'ADN ou d'ARN et pouvant se retrouver sous deux
stades: intracellulaire et extracellulaire "
•  Les phages sont des parasites intracellulaires obligatoires"

Types de bactériophages"
"
A) Phages virulents: cycle lytique"
""
•  Les phages qui lysent (destruction) toutes les bactéries qu'ils infectent sont
appelés phages virulents "Ex.: phages de la série T"
"
B) Phages tempérés: cycle lytique ou cycle lysogénique"
"
•  Le phage tempéré peut se comporter comme un phage virulent et suivre le
cycle lytique ou demeurer à l'état latent dans une bactérie hôte (cycle
lysogénique)"
" "Ex.: P1 tempéré, P22 tempéré, lambda tempéré"
37"
 Transduction bactérienne#

C) Bactéries lysogènes#
"
•  Bactéries qui possèdent et transmettent à leur descendance le
pouvoir de produire des phages en absence d'infection (elles
possèdent l’ADN du phage) "Ex.: E. coli (lambda), E. coli (P1)"
"
D) Prophage#
"
•  Forme latente du génome viral qui réside dans l’hôte sans le
détruire " "Ex.: Prophage lambda de E. coli"

"- L'ADN du phage lambda s'intègre par recombinaison dans un

site spécifique du chromosome d' E. coli et y demeure dans un état
passif (prophage) 

"
""

38"
Cycles lytiques des bactériophages"

39
http://bio1151.nicerweb.com
Cycles des bactériophages tempérés

40
Action des bactériophages sur les bactéries
Milieu solide Milieu liquide

Forte densité
cellulaire

Densité cellulaire
réduite

41
Plage de lyse
 Transduction bactérienne#

#
Définition de la transduction bactérienne"
"
•  Transfert génétique au cours duquel un ou plusieurs gènes bactériens
sont transmis d’une bactérie donneuse à une bactérie receveuse par
l’intermédiaire d’un bactériophage transducteur qui agit comme vecteur
en transportant une portion du chromosome bactérien de la donneuse à
la receveuse"
"
"
•  Il existe deux types de transduction: généralisée ou spécialisée "

**Importance de la transduction bactérienne (généralisée

et spécialisée) #
#
•  Transfert génétique horizontal ou latéral#
•  Cartographie du chromosome bactérien"
42"
 Types de transduction#
Transduction généralisée#
""
"- Transduction dans laquelle les phages tempérés ou virulents
transportent un exogénote bactérien qui peut correspondre à n'importe
quel fragment du chromosome de la bactérie donneuse."
"
" "Ex.: P1 / E. coli, P22 / S. Typhimurium#
#
Cinétique de la transduction généralisée (ex.: P1 / E. coli)#"
"
Comme pour la transformation et la conjugaison, la cinétique de la
transduction bactérienne consiste en deux grande étapes:"
"
" "- Transfert de marqueurs génétiques de la donneuse à la receveuse
par l’entremise d’un vecteur phagique"
"
" "- Recombinaison de ces marqueurs au génome de la bactérie
receveuse" 43"
 Cinétique de la transduction généralisée#
1) Infection phagique des bactéries donneuses"
#
2) Erreur lors de l’assemblage des phages (encapsidation) "
"- Lors de l’encapsidation du génome phagique, un court fragment d’ADN"
" bactérien peut être incorporé (encapsidé) par erreur et au hasard dans la
tête phagique, soit la formation d’un phage transducteur"
"
3) Lyse des bactéries donneuses et libération de phages normaux et
transducteurs"
"- La très grande majorité (>99%) des phages produits sont normaux tandis
qu’une minorité possèdent seulement de l’ADN bactérien dans leur capside
(Phage transducteurs)"
"
" "Les phages transducteurs ne contiennent pas d’ADN viral !"
"
4) Infections des bactéries réceptrices par les phages normaux et transducteurs"
"- L’infection d’une bactérie par un phage transducteur (incapable de lyser la
bactérie) produira un transductant (après intégration de l’ADN par
recombinaison dans le génome de la bactérie réceptrice)"
44"
Transduction généralisée#

45
academic.pgcc.edu
Transduction généralisée"

https://www.youtube.com/watch?v=An9oItt7U9I
46
 Transduction spécialisée#

Transduction spécialisée"
"- Transduction dans laquelle un phage tempéré, défectif pour une partie de
son information génétique, a inséré, de manière stable dans son génome, un"
" fragment d'ADN de la bactérie donneuse correspondant à quelques gènes "
" bactériens spécifiques Ex.: lambda / E. coli, φ80 / E. coli"
#
Cinétique de la transduction spécialisée (ex.: lambda / E. coli)"
"
1) Libération du prophage du chromosome d’une bactérie sauvage lysogène
donneuse"
- Sous certaines conditions de culture (ex.: irradiation aux ultraviolets), le ""
prophage devient susceptible à son excision du chromosome bactérien"
"
2) Erreur d’excision du prophage"
"- À l'aide d'enzymes phagiques spécifiques, il y a excision normale du
prophage produisant ainsi un génome phagique et un génome bactérien
intact"
"- Avec une fréquence très faible (10-6 à 10-7), il peut se produire une erreur"
" d'excision suite à des clivages incorrects. Cette erreur d'excision produit
des fragments hybrides d'ADN (ADN phagique + ADN bactérien)" 47
 Transduction spécialisée#
Cinétique de la transduction spécialisée (suite)"
""
-  Puisque le prophage lambda s'intègre dans le chromosome
bactérien entre les gènes bactériens gal et bio, certains phages
transducteurs contenant gal [phage lambda défectif gal] ou bio
[phage lambda défectif bio] peuvent être produits suite aux
erreurs d'excision, d'où la transduction spécialisée"

3) Lyse des bactéries donneuses et libération des phages normaux et

des phages défectifs"
La majorité des phages libérés sont normaux tandis qu'une faible
proportion sont transducteurs (fréquence de phages lambda
défectifs: 10-6 à 10-7)"
"
4) Infection de bactéries receveuses par des phages normaux/défectifs"
"
5) Recombinaison homologue de l’ADN transduit au génome de la
bactérie receveuse (transductant) " 48"
Transduction spécialisée#

49
Brock 2007, p275
50
 Transduction spécialisée

https://www.youtube.com/watch?v=GDIeqK_KBEQ
51
 Modalités de transfert d’ADN d’une
cellule bactérienne donneuse à une receveuse

Brock 2007, p271

52
Résumé: Échange d’information
génétique chez les bactéries

"
1)  Transformation #
#Streptocoque: R à S (non virulent à virulent) (Griffith)#
#ADN est l’agent transformant (Avery)#
#Compétence naturelle ou induite#

2) Conjugaison#
#Auxotrophe à prototrophe (Lederberg et Tatum)#
#Contact physique (pilus) , facteur de fertilité (F), transfert linéaire#
#Plamide (F, R, Col …) , Hfr, F+, F-, F’(sexduction); cartographie#

3) Transduction #
#Bactériophage (virulent ou tempéré)#
#Généralisée ou spécialisée#

53