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1) Description du cours; classification et historique
1
Rappel
• Contribution des bactéries au bien être de l’humain :
- Production de médicaments/additifs alimentaires,…
- Produits alimentaires (yogourt, fromage,...)
- Décontamination des sols
2
Contrôler les microorganismes
109
Bactéricide
108
107
Bactériostatique
106 Sans agent
CFU/ml
105
104
103
102
101
100 5
0 2 4 6
Heures
Cinétique de la mort bactérienne
Courbe de létalité
- Plus le taux de mortalité est grand et plus la pente de la droite est forte
Taux de mortalité
n
7
n
1 100 000
Nb survivants (Log)
1 000 000 6
900 000
Nb survivants
800 000 5
700 000 4
600 000
500 000 3
400 000
300 000 2
200 000 1
100 000
0 0
0 1 2 3 4 5 6
Temps (min)
7
Efficacité de la destruction thermique
Temps de réduction décimale (D ou valeur D):
Temps (min) Décès par minute Nombre de survivants Nombre de survivants (Log)
0 0 1 000 000 6
1 900 000 100 000 5
D= 1min
2 90 000 10 000 4
3 9 000 1 000 3
4 900 100 2
5 90 10 1
6 9 1 0
8
Efficacité des agents an.microbiens
Facteurs affectent l’efficacité d’un agent antimicrobien:
Biologiques, chimiques ou environnementaux et durée d’exposition
-Taille de la population:
9
Le taux de mortalité de la
-
n
1
B3 B2 B1 - Il faut plus de temps pour
0 détruire une grosse population
0 2 4 6 8 10 12 14
Temps (min)
qu’une petite (B1, B2 et B3:
densités différentes d’une même
bactérie)
- Temps de contact:
- Plus longue est la durée d’exposition et plus nombreux sont les
microbes tués
- Temps de contact varie selon les agents chimiques/physiques
- Pour réussir une stérilisation, il faut utiliser une durée d’exposition
suffisante pour réduire la probabilité de survie à 10-6 ou moins
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3) Efficacité: Facteurs environnementaux
1) La température
2) La filtration
Réfrigération:
14
Effet de la basse température
Congélation:
15
Effet de la haute température
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Types de stérilisation thermique
1) Stérilisation par la chaleur humide : L’autoclave
(inventé par Chamberland en 1884)
- Le flambage direct est l’une des méthodes les plus simples de stérilisation
à la chaleur sèche (Ex: Anse de repiquage au laboratoire, incinérateur,…) 17
Stérilisation par la chaleur
Autoclave
15 minutes à 121°C
18
Comparaison: humide vs sèche
• Humide:
15 minutes à 121oC sous 103,4 kPa (1 atm)(15 livres/pouce2) de pression
19
Désinfection thermique
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2) La filtration
- Très utile pour réduire le nombre de bactéries dans une solution thermosensible ou
même la stériliser si aucun microorganisme n’a traversé le filtre
- Les bactéries ne sont pas détruites, elles sont simplement éliminées de la solution.
Le récipient sous le filtre doit être préalablement stérilisé
- Par contre, certains micro-organismes sont plus petits que le diamètre des pores
ou n’ont pas de paroi (mycoplasmes, rickettsies, chlamydia, virus).
- Retiennent les bactéries par piégeage dans des canaux sinueux ou en surface
Ex: - Filtres de Berkefield en terre de diatomées (système de traitement d’eau)
- Filtres de porcelaine (Chamberlain)
23
La filtration (suite)
2) Les membranes filtrantes
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La filtration de l’air
Filtration de l’air
- Stérilisation de l’air en le faisant passer dans des filtres qui retiennent les micro-
organismes
Ex.: Masques chirurgicaux, bouchon de ouate sur les flacons
de culture, Hottes à flux laminaire avec filtres HEPA
(High-Efficiency Particulate Arresting) qui retiennent 99,97%
des particules de 0,3 μm de diamètre.
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3) Les radiations
26
3) Les radiations
Les radiations ultraviolettes (UV)
- Région de 260-270 nm est très létale (les protéines et l’ADN absorbent les UV)
mais ces radiations ne pénètrent pas bien (ex: bloquées par le verre, la poussière,…)
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Les agents chimiques
1) Les composés phénoliques
Séance TP# 7
29
1) Les composés phénoliques
Phénol
- Le phénol (Lister, 1876) fut le 1er antiseptique et désinfectant utilisé à grande
échelle (diminution du risque d’infection lors d’interventions chirurgicales)
- Rarement utilisé de nos jours comme antiseptique car irritation de la peau/
muqueuses et odeur désagréable
- Encore utilisé dans des onguents cutanés (Ex: ozonol) ou dans des pastilles
pour le traitement des maux de gorge (Ex: chloraseptique, action antiseptique +
anesthésique)
Mode d’action: (conc. 1-5%) - Endommage les membranes plasmiques (lipides)
Dérivés phénolés
Isopropanol Éthanol
31
3) Les agents oxydants
32
3) Les agents oxydants (suite)
Le peroxyde de benzoyle
- Traitement des plaies infectées par des agents pathogènes anaérobies
Ex: infection des follicules pileux par bactéries anaérobies (acné)
L’iode
- Actif contre tous les types de bactéries, de nombreuse endospores (à
forte dose), différents mycètes et virus
Mode d’action
- Inactivation des enzymes/protéines en s’y fixant (iodation) et/ou
en les oxydant (oxydation)
Le chlore
- Désinfectant de choix pour l’eau (piscine, aqueduc) et le nettoyage des surfaces
de travail (eau de Javel)
Utilisation: - Sous forme de gaz: Cl2 + H2O = HCl + HClO (acide hypochloreux)
- Hypochlorite de sodium/calcium (eau de Javel):
Ca(OCl)2 + 2 H2O = Ca(OH)2 + 2 HClO (acide hypochloreux)
- Utilisés pendant de nombreuses années, mais de nos jours ils ont été remplacés
par d’autres agents moins toxiques et plus efficaces (beaucoup de métaux lourds
sont plus bactériostatiques que bactéricides). Ne détruisent pas les endospores.
Aussi, inactifs en présence de matière organique.
- Peu efficace comme antiseptique, mais jour un rôle important dans le lavage
destiné à éliminer mécaniquement les microbes
- Ils sont des désinfectants à large spectre et principalement utilisés dans les
lessives et produits de nettoyage Ex: Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)
ou en industrie alimentaire
- Mode d’action: altération de la membrane plasmique 38
7) Les agents de surface (suite)
Détergents cationiques:
39
8) Les aldéhydes
40
9) Les gaz stérilisants
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Les agents chimiques
Coefficient phénol
Comparer l’efficacité d’un désinfectant à celle du phénol
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Mesure du coefficient phénol
Calcul du coefficient :
Dilution la plus élevée capable de tuer les bactéries après 10 minutes d’exposition
Ex : Phénol = 1/40
Produit = 1/160
Mise en garde : L’efficacité peut varier lorsque l’agent est utilisé dans un usage
normal (in vivo)
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Mesure du coefficient phénol
Agents chimiques
-Les composés phénoliques
-Les alcools
-Les agents oxydants (peroxyde…, ozone
-Les halogènes (chlore, iode, fluor )
-Les métaux lourds (Ag, Hg, Zn et Cu)
-Les additifs de conservation
-Les agents de surface (surfactant, savon, détergent)
-Les aldéhydes (formaldehyde, glutaraldéhyde)
-Les gaz stérilisants 47