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Objectifs du cours

- Définir le terme de réplication

- Connaître le mécanisme enzymatique d’une fourche de

Chapitre 3: Réplication de réplication

l’ADN - Décrire les différentes réactions des ADN polymérases

- Décrire la réplication de l’ADN linéaire et le rôle des
télomérases
- Décrire l’activité de la transcriptase inverse

1 2

1. Introduction • La totalité du génome doit être répliquée à

L’ADN est constitué de deux brins enroulés l’un autour de
chaque division cellulaire (cycle cellulaire,
l'autre.
Ces brins sont complémentaires et la connaissance de la d’une division mitotique à une autre), pour
séquence d’un brin , permet de déduire automatiquement toute cellule procaryote ou eucaryote
la séquence de l'autre brin. Un brin peut servir de matrice
pour générer son complémentaire. • Chaque molécule d’ADN n’est répliquée
Cette structure de la molécule d’ADN avait permis à
qu’une seule fois par cycle cellulaire.
Watson et Crick de postuler les mécanismes de la
transmission héréditaire de l’information génétique par la
• Fidélité de la réplication des gènes
réplication. 3 4

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Duplication de l'information génétique par réplication de

La phase de réplication est rapide et fiable, et l'ADN : chaque brin sert de matrice pour la synthèse d'un
nouveau brin complémentaire.
correspond à la reproduction de l’ADN à
l’identique.
Durant cette phase il peut y avoir des brassages
mais aucune information n’est perdue.

Fig 1-3

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Cycle cellulaire: la vie d’une cellule se déroule entre
deux mitoses. La durée du cycle cellulaire dépend du
type cellulaire (très courte à très longue). Chez les
mammifères la durée moyenne est de 30 heures.
Pour une cellule procaryote (bactérie) le cycle est de
l’ordre de quelques dizaines de minutes, il est entre 18 et
180 minutes (exemple de E. coli).
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De façon générale la durée moyenne du cycle cellulaire
de la bactérie est de 60 minutes avec deux temps :
le temps de réplication du chromosome qui est d’environ
40 minutes et le temps de la préparation à la division
cellulaire qui est d’environ 20 minutes.
Chez les bactéries, la fréquence d’initiation de la
réplication est donnée par le taux de croissance de la
cellule et la fin de la réplication est directement liée à la
division cellulaire.

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Plus la bactérie croît rapidement (ou plus le cycle cellulaire 2. Le Réplicon

est court) et plus nombreux sont les cycles de réplication
initiés avant chaque division, donc plus nombreux sont le
nombre de chromosomes en cours de duplication, • La réplication commence à un point et se termine à un

Le cycle cellulaire des eucaryotes comporte 4 phases. endroit de l’ADN. Ces deux extrémités définissent une
4 phases dans un cycle séquence appelée réplicon.
cellulaire:
- Phase G1; • Réplicon est donc l’unité de réplication de l’ADN
- Phase S; eucaryote, avec une origine et une terminaison.
- Phase G2;
- Phase M (mitose) • Chez les eucaryotes la taille du réplicon est
Interphase : G1+S+G2.
Dans les cellules eucaryotes, la
comprise entre 30.000 et 150.000 bp.
réplication de l’ADN n’est effectué que
durant une partie du cycle cellulaire 9 10

2. Le Réplicon 2. Le Réplicon
• ADN procaryote, circulaire, contient une seule
origine de réplication
• Présence de plusieurs réplicons chez les eucaryotes
et constitue donc un
(1 à 35.000) permettant une réplication rapide de
seul réplicon.
la totalité de l’ADN.
Génome de Escherichia coli K-
12, circulaire. Représentation des Eléments indispensables à la
gènes et de l’origine réplication et réplication du chromosome :
du site de terminaison de la centromère, télomère et origine de
réplication réplication. Plusieurs origine de
réplication par chromosome

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2. Le Réplicon 2.1. L’œil de réplication

• La réplication débute au niveau de l’origine de réplication

• Autrement cette réplication chez les eucaryotes
durerait des centaines d’heures (plus de 800 heures)
• Vitesse de synthèse de l’ADN jusqu’à 50.000 bp/min pour
les eucaryotes et encore plus rapide pour les procaryotes
par une étape d’initiation aboutissant à l’ouverture des deux
brins d’ADN synthèse de nouveaux brins fils, créant une
structure en bulle. Cette structure est appelée œil de
réplication. L’œil de réplication s’agrandit au fil de
l’avancement de la réplication. Pour les organismes à
plusieurs réplicons, les yeux de réplication se rejoignent.

Œil de réplication, formé à l’origine de réplication d’un ADN

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2.1. L’œil de réplication 2.1. L’œil de réplication

• L’œil de réplication prend une structure nommée

• L’initiation permet de contrôler la réplication. Elle est
thêta (lettre grecque) dans la réplication des réplicons
faite une seule fois par cycle de réplication et ou par
circulaires : ressemblance de la structure à la lettre
cycle de division cellulaire.
thêta. C’est le cas de la réplication des procaryotes.
• Cependant que les eubactéries qui se divisent
rapidement plusieurs initiations ont lieu pendant un
même cycle de division
Microscopie électronique de la
structure de l’œil en thêta dans l’ADN Structure de l’œil en thêta dans l’ADN
circulaire circulaire
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2.2. La fourche de réplication 2.2. La fourche de réplication

• Après l’ouverture de la double hélice d’ADN à
l’initiation de la réplication, la réplication se
poursuit avec l’écartement des deux brins.
L’endroit ou s’effectue la réplication est appelé
fourche de réplication ou encore appelé point de
croissance.

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3. Caractéristiques de la réplication ❑ Réplication semi-conservative

3.1 Types de réplication
Chaque double hélice fille issue de la réplication de la
Plusieurs théories de double hélice mère, a un brin parental et un nouveau brin.
réplication ont été avancées
dans le temps avant de
connaître et confirmer le type
exact de réplication qui est mis
en œuvre lors de la duplication
de l’ADN. 19 20

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❑ Réplication conservative ❑ Réplication dispersive

Dans le mécanisme de réplication conservative, les deux
brins parentaux restent ensemble lors de la duplication de
l’ADN.
Dans le mécanisme de réplication dispersive, chaque
double hélice fille contient à la fois (un mélange) de
fragments de l’ADN parental et des fragments
nouvellement synthétisés.

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3.2. Réplication bidirectionnelle ou • La réplication peut être bidirectionnelle ou unidirectionnelle

unidirectionnelle selon l’espèce. Elle est toujours bidirectionnelle chez les

procaryotes (eubactéries et archaebactéries).
• Chez les eucaryotes elle est très souvent bidirectionnelle

Expérience de marquage à aussi.

la radioactivité par pulse • Dans le cas de réplication bidirectionnelle il y a formation

(faible au début et forte de deux fourches de réplication qui avancent en sens
ensuite), démontrant la opposé.
réplication bidirectionnelle. • Pour la réplication unidirectionnelle c’est une seule fourche
de réplication qui est formée et qui avance dans un seul
sens.
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3.3. Polymérisation unidirectionnelle 3.3. Polymérisation unidirectionnelle

Deux brins d’ADN associés de manière antiparallèle, chacun

possédant une extrémité 5’-phosphate et une extrémité 3’-OH
libre.

- Polymérisation toujours dans le même sens donc

unidirectionnelle : 5’ vers 3’

- Formation d’une liaison phosphodiester entre l’extrémité

3’OH du brin en voie d’élongation et l’extrémité 5’phosphate
du nucléotide ajouté
Polymérisation pour la synthèse d’un nouveau brin
25 26

3.4. Réplication semi-discontinue

3.4. Réplication semi-discontinue
• Donc nécessité de la présence d’un brin précoce (ou
• Formation de fourche de réplication par écartement
primaire) qui est le brin lu dans le sens de la fourche
de deux brins parents
et d’un brin tardif (ou secondaire) qui est le brin lu
• Chacun des brins parentaux est utilisé comme
dans le sens inverse de la fourche et qui est dit brin
matrice pour la synthèse d’un nouveau brin
discontinu. On parle ainsi de réplication semi-
• Deux brins fils synthétisés simultanément
discontinue.
• Sens de la synthèse: toujours dans le sens 5’ vers 3’

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3.4. Réplication semi-discontinue
4. Facteurs de la réplication
4.1. ADN polymérases
• conditions d’activités des polymérases:
- désoxyribonucléotides 5’ triphosphate: dATP, dTTP, dCTP
et dGTP en quantité équimolaire.
- ions magnésiums (Mg2+), stabilisent l’ADN et les protéines.
- matrice d’ADN (mono ou bicaténaire).
- amorce d’ADN ou d’ARN avec extrémité 3’OH libre.
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4. Facteurs de la réplication
4.1. ADN polymérases
• ADN polymérases = désoxynucléotidyl-transférases,
enzymes, ADN dépendantes, responsables de la
polymérisation des nucléotides lors de la réplication de
l’ADN.
• Besoin d’une matrice d’ADN pour produire le brin néo-
synthétisé. Lecture du brin matriciel de 3’ vers 5’ pour
synthétiser de l’ADN dans le sens 5’ vers 3’.
• 3 types d’ADN polymérases procaryotes: I, II et III
• 5 types d’ADN polymérases eucaryotes : α, β, δ, ε et γ.
29 30
4.1. Activités des ADN Polymérases
• Formation de liaison phosphodiester entre un
désoxyribonucléotide 5’ triphosphate et le brin en
voie d’élongation avec hydrolyse de la fonction
triphosphate et formation de pyrophosphate (PPi).
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4.1. Activités des ADN Polymérases 4.1. Activités des ADN Polymérases

Activité exonucléasique de 2 types :

• Activités spécifiques des ADN Polymérases:
- de 3’ vers 5’ ou proofreading : correction des erreurs
- activité polymérasique 5’ vers 3’ :activité principale
ou des epreuves
- activité exonucléasique: dégradation d’une des
- de 5’ vers 3’ : dégradation à partir de l’extrémité
extrémités du brin néosynthétisé de l’ADN lors de la
5’phosphate lors de la jonction des segments
réplication
33
d’ADN synthétisés sur le brin retardé. 34

4.2. Facteurs généraux de la réplication - Primase : ARN polymérase ADN dépendante qui

- protéines de reconnaissance des sites d’initiation et de synthétise l’amorce

- Topoisomérases I et II : relâchent les contraintes de torsion

terminaison
de l’ADN, elles sont de 2 types. Seule la topoisomérase de
- Hélicases ou DNA B déroulent la double hélice par rupture type II consomme de l’ATP.

des liaisons hydrogènes - ADN ligases ou DNA G : catalyse la formation de la liaison

phosphodiester.
- Protéines SSB (single strand binding protein) : forte affinité

pour l’ADN simple brin, empêchant le réenroulement lors de la

migration des fourches réplicatives.

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5. Mécanismes de la réplication chez les 5.1. Initiation

procaryotes (E. coli)
• Fixation de plusieurs exemplaires ( environ 40 ) de la
protéine de reconnaissance DnaA à l’origine de
3 grandes étapes de la réplication :
réplication : OriC
- Initiation • Origine de réplication ( environ 200 bp) possède : 3
répétitions d’une séquence de 13 bp riche en T à
- Elongation
l’extrémité gauche, une séquence GATC présente une
- Terminaison dizaine de fois et 4 répétions de 9 bp à l’extrémité
droite
37 38

5.1. Initiation 5.1. Initiation

• Mise en place des hélicases et fixation des SSB

• Ouverture de la double hélice sur 40 bp environ
• Intervention des topoisomérases
• Formation de l’œil de réplication et des deux
fourches
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• Formation du complexe d’initiation au niveau de
l’origine de réplication : primosome
• Primosome : facteurs protéiques + primase
• Synthèse d’amorce (10 à 15 ribonucléotides) et
remplacement de la primase par l’ADN polymérase
III
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5.2. Elongation 5.2. Elongation

• Synthèse de l’ADN à partir des extrémités 3’OH • Brin précoce dans le sens de déplacement de la
des amorces par l’ADN polymérase III
fourche: le brin lu dans le même sens que l’avancée
• De 5’ vers 3’
de la fourche, de 3’ vers 5’ = matrice au brin
• Continue sur un brin et discontinue sur l’autre
• Protéines SSB déplacées au fur et à mesure précoce.

• Deux ADN polymérases répliquent les deux brins • ADN polymérase III est responsable de l’initiation et
(brin précoce et brin tardif)
de l’élongation du brin précoce
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Les amorces sont détruites par la suite par des protéines à

- élongation du brin tardif dans le sens inverse du activité ribonucléasique telles que des RNases et l’ADN
déplacement de la fourche: Le brin matrice du brin Polymérase I complète entièrement la brèche. La dernière
tardif est également lu dans le sens 3’ vers 5’ mais liaison phosphodiester entre l’extrémité 5’ du premier
la fourche se déplace dans le sens inverse. l’ADN fragment et l’extrémité 3’ du deuxième fragment est réalisée
polymérase III, également responsable de par la ligase.
l’élongation du brin tardif réalise donc une
synthèse segmentée en fragments de taille
relativement constante, appelés fragments
d’Okasaki. Les fragments d’Okasaki procaryotes
mesurent 100 à 200 bp. A chaque segment il y a
recrutement d’une primase pour la synthèse d’une
amorce d’ARN constitué de 10 à 50 nucléotides
selon l’espèce. 43 44

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5.3. Terminaison
• Le terminateur est le site de fixation de
protéines « Tus » qui reconnaissent les régions
Ter
• terminateur d’environ 350 kb, contenant 7
séquences quasi identiques de 23 bp.
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Mécanismes et régulations de la réplication eucaryote
• ADN polymérases eucaryotes:
-L’ADN polymérase γ, présente dans les mitochondries,
codée par un gène nucléaire, est impliquée dans la
réplication de l’ADN mitochondrial.
- L’ADN polymérase α a une fonction de primase.
- Les ADN polymérases δ et ε sont responsables de la
réplication du brin précoce et des fragments d’Okasaki
• Télomères:
- Raccourcissement des chromosomes à chaque
division cellulaire, ce qui entraînerait une perte
d’information génétique des chromosomes aux
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extrémités libres.
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6. Régulation de la réplication:
- Méthylations des séquences GATC au niveau de
l’origine de réplication: nécessité de la méthylation
des séquences GATC sur les deux brins par la
protéine Dam (pour DNA adénine méthylase) pour
l’initiation de la réplication. Le blocage de la
réinitiation est induit par une méthylation partielle.
- Rôle de la DNAA : une accumulation de DNAA
entraîne une induction de l’initiation de la
réplication. Le promoteur de dna A contient aussi
des séquences GATC.
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- La présence de télomères aux extrémités des chromosomes
évite cette perte d’information lors de la réplication. La
disparition du télomère engendre l’apoptose de la cellule.
- Le télomère est formé grâce à des télomérases (inactives dans
les cellules différenciées) qui sont des ribonucléoprotéines
pouvant s’associer à des séquences répétées spécifiques de
l’extrémité du chromosome. Les télomérases jouent le rôle de
matrice pour les ADN polymérases qui synthétiseront les
télomères.
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Réplication du matériel génétique des rétrovirus

• Rétrovirus = virus à ARN monocaténaire
- le génome viral s’intègre au génome de la cellule hôte au cours
du cycle viral
- Passage par production d’un ADN double brin à partir de
l’ARN simple brin
• Intervention de différentes enzymes:
- ADN polymérase ARN dépendante = transcriptase inverse,
responsable de la transcription reverse de l’ARN viral,
synthétise dans la direction 5’ vers 3’ mais dénuée d’une
activité exonucléasique 3’ vers 5’. Nécessite une amorce, une
matrice et des dNTPs.
- La RNase responsable de la lyse de l’ARN viral
- L’ADN polymérase ADNdépendante.
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