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BACTERIOLOGIQUE
DES DENREES
ALIMENTAIRES
La prise d’essai:
A - cas de produit solide(exemple:
fromage,viande….).
B -cas de produit liquide(exemple:
lait pasteurisé,jus…..).
BALANCE
BROYEUR TSE
DE TYPE 225
ml
STOMACHER
(suspension mère)
10ˉ¹
BROYEUR
225 225
DE TYPE ml ml
Eau Peptonée Bouillon
STOMACHER tamponnée Fraser
+1
SuspensionAZIZI
mère - IPA - 2004
b- La prise d’essai pour les
recherches des Salmonella et des
Listéria.
Prélever
25 ml 25 ml
2×25 ml de la 5
ml
Suspension
mère.
+1 Eau
peptonnée
FRASER
tamponnée
Listéria Salmonella
10ˉ¹
Suspension
mère
1 ml 1 ml 1 ml
1 ml 9 ml de TSE 9 ml de TSE
10ˉ³
10ˉ¹ 10ˉ²
+1
suspension
Solution
mère mère AZIZI - IPA - 2004
RECHERCHE ET
DENOMREMENT DES
MICROORGANISMES PAR
COMPTAGE DES COLONIES
OBTENUES A 30 °C, DANS
LES DENREES ALIMENTAIRES
Milieu utilisé:
Gélose PCA
AZIZI - IPA - 2004
Inoculer les boites de pétri avec 1 ml
des différentes dilutions.
1 1 1
ml ml ml
1 ml 1 ml 1 ml
PCA PCA
A- En milieu liquide.
(VBL + Cloche)
a- Test de présomption.
1 ml 1 ml 1 ml
B – En milieu solide :
Gélose Désoxycholate 1 ‰ ou
gélose VRBL.
AZIZI - IPA - 2004
Inoculer les 2 séries de boites avec
1 ml des différentes dilutions.
1 1 1
ml ml ml
1 ml 1 ml 1 ml
Eau
BROYEUR peptonnée
tamponnée
DE TYPE
STOMACHER flacon
de
225 ml
25 ml
1
ml Introduire dans
Prélever 225 ml d’Eau
25 ml de la Peptonée Tamponnée
Suspension
mère
Eau
(+1) peptonnée
tamponnée
+1
Eau
peptonnée
tamponnée
Milieu utilisé:
Bouillon Giolitti cantoni
Incuber 48 h à 37°C
AZIZI - IPA - 2004
RECHERCHE ET
DENOMBREMENT DE
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES
Milieu utilisé:
Gélose Baird Parker
MILIEU
de
JAUNE
D’OEUF Gélose
au BAIRD
TELLERUTE
de
POTASSIUM PARKER
Milieu utilisé:
Gélose Viande Foie
10¹ 10²
100°C
Incuber 48 h à 37°C
AZIZI - IPA - 2004
Mélanger doucement par retournement.
Laisser solidifier.
Incuber 48 h à 37°C
AZIZI - IPA - 2004
RECHERCHE ET
DENOMBREMENT DES
LEVURES ET MOISISSURES
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES
Milieu utilisé:
Sabouraud au Chloramphénicol
1 0,2 ml 1 1
ml ml
0,2 ml ml
0,2 ml 0,2 ml
TEMOIN TEMOIN
DILUANT MILIEU
Témoin diluant
A- En milieu liquide.
(VBL + Cloche)
a- Test de présomption.
Acidification
du milieu
Gaz +
++ + + ++ +
2 2 3
AZIZI - IPA - 2004
RECHERCHE ET
DENOMBREMENT DES
COLIFORMES
THERMO TOLERANTS
ET ESCHERICHIA COLI DANS
LES DENREES ALIMENTAIRES
En milieu liquide:
Test de confirmation
AZIZI - IPA - 2004
Repiquer chaque tube de milieu VBL + sur un
autre tube de VBL et un tube d’Eau Peptonée
Exempt d’Indole.
2 gouttes 2 gouttes
VBL
Eau Peptonée
Exempt
D’Indole VBL
Eau Peptonée
VBL Exempt
D’Indole
B – En milieu solide :
Gélose Désoxycholate 1 ‰ ou
gélose VRBL.
AZIZI - IPA - 2004
Dénombrer les colonies rouges qui poussent
en masse , noter les dilutions et les
températures correspondantes.
Tenir compte des boites ayant un nombre
compris entre 15 et 300.
∑ c
N 1,1 x d
∑c : c 1 + c 2 (c 1 = nombre de
colonies de la 1ère dilution et c 2 = nombre
de colonies de la 2ème dilution ).
d : le taux de dilution de la 1ère boite
retenue.
N = nombre de
coliformes /gr ou ml AZIZI - IPA - 2004
Recherche et
dénombrement
d’Escerichia Coli:
Repiquer 3 à 5 colonies caractéristiques sur le
milieu Urée Indole.
Ensemencer le milieu Urée Indole.
Incuber le milieu Urée Indole
ensemencé 24 h à 37°C.
UREE
RECHERCHE DES
SALMONELLA
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES
100 ml
SFB
D/C
Milieu utilisé:
Bouillon Giolitti cantoni
Reincuber 48 h à 37°C
AZIZI - IPA - 2004
RECHERCHE ET
DENOMBREMENT DE
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES
Milieu utilisé:
Gélose Baird Parker
Reincuber 48 h
À 37 °C
Milieu utilisé:
Gélose Viande Foie
ASR
colonie
En milieu liquide:
Test de confirmation
AZIZI - IPA - 2004
-voir acidification du milieu VBL et le dégagement de gaz dans la
cloche.
-Ajouter le milieu Kovacs au tube d’Eau Peptonée Exempt d’Indole
et voir la formation d’un anneau rouge.
Anneau
2 gouttes rouge
Gaz +
de Kovacs Eau Peptonée
Exempt
D’Indole
VBL Acidification
du milieu
10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ²10ˉ² 10ˉ² 10ˉ² 10ˉ² 10ˉ² 10ˉ³ 10ˉ³10ˉ³ 10ˉ³ 10ˉ³ 10ˉ³
+ + + + +
2 1 2 AZIZI - IPA - 2004
RECHERCHE ET
DENOMBREMENT DES
COLIFORMES,COLIFORMES
THERMOTOLERANTS DANS
LES DENREES ALIMENTAIRES
B – En milieu solide :
Gélose Désoxycholate 1 ‰ ou
gélose VRBL.
AZIZI - IPA - 2004
Recherche et
dénombrement
d’Escerichia Coli:
Lecture du milieu Urée Indole.
Production d’indole
= formation
KOVACS KOVACS
indole -
d’un anneau rouge.
Milieu utilisé:
Gélose Hektoen
Étape d’enrichissement:
Ensemencer les bouillons de Rappaport Vassiliadis et
de sélénite à partir de la solution pré enrichie.
0,1 ml 2 ml
Bouillon
Rappaport
Vassiliadis RAPPA-
PORT
Eau
peptonnée
Incuber 18- 24h à 42°C tamponnée
10 ml
Anse de platine
SFB
D/C
SFB
D/C
Milieu utilisé:
Bouillon Giolitti cantoni
Tubes + Tubes -
Anse de platine
24 à 48h à 37°C
RECHERCHE ET
DENOMBREMENT DE
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES
Milieu utilisé:
Gélose Baird Parker
CATALASE
Observation à l’oeil nu ou
au microscope. AZIZI - IPA - 2004
Réaction de la coagulase:
a- ensemencer un bouillon cœur cervelle.
BOUILLON
COEUR
CERVELLE
Milieu utilisé:
Gélose Viande Foie
ASR
colonie
15≤C≤30
2) Solution mère ensemencée.
D=taux de c
dilution de la N=
suspension D
mère. AZIZI - IPA - 2004
Lecture et interprétation.
3) 1≤C≤15 c
Formule: Ne =
D
4) C = 0
Formule: 1
N = moins de
D
∑ c
N 1,1 x d
∑c : c 1 + c 2 (c 1 = nombre de
colonies de la 1ère dilution et c 2 = nombre
de colonies de la 2ème dilution ).
d : le taux de dilution de la 1ère boite
retenue.
N = nombre de
micro-organismes /gr ou ml AZIZI - IPA - 2004
RECHERCHE DES
SALMONELLA
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES
. .
.
Repiquer 5 colonies typiques de
Salmonella sur le milieu TSI.
Stries
Anse de platine
faire une
Isoler par
piqûre centrale.
des stries
Milieu utilisé:
Bouillon Giolitti cantoni
Observation à l’oeil nu ou
au microscope. AZIZI - IPA - 2004
Réaction de la coagulase:
ensemencer un bouillon cœur cervelle.
Si catalase +
BOUILLON
COEUR
CERVELLE
Milieu utilisé:
Gélose Baird Parker
Plasma de
BOUILLON
COEUR
CERVELLE lapin
0,3 ml
H2S + H2S
TSI TSI Gaz TSI Gaz +
H2S + Pente Pente Pente
Gaz + Rouge Rouge Rouge
CLARK ET
LUBS
1 goutte
UREE de réactif
TDA
2 gouttes
de réactif Pas de Pas de
KOVACS formation virage.
d’anneau
rouge.
INDOLE - TDA -
RECHERCHE ET
DENOMBREMENT DE
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES
Milieu utilisé:
Bouillon Giolitti cantoni
Plasma de
lapin coagulé
Milieu utilisé:
Gélose Baird Parker
Plasma de
lapin coagulé