1) Caractérisations biochimiques de base 

2 recherches enzymatiques sont réalisées, liées au métabolisme respiratoire : test catalase (dissocie
l’eau oxygénée en eau et en oxygène) et test oxydase

Test catalase : lame stérile en verre où on dépose une goutte d’eau oxygénée. Dans cette goutte, on
pose une colonie isolée (ou un morceau) qu’on écrase dans la goutte. Le dépôt se fait toujours avec
une oese en plastique.

Test oxydase : avec un substrat chromogène et la phényl diamine oxydase => semi quinone (violet)
Sur une lame, on pose un papier buvard blanc et on y dépose une goutte de substrat chromogène.
On écrase bien la colonie 30 secondes sur le papier, avec une oese.

2) Méthode biochimique standardisée d’identification bactérienne : galeries API (20E)

Ne marche qu’avec les bacilles et coccobacilles GRAM-.

Comporte 20 micro-tubes qui contiennent 1 substrat déshydraté différent spécifique d’une réaction
enzymatique.

Les réactions enzymatiques produites se traduisent par des réactions colorées spontanées ou
nécessitant l’intervention d’un révélateur.

On commence par l’inoculation de la galerie. On prépare une suspension bactérienne pure à partir
d’une colonie isolée (colonie entière). On la met dans 5 mL d’eau stérile. On peut pendre une oese
métallique, on mélange la colonie dans le tube avec l’eau stérile.
Encadré, souligné ou ni l’un ni l’autre :

- Aucun : on remplit le tube du bas en haut (ouverture). On s’arrête au sommet du tube et on

ne met rien au-dessus (rien sur la cupule). Tests en aéro-anaérobiose.
- Encadré : on remplit en + la cupule. Tests en aérobiose.
- Souligné : on change de pipette pasteur et on bouche le trou de la cupule avec de l’huile de
paraffine. Ce sont des tests enzymatiques en anaérobiose.

On rajoute de l’eau au fond de la boite (culot) pour créer l’atmosphère humide. On ferme la boite
avec la galerie dedans et on incube 24h à 37°C.
La fiche Api permet de convertir les résultats + et – en un profil numérique.

Les tests sont rassemblés par groupes de 3 tests.