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BACTERIOLOGIQUE
D’UNE DENREE
ALIMENTAIRE
La prise d’essai:
A - cas de produit solide(exemple: viande).
B -cas de produit liquide(exemple: jus).
Références
• Norme NF V 08- 010 :règles générales pour la
préparation des dilutions en vue de l’examen
microbiologique.
• Norme NF EN ISO 6887-1 relative à la suspension
mère et dilutions décimales;1.règle générale.
• Norme NF V 08- 057- 2 Microbiologie alimentaire -
Directives générales pour la préparation des
dilutions en vue de l’examen microbiologique.
• Norme XP V 08 – 102 relative aux règles générales
pour le comptage des colonies et l’expression des
résultats.
• Norme NF ISO 7218 :règles générales pour les
examens microbiologiques.
• Norme NF ISO 17025 relative aux prescriptions
générales concernant la compétence des
laboratoires d’étalonnage et d’essais.
A- Cas de produit solide.
La 1ère pesée servira au
Peser dans un sachet contrôle bactériologique.
stérile 3× 25 gr du produit La seconde servira à la
à analyser aseptiquement. recherche des Salmonella et
des shigella.
25 gr
La troisième servira à la
recherche de Listéria.
BALANCE
La prise d’essai pour une analyse
bactériologique classique:
Verser le TSE dans le sachet stérile contenant 25 gr de produit
à analyser.
Broyer l’aliment 6 à 8 minutes.
Verser le contenu dans le flacon de TSE.
BROYEUR TSE
DE TYPE 225
ml
STOMACHER
(suspension mère)
10ˉ¹
La prise d’essai pour la recherche
des Salmonella et des Listéria.
Verser l’Eau Peptonée Tamponnée(Salmonella) et le bouillon
Fraser(Listéria) dans le sachet stérile contenant 25 gr de produit
à analyser.
Broyer l’aliment 6 à 8 minutes.
Verser le contenu dans les flacons respectives.
BROYEUR
225 225
DE TYPE ml ml
Eau Peptonée Bouillon
STOMACHER tamponnée Fraser
B – Cas de produit liquide:
Faire un mélanger de 3 à 5 unités
du produit à analyser.
JUS
JUS
JUS
JUS
JUS
+1
Suspension mère
La prise d’essai pour les recherches
des Salmonella et des Listéria.
Prélever
25 ml 25 ml
2×25 ml de la 5
ml
Suspension
mère.
+1 FRASER
Eau
peptonnée
tamponnée
Listéria Salmonella
PREPARATION
DES DILUTIONS
DECIMALES
a - cas de produit solide.
b - cas de produit liquide.
a - Cas de produit solide:
Introduire 1 ml de la suspension 10ˉ¹ dans 9 ml de TSE.
Mélanger,puis prélever 1 ml de la dilution 10ˉ² et
l’introduire ensuite dans 9 ml de TSE.
1 ml 1 ml
1 ml
10ˉ¹
Suspension
mère
b - Cas de produit liquide:
Introduire 1 ml de la suspension +1 dans 9 ml de TSE.
Mélanger,puis prélever 1 ml de la dilution 10ˉ¹ et l’introduire ensuite dans
9 ml de TSE,mélanger, puis prélever 1 ml de la dilution 10ˉ² et
l’introduire ensuite dans 9 ml de TSE pour obtenir la dilution 10³.
1 ml 1 ml 1 ml
1 ml 9 ml de TSE 9 ml de TSE
10ˉ³
10ˉ¹ 10ˉ²
+1
suspension
Solution
mère mère
PARAMETRES RECHERCHES
• Recherche et dénombrement des microorganismes totaux
(Flore mésophile).
• Recherche et dénombrement des levures et moisissures.
• Recherche et dénombrement des Coliformes, Coliformes
thermo tolérants et EscherichiaColi.
• Recherche et dénombrement des Anaérobies Sulfito –
Réducteurs à 46°C.
• Recherche et dénombrement de Clostridium Perfringens à
37°C.
• Recherche et dénombrement des Staphylococcus aureus.
• Recherche des salmonelles.
• Recherche de Listéria.
RECHERCHE ET
DENOMREMENT DES
MICROORGANISMES PAR
COMPTAGE DES COLONIES
OBTENUES A 30 °C,
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES.
Milieu utilisé:
Gélose PCA
Références
• Norme NF 08 – 051 relative au dénombrement des micro–
organismes – méthode par comptage des colonies obtenues à
30°C.
• Norme XP V 08 – 102 relative aux règles générales pour le
comptage des colonies et l’expression des résultats.
• Norme NF V 08 – 002:Microbiologie alimentaire – Directives
générales pour les examens microbiologiques.
• Norme NF V- 057- 2 Microbiologie alimentaire - Directives
générales pour la préparation des dilutions en vue de l’examen
microbiologique.
• Norme NF ISO 7218:règles générales pour les examens
microbiologiques.
• Norme NF ISO 17025 relative aux prescriptions générales
concernant la compétence des laboratoires d’étalonnage et
d’essais.
Inoculer les boites de pétri avec 1 ml
des différentes dilutions.
1 1 1
ml ml ml
1 ml 1 ml 1 ml
PCA PCA
N = nombre de
micro-organismes /gr ou ml
RECHERCHE DES
COLIFORMES PAR
COMPTAGE
DES COLONIES A 30°,35°
OU 37° C DANS LES
DENREES
ALIMENTAIRES.
Références
• Norme NF V 08-051:dénombrement des coliformes
par comptage des colonies,méthode de routine.
• Norme NF V 08-017:dénombrement des coliformes
fécaux et d’Eschérichia Coli(annexe NF V 08-015 et
NF V08-016).
• Norme NF ISO 7218:règles générales pour les
examens microbiologiques.
• Norme NF V 08- 010 :règles générales pour la
préparation des dilutions en vue de l’examen
microbiologique.
• Norme XP V 08-102:règles générales pour le
comptage des colonies et l’expression des
résultats:cas des dénombrements en milieu solide.
• Norme NF ISO 17025 relative aux prescriptions
générales concernant la compétence des
laboratoires d’étalonnage et d’essais.
Milieu utilisé:
VRBL: (gélose au cristal
Violet et au Rouge neutre,
Biliée et Lactosée).
Inoculer la série de boites avec
1 ml des différentes dilutions.
1 1 1
1 ml ml
1 ml
ml
1 ml
ml
VRBL VRBL
Incuber la série de boites 24 ± 2 h à
30°,35° ou 37°C pour la recherche
des coliformes.
N = nombre de
RECHERCHE ET
DENOMBREMENT DES
COLIFORMES
THERMOTOLERANTS
ET ESCERICHIA COLI
DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES.
Milieu utilisé:
VRBL: (gélose au cristal
Violet et au Rouge neutre,
Biliée et Lactosée).
Inoculer la série de boites avec
1 ml des différentes dilutions.
1 1 1
1 ml ml
1 ml
ml
1 ml
ml
VRBL VRBL
Incuber la série de boites
24 ± 2 h à 44°C.
Comptage des
coliformes
termotholérants.
Retenir 2 dilutions successives ( plus
fortes dilutions) oū le nombre de colonies
dénombrées soit : 15 ≤ c ≤ 150.
Appliquer cette formule:
∑c
N 1,1 x d
∑c : c + c (c = nombre de
1 ère 2 1
colonies de la 1 dilution et c = nombre
2
de colonies de la 2ème dilution ).
d : le taux de dilution de la 1ère boite
retenue.
N = nombre de coliformes
termotholérants /gr ou ml.
Recherche et
dénombrement
d’Escerichia Coli:
Repiquer 3 à 5 colonies caractéristiques sur le
milieu Urée Indole.
Ensemencer le milieu Urée Indole.
Incuber le milieu Urée Indole
ensemencé 24 h à 37°C.
UREE
Lecture du milieu Urée Indole.
Production d’indole
= formation
KOVACS KOVACS
indole -
d’un anneau rouge.
Eau
BROYEUR peptonnée
tamponnée
DE TYPE
STOMACHER flacon
de
225 ml
B - Cas de produit liquide.
25 ml
1
ml Introduire dans
Prélever 225 ml d’Eau Peptonée
25 ml de la Tamponnée
Suspension
mère
Eau
(+1) peptonnée
tamponnée
+1
Étape de pré enrichissement:
Incuber la solution ensemencée
d’Eau Peptonée Tamponnée
16-20h à 37°C.
Eau
peptonnée
tamponnée
0,1 ml 2 ml
Bouillon Bouillon
Rappaport sélénite
Vassiliadis RAPPA-
PORT
SFB
S/C
Eau
peptonnée
Incuber 18- 24h à 42°C tamponnée Incuber 18- 24h à 37°C
Milieux utilisés:
Gélose Hektoen
Gélose au Vert
Brillant et au Rouge
de Phénol.
Isoler par des stries :
a- Ensemencer une boite de gélose
Hektoen à partir du tube SFB.
b- Ensemencer une boite de gélose
au Vert Brillant et au rouge de phénol
à partir du tube de Rappaport Vassiliadis.
Anse de platine
SFB RAPPA-
PORT
S/C
37°C 42°C
18-24 h à 37°C
Repiquer 5 colonies typiques de
Salmonella sur le milieu TSI.
Colonies ayant un contour régulier.
Colonies ayant la couleur du milieu ,parfois avec ou
sans centre noir sur la gélose Hektoen.
Colonies de couleur rose sur la gélose V.BR.RP
. .
.
Repiquer 5 colonies typiques de
Salmonella sur le milieu TSI.
Stries
Anse de platine
faire une
Isoler par
piqûre centrale.
des stries
H2S + H2S
TSI TSI Gaz TSI Gaz +
H2S + Pente Pente Pente
Gaz + Rouge Rouge Rouge
CLARK ET
LUBS
1 goutte de
UREE réactif TDA
2 gouttes
de réactif Pas de Pas de
KOVACS formation virage.
d’anneau
rouge.
INDOLE - TDA -