Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Introduction :
L’eau est l’élément le plus demandé et le plus essentiel dans la vie. On l’utilise
quotidiennement pour
différentes applications, par exemple l’alimentation et le lavage des aliments ou
de matériels… Et pour
ces buts ou d’autres l’eau doit représente des qualités microbiologique et physico-
chimiques
satisfaisantes.
Dans cette TP nous sommes plus intéressants par le recherche dans l’échelle
microbiologique,
l’orientation de TP été vers : la réalisation des analyses sur l’eau, le rechercher
des différents types des
germes, la comparaison entre les germes présent dans deux types d’eau (eau potable
(de robinet) et
l’eau pollué) en plus l’identification des germes.
Notre groupe a été choisi pour les recherches dans l’eau pollué.
-les germes aérobies mésophiles et psychrophiles dans le milieu PCA gélosé : cette
recherche
indique plusieurs critères ; l’origine de cette eau, les traitements qu’il a subi.
C’est à dire une
évaluation de cette eau, un indicateur de la qualité générale et de la stabilité.
La recherche des germes à
20°C indique la recherche des germes pathogènes ou résistants.
-les coliformes totaux à 30°c dans le milieu BCPL : permet de signalé une
contamination fécale
d’origine animale, c'est-à-dire une évaluation de risque de présence des germes
pathogènes.
-les streptococcus type D dans le milieu Rothe : c’est une recherche d’un germe
pathogène. Pour
l’évaluation des risques sanitaires de cette eau.
2. Matériel et méthodes :
a.matériel :
Les verreries :
Tube à essais, boite de pétri, des portoirs à tubes, flacons, pipettes pasteur,
pipettes à 5ml et à 1ml, des
lames, des lamelles, cloche de Durham. (Tout le matériel doit être stérile).
Les appareils :
1
d. méthodes d’analyse :
1. le premier jour :
Eau à
analysé
10-1 10-2
10-3
1 ml
1 ml
PCA
PCA
EP2
EP2
2
Pour la recherche des coliformes totaux :
La méthode utilisée c’est « 333 », dans la quelle, on a utilisé neuf tubes remplies
(9 ml) par le milieu
BCPL et chaque tube contient une cloche de Durham préparé par l’enseignant, par
différents
concentrations, trois tubes doubles concentrés (D/C) et six simple concentrés
(S/C).
Eau à
analysé
10 ml 1 ml 0.1 ml
3
Pour cinq tubes doubles concentrés on a ajouté 10 ml d’eau à partir de la solution
à analysée, On a
ajouté 1 ml de la même solution dans un tube simple concentré et 0.1 ml (=trois
gouttes par pipettes
pasteur) de la solution mère dans un tube simple concentré qui reste. Après on a
l’incubation à 30°C
pendant 24 à 48 h. (Selon le schéma 3).
Eau à
analysé
10 ml 1 ml 0.1 ml
2. le deuxième jour :
4
Tube
+
BCPL
37°C
EP2
Incubation à 37°C
pendant 24h.
3. le troisième jour :
On a essai une autre fois d’observer les germes présent dans le milieu Rothe à
l’aide de microscope
photonique.
A partir de milieu BCPL gélosé on a prend une colonie par la pipette pasteur et
met dans trois
différents tubes par différent mode d’ensemencement, le premier tube est collé
par le milieu citrate
de Simmons (solidifié en position inclinée) l’ ensemencement fait par des
stries sur la surface de la
pente par pipettes pasteur, le deuxième est collé par le milieu Kigler-Hajana
(solidifié en position
semi-inclinée) l’ ensemencement fait par piqure centre (dans le culot) après
des stries sur la surface
de la pente par pipettes pasteur, le troisième tube est remplis par le milieu
Clark et Lubs (milieu
liquide) l’ ensemencement fait par l’entrée de la pipettes pasteur dans le
milieu, les trois tubes sont
pour but d’identification biochimique de la colonie sélectionnée, les trois
tubes sont ensuite
incubées à 30°C pendant 24h. (Selon le schéma 5).
5
Milieu Citrate Milieu Kigler- Milieu Clark
L’eau
de Simmons Hajana et Lubs
peptonée
On fait la lecture des résultats sur le milieu PCA (lecture après 72h).
La lecture directe de résultat sur le milieu Citrate de Simmon et de milieu
Kigler-Hajana.
On a divisé la culture de milieu Clark et Lubs dans deux tubes, dans le
premier tube on a ajouté
des gouttes de solution rouge de méthyle, dans le deuxième tube on a ajouté
des goutte de α-
naphtol(VP1) et des gouttes de solution de soude à 16% (VP2). le principe de
ces réactifs dans
l’annexe II.
4. Résultat et discutions :
On a fait la lecture sur les boites qui contiennent le milieu PCA après 72h
seulement la boite incubée
à 30°C contient des colonies, trop chargé, pour facilite la lecture on a divisé la
boite en quatre, on a
estimée le nombre des colonies présentent d’un quart, il est de 145 colonies à peut
prés.
6
N = (150 ×4) ×102 = 60000 UFC/ml.
Donc le nombre des bactéries aérobies mésophiles totale présentent dans cette eau
égale 60000
bactéries par un millilitre. (Schéma 6).
150
colonies PCA
37°C 10-2
EP2
Par la méthode NPP on a estimée le nombre des coliformes totaux présentent dans
l’eau, la méthode
de calcule est la suivante :
+ + + + + + + +
+
3 3 3
7
Le nombre 333 correspond à > 1100 dans le tableau NPP. Donc le nombre des bactéries
calculés
égale :
Indole RM VP
Citrate
Escherichia coli + + -
-
Enterobacter - - +
-
Klebsiella - - +
-
citrobacter - + -
+
À partir de ces résultats les caractères de cette souche sont similaires avec sels
d’Escherichia coli,
donc on peut dire que la souche choisis est Escherichia coli.
8
Recherche des streptococcus groupe D:
Les tubes dits positifs sont les tubes présentant un trouble microbien
5×10 1×1
1×0.1
D/C S/C
S/C
+ + + + _ _
_
0
0
4
Le nombre « 400 » correspond à 15 dans le tableau NPP. Donc le nombre des bactéries
égale :
5. Conclusion :
A partir des analyses qu’on les fait, on peut évaluer la qualité de cette eau. Le
nombre énorme de
FAMT indique que cette eau ne subi aucun traitement. Encore les résultats
d’analyses de coliformes
confirment la pollution et la contamination (d’origine animale) de cette eau,
l’identification de genre
E.coli et la présence des streptococcus affirme la présence des germes pathogènes
dans l’eau.
9
Annexe I : Tableau représente les milieux de cultures utilisées et leurs
compositions.
Le milieu La composition pH
Remarque
Milieu PCA gélosé Peptone 5g 7.2
(plate count Extrait de levure 2.5 g
agar) Glucose 1g
Gélose 15g
Milieu Peptone 5g 7
BCPL (bouillon Extrait de viande 3g
lactosé au Lactose 10 g
pourpre de Pourpre de bromocrésol 25 mg
bromocrésol)
Milieu Peptone 20 g 7
Rothe (bouillon) Glucose 5g
Chlorure de sodium 5g
Phosphate bipotassique 2.7 g
Phosphate monopotassique 2.7 g
Azide de sodium 0.2 g
10
Milieu Simmons :
Recherche d’indole :
L’indole est issu de l’hydrolyse du tryptophane. Après culture de 24h sur l’eau
peptonée, l’indole est
caractérisé par le réactif de Kovacs. Quelques gouttes de réactif sont ajoutées au
milieu : après
agitation, la présence d’indole se manifeste par apparition d’un anneau rouge en
surface.
Milieu Kligler-Hajana :
11
12