FACULTY OF NATURE AND LIFE SCIENCES.

ORAN 1

TP n 1:Microbiologie de
l'environnement

Isolement des microorganismes du sol

Année académique: 2021 / 2022

Section : 01 / Groupe : 07 / Sg: 06

SPECIALTY : MICROBIOLOGY LICENSE

Présenté par:
 Mahieddine fatima zohra
 Mahi ahmed mouad
 Louni malika
Plan de travail
 Isolement des microorganismes qui se trouvent dans le sol 02 sable
(moisissures, actinomycètes, bactéries, levures…) par la méthode des
dilutions successives.

 Ensemencement dans des boîtes de Petri contenant 3 milieu different :

1. GN (Gélose nutritive)
2. CZ ( Milieu de Czapek)
3. WE (Milieu water yeast extract agar )

 Observation des résultats après incubation

 Dénombrement des colonies et calculer

Introduction
La microbiologie des sols est la science dont l’objet est l’étude de l'édaphon
microscopique, c'est-à-dire des microorganismes unicellulaires doués de fonction
vitale, de types eucaryotes dont les cellules possèdent un vrai noyau et de type
procaryote sans noyau veritable

But
Isoler et dénombrer des microorganismes qui se trouvent dans un échantillon de
sable ( sol 2 ) par la méthode des dilutions tout en maintenant le plan de travail
aseptique.

Matériel

Bec Bunsen Boite de petri Tube a essai

Pipette Pasteur Point de micropipette Spatule

Pipette magnétique Balance Vortex

Sol 02 sable ( 01 g ) Milieu de Czapek Gélose nutritive

Milieu water yeast extract agar

Méthode

 1 gramme de sable( sol 2 ) séché ( 5 min , 110 C° pour enlève la humidité ) et

tamisé après l'introduit dans un tube contenant 9 mL d’eau distillée stérile .

 L'échantillon est homogénéisé par agitation au vortex pendant 30 s .

 Prélever 1 ml de solution mère à l’aide d’une pipette magnétique

et déposer dans un tube à essai contenant 9 ml d’eau distillée stérile ou eau
physiologique

 Agiter pendant au moins une minute.

 Répéter les étapes 3 et 4 pour les quatre autres dilutions (10-2, 10-3, 10-4 ,10 -5 ).

 En prend la dilution 10-4 pipeter 0,1 ml à l’aide d’une pipette pasteur

et deposer 3 gouttes dans chacune des 3 boites de Petri contenant les milieux
suivants :

o GN (Gélose nutritive): gélose ordinaire est un milieu d'isolement non

sélectif qui permet de tapoce un nombre de microorganism qui ne sont
pas exigeant .
o CZ ( Milieu de Czapek): milieu semi synthétique et le milieu de référence
pour la mise en culture des moisissures
o WE (Milieu water yeast extract agar ) : utilisé pour isolement des actinomycète .

 étale le prélèvement (0,1ml) avec un râteau .

 Incuber les boites de Petri solen leur milieux :

o GN (Gélose nutritive): 24h _ 72h / 30C°
o CZ ( Milieu de Czapek): 1 semaine / 20C° _ 25C°
o WE (Milieu water yeast extract agar ) : 3 semaine / 20C° _ 25C°

 Observer les resultates

Résultats

Après incubation , pour une même dilution, on refait plusieurs essais, pour avoir un
nombre moyen et augmenter la précision du dénombrement.

Parmi les boites comptables on ne considèrera que la boite qui a donné un nombre
de colonies compris entre 30 et 300 colonies.

Si le nombre est inférieur à 30, il n’est pas statistiquement significatif.

Si le nombre est supérieur à 300, on risque de sous-estimer le nombre de bactéries

du fait qu’il peut y avoir une compétition entre ce grand nombre de bactéries vis à
vis des éléments nutritifs disponibles et vis à vis de l’espace et par la suite une
inhibition d’une bonne proportion de cellules au niveau de la boite

Une colonie représente un nombre de ufc .

Le calcul de la concentration des microorganismes du sol se fait selon la formule

suivante :

N = n x Fd / v

N : le nombre de UFC .
n : le nombre des colonies compté sur la boite .
Fd : facteur de dilution 10-4.
V : volume ensemencé 0,1ml .

 GN (Gélose nutritive)

0,1 ml --------- colonie

104 ml --------- N