Université Oran 1 Ahmed Ben Bella Année Universitaire 2022/2023

Faculté des Sciences de la Nature et de la vie MI Blochimie Immunologie

Département de Biotechnologie Année Universitaire 2022/2023 Mahieddine Fatima Zohra G: 04

Extraction d'ADN à partir de sang total

MATERIEL ET REACTIFS
MATERIELS
 Tubes falcon 50ml/15ml
 Centrifugeuse pour tubes 50/15ml
 Bain marie
 Micropipette(500µl-1000µl)
 Tubes eppendorf
 Pointes jaunes et bleues
 Pipette Pasteur
 Vortex
 Agitateur
 Bechar
 Eau de javel

REACTIFS
 Réactif A solution Hypotonique (PH=8.0) Sucrose - Trishcl 2M - MgCl2 1M - Tritonx100
 Réactif B (PH 8.0) TrisHCL 2M - EDTA 500mM - NaCl 5M - SDS 20%
 Réactif C Perchlorate de sodium 4M

METHODE
1/ Lyse des globules rouges
 Le volume de 15 ml de sang est ajouté à 40 ml de la solution hypotonique (Réactif A).
 Le mélange est agité délicatement puis centrifuger à 3000rpm pendant 15 min
 Récupérer des globules blancs

2/ Lyse des globules blanc

 Le culot est re-suspendu dans un volume de 2ml d'une solution de lyse des globules blancs
(Réactif-B) 37C°.
 Le mélange est vortexé pendant plusieurs secondes pour bien remettre en suspension.
 Transférer la suspension dans un tube de 15ml

3/ Déprotéinisation
Perchlorate de sodium (Réactif C) détruira les membranes et la protéinase digérera les protéines
associées à l'AND :
 500μl est ajouté au tube contenant le lysat puis incubé pendant 30 minutes à 65°C sous
agitation douce