Faculté des sciences exacte et sciences de la nature et de vie

Département de SNV Module : Microbiologie de l’environnement

Responsable de TP : Prof Djouamaa Manel

TP N° 02 : Dénombrement des streptocoques fécaux

- A partir de l’eau à analyser, porter aseptiquement:

→ 3 fois 10 ml dans 3 tubes contenant 10 ml de milieu ROTHE (D/C) (voir Annexe8).
→3 fois 1ml dans 3 tubes contenant 10 ml de milieu ROTHE (S/C) (voir Annexe 8).
→ 3 fois 0.1 ml dans 3 tubes contenant 10 ml de milieu ROTHE (S/C).
- Bien mélanger le milieu et l’inoculum.
- L’incubation se fait à 37°C pendant 24 à 48 heures.
 Lecture
Sont considérés comme positifs (+) les tubes présentant un trouble microbien
accompagné d’un virage du milieu pendant cette période est présumé contenir de streptocoque
fécal.
*La lecture finale se fait selon les prescriptions de la table du NPP

 Test de confirmation
Le test de confirmation est basé sur la confirmation des streptocoques fécaux
éventuellement présents dans le test de présomption.
- Les tubes de ROTHE positifs, après l’agitation, prélever de chacun d’eux quelques
gouttes à l’aide d’une pipette pasteur donc faire l’objet d’un repiquage dans des tubes
contenants le milieu EVA LITSKY.
- Bien mélanger le milieu et l’inoculum.
- L’incubation se fait cette fois-ci à 37°C, pendant 24 à 48 heures.
 Lecture
Seront considérés comme positifs, les tubes présentant à la fois:
→ Un trouble microbien.
→ Une pastille blanchâtre (un dépôt) au fond des tubes.
La lecture finale se fait selon les prescriptions de la table du NPP, le nombre de
streptocoques fécaux sont par 100 ml de l’échantillon analysé (Rejsek, 2002).

 Erreur de frappe : Une pastille blanchâtre à la place d’une pastille violette dans la
figure 01.
 Référence : Rejsek F. 2002. Analyse des eaux aspects réglementaires et
techniques. Ed CRDP, Aquitaine. France. 358 p.
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Responsable de TP : Prof Djouamaa Manel

Figure 1 : Protocole expérimental de recherche et de dénombrement des streptocoques fécaux

E a u embouteillées

10 ml 10 ml
de rhote de rhote

10 ml d’eau 1 ml d’eau 0,1 ml d’eau

Incubation à 37 C pe nda nt 48h

4 à 5 gouttes des milieux positifs

Milieu Eva Litsky

Incubation à 37 C penda nt 24h

Trouble microbien avec prés e nce d’une pastille violette au fond du tube

Présence de Streptocoques fécaux

 Erreur de frappe : Une pastille blanchâtre à la place d’une pastille violette dans la
figure 01.
 Référence : Rejsek F. 2002. Analyse des eaux aspects réglementaires et
techniques. Ed CRDP, Aquitaine. France. 358 p.