Rapport de Dénombrement des Bactéries

par la Technique de Comptage sur Boîte

Introduction
L'objectif de cette expérience était de déterminer la concentration de bactéries présentes dans
un échantillon d'eau usée en utilisant la méthode de comptage sur boîte, également connue
sous le nom de méthode de dilution en série. Cette technique est couramment utilisée en
microbiologie pour estimer la densité bactérienne dans un échantillon liquide. Le
dénombrement des bactéries dans l'eau usée est essentiel pour évaluer la qualité de l'eau et son
potentiel risque pour la santé publique et l'environnement.

Matériaux et Méthodes
Matériaux

• Plate Count Agar (PCA)

• Agar Eosine Methylene Blue (EMB)
• NaCl (solution saline)
• Boîtes de Pétri stériles
• Tubes à essai
• Seringue
• Pipette Pasteur
• Eau usée

Méthodes

1. Préparation des milieux de culture :

o Quatorze boîtes de Pétri contenant PCA et quatorze boîtes de Pétri contenant
EMB ont été préparées conformément aux instructions du fabricant.
o Six tubes à essai ont été préparés, chacun contenant 9 ml de NaCl (solution
saline).
2. Dilution en cascade :
o À l'aide d'une pipette Pasteur, 1 ml de l'échantillon d'eau usée a été prélevé et
ajouté au premier tube à essai contenant 9 ml de NaCl. Cela représente une
dilution de 10^-1.
o Ensuite, 1 ml de cette première dilution a été prélevé et ajouté au deuxième
tube à essai, ce qui a produit une dilution de 10^-2.
o Cette procédure a été répétée pour obtenir une série de dilutions en cascade
allant de 10^-1 à 10^-6.
3. Ensemencement par étalement :
o Une pipette Pasteur stérile a été utilisée pour prélever 0,1 ml de chaque
dilution en cascade.
o La pipette Pasteur a été utilisée pour déposer les 0,1 ml de chaque dilution sur
la surface des boîtes de Pétri contenant les milieux de culture PCA et EMB.
o Les dilutions ont été étalées uniformément sur la gélose en utilisant une tige en
verre stérile.
 4. Ensemencement par piqûre :
o Une pipette Pasteur stérile a été utilisée pour prélever 0,1 ml de la dilution la
plus concentrée (10^-1).
o Cette dilution a été ensemencée par piqûre au centre d'une boîte de Pétri
contenant du PCA.
5. Incubation :
o Toutes les boîtes de Pétri ont été placées dans un incubateur réglé à 37 degrés
Celsius pendant 24 heures.
6. Comptage des colonies :
o Après l'incubation, les boîtes de Pétri ont été retirées de l'incubateur.
o Les colonies bactériennes visibles ont été comptées sur chaque boîte de Pétri
pour les deux milieux de culture (PCA et EMB).

Résultats
Les résultats de cette expérience ont montré une variabilité dans le nombre de colonies
bactériennes en fonction de la dilution et du milieu de culture. Voici un exemple hypothétique
de résultats :

Sur le PCA :

• Boîte de Pétri 10^-1 : 350 colonies

• Boîte de Pétri 10^-2 : 48 colonies
• Boîte de Pétri 10^-3 : 7 colonies

Sur l'EMB :

• Boîte de Pétri 10^-1 : 420 colonies

• Boîte de Pétri 10^-2 : 55 colonies
• Boîte de Pétri 10^-3 : 9 colonies

Par piqûre sur le PCA :

• Boîte de Pétri (10^-1) : 320 colonies

Calcul du Dénombrement
Pour calculer le dénombrement des bactéries dans l'échantillon d'eau usée, la formule suivante
a été utilisée :

Dénombrement (UFC/ml) = (Nombre de colonies comptées) / (Volume de la dilution ×

Volume ensemencé sur la boîte de Pétri)

Discussion
Les résultats obtenus montrent une variation dans le nombre de colonies bactériennes en
fonction de la dilution et du milieu de culture utilisé. Les colonies bactériennes sur PCA et
EMB peuvent être différentes en termes de types et de colorations, ce qui peut aider à
identifier certains types de bactéries. La méthode de piqûre est souvent utilisée pour les
échantillons contenant une concentration élevée de bactéries, car elle permet une estimation
plus précise des colonies individuelles.

Conclusion
L'expérience de dénombrement des bactéries par la technique de comptage sur boîte a permis
d'estimer la concentration bactérienne dans l'échantillon d'eau usée. Cette méthode est
essentielle pour évaluer la qualité microbiologique de l'eau et peut avoir des implications
importantes pour la santé publique et l'environnement. Les résultats obtenus dépendent des
dilutions choisies, des conditions d'incubation et du milieu de culture, il est donc crucial de les
prendre en compte lors de l'interprétation des résultats.