TP:01 LES MILIEUX DE CULTURE

Cest quoi un milieu de culture?

Quel sont les diffrents types des milieux de culture?

Comment prparer un milieu de culture?

 Dfinition dun milieu de culture
Environnement artificiel et contrl par l'homme pour isoler et tudier les M.O.

Le milieu de culture doit satisfaire les exigences nutritives du M.O tudi ce qui implique:

couvrir les besoins en ions minraux, en facteurs de croissance, source de carbone et

dnergie,

pH et pression osmotique adquats

 Lutilisation des milieux de culture
Isolement

Identification

Conservation (Ces milieux permettent la survie des micro-organismes

utilisant un mtabolisme ralenti. Il s'agit en gnral de milieux trs pauvres).

 Les diffrents types des milieux de culture
1- milieux non slectifs = ordinaire = gnral:

Milieu minimal pour la croissance des M.O ne contient pas des molcules inhibitrices.

Ex:

Glose nutritive ordinaire (Milieu de base qui permet la culture des bactries non exigeantes)

Glose Sabouraud (isolement des champignons )

2- milieux slectifs:
Ces milieux favorisent le dveloppement dun type (groupe) des MO parmi plusieurs et inhibent les autres
Contiennent des agents inhibiteurs ( AB, sel, colorant)
3- milieu denrichissement
Ces milieux sont gnralement sous forme liquide et ils sont utiliser pour les M.O prsents proportion
peut tre minime par rapport celle de la flore commensale ou pour les MO plus exigeants.
Ils contiennent des substances organiques complexes ( sang , extraits de levure).

Ex :

Le bouillon casine-soja modifi, appel par les Anglo-Saxons modified Tryptone Soy Broth ou mTSB, est
un milieu denrichissement utilis pour la recherche des srotypes pathognes dEscherichia coli, notamment
le srotype O157:H7, dans les produits alimentaires et tous les prlvements dorigine animale susceptibles
den contenir.

Le bouillon LEB (bouillon d'enrichissement pour Listeria) ou Fraser sont des milieux de culture qui sert
l'enrichissement slectif des Listeria.

Le bouillon de Sabouraud (tude morphologique des levures - contrles de strilit)

4- milieu spcifique = Diffrentiel

Ces milieux sont utiliss pour lidentification des MO, ils facilitent la distinction entre les colonies
prsentes sur le mme milieu par la mise en vidence des caractres biochimiques.

Dgradation du glucose en
+/- H2S, +/- lactose
+/- de O2
+/- utilisation du Mannitol
La fluorescence sous UV
TP
 Prparation de 250 ml de chaque milieu de culture

King B Glose nutritive

peptone20,0g extraitdeviande1 g
Glycrol ....10,0g extraitdelevure 2,5g

K2HPO4..1,5g peptone5 g

Sulfatedemagnsiumheptahydrat1,5g chloruredesodium. 5 g

Agar12,0g Agar ..............................................15g

Eaudistille .....1000ml Eaudistille ...1000ml

pH=7,2 pH=7 0.2

Autoclavage 20 min 121C Autoclavage 20 min 121C

 Prparation des chantillons

1) Fruits pourris (Sabouraud + glose nutritive)

2) Selles de poulet (GN)

3) Lait (MRS)

4) Paillasse (Sabouraud + glose nutritive)

5) Olivier (King B)