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Milieux de culture

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Milieux de culture

Prparation nutritive destine la


croissance de microorganismes en
laboratoire
Peuvent tre liquides ou solides
Milieux synthtiques
Milieux complexes

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Milieu solide
Milieu liquide auquel on ajoute un agent de
solidification tel que lagar-agar
Lagar-agar est un polysaccharide extrait dune
algue marine.
Cest un gel qui est ltat solide une T de
moins de 60C et qui se liqufie 100C.
Permet donc lincubation des T leves.
Nest pas une source nutritive pour les bactries
Permet dobtenir des colonies isoles

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Milieux synthtiques
Milieu qui doit fournir une source dnergie
et des lments tels que le carbone, lazote,
le soufre, le phosphore et des facteurs de
croissance.
La composition chimique de ce milieu est
connue.

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Milieux complexes

Aussi appels milieux empiriques.

Contiennent des ingrdients dont la


composition chimique est indtermine.

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Ingrdients des milieux
complexes
Extrait de levure ( source de vitamine B)
Extrait de viande ( vitamines et facteurs de
croissance)
Peptones ( source dazote)
Sang (lment nutritif +observation des proprits
hmolytiques de certaines bactries)
NaCl : isotonie
Phosphates: tampon
Eau : hydratation du milieu.
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Ingrdients (suite)
Indicateurs de pH
- indiquent une activit enzymatique qui
produit un mtabolite acide ou alcalin
pH Acide Alcalin
Rouge de phnol 6.8 jaune rouge
8.3
Rouge de mthyl 4.2 rouge jaune
6.3
Bromothymol bleu 6.0 jaune bleu
7.6
Bromocrsol pourpre 5.6 jaune pourpre
6.8 7
Milieux enrichis
Contiennent des
substances organiques
complexes ( sang,
infusions, extraits de
levure).
Permettent la
croissance des
bactries plus
exigeantes.
Ex : glose au sang
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Glose sang (composition)
Infusion de cur de buf
Peptone
NaCl
Agar
Sang dfibrin de mouton ou de cheval en
concentration de 5 10%
Utilit: visualiser lhmolyse
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Types dhmolyse

Alpha () : hmolyse
incomplte (partielle)

Zone verdtre autour


de la colonie

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Types dhmolyse
Bta () : hmolyse
complte (complte)

Zone transparente
autour de la colonie

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Types dhmolyse
Alpha prime () : double hmolyse
- hmolyse tout prs de la colonie
- hmolyse qui entoure lhmolyse

Gamma () : absence dhmolyse

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Milieu slectif
Inhibe la croissance des bactries
indsirables et stimule celle des microbes
recherchs
Contiennent des agents inhibiteurs ( Ab, sel,
colorant)
Ex : cristal violet et sels biliaires dans la
glose MacConkey

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Milieu diffrentiel

Facilite la distinction
entre les colonies de la
bactrie recherche et
les autres colonies
prsentes sur le mme
milieu.

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Milieux slectif-diffrentiel

Possde les caractristiques des milieux


slectifs et diffrentiels
Ex : MacConkey
mannitol salt

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Glose MacConkey
composition
Peptones
Lactose ( sucre) : lment
diffrentiel
Sels biliaires et cristal violet :
lments slectifs
NaCl
Agar
Rouge neutre: indicateur de pH
Utilit: isolement et distinction
des bactries Gram (-)

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Glose Mannitol salt
Composition
Extrait de boeuf
Peptones
NaCL 7.5% : lment slectif
Mannitol: lment diffrentiel
Rouge de phnol: indicateur de pH
Utilit: isolement des bactries halophiles
comme les Staphylocoques.
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Milieux denrichissement

Milieu liquide
Donne des conditions favorables la croissance
dun seul microbe donn ce qui en favorise la
multiplication
Ex : milieu slnite utilis dans les spcimens de
selles pour favoriser la croissance des salmonelles
et des shigelles au dtriment des autres bactries
prsentes.

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Milieux de transport
Utiliss pour assurer la survie des
microorganismes fragiles prsents dans les
spcimens cliniques pendant leur transport
Milieux pauvres en nutriments.
Ex : Stuart-Amies

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Milieux et mthodes de culture
des anarobies
On doit utiliser un milieu
rducteur tel que le
thioglycolate de sodium.

Lorsquon utilise une


bote de Petri, on utilise
une jarre pour placer les
bactries en atmosphre
anarobie.

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Jarre anarobie
2 gnrateurs :
- borohydrure de sodium (H2)
- bicarbonate de sodium (CO2)
Catalyseur : chlorure de
palladium
Indicateur : bleu de
mthylne
Composition finale de lair
ambiant : 10% H2
5% CO2
85% N2

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Mthode de culture en CO2
Utilise pour la culture des
bactries arobies ncessitant
une concentration de CO2 plus
leve que celle de
latmosphre( bactries
capnophiles).
On peut les cultiver soit en
tuve, en jarre chandelle ou
par la mthode des sachets.
Le but est dobtenir des
conditions semblables celles
du tube digestif ou du systme
respiratoire o se dveloppent
des bactries pathognes.
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Mthode de culture en CO2
Jarre chandelle : jarre tanche avec une
chandelle allume qui consume lO2.
La chandelle steint lorsquon atteint
latmosphre CO2.
Mthode du sachet: acide citrique
bicarbonate de sodium
Concentration finale en CO2 : 10%
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Prparation dune culture pure
But : obtention de
colonies isoles
Colonie : masse visible
lil nu de bactries qui
proviennent toutes dune
mme cellule mre
(clones)
Technique la plus courante
: mthode en stries

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Outils du microbiologiste

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Mthode des stries

26
Technique des stries

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Aspect des colonies
(macroscopie)

28
Aspect des colonies

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Conservation dune culture
bactrienne
Rfrigration

Surglation

Lyophilisation

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Rfrigration
Mthode qui permet de ralentir le
mtabolisme bactrien sans tuer les
microorganismes.
Permet de conserver des cultures
bactriennes pendant un court laps de temps
Conservation entre 4 et 7C (frigo)

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Conglation et surglation
Conservation pour une plus longue priode
Conservation des bactries et des virus
Culture microbienne pure dans un liquide en suspension
Refroidir rapidement des T entre 50 et 95 C ( - 18
C pour conglation).
Aucune activit mtabolique ; dveloppement totalement
bloqu mais la plupart des cellules restent vivantes.
Permet de dcongeler la culture et de la faire crotre,
mme aprs plusieurs annes.

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Lyophilisation ou
cryodshydratation
Conglation rapide dune suspension microbienne
des T entre 54 et -72C tout en liminant leau
par la cration dun vide ce qui donne une poudre.
Rcipient scell sous vide.
Les bactries sont toujours vivantes mais
dpourvues dactivit mtabolique.
Poudre peut tre conserve pendant des annes.
Les bactries peuvent tre ranimes en tout temps
par hydratation avec un milieu nutritif.

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