GLOSE BAIRD PARKER 1.

Contexte dutilisation Milieu utilis en microbiologie alimentaire pour lisolement et la numration des bactries du genre Staphylococcus. 2. Composition en g/L Base complter et couler ou milieu pr-coul :
Source de C et de N Facteurs de croissance Acclrateurs de croissance Inhibiteur Glose Peptones Extrait de viande de buf Extrait de levure Pyruvate de sodium Glycine Chlorure de lithium (LiCl) Agar pH 10 5 1 10 12 5 20 = 7,2

5.2. Prsence de colonies suspectes

Identifier grce la recherche de la protine A et/ou du rcepteur au fibrinogne, de la coagulase libre ou de la thermonuclase en testant : toutes les colonies suspectes sil y en a moins de 5, 5 colonies sil y en a entre 5 et 25, la racine carre du nombre, sil y en a entre 25 et 100 (arrondir par excs) recommencer le dnombrement en diluant le produit sil y en a plus de 100.
N : nombre de colonies suspectes sur Baird-Parker 1!N!5 Colonies testes N 5 ! N ! 25 5 25 ! N ! 100 100 < N Recommencer en diluant

Conclure en calculant la fraction des colonies identifies comme tant S. aureus.

ajouter au moment de lemploi, raison de 1 mL pour 20 mL de milieu.

Lipolyse et protolyse Inhibiteurs Gram Caractre biochimique mulsion de jaune duf (mL) Tellurite de potassium (g/L) 50 0,1

Le nombre de S. aureus dans le volume tal est gal au produit de f par le nombre de colonies comptes. Dterminer le nombre de S. aureus dans un gramme ou un mL de produit pur. 6. Causes derreur Dautres bactries peuvent donner des aspects identiques : Micrococcus, Bacillus, levures. EXERCICE DAPPLICATION
Le dnombrement et la recherche de Staphylococcus aureus est effectu dans un steak hach de 115 g. 10 g de steak hach sont dilus dans 90 mL deau peptone, broys et homogniss. La prparation est considre comme tant une dilution au 1/10me du steak hach. Une dilution dcimale supplmentaire est ralise. Le dnombrement est ralis partir des deux dilutions sur milieu Baird-Parker en surface (2 botes par dilution). Le nombre de colonies suspectes est fourni dans le tableau suivant : Dilution 10-1 Dilution 10-2 Premire bote 12 0 Deuxime bote 8 1

3. Ensemencement Pour une recherche partir dun bouillon denrichissement (par exemple bouillon de Chapman), on ralise un isolement classique. Pour une numration de Staphylococcus aureus, on tale en surface du milieu 0,1 mL du produit pur ou dilu laide dune pipette rteau strile. 4. Lecture On dnombre les colonies de Staphylococcus aureus, ne pas oublier de ramener ce nombre 1 mL. La prsence de tellurite inhibe la plupart des bactries Gram ngatif. Staphylococcus aureus donnent des colonies brillantes de 0,5 2 mm de diamtre : noires (couleur due la rduction du tellurite en tellure) tellurite + ventuellement entoures dun liser blanc opaque (d la prcipitation des acides gras issus de laction de la lcithinase sur la lcithine du jaune duf) : lcithinase + entoures dun halo clair (d la protolyse des protines du jaune duf) : protinase + 5. Rsultats du dnombrement
5.1. Absence de colonies suspectes

a) Rappeler laspect des colonies suspectes dtre S. aureus sur Baird-Parker. b) Indiquer la dilution partir de laquelle va tre poursuivie la recherche. c) Calculer le nombre de colonies suspectes identifier pour chaque bote. Lidentification est ralise grce la technique dagglutination sur la lame. d) Donner le nom des molcules mises en vidence la surface des Staphylococcus aureus. 3 colonies sur la premire bote et 4 colonies sur la deuxime bote se rvlent tre dues des S. aureus. e) Calculer la fraction de colonies dues S. aureus par rapport aux colonies testes. f) En dduire le nombre statistique de colonies dues S. aureus. g) Dterminer le nombre de S. aureus prsents dans un gramme de steak hach. h) Conclure. (Critre : 102 Staphylococcus aureus par gramme de viande hache)
C. LARCHER

Rendre : moins de un Staphylococcus aureus dans 0,1 mL du produit pur ou de la dilution teste.

C. LARCHER

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