UFR ST

SCIENCES BIOLOGIQUE APPLIQUEE

Licence 1

TRAVAUX PRATIQUES D’ENZYMOLOGIE

Membres du groupe :

➢ KABORE Ashley Lauriane. G

➢ COMPAORE Fadilatou
➢ IBRANGO Cheich Harouna
➢ COULIBALY Charlotte

Année Académique : 2019-2020

Enzymologie: TP

Sommaire
Introduction.................................................................................................................................................. 3

I- But .................................................................................................................................................... 3

II- Principe............................................................................................................................................. 3

III- Résultats ........................................................................................................................................... 6

IV- Interprétation ................................................................................................................................... 9

V- Conclusion........................................................................................................................................ 9

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Enzymologie: TP

Introduction

L’enzymologie est une branche de la biochimie qui a pour but l’étude des enzymes, de leurs
structures, de leurs propriétés et de leur rôle catalyseur lors des réactions. C’est ainsi qu’à la date
du 11 Mars 2020 nous avons eu à effectuer pour le cours d’enzymologie des travaux pratique
portant sur l’extraction et la caractérisation de la catalase en premier plan et en second point sur la
cinétique enzymatique.

I- But
Grosso modo ce travail pratique a pour objectif premier d’extraire ,de caractériser la catalase
présente dans le foie de bœuf et connaitre la cinétique enzymatique de la catalase.

II- Principe
Elle est basée sur le broyage de foie de bœuf et la dissociation de l’eau oxygénée en eau et en
dioxygène grâce à la catalase introduite dans le substrat.
H2O2 H20 + 1/2 O2

Mode opératoire

Extraction et caractérisation de la catalase

Matériels Produit
➢ Fiole jaugée Foie de bœuf
➢ Deux béchers de 100ml
➢ Pissette
➢ Deux flacons
➢ Pince
➢ Ciseau
➢ Lotus
➢ Coton
➢ Papier filtre

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➢ Eau distillée
➢ Erlenmeyer
➢ Mixeur
➢ Pipette graduée
➢ Poire
➢ Pot
➢ Essuie-tout
➢ Chronomètre
➢ Entonnoir

H2O2 H2O

0ml 50ml
25ml 25ml

Procédé
➢ Laver le matériel et l’essuyer.
➢ Peser le foie à l’aide d’une balance (5g) puis le broyer dans le mixeur avec 250ml d’eau
distillée.
➢ Filtrer la solution obtenue à l’aide du coton que l’on utilisera pour boucher l’entonnoir.
Réitérer la même opération 2 fois et recueillir le filtrat dans l’Erlenmeyer.
➢ Prélever 50ml de substrat à l’aide de la pipette et renverser le tout dans le bécher.
➢ Prendre un papillon de papier filtre que l’on plonge dans l’eau distille (50ml) puis dans le
flacon.

Cinétique enzymatique de la catalase

Procédé
➢ Mettre la solution de la catalase obtenue lors de la première expérience dans un flacon.
➢ Numéroter 10 flacons de concentrations différentes suivant le tableau ci-dessous :

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Numéro H202 H2 O [H2O2]

1 5 45 0,1
2 10 40 0,2

3 15 35 0,3

4 20 30 0,4

5 25 25 0,5

6 30 20 0,6

7 35 15 0,7

8 40 10 0,8

9 45 5 0,9

10 50 0 1

➢ On introduit à l’aide de la pince le papier filtre de 1 cm de coté dans la catalase durant 1

minute puis l’on sèche chaque face du dit papier sur un essuie tout.
➢ Ensuite on utilise ce même papier que l’on plonge dans un des flacons numérotés en
chronométrant le temps qu’il prendra pour revenir à la surface.
➢ On réitère la même opération avec les neufs autres flacons.

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Schéma du mode opératoire

III- Résultats

Extraction et caractérisation de la catalase

➢ Calcul de la concentration :

V H2 O2
C=
V H2 O2 + V H2 0

➢ Calcul de la vitesse :
Concentration de produits forme
V=
dT

Enzyme Observations

Substrat E + S (complexe enzyme Le papier filtre flotte

(H202) substrat) (il remonte à la surface )

Eau distille E (enzyme sans substrat) Le papier filtre est immerge

( reste au fond du flacon )

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Cinétique enzymatique
Numéro H2O2 H2 O [H2O2] T V 1/V 1/[H2O2]
1 5 45 0,1 45 0,0222 45,04 10
2 10 40 0,2 37 0,0270 37,03 5
3 15 35 0,3 28 0,0357 28,01 3,33
4 20 30 0,4 27 0,0370 27,02 2,5
5 25 25 0,5 23 0,0434 23,04 2
6 30 20 0,6 22 0,0454 22,02 1,66
7 35 15 0,7 25 0,0400 25 1,42
8 40 10 0,8 17 0,0588 17 1,25
9 45 5 0,9 20 0,0500 20 1,11
10 50 0 1 21 0,0476 21 1

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IV- Interprétation

La catalase est une enzyme qui permet la dissociation de l’eau oxygéné en eau et en oxygène.

De plus nous remarquons que la vitesse de remonte du papier filtre dépend de la concentration
d’eau oxygéné.

En effet plus la teneur en eau oxygéné est élevée plus le temps est faible et vice versa. Cela est dû
à l’oxygène contenu dans l’eau oxygéné

V- Conclusion

Cette expérience nous a permis de comprendre et d’observer les effets de l’eau oxygéné et de la
catalase et de connaitre un peu plus leur rôle.

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